專利名稱：一種生物物質微量吸取貯存器的制作方法
技術領域：
本實用新型涉及一種生物物質微量吸取貯存器，具體涉及一種能夠 精確轉移生物物質的微量吸取貯存器。
背景技術：
隨著生物冷凍技術的發展，越來越多的生物物質能夠被長時間的
保存，如人卵凍存技術的發展為人類剩余能力的保存提供了可能；卵巢 組織的保存為那些由于各種原因必須切除卵巢的女性帶來了福音。這一 系列的成果在很大程度上歸功于冷凍培養液配方的改進，但冷凍物質承 載器及相關吸取技術的改進也起到了 一定的促進作用。
經過數十年的研究和改進，慢速冷凍技術相對比較成熟，但其也 存在著非常嚴峻的瓶頸亟待突破，就是慢速冷凍過程中冰晶的形成以及 冷凍保護劑毒性滲透對生物物質特別是胚胎及卵母細胞的損傷。玻璃化 冷凍作為 一種新興的冷凍技術，其操作的簡便性以及較高的成功率越來 越受到人們的青睞。目前用于生物物質玻璃化冷凍的承載器有多種，如 Cryoloop、 Cryoleaf、 electron microscopic grid等。在應用上，這
些承載器均取得了不錯的冷凍效果。這些成果的獲得取決于對樣品的準 確吸取，因為伴隨樣品一起進入承載器的液體量與冷凍效果密切相關， 這也是冷凍效果因人的熟練程度以及發揮狀態不同而存在差異的原因之
目前所用的玻璃化冷凍細胞吸取器主要為經酒精燈拉制的巴斯德滴 管或毛細管，在吸取生物物質時不可避免的會將大量的液體伴隨樣品一 起吸入管內，給下一步的操作帶來了不便。
發明內容
3針對以上技術缺陷，本實用新型提供了一種使用安全便捷的、控制精確的生物物質微量吸取貯存器。
本實用新型生物物質微量吸取貯存器包括內管1、外管3、 口吸管2、手控注射器4和乳膠管5;其中，所述內管1下端伸入外管3內部，內管1上端通過乳膠管5與口吸管2連接，手控注射器4通過乳膠管5與外管3粗端開口連接。
本實用新型中，所述伸入外管3的內管1下端的管口內徑比所要吸取生物物質的直徑大10 ~ 40微米，從而微量控制所吸生物物質以及液體的量；其外管3細端部分的管口內徑稍大于內管1下端的管口外徑，且小于內管1下端的管口外徑與生物物質兩倍外徑之和，主要用以控制主體生物物質的聚集，其中內管1下端的管壁厚度為1-50微米。
本實用新型中，所述手控注射器4為本領域常規的普通注射器，包括但不限于例如lml 、 5ml注射器或本領域常規的微控制注射器，包括但不限于例如Narishige、印pendorf注射器等。
本實用新型中，所述口吸管2為本領域常規的口吸管，如各種商品化口吸管，也可以為含濾器的由濾器、軟管組成的自制口吸管。
本實用新型中，所述的內管1、外管3的制作材料是本領域常規的透明、耐超低溫或具有高熱傳導性的材料，包括但不限于，例如聚氟管，聚碳酸酯管。
本實用新型中，所述生物物質為各種類型細胞、胚胎、組織塊或小型生物個體，其中該生物物質的直徑為10~ 1000微米。
本實用新型微量吸取貯存器在使用時，首先通過口吸管2在內管1中吸取一定的玻璃化冷凍液，將含有一定量冷凍液的內管1嵌入外管3之中，確保內管1與外管3之間密封不漏氣；然后調節與外管3相連的手控注射器4,將預先轉移至冷凍液中的生物物質連同適量的冷凍液吸入外管3中，冷凍液進入外管3的同時，生物物質被阻擋在內管1下端開口處；此時通過與內管1相連的口吸管2輕微施加少許負壓，便能將所需的生物物質及極少量的冷凍液吸入內管1較細部位，該部分含生物物質的液體與預先吸取的冷凍液之間存在一段空氣柱；然后拔出內管1，將生物物質取出進行冷凍即可，或進行其它操作；本實用新型的內管1 也可以直接作為冷凍保存管。
本實用新型中，本領域技術人員可以根據不同的生物物質，選擇 不同材料和不同內徑的內管、外管，從而選擇適于該生物物質的本發明 實用新型。
本實用新型微量吸取貯存器具有操作筒單、安全方便的特點，且能 夠精確控制伴隨生物物質進入承載器中的液體的量，提高了冷凍效果。
