B細胞疫苗的接種方案的制作方法

專利名稱：B細胞疫苗的接種方案的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及免疫接種和治療或預(yù)防疾病的領(lǐng)域。具體地說，本發(fā)明涉 及通過在接種的受試者體內(nèi)誘導(dǎo)半抗原特異性抗體應(yīng)答來治療或預(yù)防疾 病。本發(fā)明進一步提供了一種通過在受試者體內(nèi)誘導(dǎo)半抗原特異性抗體來 預(yù)防或治療疾病的方法，包括將一種組合物施用于所述受試者體內(nèi)，該組 合物包含一種RNA噬菌體的病毒樣顆粒和至少一個與之連接的半抗原。
背景技術(shù)：
針對半抗原接種背后的概念，其包括大多數(shù)濫用藥物，是不穿過血腦 屏障的抗濫用藥物的抗體結(jié)合血液中的藥物，從而減少并降低進入中樞神 經(jīng)系統(tǒng)的藥物量和速率。通過降低藥物使用的相關(guān)回報，上癮的個人不再 有吸毒的動機。尼古丁疫苗已在人類中測試過。在吸煙者體內(nèi)進行了重組尼古丁一綠 膿桿菌外蛋白A綴合物NicVAX測試，用50樣史克、100微克或200孩走克 的NicVAX或安慰劑注射四次(Hatsukami DK等人，尸/，"wmc^ 77^/" 2005, 78:456-467)，分別于第0、 4、 8和26周進行。 一次NicVAX注射 不足以誘導(dǎo)抗尼古丁抗體，尼古丁特異性抗體僅在第二次注射后才能檢 出?？鼓峁哦〉味葍H在第IO周達到峰值，即第三次注射后兩周。尼古丁疫苗的戒煙功效已經(jīng)在一項雙盲、安慰劑對照二期戒煙研究中 得到證明(Cornuz J等人，2005年5月在ASCO上提出；佛羅里達奧蘭 多，可從網(wǎng)址hUp:〃www.asco.org/ac/1，1003，—12-002643-00 18-0034-00 19-0033424，00.asp.獲得。2005年11月25日發(fā)布)。招募中度至重度吸煙 者共340名受試者，通過每月注射一次共注射5次，以明礬配制的100微克NicQb (代表連接到一種RNA噬菌體的病毒樣顆粒的尼古丁分子)或 安慰劑進行免疫。目標退出日期設(shè)為初次免疫后的第1月。以NicQb治療 的受試者在第2月和第6月之間持續(xù)戒煙率略高于以安慰劑治療的受試者(28%比21%)，但差別未達到統(tǒng)計學(xué)顯著性。但是，當按抗尼古丁抗體 滴度對吸煙者進行分類時，觀察到了接種的強烈的統(tǒng)計學(xué)意義效果。活性 藥物治療組159名吸煙者依據(jù)其滴度被分為三組。具有最高抗體應(yīng)答的吸 煙者中有57。/。持續(xù)戒煙，相對而言，接受安慰劑的受試者為31%;而且這 一效果具有高度的顯著性(p=0.004)。相比之下，具有中度或低度抗體水 平的受試者并未達到有效戒煙。增加的持續(xù)戒煙率持續(xù)了達一年，而且 42%的具有高抗體滴度的受試者沒有復(fù)發(fā)，相比而言，安慰劑組為21%(Cytos:治療尼古丁成癮的疫苗對獲得高抗體水平的受試者可促進12個 月持續(xù)戒煙，其實現(xiàn)了高抗體水平。新聞發(fā)布公司網(wǎng)頁 http:〃www.cytos.com/doc/Cytos Press—E_051117.pdf。 2005年11月25日 發(fā)布)。這些數(shù)據(jù)清楚地表明，當抗尼古丁的抗體水平足夠高且該抗體對 尼古丁有足夠的親和力時，抗尼古丁的疫苗對人類戒煙會是有效的。因此，需要有誘導(dǎo)更高的有效抗尼古丁抗體水平的方法。這通常由提 高疫苗劑量或由添加疫苗佐劑而獲得。此外，受試者通常在戒煙期間提早 復(fù)發(fā)。最初的復(fù)發(fā)通常發(fā)生在戒煙開始后幾天，大部分受試者在最初8周 內(nèi)復(fù)發(fā)。因此，宜盡早誘導(dǎo)高抗尼古丁抗體水平。此外，抗體必須具有足夠的親和力。對于一些半抗原，曾有描述在免 疫后1到2周僅i秀導(dǎo)了低親和力(Kd = 1000 - 10000 nM )的抗體，而幾個 月后分離的抗體顯示了親和力成熟，因而有Kd = 10 -100 nM的高親和力(Foote和Eisen， PNAS， Vol. 97(20) pp. 10679-81， 1995 )。發(fā)明概迷我們驚奇地發(fā)現(xiàn)了半抗原疫苗、尤其是用于預(yù)防和治療藥物濫用成癮 的疫苗的新接種方案。相比先前的接種方案施用之間的時間間隔約為28 天，本發(fā)明接種方案使接受免疫的受試者可以獲得更高的抗體滴度。例如，7中，本發(fā)明方案所獲得的最高抗體滴度是現(xiàn)有技 術(shù)的兩倍。此外，這些發(fā)明方案會使達到高抗體應(yīng)答的時間比現(xiàn)有技術(shù)早 很多。再次，實施例部分中的方案設(shè)置顯示了達到最高抗體應(yīng)答的時間可 以比現(xiàn)有技術(shù)方案縮短至少一半。盡管本發(fā)明加快了接種方案，但我們驚 奇地發(fā)現(xiàn)，由本發(fā)明方案和由現(xiàn)有技術(shù)方案取得的高抗體親和力都相當 高。
因此，本發(fā)明提供了 一種通過在人的體內(nèi)誘導(dǎo)半抗原特異性抗體來預(yù) 防或治療疾病的方法，包括將一種組合物施用于所述人的體內(nèi)，該組合物
包含(a)—種具有至少一個第一附著位點的RNA噬菌體的病毒樣顆粒； 及(b)至少一種半抗原，其具有至少一個，優(yōu)選為僅一個第二附著位點， 其中(a)和(b)通過該至少一個第一附著位點和該至少一個第二附著位 點共價連接，其中施用組合物于人的體內(nèi)包括至少第一、第二和第三次施 用組合物于人的體內(nèi)，其中笫一次施用和第二次施用之間，以及笫二次施 用和笫三次施用之間的時間間隔最多為18天。
在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明提供了一種通過在人的體內(nèi)誘導(dǎo)藥 物濫用特異性抗體來預(yù)防或治療濫用藥物成癮的方法，包括施用一種組合 物于所迷人的體內(nèi)，該組合物包含，基本由或由下列組成(a)—種具有 至少一個第一附著位點的RNA噬菌體的病毒樣顆粒；及(b)至少一種濫 用藥物，其具有至少一個，優(yōu)選為僅一個第二附著位點，其中(a)和(b) 通過該至少一個第一附著位點和該至少一個第二附著位點共價連接，其中 施用組合物于人體內(nèi)包括至少第 一 、第二和第三次施用組合物于人體內(nèi)， 其中第 一次施用和第二次施用之間，以及第二次施用和第三次施用之間的 時間間隔最多為18天。在一個優(yōu)選的實施方案中，時間間隔最多為14天。 在一個進一步優(yōu)選實施方案中，時間間隔為14天或7天。
