專利名稱：作為刺猬蛋白信號通路調(diào)節(jié)劑的聯(lián)苯基甲酰胺類化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及下列發(fā)現(xiàn)由刺猬蛋白、patched(Ptc)、gli和/或smoothened調(diào)節(jié)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路可以通過式I化合物予以調(diào)節(jié)。
優(yōu)選實施方案的表述 本發(fā)明的治療方法采用刺猬蛋白信號通路拮抗劑抑制銀屑病、淋巴瘤細(xì)胞、白血病細(xì)胞或骨髓瘤細(xì)胞的生長和增生。這些方法包括使得此類腫瘤細(xì)胞(在體外或體內(nèi))與Hh信號通路抑制劑(式I化合物)接觸。在一個實施方案中，所述式I化合物具有如下定義Y1和Y2選自N和CR10；其中R10選自氫、甲基、氟、氯、溴、二甲基氨基-乙氧基和三氟甲基；R6和R7獨立選自氫、甲基、氯、氟、溴、三氟甲基和甲氧基；前提是R6和R7不同時為氫；且R8選自氫、氟、氯、甲基和三氟甲基。
在另一個實施方案中，R1為選自氰基、氯、氟、甲基、乙基、叔-丁基、丙基、異丁基、異丙基、異丙氧基、丁氧基、甲氧基、二甲基-氨基、乙氧基、甲基-硫烷基、苯基、三氟甲基、三氟甲氧基和任選被至多2個甲基取代的哌嗪基；R2和R5獨立選自氫、氯、氟、氰基、甲基、三氟甲基、異丙氧基、甲氧基、乙氧基、三氟甲氧基和二甲基氨基；R3和R4獨立選自氫、氯、甲基、甲氧基和氰基；或者，R1和R2或R1和R5與它們所連接的苯基一起形成喹喔啉基。
在另一個實施方案中，R9選自-S(O)2R11、-OR11、-C(O)R11、-NR12aR12b和-R11；其中R11選自硫代嗎啉代、硫代嗎啉代-S-一氧化物、硫代嗎啉代-S，S-二氧化物、嗎啉代、環(huán)己基、苯基、氮雜環(huán)庚-1-基、2-氧代哌嗪-1-基、1，4-氧雜氮雜環(huán)庚-4-基、哌啶-1-基、四氫-2H-吡喃-4-基、哌啶-3-基、哌嗪基、吡咯烷基和1，4-二氮雜環(huán)庚-1-基；R12a和R12b獨立選自異丁基和羥基-乙基；其中所述R9的硫代嗎啉代、硫代嗎啉代-S-一氧化物、硫代嗎啉代-S，S-二氧化物、嗎啉代、環(huán)己基、苯基、氮雜環(huán)庚-1-基、2-氧代哌嗪-1-基、1，4-氧雜氮雜環(huán)庚-4-基、哌啶-1-基、四氫-2H-吡喃-4-基、哌啶-3-基、哌嗪基、吡咯烷基或1，4-二氮雜環(huán)庚-1-基可以被1-3個獨立選自下列的基團所取代甲基、乙基、甲氧基、芐基、噻吩基-甲基、吡啶基-甲基、苯并[d][1，3]間二氧雜環(huán)戊烯-6-基和2，3-二氫苯并[b][1，4]二氧雜環(huán)己烯-7-基；其中所述R9的苯基或芐基取代基任選被1-3個獨立選自下列的基團所取代甲氧基、乙氧基、甲基-哌嗪基、甲基、三氟甲氧基、氯、氟和三氟甲基。
優(yōu)選的式I化合物選自4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[4-(嗎啉-4-磺酰基)-苯基]-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[6-(2，6-二甲基-嗎啉-4-基)-吡啶-3-基]-酰胺、4′-氰基-2-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、4′-甲氧基-2-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、4′-甲氧基-2-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(4-環(huán)己基-苯基)-酰胺、4′-甲氧基-2-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[6-(2-甲基-嗎啉-4-基)-吡啶-3-基]-酰胺、4′-二甲基氨基-2-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(4-環(huán)己基-苯基)-酰胺、4′-二甲基氨基-2-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(4-嗎啉-4-基-苯基)-酰胺、6-氯代-4′-二甲基氨基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-[1，4]氧雜氮雜環(huán)庚-4-基-吡啶-3-基)-酰胺、6-氯代-4′-二甲基氨基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-嗎啉-4-基-吡啶-3-基)-酰胺、6-氯代-4′-二甲基氨基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、6-氯代-4′-甲氧基-聯(lián)苯基-3-甲酸[6-(2-甲基-嗎啉-4-基)-吡啶-3-基]-酰胺、6-氯代-4′-甲氧基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-[1，4]氧雜氮雜環(huán)庚-4-基-吡啶-3-基)-酰胺、6-氯代-4′-甲氧基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、6-氯代-4′-甲氧基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-嗎啉-4-基-吡啶-3-基)-酰胺、4′-甲氧基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-嗎啉-4-基-吡啶-3-基)-酰胺、4′-甲氧基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-[1，4]氧雜氮雜環(huán)庚-4-基-吡啶-3-基)-酰胺、4′-甲氧基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[6-(2-甲基-嗎啉-4-基)-吡啶-3-基]-酰胺、4′-二甲基氨基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[6-(2-甲基-嗎啉-4-基)-吡啶-3-基]-酰胺、4′-二甲基氨基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-[1，4]氧雜氮雜環(huán)庚-4-基-吡啶-3-基)-酰胺、4′-二甲基氨基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-嗎啉-4-基-吡啶-3-基)-酰胺、4′-甲氧基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、4′-乙氧基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、6-甲基-4′-甲基硫烷基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、4′-二甲基氨基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、6-甲基-[1，1′；4′，1″]三苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、3′-氯代-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、2′，4’-二氯代-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、2′-氯代-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、3′-氯代-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、3′，4’-二氯代-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、3′-氯代-6-甲基-4′-三氟甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、6，4′-二甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、4′-乙基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、4′-叔-丁基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、6-甲基-4′-丙基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、4′-異丁基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、4′-異丙基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、6，2′，6′-三甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、6，2′，3′-三甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、6-甲基-4′-三氟甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、6-甲基-3′-三氟甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、6-甲基-3′，5’-二三氟甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、3′-異丙氧基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、3′-乙氧基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、2′，6’-二甲氧基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、6-甲基-4′-三氟甲氧基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、6-甲基-3′-三氟甲氧基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(4-嗎啉-4-基-苯基)-酰胺、4′-甲氧基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(4-嗎啉-4-基-苯基)-酰胺、3′-甲氧基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(4-嗎啉-4-基-苯基)-酰胺、4′-(2-二甲基氨基-乙氧基)-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(4-嗎啉-4-基-苯基)-酰胺、3′-二甲基氨基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(4-嗎啉-4-基-苯基)-酰胺、4′-氟-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(4-嗎啉-4-基-苯基)-酰胺、3′-氟-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(4-嗎啉-4-基-苯基)-酰胺、2′-氟-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(4-嗎啉-4-基-苯基)-酰胺、4-甲基-N-(4-嗎啉-4-基-苯基)-3-喹喔啉-6-基-苯甲酰胺、6-甲基-4′-(4-甲基-哌嗪-1-基)-聯(lián)苯基-3-甲酸(4-嗎啉-4-基-苯基)-酰胺、2′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(4-嗎啉-4-基-苯基)-酰胺、3′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(4-嗎啉-4-基-苯基)-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-[1，4]氧雜氮雜環(huán)庚-4-基-吡啶-3-基)-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[6-(2-甲基-嗎啉-4-基)-吡啶-3-基]-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(3，4，5，6-四氫-2H-[1，2′]聯(lián)吡啶基-5′-基)-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-嗎啉-4-基-吡啶-3-基)-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基]-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(4-嗎啉-4-基-苯基)-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(3-氟-4-嗎啉-4-基-苯基)-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(3-氯代-4-嗎啉-4-基-苯基)-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(3-溴-4-嗎啉-4-基-苯基)-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(3-甲基-4-嗎啉-4-基-苯基)-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(4-嗎啉-4-基-3-三氟甲基-苯基)-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(4-環(huán)己基-苯基)-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸聯(lián)苯基-4-基酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(4′-甲氧基-聯(lián)苯基-4-基)-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[4-(4-芐基-哌嗪-1-基)-苯基]-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[4-(哌啶-1-磺酰基)-苯基]-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[4-(吡咯烷-1-磺酰基)-苯基]-酰胺、4′-氰基-6-甲氧基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、4′-氰基-2-甲氧基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、4′-氰基-2-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、3′-氟-4′-甲氧基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、4′-異丙氧基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、4′-丁氧基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、3′-氯代-4′-甲氧基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、4′-甲氧基-6，3′-二甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、4′-氰基-2-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[4-(哌啶-1-磺?