圖1為生物物質^f效量吸^i貯存器的結構示意圖； 圖2為生物物質微量吸取貯存器的使用狀態圖。
具體實施方式
以下結合附圖和實施例對本實用新型作進一步的說明，但本實用 新型并不受限于此。
如圖1所示，本實用新型生物物質微量吸取貯存器，包括內管1、 外管3、 口吸管2、手控注射器4和乳膠管5;其中，內管1下端伸入 外管3內，內管1上端通過乳膠管5與口吸管2連接，手控注射器4通 過乳膠管5與外管3粗端開口連接，伸入外管3的內管1下端的管口 內徑比所要吸取生物物質的直徑大10~40微米，其中該生物物質的直徑 為10 1000微米；外管3管口內徑稍大于內管1下端的管口外徑，且小 于內管1下端的管口外徑與生物物質兩倍外徑之和，其中內管1下端的 管壁厚度為1-50微米。本實用新型生物物質微量吸取貯存器的使用狀態 如圖2所示，其中圖2中的6為冷凍液、7為生物物質及適量冷凍液、 8為空氣柱、9為生物物質及少量冷凍液。
實施例1人卵母細胞的吸取
(1)用聚乙烯管制作外徑150、內徑130的內管1，用玻璃材料制作 外徑200、內徑180的外管3;
5(2) 通過自制的口吸管2在內管1中吸取一定的玻璃化的冷凍液6，冷凍液6 (成分為改良人輸卵管液(mHTF) +20%血清替代物(sss) +15%乙二醇(EG) + 15%二曱基亞砜(DMS0) +0. 5M蔗糖(Sucrose));
(3) 將含有一定量冷凍液6的內管1嵌入外管3之中，確保內管1與外管3之間密封不漏氣；
(4) 將2~3枚人卵母細胞在成分為mHTF+20%SSS+7. 5 % EG +7. 5 %DMS0的液體中處理4 ~ 5分鐘后，轉移至最終冷凍液中；
(5) 半分種后調節與外管3相連的普通lml的手控注射器4中的負壓，使卵母細胞及適量的冷凍液7 —起進入外管3之中；
(6) 冷凍液進入外管3的同時，卵母細胞被阻擋在內管1 口處，此時通過與內管1相連的口吸管2輕微施加少許負壓便能將卵母細胞及極少量的冷凍液9吸入內管1較細部位，該部分含卵母細胞的液體與預先吸取的冷凍液之間存在一段空氣柱8;
(7) 拔出內管1,將卵母細胞以及極少量的冷凍液9置于Cryoloop上，再浸入液氮進行冷凍保存。
實施例2:人8-細胞胚胎的吸取
(1) 用聚乙烯管制作外徑150、內徑130的內管1，用玻璃材料制作外徑200、內徑180的外管3;
(2) 通過商品化的口吸管2在內管1中吸取一定的玻璃化冷凍液，冷凍液成分為mHTF+20°/。sss+15%EG + 15%PROH+0. 5M Sucrose;
(3) 將含有一定量冷凍液的內管l嵌入外管3之中，確保內管1與外管3之間密封不漏氣；
(4 )將2 ~ 3枚人8-細胞胚胎放入成分為mHTF+20%SSS+7. 5 % EG +7. 5 %PR0H的液體中處理4 ~ 5分鐘后，轉移至最終冷凍液中；
(5) 半分種后調節與外管3相連的螺旋注射器中的負壓，使胚胎連同適量的冷凍液一起進入外管3之中；
(6) 冷凍液進入外管3的同時，胚胎被阻擋在內管1 口處，此時通過與內管1相連的口吸管2輕微施加少許負壓便能將胚胎及極少量的冷凍液吸入內管1較細部位，該部分含胚胎的液體與預先吸取的冷凍液
之間存在一段空氣柱；
(7)拔出內管1，將胚胎以及少量的冷凍液置于Cryoloop上，再浸 入液氮進行冷凍保存。
實施例3:牛MII期牛卵母細胞胚胎的吸取
(1) 用聚乙烯管制作外徑180、內徑150的內管1，用玻璃材料制作 外徑220、內徑200的外管3;
(2) 通過自制的口吸管2在內管1吸取一定的顯微操作液，操作液 成分為G-M0Ps+5mg/mlBSA;
(3) 將含有一定量才喿作液的內管1嵌入外管3之中，確保內管1與 外管3之間密封不漏氣；
