與化療藥劑聯用的用于治療癌癥的免疫細胞因子的制作方法

專利名稱：與化療藥劑聯用的用于治療癌癥的免疫細胞因子的制作方法
技術領域：
本發明涉及利用化療藥劑與免疫球蛋白的聯用來治療癌癥。
背景技術：
細胞粘合素-C (tenascin-C )是一種細胞外基質的大分子六聚體 #唐蛋白，其用于調節細月包粘附。它涉及例力o細月包增殖和細月包遷移的 過程，并且與如在形態發生和胚胎發生的過程中以及在腫瘤發生或 血管形成的情況下出現的組織結構變化相關。
已經才艮道了細月包粘合素-C同種型對許多腫瘤的4交強過表達 [Borsi 1992 supra]，并且在臨床中已經廣泛地表4正了分別特異于結 構域Al和D的單克隆抗體[Riva P等，Int J Cancer 1992; 51:7-13, RivaP等，Cancer Res 1995; 55 : 5952s-5956s， Paganelli G等，Bur J Nucl Med 1994; 21:314-321, Reardon DA等，J Clin Oncol 2002; 20:1389-1397， Bigner DD等，J Clin Oncol 1998; 16:2202-2212]。
WO2006/050834中描述了特異于細胞粘合素-C的人單克隆抗 體片,殳，并且相對于正常組織而言其表現出優先結合于腫瘤組織。 這些抗體是有用的，例如，用于特異于腫瘤細胞遞送毒素，例如細 胞因子。

發明內容
本發明的發明人已經發現，在癌癥的治療中，輩巴向于細胞粘合
素-c的抗體-細胞因子結合物具有意料不到的與諸如多柔比星和紫
杉醇之類的抗癌化合物的協同作用。
本發明的一個方面一是供了 一種治療癌癥的方法，包括對需要治
療的個體給予抗癌化合物和抗體-白細胞介素2 (IL2)結合物，其 中該抗體-IL2結合物包含與特異性結合于細力包粘合素-C的抗體相 結合的IL2。
本發明的其他方面提供了 一種在治療癌癥的方法中使用的抗 癌化合物，該方法包括對需要治療的個體與抗體-IL2結合物聯合給 予抗癌化合物，該抗體-IL2結合物包含與特異性結合于細胞粘合素 -C的抗體相結合的白細胞介素2 (IL2 )，并且提供了抗癌化合物在 制造用于治療癌癥的方法的藥物中的應用，其中該方法包4舌3于需要 治療的個體與抗體-IL2結合物聯合給予抗癌化合物，所述抗體-IL2 結合物包含與特異性結合于細胞粘合素-C的抗體相結合的白細胞 介素2 (IL2 )。
本發明的其他方面提供了 一種在癌癥治療方法中使用的抗體 -IL2結合物，包含與特異性結合于細胞粘合素-C的抗體相結合的白 細胞介素2 (IL2),其中該方法包括對需要治療的個體與抗體-IL2 結合物聯合給予抗癌化合物，并且還提供了抗體-IL2結合物在制造 用于治療癌癥的方法中4吏用的藥物的應用，其中該抗體-IL2結合物 包含與特異性結合于細胞粘合素-C的抗體相結合的白細胞介素2 (IL2 ),該方法包括對需要治療的個體與抗癌化合物聯合纟會予抗體 -IL2結合物。本發明的其他方面^是供了 一種抗癌化合物與抗體-IL2結合物 的組合物，該抗體-IL2結合物包含在治療癌癥的方法中4吏用的與特 異性結合于細胞粘合素-C的抗體相結合的白細胞介素2 (IL2 )，該 方法包括對需要治療的個體給予抗體-IL2結合物和抗癌化合物，并 且還4是供了該抗癌化合物與抗體-IL2結合物的組合物在制造用于治 療癌癥的方法中〗吏用的藥物的應用，其中該抗體-IL2結合物包含與 特異性結合于細胞粘合素-C的抗體相結合的白細胞介素2 (IL2 )， 該方法包括對需要治療的個體給予抗體-IL2結合物和抗癌化合物。
本文中所述的適合于治療的癌癥包括任何類型的實體腫瘤和 非實體腫瘤或惡性淋巴瘤，并且尤其是白血病、肉瘤、皮膚癌、膀
胱癌、乳癌、子宮癌、卵巢癌、前列A泉癌、"申癌，結腸癌，頸癌、 肝癌，頭頸癌、食管癌、減A泉癌、腎癌、胃癌以及腦癌。癌癥可以 是遺傳性的也可以是偶發性的。
在一些〗尤選實施方式中，癌癥是乳癌。
抗癌化合物是抑制癌細胞的生長、分化和/或增殖的細胞毒素化 合物。在一些情況下，抗癌4b合物可以對患者體內的正常非癌變細 胞起作用。例如，抗癌化合物可以抑制細胞周期或激活細胞凋亡。 抑制細胞周期的適合的抗癌化合物包括DNA損傷劑(DNA damaging agent)和抗有絲分裂藥劑，包括有絲分裂紡錘體組裝的抑 制劑。