；?-苯基]-酰胺、4′-氰基-6-氟-聯(lián)苯基-3-甲酸[4-(哌啶-1-磺?；?-苯基]-酰胺、6-溴-4′-氰基-聯(lián)苯基-3-甲酸[4-(哌啶-1-磺?；?-苯基]-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[6-(4-芐基-[1，4]二氮雜環(huán)庚-1-基)-吡啶-3-基]-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[6-(4-噻吩-3-基甲基-[1，4]二氮雜環(huán)庚-1-基)-吡啶-3-基]-酰胺、4′-氰基-2-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[6-(2，6-二甲基-嗎啉-4-基)-吡啶-3-基]-酰胺、4′-甲氧基-2-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[6-(2，6-二甲基-嗎啉-4-基)-吡啶-3-基]-酰胺、2-甲基-4′-三氟甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[6-(2，6-二甲基-嗎啉-4-基)-吡啶-3-基]-酰胺、2-甲基-4′-三氟甲氧基-聯(lián)苯基-3-甲酸[6-(2，6-二甲基-嗎啉-4-基)-吡啶-3-基]-酰胺、4′-氰基-2-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[6-(2-甲基-嗎啉-4-基)-吡啶-3-基]-酰胺、4′-氰基-2-氟-聯(lián)苯基-3-甲酸[4-(哌啶-1-磺?；?-苯基]-酰胺、4′-氰基-6-三氟甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[4-(哌啶-1-磺?；?-苯基]-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[6-(4-吡啶-4-基甲基-[1，4]二氮雜環(huán)庚-1-基)-吡啶-3-基]-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[6-(4-吡啶-3-基甲基-[1，4]二氮雜環(huán)庚-1-基)-吡啶-3-基]-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸{6-[4-(2，6-二甲氧基-芐基)-[1，4]二氮雜環(huán)庚-1-基]-吡啶-3-基}-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸{6-[4-(2-乙氧基-芐基)-[1，4]二氮雜環(huán)庚-1-基]-吡啶-3-基}-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-{4-[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-芐基]-[1，4]二氮雜環(huán)庚-1-基}-吡啶-3-基)-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸{6-[4-(4-甲氧基-2，3-二甲基-芐基)-[1，4]二氮雜環(huán)庚-1-基]-吡啶-3-基}-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸{6-[4-(2，3-二氫-苯并[1，4]二氧雜環(huán)己烯-6-基甲基)-[1，4]二氮雜環(huán)庚-1-基]-吡啶-3-基}-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[6-(4-吡啶-2-基甲基-[1，4]二氮雜環(huán)庚-1-基)-吡啶-3-基]-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[6-(4-苯并[1，3]間二氧雜環(huán)戊烯-4-基甲基-[1，4]二氮雜環(huán)庚-1-基)-吡啶-3-基]-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸{6-[4-(2-三氟甲氧基-芐基)-[1，4]二氮雜環(huán)庚-1-基]-吡啶-3-基}-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸{6-[4-(2-二甲基氨基-芐基)-[1，4]二氮雜環(huán)庚-1-基]-吡啶-3-基}-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸{6-[4-(2-氯代-5-三氟甲基-芐基)-[1，4]二氮雜環(huán)庚-1-基]-吡啶-3-基}-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸{6-[4-(2，3-二氟-芐基)-[1，4]二氮雜環(huán)庚-1-基]-吡啶-3-基}-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸{6-[4-(2-氯代-4-氟-芐基)-[1，4]二氮雜環(huán)庚-1-基]-吡啶-3-基}-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸{6-[4-(2，6-二氟-芐基)-[1，4]二氮雜環(huán)庚-1-基]-吡啶-3-基}-酰胺、2-氯代-4′-氰基-聯(lián)苯基-3-甲酸[4-(哌啶-1-磺酰基)-苯基]-酰胺、4′-氰基-6-三氟甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[6-(2，6-二甲基-嗎啉-4-基)-吡啶-3-基]-酰胺、2-氯代-4′-氰基-聯(lián)苯基-3-甲酸[6-(2，6-二甲基-嗎啉-4-基)-吡啶-3-基]-酰胺、4′-氰基-6-乙基-聯(lián)苯基-3-甲酸[6-(2，6-二甲基-嗎啉-4-基)-吡啶-3-基]-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸{6-[4-(3-氟-芐基)-哌嗪-1-基]-吡啶-3-基}-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸{6-[4-(2-三氟甲氧基-芐基)-哌嗪-1-基]-吡啶-3-基}-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸{6-[4-(3-氯代-芐基)-哌嗪-1-基]-吡啶-3-基}-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸{6-[4-(4-異丁基-芐基)-哌嗪-1-基]-吡啶-3-基}-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸{6-[4-(4-叔-丁基-芐基)-哌嗪-1-基]-吡啶-3-基}-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸{6-[4-(7-甲氧基-苯并[1，3]間二氧雜環(huán)戊烯-5-基甲基)-哌嗪-1-基]-吡啶-3-基}-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[6-(4-芐基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基]-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[6-(4-吡啶-3-基甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基]-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸{6-[4-(4-二氟甲氧基-芐基)-哌嗪-1-基]-吡啶-3-基}-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸{6-[4-(4-氰基-芐基)-哌嗪-1-基]-吡啶-3-基}-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[6-(4-喹啉-5-基甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基]-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[6-(4-吡啶-4-基甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基]-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[6-(4-吡啶-2-基甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基]-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸{6-[4-(4-咪唑-1-基-芐基)-哌嗪-1-基]-吡啶-3-基}-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸{6-[4-(3-氰基-芐基)-哌嗪-1-基]-吡啶-3-基}-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[6-(4-異喹啉-5-基甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基]-酰胺、(R)-2-甲基-N-(6-(2-甲基嗎啉代)吡啶-3-基)-4′-(三氟甲氧基)聯(lián)苯基-3-甲酰胺、4′-氰基-2-甲基-N-(6-磺酰基嗎啉代吡啶-3-基)聯(lián)苯基-3-甲酰胺、(S)-4′-氰基-2-甲基-N-(6-(2-甲基嗎啉代)吡啶-3-基)聯(lián)苯基-3-甲酰胺、(R)-6-氯代-N-(6-(2-甲基嗎啉代)吡啶-3-基)-4′-(三氟甲氧基)聯(lián)苯基-3-甲酰胺、4′-氰基-2-甲基-N-(6-亞磺酰基嗎啉代吡啶-3-基)聯(lián)苯基-3-甲酰胺、4′-氰基-N-(6-(二異丁基氨基)吡啶-3-基)-2-甲基聯(lián)苯基-3-甲酰胺、4′-氰基-N-(2-((2S，6R)-2，6-二甲基嗎啉代)嘧啶-5-基)-2-甲基聯(lián)苯基-3-甲酰胺、N-(2-((2S，6R)-2，6-二甲基嗎啉代)嘧啶-5-基)-2-甲基-4′-(三氟甲基)聯(lián)苯基-3-甲酰胺、N-(2-((2S，6R)-2，6-二甲基嗎啉代)嘧啶-5-基)-2-甲基-4′-(三氟甲氧基)聯(lián)苯基-3-甲酰胺、N-(2-(二(2-羥基乙基)氨基)嘧啶-5-基)-2-甲基-4′-(三氟甲氧基)聯(lián)苯基-3-甲酰胺、2-甲基-N-(6-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)吡啶-3-基)-4′-(三氟甲氧基)聯(lián)苯基-3-甲酰胺、N-(5-氯代-6-((2S，6R)-2，6-二甲基嗎啉代)吡啶-3-基)-2-甲基-4′-(三氟甲氧基)聯(lián)苯基-3-甲酰胺、N-(6-((2R，6S)-2，6-二甲基四氫-2H-吡喃-4-基)吡啶-3-基)-2-甲基-4′-(三氟甲氧基)聯(lián)苯基-3-甲酰胺、N-(6-(4-乙基哌嗪-1-羰基)吡啶-3-基)-2-甲基-4′-(三氟甲氧基)聯(lián)苯基-3-甲酰胺、2-甲基-N-(6-(2-氧代哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-4′-(三氟甲氧基)聯(lián)苯基-3-甲酰胺、2-甲基-N-(6-(1-(吡啶-4-基甲基)哌啶-4-基)吡啶-3-基)-4′-(三氟甲氧基)聯(lián)苯基-3-甲酰胺、2-甲基-N-(6-(2-氧代-4-(吡啶-4-基甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-4′-(三氟甲氧基)聯(lián)苯基-3-甲酰胺、2-甲基-N-(6-(1-(吡啶-4-基甲基)哌啶-3-基)吡啶-3-基)-4′-(三氟甲氧基)聯(lián)苯基-3-甲酰胺、N-(6-(1-乙基哌啶-3-基)吡啶-3-基)-2-甲基-4′-(三氟甲氧基)聯(lián)苯基-3-甲酰胺和N-(6-((2R，6S)-2，6-二甲基嗎啉代)吡啶-3-基)-2-甲基-4′-(三氟甲氧基)聯(lián)苯基-3-甲酰胺。
因此，它特別涉及能夠干擾刺猬蛋白、Ptc或smoothened信號轉(zhuǎn)導(dǎo)活性的式I化合物，該化合物同樣能夠抑制正常細(xì)胞和/或具有patched功能喪失表型、刺猬蛋白功能獲得表型、smoothened功能獲得表型、Gli功能獲得表型或刺猬蛋白配體表型過度表達(dá)的細(xì)胞中的增生(或其它生物學(xué)結(jié)果)。因此，在某些實施方案中，它涉及這些化合物用于抑制正常細(xì)胞中刺猬蛋白活性，例如，所述細(xì)胞沒有能夠激活刺猬蛋白通路的基因突變。在優(yōu)選的實施方案中，化合物能夠抑制刺猬蛋白的至少某些生物學(xué)活性，優(yōu)選特別是在靶細(xì)胞中的刺猬蛋白。
因此，本發(fā)明方法包括式I化合物的用途，在對多種細(xì)胞、組織和器官(包括正常細(xì)胞、組織和器官)以及具有Ptc功能喪失、刺猬蛋白功能獲得、smoothened功能獲得或Gli功能獲得表型的細(xì)胞、組織和器官的修復(fù)和/或功能表現(xiàn)的調(diào)節(jié)中，通過例如抑制smoothened或信號通路下游成分的激活，它能夠激動刺猬蛋白信號的Ptc抑制。例如，所述方法具有治療和美容用途，用途范圍包括神經(jīng)組織的調(diào)節(jié)，骨和軟骨的形成和修復(fù)，精子生成調(diào)節(jié)，平滑肌調(diào)節(jié)，肺、肝以及其它原腸器官的調(diào)節(jié)，造血功能調(diào)節(jié)，皮膚和毛發(fā)生長的調(diào)節(jié)等。而且，所述方法可以在培養(yǎng)的細(xì)胞(體外)中進行，或者在機體細(xì)胞(體內(nèi))中進行。
