專利名稱：：營養(yǎng)組合物的制作方法營養(yǎng)組合物本發(fā)明涉及分離自酵母培養(yǎng)物的新的糖類組合物。本發(fā)明還涉及具有增強的水溶性的基于酵母細胞的糖類組合物。本發(fā)明中公開的糖類組合物可用作營養(yǎng)添加劑或藥物添加劑或作為營養(yǎng)組合物或藥物組合物的一部分，以便促進施用所述組合物的動物或人類受治療者的健康。本發(fā)明還涉及產(chǎn)生所述糖類組合物的方法。
背景技術(shù)：
：ProgutTM是基于全酵母的動物飼料成分，用于保持動物良好的腸道健康、改善其生長和在大多數(shù)胃腸問題中替代抗生素(參見US20020061345)。Progut產(chǎn)生于全啤酒酵母(釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae))，因此其含有酵母細胞壁顆粒(主要是甘露糖蛋白和P-葡聚糖)和內(nèi)部的細胞核苷酸。所有這些組分顯示對Progut的活性是重要的。本發(fā)明揭示了特別是用優(yōu)化的強酸水解或酶促水解條件或令人驚訝地有效的其組合產(chǎn)生的新的progut型產(chǎn)物，以便獲得新的具有生物活性和高度可溶的產(chǎn)物。據(jù)觀察，需要令人驚訝地強酸處理條件(包括非常高的酸濃度，包括約O.5M至約1M酸)和/或范圍在75-100°C的高反應(yīng)溫度來獲得增強的溶解作用和獲得高生物活性的低分子量多糖和寡糖。條件是劇烈的，并揭示了酵母材料對水解的高抗性，然而存在條件的優(yōu)化，以便高溫下增加酸至2M造成細胞壁材料更低效的溶解作用和/或由接近完全水解的水解造成的增加量的游離單糖。包括高甘露糖寡糖和低淀粉寡糖含量及高Glc13-糖含量的獨特化學(xué)特性與新的糖類級分的高生物活性相關(guān)。這些明顯不同于之前的產(chǎn)物和競爭產(chǎn)物。產(chǎn)生大量有效的甘露糖寡糖和GlcP-糖類至相同制品的優(yōu)化水解條件是新穎而有創(chuàng)意的，特別當(dāng)糖類產(chǎn)生至相同制品并來自包括未經(jīng)主要水解或提取化學(xué)處理(諸如衍生自發(fā)酵的酵母，諸如釀酒過程衍生的酵母)的天然酵母的酵母原材料。應(yīng)理解，背景中酵母材料的酸處理主要是在適度pH范圍用低酸濃度的溫和處理，并且反應(yīng)溫度一般與堿處理一起使用來獲得主要不可溶的細胞壁制品(稱為葡聚糖)。不存在葡聚糖制品酸衍生的P6的證據(jù)。本發(fā)明中分析了一套舊的和新的ProgutTM樣品以及來自選擇的相關(guān)產(chǎn)物的樣品。主要通過凝膠滲透色譜進行分析，但是該過程使用此處通過凝膠滲透色譜分離的可溶性組分的NMR分析。本研究的另一個目的是產(chǎn)生具有增強的可溶性而不喪失其活性的新的ProgutTM。這可通過酶促地、機械地或通過酸水解來降解甘露糖蛋白和/或P_葡聚糖而實現(xiàn)。附圖簡述圖1.Progut型產(chǎn)物(PG)和相關(guān)樣品中可溶性組分的量。PG1-PG9，Progut型產(chǎn)物樣品；相關(guān)樣品Cl，Agrimos;C2，Ascogen;C3，Alpha咖neAlpharma;C4，Bio-Mos。圖2.來自0.2X的溶液的PG1和PG2的比較。來自0.2%溶液的A.PG1和B.PG2水溶性組分的凝膠滲透色譜圖(等量的樣品制品)；在Superdex肽柱上(測量414)。圖3.來自1X的溶液的PG1和PG2的比較。來自1X溶液的A.PG1和B.PG2水溶性組分的凝膠滲透色譜圖(等量的樣品制品)；在Superdex肽柱上(測量414)。圖4.9種PG樣品和相關(guān)樣品的比較。來自1X溶液的A.PG1、B.PG2、C.PG3、D.PG4、E.PG5、F.PG6、G.PG7、H.PG8、I.PG9、J.Cl、K.C2、L.C3、M.C4水溶性組分的凝膠滲透色譜圖(等量的樣品制品)；在Superdex肽柱上(測量A，)。對于PG9，分析大約50%更少的材料。然而這通過相應(yīng)地調(diào)整比例尺以便能夠同等地比較結(jié)果而被補償。圖5.5種PG樣品的比較。來自1X溶液的A.PG10、B.PG11、C.PG12、D.PG13、E.PG14水溶性組分的凝膠滲透色譜圖(等量的樣品制品)；在Superdex肽柱上(測量A，)。圖6.產(chǎn)生自啤酒酵母溶液及其均化形式的PG樣品的比較。來自1%溶液的酸水解的A.啤酒酵母和B.均化的啤酒酵母水溶性組分的凝膠滲透色譜圖(等量的樣品制品)；在Superdex肽柱上(測量A214)。圖7.通過用于細菌黏著測試的酶促或化學(xué)降解產(chǎn)生的樣品的比較。來自1%溶液的A.啤酒酵母(BY)+gluca證(G)、B.均化的BY(HBY)+G、C.BYG+賽威蛋白酶(savinase)(S)、D.HBYG+S、E.BY1MH3P04、F.HBY1MH3P04、G.BYG+果膠酶(PE)、H.HBYG+PE、I.PG1PE、J.PG1+PR水溶性組分的凝膠滲透色譜圖(等量的樣品制品)；在Superdex肽柱上。A、B和I是制備色譜圖，其中測量A^(彼此可比較)；其他是分析色譜圖，其中測量A^(彼此可比較)。圖8.PG1、水溶性PG(PGWS)、具有乳化劑的水溶性PG(PGWS+E)和過度水解的PG的比較。來自1%溶液的A.PG1、B.PGWS、C.PGWS+E和D.PG15h水溶性組分的凝膠滲透色譜圖(等量的樣品制品)；在Superdex肽柱上(測量A旭)。圖9.鏈霉蛋白酶對Progut-型產(chǎn)物樣品的影響。沒有(灰色柱)和具有(深灰色柱)鏈霉蛋白酶消化的Progut-型產(chǎn)物樣品1和2(PG1和PG2)。圖10.鏈霉蛋白酶對Progut-型產(chǎn)物和啤酒酵母溶液的影響。沒有(灰色柱)和具有(深灰色柱)鏈霉蛋白酶消化的Progut-型產(chǎn)物樣品1和2(PG1和PG2)(第二次實驗)。啤酒酵母(BY)首先用鏈霉蛋白酶然后用酸水解處理(BYl)，或者首先用酸水解然后用鏈霉蛋白酶處理(BY2)，深灰色柱。作為對照，BY與工藝過程一起酸水解(灰色柱)。圖11.賽威蛋白酶對Progut-型產(chǎn)物和啤酒酵母溶液的影響。沒有(灰色柱)和具有(深灰色柱)賽威蛋白酶消化的Progut-型產(chǎn)物樣品1和2(PG1和PG2)。啤酒酵母(BY)首先用賽威蛋白酶然后用酸水解處理(BYl)，或者首先用酸水解然后用賽威蛋白酶處理(BY2)，深灰色柱。作為對照，BY1和BY2與工藝過程一起酸水解(灰色柱)。圖12.果膠酶對Progut-型產(chǎn)物和啤酒酵母溶液的影響。沒有(灰色柱)和具有(深灰色柱)果膠酶消化的Progut-型產(chǎn)物樣品1和2(PG1和PG2)。啤酒酵母(BY)首先用果膠酶然后用酸水解處理(BY1)，或者首先用酸水解然后用果膠酶處理(BY2)，深灰色柱。作為對照，BY1和BY2與工藝過程一起酸水解(灰色柱)。圖13.glucanex對啤酒酵母溶液的影響。第一個實驗，啤酒酵母在3(TC用5mg、20mg、100mgglucanex處理(分別為G530C、G2030C、G10030C)，之后進行工藝酸處理，深灰色柱。第二個實驗，啤酒酵母在37。C或50。C用20mgglucanex處理(分別為G2037C、G2050C)，之后進行工藝酸處理，深灰色柱。作為對照，在兩個實驗中，啤酒酵母僅用工藝酸處理來處理，灰色柱。圖14.glucanex和賽威蛋白酶對啤酒酵母溶液的組合影響。A.啤酒酵母溶液首先于30。C下用5mg、20mg、100mgglucanex處理，然后于37。C下用4賽威蛋白酶處理(分別為G5+S、G20+S、G100+S)，之后用工藝酸處理，深灰色柱。B.啤酒酵母溶液首先于37。C下用20mgglucanex處理，然后于37。C下用4iil或20iil賽威蛋白酶處理(分別為G37+S4、G37+S20)，深灰色柱，或者于50。C下用20mgglucanex處理，然后于37。C下用4yl或20yl賽威蛋白酶處理(分別為G50+S4、G50+S20)，之后用工藝酸處理，深灰色柱。作為A.和B.的對照，啤酒酵母溶液在沒有酶時孵育，并僅用工藝酸處理進行處理，灰柱。圖15.glucanex和內(nèi)切葡聚糖酶和/或賽威蛋白酶對啤酒酵母溶液的組合影響。啤酒酵母溶液于37。C或50。C下用20mgglucanex和200yg內(nèi)切葡聚糖酶處理(分別為G37+EG、G50+EG)，或者首先于37。C或50。C下用20mgglucanex、200yg內(nèi)切葡聚糖酶處理，然后于37。C下用4iU賽威蛋白酶處理(分別為G37+EG+S、G50+EG+S)，然后用工藝酸處理，深灰色柱。作為對照，啤酒酵母溶液在沒有酶時孵育，并僅用工藝酸處理進行處理，灰柱。圖16.與賽威蛋白酶處理組合的更高濃度!1304對啤酒酵母溶液的影響。用不同H3P04濃度(0.3M、0.5M、1M)于IO(TC下對啤酒酵母溶液進行酸水解(分別為0.3M、0.5M、1M)，深灰色柱。啤酒酵母溶液與賽威蛋白酶(4iU)—起孵育，然后用不同!1304濃度(0.3M、0.5M、1M、2M)于80。C下進行酸水解(分別為0.3M+S、0.5M+S、1M+S)，深灰色柱。作為對照，啤酒酵母溶液用工藝酸處理進行處理，灰柱。圖17.HC1對啤酒酵母溶液的影響。用不同HC1濃度(0.3M、0.5M、1M、2M)于80°C下對啤酒酵母溶液進行酸水解(分別為0.3M、0.5M、1M、2M)，深灰色柱。作為對照，啤酒酵母溶液用工藝酸處理進行處理，灰柱。圖18.!12504對啤酒酵母溶液的影響。用不同112504濃度(0.3M、0.5M、1M、2M)于8(TC下對啤酒酵母溶液進行酸水解(分別為0.3M、0.5M、1M、2M)，深灰色柱。作為對照，啤酒酵母溶液用工藝酸處理進行處理，灰柱。圖19.均化的影響。啤酒酵母溶液用工藝酸水解或1M!1304處理，而均化的啤酒酵母溶液于80。C下用1MH3P04處理(分別為BY、BY1M、HBY1M)。圖20.用glucanex、賽威蛋白酶和果膠酶均化的影響。用glucanex、glucanex和賽威蛋白酶、及glucanex和果膠酶處理(分別為BYG、BYG+S、BYG+P)，然后進行工藝酸水解的啤酒酵母溶液(灰色)及其均化的形式(深灰色)。圖21.PG1、PG2、PGWS和PGWS+E的可溶性之間的比較。圖22.通過凝膠滲透色譜比較PG1、PG-WS、Agrimos、Ascogen、AlphamuneAlpharma和Bio-Mos。來自1%溶液的樣品在Superdex肽柱中運行(測量A23。)。圖23.從1%溶液中測量的酵母產(chǎn)物在水中的可溶性。PGAv，ProgutTM平均值(n=9);PGS，Progut型可溶性產(chǎn)物；Ag，Agrimos;A1，Alphamune;BM，Bio_Mos圖24顯示5種Progut型樣品的分析性GPC分析。該分析顯示可溶性材料的GPC分布基本沒有變化，因此生產(chǎn)工藝被很好地標(biāo)準(zhǔn)化。圖25.PG，Progut;PGS，Progut型可溶性產(chǎn)物；和PGWS，Progut型水溶性產(chǎn)物(總體(水)溶性產(chǎn)物，從ProgutS進一步加工)的分析性GPC分析。圖26.可溶性多糖和寡糖以及肽的量的比較。測量材料的相對量，表示為214nm下以6-14ml洗脫體積的凝膠滲透色譜圖的面積。PGAv指5個不同PG批次的平均面積，并7設(shè)定為l。圖27.PG;PGS;Agrimos;Alphamune;禾口Bio-Mos⑧的GPC分析。