(4) 調節與外管3相連的普通lml注射器中的負壓，使10~20枚 牛MII期牛卵母細胞胚胎連同適量的培養液一起進入外管3中，培養液 成分Gl. 5+5mg/mlBSA;
(5) 培養液進入外管3的同時，胚胎被阻擋在內管1 口處，此時通 過與內管1相連的口吸管2輕孩i施加少許負壓便能將牛卵及極少量的培 養液液吸入內管1較細部位，該部分含胚胎的液體與預先吸取的操作液 之間存在一段空氣柱；
(6 )拔出內管1，將牛卵以及少量的培養液吹入含操作液的核移植皿 中，并進行核移植才喿作。
實施例4:人卵母細胞的貯存
(1)制作外徑150、內徑130的內管1以及外徑200、內徑180的 外管3;
(2 )用內管1吸取一定的最終冷凍液，冷凍液成分為mHTF+20°/。sss+ 15%EG +15%DMSO+0. 5M Sucrose;
(3)將含有一定量冷凍液的內管1嵌入外管3之中，確保內管1與 外管3之間密封不漏氣；
7(4 )將2 - 3枚人卵母細胞在成分為mHTF+20%SSS+7. 5 % EG + 7. 5 % DMS0的液體中處理4 - 5分鐘后，轉移至最終冷凍液中；
(5) 半分種后調節與外管3相連的注射器中的負壓，使卵母細胞連 同適量的冷凍液一起進入外管3之中；
(6) 冷凍液進入外管3的同時，卵母細胞被阻擋在內管1 口處，此 時通過與內管l相連的口吸管2 (圖1-2)輕微施少許負壓便能將卵母 細胞及極少量的冷凍液吸入內管1較細部位，該部分含卵母細胞的液體 柱與預先吸取的冷凍液之間存在一段空氣柱；
(7 )拔出內管1，將含有卵母細胞的液體柱通過負壓使其上升一段距 離，并用經酒精燈消毒的鑷子將內管l開口處捏緊從而使其封閉；
(8)隨后，立即將含有卵母細胞的內管1細長部分浸入液氮中，去 除口吸管2并將細管的另一端用塞子塞住，并將整個內管1浸入液氮中 進行保存。
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權利要求1. 一種生物物質微量吸取貯存器，其特征在于，所述貯存器包括內管(1)、外管(3)、口吸管(2)、手控注射器(4)和乳膠管(5)，所述內管(1)下端伸入外管(3)內部，內管(1)上端通過乳膠管(5)與口吸管(2)連接，手控注射器(4)通過乳膠管(5)與外管(3)粗端開口連接。
2. 根據權利要求1所述的生物物質吸取貯存器，其特征在于，所述內管(1)下端的管口內徑比所要吸取生物物質的直徑大10~40微米，其中生物物質的直徑為10~ 1000微米。
3. 根據權利要求2所述的生物物質吸取貯存器，其特征在于，所述外管(3)細端的管口內徑稍大于內管(1)下端的管口外徑，且小于內管(1)下端的管口外徑與生物物質兩倍外徑之和，其中內管(1)下端的管壁厚度為1-50微米。
4. 根據權利要求3所述的生物物質吸取貯存器，其特征在于，所述手控注射器(4)為普通注射器或者微控制注射器。
5. 根據權利要求4所述的生物物質吸取貯存器，其特征在于，所述口吸管(2)為含濾器的自制口吸管或者商品化口吸管。
6. 根據權利要求5所述的生物物質吸取貯存器，其特征在于，所述內管(1)、外管(3)為具有透明、耐超低溫或高熱傳導性的材料。
專利摘要本實用新型涉及一種生物物質微量吸取貯存器，包括內管(1)、外管(3)、口吸管(2)、手控注射器(4)和乳膠管(5)；其中，內管(1)下端伸入外管(3)內，內管(1)上端通過乳膠管(5)與口吸管(2)連接，手控注射器(4)通過乳膠管(5)與外管(3)粗端開口連接。本實用新型能夠在帶有極少量液體的情況下將生物物質進行轉移或冷凍保存，具有控制精確、使用安全方便的特點。
文檔編號A61B17/425GK201282994SQ20082013421
公開日2009年8月5日 申請日期2008年9月12日 優先權日2008年9月12日
發明者吳克良, 陳子江 申請人:陳子江