在另一個實施方案中，所述方法可以治療具有Ptc功能喪失表型、刺猬蛋白功能獲得表型、smoothened功能獲得表型或Gli功能獲得表型的上皮細(xì)胞。例如，所述方法可以用于治療或預(yù)防基底細(xì)胞癌或其它與刺猬蛋白通路相關(guān)的疾病。
在某些實施方案中，式I化合物可以通過與smoothened或其下游蛋白結(jié)合而抑制刺猬蛋白通路的激活。在某些實施方案中，所述拮抗劑可以通過與patched結(jié)合而抑制刺猬蛋白通路的激活。
在另一個優(yōu)選的實施方案中，所述方法可以作為惡性髓母細(xì)胞瘤和其它原發(fā)性CNS惡性神經(jīng)外胚瘤治療方案的一部分。
另一方面，本發(fā)明提供了藥物制劑，它含有作為活性成分的例如本文中所述的刺猬蛋白信號調(diào)節(jié)劑(例如式I化合物)、Ptc激動劑、smoothened拮抗劑或下游刺猬蛋白通路蛋白拮抗劑，該制劑的量應(yīng)足以抑制體內(nèi)Ptc功能喪失、刺猬蛋白功能獲得、smoothened功能獲得或Gli功能獲得的增生或其它生物學(xué)結(jié)果。
采用式I化合物、patched激動劑、smoothened拮抗劑或下游刺猬蛋白通路蛋白拮抗劑的所述治療對人類或動物患者均有效。本發(fā)明可適用的動物患者包括作為寵物或商業(yè)目的的馴養(yǎng)動物和家畜。實例包括犬、貓、牛、馬、綿羊、豬和山羊。
藥理學(xué)和效用 本發(fā)明發(fā)明了抑制刺猬蛋白信號通路激活的有用的方法和化合物，例如，抑制由表型例如Ptc功能喪失、刺猬蛋白功能獲得、smoothened功能獲得或Gli功能獲得而導(dǎo)致的異常生長狀態(tài)，所述方法包括使得細(xì)胞與式I化合物接觸，所述化合物的量應(yīng)足以激動正常Ptc活性，拮抗正常刺猬蛋白活性，拮抗smoothened活性或者拮抗Gli活性，例如以逆轉(zhuǎn)或控制異常生長狀態(tài)。
信號分子的刺猬蛋白家族成員能夠介導(dǎo)脊椎動物發(fā)育過程中的多種重要的短程和長程模式過程。模式形成是一種活動，胚胎細(xì)胞通過它來形成分化組織的有序空間排列。在胚胎形成過程中，通過細(xì)胞自身的譜系和細(xì)胞外信號的相互作用產(chǎn)生了高等有機體的機體復(fù)雜性。誘導(dǎo)性的相互作用對于脊椎動物發(fā)育中的胚胎模式形成是必需的，包括從早期身體架構(gòu)的構(gòu)建到器官系統(tǒng)模式形成以及在組織分化期間不同的細(xì)胞類型的產(chǎn)生。發(fā)育細(xì)胞相互作用的效果是不同的應(yīng)答細(xì)胞被誘導(dǎo)細(xì)胞從一種細(xì)胞分化途徑轉(zhuǎn)換到另一種途徑，所述的誘導(dǎo)細(xì)胞不同于未誘導(dǎo)和誘導(dǎo)階段的應(yīng)答細(xì)胞(誘導(dǎo)作用)。有些情況下，細(xì)胞誘導(dǎo)其鄰近的細(xì)胞象其自身一樣分化(同源誘導(dǎo))；在其它情況下，細(xì)胞抑制其鄰近的細(xì)胞象其自身一樣分化。在早期發(fā)育中，細(xì)胞相互作用可以是相繼的，以便兩種細(xì)胞類型間的初期誘導(dǎo)作用引起差異的遞增放大。此外，誘導(dǎo)性的相互作用不僅發(fā)生在胚胎，也發(fā)生在成熟細(xì)胞中，可以用于建立和維持形態(tài)形成模式以及誘導(dǎo)分化。
刺猬蛋白基因的脊椎動物家族包括存在于哺乳動物中的三種成員，稱為Desert(Dhh)、Sonic(Shh)和Indian(Ihh)刺猬蛋白，它們均能夠編碼分泌的蛋白質(zhì)。這些不同的刺猬蛋白由信號肽、高度保存的N末端區(qū)域和差異較大的C末端區(qū)域組成。生物化學(xué)研究已經(jīng)顯示Hh前體蛋白的自身蛋白酶解通過自身的硫酯中間體來進行，所述的中間體隨后在親核取代反應(yīng)中裂解。很有可能的是，親核體是較小的親脂性分子，它共價結(jié)合在N-肽的C末端，將其束縛于細(xì)胞表面。該生物學(xué)含意是很深奧的。由于這種束縛，在產(chǎn)生刺猬蛋白的細(xì)胞表面上產(chǎn)生了局部高濃度的N-末端刺猬蛋白肽。這種N-末端肽對于短程或長程的刺猬蛋白信號活性而言是必要的和充分的。
刺猬蛋白信號通路失活是指其中跨膜蛋白受體Patched(Ptc)抑制了Smoothened(Smo)(一種七跨膜蛋白)的活性的情況。轉(zhuǎn)錄因子Gli是一種Hh信號的下游組分，它通過與細(xì)胞質(zhì)蛋白(包括Fused和fused的抑制物(Sufu))的相互作用被阻止進入細(xì)胞核。因此，刺猬蛋白靶基因的轉(zhuǎn)錄活化被抑制。通過三種哺乳動物配體(Dhh、Shh或Ihh)中的任何一種與Ptc結(jié)合來啟動該通路的活化。配體結(jié)合導(dǎo)致了Smo抑制的逆轉(zhuǎn)，因而激活了產(chǎn)生轉(zhuǎn)錄因子Gli的活化形式向細(xì)胞核易位的級聯(lián)。細(xì)胞核Gli激活了靶基因表達(dá)，包括Ptc和Gli自身。
刺猬蛋白信號水平的升高足以啟動癌癥形成，并且是腫瘤存活所必需。這些癌癥包括但不限于前列腺癌(“在前列腺再生、瘤形成和轉(zhuǎn)移中的刺猬蛋白信號(Hedgehog signaling in prostate regeneration，neoplasia andmetastasis)”，Karhadkar SS，Bova GS，Abdallah N，Dhara S，Gardner D，Maitra A，Isaacs JT，Berman DM，Beachy PA.，Nature.2004年10月7日；431(7009)707-12；“通過干擾SONIC刺猬蛋白-GLI1信號而抑制前列腺癌增生(Inhibition of prostate cancer proliferation by interference with SONICHedgehog-GLI1 signaling)”，Sanchez P，Hernandez AM，Stecca B，Kahler AJ，DeGueme AM，Barrett A，Beyna M，Datta MW，Datta S，Ruizi Altaba A.，Proc Natl Acad Sci U S A.2004年8月24日；101(34)12561-6)，(“環(huán)巴胺和吉非替尼(選擇性刺猬蛋白和表皮生長因子受體信號抑制劑)的組合產(chǎn)品在前列腺癌細(xì)胞中所引起的細(xì)胞毒作用(Cytotoxic effects induced by a combinationof Cyclopamine and gefitinib，the selective Hdegehog and epidermal growthfactor receptor signaling inhibitors，in prostate cancer cells)，”Mimeault M，Moore E，Moniaux N，等(2006)，International Journal of Cancer；118(4)1022-31)，乳癌(“刺猬蛋白信號通路是乳癌患者的新的治療靶點(Hedgehog signaling pathway is a new therapeutic target for patients withbreast cancer)”，Kubo M，Nakamura M，Tasaki A，Yamanaka N，NakashimaH，Nomura M，Kuroki S，Katano M.，Cancer Res.2004年9月1日；64(17)6071-4)，(“刺猬蛋白信號和Bmi-1調(diào)節(jié)正常和惡性人類乳腺干細(xì)胞的自我更新(Hedgehog signaling和regulate self-renewal of normal andmalignant human mammary stem cells)，”Liu S，Dontu G，Mantle ID，等(2006)Cancer Res；66(12)6063-71)，(“smoothened(SMO)在轉(zhuǎn)基因小鼠乳腺中的構(gòu)成性激活導(dǎo)致增生提高、分化改變和導(dǎo)管發(fā)育不良(Constitutiveactivation of in mammary glands of transgenic mice leads to increasedproliferation，altered differentiation and ductal dysplasia)，”Moraes RC，Zhang XM，Harrington N，等(2007)，Development；134(6)1231-42)，母細(xì)胞瘤(“通過刺猬蛋白通路阻斷抑制髓母細(xì)胞瘤生長(Medulloblastoma growthinhibition by Hedgehog pathway blockade)”，Berman DM，Karhadkar SS，Hallahan AR，Pritchard JI，Eberhart CG，Watkins DN，Chen JK，CooperMK，Taipale J，Olson JM，Beachy PA.，Science.2002年8月30日；297(5586)1559-61)，非-黑素瘤皮膚癌(即鱗狀細(xì)胞癌(SCC)和基底細(xì)胞癌(BCC))(“刺猬蛋白信號通路的小分子抑制劑的鑒別對基底細(xì)胞癌樣病變的作用(Identification of a small molecule inhibitor of the hedgehog signalingpathwayeffects on basal cell carcinoma-like lesions)”，Williams JA，Guicherit OM，Zaharian BI，Xu Y，Chai L，Wichterle H，Kon C，GatchalianC，Porter JA，Rubin LL，Wang FY.，Proc Natl Acad Sci U S A.2003年4月15日；100(8)4616-21；“激活偶發(fā)性基底細(xì)胞癌中的Smoothened突變(Activating Smoothened mutations in sporadic basal-cell carcinoma)”，Xie J，Murone M，Luoh SM，Ryan A，Gu Q，Zhang C，Bonifas JM，Lam CW，HynesM，Goddard A，Rosenthal A，Epstein EH Jr，de Sauvage FJ.，Nature.1998年1月1日；391(6662)90-2)，胰腺癌、食道癌、胃癌和膽管癌(“刺猬蛋白為胰腺癌腫瘤形成的早期和晚期遞質(zhì)(Hedgehog is an early and late mediator ofpancreatic cancer tumorigenesis)”，Thayer SP，di Magliano MP，Heiser PW，Nielsen CM，Roberts DJ，Lauwers G Y，Qi Y P，Gysin S，F(xiàn)ernandez-delCastillo C，Yajnik V，Antoniu B，McMahon M，Warshaw AL，Hebrok M.，Nature.2003年10月23日；425(6960)851-6；“在消化道腫瘤生長中普遍存在的刺猬蛋白配體刺激需要(Widespread requirement for Hedgehog ligandstimulation in growth of digestive tract tumours)”，Berman DM，KarhadkarSS，Maitra A，Montes De Oca R，Gerstenblith MR，Briggs K，Parker AR，Shimada Y，Eshleman JR，Watlins DN，Beachy PA.，Nature.2003年10月23日；425(6960)846-51)，(“核因子-κB在胰腺癌中通過sonic刺猬蛋白誘導(dǎo)作用促進刺猬蛋白信號通路的激活(Nuclear factor-kappa B contributes tohedgehog signaling pathway activation through sonic hedgehog induction inpancreatic cancer)，”Nakashima H，Nakamura M，Yamaguchi H，等(2006)，Cancer Research；66(14)7041-9)，(“刺猬信號的阻斷抑制了胰腺癌侵入和轉(zhuǎn)移用于實體癌聯(lián)合療法的新模式(Blockade of hedgehog signaling inhibitspancreatic cancer invasion and metastasesA new paradigm for combinationtherapy in solid cancers)，”Feldmann G，Dhara S，F(xiàn)endrich V，等(2007)Cancer Research；67(5)2187-96)，(“致癌性KRAS在胰腺癌細(xì)胞中抑制Gli1降解并激活刺猬蛋白信號通路(Oncogenic KRAS suppressesdegradation和activates Hedgehog signaling pathway in pancreatic cancercells)，”Ji Z，Mei FC，Xie J，等(2007)，J Biol Chem；282(19)14048-55)，小細(xì)胞肺癌(“在呼吸道上皮祖細(xì)胞和小細(xì)胞肺癌中的刺猬蛋白信號(Hedgehogsignaling within airway epithelial progenitors and in small-cell lung cancer)”，Watkins DN，Berman DM，Burkholder SG，Wang B，Beachy PA，Baylin SB.，Nature.2003年3月20日；422(6929)313-7)，(“小細(xì)胞肺癌中的刺猬蛋白信號體內(nèi)常見但是體外罕見事件(Hedgehog signaling in small-cell lung cancerFrequent in vivo but a rare event in vitro)，”Vestergaard J，Pedersen MW，Pedersen N，等(2006)，Lung Cancer；52(3)281-90)。