圖28.Progut型材料和3種競爭劑產(chǎn)物中多糖和寡糖以及肽的量的比較。PGAv，平均值(指5個不同PG批次的平均面積，并設(shè)定為1);PGS;PGWS;Ag，Agrimos;Al，Alphamune;BM，Bio-Mos。結(jié)果顯示為230nm下來自6_14ml的從凝膠滲透色譜圖測量的相對量。圖29.5個Progut型產(chǎn)物批次的可溶性中等大小材料的量與細菌黏著分析結(jié)果的相關(guān)性。圖A.通過GPC測量的可溶性多糖和寡糖大小材料的相對量(來自400mg1%PG溶液的部分純化(即基本上不含氨基酸/肽)的可溶性組分的制備GPC分析的數(shù)據(jù)，230nm來自6-14ml測量。此處來自5個PG樣品的平均面積是27800mAu，其給定值為1)。圖B.大腸桿菌細菌黏著分析結(jié)果。圖30.Progut型產(chǎn)物和競爭劑樣品的可溶性材料的量與細菌黏著分析結(jié)果的相關(guān)性。圖A.可溶性多糖和寡糖大小材料的相對量。(來自400mgl^PG溶液的部分純化(即基本上不含氨基酸/肽)的可溶性組分的分析性1%樣品的GPC分析的數(shù)據(jù)，230nm來自6-14ml測量。此處來自5個PG樣品的平均面積是205mAu，其給定值為1)。圖B.大腸桿菌細菌黏著分析結(jié)果。圖31.可溶性多糖和寡糖大小材料的甘露糖含量(即，來自1%PG或相關(guān)溶液的通過GPC、Superdex肽10/30柱于6_16ml分離的可溶性組分)。PGAv，平均值(n=5);PGWS;Ag，Agrimos;A1，Alphamune;BM，Bio_Mos。圖32.5個Progut型產(chǎn)物批次的甘露糖含量與細菌黏著分析結(jié)果的比較。圖A.可溶性多糖和寡糖大小材料的甘露糖含量(即來自1^PG溶液的通過GPC、Superdex肽10/30柱于6-16ml分離的可溶性組分)。圖B.大腸桿菌細菌黏著分析結(jié)果。圖33.來自Progut型產(chǎn)物的可溶性多糖和寡糖的^NMR。甘露-寡糖類的一些結(jié)構(gòu)特性由NMR譜指示。圖34.PG和競爭劑的^NMR的比較。發(fā)明詳述新的可溶性啤酒酵母衍生的產(chǎn)物的產(chǎn)生本發(fā)明揭示了用于從酵母(優(yōu)選啤酒酵母型材料)產(chǎn)生可溶性治療性或營養(yǎng)保健產(chǎn)物(食品或飼料產(chǎn)物或其添加劑)的新方法。本發(fā)明揭示了用于產(chǎn)生材料的幾種方法，包括特異性水解和/或降解方法1)特異性的糖苷酶，特別是內(nèi)切糖苷酶2)蛋白切割酶，諸如蛋白酶鏈霉蛋白酶和賽威蛋白酶，3)改善的化學(xué)水解，特別是強酸水解，禾口4)原材料的物理均化。本發(fā)明進一步涉及具有增強溶解作用活性的方法的組合。用于產(chǎn)生新的可溶性產(chǎn)物的優(yōu)選原材料本發(fā)明優(yōu)選地涉及適當(dāng)?shù)慕湍覆牧咸貏e是來自發(fā)酵過程的酵母的應(yīng)用，最優(yōu)選地當(dāng)酵母衍生自釀造工藝時啤酒酵母作為原材料的應(yīng)用。應(yīng)意識到，此類酵母材料將包括植物衍生的非可溶性材料，特別是包含諸如半纖維素糖類(如由果膠酶的切割所示)的植物多糖的植物衍生的非可溶性材料和諸如谷物P葡聚糖的植物衍生的P-葡聚糖材料，該谷物優(yōu)選地是用于釀造工藝的谷物，最優(yōu)選地是大麥。應(yīng)意識到，新的酶促反應(yīng)用于產(chǎn)生其他量的谷物型可溶性糖類至新的產(chǎn)物。應(yīng)意識到，通過特異性酶促反應(yīng)或可選地通過化學(xué)方法產(chǎn)生的新的糖類具有其他有益的保健作用。應(yīng)進一步意識到優(yōu)選的可溶性組合可通過組合以下原材料來產(chǎn)生1)不用于釀酒的酵母和2)植物衍生的多糖，優(yōu)選諸如半纖維素多糖的植物多糖；和/或植物葡聚糖(特別是谷物)，且最優(yōu)選大麥衍生的多糖或谷物葡聚糖，最優(yōu)選大麥葡聚糖。優(yōu)選工藝優(yōu)選的優(yōu)化工藝包括至少以下步驟1.提供啤酒酵母原材料2.通過酶和/或通過優(yōu)化的酸水解的水解本發(fā)明進一步涉及包含以下步驟的工藝1.提供啤酒酵母原材料2.材料的物理均化3.通過酶和/或酸的水解，在優(yōu)選的實施方案中通過酸的水解本發(fā)明進一步涉及包含以下步驟的工藝1.提供啤酒酵母原材料2.材料的物理均化3.通過酶和酸的水解新的寡糖和低分子量多糖飽合物新的降解性產(chǎn)生工藝得到具有增強的可溶性或更少不可溶材料的產(chǎn)物。除了增強的可溶性，這些材料對引起腹瀉的感染具有增強的生物活性，并且具有增加動物生長的活性。從新的產(chǎn)物中對可溶性組分的分離本發(fā)明特別涉及產(chǎn)生自啤酒酵母材料的新的可溶性級分的分離。產(chǎn)物中優(yōu)選的寡糖組合物本發(fā)明者根據(jù)Superdex肽色譜圖(于水中的1%溶液)的分布分析了新的可溶性產(chǎn)物的生物活性。吸光度指示可溶的不同大小組分的相對量。在生物模型和相關(guān)材料中Progut型產(chǎn)物的相對有效性可通過計算洗脫面積而以數(shù)目來顯示(例如，表l)。本發(fā)明揭示了稱為"可溶性"和"水溶性"材料、用于抑制有害細菌活性(諸如引起腹瀉的大腸桿菌活性)的新的可溶性糖類制品。應(yīng)意識到，此類制品用于人類和動物的生長和健康。優(yōu)選的產(chǎn)物類型應(yīng)意識到，新的水解工藝產(chǎn)生可用作諸如衍生自酵母的非分級組合物的新的可溶性糖類。在優(yōu)選實施方案中，優(yōu)選地通過諸如氫氧化鈉的強堿來中和或部分中和該制品。在優(yōu)選實施方案中，例如通過噴霧干燥、轉(zhuǎn)鼓式干燥或其他已知的干燥方法來干燥產(chǎn)物。本發(fā)明進一步涉及包括部分分級和純化的糖類產(chǎn)物的分級產(chǎn)物。優(yōu)選的部分純化9方法包括主要非糖類組分的一部分的去除，諸如1)脫鹽，在優(yōu)選實施方案中通過諸如鈣或其他離子的磷酸鹽沉淀的鹽沉淀，2)通過特異性的吸附劑(諸如疏水或離子交換基質(zhì))對離子分子或疏水分子的去除和/或3)對不可溶材料或其一部分的去除。應(yīng)意識到，部分純化一般增加了制品中新糖類含量10-30%或甚至50%。在強磷酸水解之后脫鹽將增加制品中糖類的量甚至30-60%，因此增加了優(yōu)選的Mana3Man_甘露糖糖類的優(yōu)選量從約15g/kg、更優(yōu)選20g/kg至約20g/ke和更優(yōu)選30g/kg。優(yōu)選的純化方法包括糖類級分或其一部分的分離。純化級分中糖類的含量優(yōu)選地為至少10%，更優(yōu)選地至少25%，甚至更優(yōu)選地至少約50%。NMR中測量的凝膠過濾級分估計包括至少60%的、甚至更優(yōu)選地至少70%的糖類純度。應(yīng)意識到，通過其他標(biāo)準(zhǔn)的純化和分級方法能獲得相似的純度。糖類材料的優(yōu)選大小本發(fā)明揭示了可溶性產(chǎn)物的兩種優(yōu)選的主要大小范圍從Superdex肽柱從6至12分鐘洗脫的大的大小的產(chǎn)物和從約12分鐘至約16分鐘洗脫的中等大小的產(chǎn)物。本發(fā)明特別涉及描述的糖類級分，其含有新的有用的糖類，并且與產(chǎn)物改善的增強的生物活性相關(guān)。優(yōu)選的可溶性多糖大小和級分產(chǎn)物包含對應(yīng)于大小從凝膠過濾大小的約20個至約30個己糖(Hex)單位的糖類和可能更大的可溶性多糖的空體積峰。更優(yōu)選地，從約7.7分鐘的空體積對應(yīng)于約25個己糖單位和更大的糖類的可溶性多糖。本發(fā)明涉及新產(chǎn)物，該新產(chǎn)物包含大量可溶性多糖材料，這是該新產(chǎn)物的特征。優(yōu)選的多糖級分包括對應(yīng)于約20個己糖單位的糖類的從6-9分鐘洗脫的級分和從Superdex肽柱和6_12分鐘洗脫的更大的級分。應(yīng)意識到，12分鐘處的洗脫位置大約在寡糖(DP10)和包含超過10個單糖殘基的多糖的邊界。因此，本發(fā)明涉及以下多糖級分a)從10-mer至30-mer或從10-Hex單位至至少約30-Hex單位的凝膠過濾大小和更大的可溶性多糖，b)通過根據(jù)本發(fā)明的工藝產(chǎn)生的從20-mer至30_mer或從20_Hex單位至至少約30-Hex單位的凝膠過濾大小。優(yōu)選的中等大小產(chǎn)物本發(fā)明進一步涉及從約12分鐘至約16分鐘洗脫的優(yōu)選的中等大小產(chǎn)物。該范圍對應(yīng)從約二糖/三糖至約十糖的寡糖或者具有從3-Hex單位至至少約10-Hex單位的凝膠過濾大小的糖類。優(yōu)選的更大的寡糖和多糖級分本發(fā)明進一步涉及從約6分鐘至14分鐘洗脫的更大寡糖和多糖的組合級分。該優(yōu)選級分含有從約4-6-mer的，更優(yōu)選地從約5-6-mer的寡糖至至少約20-30mer的多糖，或至從5-Hex單位至至少約30-Hex單位的凝膠過濾大小和更大的可溶性多糖。凝膠過濾中，2個己糖(諸如葡萄糖、甘露糖或半乳糖)單位一般對應(yīng)于寡糖或多糖中的一個HexNAc(例如GlcNAc或GalNAc)，并且糖類的預(yù)期洗脫大小一般可由Hex單位的量來計算。原材料的均化和與水解的組合已揭示在工藝酸水解之前使用啤酒酵母原材料和甚至更多的酸，啤酒酵母溶液的均化增加了Progut-型產(chǎn)物型產(chǎn)物的可溶性15%。在優(yōu)選實施方案的酸水解中，本發(fā)明特別涉及包括水解前均化的工藝。酶促處理增加酸水解產(chǎn)物(PG)的可溶性本發(fā)明揭示了通過酸水解的產(chǎn)物可進一步通過用蛋白酶或多糖切割酶的酶促處理而溶解。優(yōu)選的酶促處理包括鏈霉蛋白酶、賽威蛋白酶、果膠酶、Glucanex和與賽威蛋白酶組合的Glucanex或者對相同蛋白或多糖類型具有特異性的酶。酸水解之前的酶促處理本發(fā)明揭示了如果在酸水解之前用蛋白酶或多糖切割酶進行酶促處理，那么通過酸水解的產(chǎn)物更可溶。優(yōu)選的酶促處理包括鏈霉蛋白酶、賽威蛋白酶、果膠酶、Glucanex和與賽威蛋白酶組合的Glucanex，以及任選地與賽威蛋白酶組合的內(nèi)切葡聚糖酶，或者對相同蛋白或多糖類型具有特異性的酶。優(yōu)化的酸水解條件本發(fā)明涉及用于產(chǎn)生新的可溶性產(chǎn)物的優(yōu)化的酸水解條件。本發(fā)明揭示了用增加量的酸的酸處理增加啤酒酵母的可溶性。本發(fā)明特別涉及優(yōu)化的水解工藝，其中作為干重計算的原始酵母材料的量介于反應(yīng)總體積的5-35重量/體積(w/v)%之間，更優(yōu)選地介于10-30%(w/v)，甚至更優(yōu)選15-25%(w/v)，并且最優(yōu)選約反應(yīng)總體積的20%(w/v)。本發(fā)明涉及根據(jù)時間、溫度、酸濃度(/每樣品量的酸量)和酸類型優(yōu)化的水解條件。優(yōu)選的酸包括無機酸磷酸(H3P0》、鹽酸和硫酸。最優(yōu)選的酸是磷酸(H3P04)。本發(fā)明揭示了特別是用優(yōu)化的強酸水解或酶促水解條件或令人驚訝地其有效組合產(chǎn)生的新的progut型產(chǎn)物，來獲得新的生物活性的和可溶的產(chǎn)物。