DNA損傷劑是一種化療藥劑，其i秀導細胞內DNA發生DNA DSB 乂人而抑制或停止DNA復制。許多用于治療癌癥的適合的化合 物是本領域已知的，包括例如，博來霉素羥基脲、絲裂霉素和放線 菌素以及拓樸異構酶I和II活性的抑制劑，包括蒽環類，例如柔紅 霉素、多柔比星、表柔比星、伊達比星、米托蒽醌和戊柔比星、依 托泊苷和替尼泊苷，以及帝肯(tecan)家族成員，例如伊立替康、托泊替康、盧比替康。本文中所描述的DNA損傷劑可以是任何方 便的形式或制劑。例如，可以采用任意適合的異構體、鹽、溶劑化 物、化學保護的形式、或特定DNA損傷劑的前藥。
在一些優選的實施方式中，該DNA損傷劑是多柔比星((8S, 1 OS)-10-(4-氨基-5-羥基畫6畫曱基-四氫國2H-p比喃-2-基氧)-6,8,11 -三羥基 -8-(2-羥基乙酰基)-1-曱氧基-7,8,9,10-四氫并四苯-5,12-二酮)。多柔 比星是一種蒽環類抗生素嵌入劑，其以商品名例如AdriamycinTM和 RubexTM廣泛應用于癌癥的治療。
抑制有絲分裂紡4垂體組裝的抗癌化合物例如可以結合纟效管并 改變微管聚合或穩定性，這會導致抑制細胞周期進行并最終凋亡。 有絲分裂紡錘體組裝抑制劑的實例包括紫杉烷類，例如紫杉醇 (taxolTM : P-(苯酰氨基)-a-羥基-6,12b-雙(乙酰氧)-12-(苯酰 氧)-2^3,4，4^5，6,9,10，11，12,12^121>十二氫陽4,11-二羥基-4^8，13，13-四曱基-5-氧代-7,ll-亞曱基-lH-環十(3,4)苯(l，2-b)氧雜環丁 ( oxet) -9- 基 酯 ，
(2aR-(2a-a，4-p,4a-P,6-p，9國a(a-R承，p-S承),ll-a,12國a，12a-a,2b-a))國苯丙酮
酸)以及它們的類似物或f;于生物。
紫杉烷類是由連接于4個成員的環氧丙烷(oxetan，氧雜環丁 烷)環的15個成員的紫杉烷環體系構成的復合酯類。優選的紫杉 烷類是那些具有本領域已知構成的要求增強微管形成的紫杉烷類， 例如紫杉醇和多西4也賽。紫杉醇和多西4也賽的結構在C-10紫杉》克 環位置處和連接于C-13的酯側鏈處取代不同。多西他賽具有叔畫丁 氧基羰基，在C-13位置處代替了(2R,3S)-苯基異絲氨酸部分的氨基 上的苯曱酰基，以及羥基在C-10處代替了乙酰氧基。紫杉醇和多西 他賽的結構是本領域中/>知的。分子的部分改變的紫杉醇;f汙生物，該紫杉醇分子包含-友6-12，在 C-7、 C-9和C-10處具有氧官能團。許多這樣的衍生物都是本領域 已知的，并且已知這樣的衍生物表現出可比得上紫杉醇的生物活性 的生物學活性。例如，C-7羥基的酰化作用，或用氫置纟奐它都不會 明顯減少紫杉醇的活性。此外，用氫置換10-乙酰氧基僅會造成較 少的活性下降。
已知C-9羰基被還原成a-OH會引起微管蛋白組裝活性稍微增 加。此外，已知在7位和8位與環丙烷環橋連所得的重排產物幾乎 具有與紫杉醇一樣的細胞毒性。還報道了 m-取代的苯曱酰基衍生物 比其p-取代的類似物具有更強的活性，并且通常具有比紫杉醇本身 更強的活性。
本文中使用的另 一種適合的紫杉醇類似物是A-去曱-紫杉醇 (A-nor-paclitaxel )。這種類似物具有的微管蛋白組裝活性僅為紫杉 醇的三分之一。A-去甲-紫杉醇和紫杉醇具有非常類似的分子形狀， 這可以解釋它們具有類似的微管蛋白組裝活性。
其他適合的紫杉烷類是taxasm、 7-表紫杉醇、t-乙酰基紫杉醇、 10-去乙酰基-紫杉醇、10-去乙酰基-7-表紫杉醇(或7-表-10-去乙酰 基紫杉醇)、7-木糖紫杉醇(7-xylosylpaclitaxel)、 10-去乙酰基-7-戊 二酰基紫杉醇、7-N,N-二曱基氨乙酰紫杉醇、7-L-丙氨酰基紫杉醇、 以及它們的混合物。
在一些優選的實施方式中，該抗癌化合物是紫杉醇。
本文所述使用的抗體-IL2結合物可以包含與特異性結合于細 月包粘合素-C的抗體相結合的白細月包介素2 (IL2 )。白細胞介素2 (IL2)是一種分泌的細胞因子，其與免疫調節以及T和B淋巴細胞的增殖有關。IL-2已經表現出對腫瘤細胞具有細胞毒性效應，且FDA已經批準使用重組體人IL2 (阿地白介素ProleukinR)來治療遷移性腎癌和遷移性黑素瘤。SEQIDNO:ll中列出了人IL2的序列并且7>眾可/人基因凝:才居庫(sequence database )中以參考號NP—000577.2 GI: 28178861獲得。
在一些優選的實施方式中，抗體-IL-2結合物的IL-2部分包含與在SEQ ID NO: 11中列出的成熟人IL2序列具有至少90%的序列同一'I"生，至少95%的序列同一性，或具有至少98%的序列同一性的序列。