其中刺猬蛋白信號的升高足以啟動癌癥形成并且是腫瘤存活所必需的其它癌癥包括但不限于結(jié)腸癌(“多個大腸癌患者中Sonic刺猬蛋白依賴性增生(Sonic Hedgehog-dependent proliferation in a series of patients withcolorectal cancer)，”Douard R，Moutereau S，Pernet P，等(2006)Surgery；139(5)665-70)，(“結(jié)直腸腫瘤細(xì)胞中的刺猬蛋白信號采用環(huán)巴胺治療誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡(Hedgehog signalling in colorectal tumour cellsInduction ofapoptosis with cyclopamine treatment)，”Qualtrough D，Buda A，Gaffield W，等(2004)，International Journal of Cancer；110(6)831-7)，神經(jīng)膠質(zhì)瘤(“環(huán)巴胺介導(dǎo)的刺猬蛋白通路抑制在成膠質(zhì)細(xì)胞瘤中大大減少干細(xì)胞樣癌細(xì)胞(Cyclopamine-mediated Hedgehog pathway inhibition depletes stem-likecancer cells in glioblastoma)，”Bar EE，Chaudhry A，Lin A，等，Neuro-Oncology；2007，9(4)594)，(“刺猬蛋白-GLI1信號調(diào)節(jié)人類神經(jīng)膠質(zhì)瘤生長、癌干細(xì)胞自我更新和腫瘤生成(Hedgehog-GLI1 signaling regulateshuman glioma growth，cancer stem cell self-renewal，and tumorigenicity)，”Clement V，Sanchez P，de Tribolet N，等，(2007)Current Biology17(2)165-72)，(“神經(jīng)膠質(zhì)瘤干細(xì)胞中刺猬蛋白通路的配體依賴性激活(Ligand-dependent activation of the hedgehog pathway in glioma progenitorcells)，”Ehteshan M，Sarangi A，Valadez JG，等(2007)Oncogene；2007年3月12日，Epub ahead of print)，黑素瘤(“黑素瘤有賴于通過GLI1和RAS-MEK/AKT通路之間相互作用而調(diào)節(jié)的HEDGEHOG-GLI信號(Melanomas require HEDGEHOG-GLI signaling reaulated by interactionsbetween GLI1and the RAS-MEK/AKT pathways)，”Stecca B，Mas C，Clement V，等(2007)，Proceedings of the National Academy of Sciences of theUnited States of America；104(14)5895-900)，非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)(“非小細(xì)胞肺癌中刺猬蛋白信號的頻繁需要(Frequent requirement of hedgehogsignaling in non-small cell lung carcinoma)，”Yuan Z，Goetz JA，Singh S，等(2007)，Oncogene；26(7)1046-55)，卵巢癌(“卵巢癌中刺猬蛋白信號通路的激活與細(xì)胞增生有關(guān)它的抑制導(dǎo)致了生長抑制和細(xì)胞凋亡(Hedgehog signalpathway is activated in ovarian carcinomas，correlating with cell proliferationIt′s inhibition leads to growth suppression and apoptosis)，”Chen XJ，Horiuchi A，Kikuchi N，等，Cancer Science；(2007)98(1)68-76)，肝癌(“人類肝細(xì)胞肝癌中刺猬蛋白通路的激活(Activation ofthe hedgehog pathway inhuman hepatocellular carcinomas)，”Huang SH，He J，Zhang XL，等(2006)，Carcinogenesis；27(7)1334-40)，(“在人類肝癌形成中刺猬蛋白信號通路的失調(diào)(Dysregulation of the Hedgehog signalling pathway in humanhepatocarcinogenesis)，”Sicklick JK，Li YX，Jayaraman A，等(2006)，Carcinogenesis；27(4)748-57)，腎癌(“腎透明細(xì)胞肉瘤采用sonic hedgehog和Akt通路激活的神經(jīng)標(biāo)記的上調(diào)(Clear cell sarcoma of the kidneyUp-regulation of neural markers with activation of the sonic hedgehog andAkt pathways)，”Cutcliffe C，Kersey D，Huang CC，等(2005)，Clinical CancerResearch；11(22)7986-94)，橫紋肌肉瘤(“在Gorlin綜合征小鼠模型中的橫紋肌肉瘤和放射超敏性(Rhabdomyosarcomas and radiation hypersensitivity ina mouse model of Gorlin syndrome)，”Hahn H，Wojnowski L，Zimmer AM，等(1998)，Nature Medicine；4(5)619-22)，(“刺猬蛋白信號通路的失調(diào)PTCH和SUFU基因在人類橫紋肌瘤和橫紋肌肉瘤發(fā)展中的可能的作用(Deregulation of the hedgehog signalling pathwaya possible role for thePTCH and SUFU genes in human rhabdomyoma and rhabdomyosarcomadevelopment)，”Tostar U，Malm CJ，Meis-Kindblom JM，等(2006)，Journalof Pathology；208(1)17-25)，軟骨肉瘤(“在軟骨肉瘤中的構(gòu)成性刺猬蛋白信號上調(diào)腫瘤細(xì)胞增生(Constitutive hedgehog signaling in chondrosarcomaup-regulates tumor cell proliferation)，”Tiet TD，Hopyan S，Nadesan P，等(2006)，American Journal of Pathology；168(1)321-30)。
刺猬蛋白通路抑制劑(例如環(huán)巴胺)已經(jīng)被證實可以用于治療銀屑病(“環(huán)巴胺在銀屑病的治療中抑制刺猬蛋白(Cyclopamineinhibiting hedgehog inthe treatment of psoriasis)”，Cutis，2006，78(3)185-8；Br.J.Dermatology，2006年4月；154(4)619-23，“牛皮癬皮膚表達(dá)轉(zhuǎn)錄因子Gli1神經(jīng)纖維蛋白表達(dá)降低的可能的貢獻(Psoriatic skin expresses the transcription factor Gli1possible contribution of decreased neurofibromin expression)”，Endo H，Momota Y，Oikawa A，Shinkai H.)。
惡性淋巴瘤(ML)涉及淋巴系統(tǒng)細(xì)胞，在美國為第五種主要癌癥。ML包括霍奇金病和非霍奇金病，它們屬于淋巴增生性疾病的多樣化群組?；羝娼鸩〖s占所有惡性淋巴瘤的14％。非霍奇金淋巴瘤為不同的惡性組別，主要源自B細(xì)胞。在實施制劑分類方案時，根據(jù)其固有的歷史特征，這些淋巴瘤被分為低、中和高等級種類(參見“非霍奇金淋巴瘤病理學(xué)分類方案(TheNon-Hodgkin’s Lymphoma Pathologic Classification Project)”Cancer492112-2135，1982)。低級別淋巴瘤無痛，平均生存5-10年(Horning和Rosenberg，N.Engl.J.Med.3111471-1475，1984)。盡管化療可以使得絕大多數(shù)無痛淋巴瘤的緩解，但罕見治愈，大多數(shù)患者最終會復(fù)發(fā)，需要進一步治療。中度級別和高級別淋巴瘤為更具侵略性的腫瘤，但是它們采用化療治愈的機會較大。然而，這些患者中相當(dāng)大的比例會復(fù)發(fā)，需要進一步治療。
多發(fā)性骨髓瘤(MM)是由在骨髓中正常發(fā)現(xiàn)的血漿細(xì)胞類型組成的惡性腫瘤。這些惡性血漿細(xì)胞在骨髓中聚集，通常產(chǎn)生單克隆IgG或IgA分子。所述惡性血漿細(xì)胞在骨髓中棲息并擴張，由于正常造血作用的不足引起貧血癥和免疫抑制。患有多發(fā)性骨髓瘤的個體通常會產(chǎn)生貧血、溶骨性病變、腎衰、高鈣血癥和復(fù)發(fā)性細(xì)菌感染。MM代表第二種最常見的惡性血液病(hematopoietic malignancy)。
根據(jù)本發(fā)明者的發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明可以基本斷定淋巴瘤和多發(fā)性骨髓瘤疾病依賴于刺猬蛋白(Hh)信號通路，它利用分離自轉(zhuǎn)基因Eμ-Myc小鼠和Cdkn2a敲除小鼠的淋巴瘤細(xì)胞和血漿細(xì)胞瘤細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)刺猬蛋白配體介導(dǎo)了間質(zhì)和淋巴瘤細(xì)胞之間的相互作用。同樣的作用也發(fā)現(xiàn)于淋巴瘤和多發(fā)性骨髓瘤樣品，所述樣品分離自患者樣本的骨(多發(fā)性骨髓瘤)或分離自非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者的淋巴結(jié)、骨髓或脾臟以及慢性淋巴細(xì)胞白血病(CLL)樣本。另外發(fā)現(xiàn)，Hh信號通路的抑制誘導(dǎo)了基質(zhì)依賴性淋巴瘤細(xì)胞的凋亡，刺猬蛋白通路成員的過度表達(dá)抑制了環(huán)巴胺誘導(dǎo)的淋巴瘤細(xì)胞的體外凋亡。另外，本發(fā)明者發(fā)現(xiàn)采用刺猬蛋白通路抑制劑對小鼠進行治療能夠使得淋巴瘤在體內(nèi)的擴張終止。最后，本發(fā)明者發(fā)現(xiàn)在脾B-細(xì)胞中以及大多數(shù)環(huán)巴胺應(yīng)答淋巴瘤中沒有Gli3的表達(dá)，但是在所有的環(huán)巴胺對抗淋巴瘤中均能夠優(yōu)勢表達(dá)。
這些數(shù)據(jù)表明，Hh信號提供了對于通過c-Myc轉(zhuǎn)化的最初階段的重要的抗凋亡信號，對于淋巴瘤維持起到了重要的作用。因此，破壞Hh信號通路提供了治療淋巴瘤(例如NHL)、多發(fā)性骨髓瘤、CLL和其它惡性血液病的新方法。另外，Gli3在淋巴瘤中的表達(dá)提供了Hh抑制的響應(yīng)性的負(fù)面預(yù)測因素，并提供了患者分類的重要方法。
根據(jù)這些發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明提供了抑制腫瘤細(xì)胞生長的方法，例如淋巴瘤和骨髓瘤細(xì)胞。本發(fā)明提供了在患者中通過抑制腫瘤細(xì)胞生長而治療淋巴瘤或骨髓瘤的方法和組合物。該方法也用于預(yù)防患者的腫瘤形成。其中某些方法涉及治療相對于脾B細(xì)胞而言Gli3的表達(dá)沒有顯著增加的淋巴瘤。該方法包括給予需要治療的患者藥用組合物，該組合物含有Hh信號拮抗成分(例如式I化合物)。本發(fā)明化合物下調(diào)Hh信號通路成員的細(xì)胞水平或抑制其生物學(xué)活性。
本發(fā)明提供了預(yù)防或治療血液癌癥以及淋巴系統(tǒng)癌癥的方法，包括淋巴瘤、白血病和骨髓瘤。該方法采用刺猬蛋白信號通路拮抗劑抑制淋巴瘤細(xì)胞、白血病細(xì)胞或骨髓瘤細(xì)胞的生長和增生。淋巴瘤是衍生自B淋巴細(xì)胞的淋巴母細(xì)胞的惡性腫瘤。骨髓瘤為由通常發(fā)現(xiàn)于骨髓中的血漿細(xì)胞類組成的惡性腫瘤。白血病為與造血器官有關(guān)的急性或慢性疾病。NHLs的特征在于機體組織中白細(xì)胞數(shù)量的異常增加，伴有或不伴有循環(huán)血液中白細(xì)胞相應(yīng)的增加，它可以根據(jù)其中占絕對優(yōu)勢的白細(xì)胞的類型進行分類。
例如，患有淋巴瘤(例如，B-細(xì)胞淋巴瘤、血漿母細(xì)胞瘤(plasmoblastoma)、血漿細(xì)胞瘤或CLL)或者具有上述腫瘤發(fā)生風(fēng)險的患者可以采用本發(fā)明方法治療。優(yōu)選，所述患者為人類。該方法需要給予所述患者藥用組合物，該組合物含有能夠抑制刺猬蛋白信號通路的有效量的式I化合物。所述患者可以是被診斷為淋巴瘤并伴有轉(zhuǎn)移或沒有轉(zhuǎn)移的患者，可以處于該疾病的任何階段(例如，階段I-IV，Ann Arbor Staging System)。適合采用本發(fā)明方法治療的淋巴瘤包括但不限于霍奇金病和非霍奇金病。霍奇金病是人類淋巴組織惡性疾病(淋巴瘤)，它最初主要起源于淋巴結(jié)，后來擴散到脾臟、肝臟和骨髓。它主要發(fā)生在年齡為15-35之間的個體。其特征在于淋巴結(jié)、脾臟和普通淋巴組織的進行性無痛腫大。典型的霍奇金病分為四種亞型(1)結(jié)節(jié)硬化型霍奇金病(NSHD)；(2)混合細(xì)胞型霍奇金病(MCHD)；(3)淋巴細(xì)胞耗竭型霍奇金病(LDHD)；和(4)富含淋巴細(xì)胞的經(jīng)典型霍奇金病(cLRHD)。
在某些優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明方法用于治療非霍奇金病淋巴瘤(NHL)。非霍奇金病也稱為淋巴肉瘤，它是指與霍奇金病在某些重要方面不同的一組淋巴瘤，根據(jù)癌癥細(xì)胞的顯微特征而分類。非霍奇金病包括但不限于(1)緩慢生長性淋巴瘤和淋巴性白血病(例如，慢性淋巴細(xì)胞白血病、小淋巴細(xì)胞白血病、淋巴血漿細(xì)胞樣淋巴瘤、濾泡中心淋巴瘤、濾泡性小裂細(xì)胞淋巴瘤、濾泡性混合細(xì)胞淋巴瘤、邊緣區(qū)B細(xì)胞淋巴瘤、毛細(xì)胞白血病、血漿細(xì)胞瘤、骨髓瘤、大顆粒淋巴細(xì)胞白血病、蕈樣真菌病、szary綜合征)；(2)中度侵略性淋巴瘤和淋巴性白血病(例如，幼淋巴細(xì)胞白血病、套細(xì)胞淋巴瘤、濾泡中心淋巴瘤、濾泡性小裂細(xì)胞淋巴瘤、濾泡中心淋巴瘤、慢性淋巴細(xì)胞白血病/幼淋巴細(xì)胞白血病、血管中心性淋巴瘤、血管免疫母細(xì)胞性淋巴瘤)；(3)侵略性淋巴瘤(例如，大B細(xì)胞淋巴瘤、外周T-細(xì)胞淋巴瘤、腸道T-細(xì)胞淋巴瘤、間變性大細(xì)胞淋巴瘤)；和(4)高侵略性淋巴瘤和淋巴細(xì)胞白血病(例如，B-細(xì)胞前體B-淋巴細(xì)胞性白血病/淋巴瘤、Burkitt淋巴瘤、高級別B-細(xì)胞淋巴瘤、伯基特(Burkitt)樣T-細(xì)胞前體T-淋巴細(xì)胞白血病/淋巴瘤)。本發(fā)明的方法可以用于成人或兒童型淋巴瘤，也可以用于淋巴瘤的任何階段，例如階段I、II、III或IV。本文中所述的方法也可以用于治療其它類型的白血病，例如急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)。