據(jù)觀察，令人驚訝地需要強酸處理條件(包括非常高的酸濃度，包括約0.5M至約1M酸)和/或在75-10(TC范圍的高反應(yīng)溫度以便獲得增加的溶解作用和獲得高生物活性的低分子量多糖和寡糖。條件是劇烈的，并且揭示了酵母材料對水解的高抗性，然而存在對條件的優(yōu)化以便高溫下增加酸至2M引起細胞壁材料的更低效的溶解和/或由接近完全水解的水解造成的增加的量的自由單糖。經(jīng)由H3P04的優(yōu)化的水解本發(fā)明優(yōu)選地涉及濃度高于0.5M、更優(yōu)選地高于約0.75M、甚至更優(yōu)選地高于1M或者最優(yōu)選約1M的磷酸(H3P04)的應(yīng)用。用2M磷酸降低了對溶解作用的影B向，甚至低于0.5M磷酸的影響，極端的酸濃度令人驚訝的沒有增加水解但引起材料的沉淀。這表明用于有效溶解作用的優(yōu)化的酸濃度是從約0.5M至約1M。在優(yōu)選實施方案中，當(dāng)反應(yīng)在約8(TC的溫度(優(yōu)選地介于70-10(TC之間，甚至更優(yōu)選地介于7(TC和95t:之間，甚至更優(yōu)選地介于75t:和85t:之間)下進行時，使用約1MH3P04作為最佳濃度，優(yōu)選范圍從約0.75M至約1.25M，甚至更優(yōu)選地從約0.8M至約1.2M，并且最優(yōu)選地約0.9M至約1.1M。優(yōu)選的反應(yīng)時間是約4小時，優(yōu)選地從2至8小時，更優(yōu)選地3至5小時，最優(yōu)選地從3.5至4.5小時。本發(fā)明特別涉及強水解條件或強酸水解條件和酶促水解的組合來獲得根據(jù)本發(fā)明的增加量的高度可溶的和高生物活性的糖類，在優(yōu)選實施方案中，使用等同于本發(fā)明的水解條件。在優(yōu)選實施方案中，條件等于在約75t:至9(TC下持續(xù)約4小時、約1MH3P04持續(xù)4小時。應(yīng)意識到，如果升高溫度，可降低酸量和/或反應(yīng)時間，并且反之亦然。在另一個優(yōu)選實施方案中，溫度從約9(TC升高至約IO(TC，并且酸量從約0.5M增加至約1M，那么反應(yīng)時間是約4小時。圖16顯示IO(TC下使用0.5M和1M酸的高溶解作用。應(yīng)進一步意識到，可通過使用根據(jù)本發(fā)明的酶或與酸水解組合的酶(諸如圖16所示的賽威蛋白酶)來獲得高度可溶的和高生物活性的產(chǎn)物。酶的應(yīng)用增強了溶解過程，以致需要更低的酸濃度、更低的反應(yīng)溫度或更短的反應(yīng)時間。在優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明涉及與0.3-1M酸組合的根據(jù)本發(fā)明的酶的應(yīng)用。經(jīng)由鹽酸HC1的優(yōu)化的水解本發(fā)明優(yōu)選地涉及濃度高于O.5M、更優(yōu)選地高于約0.75M和甚至更優(yōu)選地高于1M或約1M的HC1的應(yīng)用。2M酸產(chǎn)生更高的溶解作用，但是也增加了單糖的量，因為使用非常強的無機酸的酸水解條件接近完全水解條件。在優(yōu)選實施方案中，當(dāng)反應(yīng)在約8(TC的溫度下(優(yōu)選地介于70-9(TC之間，甚至更優(yōu)選地介于75t:和85t:之間)進行時，使用大約最佳濃度的HC1，優(yōu)選范圍從約0.75M至約1.25M，甚至更優(yōu)選地從約0.8M至約1.2M，且最優(yōu)選地約0.9M至約1.1M。優(yōu)選的反應(yīng)時間為約4小時，優(yōu)選地2至8小時，更優(yōu)選地3至5小時，最優(yōu)選地3.5至4.5小時。本發(fā)明進一步涉及以高于0.5M的增加濃度的H2S04和以如上文所述的約1M的其他酸處理的應(yīng)用。數(shù)據(jù)顯示2M酸不產(chǎn)生增加的溶解作用，進一步可能指示增加的沉淀。溶解方法的組合本發(fā)明進一步揭示了如實驗部分所述的方法的多種有用的組合。優(yōu)選的組合包括均化與酶促水解或化學(xué)水解。在優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明涉及諸如均化和改善的化學(xué)水解的方法的組合。該方法是優(yōu)選的，因為產(chǎn)物溶解的高效以及方法和試劑的低成本。本發(fā)明進一步涉及均化與糖苷酶和/蛋白切割酶的酶促水解的組合。本發(fā)明進一步揭示了蛋白的酶促切割和產(chǎn)生高產(chǎn)量材料的糖苷酶切割的優(yōu)選組合。該方法優(yōu)選地與均化組合。本發(fā)明進一步揭示了化學(xué)切割方法與蛋白的酶促切割和/或產(chǎn)生高產(chǎn)量材料的糖苷酶切割的優(yōu)選組合。該方法優(yōu)選地與均化組合。產(chǎn)生的可溶性碳水化合物的改善的活性本發(fā)明揭示了優(yōu)選的溶解方法產(chǎn)生具有有用生物活性的增加量的可溶的分子材料。本發(fā)明特別涉及針對病原微生物的增加的活性，所述病原微生物諸如引起腹瀉的微生物，特別是包括大腸桿菌的細菌。優(yōu)選的酶促處理優(yōu)選的內(nèi)切糖苷酶葡萄糖多糖的切割本發(fā)明揭示了葡萄糖多糖切割酶用于產(chǎn)生新的可溶性產(chǎn)物。12在優(yōu)選實施方案中，包含纖維素酶活性的13_連接的葡萄糖多糖切割內(nèi)切_P_葡糖苷酶(諸如內(nèi)切-葡糖苷酶和glucanex)在新的生產(chǎn)工藝中在減少不溶性材料中具有有用的活性。本發(fā)明特別涉及切割纖維素型和P-葡聚糖的多糖。優(yōu)選的有待切割的P-葡聚糖是包含Glc134Glc_結(jié)構(gòu)的13-葡聚糖，諸如纖維素、谷物b-葡聚糖，包括葡萄糖殘基之間的P4和133-鍵合。優(yōu)選的內(nèi)切-P-葡糖苷酶是內(nèi)切-葡糖苷酶和纖維素酶。本發(fā)明特別涉及殘基不可溶13-葡聚糖，諸如酵母細胞壁葡聚糖、谷物葡聚糖和/或在優(yōu)選實施方案中啤酒酵母材料中的纖維素材料的切割，以便產(chǎn)生更高的可溶性和/或以便產(chǎn)生可溶的生物活性的葡聚糖寡糖。本發(fā)明特別涉及包含根據(jù)式[GlcP4]nGlc-結(jié)構(gòu)的結(jié)構(gòu)的纖維素和/或谷物P_葡聚糖寡糖的產(chǎn)生，其中n是從2-20的整數(shù)，更優(yōu)選2-10。本發(fā)明更優(yōu)選地涉及產(chǎn)生谷物型葡聚糖寡糖至產(chǎn)物。產(chǎn)物優(yōu)選地包含根據(jù)式[Glc134]nl[Glc133]n2[Glc134]n3GlcP3[GlcP4]n4Glc_結(jié)構(gòu)的葡萄糖殘基之間的P4和P3-鍵合，其中nl、n3和n4是獨立地從0至約5的，優(yōu)選1至4的，甚至更優(yōu)選1至3的整數(shù)，并且n2是0或l。本發(fā)明特別涉及內(nèi)切-13_葡糖苷酶催化的葡聚糖寡糖的產(chǎn)生。本發(fā)明揭示了在根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選級分中a-連接的葡萄糖材料的存在。本發(fā)明進一步涉及在生產(chǎn)新的可溶性產(chǎn)物中內(nèi)切_a_葡糖苷酶的應(yīng)用。a-葡萄糖多糖切割酶是新的產(chǎn)物組合物特別優(yōu)選的調(diào)整和優(yōu)化，并且優(yōu)選作為具有內(nèi)切a-葡糖苷酶活性的，特別是內(nèi)切_a4-葡糖苷酶活性的其他酶，優(yōu)選淀粉或直鏈淀粉切割酶。果膠和相關(guān)半纖維素材料的切割本發(fā)明進一步涉及通過果膠酶制品對啤酒酵母材料的處理。應(yīng)意識到，已報道果膠酶包含多種活性。本發(fā)明涉及通過包含果膠酶的制品對果膠和/或其他半纖維素型材料如包含果膠的半纖維素材料的切割。在優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明涉及產(chǎn)生果膠和或半纖維素衍生的寡糖或低分子量可溶性多糖至產(chǎn)物。優(yōu)選的蛋白酶處理本發(fā)明涉及應(yīng)用蛋白酶切割來自原材料或酸水解材料的蛋白材料。優(yōu)選的蛋白酶是賽威蛋白酶或鏈霉蛋白酶。具有改善的可溶件的新的包含聚糖的材料，可溶件Progut型產(chǎn)物和水溶件Progut型產(chǎn)物本發(fā)明揭示了可能通過根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)化方法來產(chǎn)生具有增強的水溶性的酸水解的酵母制品。應(yīng)意識到，高可溶性材料用于飼料和食品的更有效的制品。可溶性級分特別優(yōu)選用于液體飼料和液體食品或食品添加劑，特別是飲品和飲料。應(yīng)意識到，由于實踐原因(諸如生產(chǎn)中裝瓶和轉(zhuǎn)移液體材料)，具有遠小于50%可溶性材料的材料不用于液體食品或飲料，而實踐材料應(yīng)優(yōu)選地具有遠高于50%的可溶性材料。應(yīng)意識到，一些應(yīng)用將部分耐受不可溶材料，并且在優(yōu)選實施方案中不可溶材料的小部分用于食品組合物中作為纖維來支持營養(yǎng)和健康。Progut型產(chǎn)物及其可溶性形式與用于動物飼料的一些參考產(chǎn)物的總體可溶性的比較示于圖23。新的可溶性產(chǎn)物包含具有改善的生物活性的甚至更大量的可溶性糖類材料(寡糖和多糖)?？扇苄远嗵呛凸烟遣牧系牧?從Superdex肽柱在6-14分鐘之間洗脫，如圖25所示)示于圖26和圖28。可溶性Progut型產(chǎn)物和水溶性Progut型產(chǎn)物中寡糖的量與較小優(yōu)化的Progut型產(chǎn)物相比分別為約2-倍更高，甚至超過3-倍更高。,胃斷備細嫌聰性細本發(fā)明特別涉及新的可溶性Progut型產(chǎn)物，其中作為1%水溶液的總體可溶性為超過55%，更優(yōu)選地超過60%，甚至更優(yōu)選地超過65%，甚至更優(yōu)選地超過63%，甚至更優(yōu)選地超過66%，甚至更優(yōu)選地超過67%，且最優(yōu)選地超過68%。在優(yōu)選實施方案中，水溶性為約70%，優(yōu)選地在55%至85%的范圍，更優(yōu)選地在60%至80%的范圍，更優(yōu)選地在63%至77%的范圍，更優(yōu)選地在65%至75%的范圍，甚至更優(yōu)選地在66%至74%的范圍，甚至更優(yōu)選地在67%至73%的范圍。本發(fā)明進一步涉及實際上完全水溶性的包含糖類的產(chǎn)物，其中水溶性產(chǎn)物在室溫(優(yōu)選20-25t:)下作為1%(重量/體積)水溶液具有實際上完全的水溶性。優(yōu)選的水溶性級分分離自Progut型產(chǎn)物，優(yōu)選可溶性Progut型產(chǎn)物。優(yōu)選的完全水溶性為至少90%或超過90%，更優(yōu)選地超過93%，甚至更優(yōu)選地超過95%，甚至更優(yōu)選地超過96%，甚至更優(yōu)選地超過97%，且最優(yōu)選地超過98%。本發(fā)明進一步涉及半水溶性Progut型產(chǎn)物，其中部分去除了不可溶材料。應(yīng)意識到，部分的低去除提供了與可溶性產(chǎn)物相似的材料，而高去除提供了與水溶性產(chǎn)物相似的材料。