序列同一'I"生通常是參照算法GAP來定義的(Wisconsin GCGpackage, Accelerys Inc, 圣;也亞哥，美國)。GAP禾'J用Needleman禾口Wunsch算法來比對兩個匹配數最多且空位數最少的完整序列。一般而言，使用默認參數，空位產生罰分=12且空位延伸罰分=4。利用GAP是優選的，^旦也可以z使用其他算法，例如BLAST (其利用Altschul等.(1990) / Mo/. Sz'o/. 215: 405- 410的方';去)、FASTA (其利用Pearson和Lipman (1988) PNAS USA 85: 2444-2448的方法)，
195-197 ),或Altschul等(1990 ) supra的TBLASTN程序，其通常采用默認參數。尤其是，可以利用psi-Blast算法(Nucl. Acids Res.(1997) 25 3389-3402)。
在一些尤其優選的實施方式中，抗體-IL2結合物的IL2部分包含在SEQ ID NO: 11中列出的成熟人IL2的序列。
IL2部分可以在抗體或其多肽成分的上游(N-末端)或下游(C-末端)發生融合。IL2部分可以通過任何適合的共價方式或非共價方式而連接或附著于抗體-IL2結合物的抗體部分。在優選的實施方式中，該抗體-IL2結合物可以是一種包含IL2和抗細月包粘合素C抗體或其多肽成分(例如抗體的重鏈或輕鏈或多鏈抗體片段，例如Fab)的融合蛋白。因此，例如，IL2部分可以融合于抗體的VH結構i或或VL結構域。通常，抗體或其成分，以及IL2部分經由肽4妄頭而連接，該肽接頭例如是約5-25個殘基、例如10-20個殘基，優選約15個殘基的肽。肽接頭的適合的實例是本領域中7>知的。在一些實施方式中，4妄頭可以具有如SEQIDNO: 12中所列出的氨基酸序列。通常，該才妾頭具有包含一個或多個前后重復的基因座(motif)的氨基酸序列。該基因座通常是五個殘基的序列，并優選至少4個殘基是Gly或Ser。其中五個殘基中的四個是Gly或Ser，其他的殘基可以是Ala。更優選五個殘基中的每一個都是Gly或Ser。優選的基因座是GGGGS、 SSSSG、 GSGSA禾口 GGSGG。 4尤選:t也，i亥基因座在序列中是相鄰的，在重復之間沒有插入核苷酸。接頭序列可以包含l至5個，優選3個或4個基因座的重復，或由1至5個，優選3個或4個基因座的重復組成。例如，具有三個前后重復的4妻頭可以為以下氨基酸序列之一
GGGGSGGGGSGGGGS-SEQ ID NO: 13
SSSSGSSSSGSSSSG-SEQ ID NO: 14
GSGSAGSGSAGSGSA-SEQ ID NO: 15
GGSGGGGSGGGGSGG畫SEQ ID NO: 16。
在優選的實施方式中，抗體-IL2結合物的抗體部分特異性結合于細胞粘合素-C大分子同種型。例如，相對于細胞粘合素-C小分子同種型而言，該抗體可以優先結合于細月包粘合素-C大分子同種型。最優選地，該抗體結合于細胞粘合素-C大分子同種型的Al結構域。4尤選的抗體是腫瘤特異性的或相對于正常組織而言伊C先與腫瘤組織結合。例如，抗體可以優先于正常組織而結合于腫瘤組織的基質和/或新生血管和周圍血管結構。
WO2006/050834中4皮露了抗體-IL2結合物中所使用的適合的4元體的實例。
在一些實施方式中，本文中所描述的抗體-IL2結合物的抗體部分與包含SEQ ID NO. 2的4A1-F16 VH結構域和SEQ ID NO. 4的4A1-F16 VL結構域的抗體竟爭性結合于細胞粘合素-C。
抗體之間的竟爭可以易于在體外測定，例如，利用ELISA和/或通過對一種抗體標記特異性的^艮告分子，該種抗體能夠在其^f也未經標記的( 一種或多種)抗體的存在下凈皮;險測出，從而使得能夠鑒定結合于同一表位或重疊表位的抗體。
本文所述的抗體-IL2結合物中所利用的適合的抗體可以包含抗體抗原結合位點，該抗體抗原結合位點包含VH結構域和VL結構域，該VH結構域包含SEQIDNO. 5的VH CDR1、 SEQ ID NO.6的VH CDR2以及SEQ ID NO. 7的VH CDR3;而VL結4勾i或包含SEQ ID NO. 8的VL CDRl 、 SEQ ID NO. 9的VL CDR2以及SEQ IDNO. 10的VLCDR3。
在一些優選的實施方式中，抗體可以包含抗體抗原結合位點，該抗體抗原結合位點包含SEQ ID NO. 2的4A1-F16 VH結構域以及SEQ ID NO. 4的4A1-F16 VL結構域。
這些VH和VL結構i或以及CDR的變體也可以在用于如本文所述的抗體-IL2結合物的抗體中采用。適合的變體可通過序列改變或突變或篩選方法的方式而^f尋到。用于本文所述的特定變體可以包4舌一種或多種氨基酉菱序列？文