在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明方法包括或由五次施用組成，其中 所有各次施用之間的時間間隔為14天或7天。在一個優(yōu)選的實施方案中， 本發(fā)明方法包括或由五次藥物施用組成，其中第一次和第二次施用之間， 第二次和第三次施用之間的時間間隔為7天，而第三次和第四次施用之間，以及第四次和笫五次施用之間的時間間隔為14天。
在一個優(yōu)選的實施方案中，通過本發(fā)明方法施用的組合物進一步包括 佐劑，其中所述佐劑優(yōu)選為鋁鹽，優(yōu)選為氫氧化鋁。
在另一方面，本發(fā)明提供了一種組合物用于生產(chǎn)藥物的用途，該藥物 通過在人的體內(nèi)誘導(dǎo)半抗原特異性抗體來預(yù)防或治療疾病，該組合物包含 (a ) —種具有至少一個第一附著位點的RNA噬菌體的病毒樣顆粒，優(yōu)選 為具有至少一個第一附著位點的RNA噬菌體QP的病毒樣顆粒；及(b) 至少一種半抗原，其具有至少一個，優(yōu)選為僅一個第二附著位點；其中(a) 和(b)通過該至少一個第一附著位點和該至少一個第二附著位點共價連 接，其中所述組合物將被施用于所述人的體內(nèi)，而且其中所述施用所述組 合物于所述人的體內(nèi)包括至少第一、第二和第三次施用所述組合物于所述 人的體內(nèi)，其中所述第一次施用和所述第二次施用之間，以及所述笫二次 施用和所述第三次施用之間的時間間隔最多為18天。
在另一方面，本發(fā)明提供了一種組合物用于通過在人的體內(nèi)誘導(dǎo)半抗 原特異性抗體來預(yù)防或治療疾病，其中所述組合物包含(a)—種具有至 少一個第一附著位點的RNA噬菌體的病毒樣顆粒，優(yōu)選為具有至少一個 第一附著位點的RNA噬菌體QP的病毒樣顆粒；及(b)至少一種半抗原， 其具有至少一個，優(yōu)選為僅一個第二附著位點；其中(a)和(b)通過該 至少一個第一附著位點和該至少一個第二附著位點共價連接，其中所述組 合物將被施用于所述人的體內(nèi)，而且其中施用所述組合物于所述人的體內(nèi) 包括至少第一、第二和第三次施用所述組合物于所述人的體內(nèi)，其中所述 第一次施用和所述第二次施用之間，以及所述第二次施用和所述第三次施 用之間的時間間隔最多為18天。
在另一個優(yōu)選的實施例中，本發(fā)明提供一種組合物生產(chǎn)藥物的用途， 所述藥物用于通過在人的體內(nèi)誘導(dǎo)濫用藥物特異性抗體來預(yù)防或治療藥 物成癮，該組合物包含(a) —種具有至少一個第一附著位點的RNA噬 菌體的病毒樣顆粒，優(yōu)選為具有至少一個第一附著位點的RNA噬菌體QP 的病毒樣顆粒；及(b)至少一種濫用藥物，其具有至少一個，優(yōu)選為僅一個第二附著位點；其中(a)和(b)通過該至少一個第一附著位點和該
至少一個第二附著位點共價連接，其中所述組合物將被施用于所述人的體 內(nèi)，并且其中所述施用所述組合物于所述人的體內(nèi)包括至少第一、第二和 第三次施用所述組合物于所述人的體內(nèi)，其中所述第一次施用和所述第二 次施用之間，以及所述第二次施用和所述笫三次施用之間的時間間隔最多
為18天。在一個進一步優(yōu)選的實施方案中，時間間隔最多為14天，或進 一步優(yōu)選地，時間間隔為14天。在一個非常優(yōu)選的實施方案中，時間間隔 為7天。在本發(fā)明的又一個非常優(yōu)選的實施方案中，所述組合物生產(chǎn)用于 預(yù)防或治療濫用藥物成癮的藥物的用途進一步包括或由第四次施用組成。 進一步優(yōu)選為，第三次和第四次施用之間的時間間隔最多為14天，同樣進 一步優(yōu)選地，第三次和第四次施用之間的時間間隔為14天，非常優(yōu)選地， 第三次和第四次施用之間的時間間隔為7天。在本發(fā)明的另一個進一步優(yōu) 選的實施方案中，使用所述組合物以生產(chǎn)藥物用于預(yù)防或治療濫用藥物成 癮、進一步包括或由第五次施用組成。進一步優(yōu)選地，藥物施用的第一次和 第二次之間、第二次和第三次之間、第三次和第四次之間的時間間隔為7 天，第四次和笫五次之間的時間間隔為至少14天，優(yōu)選為14天，更優(yōu)選 為21天，還更優(yōu)選為28天。
在進一步優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明提供一種組合物，用于通過在人 的體內(nèi)誘導(dǎo)濫用藥物特異性抗體來預(yù)防或治療濫用藥物成癮，其中所述組 合物包含(a) —種具有至少一個第一附著位點的RNA噬菌體的病毒樣 顆粒，優(yōu)選為具有至少一個第一附著位點的RNA噬菌體QP的病毒樣顆粒； 及(b)至少一種濫用藥物，其具有至少一個，優(yōu)選為僅一個第二附著位 點；其中(a)和(b)通過該至少一個第一附著位點和該至少一個第二附 著位點共價連接，其中所述組合物將被施用于所述人的體內(nèi)，而且其中所 述施用所述組合物于所述人的體內(nèi)包括至少第一、第二和第三次施用所述 組合物于所述人的體內(nèi)，其中所述第一次和所述第二次施用之間，以及所 述第二次和所述第三次施用之間的時間間隔最多為18天。在進一步優(yōu)選的 實施方案中，時間間隔最多為14天，或進一步優(yōu)選地，時間間隔為14天。
10在一個非常優(yōu)選的實施方案中，時間間隔為7天。在本發(fā)明的又一個非常 優(yōu)選的實施方案中，用于預(yù)防或治療濫用藥物成癮的組合物進一步包括或 由第四次施用所述組合物于所述人的體內(nèi)組成。進一步優(yōu)選地，第三次施 用和第四次施用之間的時間間隔最多為14天，再次進一步優(yōu)選地，第三次 施用和第四次施用之間的時間間隔為14天，非常優(yōu)選地，第三次施用和第 四次施用之間的時間間隔為7天。在本發(fā)明的又一個非常優(yōu)選的實施例中， 用于預(yù)防或治療濫用藥物成癮的組合物進一步包括或由第五次施用組成。 進一步優(yōu)選地，第一次和第二次施用之間、第二次和第三次施用之間、第 三次和第四次施用之間的時間間隔為7天，第四次和第五次施用之間的時 間間隔為至少14天，優(yōu)選為14天，更優(yōu)選為21天，還更優(yōu)選為28天。
在又一個進一步優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明提供了一種組合物用于通 過在人的體內(nèi)誘導(dǎo)尼古丁特異性抗體來預(yù)防或治療尼古丁成癮，其中所述 組合物包含(a) RNA噬菌體Q[p]的病毒樣顆粒及(b)至少一個尼古 丁分子，其中該至少一個尼古丁分子通過一個連接序列被共價結(jié)合到該病 毒樣顆粒上，其中該連接序列由A-CH20CO(CH2)2CO-B組成，而且其中 A代表所述尼古丁分子，而且其中B代表所述RNA噬菌體QP1的病毒樣 顆粒，其中所述連接序列被共價結(jié)合到所述尼古丁分子的3，位上，而且其 中所述組合物將一皮施用于所述人的體內(nèi)，而且其中所述施用所述組合物于 所述人的體內(nèi)包括至少第一、第二和第三次施用所述組合物于所述人的體 內(nèi)，其中所述第一次和所述第二次施用之間，以及所迷第二次和所迷第三 次施用之間的時間間隔為7天。進一步優(yōu)選地，用于預(yù)防或治療濫用藥物 成癮的組合物進一步包括第四次施用所述組合物于所述人的體內(nèi)，其中優(yōu) 選地，第三次施用和第四次施用之間的時間間隔為7天。再次，更優(yōu)選地， 用于預(yù)防或治療濫用藥物成癮的組合物進一步包括第五次施用，其中優(yōu)選 地，第四次和第五次施用之間的時間間隔至少為14天，優(yōu)選為14天，更 優(yōu)選為21天，再更優(yōu)選為28天。