在優(yōu)選實施方案中，不溶性組分可以從約10%至約80%，更優(yōu)選地從約20%至約75%，更優(yōu)選地從約25%至約66%，甚至更優(yōu)選地從約33%至約66%的可變程度被去除以便獲得半水溶性產(chǎn)物。半水溶性產(chǎn)物的總體可溶性優(yōu)選地在從約73%至約94%，更優(yōu)選地從約76%至約92.5%，甚至更優(yōu)選地從約80%至約90%，甚至更優(yōu)選地從約81%至約89%的范圍內(nèi)。在優(yōu)選實施方案中，可溶性接近約80%，優(yōu)選地在從約75%至約85%的范圍內(nèi)，或接近約90%，在從約85%至約95%的范圍內(nèi)。半水溶性級分的總體可溶性優(yōu)選地調(diào)整為覆蓋介于可溶性和水溶性級分/材料之間的可溶性。在優(yōu)選實施方案中，字'約'指示優(yōu)選地在值的2%單位內(nèi)，更優(yōu)選地在1%單位內(nèi)，或者更優(yōu)選地在從精確值的0.5%單位內(nèi)，或者在單獨實施方案中精確的值。生物活性的碳水化合物組分本發(fā)明進一步揭示了具有改善的可溶性的新材料具有針對造成腹瀉的細菌的改善的生物活性。這顯示于圖29，且與相關(guān)材料的比較顯示于圖30的圖B。生物活性與UV吸收材料的存在相關(guān)。材料被去除蛋白，并去除疏水雜質(zhì)，在可通過NMR觀察的寡糖范圍內(nèi)不含有主要雜質(zhì)。因此，吸光度看起來對應(yīng)于碳水化合物材料、包括水溶性寡糖和多糖的糖類，部分是由于還原性末端醛的吸光度和工藝中形成的還原性末端衍生化和少量與糖類相連的GlcNAc殘基?？赡馨ㄉ倭侩牟牧?，如圖說明所示，但基于NMR，這些材料的定量重要性是有限的?；钚蕴妓衔锝M分甘露糖糖類示于圖31的分析揭示了新的高活性的可溶性Progut型產(chǎn)物包括增加量的甘露糖寡糖。圖32顯示級分的生物活性與甘露糖含量部分相關(guān)。本發(fā)明者能通過NMR分析定義Progut型產(chǎn)物中新的高活性的甘露糖寡糖和多糖。這類寡糖的增加特別用于新的營養(yǎng)保健14分子。新的可溶性產(chǎn)物中的甘露糖含量增加了約50%。優(yōu)選的末端Mana3_結(jié)構(gòu)本發(fā)明進一步揭示了除了甘露糖含量，甘露糖寡糖的特定結(jié)構(gòu)解釋了Progut型產(chǎn)物更高的活性(例如，如圖30所示)。本發(fā)明特別涉及包含增加量的末端Mana3-結(jié)構(gòu)的寡糖序列，如圖33-34所示。本發(fā)明進一步揭示了非還原端末端的和3-取代的Mana2-表位及在線性Mana2_結(jié)構(gòu)中的中鏈Mana2_表位的特定量，其為衍生自酵母的甘露糖糖類的關(guān)鍵部分。本發(fā)明優(yōu)選地涉及由根據(jù)本發(fā)明的工藝產(chǎn)生的和在優(yōu)選實施方案中從啤酒酵母產(chǎn)生的包含增加的末端Mana3_結(jié)構(gòu)，更優(yōu)選的非還原端末端Mana3Mana2的寡糖。在優(yōu)選實施方案中，末端Mana3_結(jié)構(gòu)的量產(chǎn)生NMR信號，其高于非還原端末端的和3_取代的Mana2_表位的NMR信號，或者高于線性Mana2_結(jié)構(gòu)中的中鏈Mana2_表位的NMR信號，如圖33-34所示。在優(yōu)選實施方案中，Mana3信號高于質(zhì)子NMR光譜中圖33標(biāo)記的Mana2-表位信號的任一種，如圖33和34所示。本發(fā)明特別涉及Mana3-聚糖，其中Mana3位置的質(zhì)子NMR信號至少5%高于、更優(yōu)選地至少7%高于，甚至更優(yōu)選地9%高于，且最優(yōu)選地至少10%高于圖33所示的比較的Mana2_信號。應(yīng)理解，末端非還原端Mana3Mana2結(jié)構(gòu)是針對用于抑制病原體(特別是產(chǎn)生腹瀉的細菌，諸如大腸桿菌)的新的活性組分。還原端Mana2-結(jié)構(gòu)產(chǎn)生聚糖新構(gòu)象?；谥T如Mana3ManP4GlcNAc結(jié)構(gòu)的其他聚糖或還原性二糖表位，該聚糖的活性未知。本發(fā)明進一步涉及富集末端Mana3的糖類級分，其包含至少約10克/kg，甚至更優(yōu)選地至少15克/kg，甚至更優(yōu)選地至少16克/kg，甚至更優(yōu)選地至少17克/kg，甚至更優(yōu)選地至少18克/kg，甚至更優(yōu)選地至少19克/kg，甚至更優(yōu)選地至少20克/kg，甚至更優(yōu)選地至少21克/kg，甚至更優(yōu)選地至少22克/kg，最優(yōu)選地至少23克/kg或24克/kg的優(yōu)選甘露糖寡糖。優(yōu)選的甘露糖寡糖包括包含甘露糖的、優(yōu)選地主要包含甘露糖的寡糖，但其可進一步包含其他單糖殘基，優(yōu)選地，Glc、或GlcNAc或GlcN優(yōu)選地作為次要組分。其他,活件碳水化合物飽分,特殊的P-葡糖信號本發(fā)明者觀察到在質(zhì)子NMR-光譜約4.51-4.53卯m區(qū)特殊的P-葡萄糖寡糖信號。這些信號是相關(guān)的新的異常低分子量的葡萄糖寡糖和多糖信號。本發(fā)明特別涉及富含在區(qū)域(Glc136的龍膽二糖Hl位于約4.51卯m，中鏈GlcP6殘基的信號位于約4，519;4，529;和4.523ppm;LoV.M.等CarbohydrRes.(1993)245，333-345)具有特征信號的P6-連接的葡萄糖的寡糖。本發(fā)明進一步涉及當(dāng)材料進一步包含少量GlcN/GlcNAc時的根據(jù)本發(fā)明的糖類材料，材料優(yōu)選地是衍生自酵母的Glc13-材料，更優(yōu)選地包含Glc136殘基。在單獨的實施方案中，本發(fā)明進一步涉及當(dāng)酵母原材料培養(yǎng)于含有(谷物)133/4葡聚糖或纖維素的材料中時的P4-連接的葡萄糖寡糖，優(yōu)選的13(3/)4葡萄糖信號位于優(yōu)選區(qū)域(例如P3/4葡聚糖寡糖在約4.53ppm處具有P4-連接的GlcHl信號)?；趩翁欠治?，葡萄糖材料的量與樣品中的甘露糖材料是可比較的，Glc材料的一部分包括Glca-材料，而a和13信號都對應(yīng)于大量的糖類。根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選的富集的寡糖本發(fā)明涉及根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選糖類，其中由于Progut型產(chǎn)物NMR-信號的銳度，該15信號特別地來自寡糖。根據(jù)本發(fā)明的寡糖具有介于2-10程度的寡聚化。應(yīng)意識到，大多數(shù)背景涉及諸如葡聚糖的多糖材料和不可溶的大多糖。爐^賴禾口財M白勺賴誦討UV吸舊歸財白勺織禾口織本發(fā)明涉及具有特定更大寡糖和多糖含量的新的Progut型產(chǎn)物。0.4克干Progut型產(chǎn)物或相關(guān)產(chǎn)物的樣品在水中稀釋為1%的溶液(重量/體積)。離心樣品，并干燥水溶性部分，進行進一步的分析。通過與1.4mlDowexH+-樹脂和bondelut柱一起孵育而去除蛋白和肽以及親脂雜質(zhì)來進一步純化寡糖和多糖級分(分析，實驗部分)。純化的樣品在真空離心機中干燥，并溶于1000微升水中。1000微升的15微升樣品在Superdex肽柱中運行，并在214nm處收集從6至14分鐘的吸光度面積。標(biāo)準(zhǔn)化的Progut型產(chǎn)物在從柱上介于6-14分鐘之間洗脫的更大糖類范圍內(nèi)(含有更大的寡糖和多糖)產(chǎn)生680mAU(吸光度單位)。本發(fā)明特別涉及新的Progut型產(chǎn)物，特別是可溶性和水溶性產(chǎn)物，當(dāng)以1.0m1/min的流速運行于Superdex肽柱(AmershamPharmacia,分析實施例)時，當(dāng)糖類級分基本上從來自糖類級分的污染的肽和蛋白中純化時，其產(chǎn)生每6mg原始干樣品介于6-14分鐘之間高于680mAU(Ab單位，吸光度單位)的吸光度積分。本發(fā)明還涉及具有凝膠過濾中相應(yīng)材料大小范圍的對等的寡糖級分和通過根據(jù)本發(fā)明的工藝產(chǎn)生的材料。吸光度積分的優(yōu)選值是680mAU的1.3倍、更優(yōu)選地1.5倍、甚至更優(yōu)選地1.7倍、甚至更優(yōu)選地1.8倍、甚至更優(yōu)選地2.0倍、甚至更優(yōu)選地2.3倍、甚至更優(yōu)選地2.5倍、甚至更優(yōu)選地2.7倍、甚至更優(yōu)選地2.8倍、最優(yōu)選地2.9倍、3.0倍或3.2倍。通過甘g糖質(zhì)量對寡糖和多糖的定量本發(fā)明涉及具有特定總體寡糖和多糖含量的新的Progut型產(chǎn)物。這是通過分析從Superdex肽柱上在6至16分鐘之間洗脫的寡糖和/或多糖級分中的總體甘露糖含量而實現(xiàn)的。對可溶件糖類材料的純化或分離本發(fā)明特別涉及包含根據(jù)本發(fā)明的一種或幾種優(yōu)選糖類類型的純化的或富集的級分。應(yīng)意識到，富集的或純化的級分具有作為營養(yǎng)保健功能性食品或飼料或營養(yǎng)保健(食品或飼料)添加劑的特別高的特異活性。優(yōu)選的純化方法包括以下及其組合a)色譜方法，諸如i.用于吸收帶電的和或親脂的(疏水雜質(zhì))的色譜ii.大小排阻色譜，特別是凝膠過濾以便去除低分子量雜質(zhì)iii.具有與糖類或其一部分結(jié)合的基質(zhì)的親和色譜，優(yōu)選活性炭上的色譜禾P/或b)相分離溶液方法，諸如用溶劑提取和/或雜質(zhì)或糖類的沉淀。在優(yōu)選實施方案中，有機溶劑用于沉淀，優(yōu)選醇或酮，諸如甲醇或乙醇，更優(yōu)選乙醇；或者丙酮用于沉淀優(yōu)選大小的糖類。禾口/或c)溶液和沉淀劑的離心和分離禾口/或d)化學(xué)或酶促方法來降解不需要的組分，優(yōu)選溫和堿水解來降解堿不穩(wěn)定的雜質(zhì)和/或包含Glca的糖原/淀粉型糖類的酶促水解。本發(fā)明進一步特別涉及用于去除雜質(zhì)的離子交換和/或疏水色譜和/或用于純化新的糖類級分的大小排阻色譜。應(yīng)意識到，在優(yōu)選實施方案中離子交換的陽離子交換樹脂材料還吸收親脂化合物，或者兩種基質(zhì)可包括于相同的柱中。聰性輔圖9-21顯示酸和/或酶處理之后的產(chǎn)物級分的可溶性。測量0.2%水溶液中剩余的不可溶材料。顯示的量對應(yīng)于50ml中100mg原始干產(chǎn)物。因此，mg量表示對應(yīng)于不可溶材料的百分比。圖23中，可溶性材料的量表示為百分比。實驗部分BYHBYGPGPGSPGWSPGWS+EPEPRS實施例1材料和方法啤酒酵母均化的啤酒酵母GlucanexProgut型產(chǎn)物可溶性Progut型產(chǎn)物水溶性Progut型產(chǎn)物具有乳化劑的水溶性Progut型產(chǎn)物果膠酶材料來自SuomenRehu的Progut(PG)樣品來自不同生產(chǎn)批次的14種Progut型產(chǎn)物樣品PG1-PG14。來自不同生產(chǎn)工藝的3種Progut型產(chǎn)物樣品PG15h，水解15h;PGWS，PG水溶性；PGWSE+，具有乳化劑的PG水溶性。已顯示PG1作用很好，而PG2如在細菌黏著測定上所示不是有效的。當(dāng)使用山羊測試時，PG4在田間產(chǎn)生良好的結(jié)果。