變(氨基酸殘基的加入、缺失、置換和/或插入)，可以少于約20個的 文變，少于約15個的 文變，少于約10個的 文變或少于約5、 4、3、 2或1個改變。改變可以在一個或多個骨架區和/或一個或多個CDR中進行。尤其是，改變可以在VH CDR1、 VH CDR2和/或VHCDR3,尤其是VH CDR3中進4亍。
抗癌化合物、抗體-IL2結合物以及包含這些分子中的一者或二者的組合物優選以足以對患者表現出益處的"治療有效量，，給藥。這樣的益處可以是至少改善至少一種癥狀。實際給予的量、給藥速率以及時程則根據所治療的性質和嚴重程度來確定。治療的處方(例如確定的劑量等)在普通醫生和其他藥劑師的能力范圍內。
準確的劑量取決于幾個因素，待治療區域的尺寸和位置、抗體-IL2結合物的準確性質(例如完整抗體、片,殳或雙特異抗體)。對于系統應用而言， 一種典型的抗體-IL2結合物劑量在0.5mg至100g的范圍內，而乂于于局部應用而言則為lOpg至lmg。通常，結合物的抗體部分是完整抗體，優選IgGl或lgG4同種型。這是對于成年患者單獨治療的劑量，其對于兒童或幼兒可以成比例地調整，并且也可以才艮據分子量4安比例調整以用于其^f也的抗體形式(antibodyformats )。抗癌化合物的適當劑量和用藥方法是本領域中/>知的。
治療可以每天重復兩次，每周兩次，每周一次或每月一次，這是由醫生來判定的。
才艮據4壬4可適合的用藥方法，抗體-IL2結合物和抗癌4匕合物可以連續給藥或同時給藥。
抗體-IL2結合物和抗癌4匕合物通常會以藥物組合物的形式纟會予個體，該藥物纟且合物除了活〗生〗匕合物之外還包含至少 一種纟且分。適合的組分包括藥用賦形劑、載體、緩沖劑、穩定劑或本領域 普通技術人員公知的其他物質。這樣的物質應該是無毒的并且應該 不干擾活性成分的效力。載體和其他物質的準確性質取決于給藥途 ^圣，可以是口月良、或注射，例》口4爭月永注射。
抗體-IL2結合物和抗癌化合物可以單獨配制成藥物組合物，或 者在適當的情況下配制成同 一種藥物組合物。
本發明的其他方面提供了 一種用于治療癌癥的藥物組合物，該 藥物組合物包含抗癌化合物和抗體-IL2結合物，該抗體-IL2結合物 包含與特異性結合于細胞粘合素-C的抗體相結合的白細胞介素2 (IL2 )。
本發明的另 一 方面提供了 一種制造用于治療癌癥的藥物組合 物的方法，該方法包含配制抗癌化合物與纟元體-IL2結合物，該纟元體 -IL2結合物包含與特異性結合于細胞粘合素-C的抗體相結合的白 細月包介素2 (IL2 )。
用于口服給藥的藥物組合物可以是片劑、膠嚢劑、粉劑或液體 形式。片劑可以包含諸如明膠的固體載體或佐劑。液體藥物組合物 通常包含i者^口 K、石油(petroleum )、動凈勿或才直凈勿、油、石廣沖勿油或合 成油之類的液體載體。可以包括生理鹽水溶液、葡萄糖或其他糖類 溶液或二醇類，例如乙二醇、丙二醇或聚乙二醇。
對于靜脈注射，或在病痛位置處的注射，該活性成分為腸胃外 用的水溶液形式，其為無熱原的并且具有適合的pH、等滲性和穩 定性。相關領域的技術人員能夠例如利用等滲載體來制備適合的溶 液，該等滲載體例如是氯化鈉注射液、林才各氏注射液、乳酸林才各氏 注射液。可以才艮據需要包括防腐劑、穩定劑、緩沖劑、抗氧化劑和 /或其4也^力口劑。
15本發明的另 一 方面纟是供了 一種用于治療癌癥的治療用試劑盒，
其包含抗癌化合物和抗體-IL2結合物，該抗體-IL2結合物包含與特 異性結合于細胞粘合素-C的抗體相結合的白細胞介素2 (IL2 )。
試劑盒中的組分(即，抗癌化合物和抗體-IL2結合物)是無菌 的并且一皮密封在藥并瓦或其^f也容器中。試劑盒可以進一步包含關于該 組分在本文所述的方法中應用的i兌明。該試劑盒的組分可以^皮包含 或包裝在容器中，例如袋、盒、瓶、罐或罩板包裝(blisterpack )。
術語
在沐
其描述了天然的或部分或全部合成產生的免疫球蛋白。該術語
的任何多肽或蛋白。抗體的實例是免疫球蛋白同種型和它們的同種 型亞類；包含抗原結合結構域的片^史，例如Fab、 scFv、 Fv、 dAb、 Fd;以及乂又特異4元體。
可以采用單克隆纟元體和其伸4元體并利用重纟且DNA纟支術來生產
以涉及將抗體的編碼免疫J求蛋白可變區、或互補決定區(CDR)的 DNA引入不同免疫球蛋白的恒定區，或恒定區加上骨架區。參見 例如，EP-A-184187、 GB 2188638A或EP-A-239400。可^f吏產生4元 體的雜交瘤或其4也細"包經歷基因突變或其4也變4b，這會改變或不改 變所產生的抗體的結合特異性。