在另 一方面，本發(fā)明提供了 一種組合物用于通過在人的體內(nèi)誘導(dǎo)尼古 丁特異性抗體來預(yù)防或治療尼古丁成癮，其中所述組合物包含(a)RNA噬菌體QP的病毒樣顆粒及(b )至少一個尼古丁分子，其中該至少一個尼 古丁分子通過一個連接序列被共價結(jié)合到病毒樣顆粒上，其中該連接序列 由A-CH20CO(CH2)2CO-B組成，其中A代表所述尼古丁分子，而B代表 所述RNA噬菌體QP的病毒樣顆粒，該連接序列被共價結(jié)合到所述尼古丁 分子的3，位上，其中對所述組合物進行配制用于施用于所述人的體內(nèi)，而 且其中所述施用所述組合物于所述人的體內(nèi)包括至少第一、第二和第三次 施用所述組合物于所述人的體內(nèi)，其中所述第一次施用和所述第二次施用 之間，以及所述第二次施用和所述第三次施用之間的時間間隔為7天。進 一步優(yōu)選地，用于預(yù)防或治療濫用藥物成癮的該組合物進一步包括第四次 施用所述組合物于所述人的體內(nèi)，其中優(yōu)選地，第三次施用和第四次施用 之間的時間間隔為7天。再次，更優(yōu)選地，用于預(yù)防或治療濫用藥物成癮 的該組合物包含第五次施用，其中優(yōu)選地，第四次和第五次施用之間的時 間間隔為至少14天，優(yōu)選為14天，更優(yōu)選為21天，還更優(yōu)選為28天。
在另 一方面，本發(fā)明提供了 一種組合物用于通過在人的體內(nèi)誘導(dǎo)尼古 丁特異性抗體來預(yù)防或治療尼古丁成癮，其中所述組合物包含(a)RNA 噬菌體QP的病毒樣顆粒及(b)至少一個尼古丁分子，其中該至少一個尼 古丁分子通過一個連接序列被共價結(jié)合到病毒樣顆粒上，其中連接序列由 A-CH2OCO(CH2)2CO-B組成，而且其中A代表所述尼古丁分子，而且其 中B代表所述RNA噬菌體QP的病毒樣顆粒，而且其中所述連接序列被 共價結(jié)合到所述尼古丁分子的3，位上，而且其中所述組合物被改制或定制 用于施用于所述人的體內(nèi)，其中所述施用所述組合物于所述人的體內(nèi)包括 至少第一、第二和第三次施用所述組合物于所述人的體內(nèi)，其中所述第一 次施用和所述第二次施用之間，以及所述第二次施用和所述第三次施用之 間的時間間隔為7天。進一步優(yōu)選地，用于預(yù)防或治療濫用藥物成癮的該 組合物進一步包括第四次施用所述組合物于所述人的體內(nèi)，其中優(yōu)選地， 第三次施用和第四次施用之間的時間間隔為7天。再次，更優(yōu)選地，用于 預(yù)防或治療濫用藥物成癮的該組合物包含第五次施用，其中優(yōu)選地，第四 次和第五次之間的時間間隔至少為14天，優(yōu)選為14天，更優(yōu)選為21天，再更優(yōu)選為28天。 附圖簡要說明


圖1:接種方案1、 2和3的比較受試者采用存在明礬的100微克 NicQb以每周一次的間隔接種5次(實心菱形，方案3)或每兩周一次的 間隔接種5次(空心方形，方案2)或每月一次的間隔接種5次(十字形， 方案1)進行免疫。通過酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)測定了所有受試 者的尼古丁特異性IgG滴度，并顯示了三組的幾何平均酶聯(lián)免疫吸附測定 法滴度。
圖2: A)接種方案1和4的比較受試者采用存在明礬的100微克 NicQb以每月一次的間隔接種5次(十字形，方案l)或以每周一次的間 隔注射四次并隨之于28天后注射一次(方案4)進行免疫。B)接種方案 1和5的比較受試者釆用存在明礬的100微克NicQb以每月 一次的間隔
接種5次(十字形，方法1)或以每周一次的間隔注射三次并隨之以每月 一次的間隔注射兩次(方法5)進行免疫。通過酶聯(lián)免疫吸附測定法測定 了所有受試者的尼古丁特異性IgG滴度，并顯示了各組的幾何平均酶聯(lián)免 疫吸附測定法滴度。
發(fā)明詳述
除非另有規(guī)定，本文中使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語均與本發(fā)明所屬領(lǐng) 域的普通技術(shù)人員的一般理解的意義相同。
佐劑本文中使用的術(shù)語"佐劑"指免疫應(yīng)答或物質(zhì)的非特異性刺激因 子，其會在宿主中產(chǎn)生一個儲存庫，該儲存庫在與本發(fā)明的組合物、疫苗 組合物或藥物組合物組合時，會提供一個甚而更增強^/或更持久的免疫應(yīng) 答，優(yōu)選為產(chǎn)生細胞因子。多種佐劑已為本技術(shù)領(lǐng)域所知并在本發(fā)明中有 用。優(yōu)選的佐劑選自完全或不完全弗氏佐劑、含鋁佐劑、改性胞壁酰二肽、 表面活性物質(zhì)(如溶血卵磷脂、普盧蘭尼克多元醇類、聚陰離子、肽、油 乳劑、鑰孔血藍蛋白、二硝基酚、卡介苗(BCG)、短棒桿菌、包括但不限于肽聚糖、脂多糖類及其衍生物的Toll樣受體(TLR)的配體、聚次黃苷 酸-胞苦酸、免疫刺激寡核苷酸、咪唑并喹啉(如瑞喹莫德和咪喹莫特)、 鞭毛蛋白、單磷酰脂免疫調(diào)節(jié)劑、AdjuVax 100a、 QS-21 、 QS-18、 GPI-0100、 CRL1005、 MF-59、 OM-174、 OM-197、 OM-294、 Virosomal佐劑技術(shù)及 其任何混合物)。本發(fā)明的一個非常優(yōu)選的佐劑為含佐劑的鋁，優(yōu)選為鋁 鹽，優(yōu)選為氫氧化鋁，優(yōu)選為含鋁礦物凝膠，最優(yōu)選為鋁膠。在一個非常 優(yōu)選的實施方案中，所述佐劑為鋁膠。佐劑這一術(shù)語也包括上述所列任何 物質(zhì)的混合物。本發(fā)明顆粒，優(yōu)選為病毒樣顆粒， 一般被描述為一種佐劑。 然而，術(shù)語"佐劑"在本申請的上下文中使用時，是指一種非為用于本發(fā)明 組合物的RNA噬菌體的病毒樣顆粒的佐劑。在每一種情況下，"佐劑，，這 一術(shù)語是指一種除了病毒樣顆粒之外所使用的佐劑。
附著位點，第一本文中使用的術(shù)語"第一附著位點"是指隨RNA噬 菌體病毒樣顆粒而自然發(fā)生的或人為地增加到RNA噬菌體病毒樣顆粒的