來自其他生產(chǎn)商的商業(yè)化樣品Agrimos(CI)、禾口Ascogen(C2)、Alphamimealpharma(C3)、禾口Bio—Mos(C4)。全啤酒酵母樣品啤酒酵母BY和均化的啤酒酵母HBY。分析步驟樣品的制備從Progut型產(chǎn)物和相關(guān)樣品制備0.2%的水溶液或1%的水溶液。這些溶液于室溫在溫和攪拌下孵育2-5小時。然后將混合物離心(4000rpm，20分鐘)，凍干上清液，并測量干重?？扇苄越M分的分析在凝膠滲透色譜之前通過兩個純化步驟來純化樣品的可溶性組分首先，干材料稀釋為H+-珠(AG50W-X8樹脂，Bio-Rad，1.4ml用于0.4g樣品)的漿態(tài)溶液，并在溫和攪拌下于室溫(RT)孵育2小時。第二，來自『-珠溶液的上清液通過8011(^11^C-18-柱洗脫(500mg/6ml，Varian)。濃縮后，樣品在Superdex肽10/300GL柱(AmershamBiosciences)內(nèi)以lml/min的流速使用50mM碳酸氫銨運行凝膠滲透色譜，在AktaPurifier10(泵P_903，UV_900，AmershamBiosciences)中測量214nm或230nm處的吸光度。Superdex肽柱空體積，6.7ml;總洗脫體積，18.Oml;和多糖/寡糖/單糖的洗脫空體積處30個Hex單位；7.7ml處25個Hex單位；14.4ml處5個Hex單位；16.7ml處2個Hex單位，和17.3ml處1個Hex單位。核磁共振光譜(NMR)對NMR分析，如以下從Superdex肽色譜收集樣品大的大小組分(從6至12ml洗脫)，中等大小組分(從12至16ml洗脫)。在一維111NMR實驗之前，首先凍干樣品，然后溶解于。20(99.9%)中。通過VarianUnity500光譜儀(VarianInc.)于23"C下記錄NMR譜。啤酒酵母的酸水解全啤酒酵母溶液用H3P04的酸水解相似于Progut型產(chǎn)物制造工藝中使用的水解用11304(濃縮的，87%)將pH調(diào)整為2.4，并于8(TC下孵育4小時。該酸水解在下文文本中稱為"工藝酸水解"。結(jié)果可溶性組分的量的比較制備9種Progut型產(chǎn)物樣品和4種相關(guān)樣品的1%溶液，并測量水溶性組分的干重(圖1)。從圖1顯示的結(jié)果，可得出結(jié)論，大約50%的Progut型產(chǎn)物材料是水溶性的，盡管取決于批次可溶性有變化。Alphamunealpharma(C3)、Bio-Mos(C4)禾PAgrimos(Cl)具有比Progut型產(chǎn)物更少的可溶性組分。在另一方面，Ascogen(C2)看來具有良好的可溶性。然而，應(yīng)注意到，在這些凍干樣品中可留有可變量的水。因此，干重的誤差可能高于平均值。通過凝膠滲透色譜對可溶性材料比較來自0.2%溶液的色譜圖PG1禾卩PG2的比較如材料和方法中所述制備PG1和PG2的0.2%溶液，且可溶性材料的色譜圖示于圖2。比較PG1和PG2的可溶性材料可以發(fā)現(xiàn)，PG1具有比PG2相對更中等大小的材料(在12-16ml之間洗脫)，相反PG2具有比PG1更大的大小的材料(在6-12ml之間洗脫)。PG1中可溶性材料的總量看來高于PG2，如PG1中更高的吸收性所示。從圖1也可發(fā)現(xiàn)相同的現(xiàn)象。可溶性和色譜行為的這些差異暗示PG1和PG2的有效性PG1和PG2已通過細菌黏著測試進行測試，并且PG1顯示有效而PG2無效。來自1%溶液的色譜圖PG1禾口PG2的比較可溶性組分的NMR分析需要大量的材料。因此，從半制備凝膠滲透色譜圖中產(chǎn)生1%的溶液。作為與來自圖3的0.2%溶液的色譜圖的比較，顯示了來自PG1和PG2的1%溶液的可溶性材料的色譜圖。盡管檢測器有些過載，可能甚至更清楚地發(fā)現(xiàn)PG2中存在的中等大小的可溶性組分少于PG1。9種Progut型產(chǎn)物和4種相關(guān)樣品的比較同時制備9種Progut型產(chǎn)物(PG1-9)和4種相關(guān)樣品(Cl_4)，并進行相同的分析。因此，它們的凝膠滲透色譜圖是可比較的。此處，在A，處檢測樣品，為了正確的比較，重新分析PG1和PG2。吸光度軸的比例尺調(diào)整為在所有色譜圖中相等，以便有利于樣品的比較。PG1、PG3、PG4和PG6的色譜圖的形狀和材料的量看起來都相當(dāng)相似(圖4，A、C、D、F)。PG1(細菌黏著測定中)和PG4(使用山羊的田間實驗中)都顯示是有效的。另一方面，PG2、PG5、PG7和PG8具有比其他PG樣品更少的材料(圖4，B、E、G、H)。從這些結(jié)果發(fā)現(xiàn)已知PG2在細菌黏著測定中是無效的。這些數(shù)據(jù)表明在優(yōu)選實施方案中，可通過色譜圖的形狀特別是通過中等大小可溶性材料的量來預(yù)測有效的Progut-型產(chǎn)物。中等大小材料(于12-16ml處洗脫)的相對量可計算為色譜圖的面積(mAb單位乘以ml)，比較這些值(表1)證明了Progut型產(chǎn)物樣品之間差異的估計。收集大的大小(于6-12ml處洗脫)和中等大小(于12-16ml處洗脫)材料用于NMR分析。在相關(guān)樣品中，中等大小和甚至大的材料的量遠低于Progut型產(chǎn)物樣品(圖4，J、K、L、M)。Alphamunealpharma(C3)禾PBio-Mos(C4)中可溶性材料的總量(分別為圖4，L、M)當(dāng)與Progut型產(chǎn)物樣品相比時看起來很少，這也可在圖1中觀察到。在Agrimos(Cl)和特別在Ascogen(C2)中，可溶性材料的總量與Progut型產(chǎn)物是可比較的，但是其中大多數(shù)是低分子量大小的材料(圖4，J、K)。低分子量大小的材料在抑制細菌黏著方面并不好，盡管其可能具有一些其他有益的特性。表1.來自圖4中色譜圖的組分的相對量。面積計算為mAb單位乘以ml(此處，面積是來自3個半制備色譜圖的合并)。<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>5種Progut型產(chǎn)物樣品的比較與圖4的樣品相似地制備Progut型產(chǎn)物樣品PG10-14用于凝膠滲透色譜。因此，圖4和圖5的色譜圖是可比較的。盡管沒有獲得PG10-14的生物活性的信息，但這些色譜圖暗示這些(PG10-14)Progut型產(chǎn)物批次應(yīng)很好地起作用，因為在所有樣品中，存在大量的主要由中等至高分子量化合物組成的可溶性材料。收集大的大小(在6-12ml處洗脫)和中等大小(在12-16ml處洗脫)的材料用于NMR分析。酸水解的啤酒酵母及其均化形式啤酒酵母溶液通過工業(yè)壓力勻漿器被均化，并且兩種啤酒酵母溶液的樣品及其均化形式由如材料和方法中所述的Progut型產(chǎn)物工藝酸水解水解。為了分離樣品用于半制備凝膠滲透色譜的NMR，檢測器被過載，并且不能獲得與圖4和圖5可比較的色譜圖。然而，運行分析凝膠滲透色譜圖(圖6)，并且色譜圖的分布模擬PGl的分布(圖2A)。比較圖6A和圖6B的色譜圖面積表明均化增加了可溶性15%。制備用于細菌黏著測試的樣品需要Progut型產(chǎn)物更高的可溶性用于將其混于液體飼料中最優(yōu)選地于飲用水中服用。選擇針對新的水溶性Progut型產(chǎn)物的10種樣品候選物。制備足夠量的這些樣品用于細菌黏著測試，其凝膠滲透色譜圖示于圖7(實驗工藝示于實施例2的材料和方法中)。樣品是1.用glucanex和工藝酸水解處理的啤酒酵母，BYG(圖7A)2.用glucanex和工藝酸水解處理的均化的啤酒酵母，HBYG(圖7B)3.用glucanex和賽威蛋白酶處理的，然后通過工藝酸水解的啤酒酵母，BYG+S(圖7C)4.用glucanex和賽威蛋白酶處理的，然后通過工藝酸水解的均化的啤酒酵母，HBYG+S(圖7D)5.用1MH3P04處理的啤酒酵母，BY1M(圖7E)6.用1MH3P04處理的均化的啤酒酵母，HBY1M(圖7F)7.用glucanex和果膠酶處理的，然后通過工藝酸水解的啤酒酵母，BYG+PE(圖7G)8.用glucanex和果膠酶處理的，然后通過工藝酸水解的均化的啤酒酵母，HBYG+PE(圖7H)9.用果膠酶處理的PG1，PG1PE(圖71)10.用鏈霉蛋白酶處理的PG1，PG1PR(圖7J)最后選擇新的水溶性Progut型產(chǎn)物的5種候選物(樣品1、2、5、6和9)用于細菌黏著測試。用glucanex和用1MH3P04對啤酒酵母的處理在與以前的Progut型產(chǎn)物測試工藝相似進行的細菌黏著測定中產(chǎn)生具有最好活性的材料。有趣地，酶促處理之后啤酒酵母及其均化形式的色譜圖相當(dāng)相似。相反，與未均化的樣品相比，用1MH3P04處理的均化的啤酒酵母中發(fā)現(xiàn)更可溶的中等大小的材料(圖7，F(xiàn)相比于E)。水溶性Progut型產(chǎn)物為了測試1MH3P04處理的啤酒酵母的田間有效性，以工業(yè)規(guī)模產(chǎn)生產(chǎn)物，并且產(chǎn)物命名為水溶性Progut型產(chǎn)物(PGWS)。還通過引入乳化劑產(chǎn)生另一種形式的PGWS，并將其命名為PGWS+E。通過凝膠滲透色譜分析其可溶性，為了容易比較，在相同組的實驗中分析PG1(圖8)。當(dāng)比較PG(圖8A)和PGWS(圖8B)的色譜圖，并且由此計算材料的相對量時(表2)，可以得出結(jié)論，PGWS中存在超過30X更多的可溶性材料。具體地，非常大的大小的材料(于6-9ml洗脫)的相對量增加了大體上60%。然而，中等大小材料(12-16ml)的相對量大約是相等的。因此，PGWS生產(chǎn)中更高濃度的H3P04看起來破壞了不可溶部分正好足以使其可溶于水。盡管產(chǎn)物不完全可溶，但是改變足夠高以允許PGWS作為飲用水中的液體飼料被遞送。在其他正常的生產(chǎn)工藝中，通過更長(15小時)的水解制備另一種樣品(PG15h)。PG15h的凝膠滲透色譜圖(圖8D)暗示產(chǎn)物與PG1相似。NMR分析將揭示是否存在組分結(jié)構(gòu)的改變。表2.來自圖8A和圖8B的色譜圖的材料的相對量。材料的量指定為作為計算的mAb單位乘以ml的色譜圖的面積。<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>Progut型產(chǎn)物樣品中中等大小組分的NMR分析中等大小級分NMR分析中最顯著的信號可指定至a-糖苷碳水化合物鏈的H_l?？紤]到分析材料的生物起源，a-葡聚糖鏈和a-甘露糖苷鏈?zhǔn)切盘柕念A(yù)期來源。譜圖還顯示了起源自P-糖苷單位的H-l的信號。這些信號預(yù)期起源自各種P-葡萄糖殘基。含有此類單位的碳水化合物寡聚體預(yù)期從例如酵母和大麥的P-葡聚糖在本發(fā)明的工藝中產(chǎn)生。結(jié)論分析Progut型產(chǎn)物樣品和來自主要生產(chǎn)者的相關(guān)樣品的可溶性，并產(chǎn)生其凝膠滲透色譜分布。從這些結(jié)果，看起來同樣工藝化樣品的可溶性材料的相對量暗示討論的Progut型產(chǎn)物作為動物飼料的有效性。大和中等大小材料兩者的量看來特別重要。在所有相關(guān)樣品中，大和中等大小材料的量明顯低于Progut型產(chǎn)物樣品中的量。在一些相關(guān)樣品中，大多數(shù)可溶性材料是低分子量大小，其不可能有效抑制細菌黏著。