由于可以i午多種方式對抗體進^^奮飾，因此術語"抗體"應該 被理解為包含具有所需特異性的具有結合結構域的任何特異性結 合成員或物質。因此，該術語包含抗體片段、衍生物、功能等價物以及抗體的同源物，包括包含免疫球蛋白結合結構域的任何多肽， 不論其是天然存在的或全部或部分合成的。因此包括了包含免疫球 蛋白結合結構域或等價物的融合于其他多肽的嵌合體分子。
EP-A-0120694和EP-A-0125023中描述了嵌合抗體的克隆和表達。
完整抗體的片段已經表現出能夠實現結合抗原的功能。結合片 革史的實例是(i)由VL、 VH、 CL和CH1結構域組成的Fab片段；(ii) 由VH和CH1結構域組成的Fd片,更；(iii)由單獨一種抗體的VL 和VH結構i或組成的Fv片革殳；(iv)由VH結構i或組成的dAb片,殳
(Ward, E.S.等，Nature 341， 544-546 (1989) ); (v)分離的CDR區；(vi) F(ab')2片段，其是一種包含兩個連接的Fab片段的二價體片段；(vii) 單鏈Fv分子(scFv )，其中VH結構域和VL結構域通過肽接頭連 接，其使得兩個結構域相聯合以形成抗原結合位點(Bird等，Science, 242, 423-426, 1988; Huston等，PNAS USA， 85， 5879-5883， 1988 ); (viii)雙特異單鏈Fv 二聚體(PCT/US92/09965 );以及(ix)"雙特異 抗體"，由基因融合構造的多4介或多特異片段(WO94/13804; P. Holliger等，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90 6444-6448, 1993 )。可以通 過連4妄VH和VL結構域的二石危橋的相連而使Fv、 scFv或雙特異抗 體分子穩、定4匕(Y. Reiter等，Nature Biotech 14 1239-1245 1996)。 也可以制造包含連4妻于CH3結構i或的scFv的農t小抗體(minibody )
(S. Hu et al， Cancer Res. 56 3055-3061 1996 )。
雙特異抗體是多肽的多聚體，每一個多肽都包含第一結構域和 第二結構域，其中第一結構域包含免疫球蛋白輕鏈的結合區，第二
結構i或包含免疫5求蛋白重《連的結合區，這兩個結構i或是相連的(例
如，通過肽接頭)，但不能彼此聯合以形成抗原結合位點抗原結 合位點是通過多聚體中的一種多肽的第 一結構域與該多聚體中的 另 一種多肽的第二結構域的聯合而形成的(WO94/13804 )。抗^潛合潛溝試
其描述了包含特異性結合于部分或全部抗原或與部分或全部 抗原互補的區域的抗體部分。其中，抗原是大分子的，抗體可以Y又 結合于該抗原的特定部4立，該部4立稱為表4立。抗原結合結構域可以
由一個或多個抗體可變結構域來才是供(例如，由VH結構;或組成的 所謂Fd抗體片段)。優選地，抗原結合結構域包含抗體輕鏈可變區 (VL)和4元體重4連可變區(VH)。
使用該術語是指特異性結合對中的一個成員不會表現出任何 明顯的結合于除了(一個或多個)其特異性結合伴侶之外的分子的 情形。例如，特異于細胞粘合素-C的抗體不結合于或幾乎不結合于 細胞外基質的其他組分，例如纖連蛋白。類似地，特異于細胞粘合 素-C大分子同種型的抗體不結合于或幾乎不結合于細胞粘合素-C ,J、分子同種型。該術語也適用于例如抗原結合結構域特異于多個抗 原所具有的特定表位的情況，在這種情況下，該具有抗原結合結構 域的特異性結合成員將能夠結合于具有該表位的各種抗原。
逸舍
該術語通常以包括的含義使用，即，允許存在一個或多個特征 或一種或多種組分。
"基本上如所列出"的意思是本發明的相關CDR或VH或VL 結構域與本文所列出的序列的特定區域完全相同或高度相似。"高 度相似，，是指可以在CDR和/或VH或VL結構域中具有1至5,優 選1至4，例》口 1至3或1或2，或3或4個置4奐。具有本發明的CDR的結構通常是4元體重《連或輕4連序列或它們 的實質部分，其中該CDR位于與重排免疫球蛋白基因編碼的天然 存在VH和VL抗體可變區的CDR相應的位置。免疫球蛋白可變區 和CDR的結構和位置可以通過參考來確定(Kabat, E.A.等， Sequences of Proteins of Immunological Interest, 4th Edition, US Departmentof Health and Human Services, 1987，及其更*斤，i見在可 乂人互聯網獲4尋(http:〃immuno.bme.nwu.edu ))。