一種成分，并且，第二附著位點可與之連接。第一附著位點可以是蛋白質(zhì)、 多肽、氨基酸、肽、糖、多核苷酸、天然或合成聚合物、次生代謝產(chǎn)物或 化合物(生物素、焚光素、視黃醇、地高辛配基、金屬離子、苯曱磺酰氟) 或化學(xué)反應(yīng)基團(如氨基、羧基、巰基、羥基、胍基、組氨?；蚱浣M合)。 作為第一附著位點的化學(xué)反應(yīng)基團的優(yōu)選的實施方案為氨基酸的氨基，如 賴氨酸。第一附著位點一般位于表面上，而且優(yōu)選為位于病毒樣顆粒的外 表面上。多個第一附著位點存在于表面上，優(yōu)選為存在于RNA噬菌體的 病毒樣顆粒的外表面上， 一般以重復(fù)構(gòu)型存在。
附著位點，第二本文中使用的術(shù)語"第二附著位點"是指半抗原(或 優(yōu)選為濫用的藥物)的一個成分部分或與半抗原相關(guān)的一個成分，位于 RNA噬菌體的病毒樣顆粒表面上的第一附著位點可與之連接。半抗原或優(yōu) 選為濫用的藥物的第二附著位點，包括任何化學(xué)部分，優(yōu)選為胺、酰胺、 羧基、巰基、羥基、醛、?；栈铩㈦隆⒅氐蝓ｋ?，或能夠特異性 地與第一附著位點產(chǎn)生反應(yīng)的其他化學(xué)部分。至少一個，優(yōu)選為僅一個第 二附著位點存在于半抗原上，或優(yōu)選為存在于濫用藥物上。因此，術(shù)語"半抗原"或優(yōu)選為"具有至少一個第二附著位點的濫用藥物"是指半抗原或優(yōu) 選為"濫用藥物"，包含至少半抗原或優(yōu)選
"濫用藥物，，以及第二附著位點的構(gòu)建體。然而，特別是對于第二附著 位點，其不是自然發(fā)生于半抗原或優(yōu)選濫用藥物之內(nèi)，這些半抗原或濫用 藥物包括一個連接體，其將半抗原或濫用藥物與第二附著位點相連接，或 更優(yōu)選地，已經(jīng)包括或含有第二附著位點。
外殼蛋白本申請中使用的術(shù)語"外殼蛋白"和可互換使用的術(shù)語"衣殼 蛋白"，是指病毒蛋白質(zhì)，優(yōu)選為RNA噬菌體的亞單位，其能夠裝配成為 病毒衣殼或RNA噬菌體的病毒樣顆粒。
半抗原本文中使用的術(shù)語"半抗原"是指自身不能誘發(fā)免疫應(yīng)答的低 分子量的有機組合物，但其一旦附著在栽體分子上，便會誘發(fā)免疫應(yīng)答。 在本發(fā)明綴合物、組合物和方法中使用的半抗原例子包括藥物、激素和毒 素，但并不限于這些特異性半抗原。絕大多數(shù)的濫用藥物為半抗原。
連接的本文中使用的術(shù)語"連接的"(或其名詞連接)是指將該至 少一個第一連接點和該至少一個第二連接位點連接的所有可能的方式，優(yōu) 選為化學(xué)相互作用。化學(xué)相互作用包括共價和非共價相互作用。非共價相 互作用的典型例子是離子相互作用、疏水相互作用或氫鍵，而共價相互作 用為基于例如共價鍵，如酯、醚、磷酸酯、酰胺、肽、碳磷鍵、碳硫鍵(如 硫醚)或酰亞胺鍵。在某些優(yōu)選的實施方案中，第一附著位點和第二附著 位點通過至少一個共價鍵相連接。然而，本文中使用的術(shù)語"連接的"不僅 應(yīng)包含該至少一個第一附著位點和該至少一個第二附著位點的直接連接， 還應(yīng)備選或優(yōu)選地，包括通過中間分子對該至少一個第一附著位點和該至 少一個第二附著位點的間接連接，而且通常且優(yōu)選為通過使用至少一個，
優(yōu)選為一個異型雙功能交聯(lián)劑。
尼古丁本發(fā)明中使用的術(shù)語"尼古丁"是指對映體純(S)或(R)構(gòu) 型的尼古丁或其混合物，其可以這樣的方式衍生使之包含至少一個第二附 著位點，然后該第二附著位點能夠直接或通過一個交聯(lián)劑與載體的第一附 著位點相連接。優(yōu)選地，尼古丁的衍生方式使之僅包含一個第二附著位點。
15RNA噬菌體的病毒樣顆粒本文中使用的術(shù)語"RNA噬菌體的病毒樣 顆粒"是指包含或優(yōu)選基本組成或組成為RNA噬菌體的外殼蛋白、突變體 或片段的病毒樣顆粒。此外，RNA噬菌體的病毒樣顆粒與RNA噬菌體的 結(jié)構(gòu)相似，為非復(fù)制性或非感染性，而且通常且優(yōu)選為非復(fù)制性且非感染 性。通常且優(yōu)選地，術(shù)語"RNA噬菌體的病毒樣顆粒"應(yīng)進一步指一種RNA 噬菌體的病毒樣顆粒，其缺少至少一個編碼RNA噬菌體之復(fù)制機制的基 因，優(yōu)選為缺乏所有此等基因，而且通常并進一步優(yōu)選為甚至缺少至少一 個編碼該負責病毒附著于或進入宿主的蛋白質(zhì)或多個蛋白質(zhì)的基因，優(yōu)選 為缺乏所有此等基因。然而，此定義還應(yīng)包含RNA噬菌體的病毒樣顆粒， 其中所述該基因或該等基因仍然存在但無活性，因此也導(dǎo)致非復(fù)制性和/ 或非感染性的RNA噬菌體的病毒樣顆粒。此外，術(shù)語"RNA噬菌體的病 毒樣顆粒"因此在其最廣定義上還應(yīng)包含一種RNA噬菌體的病毒顆粒，其 基因組已通過物理或化學(xué)或遺傳方法失活，從而使該病毒顆粒不能感染和 /或復(fù)制。優(yōu)選的由RNA噬菌體衍生的病毒樣顆粒呈現(xiàn)二十面體對稱并由 180個亞單位組成。在本公開中，術(shù)語"亞單位，，和"單體，，在這一情形中可 互換并等同地使用。在本申請中，術(shù)語"RNA噬菌體"和術(shù)語"RNA噬菌體" 可互換地^f吏用。
一個本Z/^開中^f吏用"一個"時，其含義為"至少一個"或"一個或多個"， 除非另有注明。
多肽的氨基酸序列同一性通?？梢允褂靡阎挠嬎銠C程序如Bestfit 程序確定。當采用Bestm或任何其他序列比對程序，優(yōu)選為使用Bestfit， 以確定某特定序列是否為，例如，與參照氨基酸序列95%同一時，對參數(shù) 進行設(shè)定，使得同一性百分數(shù)在參照氨基酸序列的整個長度上計算，并且 使得同源性中空位允許最大為參照序列中氨基酸殘基總數(shù)的5%。上述確 定多肽之間同一性百分比的方法適用于本發(fā)明中公開的所有蛋白質(zhì)、多肽 或其片段。
相關(guān)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員將可以理解，對本文中所述方法和應(yīng)用的適 當修改和改編是顯而易見的，且可在不背離本發(fā)明的范圍或其任何實施方
16案的情況下進行。特別是在本申請中，以天表示的時間間隔，如"最多14 天"、"為14天"、"為7天"，應(yīng)理解為具有加或減兩天的偏差，優(yōu)選為加 或減一天。本文中表示的其他數(shù)值，除了在實施例中實驗確定的數(shù)值除外， 均應(yīng)包括所述數(shù)值和所述數(shù)值的±10%的值范圍。