本發(fā)明涉及顯示于這些凝膠滲透色譜圖中的可溶性組分的分離和材料的任選的進一步分級以及例如通過NMR對分離的和/分級的材料的更詳細的化學(xué)分析。本發(fā)明特別涉及中等大小的材料及其作為活性重要組分的相對量。本發(fā)明進一步涉及大的大小的材料及其作為活性重要組分的相對量。實施例2材料和方法材料來自SuomenRehu的Progut(PG)-型產(chǎn)物樣品PG1;PG2;PG15h，PG水解15h;PGWS，水溶性PG;PGWSE+，具有乳化劑的水溶性PG。已顯示PG1很好地起作用，而PG2在細菌黏著測定上不這么有效。4卩単鵬鵬口口口用于本實驗的啤酒酵母樣品具有平均20%的干物質(zhì)。用酸水解磷酸用H3P04對全啤酒酵母溶液的主要酸水解與用于Progut型產(chǎn)物制造工藝的水解相似用404(濃縮的，87%)調(diào)整pH至2.4，并于8(TC下孵育4小時。這一酸水解在下文文本中稱為'工藝酸水解'。用更高濃度1^04的酸水解使用0.3M、0.5M、1M和2M1^04在80"或IO(TC下進行4小時。鹽酸用HC1的酸水解用0.3M、0.5M、1M和2MHC1于80。C下進行4小時。硫酸用H2S04的酸水解用0.3M、0.5M、1M和2MH2S04于80。C下進行4小時?？扇苄詫嶒瀼腜rogut型產(chǎn)物樣品或啤酒酵母溶液制備0.2%水溶液(即含有100mg干重材料的500ii1反應(yīng)混合物用H20稀釋至50ml)。將該水溶液在溫和攪拌下于室溫孵育2_5小時。顯示孵育持續(xù)時間與可溶性不相關(guān)。將混合物離心(4000rpm，20分鐘)，并在凍干后測量沉淀物的重量。酶促處理鏈霉蛋白酶20mg鏈霉蛋白酶(灰色鏈霉菌(Str印tomycesgriseus)，48U/mg，Sigma)與5ml啤酒酵母溶液/20%Progut型產(chǎn)物溶液、5mMCaCl2于37。C下一起孵育5小時。在酶促處理之前或之后進行工藝酸水解。通過可溶性實驗分析鏈霉蛋白酶的影響。賽威蛋白酶5ml啤酒酵母溶液/20%Progut型產(chǎn)物溶液(用NaOH調(diào)整pH至10)、4或20iU賽威蛋白酶(來自芽孢桿菌屬(Bacillussp)的蛋白酶，16mU/iU，Sigma)于37"下一起孵育5小時。在酶促處理之前或之后進行工藝酸水解。通過可溶性實驗顯示賽威蛋白酶的影響。Glucanex通過改變glucanex的量或反應(yīng)溫度來研究glucanex(來自哈茨木霉(Trichodermaharzianum)的裂解酶，1.18U/g，Sigma)對啤酒酵母溶液可溶性的影響。對5ml啤酒酵母溶液，加入5-100mgglucanex，并于30°C、37。C或50。C下孵育5小時。在酶促處理之后進行工藝酸水解。通過可溶性實驗顯示glucanex的影響。果膠酶對5ml啤酒酵母溶液或20%Progut型產(chǎn)物溶液加入20mg果膠酶(黑曲霉(Aspergillusniger)，1U/mg，Calbiochem)，并于37。C下孵育5小時。在酶促處理之前或之后進行工藝酸水解。通過可溶性實驗顯示果膠酶的影響。內(nèi)切葡聚糖酶對5ml啤酒酵母溶液，200iig內(nèi)切葡聚糖酶(來自里氏木霉(T.reesei)的內(nèi)切葡聚糖酶I，來自VTT)于37。C或50。C下孵育5小時。該反應(yīng)僅與glucanex或glucanex和賽威蛋白酶兩者一起進行(參見下文)。組合的酶促處理glucanex和賽威蛋白酶的組合效應(yīng):首先如所述用glucanex反應(yīng)，然后如所述在pHIO用賽威蛋白酶反應(yīng)。在酶促處理之后進行工藝酸水解，之后通過可溶性實驗顯示酶的影響。glucanex和內(nèi)切葡聚糖酶的會目合效應(yīng):如所述，在37t:或5(TC下同時用glucanex和內(nèi)切葡聚糖酶進行反應(yīng)。在酶促處理之后進行工藝酸水解，之后通過可溶性實驗顯示酶的影響。glucanex、內(nèi)切葡聚糖酶和賽威蛋白酶的會目合效應(yīng):首先如所述用glucanex和內(nèi)切葡聚糖酶在37。C或5(TC下反應(yīng)，然后如所述在pH10用賽威蛋白酶反應(yīng)。在酶促處理之后進行工藝酸水解，之后通過可溶性實驗顯示酶的影響。結(jié)果每個系列實驗包括模擬初始Progut型產(chǎn)物的生產(chǎn)工藝的對照反應(yīng)，即如材料和方法中所述用工藝酸水解處理啤酒酵母溶液。以反向的方式測量酶促和/或酸水解實驗之后組分可溶性的增加因為可溶性組分的干重在一定程度上不可能測量，因而測量不可溶組分的減少。鏈霉蛋白酶的影響如材料和方法中所述用鏈霉蛋白酶處理Progut型產(chǎn)物樣品。根據(jù)細菌黏著抑制測試，PG1作為動物飼料是有效的，看來具有比PG2更好的可溶性。如圖9所示，鏈霉蛋白酶處理極大地增加了兩種Progut型產(chǎn)物樣品的可溶性，其中顯示了不可溶材料的量(這些樣品中的初始干重材料是100mg)。在下一系列的實驗中，重復(fù)用PG1和PG2的鏈霉蛋白酶消化，并且如圖10所示，結(jié)果非常相似。在該系列實驗中還研究了pH在用啤酒酵母的鏈霉蛋白酶消化中的影響。在pH5(原初啤酒酵母溶液的pH)和pH8下進行消化，然后進行酸水解。孵育期間pH的改變不引起可溶性的任何顯著差異(數(shù)據(jù)未顯示)。還研究了在酸水解之前或之后孵育的鏈霉蛋白酶的活性。圖10的結(jié)果顯示酸水解之后比酸水解之前鏈霉蛋白酶更有效，這最可能暗示酸水解之后蛋白被變性，并且更容易接近蛋白酶。因此，鏈霉蛋白酶將增加Progut型產(chǎn)物的可溶性，即使其在酸水解之前使用?？紤]到Progut型產(chǎn)物的生產(chǎn)工藝，這是有益的，因為酸水解將破壞鏈霉蛋白酶，并且當(dāng)用作動物飼料時產(chǎn)物本身將沒有酶促活性殘留。23比較Progut型產(chǎn)物或啤酒酵母的可溶性結(jié)果(圖10)，看來初始的工業(yè)Progut型產(chǎn)物產(chǎn)生工藝(1)在產(chǎn)生更可溶的產(chǎn)物上更有效，并且(2)與用于原初啤酒酵母的實驗室規(guī)模的酸水解工藝相比，該產(chǎn)物對鏈霉蛋白酶的作用更敏感。賽威蛋白酶的影響為了檢查另一種蛋白酶與Progut型產(chǎn)物的反應(yīng)性，選擇了賽威蛋白酶(來自芽孢桿菌屬的蛋白酶)，一種以工業(yè)生產(chǎn)的堿性蛋白酶。當(dāng)用Progut型產(chǎn)物測試時，賽威蛋白酶減少了不可溶材料的量幾乎一半(圖11)。然而，鏈霉蛋白酶的有效性(圖10)看起來更好盡管鏈霉蛋白酶減少不可溶材料的量達22%(PG1)，在賽威蛋白酶處理的PG1中，存在53%的殘留。與鏈霉蛋白酶的作用相反，不可溶材料的量不取決于賽威蛋白酶是在工藝酸水解之前還是之后使用(參考圖10和圖ll，使用啤酒酵母的實驗)。因為賽威蛋白酶是工業(yè)酶，其可以合理的成本使用。然而，使用賽威蛋白酶不如使用鏈霉蛋白酶實際因為賽威蛋白酶是堿性蛋白酶，pH需要調(diào)整至10以便獲得有效的反應(yīng)。這意味著在中和后(無論賽威蛋白酶是在工藝酸水解之前還是之后進行)產(chǎn)物的磷酸鈉濃度是可觀的。果膠酶的影響果膠是大的、異型的并且?guī)ж撾姾傻募毎诙嗵恰９I(yè)果膠酶是果膠裂解酶，另外其還含有幾種其他的酶促活性。因此，認為果膠酶處理在Progut型產(chǎn)物溶液中可能是有效的。實際上，在產(chǎn)生更水溶性的Progut型產(chǎn)物中，果膠酶顯示比賽威蛋白酶更有效，但不如鏈霉蛋白酶有效(圖10、圖11和圖12)。例如，鏈霉蛋白酶減少PG1中不可溶材料的干重達22%，用果膠酶達34%，分別殘留8.5mg或15mg不可溶材料。與蛋白酶鏈霉蛋白酶和賽威蛋白酶相反，果膠酶處理只有在工藝酸水解之后才對啤酒酵母溶液有效(圖12)。glucanex的影響為了分析13-葡聚糖對Progut型產(chǎn)物可溶性的影響，進行13_葡聚糖酶處理。選擇Glucanex(來自哈茨木霉的裂解酶)，因為已知其作為有成本效益的酵母細胞壁葡聚糖水解酶。已知Glucanex還含有纖維素酶、蛋白酶和幾丁質(zhì)酶活性。首先，在3(TC下研究各種量的glucanex的影響。清楚顯示少量glucanex不顯著增加啤酒酵母的可溶性。然而，如圖13所示，用100mg/5ml啤酒溶液，不可溶材料的量減少達46%。在第二個反應(yīng)系列中，研究溫度的影響，使用處于+4t:l個月的使其稍微更加清澈的啤酒酵母進行。增加孵育溫度7t:(從3(TC至37tO明顯增加了可溶性(不可溶材料從64%至54%)。相反，當(dāng)溫度升高至5(TC時，不可溶材料的量僅減少26%，暗示酶不耐受這么高的溫度。在37t:下，glucanex產(chǎn)生與鏈霉蛋白酶和果膠酶大約相同程度的不可溶材料的量的減少(參考圖10、圖12和圖13)。組合的酶處理的影響如上文所示，蛋白和多糖降解酶在降低Progut型產(chǎn)物或啤酒酵母溶液中不可溶材料的量上非常有效。然而，這些酶類型單獨都不能產(chǎn)生水溶性產(chǎn)物。然后研究蛋白酶和例如葡聚糖酶的反應(yīng)性是否是組合的，即通過這些酶的組合作用可產(chǎn)生可溶性產(chǎn)物。[O321]Glucanex和賽威蛋白酶Glucanex和賽威蛋白酶都是有成本效益的工業(yè)酶，并且因此被選擇來測試組合反應(yīng)性。當(dāng)比較單獨的glucanex(圖13)或單獨的賽威蛋白酶(圖11)與其組合作用的影響時，清楚地發(fā)現(xiàn)這些酶一起更有效地發(fā)揮作用(圖14):單獨的glucanex(20mg，37°C)處理使不可溶材料降低47%，單獨的賽威蛋白酶(4iU，37°C)處理使不可溶材料降低32%，而在其組合反應(yīng)中，降低了77%(即僅12mg的初始干重材料殘留為不可溶)。然而，甚至在進行的最好的反應(yīng)中(glucanex100mg于3(TC下和賽威蛋白酶4yl于37"C下)，在最初100mg干重材料中仍舊有8.5mg殘留于啤酒酵母溶液中。賽威蛋白酶顯示不如鏈霉蛋白酶或果膠酶有效，而glucanex大約與鏈霉蛋白酶和果膠酶同樣有效(參見上文)。glucanex和賽威蛋白酶對啤酒酵母溶液的組合作用產(chǎn)生遠比鏈霉蛋白酶和果膠酶更好的結(jié)果，實際上類似于鏈霉蛋白酶和果膠酶對Progut型產(chǎn)物的有效性。與glucanex和/或賽威蛋白酶組合的內(nèi)切葡聚糖酶為了改善多糖的降解，研究與glucanex和賽威蛋白酶組合的內(nèi)切葡聚糖酶(來自里氏木霉的內(nèi)切葡聚糖酶I)的有效性。glucanex和內(nèi)切葡聚糖酶處理(圖15)和單獨的glucanex(圖13)的實驗顯示沒有累加作用；與對照相比不可溶材料的量分別是54%和53%。相似地，使用glucanex和賽威蛋白酶，在這些實驗中，內(nèi)切葡聚糖酶沒有改善可溶性(使用EG為22%的和沒有EG23%的不可溶材料相比于對照)。酸的影響為了確立H3P04與其他酸相比溶解作用的差異，選擇兩種強酸HC1和H2S04用于酸水解實驗。還研究了更高酸濃度對啤酒酵母溶液可溶性的影響。具有或沒有賽威蛋白酶的情況下增加濃度的H3P04的影響圖16顯示使用啤酒酵母溶液的兩組實驗的結(jié)果。清楚地，更高濃度的!1304(0.3M、0.5M和1M，于IO(TC)增加了產(chǎn)物的可溶性(圖16，前3個柱對)。