通過閱讀本發明4皮露的內容，本發明的各種其他的方面和實施 方式對于本領域技術人員而言是顯而易見的。本說明書中提及的全 部文件和凄t才居庫實體都以其全部內容結合于本文作為參考。
本文中所使用的"和/或"是指具體披露兩個具體特征或組成部 分中的任意一個和另一個或未具體4皮露另一個。例如，^又僅當其中 的每一種情況都在本文中單獨一坡露時，"A和/或B"是指具體披露了 (i) A、 ( ii) B以及(iii) A和B這三種情況中的每一種。
除非文中另有指示，否則上述特4正的i兌明和定義均不限于本發 明的特定方面和實施方式，并且采用與所述的所有方面和實施方式 相同的含義。
附圖i兌明
現在將以舉例的方式并參考以上的附圖和以下的表4各來i兌明 本發明的某些方面和實施方式。


圖1至圖4示出了在預注射多柔比星后主合藥的標記的F16-IL2 的生物分布。
圖5示出了多柔比星、F16-IL2和重組IL2對植入^果鼠體內的 MDA-MB231人吝'L癌月中瘤的4乍用。圖6示出了紫杉醇(taxolTM)和F16-IL2對植入棵鼠體內的 MDA-MB231人乳癌腫瘤的作用。
圖7示出了小分子(A)和大分子(B)細胞粘合素-C的示意 圖。4吏幾種III型纖連蛋白樣結構域經受可變剪切，以佳J尋其分子 中包括(B)或省去(A)。氨基酸序列和細胞粘合素-C的編碼核苷 酸序列是公眾可得到的，它們的數據庫參考號分別為NP_002151.1 GI:4504549和NM一002160.1 GI:4504548。
具體實施例方式
實驗
^:參為、布
通過生物分布分析來評價體內靶向性能。通過在10至12周齡 的Balb/c雌性4果鼠體內皮下注射107個MDA-MB-231人乳癌細月包來 獲《尋荷瘤小鼠(Charles River Labor atories )。當可明顯觸及腫瘤時 將小鼠分組(n^ 5 )并在生物分布8天、24h或2h之前，在側向 尾靜脈通過靜脈注射10 mg/kg的多柔比星。對照組不給予多柔比 星。將經純化的F16-IL2進行放射性碘化并注射到所有小鼠的側向 尾靜脈中。在注射后24小時處死小鼠(12.5(ag, 3.3pCi/小鼠)。對 器官進行稱重并用Packard Cobra伽瑪計數器讀出其放射性。代表 性器官的》丈射性含量被表示為每克組織注射劑量的百分比 (%ID/g )。
這些實驗的結果表明，多柔比星劑量的預注入不會削弱免疫細 月包因子的腫瘤革巴向作用(圖1至圖4)。治^f
通過在10至12周齡的Balb/c雌性凈果鼠體內皮下注射2><107個 MDA-MB-231人乳癌細胞來獲得荷瘤小鼠(Charles River Labor atories)。在腫瘤細胞植入9天后，當可明顯觸及腫瘤時將小鼠分組
(n = 5)并在側向尾4爭脈通過靜脈注射鹽水，20 jiigF16-IL2 (相應 于6.6 pg IL2 )、 6.6 |ug重纟且IL2 ( Proleukin )、以及最大體禾口、為250 iul的4 mg/kg或1 mg/kg多柔比星。每天監測小鼠并且每周用測徑 器測量三次腫瘤生長，利用以下/>式計算體積體積二長度x寬度 2x0.5。當腫瘤達到體積> 2000 mm3或當腫瘤壞死時，才艮才居瑞士法4聿
(Swiss regulations) 并依據由 Veterinaramt des Kantons Ziirich (198/2005)頒發的項目許可證將動物處死。腫瘤的尺寸由平均值士 SE表示。
在才直入到凈果鼠體內的MDA-MB231人乳癌才莫型中7見察到 F16-IL2與多柔比星的協同作用(圖5)。還觀察到較高劑量的多柔 比星比低劑量更加有效。
向以同樣方式產生的荷瘤小鼠的側向尾靜脈通過靜脈注射鹽 7K, 20 pg F16-IL2 (牙目應于6.6 pg IL2 )、以及最大體積、為250 pl的 1 mg/kg或5 mg/kg taxolTM。如上文所述監控小鼠并測量胂瘤的生 長。
在才直入凈果鼠中的MDA-MB231人乳癌才莫型中^見察到了 F16-IL2 與taxolTM之間的協同作用(圖6)。序列
SEQ ID NO: 1. 4A1 -F16 VH結構域核苦酸序歹'J
GAG GTG CAG CTG TTG GAG TCT GGG GGA GGC TTG GTA CAG CCT GGG GGG TCC CTG AGA CTC TCC TGT GCA GCC TCT GGA TTC ACC TTT AGC CGG TAT GGT GCG AGC TGG GTC CGC CAG GCT CCA GGG AAG GGG CTG GAG TGG GTC TCA GCT ATT AGT GGT AGT GGT GGT AGC ACA TAC TAC GCA GAC TCC GTG AAG GGC CGG TTC ACC ATC TCC AGA GAC AAT TCC AAG AAC ACG CTG TAT CTG CAA ATG AAC AGC CTG AGA GCC GAG GAC ACG GCC GTA TAT TAC TGT GCG AAA GCG CAT AAT GCT TTT GAC TAC TGG GGC CAG GGA ACC CTG GTC ACC GTG TCG AGA