在本發(fā)明的一方面，本發(fā)明提供了一種通過在人的體內(nèi)誘導(dǎo)半抗原特 異性抗體來預(yù)防或治療疾病的方法，包括施用一種組合物于該人的體內(nèi)， 該組合物包含，基本組成或組成為(a)—種具有至少一個第一附著位點 的RNA噬菌體的病毒樣顆粒；及(b)至少一種半抗原，其具有至少一個， 優(yōu)選為僅一個第二附著位點，其中(a)和(b)通過該至少一個第一附著 位點和該至少一個第二附著位點共價連接，其中施用該組合物于該人的體 內(nèi)包括至少第一、第二和第三次施用該組合物于該人的體內(nèi)，其中第一次 施用和第二次施用之間，以及第二次施用和第三次施用之間的時間間隔最
多為18天。
在本發(fā)明的 一方面，本發(fā)明提供了 一種通過在人的體內(nèi)誘導(dǎo)濫用藥物 特異性抗體來預(yù)防或治療濫用藥物成癮的方法，包括將一種組合物施用于 該人的體內(nèi)，該組合物包含，基本組成或組成為(a)—種具有至少一個 第一附著位點的RNA噬菌體的病毒樣顆粒；及(b)至少一種濫用藥物， 其具有至少一個，優(yōu)選為僅一個第二附著位點，其中(a)和(b)通過該 至少一個第一附著位點和該至少一個第二附著位點共價連接，而且其中將 該組合物施用于該人的體內(nèi)包括至少第一、第二和第三次施用該組合物于 該人的體內(nèi)，其中第一次施用和第二次施用之間，以及第二次施用和第三 次施用之間的時間間隔最多為18天。優(yōu)選地，第一次施用和第二次施用之 間，以及第二次施用和第三次施用之間的時間間隔為至少三天，優(yōu)選為至 少四天，更優(yōu)選為至少五天。在一個優(yōu)選的實施方案中，第一次施用和第 二次施用之間，以及第二次施用和第三次施用之間的時間間隔為至少五天 且最多18天。
在一個優(yōu)選的實施方案中，第一次施用和第二次施用之間，以及第二 次施用和第三次施用之間的時間間隔為最多14天，或最多10天，或優(yōu)選為最多7天。進一步優(yōu)選地，第一次施用和第二次施用之間，以及第二次 施用和第三次施用之間的時間間隔為至少三天，優(yōu)選為至少四天，更優(yōu)選 為至少五天。在一個優(yōu)選的實施方案中，第一次施用和第二次施用之間， 以及第二次施用和第三次施用之間的時間間隔為至少五天且最多14天。在 一個優(yōu)選的實施方案中，第一次施用和第二次施用之間，以及第二次施用 和笫三次施用之間的時間間隔為至少五天且最多10天。在一個優(yōu)選的實施 例中，第一次施用和第二次施用之間，以及第二次施用和第三次施用之間 的時間間隔為至少五天且最多7天。
在一個優(yōu)選的實施方案中，第 一次施用和第二次施用之間的時間間隔 與第二次施用和第三次施用之間的時間間隔相同。
在一個非常優(yōu)選的實施方案中，第一次施用和第二次施用之間，以及
第二次施用和第三次施用之間的時間間隔為14天。在本發(fā)明的備選的非常 優(yōu)選的實施方案中，第一次施用和第二次施用之間，以及第二次施用和第 三次施用之間的時間間隔為7天。
在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的方法進一步包括進一步施用。在 一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的方法包括或組成為再一次施用，或再二 次施用或三次施用。
在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的方法進一步包括或由第四次施用 組成。在一個優(yōu)選的實施方案中，第三次施用和第四次施用之間的時間間 隔等于第一次施用和第二次施用之間的時間間隔。在一個優(yōu)選的實施方案 中，第一次和第二次施用之間、第二次和第三次施用之間以及第三次和第 四次施用之間的時間間隔相同。在另一優(yōu)選的實施方案中，第三次施用和 第四次施用之間的時間間隔長于第 一次施用和第二次施用之間的時間間 隔并長于第二次施用和第三次施用之間的時間間隔。在一個優(yōu)選的實施方 案中，第三次施用和第四次施用之間的時間間隔是第 一次施用和第二次施 用之間的時間間隔的兩倍，并且是第二次施用和第三次施用之間的時間間 隔的兩倍。在一個優(yōu)選的實施方案中，第三次施用和第四次施用之間的時 間間隔為最多14天，優(yōu)選為14天或優(yōu)選為7天。在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的方法進一步包括或由第五次施用 組成。在一個優(yōu)選的實施方案中，第四次施用和第五次施用之間的時間間 隔等于第 一次施用和第二次施用之間的時間間隔。在另 一個優(yōu)選的實施方 案中，第四次施用和第五次施用之間的時間間隔長于第一次施用和第二次 施用之間的時間間隔，并且長于第二次施用和第三次施用之間的時間間 隔。在一個優(yōu)選的實施方案中，第四次施用和第五次施用之間的時間間隔 是第 一次施用和第二次施用之間的時間間隔的兩倍，并且是第二次施用和 第三次施用之間的時間間隔的兩倍。在一個優(yōu)選的實施方案中，第三次施 用和第四次施用之間的時間間隔與第四次和第五次施用之間的時間間隔 相同。在一個優(yōu)選的實施方案中，第四次施用和第五次施用之間的時間間
隔為最多14天，優(yōu)選為14天或優(yōu)選為7天。
在一個優(yōu)選的實施方案中，第一次施用和第二次施用之間、第二次施 用和第三次施用之間、第三次和第四次施用之間以及第四次施用和第五次 施用之間的時間間隔均相同。在一個優(yōu)選的實施方案中，時間間隔為最多 14天。在一個進一步優(yōu)選的實施方案中，時間間隔為14天。在另一進一 步優(yōu)選的實施方案中，時間間隔為7天。
在一個優(yōu)選的實施方案中，第三次和第四次之間以及第四次和第五次 之間的時間間隔長于第 一 次和第二次之間以及第二次和第三次之間的時 間間隔。在一個優(yōu)選的實施方案中，第一次施用和第二次之間以及第二次 和第三次之間的時間間隔為7天，第三次和第四次之間以及第四次和第五 次之間的時間間隔為14天。在一個優(yōu)選的實施方案中，第一次施用和第二 次施用之間以及第二次和第三次之間的時間間隔為14天，第三次和第四次 之間以及第四次和第五次之間的時間間隔為28天。最初三次初步施用后延 長后續(xù)施用的時間間隔的優(yōu)點是在受試者體內(nèi)獲得延長的高抗體滴度。
在一個優(yōu)選的實施方案中，第一次和第二次施用之間以及第二次和第 三次施用之間的時間間隔為7天，第三次和第四次施用之間以及第四次和 第五次施用之間的時間間隔為至少14天，優(yōu)選為14天，更優(yōu)選為21天， 再更優(yōu)選為28天。
19在另一個優(yōu)選的實施方案中，第一次和第二次施用之間、第二次和第
三次施用之間、第三次和第四次施用的時間間隔為7天，第四次和第五次 施用之間的時間間隔為至少14天，優(yōu)選為14天，更優(yōu)選為21天，再更優(yōu) 選為28天。