使用與8(TC下更高濃度的H3P04(0.3M、0.5M、1M和2M)的酸水解組合的啤酒酵母溶液的賽威蛋白酶處理，導(dǎo)致與IO(TC下的酸水解相當(dāng)相似的可溶性。HC1使用可變的HC1濃度的啤酒酵母溶液的酸水解(圖17)顯示與用H3P04水解非常相似的有效性。H2S04與H3P04水解相比(圖16)，使用增加H2S04濃度的啤酒酵母溶液的酸水解(圖18)表明酸產(chǎn)生非常相似的溶解性。有趣地，與1M酸相比，使用2M酸降低了酸水解產(chǎn)物的可溶性。2MH^04可能從啤酒酵母溶液中沉淀組分，因為其是如此強的酸。均化的影響為了分析啤酒酵母溶液的機械處理是否將改善酸水解的影響，通過工業(yè)勻漿器使啤酒酵母樣品均化。當(dāng)比較均化的和正常的啤酒酵母的1M酸水解結(jié)果時，可溶性增加10%(圖19，相比于工藝水解，啤酒酵母不可溶材料75%殘留，而均化的啤酒酵母不可溶材料65%殘留)。相反，如圖20所示，均化作用對酶glucanex、賽威蛋白酶和果膠酶的降解效應(yīng)僅具有微小的影響。PG、PGWS禾卩PGWSE+的比較根據(jù)本文顯示的這些可溶性結(jié)果，選擇5種樣品制備用于細菌黏著抑制實驗。這些樣品為1.用glucanex處理和工藝酸水解的啤酒酵母溶液，2.用glucanex處理和工藝酸水解的均化的啤酒酵母溶液，3.對啤酒酵母溶液進行1MH3P04酸水解，4.對均化的啤酒酵母溶液進行1M!^04酸水解，禾口5.用果膠酶處理的PGl。這些樣品在細菌黏著測定(與在以前的Progut型產(chǎn)物測試工藝中進行的類似)中都產(chǎn)生良好的結(jié)果，其中g(shù)lucanex處理的樣品最有效。然而，因為1MH3P04酸水解產(chǎn)物幾乎同樣有效，其被選擇產(chǎn)生用于田間實驗。在工業(yè)工藝中產(chǎn)生該水溶性Progut型產(chǎn)物(PGWS)和具有乳化劑的水溶性Progut型產(chǎn)物(PGWS+E)，并且研究來自這些產(chǎn)物的樣品的可溶性。圖21顯示與PGl和PG2相比具有和沒有乳化劑的水溶性Progut型產(chǎn)物的可溶性。當(dāng)比較PGl和PGWS時，不可溶材料的量降低了40%。另一方面，當(dāng)與PGWS的可溶性相比時，看來乳化劑沒有增加可溶性。另外，將過度水解的Progut型產(chǎn)物樣品用于分析。該15小時水解的Progut型產(chǎn)物的可溶性實驗顯示當(dāng)與PG1相比時幾乎等量的不可溶材料殘留。應(yīng)進行進一步的分析以便能考慮是否存在例如過度降解。結(jié)論在工藝生產(chǎn)中啤酒酵母溶液的1M!1304水解產(chǎn)生可作為飲用水組分而遞送至動物的產(chǎn)物。這意味著殘留于水溶性Progut型產(chǎn)物的不可溶材料的量(26%)足夠少以便在對動物的遞送過程期間其將保持液態(tài)。產(chǎn)生PG-WS的這一工藝顯著增加了可溶性，從目前Progut型產(chǎn)物的42%的不可溶材料至PG-WS的26%。Progut型產(chǎn)物或啤酒酵母溶液的與工藝酸水解組合的酶促處理產(chǎn)生比上文提到的單獨1M11304水解甚至更多的可溶性產(chǎn)物。當(dāng)用鏈霉蛋白酶或glucanex和賽威蛋白酶的組合作用處理時，不可溶材料的量最多減少至10%。實施例3Progut型產(chǎn)物、新的可溶性產(chǎn)物和競爭劑在水中的可溶性進一步開發(fā)水解工藝以產(chǎn)生Progut型可溶性產(chǎn)物，稱為可溶性Progut型，其可作為自動飼料機中的液體混合物用在動物喂食中，而沒有遞送的問題。Progut型產(chǎn)物的可溶性平均為約50%(n=9)，而Progut型可溶性產(chǎn)物的可溶性超過70%。競爭性產(chǎn)物都顯示低于40%的可溶性(圖23)。Progut型可溶性產(chǎn)物的特性關(guān)于動物的健康和康樂，認為Progut型產(chǎn)物和其他酵母產(chǎn)物中生物相關(guān)的材料是可溶性多糖和寡糖。本文中，在1%或更稀釋的溶液中，所有寡糖都是可溶的。不可溶部分由細胞壁組分組成，即主要由不可溶多糖和蛋白組成。在凝膠滲透色譜(GPC)中，可溶性多糖和寡糖以及肽(本報道中也稱為"中等大小的材料")在6-14ml洗脫，并在214nm處測量其相對量。Progut型可溶性產(chǎn)物的改良水解工藝產(chǎn)生中等大小材料的幾乎2倍的增加，且在進一步加工的新的Progut型可溶性產(chǎn)物中檢測的量幾乎是3倍更高(圖25和圖26)。本發(fā)明還揭示了分離的實際上完全可溶的產(chǎn)物，稱為水溶性Progut型產(chǎn)物。多糖和寡糖以及肽的量在3種競爭劑產(chǎn)物中大體上更低(圖27和圖28)?？扇苄圆牧吓c細菌黏著分析的相關(guān)性Progut型產(chǎn)物的生物活性與中等大小材料的量成比例。圖29顯示更大量的多糖和寡糖以及肽導(dǎo)致更高的細菌黏著活性。還明顯的是，攜帶少量中等大小材料的競爭劑產(chǎn)物顯示遠遠更低的大腸桿菌細菌黏著(圖30)。單糖分析_甘露糖含量的比較相信酵母產(chǎn)物中的甘露聚糖和甘露寡糖是生物活性組分。因此測量可溶性多糖和寡糖級分的甘露糖含量，并且如圖31所示，Progut-型產(chǎn)物具有明顯比競爭性產(chǎn)物更多的可溶性甘露寡糖。還比較了甘露糖含量與大腸桿菌的細菌黏著活性。發(fā)現(xiàn)甘露糖量和細菌黏著活性之間的相關(guān)性不是直接的(圖32)。因此假設(shè)不是所有的甘露糖多糖和寡糖顯示相似的細菌黏著活性，而是某些結(jié)構(gòu)顯示更高的生物活性。可溶性組分的NMR分析^NMR分析能揭示Progut型產(chǎn)物和其他酵母產(chǎn)物中甘露寡糖的結(jié)構(gòu)特征。圖33顯示了Progut型產(chǎn)物樣品的NMR分析。典型酵母甘露聚糖糖類及其特征性NMR峰的結(jié)構(gòu)細節(jié)顯示于插圖中。通過比較Progut型產(chǎn)物和3種競爭劑產(chǎn)物的NMR光譜(圖34)，可以得出結(jié)論，末端Mana1-3單元的相對量(圖33和圖34的藍色標(biāo)記)在Progut型產(chǎn)物中明顯更高。已顯示一些大腸桿菌菌株(對腸道健康有害)優(yōu)先結(jié)合哺乳動物中的Mana1-3結(jié)構(gòu)。具有末端Mana1-3單元的寡糖的增加是Progut型產(chǎn)物工藝水解步驟的結(jié)果。IHNMR分析的詳述根據(jù)其糖類組成，NMR樣品被分為兩類。含有低分子量甘露多糖/甘露糖寡糖的樣品糖類信號的譜線形狀/寬度表明糖類相當(dāng)大?；诟吒事毒厶枪烟堑陌l(fā)表數(shù)據(jù)，已指定了成分甘露糖單元的異頭1H信號。鑒定了以下甘露寡糖片段。對應(yīng)于大寫字母的甘露糖單元為黑體。每個樣品中不同甘露糖殘基的相對濃度示于表l。使用峰高度進行積分，并給定A的信號值為1。根據(jù)積分，與來自競爭劑的樣品相比，PG樣品中末端a-D-Manp-(l-3)-a-D-Manp-(l-2)和其他常見甘露糖表位的濃度更高，另外a-D-Manp-(l-3)-a-D-Manp-(l-2)表位B與內(nèi)部a-D-Manp-(1-2)表位A的相對比例更高。所有這些樣品還含有如表3中指示為(+)的淀粉。關(guān)鍵甘露糖信號的積分表明PG型樣品中的淀粉含量更低。對應(yīng)于甘露糖NMR信號A-E的特定單糖結(jié)構(gòu)的列表A)_a_D_Manp_(1-2)_a_D_Manp_(1-2)_a_D_Manp_B)a_D_Manp_(1-3)_a_D_Manp_(1-2)_a_D_Manp_C)-a-D-Manp-(l—6)-<x-D-Manp-(l—6)-a-D-Manp-Ia-D-Manp-(l-2)+D)_a_D_Manp_(1-2)_a_D_Manp_(1-6)_a_D_Manp_E)_a_D_Manp_(1-6)_a_D_Manp_(1-2)_a_D_Manp_禾口-a-D-Manp-(1-6)-a-D-Manp-(1-6)-a-D-Manp-Ia-D-Manp-(l-2)+禾口a_D_Manp_(1-3)_a_D_Manp_(1-2)_a_D_Manp_表3.甘露寡糖片段的力-NMR信號和不同甘露糖殘基的相對濃度。樣品名稱中的'大'指示來自凝膠滲透色譜6-12ml洗脫的大的大小的組分。<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>x由于背景難于指定，但明顯小于5.302。含有淀粉寡糖的樣品以下樣品含有淀粉寡糖作為唯一的可鑒定糖類組分PG1中等(從GPC于12_16ml洗脫)、PG2中等、PG3中等、PG4中等、PG6中等、PG7中等、PG8中等、PG9中等、PG15h中等、PG10中等、PG11中等、PG12中等、PG13中等、PG14中等、Ag中等、As中等、A1中等和BM中等。指定是基于分別對應(yīng)于[a-(l-4)Glcp]n鏈、a-(1-6)-Glcp分支點以及還原端a-D-Glcp和P-D-Glcp的異頭HI的于5.409ppm、4.972ppm、5.231ppm和4.645ppm處信號的存在。還存在可能含有除了淀粉寡糖主要組分之外還有甘露寡糖片段的幾種樣品。這些分子的鑒定需要進一步的研究。樣品PG1中等、PGS中等、PGS+E中等和PGWS中等的NMR譜中，存在對應(yīng)于末端片段a_D_Manp_(1-3)_a_D_Manp_(1-2)_a_D_Manp_禾口a_D_Manp_(1_2)_a_D_Manp_(1_2)-a-D-Manp-的信號。低淀粉量表4包括通過NMR對大的糖類級分中淀粉的定量。在優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明涉及糖類級分(6-12分鐘和任選地還有寡糖)和根據(jù)本發(fā)明的材料，其中淀粉Glca4表位的量比Manp-(l-3)-a-D-Manp-(l-2)小3.5倍多，更優(yōu)選地小于3倍。本發(fā)明進一步揭示了在本樣品中存在指示低分子量淀粉鏈的淀粉的還原端信號。另外，根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選淀粉含有適量Glca6分支結(jié)構(gòu)。本發(fā)明涉及在大量優(yōu)選甘露糖糖類中的少量淀粉。應(yīng)意識到，淀粉片段可由淀粉酶型酶降解。在優(yōu)選實施方案中，殘留的淀粉材料由諸如淀粉酶的淀粉降解酶降解來獲得更純的甘露糖/葡萄糖糖類。中等Superdex肽凝膠過濾級分的分析揭示了在新的可溶性級分(PG水溶性和可溶性)中淀粉寡糖的量特別低。絲白勺聰絲￥綠織在可溶性(可溶性和水溶性)糖類制品中甘露糖寡糖的信號更明顯。當(dāng)比較可溶性制品之間的a-D-Manp-(l-3)-a-D-Manp-(l-2)-a-D-Manp-信號與淀粉寡糖信號時，這些信號是至少約20^的淀粉Glc!34信號，在某些制品中甚至為約30-60^的淀粉信號和約等量的總指定寡糖。在以前的工藝制品中，只觀察到非常低的a-D-Manp-(l-3)-a-D-Ma即信號，并且僅有很少百分比的，一般低于約5%的淀粉信號。包含在12-16分鐘之間洗脫的更大寡糖的中等級分包含大多數(shù)寡糖，除了最小的寡糖(二糖和可能部分三糖)但不是單糖。應(yīng)意識到，更小甘露糖寡糖不可能存在樣品中。如凝膠過濾分布所示，中等級分的量(superdex肽12-16)是總糖類類型材料的大部分，估計為總糖類的約20-50%。