本發(fā)明的某些治療方法特別涉及用于治療不能表達(dá)Gli3的淋巴瘤或骨髓瘤。根據(jù)下面實施例中所公開，可以觀察到，盡管Gli1和Gli2在所有的淋巴瘤中均有表達(dá)，但是可檢測的Gli3表達(dá)主要存在于對通過環(huán)巴胺進行的Hh通路的抑制具有抗性的淋巴瘤中。在正常的脾B細(xì)胞中和大多數(shù)環(huán)巴胺應(yīng)答型淋巴瘤中沒有Gli3的表達(dá)。因此，在采用Hh拮抗劑治療前，患有淋巴瘤的患者可以首先在獲自患者的淋巴瘤細(xì)胞樣本中進行Gli3表達(dá)的檢查。樣本中的Gli3表達(dá)水平可以與正常脾B細(xì)胞(獲自患者)中的Gli3表達(dá)水平進行比較。在淋巴瘤或骨髓瘤樣本中和在對照細(xì)胞中的Gli3表達(dá)可以采用本領(lǐng)域中已知的方法測定，例如采用下面實施例中所述的方法。如果在淋巴瘤或骨髓瘤樣本中沒有可檢測的Gli3表達(dá)或者表達(dá)水平較正常B細(xì)胞中Gli3表達(dá)水平?jīng)]有明顯的提高(例如，不高于25％、50％或100％)，則說明采用本文中所述的Hh拮抗劑治療有可能產(chǎn)生響應(yīng)。除了作為本發(fā)明治療方法的其它步驟外，對于Gli3表達(dá)匱乏的前期篩選也可以獨立用作患者分類的方法。
除了淋巴瘤外，上述方法和組合物也適用于治療骨髓瘤。多發(fā)性骨髓瘤為致命性腫瘤，其特征在于一簇(a clone)血漿細(xì)胞的積聚，通常伴有Ig鏈的分泌。腫瘤的骨髓侵入與伴有細(xì)菌感染的貧血、低丙種球蛋白血癥(hypogammaglobinemia)和粒細(xì)胞減少有關(guān)。異常的細(xì)胞因子環(huán)境(主要是IL-6和IL-1β水平升高)經(jīng)常會導(dǎo)致破骨增加，產(chǎn)生骨痛、骨折和高鈣血癥。盡管可以進行侵入性化療和移植，但多發(fā)性骨髓瘤仍然是普遍存在的致命性血漿增生性疾病。
本發(fā)明化合物用于治療與刺猬蛋白相關(guān)的疾病，例如基底細(xì)胞痣綜合征(也稱為Gorlin綜合征和/或痣樣基底細(xì)胞癌)，它是一種罕見的常染色體顯性癌樣遺傳綜合征。
本發(fā)明化合物用于治療基底細(xì)胞癌(BCC或嚙齒類動物潰瘍)、源自皮層或腎上腺髓質(zhì)的髓質(zhì)部的腎上腺腫瘤和卵巢腫瘤。
本發(fā)明化合物用于治療骨過度生長疾病，包括但不限于肢端肥大癥、巨頭畸形、Sotos綜合征、進行性骨干發(fā)育異常(PDD或Camurati-Engelmann疾病)、顱骨骨干發(fā)育異常(craniodiaphyseal dysplasia)和骨內(nèi)膜骨質(zhì)增生(endosteal hyperostosis)疾病，包括Van Buchem疾病(I型和II型)和硬化性骨化病(sclerosteosis)。
本發(fā)明化合物用于治療不受歡迎的毛發(fā)生長(例如毛痣)以及脫毛后毛發(fā)再生長的美容預(yù)防。
本發(fā)明化合物用于治療肝纖維化。
因此，本發(fā)明方法包括本發(fā)明化合物在調(diào)節(jié)各類細(xì)胞、組織和器官的修復(fù)和/或功能表現(xiàn)中拮抗刺猬蛋白信號的Ptc抑制中的用途，例如抑制信號通路的smoothened或下游成分的激活，所述細(xì)胞、組織和器官包括正常細(xì)胞、組織和器官以及那些具有表型Ptc功能喪失、刺猬蛋白功能獲得、smoothened功能獲得或Gli功能獲得的細(xì)胞、組織和器官。例如，所述方法為治療和化妝品應(yīng)用，包括神經(jīng)組織的調(diào)節(jié)，骨和軟骨的形成和修復(fù)，精子生成調(diào)節(jié)，良性前列腺增生調(diào)節(jié)，在濕性黃斑變性中的血管壁調(diào)節(jié)，銀屑病調(diào)節(jié)，平滑肌調(diào)節(jié)，肺、肝和其它主要內(nèi)臟器官的調(diào)節(jié)、造血功能的調(diào)節(jié)、皮膚和毛發(fā)生長的調(diào)節(jié)等。另外，所述方法可以在細(xì)胞上進行，可以是培養(yǎng)中的細(xì)胞(體外)或整個機體中的細(xì)胞(體內(nèi))。
綜上所述，本發(fā)明還提供了在需要此類治療的患者中預(yù)防或治療上述任何疾病或病癥的方法，該方法包括給予所述患者治療有效量的(參見下文“給藥和藥用組合物”)式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。對于任何上述用途而言，需要的劑量取決于給藥的模式、待治療的特定疾病以及預(yù)期的效果。
給藥和藥用組合物 一般而言，通過任何本領(lǐng)域常用的和可接受的方法，本發(fā)明化合物可以以治療有效量單獨進行給藥，或者與一種或多種治療藥物組合給藥。治療有效量可以在很大程度上進行變化，這取決于疾病的嚴(yán)重性、個體的年齡和相對健康狀況、所用化合物的效能以及其它因素。一般情況下，日劑量約0.03-2.5mg/kg體重的全身給藥可獲得令人滿意的結(jié)果。在大型哺乳動物例如人類中，推薦的日劑量范圍為約0.5mg至約100mg，例如以最多每日四次的分劑量或以緩釋形式方便地給藥。用于口服給藥的合適的單位劑型包含約1-50mg活性成分。
本發(fā)明的化合物可以作為藥物組合物通過任何常規(guī)途徑給藥，特別是胃腸內(nèi)(例如口服)途徑，例如以片劑或膠囊劑形式給藥；或者通過胃腸外途徑，例如以可注射的溶液劑或混懸液形式給藥；通過局部給途徑，例如以洗劑、凝膠劑、軟膏劑或霜劑的形式給藥；或者以經(jīng)鼻形式或栓劑形式給藥。含有游離形式或可藥用鹽形式的本發(fā)明化合物以及至少一種可藥用的載體或稀釋劑的藥物組合物可以按常規(guī)方式通過混合、制?；虬碌姆椒ㄖ苽洹＠?，口服組合物可以是片劑或明膠膠囊，它包含活性成分與a)稀釋劑，例如乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纖維素和/或甘氨酸；b)潤滑劑，例如硅膠、滑石粉、硬脂酸、硬脂酸鎂或鈣鹽和/或聚乙二醇；對于片劑而言，還包含c)粘合劑，例如硅酸鎂鋁、淀粉糊、明膠、西黃蓍膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯酮；如果需要的話，還可以包含d)崩解劑，例如淀粉、瓊脂、海藻酸及其鈉鹽或泡騰混合物；和/或e)吸收劑、著色劑、矯味劑和甜味劑?？勺⑸涞慕M合物可以是等滲的水溶液或混懸液，栓劑可以自脂肪乳劑或混懸劑制備。該組合物可以滅菌和/或包含輔助劑，例如防腐劑、穩(wěn)定劑、潤濕劑、乳化劑、溶液促進劑、調(diào)節(jié)滲透壓的鹽和/或緩沖劑。此外，它們還可以包含其它有治療價值的物質(zhì)。用于透皮給藥的合適制劑包含有效量的本發(fā)明化合物和載體。載體可以包含可吸收的藥理學(xué)可接受的溶劑以有助于通過宿主皮膚。例如，透皮裝置為繃帶形式，它包括背襯、含有化合物以及任選載體的貯庫、任選的速率控制屏障(它以可控的和預(yù)設(shè)的速率在延長的時期內(nèi)向宿主皮膚傳遞所述化合物)以及將該裝置固定于皮膚的工具。還可以采用基質(zhì)型透皮制劑。用于局部使用(例如用于皮膚和眼睛)的合適的制劑優(yōu)選本領(lǐng)域內(nèi)眾所周知的水溶液、軟膏劑、霜劑或凝膠劑。此類制劑可以含有增溶劑、穩(wěn)定劑、張力增強劑、緩沖劑和防腐劑。
本發(fā)明化合物可以以治療有效量與其它治療方法聯(lián)合應(yīng)用，其它方法例如放療、骨髓移植或激素治療。
本發(fā)明的化合物可以以治療有效量與一種或多種治療藥物組合給藥(藥物組合產(chǎn)品)。例如，與用于治療淋巴瘤或骨髓瘤的免疫調(diào)節(jié)劑、抗炎物質(zhì)、其它抗腫瘤治療劑、化療劑、切除術(shù)(ablation)或其它治療激素類、抗腫瘤劑和/或單克隆抗體聯(lián)合應(yīng)用可以產(chǎn)生協(xié)同作用。某些眾所周知的抗癌藥物在本領(lǐng)域中已有報道，例如，《癌癥治療實驗和臨床藥物(Cancer TherapeuticsExperimental and clinical Agents)》，Teicher(編輯)，Humana Press(第一版，1997)；和《Goodman和Gilman的治療藥理學(xué)基礎(chǔ)(Goodman and Gilman’sThe Pharmacolgical Basis of Therapeutics)》，Hardman等(編輯)，McGraw-Hill Professional(第10版，2001)。適當(dāng)?shù)目拱┧幬锏膶嵗?-氟尿嘧啶、硫酸長春堿、磷酸雌氮芥、蘇拉明和鍶-89。適當(dāng)?shù)幕熕幬锏膶嵗ㄌ扉T冬酰胺酶、硫酸博來霉素、順鉑、阿糖胞苷、磷酸氟達(dá)拉濱、絲裂霉素和鏈脲霉素。
當(dāng)本發(fā)明化合物與其它治療方法聯(lián)合應(yīng)用時，聯(lián)合給藥的化合物的劑量當(dāng)然取決于采用的聯(lián)合給藥的類型、采用的特定藥物、待治療的疾病等等。
本發(fā)明還提供了藥物組合產(chǎn)品，例如藥盒，它包含a)第一種藥物，為游離形式或可藥用鹽形式的如本文所公開的本發(fā)明化合物，以及b)至少一種聯(lián)合藥物。該藥盒可以包含用于其給藥的說明書。
本文所用的術(shù)語“聯(lián)合給藥”或“組合給藥”等的含義包括向單個患者給藥所選擇的治療藥物的給藥，還包括其中所述藥物不是必須在相同時間或通過相同給藥途徑給藥的治療方案。
本文所用的術(shù)語“藥物組合產(chǎn)品”的含義是將一種以上的活性成分混合或組合所獲得的產(chǎn)品，包括活性成分的固定組合和非固定組合。術(shù)語“固定組合”是指活性成分(例如式I化合物)和聯(lián)合藥物以單一實體或劑型的形式同時給予患者。術(shù)語“非固定組合”是指活性成分(例如式I化合物)和聯(lián)合藥物作為分離的實體同時或在沒有特別時間限制下共同或先后給藥于患者，其中此類給藥方式在患者體內(nèi)提供了這兩種化合物的治療有效水平。后者還應(yīng)用于雞尾酒療法，例如用于3種或更多種活性成分的給藥。
制備本發(fā)明化合物的方法 本發(fā)明也包括本發(fā)明化合物的制備方法。在所述反應(yīng)中，如果在終產(chǎn)物中需要反應(yīng)性官能團(例如羥基、氨基、亞氨基、硫代基團或羧基)的存在，則有必要對其加以保護以避免其參與不需要的反應(yīng)。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)實踐，可以采用常規(guī)的保護基團，例如，參見T.W.Greene和P.G.M.Wuts的《有機化學(xué)中的保護基團(Protective Groups in Organic Chemistry)》，John Wiley andSons，1991。
式I化合物可以根據(jù)下列反應(yīng)流程I中的方法制備 反應(yīng)流程I
其中Y1、Y2、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9如發(fā)明內(nèi)容中式I所定義。在約-20至約100℃的溫度范圍內(nèi)，在適當(dāng)?shù)娜軇?例如，二氯甲烷，N，N--二甲基甲酰胺甲酰胺等)存在下，通過使得式2(或2’)化合物與式3式化合物反應(yīng)，可以制備I化合物。反應(yīng)可以進行至多約20小時直到完成。
式I化合物合成的詳細(xì)實例可以參見下文中的實施例。
制備本發(fā)明化合物的其它方法 通過將游離堿形式的所述化合物與可藥用的無機或有機酸反應(yīng)，可以將本發(fā)明化合物制備為可藥用的酸加成鹽。或者，通過將游離酸形式的所述化合物與可藥用的無機或有機堿反應(yīng)，可以制備本發(fā)明化合物的可藥用的堿加成鹽。
或者，可以使用原料或中間體的鹽制備本發(fā)明化合物的鹽形式。
可以分別從相應(yīng)的堿加成鹽或酸加成鹽形式制備本發(fā)明化合物的游離酸或游離堿形式。例如可以通過用合適的堿(例如氫氧化銨溶液、氫氧化鈉等)處理，使酸加成鹽形式的本發(fā)明化合物轉(zhuǎn)化為對應(yīng)的游離堿?？梢酝ㄟ^采用適當(dāng)?shù)乃?例如鹽酸等)處理，使堿加成鹽形式的本發(fā)明化合物轉(zhuǎn)化為對應(yīng)的游離酸。
在適當(dāng)?shù)亩栊杂袡C溶劑(例如乙腈、乙醇、二氧六環(huán)水溶液等)中，于0℃至80℃，通過用還原劑(例如，硫、二氧化硫、三苯基膦、硼氫化鋰、硼氫化鈉、三氯化磷、三溴化磷等)處理，可以自本發(fā)明化合物的N-氧化物制備本發(fā)明化合物的未氧化形式。
可以通過那些本領(lǐng)域普通技術(shù)人員公知的方法來制備本發(fā)明化合物的前藥衍生物(例如，進一步的細(xì)節(jié)參見Saulnier等，(1994)，Bioorganic andMedicinal Chemistry Letters，第4卷，1985頁)。例如，通過使得非衍生化的本發(fā)明化合物與適當(dāng)?shù)陌奔柞；噭?例如，1，1-酰氧基烷基氯甲酸酯(1，1-acyloxyalkylcarbanochloridate)，對-硝基苯基碳酸酯等)反應(yīng)，可以制備適當(dāng)?shù)那八帯?br>
可以通過那些本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的方法來制備本發(fā)明化合物的被保護的衍生物。保護基團的產(chǎn)生及其去除的應(yīng)用技術(shù)的詳細(xì)描述可以參見T.W.Greene，“有機化學(xué)中的保護基團(Protecting Groups in OrganicChemistry)”，第3版，John Wiley and Sons公司，1999。
可以在本發(fā)明的反應(yīng)過程中方便地制成或形成本發(fā)明化合物的溶劑合物(例如水合物)?？梢圆捎糜袡C溶劑例如二噁英、四氫呋喃或甲醇，通過自水/有機溶劑混合物中重結(jié)晶來方便地制備本發(fā)明化合物的水合物。
可以將所述化合物的外消旋混合物與光學(xué)活性的拆分試劑反應(yīng)來形成一對非對映異構(gòu)體化合物，然后分離非對映異構(gòu)體并回收光學(xué)純的對映異構(gòu)體，制備作為其單一立體異構(gòu)體的本發(fā)明化合物。雖然可以使用本發(fā)明化合物的共價非對映異構(gòu)的衍生物來進行對映異構(gòu)體的拆分，但優(yōu)選可解離的復(fù)合物(例如結(jié)晶的非對映異構(gòu)的鹽)。非對映異構(gòu)體具有不同的物理性質(zhì)(例如熔點、沸點、溶解度、反應(yīng)性等)，可以利用這些不同點容易地進行分離?？梢酝ㄟ^色譜法或優(yōu)選通過基于不同溶解度的分離/拆分技術(shù)來分離非對映異構(gòu)體。然后通過不會導(dǎo)致外消旋化的任何實用方法回收光學(xué)純的對映異構(gòu)體與拆分試劑。用于將化合物的立體異構(gòu)體從其外消旋混合物中拆分的技術(shù)的更加詳細(xì)描述可以參見Jean Jacques，Andre Collet，Samuel H.Wilen，“對映體、外消旋體及拆分(Enantiomers，Racemates and Resolutions)，”John Wiley And Sons，Inc.，1981。
綜上所述，式I化合物可以通過包括下列步驟的方法制備 (a)反應(yīng)流程I的方法；和 (b)任選將本發(fā)明化合物轉(zhuǎn)化為藥學(xué)上可接受的鹽； (c)任選將鹽形式的本發(fā)明化合物轉(zhuǎn)化為非鹽形式； (d)任選將非氧化形式的本發(fā)明化合物轉(zhuǎn)化為藥學(xué)上可接受的N-氧化物； (e)任選將N-氧化物形式的本發(fā)明化合物轉(zhuǎn)化為其非氧化形式； (f)任選自異構(gòu)體的混合物拆分本發(fā)明化合物的單一異構(gòu)體； (g)任選將非衍生化的本發(fā)明化合物轉(zhuǎn)化為藥學(xué)上可接受的前藥衍生物；和 (h)任選將本發(fā)明化合物的前藥衍生物轉(zhuǎn)化為其非衍生化形式。