一般認為，抗體的成熟，即針對抗原的高親和力的抗體的演變要花費 一些時間，通常是幾個月。然而，我們驚奇地發(fā)現(xiàn)，釆用我們的加速接種 方案，即第 一次和第二次施用之間以及第二次和第三次施用之間的時間間 隔為最多14天，優(yōu)選地，時間間隔為14天或7天，或采用我們的甚至更 優(yōu)選的方案，即五次施用之間的時間間隔為最多14天，優(yōu)選為14天或7 天，不僅能在比現(xiàn)有技術(shù)更短的時間內(nèi)取得高抗體應(yīng)答，而且更重要的是， 可獲得或所獲得的抗體具有Kd低于500nM的高親和力，與現(xiàn)有技術(shù)具有 可比性。
因此，在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的方法導(dǎo)致在IO周之內(nèi)、優(yōu) 選4周之內(nèi)達到最高抗體應(yīng)答。
另外，在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明可獲得或所獲得的半抗原特 異性，優(yōu)選濫用藥物特異性，更優(yōu)選尼古丁分子特異性的抗體具有Kd低 于500nM的親和力，優(yōu)選為低于150nM,更優(yōu)選為低于100nM，再更優(yōu) 選為低于50nM,更優(yōu)選為低于10nM，更優(yōu)選為低于lnM。
在一個優(yōu)選的實施方案中，RNA噬菌體選自a)噬菌體QP; b)噬 菌體R17; c)噬菌體fr; d)嗟菌體GA; e)噔菌體SP; f)逸菌體MS2; g)噬菌體Mll; h)噬菌體MXl; i)噬菌體NL95; k)噬菌體f2; l)噬 菌體PP7及m)噬菌體AP205。
在一個優(yōu)選的實施方案中，RNA噬菌體的病毒樣顆粒包含或者備選地 基本由或由RNA噬菌體的外殼蛋白、重組外殼蛋白、突變體或其片段組 成。本文中使用的術(shù)語"外殼蛋白的片段"定義為一種多肽，其具有至少 70%,優(yōu)選為至少80%,更優(yōu)選為至少卯％,甚至更優(yōu)選為至少95%的 野生型外殼蛋白的長度，且其優(yōu)選地保留有形成RNA噬菌體的病毒樣顆 粒的能力。優(yōu)選地，該片段通過至少一次內(nèi)部缺失、至少一次截短或至少
20一次上述缺失和截短的組合而獲得。術(shù)語"外殼蛋白的片段"應(yīng)進一步包含
多肽，其與上述定義的"外殼蛋白的片段"具有至少80%，優(yōu)選為卯％，甚 至更優(yōu)選為95%的氨基酸序列同一性，且其優(yōu)選地能夠裝配成為RNA噬 菌體的病毒樣顆粒。
術(shù)語"突變體外殼蛋白，，或術(shù)語"外殼蛋白的突變體"在本文中可互換使 用，是指具有源自于外殼蛋白的氨基酸序列的多肽，其中該氨基酸序列與 外殼蛋白具有至少80%,優(yōu)選為至少85%、卯％、 95%、 97%或99%同 一性并且優(yōu)選地保留裝配成為RNA噬菌體的病毒樣顆粒的能力。
在本發(fā)明的一個優(yōu)選的實施方案中，組合物包含RNA噬菌體的外殼 蛋白、突變體或其片段，其中外殼蛋白具有氨基酸序列，該序列選自(a) SEQ ID NO:l;指Q|5 CP; ( b ) SEQ ID NO:l和SEQ ID NO:2的混合物 (指QPA1蛋白)；(c ) SEQ ID NO:3; (d)SEQID隱4; ( e ) SEQ ID NO:5; ( f) SEQ ID NO:6， ( g ) SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:7的混 合物；(h ) SEQ ID NO:8; (i) SEQ ID NO:9; (j) SEQ ID NO: 10; (k) SEQIDNO:ll; (1) SEQ ID NO:12; ( m ) SEQ ID NO:13;及(n ) SEQ ID NO:14。
在一個優(yōu)選的實施方案中，RNA噬菌體是QP。 WO 02/056905的特定 實施例18提供了由QP制備病毒樣顆粒的詳細描述。
QP突變體外殼蛋白可用于本發(fā)明，所述外殼蛋白的暴露的賴氨酸殘 基被精氨酸取代。在一個優(yōu)選的實施方案中，Q(J突變體外殼蛋白選自a) QP-240 (SEQ ID NO: 15， SEQ ID NO:l的Lysl3-Arg) b ) Q|3-243 (SEQ ID NO:16， SEQ ID NO:l的Asnl0-Lys); c ) Qp-250 (SEQ ID NO:17， SEQ ID NO:l的Lys2-Arg); d) QP-251 (SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:l的 Lysl6-Arg);以及e ) QP-259" (SEQ ID NO:19， SEQ ID NO:l的Lys2-Arg, Lysl6-Arg.)。
在一個優(yōu)選的實施方案中，RNA噬菌體為AP205。 在本發(fā)明的另 一個非常優(yōu)選的實施方案中，RNA噬菌體的病毒樣顆粒 為包含RNA噬菌體QP的外殼蛋白的RNA噬菌體Q卩的病毒樣顆粒，其中所述外殼蛋白具有SEQ IDNO:l的氨基*列 在本發(fā)明的一個進一步 優(yōu)選的實施方案中，RNA噬菌體的病毒樣顆粒為基本由或由RNA噬菌體 QP的外殼蛋白組成的RNA嗟菌體QP的病毒樣顆粒，其中所述外殼蛋白 具有SEQ ID NO:l的氨基,列。
在一個優(yōu)選的實施方案中，第一附著位點包含，或優(yōu)選為氨基，優(yōu)選 為賴氨酸殘基的氨基。
在一個優(yōu)選的實施方案中，濫用藥物選自(a)可待因；(b )芬太 尼；(c)海洛因；U)嗎啡；(e)苯異丙胺；(f)可卡因；(g)亞曱 二氧甲基苯丙胺；(h)甲基苯丙胺；(i)哌醋甲酯；(j)尼古??； (k) 可替寧；(l)去甲煙堿；(m)PCP; (n)LSD; (o)美司卡林；(p) 賽洛西賓；(q)四氫大麻酚；(r)地西泮；(s)地昔帕明；(t)丙咪 溱；(u)去甲替林；及")阿米替林類藥物。
在一個優(yōu)選的實施方案中，濫用的藥物是尼古丁。共價結(jié)合的尼古丁 分子的整體或者呈現(xiàn)為相同的絕對構(gòu)型，即所有尼古丁分子具有(i )-構(gòu) 型或者所有尼古丁分子具有自然發(fā)生的(S)-構(gòu)型，或者它們呈現(xiàn)為上述 構(gòu)型的任何混合。優(yōu)選地，尼古丁分子共價結(jié)合，如以(/f)-構(gòu)型和自然 產(chǎn)生的(S)-構(gòu)型兩者的約等量混合物或等量混合物存在。在一個優(yōu)選的 實施方案中，由本發(fā)明制劑包含的尼古丁-病毒樣顆粒綴合物由使用尼古丁 分子或尼古丁衍生物的外消旋混合物而可獲得或獲得，通常且優(yōu)選為由使 用尼古丁分子或尼古丁衍生物的外消旋混合物，其包括帶有一個與尼古丁 分子共價結(jié)合的連接序列的尼古丁分子，用于與RNA噬菌體的病毒樣顆 粒產(chǎn)生偶聯(lián)反應(yīng)。