SEQ ID NO: 2 4A1 -F16 VH結構域氨基酸序列
EVQLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS RYGASWVRQA PGKGLEWVSA ISGSGGSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKAH NAFDYWGQGT
LVTVSREVQLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS
RYGASWVRQA PGKGLEWVSA ISGSGGSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKAH NAFDYWGQGT LVTVSR
SEQ ID NO: 3 4A1 -F16 VL結構i或核苦酸序歹。
TCG TCT GAG CTG ACT CAG GAC CCT GCT GTG TCT GTG GCC TTG GGA CAG ACA GTC AGG ATC ACA TGC CAA GGA GAC AGC CTC AGA AGC TAT TAT GCA AGC TGG TAC CAG CAG AAG CCA GGA CAG GCC CCT GTA CTT GTC ATC TAT GGT AAA AAC AAC CGG CCC TCA GGG ATC CCA GAC CGA TTC TCT GGC TCC AGC TCA GGA AAC ACA GCT TCC TTG ACC ATC ACT GGG GCT CAG GCG GAA GAT GAG GCT GAC TAT TACTGT AAC TCC TCT GTT TAT ACT ATG CCG CCC GTG GTA TTC GGC GGA GGG ACC AAG CTG ACC GTC CTA GGC
SEQ ID NO: 4 4A1 -F16 VL結構域氨基酸序列
SSELTQDPAV SVALGQTVRI TCQGDSLRSY YASWYQQKPG QAPVLVIYGK NNRPSGIPDR FSGSSSGNTA SLTITGAQAE DEADYYCNSS VYTMPPVVFG GGTKLTVLG
SEQ ID NO: 5 4A1-F16 VH CDRl氨基酸序列 RYGAS
SEQ ID NO: 6 4A1畫F 16 VH CDR2氨基酸序列 AISGSGGSTYYADSVKG
SEQ ID NO: 7 4A1 -F16 VH CDR3氨基酸序列 AHNAFDY
SEQ ID NO: 8 4A1-F16 VL CDRl氨基酸序列 QGDSLRSYYAS
SEQ ID NO: 9 4A1國F 16 VL CDR2氨基酸序歹'j GKNNRPS
SEQ ID NO: 10 4A1隱F 16 VL CDR3氨基酸序歹'j NSSVYTMPPVV
SEQ ID NO: 11 hlL2前體序歹'J (成熟hlL2:殘基7-150 )
MY腹QLLSCI ALSLALVTNS APTSSSTKKT QLQLEHLLLD LQMILNGI麗 YKNPKLT腹L TFKFYMPKKA TELKHLQCLEEELKPLEEVL NLAQSKNFHL RPRDLISNIN VIVLELKGSE TTFMCEYADE TATIVEFLNR WITFCQSIIS TLT
SEQIDNO: 12肽才妄頭氨基酸序歹1！ GGGGSGGGGSGGGG
SEQ ID NO: 13 肽4妄頭氨基酸序列 GGGGSGGGGSGGGGS
SEQ ID NO: 14 肽4妄頭氨基酸序歹'J SSSSGSSSSGSSSSG
SEQ ID NO: 15 肽4妻頭氨基酸序列 GSGSAGSGSAGSGSA
SEQ ID NO: 16 肽4妻頭氨基酸序歹'J GGSGGGGSGGGGSGG 。
2權利要求
1.一種治療癌癥的方法，包含對有需要的個體給予抗癌化合物和抗體-白細胞介素2(IL2)結合物，其中所述抗體-IL2結合物包含與特異性結合于細胞粘合素-C的抗體相結合的IL2。