對于沒有特別描述的原料的制備而言，所述化合物為已知的，或者可以根據(jù)本領(lǐng)域已知的方法制備，或者根據(jù)下文實施例中所公開的方法制備。
本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，上述轉(zhuǎn)化并非制備本發(fā)明化合物的唯一的代表性方法，也同樣可以采用其它眾所周知的方法。
具體實施例方式 實施例 通過下列說明本發(fā)明式I化合物的制備方法的實施例進一步闡述了本發(fā)明，并非對其加以限定。
實施例1 4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[4-(嗎啉-4-磺?；?-苯基]-酰胺
步驟1向3-碘-4-甲基-苯甲酸(10.0g，38.2mmol)的甲醇(70ml)溶液中加入濃硫酸(0.5ml)。將反應(yīng)混合物于70℃加熱48小時，冷卻至室溫，然后濃縮。然后，向殘留物中加入乙酸乙酯(100ml)和NaHCO3(飽和的，100ml)水溶液。分離有機層，再次用NaHCO3(飽和的，100ml)水溶液洗滌。分離有機層，無水硫酸鈉干燥并濃縮，得到3-碘-4-甲基-苯甲酸甲酯1。它無需進一步純化可以直接用于下一步驟。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.31(s，1H)，7.87(d，1H，J＝8.4Hz)，7.48(d，1H，J＝8.4Hz)，3.85(s，3H)，3.35(s，3H)；LC-MS m/z277.0(M+1)。
步驟2向含有3-碘-4-甲基-苯甲酸甲酯(1.38g，5.00mmol)、4-氰基苯基硼酸(1.10g，7.48mmol)、乙酸鈀(168mg，0.748mmol)、2-(二環(huán)己基膦基)聯(lián)苯(0.526g，1.50mmol)和氟化鉀(0.870g，15.0mmol)的圓底燒瓶中加入無水1，4-二氧六環(huán)(15ml)。向燒瓶中充入氬氣并密封。將混合物于130℃攪拌18小時，冷卻至室溫，然后加入水(20ml)和乙酸乙酯(20ml)。真空過濾除去固體。濾液采用EtOAc(20ml×2)萃取。合并有機層，用HCl(5％，20ml)和飽和的NaHCO3(20ml)水溶液洗滌。將其經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮。殘留物經(jīng)硅膠柱色譜純化(EtOAc/己烷，梯度洗脫)，獲得4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸甲酯2；LC-MS m/z252.1(M+1)。
步驟3向4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸甲酯2(2.56g，10.3mmol)的1，4-二氧六環(huán)-H2O(1∶1混合物，20ml)溶液中加入NaOH(1.22g，30.2mmol))。將反應(yīng)物于室溫下攪拌24小時。向反應(yīng)物中加入HCl(1N，36ml)水溶液，然后將其采用乙酸乙酯(40ml×3)萃取。合并有機層，無水硫酸鈉過濾。除去溶劑(solver)。獲得的固體采用少量的乙腈洗滌，空氣干燥，獲得4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸31H NMR(DMSO-d6)δ7.94(d，2H，J＝8.0Hz)，7.84(dd，1H，J1＝8.4Hz，J2＝1.2Hz)，7.75(d，1H，J＝1.2Hz)，7.61(d，2H，J＝8.0Hz)，7.48(d，1H，J＝8.4Hz)，2.29(s，3H)；LC-MS m/z 238.1(M+1)。
步驟4向4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸3(40mg，0.17mmol)的無水二氯甲烷(5ml)混懸液中加入2滴DMF。然后加入草酰氯(32mg，22μl，0.25mmol)。將混合物于室溫下攪拌直到其變得澄清。然后，將其濃縮，再溶于無水二氯甲烷(3ml)，加入4-(嗎啉-4-磺酰基)-苯基胺(61mg，0.25mmol)和三乙胺(34mg，47μl，0.33mmol)的二氯甲烷(2ml)溶液。將混合物攪拌2小時，濃縮，殘留物經(jīng)制備性質(zhì)譜-HPLC(preparative mass triggered HPLC)純化(C18柱，采用含有0.05％TFA的CH3CN-H2O洗脫)，獲得4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[4-(嗎啉-4-磺酰基)-苯基]-酰胺1H NMR(DMSO-d6)δ10.64(s，1H)，8.07(d，2H，J＝8.8Hz)，7.97(d，2H，J＝8.4Hz)，7.95(d，1H，J＝8.8Hz)，7.89(s，1H)，7.43(d，2H，J＝8.4Hz)，7.67(d，2H，J＝8.8Hz)，7.53(d，2H，J＝8.8Hz)，3.63(m，4H)，2.84(m，4H)2.32(s，3H)；LC-MS m/z462.1(M+1)。
實施例2 4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[6-(2，6-二甲基-嗎啉-4-基)-吡啶-3-基]-酰胺
步驟1向2-氯代-5-硝基-吡啶4(2.38g，15mmoL)和cis-2，6-二甲基嗎啉(1.73g，15mmoL)的溶液中加入K2CO3(4.14g，30mmoL)。將混合物于50℃加熱過夜。濃縮后，將殘留物在EtOAc和水之間分配。EtOAc層經(jīng)無水硫酸鈉干燥并濃縮，獲得為黃色固體的粗品產(chǎn)物6。粗品產(chǎn)物無需進一步純化可以直接用于下一步驟。LC-MS m/z238.1(M+1)。
步驟2在氫氣環(huán)境下，在MeOH(100mL)中，在Pd-C(0.2g)存在下，將上述粗品產(chǎn)物6氫化。將混懸液通過硅藻土過濾，濾液濃縮，獲得為深棕色油狀物的粗品產(chǎn)物7，它無需進一步純化可以直接用于下一步驟。LC-MSm/z208.1(M+1)。
步驟3向3-溴-4-甲基苯甲酸(108mg，0.5mmoL)、6-(2，6-二甲基-嗎啉-4-基)-吡啶-3-基胺7(104mg，0.5mmoL)和HATU(190mg，0.5mmoL)的無水DMF(5mL)溶液中滴加三乙胺(139μL，1.0mmoL)。將獲得的混合物于室溫下攪拌2小時。濃縮后，將殘留物在EtOAc和水之間分配。將有機層干燥并濃縮，獲得粗品產(chǎn)物。終產(chǎn)物經(jīng)快速柱色譜純化，采用50％EtOAc的己烷溶液作為洗脫劑，獲得為白色固體的8。LC-MS m/z404.1(M+1)。
步驟4在微波照射下，將4-氰基苯基硼酸(18mg，0.12mmol)、3-溴-N-[6-(2，6-二甲基-嗎啉-4-基)-吡啶-3-基]-4-甲基-苯甲酰胺8(40mg，0.1mmol)、Pd(PPh3)4(11mg，0.01mmol)和Na2CO3(42mg，0.4mmol)在甲苯(0.2mL)、水(0.2mL)和乙醇(0.05mL)的混合溶劑系統(tǒng)中于140℃加熱30分鐘。反應(yīng)混合物用EtOAc和水稀釋。水層用EtOAc萃取。合并的有機層用鹽水洗滌，濃縮，獲得粗品產(chǎn)物，將其經(jīng)制備性質(zhì)譜-HPLC純化(C18柱，采用含有0.05％TFA的CH3CN-H2O洗脫)，獲得4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[6-(2，6-二甲基-嗎啉-4-基)-吡啶-3-基]-酰胺。LC-MS m/z427.2(M+1)。
通過重復(fù)上述實施例中所述方法，采用適當(dāng)?shù)脑?，獲得如表1中所鑒定的下列式I化合物。
表1
用于分析本發(fā)明化合物的通用材料和方法公開于PCT申請?zhí)朠CT/US2007/038171“用于治療淋巴瘤和骨髓瘤的化合物和組合物(Compounds and Compositions for Treating Lymphoma and Myeloma)”；Dierks和Warmuth。該申請的全部公開以其全部內(nèi)容和所有的目的引入本文作為參考。對本發(fā)明化合物進行分析以評價其抑制刺猬蛋白信號通路的能力。
用于Hh通路抑制的Gli-Luc報道分子分析 于37℃、5％CO2的空氣環(huán)境中，將小鼠TM3細(xì)胞(獲自美國典型物保藏中心(American Type Culture Collection)，ATCC，Manassas，VA)在DMEM/F12培養(yǎng)基(Gibco/Invitrogen，Carlsbad，CA)中培養(yǎng)，所述培養(yǎng)基補充有5％熱滅活馬血清和2.5％FBS(Gibco/Invitrogen，Carlsbad，CA)、50單位/mL青霉素和50μg/mL鏈霉素(Gibco/Invitrogen，Carlsbad，CA)。將TM3細(xì)胞采用pTA-8xGli-Luc報告質(zhì)粒轉(zhuǎn)染。選擇穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的克隆TMHh-12。TMHh-12克隆對Shh-N刺激顯示良好的應(yīng)答。為了評價拮抗劑的IC50，將8000個TMHh-12細(xì)胞涂布于含有50％DMEM/F12培養(yǎng)基(補充有2％FBS)的384孔的每一個孔中。12小時后，通過加入重組小鼠Shh蛋白(在E.coli中表達(dá)，8μg/mL)或通過加入Smo激動劑激活Hh通路。向各個板中加入不同濃度的實驗化合物。48小時后，采用Bright-GloTM熒光素酶分析系統(tǒng)(Promega，Madison，WI)分析螢火蟲熒光素酶的活性。當(dāng)所述化合物的作用將熒光信號降低達(dá)50％時測定IC50。這些化合物的毒性在TM3細(xì)胞中采用CellTiter Glo分析測定，或者通過TM3-Luc細(xì)胞系(采用構(gòu)成性熒光素酶表達(dá)載體穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的TM3細(xì)胞)評價。
式I化合物優(yōu)選具有EC50小于500nM，更優(yōu)選小于200nM。
抑制Hh通路終止淋巴瘤的體內(nèi)擴張 間質(zhì)組織產(chǎn)生的刺猬蛋白配體是在體外培養(yǎng)條件下原發(fā)性淋巴瘤細(xì)胞的重要的生長和生存因子。淋巴瘤細(xì)胞在體內(nèi)的生長和擴張也依賴于Hh信號。將表達(dá)熒光素酶的1e6淋巴瘤細(xì)胞注射到同源C57BL/6小鼠中。注射后的第2天，通過口服給藥，將小鼠分別采用載體對照或本發(fā)明化合物(50、25、10和5mg/kg/bid)治療10天。每周三次，通過生物發(fā)光成像測定熒光素酶水平。注射后10天，對照組在所有注射小鼠的淋巴結(jié)和脾臟中均顯示較高的熒光。與對照組相比，采用本發(fā)明化合物以50、25和10mg/kg/bid治療的小鼠顯示熒光信號降低至小于10％(T/C低于10％)。5mg/kg bid劑量組顯示部分響應(yīng)，T/C 40％(T/C from 40％)。因此，斷定刺猬蛋白通路抑制降低了淋巴瘤在小鼠中的生長。
例如，表1中的化合物153達(dá)到充分的療效，也就是說，當(dāng)劑量為50mg/kg/日時，化合物153的存在完全阻斷了淋巴瘤細(xì)胞的擴張。
胚胎皮膚穿孔(Punch)分析 采用皮膚穿孔分析，測定本發(fā)明化合物治療非黑素瘤皮膚癌即基底細(xì)胞癌損害的能力。自Ptch+/--LacZ小鼠采集小鼠胚，在妊娠后期(胚胎天數(shù)為第17.5天)將其處死并剝離皮膚。將圓形穿孔(4mm直徑)置于骨膠原包被的Transwell(BIOCOAT cell Culture Insert，Becton Dickinson Labware，Bedford，MA)中，于空氣-液體界面處培養(yǎng)，表皮一側(cè)向上。培養(yǎng)介質(zhì)含有5％FBS的DMEM/F12(3∶1)溶液，其中加有表皮生長因子、胰島素和氫化可的松。為了誘導(dǎo)基底細(xì)胞樣巢(basaloid nests)的形成，在1-2μg/ml Shh存在下，使得穿孔生長4天或以上。加入Shh的同時或者采用Shh預(yù)處理6天后，測定本發(fā)明化合物的作用。本發(fā)明化合物在濃度為1μM或更低的情況下顯示完全抑制(預(yù)防了損害的形成)。
為阻斷基底細(xì)胞樣形成，式I化合物優(yōu)選的EC50小于500nM，更優(yōu)選小于200nM。例如，表1中的化合物153完全阻斷基地血樣細(xì)胞形成，EC50小于200nM。
銀屑病分析 根據(jù)Tas & Avci，Pharmacology and Treatment，Dermatology 2004；209126-131中所述的分析方法，測定本發(fā)明化合物治療銀屑病皮膚損害的能力。
應(yīng)當(dāng)理解，本文所描述的實施例和實施方案僅用于說明性目的，本領(lǐng)域技術(shù)人員可對其進行各種修飾或改變，這些修飾或改變均包含在本申請的主旨和范圍內(nèi)以及權(quán)利要求書的范圍之內(nèi)。本文所引用的全部出版物、專利和專利申請均以其全部目的引入本文作為參考。
權(quán)利要求
1.在細(xì)胞中抑制刺猬蛋白通路的方法，所述方法包括使得細(xì)胞與式I化合物或其可藥用的鹽、水合物、溶劑化物和異構(gòu)體接觸
其中
Y1和Y2獨立選自N和CR10；其中R10選自氫、鹵素、C1-6烷基、鹵素取代的-C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵素取代的-C1-6烷氧基和-OXNR10aR10b；其中R10a和R10b獨立選自氫和C1-6烷基；
R1選自氰基、鹵素、C1-6烷基、鹵素取代的-C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵素取代的-C1-6烷氧基、C6-10芳基、二甲基-氨基、C1-6烷基-硫烷基和任選被至多2個C1-6烷基取代的C3-8雜環(huán)烷基；
R2和R5獨立選自氫、氰基、鹵素、C1-6烷基、鹵素取代的-C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵素取代的-C1-6烷氧基和二甲基氨基；
R3和R4獨立選自氫、鹵素、氰基、C1-6烷基、鹵素取代的-C1-6烷基、C1-6烷氧基和鹵素取代的-C1-6烷氧基；或者R1和R2或R1和R5與它們所連接的苯基一起形成C5-10雜芳基；
R6和R7獨立選自氫、C1-6烷基、鹵素取代的-C1-6烷基、C1-6烷氧基和鹵素取代的-C1-6烷氧基；前提是R6和R7兩者不同時為氫；
R8選自氫、鹵素、C1-6烷基、鹵素取代的-C1-6烷基、C1-6烷氧基和鹵素取代的-C1-6烷氧基；
R9選自-S(O)2R11、-C(O)R11、-NR12aR12b和-R11；其中R11選自芳基、雜芳基、環(huán)烷基和雜環(huán)烷基；R12a和R12b獨立選自C1-6烷基和羥基-取代的-C1-6烷基；
其中所述R9的芳基、雜芳基、環(huán)烷基和雜環(huán)烷基可任選被1-3個獨立選自下列的基團所取代C1-6烷基、鹵素取代的-C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵素取代的-C1-6烷氧基、C6-10芳基-C0-4烷基、C5-10雜芳基-C0-4烷基、C3-12環(huán)烷基和C3-8雜環(huán)烷基；