在一個優(yōu)選的實施方案中，濫用藥物是尼古丁代謝產(chǎn)物，包括去甲煙 堿和可替寧。尼古丁成癮的治療也可以靶向尼古丁代謝產(chǎn)物，包括去曱煙 堿和可替寧，兩者的半衰期均長于尼古丁的半衰期，均有與尼古丁類似的 藥理和神經(jīng)藥理作用且可能會上癮。US6932971，特別是從42欄到43欄， 描述了尼古丁或尼古丁代謝產(chǎn)物與蛋白載體的不同連接位點及連接方式。
在一個優(yōu)選的實施方案中，濫用藥物是可卡因，例如琥珀酰化去甲可卡因。US6932971,特別是從43欄到45欄直至第二段，描述了可卡因和 相關(guān)藥物與蛋白栽體的不同連接位點及連接方式。 在一個優(yōu)選的實施方案中，濫用藥物是海洛因。
適當?shù)牡诙街稽c已為熟練技術(shù)人員所知，其隨半抗原而自然發(fā)生 或源自于半抗原、優(yōu)選濫用藥物。US6932971,特別是從37欄到41欄， 描述了第二附著位點的性質(zhì)、位置和產(chǎn)生，將這些教導(dǎo)通過引用并入本文。 半抗原，優(yōu)選濫用藥物的化學(xué)衍生導(dǎo)致所述半抗原，或優(yōu)選地，所述濫用 藥物包含一個連接體，連接體將半抗原，或優(yōu)選濫用藥物，與第二附著位 點相關(guān)聯(lián)，或更優(yōu)選地，已經(jīng)包括或包含該第二附著位點。
在本發(fā)明的一個非常優(yōu)選的實施方案中，組合物包含(a) RNA噬菌 體QP的病毒樣顆粒及(b)至少一個尼古丁分子，其中該至少一個尼古丁 分子通過一個連接序列被共價結(jié)合到病毒樣顆粒上，其中該連接序列由 A-CH2OCO(CH2)2CO-B組成，其中A代表所述尼古丁分子，而B代表所 述RNA噬菌體QP的病毒樣顆粒，而且其中所述連接序列被共價結(jié)合到所 述尼古丁分子的3，位。
在本發(fā)明的一個優(yōu)選的實施方案中，組合物進一步包括佐劑，其中優(yōu) 選為含佐劑的鋁，優(yōu)選為鋁鹽，優(yōu)選為氫氧化鋁，優(yōu)選為含鋁的礦物凝膠， 最優(yōu)選為鋁膠。在本發(fā)明的一個優(yōu)選的實施方案中，組合物包含l毫克到 2毫克，優(yōu)選為1,2毫克到1,7毫克，更優(yōu)選為1.3毫克到1.5毫克的鋁鹽， 優(yōu)選為氫氧化鋁。
在一個優(yōu)選的實施方案中，在每次施用期間，施用基本相同劑量的所 述組合物。
在一個優(yōu)選的實施方案中，在每次施用期間，施用至少50微克，優(yōu)選 為至少100微克或優(yōu)選為至少200微克或300微克劑量的組合物。組合物 的施用劑量優(yōu)選為不超過500微克，優(yōu)選為不超過400微克。在本發(fā)明的 一個優(yōu)選的實施方案中，在每次施用期間，將約100孩i克的組合物施用于 人的體內(nèi)。
本發(fā)明的組合物可通過本領(lǐng)域已知的多種方法施用，但一般通過注射、輸注、吸入、口服或其他適當?shù)奈锢矸椒ㄊ┯?。組合物可以備選通過 肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、經(jīng)粘膜、經(jīng)皮或皮下施用。在一個非常優(yōu)選的實施方案中， 組合物通過皮下施用。施用的組合物成分包括無菌水性(如生理鹽水)或 非水溶液及懸浮液。非水溶劑的實例有丙二醇、聚乙二醇、橄欖油等植物 油以及可注射的有機酯，如油酸乙酯。載體或封閉敷料可用于增加皮膚滲 透性并增強抗原吸收。
實施例1
"NicQP"—本文中使用的術(shù)語"NicQP"應(yīng)指至少 一個尼古丁-病毒樣顆 粒綴合物，其包含(a) RNA噬菌體QP的病毒樣顆粒；及(b)至少一個 尼古丁分子，其中該尼古丁分子通過連接序列被共價結(jié)合到QP的病毒樣 顆粒上，其中所述連接序列由A-CH20CO(CH2)2CO-B組成，其中A代表 所述尼古丁分子，而B代表QP的病毒樣顆粒，并且其中連接序列共價結(jié) 合到尼古丁分子的3'位上。NicQP按照US6，932'971的實施例1中的描述 產(chǎn)生。NicQ(5藥物在室溫下解凍(方法1)或由凍干粉以無菌水復(fù)溶，隨 后添加含有氫氧化鋁[Al(OH)3J的佐劑鋁膠(Alhydrogel )。
即用型最終疫苗組合物，被指定為"100微克劑量"，含有100微克 NicQ(J和1.3毫克氫氧化鋁。
實施例2
方案1:受試者接受了按實施例1所述制備的五個劑量。施用的時間 間隔為28天。
方案2:與方法1基本上相同，唯一的例外是施用的時間間隔為14天。 方案3:與方法l基本上相同，唯一的例外是施用的時間間隔為7天。 圖1:每周一次、兩周一次及每月一次接種方案的比較 按照圖1中注明的時間點收集血液樣本，用于測量抗尼古丁抗體滴度， 以評估特定用藥方案的免疫原性。抗尼古丁 IgG抗體滴度通過使用包被 RNA酶-尼古丁綴合物的孔板由酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)進行測定?？?br> 24體滴度的幾何平均值顯示于圖1中?？贵w與尼古丁的結(jié)合親和力通過平衡 透析測定。
方案1的最高抗體滴度在第20周達到，方案2和方案3的抗體滴度峰 值分別在第IO周和第4周達到。
方案l、 2和3的最高抗體滴度分別是9000、 20000和23000。因此， 由方案3和方案2獲得的最高抗體滴度約為由方法1獲得的最高抗體滴度 的兩倍。
在第8周檢測時，所有三種方案引起的尼古丁特異性抗體具有相當?shù)?親和力，大約為50-100nM。
實施例3
方案4:受試者接受了按實施例1所述制備的五個劑量。最初三次施 用之間的時間間隔為7天，隨后兩次施用的時間間隔為28天。
方案5:受試者接受了按實施例1所述制備的五個劑量。最初四次施 用之間的時間間隔為7天，隨后一次施用間隔28天進4亍。
圖2A和2B:方案4和方案5以及每月接種方案的比較
按照圖2中注明的時間點收集血液樣本，用于測量抗尼古丁抗體滴度， 以評估特定用藥方案的免疫原性。抗尼古丁 IgG抗體滴度通過使用包被 R1NA酶-尼古丁綴合物的孔板由酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)進行測定?？?體滴度的幾何平均值顯示于圖2中?？贵w與尼古丁的結(jié)合親和力通過平衡 透析測定。
方案1的最高抗體滴度在第20周達到，而方案5的抗體滴度最高峰在 第4周達到。對于方案4,首次滴度峰在第3周達到，且尼古丁特異性IgG 反應(yīng)由第6周和第IO周的額外注射而提高。
方案1、 4和5在五次注射后的最高抗體滴度分別是9000、 21000和 16000。因此，方案4和方案5獲得的最高抗體滴度約為方案1獲得的最高 抗體滴度的兩倍。
方案4和方案5特別有優(yōu)勢，因為除早期及快速誘導(dǎo)高抗體滴度外，
25這些方案進一步確保高抗體滴度維持到第8周或甚至第12周。考慮到一般 在前8到12周內(nèi)抽煙復(fù)發(fā)的危險性更高，這是特別有益的。
根據(jù)第8周檢測，所有五種方案引起的尼古丁特異性抗體均具有相當 的親和力，具有約50-100nM的平衡離解值(Kd)。