2. 才艮據權利要求1所述的方法，其中，所述抗體特異性結合于所 述細胞粘合素-C大分子同種型。
3. 根據權利要求2所述的方法，其中，所述抗體特異性結合于所 述細月包粘合素-C大分子同種型的Al結構i或。
4. 根據權利要求3所述的方法，其中，所述抗體與包含SEQ ID NO. 2的4A1-F16 VH結構i或和SEQ ID NO. 4的4A1-F16 VL結構域的抗體竟爭結合于細胞粘合素-C大分子同種型。
5. 根據權利要求4所述的方法，其中，所述抗體包含具有VH結 構域和VL結構i或的4元體纟元原結合4立點，所述VH結構域包含SEQ ID NO. 5的VH CDR1 、 SEQ ID NO. 6的VH CDR2和SEQ ID NO. 7的VH CDR3;以及所述VL結構i或包含SEQ ID NO. 8的VL CDR1 、 SEQ ID NO. 9的VL CDR2和SEQ ID NO. 10的VL CDR3。
6. 根據權利要求5所述的方法，其中，所述抗體包含抗體抗原結 合^f立點，所述抗體抗原結合^f立點包含SEQ ID NO. 2的4A1-F16 VH結構域和SEQ ID NO. 4的4A1-F16 VL結構域。
7. 根據權利要求1至6中任一項所述的方法，其中，所述抗癌化 合物是DNA損傷劑。
8. 根據權利要求7所述的方法，其中，所述抗癌化合物是多柔比 星。
9. 才艮據權利要求1至6中任一項所述的方法，其中，所述抗癌化 合物是有絲分裂紡錘體組裝抑制劑。
10. 根據權利要求9所述的方法，其中，所述抗癌化合物是紫杉醇。
11. 根據權利要求1至10中任一項所述的方法，其中，所述癌癥 是乳癌。
12. 抗癌化合物在制造用于治療癌癥的方法中4吏用的藥物中的應 用，所述方法包含與抗體-IL2結合物聯合纟會予所述抗癌化合 物，所述抗體-IL2結合物包含與特異性結合于細胞粘合素-C 的4元體相結合的白細胞介素2 (IL2 )。
13. 包含與特異性結合于細胞粘合素-C的抗體相結合的白細胞介 素2 (IL2)的抗體-IL2結合物在制造用于治療癌癥的方法中 使用的藥物的應用，所述方法包含與所述抗癌化合物聯合給予 所述寺元體-IL2結合物。
14. 才艮據4又利要求12或4又利要求13所述的應用，其中，所述抗體 特異性結合于所述細胞粘合素-C大分子同種型。
15. 根據權利要求14所述的應用，其中，所述抗體特異性結合于 所述細胞粘合素-C大分子同種型的Al結構域。
16. 才艮據氺又利要求15所述的應用，其中，所述抗體與包含SEQ ID NO. 2的4A1-F16 VH結構i或和SEQ ID NO. 4的4A1-F16 VL結構域的抗體竟爭結合于細胞粘合素-C大分子同種型。
17. 才艮據沐又利要求16所述的應用，其中，所述抗體包含具有VH 結構域和VL結構3或的抗體#元原結合<立點，所述VH結構J或包含SEQ ID NO. 5的VH CDR1 、 SEQ ID NO. 6的VH CDR2和SEQ ID NO. 7的VH CDR3;以及所述VL結構域包含SEQ ID NO. 8的VL CDR1 、 SEQ ID NO. 9的VL CDR2和SEQ ID NO. 10的VL CDR3。
18. 才艮據4又利要求17所述的應用，其中，所述抗體包含抗體抗原 結合位點，所述抗體抗原結合位點包含SEQ ID NO. 2的 4A1-F16 VH結構域和SEQ ID NO. 4的4A1-F16 VL結構i或。
19. 根據權利要求12至18中任一項所述的應用，其中，所述抗癌 化合物是DNA損傷劑。
20. 根據權利要求19所述的應用，其中，所述抗癌化合物是多柔 比星。
21. 根據權利要求12至18中任一項所述的應用，其中，所述抗癌 化合物是有絲分裂紡錘體組裝抑制劑。
22. 根據權利要求21所述的應用，其中，所述抗癌化合物是紫杉醇。
23. 根據權利要求12至22中任一項所述的應用，其中，所述癌癥 是乳癌。
24. —種用于治療癌癥的試劑盒，包含抗癌化合物和抗體-IL2結合 物，所述抗體-IL2結合物包含與特異性結合于細胞粘合素-C 的抗體相結合的白細胞介素2 (IL2 )。
全文摘要
本發明涉及利用抗癌劑與靶向于細胞粘合素-C的抗體-免疫球蛋白2(IL-2)結合物聯合用來治療癌癥，該抗癌劑例如是多柔比星或紫杉醇。
文檔編號A61K47/48GK101687049SQ200880021930
公開日2010年3月31日 申請日期2008年6月25日 優先權日2007年6月28日
發明者伊夫林·特拉赫塞爾, 曼努埃拉·卡斯帕, 杰茜卡·馬林德, 達里奧·內里 申請人:菲洛根股份公司