其中所述R9的芳基-烷基取代基任選被1-3個獨立選自下列的基團所取代鹵素、C1-6烷基、鹵素取代的-C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵素取代的-C1-6烷氧基和甲基-哌嗪基。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中
Y1和Y2選自N和CR10；其中R10選自氫、甲基、氟、氯、溴、二甲基氨基-乙氧基和三氟甲基；
R6和R7獨立選自氫、甲基、氯、氟、溴、三氟甲基和甲氧基；前提是R6和R7不同時為氫；并且
R8選自氫、氟、氯、甲基和三氟甲基。
3.權(quán)利要求2的化合物，其中R1選自氰基、氯、氟、甲基、乙基、叔-丁基、丙基、異丁基、異丙基、異丙氧基、丁氧基、甲氧基、二甲基-氨基、乙氧基、甲基-硫烷基、苯基、三氟甲基、三氟甲氧基和任選被至多2個甲基取代的哌嗪基；
R2和R5獨立選自氫、氯、氟、氰基、甲基、三氟甲基、異丙氧基、甲氧基、乙氧基、三氟甲氧基和二甲基氨基；并且
R3和R4獨立選自氫、氯、甲基、甲氧基和氰基；或者R1和R2或R1和R5與它們所連接的苯基一起形成喹喔啉基。
4.權(quán)利要求3的化合物，其中R9選自-S(O)2R11、-OR11、-C(O)R11、-NR12aR12b和-R11；其中R11選自硫代嗎啉代、硫代嗎啉代-S-一氧化物、硫代嗎啉代-S，S-二氧化物、嗎啉代、環(huán)己基、苯基、氮雜環(huán)庚-1-基、2-氧代哌嗪-1-基、1，4-氧雜氮雜環(huán)庚-4-基、哌啶-1-基、四氫-2H-吡喃-4-基、哌啶-3-基、哌嗪基、吡咯烷基和1，4-二氮雜環(huán)庚-1-基；R12a和R12b獨立選自異丁基、羥基-乙基，
其中所述R9的硫代嗎啉代、硫代嗎啉代-S-一氧化物、硫代嗎啉代-S，S-二氧化物、嗎啉代、環(huán)己基、苯基、氮雜環(huán)庚-1-基、2-氧代哌嗪-1-基、1，4-氧雜氮雜環(huán)庚-4-基、哌啶-1-基、四氫-2H-吡喃-4-基、哌啶-3-基、哌嗪基、吡咯烷基或1，4-二氮雜環(huán)庚-1-基可任選被1-3個獨立選自下列的基團所取代甲基、乙基、甲氧基、芐基、噻吩基-甲基、吡啶基-甲基、苯并[d][1，3]間二氧雜環(huán)戊烯-6-基和2，3-二氫苯并[b][1，4]二氧雜環(huán)己烯-7-基；
其中所述R9的苯基或芐基取代基任選被1-3個獨立選自下列的基團所取代甲氧基、乙氧基、甲基-哌嗪基、甲基、三氟甲氧基、氯代、氟和三氟甲基。
5.權(quán)利要求4的化合物，所述化合物選自N-(6-((2R，6S)-2，6-二甲基嗎啉代)吡啶-3-基)-2-甲基-4′-(三氟甲氧基)聯(lián)苯基-3-甲酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[4-(嗎啉-4-磺酰基)-苯基]-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[6-(2，6-二甲基-嗎啉-4-基)-吡啶-3-基]-酰胺、4′-氰基-2-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、4′-甲氧基-2-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、4′-甲氧基-2-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(4-環(huán)己基-苯基)-酰胺、4′-甲氧基-2-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[6-(2-甲基-嗎啉-4-基)-吡啶-3-基]-酰胺、4′-二甲基氨基-2-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(4-環(huán)己基-苯基)-酰胺、4′-二甲基氨基-2-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(4-嗎啉-4-基-苯基)-酰胺、6-氯代-4′-二甲基氨基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-[1，4]氧雜氮雜環(huán)庚-4-基-吡啶-3-基)-酰胺、6-氯代-4′-二甲基氨基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-嗎啉-4-基-吡啶-3-基)-酰胺、6-氯代-4′-二甲基氨基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、6-氯代-4′-甲氧基-聯(lián)苯基-3-甲酸[6-(2-甲基-嗎啉-4-基)-吡啶-3-基]-酰胺、6-氯代-4′-甲氧基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-[1，4]氧雜氮雜環(huán)庚-4-基-吡啶-3-基)-酰胺、6-氯代-4′-甲氧基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、6-氯代-4′-甲氧基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-嗎啉-4-基-吡啶-3-基)-酰胺、4′-甲氧基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-嗎啉-4-基-吡啶-3-基)-酰胺、4′-甲氧基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-[1，4]氧雜氮雜環(huán)庚-4-基-吡啶-3-基)-酰胺、4′-甲氧基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[6-(2-甲基-嗎啉-4-基)-吡啶-3-基]-酰胺、4′-二甲基氨基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[6-(2-甲基-嗎啉-4-基)-吡啶-3-基]-酰胺、4′-二甲基氨基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-[1，4]氧雜氮雜環(huán)庚-4-基-吡啶-3-基)-酰胺、4′-二甲基氨基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-嗎啉-4-基-吡啶-3-基)-酰胺、4′-甲氧基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、4′-乙氧基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、6-甲基-4′-甲基硫烷基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、4′-二甲基氨基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、6-甲基-[1，1′；4′，1″]三苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、3′-氯代-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、2′，4’-二氯代-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、2′-氯代-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、3′-氯代-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、3′，4’-二氯代-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、3′-氯代-6-甲基-4′-三氟甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、6，4′-二甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、4′-乙基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、4′-叔-丁基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、6-甲基-4′-丙基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、4′-異丁基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、4′-異丙基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、6，2′，6′-三甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、6，2′，3′-三甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、6-甲基-4′-三氟甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、6-甲基-3′-三氟甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、6-甲基-3′，5’-二三氟甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、3′-異丙氧基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、3′-乙氧基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、2′，6’-二甲氧基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、6-甲基-4′-三氟甲氧基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、6-甲基-3′-三氟甲氧基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(4-嗎啉-4-基-苯基)-酰胺、4′-甲氧基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(4-嗎啉-4-基-苯基)-酰胺、3′-甲氧基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(4-嗎啉-4-基-苯基)-酰胺、4′-(2-二甲基氨基-乙氧基)-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(4-嗎啉-4-基-苯基)-酰胺、3′-二甲基氨基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(4-嗎啉-4-基-苯基)-酰胺、4′-氟-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(4-嗎啉-4-基-苯基)-酰胺、3′-氟-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(4-嗎啉-4-基-苯基)-酰胺、2′-氟-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(4-嗎啉-4-基-苯基)-酰胺、4-甲基-N-(4-嗎啉-4-基-苯基)-3-喹喔啉-6-基-苯甲酰胺、6-甲基-4′-(4-甲基-哌嗪-1-基)-聯(lián)苯基-3-甲酸(4-嗎啉-4-基-苯基)-酰胺、2′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(4-嗎啉-4-基-苯基)-酰胺、3′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(4-嗎啉-4-基-苯基)-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-[1，4]氧雜氮雜環(huán)庚-4-基-吡啶-3-基)-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[6-(2-甲基-嗎啉-4-基)-吡啶-3-基]-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(3，4，5，6-四氫-2H-[1，2′]聯(lián)吡啶基-5′-基)-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-嗎啉-4-基-吡啶-3-基)-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基]-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(4-嗎啉-4-基-苯基)-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(3-氟-4-嗎啉-4-基-苯基)-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(3-氯代-4-嗎啉-4-基-苯基)-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(3-溴-4-嗎啉-4-基-苯基)-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(3-甲基-4-嗎啉-4-基-苯基)-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(4-嗎啉-4-基-3-三氟甲基-苯基)-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(4-環(huán)己基-苯基)-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸聯(lián)苯基-4-基酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(4′-甲氧基-聯(lián)苯基-4-基)-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[4-(4-芐基-哌嗪-1-基)-苯基]-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[4-(哌啶-1-磺?；?-苯基]-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[4-(吡咯烷-1-磺?；?