權(quán)利要求
1、一種組合物，其通過在人體內(nèi)誘導(dǎo)濫用藥物特異性抗體而預(yù)防或治療濫用藥物成癮，其中所述組合物包含(a)具有至少一個第一附著位點的RNA噬菌體的病毒樣顆粒，(b)具有至少一個第二附著位點的至少一種濫用藥物，其中(a)和(b)通過所述至少一個第一附著位點和所述至少一個第二附著位點共價連接，并且其中所述組合物將被施用于所述人，并且其中所述組合物向所述人的所述施用包括至少第一、第二和第三次施用所述組合物于所述人體內(nèi)，其中所述第一次施用和所述第二次施用之間，以及所述第二次施用和所述第三次施用之間的時間間隔最多為18天。
2、 沖又利要求1的組合物，其中所述第一次施用和所述第二次施用之間， 以及所述第二次施用和所述第三次施用之間的時間間隔最多為14天。
3、 權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的組合物，其中所述第一次施用和所述第 二次施用之間，以及所述第二次施用和所述笫三次施用之間的所述時間間 隔為7天。
4、 前述權(quán)利要求任一項所述的組合物，其中所述組合物向所述人的施 用進一步包括笫四次施用。
5、 權(quán)利要求4的組合物，其中所述組合物向所述人的施用進一步包括 第五次施用。
6、 權(quán)利要求5的組合物，其中第一次施用和第二次施用、第二次和第 三次、第三次和第四次以及第四次和第五次施用之間的時間間隔為7天。
7、 權(quán)利要求l-6之任一項所述的組合物，其中第三次和第四次以及第 四次和第五次施用之間的時間間隔長于第 一 次和笫二次施用之間的時間 間隔并且長于第二次和第三次施用之間的時間間隔。
8、 權(quán)利要求7所述的組合物，其中第一次施用和第二次施用、第二次 和第三次施用之間的時間間隔為7天，并且第三次和第四次以及第四次和第五次施用之間的時間間隔為28天。
9、權(quán)利要求4所述的組合物，其中所述第 一次和所述第二次施用之間、 所述第二次和所述第三次施用之間、以及所述第三次和所述第四次施用之 間的時間間隔為7天。
10、 權(quán)利要求5所述的組合物，其中所述第一次和所述第二次施用之 間、所述第二次和所述第三次施用之間以及所述第三次和所述第四次施用 之間的時間間隔為7天，并且其中所述第四次和所述第五次施用之間的時 間間隔為28天。
11、 前述權(quán)利要求任一項所述的組合物，其中所迷濫用藥物是尼古丁。
12、 前述權(quán)利要求任一項所述的組合物，其中所述疾病是尼古丁成癮。
13、 前述權(quán)利要求任一項所述的組合物，其中所述組合物包含(a) RNA噬菌體QP的病毒樣顆粒及(b)至少一個尼古丁分子，其中該至少 一個尼古丁分子通過連接序列共價結(jié)合到所述病毒樣顆粒。
14 、權(quán)利要求13所述的組合物，其中所述連接序列由 A-CH2OCO(CH2)2CO-B組成，其中A代表所述尼古丁分子，并且其中B 代表所述RNA噬菌體QP的病毒樣顆粒，其中所述連接序列共價結(jié)合到所 述尼古丁分子的3，位。
15、 一種通過在人體內(nèi)誘導(dǎo)濫用藥物特異性抗體而預(yù)防或治療濫用藥 物成癮的方法，包括向所述人體內(nèi)施用組合物，該組合物包含(a) 具有至少一個第一附著位點的RNA噬菌體的病毒樣顆粒，(b) 至少一種具有至少一個第二附著位點的濫用藥物，其中(a)和(b)通過所述至少一個第一附著位點和所述至少一個第 二附著位點共價連接，并且其中所述組合物向所述人的所述施用包括至少第一次、第二次和第三 次施用所述組合物于所述人，其中所迷第一次施用和所述第二次施用之 間，以及所述笫二次施用和所述第三次施用之間的時間間隔最多為18天。
16、 權(quán)利要求15所述的方法，其中所述第一次施用和所述笫二次施用 之間，以及所述第二次施用和所述第三次施用之間的所述時間間隔最多為14天。
17、 權(quán)利要求15或權(quán)利要求16所述的方法，其中所述第一次施用和 所述第二次施用之間，以及所述第二次施用和所述第三次施用之間的所述時間間隔為7天。
18、 權(quán)利要求15-17任一項所述的方法，其進一步包括第四次施用。
19、 權(quán)利要求18所述的方法，其進一步包括第五次施用。
20、 權(quán)利要求19所述的方法，其中第一次施用和第二次施用、第二次 和第三次、第三次和第四次以及第四次和第五次施用之間的時間間隔為7 天。
21、 權(quán)利要求15-20任一項所述的方法，其中第三次和第四次以及第 四次和第五次施用之間的時間間隔長于第一次和第二次之間的時間間隔 并且長于第二次和第三次施用之間的時間間隔。
22、 ；f又利要求21所述的方法，其中第一次施用和第二次施用、第二次 和第三次之間的時間間隔為7天，第三次和第四次以及第四次和笫五次施 用之間的時間間隔為28天。
23、 權(quán)利要求18所述的組合物，其中所述第一次和所述第二次施用之 間、所述第二次和所述第三次施用之間以及所述第三次和所述第四次施用 之間的時間間隔為7天。
24、 權(quán)利要求19所述的組合物，其中所述第一次和所述第二次施用之 間、所述第二次和所述第三次施用之間以及所迷第三次和所述笫四次施用 之間的時間間隔為7天，而且其中所述第四次和所述第五次施用之間的時 間間隔為28天。
25、 權(quán)利要求15-24任一項所述的方法，其中所述濫用藥物是尼古丁。
26、 權(quán)利要求15-25任一項所述的方法，其中所述疾病是尼古丁成癮。
27、 權(quán)利要求15-26任一項所述的組合物，其中所述組合物包含(a) RNA喧菌體Qp的病毒樣顆粒及(b)至少一個尼古丁分子，其中該至少 一個尼古丁分子通過連接序列共價結(jié)合到該病毒樣顆粒。
28 、權(quán)利要求27所述的組合物，其中所迷連接序列由A-CH20CO(CH2)2CO-B組成，其中A代表所述尼古丁分子，并且其中B 代表所述RNA噬菌體QP的病毒樣顆粒，并且其中所述連接序列共價結(jié)合 到所述尼古丁分子的3，位。
全文摘要
本發(fā)明涉及接種和治療或預(yù)防疾病領(lǐng)域。具體地說，本發(fā)明涉及通過在接種的受試者體內(nèi)誘導(dǎo)半抗原特異性抗體應(yīng)答來治療或預(yù)防疾病。本發(fā)明進一步提供了一種通過在受試者體內(nèi)誘導(dǎo)半抗原特異性抗體來預(yù)防或治療疾病的方法，包括將一種組合物施用于所述受試者體內(nèi)，該組合物包含一種RNA噬菌體的病毒樣顆粒和至少一個與之連接的半抗原。
文檔編號A61K47/48GK101678097SQ200880020885
公開日2010年3月24日 申請日期2008年4月18日 優(yōu)先權(quán)日2007年4月20日
發(fā)明者M·巴赫曼, P·毛爾, P·穆勒, T·菲斯特, W·萊納 申請人:希托斯生物技術(shù)股份公司