因此，樣品包括總糖類中至少約4%_30%、更優(yōu)選地至少約5-30%、甚至更優(yōu)選地至少約10-30%的甘露糖寡糖。基于樣品的甘露糖和葡萄糖含量，總的包含甘露糖的糖類中甘露糖寡糖的量為約10-60%，更優(yōu)選地20-60%。制品中的甘露糖寡糖高度富集末端Mana3_表位，其為制品中的主要甘露糖信號，表明新的生物活性的甘露糖糖類的富集抑制甘露糖結(jié)合病原體。數(shù)據(jù)揭示了通過本文優(yōu)化的產(chǎn)生可溶性的方法而不是包括之前的progut方法的其他方法或通過競爭性方法，有效地產(chǎn)生在12-16分鐘之間洗脫的更低分子量的實際上主要的甘露糖寡糖。令人驚訝地，競爭劑材料看起來不含有大量的甘露糖寡糖，盡管這些寡糖中的一些被廣告為甘露寡糖。盡管許多公司的努力，但看起來從酵母中有效產(chǎn)生甘露糖寡糖不是容易的任務(wù)。如還由非常廣泛的且弱的NMR信號與根據(jù)本發(fā)明的材料的更窄和平滑的信號的比較所證明，競爭劑中殘留的甘露糖材料看起來作為高分子量可溶性差的材料。在優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明涉及根據(jù)本發(fā)明的新的糖類材料，其產(chǎn)生與甘露糖信號A-E和根據(jù)本發(fā)明的Glc13-信號基本上相似的NMR譜，優(yōu)選地包括相似的峰寬度和/或相似的峰積分和高度以及相似的少量淀粉信號和/或諸如在約4.7ppm的雜質(zhì)信號的其他雜質(zhì)，包括可能的非碳水化合物材料。NMR分析的參考文獻Kath，F(xiàn).禾口Kulicke，W-M(1999)DieAngewandteMakromoleculareChemie268，69-80Shibata，N.，Kojima，C.，Satoh，Y.，Satoh，R.，S證ki，A.，Kobayashi，H.禾口Suzuki，S.(1993)Eur.J.Biochem217，1-12Ikuta，K.，Shibata，N.，BlakeJ.S.，DahlM.V.，Nelson,R.D.，Hisamichi，K.，Kobayashi，H.，Suzuki,S.和0kawaY.(1997)BiochemJ.323,297-305總之，如^NMR所示Progut型產(chǎn)物含有更多的末端Mana1-3單元(圖33和圖34)，并且如通過可溶性材料的單糖分析(圖31)所示甘露寡糖含量比競爭劑產(chǎn)物更高。根據(jù)這些結(jié)果可以得出結(jié)論，Progut型產(chǎn)物中活性甘露寡糖的量明顯高于競爭性產(chǎn)物。包含a-Glc和P-Glc的材料的指定表4顯示了Progut型樣品中特別存在Glcb材料。通過約4.53ppm處的NMR信號所示，可溶性產(chǎn)物中發(fā)現(xiàn)最大量的Glcb材料。本發(fā)明特別涉及當(dāng)約4.53ppm處的GlcPNMR信號量為約5.14卯m處的Mana3信號的至少約80%(表4中0.8倍)、更優(yōu)選Mana3信號的90%(表4中0.9倍)時的新的可溶性產(chǎn)物。本發(fā)明涉及甚至等摩爾量的末端Glcl3禾口Mana3材料。應(yīng)注意，沒有競爭性材料含有Glc!3-信號。GlcP-信號被認為包括大量的Glc136-材料，指定為3.31ppm處GlcP6_H2信號的信號的存在進一步支持了這一點。Glc13-信號還與谷物葡聚糖信號區(qū)重疊，且認為信號形狀指示優(yōu)選糖類材料中谷物葡聚糖衍生的糖類的Glc134表位的部分存在。表4.寡糖片段的^-NMR信號和不同單糖殘基的相對濃度。樣品名稱中的'大'指示來自凝膠滲透色譜6-12ml處洗脫的大的大小的組分。<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>a注意:GlcPl-6和GlcP1-4的HI信號的值相同。bGlc|31-6葡聚糖中GlcP1-3分支的HIe未測量該信號的強度，而是指該信號是被檢測(是)或未被檢測(否)d注意，4.53卯m處存在相當(dāng)大的背景；因此，強度可能有些估計過高+小信號，明顯可檢測的雙峰，太小以致不能被積分-沒有可檢測的信號n.d.未確定，產(chǎn)生自H20的信號疊蓋了檢測該信號的可能性實施例4.動物試驗使用用在測試Progut中的標(biāo)準(zhǔn)方法(SuomenRehu發(fā)表)，用新的糖類制品水溶性PG作為占飼料或飲用水0.3%_3%量的食物補充劑喂食測試動物。觀察到比使用常規(guī)Progut制品或競爭性產(chǎn)物更高的體重增加和/或更少的腹瀉。3權(quán)利要求產(chǎn)生用于在動物或人類中預(yù)防胃疾患、腸疾病和促進生長的包含糖類的產(chǎn)物的方法，其包括A.提供酵母原材料，優(yōu)選啤酒酵母原材料；B.通過酶和/或通過優(yōu)化的酸水解的水解來產(chǎn)生糖類組合物，其中作為于水中的1％溶液，所述組合物的總體可溶性超過55％。2.如權(quán)利要求1所述的方法，其包括以下步驟A.提供酵母原材料，優(yōu)選啤酒酵母原材料；B.所述材料的物理均化；C.通過無機酸水解。3.如權(quán)利要求2所述的方法，其包括在等同于以下的條件下，通過選自組HC1、磷酸或硫酸的強酸的強水解酸濃度為從約0.5M至約1.25M，反應(yīng)溫度介于70°C-IO(TC之間，且反應(yīng)時間為從2小時至8小時，更優(yōu)選地3小時至5小時，最優(yōu)選地從3.5小時至4.5小時。4.如權(quán)利要求3所述的方法，其中在等同于以下的條件下，通過磷酸對啤酒酵母進行所述水解酸濃度為從約0.5M至約1.25M，反應(yīng)溫度介于70°C-IO(TC之間，且反應(yīng)時間為從2小時至8小時，更優(yōu)選地3小時至5小時，最優(yōu)選地從3.5小時至4.5小時。5.—種通過如權(quán)利要求1-4中任一項所述的方法獲得的Progut型可溶性糖類組合物，其中作為于水中的1%溶液，所述組合物的總體可溶性超過55%。6.如權(quán)利要求5所述的Progut型可溶性糖類組合物，其中作為于水中的1%溶液，所述組合物的總體可溶性介于60%和80%之間。7.如權(quán)利要求6所述的Progut型可溶性糖類組合物，其中所述組合物包含從總洗脫體積18ml和柱長30cm的Superdex肽10/300GL柱在約6ml至16ml和/或6ml至14ml之間洗脫的增加量的糖類。8.如權(quán)利要求7所述的Progut型可溶性糖類組合物，其中在6ml至14ml之間洗脫的所述增加量的糖類對應(yīng)于214nM處680mAU的UV吸光度積分的至少1.5倍。9.如權(quán)利要求8所述的Progut型可溶性糖類組合物，其中所述組合物包含增加量的Mana3Mana2_寡糖。10.如權(quán)利要求9所述的Progut型可溶性糖類組合物，其中Mana3Mana2_寡糖中甘露糖的量大于15g/kg。11.如權(quán)利要求1-4中任一項所述的方法，其中可溶性糖類級分在進一步的步驟中從所述組合物中分離或純化以便獲得水溶性Progut型產(chǎn)物或半水溶性Progut型產(chǎn)物。12.如權(quán)利要求1-4中任一項所述的方法，其中可溶性糖類級分通過選自以下的組的方法或/其任意組合來分離或純化a)色譜方法，諸如i.用于吸收帶電的和或親脂的(疏水雜質(zhì))的色譜；ii.大小排阻色譜，特別是凝膠過濾來去除低分子量雜質(zhì)；iii.具有與糖類或其一部分結(jié)合的基質(zhì)的親和色譜，優(yōu)選地在活性炭上的色譜；和/或b)相分離溶液方法，諸如用溶劑提取和/或雜質(zhì)或糖類的沉淀；在優(yōu)選實施方案中，使用有機溶劑用于沉淀，優(yōu)選醇或酮，諸如甲醇或乙醇，更優(yōu)選乙醇；或使用丙酮用于優(yōu)選大小的糖類的沉淀，和/或c)溶液和沉淀劑的離心和分離；和/或d)化學(xué)或酶促方法來降解不需要的組分，優(yōu)選溫和堿水解來降解堿不穩(wěn)定雜質(zhì)和/或酶促水解包含Glca的糖原/淀粉型糖類。13.如權(quán)利要求12所述的方法，其中通過疏水和/或離子交換和大小排阻色譜純化所述糖類級分。14.一種通過如權(quán)利要求12-13中任一項所述的方法獲得的Progut型水溶性糖類組合物，其中作為于水中的1%溶液，所述組合物的總體可溶性超過90%。15.如權(quán)利要求14所述的糖類組合物，其中作為于水中的1%溶液，所述組合物的總體可溶性介于90%和100%之間。16.如權(quán)利要求14所述的組合物，其中所述組合物包含從總洗脫體積18ml和柱長30cm的Superdex肽10/300GL柱在約6ml至16ml和/或6ml至14ml之間洗脫的增加量的糖類。17.如權(quán)利要求16所述的組合物，其中在6ml至14ml之間洗脫的增加量的可溶性材料對應(yīng)于214nM處680mAU的UV吸光度積分的至少2.0倍。18.如權(quán)利要求17所述的可溶性材料中的糖類組合物，其中所述組合物包含增加量的Mana3Mana2_寡糖。19.如權(quán)利要求9所述的糖類組合物，其中在6ml至16ml之間洗脫的Mana3Mana2-糖類中的甘露糖的量大于20g/kg。20.如權(quán)利要求10或19所述的糖類組合物，其中存在12分鐘至16分鐘之間洗脫的大量的Mana3Mana2_甘露糖寡糖，優(yōu)選地為總Mana3Mana2_甘露糖糖類的至少約10%。21.如權(quán)利要求10、19或20所述的糖類組合物，其中存在大量的Glc13-糖類，以便在約ppm4.53處GlcP的積分Hl質(zhì)子NMR信號為Mana3Mana2-H1質(zhì)子NMR信號的至少80%。22.—種糖類組合物，其通過應(yīng)用過濾的和水解處理的啤酒酵母原材料的可溶性組分于凝膠滲透色譜、并在從總洗脫體積18ml和柱長30cm的Superdex肽10/300GL柱在約6ml至16ml之間洗脫的級分中分離中等大小的糖類材料而獲得。23.如權(quán)利要求22所述的糖類組合物，其用于在動物中預(yù)防胃疾患、腸疾病和促進生長。24.用于產(chǎn)生糖類組合物的方法，所述方法包括過濾啤酒酵母原材料、水解處理過濾的啤酒酵母原材料和分離能在凝膠滲透色譜中約6ml至16ml之間洗脫的中等大小的糖類材料的步驟。25.如權(quán)利要求24所述的方法，其還包括在所述中等大小的糖類材料中分離和/或鑒定單個糖類物質(zhì)的步驟。26.如權(quán)利要求25所述的方法，其還包括篩選所述單個糖類物質(zhì)在動物中預(yù)防胃疾患、腸疾病或促進生長的作用的步驟。全文摘要本發(fā)明涉及分離自酵母培養(yǎng)物的新的糖類組合物。本發(fā)明還涉及具有增強的水溶性的基于酵母細胞的糖類組合物。本發(fā)明中公開的糖類組合物可用作營養(yǎng)添加劑或藥物添加劑或作為營養(yǎng)組合物或藥物組合物的一部分，以便促進施用所述組合物的動物或人類受治療者的健康。本發(fā)明還涉及產(chǎn)生所述糖類組合物的方法。文檔編號A61K36/064GK101778947SQ200880103192公開日2010年7月14日申請日期2008年6月13日優(yōu)先權(quán)日2007年6月13日發(fā)明者加尼卡·瓦基寧,朱哈尼·沙里寧,賈里·何琳,里特瓦·尼瑪拉申請人:格萊科斯芬蘭公司;索曼·雷胡公司