-苯基]-酰胺、4′-氰基-6-甲氧基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、4′-氰基-2-甲氧基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、4′-氰基-2-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、3′-氟-4′-甲氧基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、4′-異丙氧基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、4′-丁氧基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、3′-氯代-4′-甲氧基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、4′-甲氧基-6，3′-二甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-氮雜環(huán)庚-1-基-吡啶-3-基)-酰胺、4′-氰基-2-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[4-(哌啶-1-磺?；?-苯基]-酰胺、4′-氰基-6-氟-聯(lián)苯基-3-甲酸[4-(哌啶-1-磺?；?-苯基]-酰胺、6-溴-4′-氰基-聯(lián)苯基-3-甲酸[4-(哌啶-1-磺?；?-苯基]-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[6-(4-芐基-[1，4]二氮雜環(huán)庚-1-基)-吡啶-3-基]-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[6-(4-噻吩-3-基甲基-[1，4]二氮雜環(huán)庚-1-基)-吡啶-3-基]-酰胺、4′-氰基-2-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[6-(2，6-二甲基-嗎啉-4-基)-吡啶-3-基]-酰胺、4′-甲氧基-2-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[6-(2，6-二甲基-嗎啉-4-基)-吡啶-3-基]-酰胺、2-甲基-4′-三氟甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[6-(2，6-二甲基-嗎啉-4-基)-吡啶-3-基]-酰胺、2-甲基-4′-三氟甲氧基-聯(lián)苯基-3-甲酸[6-(2，6-二甲基-嗎啉-4-基)-吡啶-3-基]-酰胺、4′-氰基-2-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[6-(2-甲基-嗎啉-4-基)-吡啶-3-基]-酰胺、4′-氰基-2-氟-聯(lián)苯基-3-甲酸[4-(哌啶-1-磺?；?-苯基]-酰胺、4′-氰基-6-三氟甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[4-(哌啶-1-磺?；?-苯基]-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[6-(4-吡啶-4-基甲基-[1，4]二氮雜環(huán)庚-1-基)-吡啶-3-基]-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[6-(4-吡啶-3-基甲基-[1，4]二氮雜環(huán)庚-1-基)-吡啶-3-基]-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸{6-[4-(2，6-二甲氧基-芐基)-[1，4]二氮雜環(huán)庚-1-基]-吡啶-3-基}-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸{6-[4-(2-乙氧基-芐基)-[1，4]二氮雜環(huán)庚-1-基]-吡啶-3-基}-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸(6-{4-[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-芐基]-[1，4]二氮雜環(huán)庚-1-基}-吡啶-3-基)-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸{6-[4-(4-甲氧基-2，3-二甲基-芐基)-[1，4]二氮雜環(huán)庚-1-基]-吡啶-3-基}-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸{6-[4-(2，3-二氫-苯并[1，4]二氧雜環(huán)己烯-6-基甲基)-[1，4]二氮雜環(huán)庚-1-基]-吡啶-3-基}-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[6-(4-吡啶-2-基甲基-[1，4]二氮雜環(huán)庚-1-基)-吡啶-3-基]-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[6-(4-苯并[1，3]間二氧雜環(huán)戊烯-4-基甲基-[1，4]二氮雜環(huán)庚-1-基)-吡啶-3-基]-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸{6-[4-(2-三氟甲氧基-芐基)-[1，4]二氮雜環(huán)庚-1-基]-吡啶-3-基}-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸{6-[4-(2-二甲基氨基-芐基)-[1，4]二氮雜環(huán)庚-1-基]-吡啶-3-基}-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸{6-[4-(2-氯代-5-三氟甲基-芐基)-[1，4]二氮雜環(huán)庚-1-基]-吡啶-3-基}-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸{6-[4-(2，3-二氟-芐基)-[1，4]二氮雜環(huán)庚-1-基]-吡啶-3-基}-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸{6-[4-(2-氯代-4-氟-芐基)-[1，4]二氮雜環(huán)庚-1-基]-吡啶-3-基}-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸{6-[4-(2，6-二氟-芐基)-[1，4]二氮雜環(huán)庚-1-基]-吡啶-3-基}-酰胺、2-氯代-4′-氰基-聯(lián)苯基-3-甲酸[4-(哌啶-1-磺?；?-苯基]-酰胺、4′-氰基-6-三氟甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[6-(2，6-二甲基-嗎啉-4-基)-吡啶-3-基]-酰胺、2-氯代-4′-氰基-聯(lián)苯基-3-甲酸[6-(2，6-二甲基-嗎啉-4-基)-吡啶-3-基]-酰胺、4′-氰基-6-乙基-聯(lián)苯基-3-甲酸[6-(2，6-二甲基-嗎啉-4-基)-吡啶-3-基]-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸{6-[4-(3-氟-芐基)-哌嗪-1-基]-吡啶-3-基}-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸{6-[4-(2-三氟甲氧基-芐基)-哌嗪-1-基]-吡啶-3-基}-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸{6-[4-(3-氯代-芐基)-哌嗪-1-基]-吡啶-3-基}-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸{6-[4-(4-異丁基-芐基)-哌嗪-1-基]-吡啶-3-基}-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸{6-[4-(4-叔-丁基-芐基)-哌嗪-1-基]-吡啶-3-基}-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸{6-[4-(7-甲氧基-苯并[1，3]間二氧雜環(huán)戊烯-5-基甲基)-哌嗪-1-基]-吡啶-3-基}-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[6-(4-芐基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基]-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[6-(4-吡啶-3-基甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基]-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸{6-[4-(4-二氟甲氧基-芐基)-哌嗪-1-基]啶-3-基}-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸{6-[4-(4-氰基-芐基)-哌嗪-1-基]-吡啶-3-基}-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[6-(4-喹啉-5-基甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基]-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[6-(4-吡啶-4-基甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基]-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[6-(4-吡啶-2-基甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基]-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸{6-[4-(4-咪唑-1-基-芐基)-哌嗪-1-基]-吡啶-3-基}-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸{6-[4-(3-氰基-芐基)-哌嗪-1-基]-吡啶-3-基}-酰胺、4′-氰基-6-甲基-聯(lián)苯基-3-甲酸[6-(4-異喹啉-5-基甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基]-酰胺、(R)-2-甲基-N-(6-(2-甲基嗎啉代)吡啶-3-基)-4′-(三氟甲氧基)聯(lián)苯基-3-甲酰胺、4′-氰基-2-甲基-N-(6-磺酰基嗎啉代吡啶-3-基)聯(lián)苯基-3-甲酰胺、(S)-4′-氰基-2-甲基-N-(6-(2-甲基嗎啉代)吡啶-3-基)聯(lián)苯基-3-甲酰胺、(R)-6-氯代-N-(6-(2-甲基嗎啉代)吡啶-3-基)-4′-(三氟甲氧基)聯(lián)苯基-3-甲酰胺、4′-氰基-2-甲基-N-(6-亞磺?；鶈徇拎?3-基)聯(lián)苯基-3-甲酰胺、4′-氰基-N-(6-(二異丁基氨基)吡啶-3-基)-2-甲基聯(lián)苯基-3-甲酰胺、4′-氰基-N-(2-((2S，6R)-2，6-二甲基嗎啉代)嘧啶-5-基)-2-甲基聯(lián)苯基-3-甲酰胺、N-(2-((2S，6R)-2，6-二甲基嗎啉代)嘧啶-5-基)-2-甲基-4′-(三氟甲基)聯(lián)苯基-3-甲酰胺、N-(2-((2S，6R)-2，6-二甲基嗎啉代)嘧啶-5-基)-2-甲基-4′-(三氟甲氧基)聯(lián)苯基-3-甲酰胺、N-(2-(二(2-羥基乙基)氨基)嘧啶-5-基)-2-甲基-4′-(三氟甲氧基)聯(lián)苯基-3-甲酰胺、2-甲基-N-(6-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)吡啶-3-基)-4′-(三氟甲氧基)聯(lián)苯基-3-甲酰胺、N-(5-氯代-6-((2S，6R)-2，6-二甲基嗎啉代)吡啶-3-基)-2-甲基-4′-(三氟甲氧基)聯(lián)苯基-3-甲酰胺、N-(6-((2R，6S)-2，6-二甲基四氫-2H-吡喃-4-基)吡啶-3-基)-2-甲基-4′-(三氟甲氧基)聯(lián)苯基-3-甲酰胺、N-(6-(4-乙基哌嗪-1-羰基)吡啶-3-基)-2-甲基-4′-(三氟甲氧基)-聯(lián)苯基-3-甲酰胺、2-甲基-N-(6-(2-氧代哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-4′-(三氟甲氧基)聯(lián)苯基-3-甲酰胺、2-甲基-N-(6-(1-(吡啶-4-基甲基)哌啶-4-基)吡啶-3-基)-4′-(三氟甲氧基)聯(lián)苯基-3-甲酰胺、2-甲基-N-(6-(2-氧代-4-(吡啶-4-基甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-4′-(三氟甲氧基)聯(lián)苯基-3-甲酰胺、2-甲基-N-(6-(1-(吡啶-4-基甲基)哌啶-3-基)吡啶-3-基)-4′-(三氟甲氧基)聯(lián)苯基-3-甲酰胺和N-(6-(1-乙基哌啶-3-基)吡啶-3-基)-2-甲基-4′-(三氟甲氧基)聯(lián)苯基-3-甲酰胺。
6.權(quán)利要求1的方法，其中所述細(xì)胞具有Ptc功能喪失表型、刺猬蛋白功能獲得表型、smoothened功能獲得表型、Gli功能獲得表型或者刺猬蛋白配體過度表達(dá)表型。
7.權(quán)利要求6的方法，其中所述細(xì)胞與刺猬蛋白拮抗劑在體內(nèi)或體外接觸。
8.權(quán)利要求7的方法，其中所述化合物作為治療應(yīng)用的一部分給藥于動物。
9.權(quán)利要求8的方法，其中所述治療應(yīng)用選自非黑素瘤皮膚癌、骨髓瘤、淋巴瘤和銀屑病。
10.權(quán)利要求8的方法，其中所述治療應(yīng)用選自基底細(xì)胞痣氧綜合征、基底細(xì)胞癌和骨過度生長疾病。
11.權(quán)利要求10的方法，其中骨過度生長疾病選自肢端肥大癥、巨頭畸形、Sotos綜合征、進行性骨干發(fā)育異常、顱骨骨干發(fā)育異常和骨內(nèi)膜骨質(zhì)增生疾病，包括Van Buchem疾病(I型和II型)和硬化性骨化病。
12.權(quán)利要求11的方法，其中骨內(nèi)膜骨質(zhì)增生疾病選自I型和II型VanBuchem疾病。
13.權(quán)利要求8的方法，其中所述治療應(yīng)用為治療不受歡迎的毛發(fā)生長(例如毛痣)以及脫毛后毛發(fā)再生長的美容預(yù)防。
14.抑制不必要的細(xì)胞增生的方法，該方法包括使得所述細(xì)胞與式I化合物接觸。
15.權(quán)利要求14的方法，其中所述細(xì)胞選自非黑素瘤皮膚癌、骨髓瘤、淋巴瘤和銀屑病。
全文摘要
本發(fā)明提供了調(diào)節(jié)刺猬蛋白信號通路活性的方法。特別的是，本發(fā)明提供了抑制由表型例如Ptc功能喪失、刺猬蛋白功能獲得、smoothened功能獲得或Gli功能獲得所導(dǎo)致的異常生長狀態(tài)的方法，所述方法包括使細(xì)胞與足量的式I化合物接觸。
文檔編號A61K31/496GK101820950SQ200880102214
公開日2010年9月1日 申請日期2008年6月4日 優(yōu)先權(quán)日2007年6月7日
發(fā)明者C·德克斯, M·瓦爾穆特, 吳旭 申請人:Irm責(zé)任有限公司