專利名稱：一種用于抑制血管生成的合歡皮提取物的制備方法和應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種用于抑制血管生成的合歡皮提取物及其制備方法，并且闡明了其
在醫藥，食品、化妝品方面的用途，屬于中藥應用技術領域。
背景技術：
統計資料表明，全世界每年癌癥發病人數約1000萬，死亡約700萬人，己成為僅次于心血管病的人類第二殺手。我國每年新增惡性腫瘤患者約160萬人以上，因惡性腫瘤死亡的人數占全國總死亡人數的17.9%。如何找到符合中國國情的抗腫瘤藥物研發方向，是擺在國內藥物研發機構面前一個現實而嚴峻的問題。 目前臨床治療腫瘤的藥物主要分為兩大類，除常見的直接殺死腫瘤細胞的化療藥物以外，改變腫瘤惡性行為的藥物，如血管生成抑制劑越來越受到藥物研究者的關注。血管生成抑制劑以血管內皮細胞為目標靶細胞，通過切斷腫瘤的供養，從而遏制腫瘤的生長和轉移，它已成為當今新型抗腫瘤藥物研究最活躍的領域之一。與常規的腫瘤化療藥物相比，血管生成抑制劑最大的優點是抗癌譜廣，不易產生耐藥性，針對各種實體瘤均有效。國外在此領域發展迅速，已成功開發了血管生成抑素(Angiostatin)、內皮抑素(Endostatin)等生物制劑，每年可創8. 5億美金的利潤。但由于這些生物制劑屬多肽類藥物，體內穩定性差，生物利用度低，只能靜脈給藥，且給藥劑量大(50mg/kg)，療程長，治療費用高，長期使用的毒副作用尚有待評價。例如Endostatin臨床每天靜脈給藥15mg，十四天為一治療周期，通常要進行2 4個周期的治療，僅藥物費用高達3 6萬元，不但加重了患者的精神負擔與經濟負擔，而且大劑量、長時間給藥所帶來的安全性問題也不容忽視。因此，開發口服、高效、低毒、分子量小、價格便宜、特異性高的腫瘤血管生成抑制劑已成為急需解決的問題。天然藥物，特別是中國傳統中藥以其療效可靠、毒副作用小、資源豐富、價格便宜等優點日益受到國內外藥學研究者的重視。以我國中藥為研發對象，在傳統中醫藥理論指導下，臨床與科研單位緊密協作，運用現代生物技術開展中藥的研究與開發，有可能獲得擁有完全自主知識產權的藥物。 合歡皮是我國的一味常用中藥，為豆科植物合歡Albizia julibrissinDurazz.的干燥樹皮，具有解郁安神、活血消腫的功能，用于心神不安、憂郁失眠、肺癰瘡腫、跌撲傷痛等癥。文獻報道合歡皮提取物具有廣泛的體內、體外抑制腫瘤細胞增殖的細胞毒活性。但它是否具有的抗血管生成的作用，以及它的抗腫瘤作用是否與其抑制腫瘤血管形成有關尚不清楚。經過調研，未見合歡皮抑制血管生成作用的相關文獻報道，因此合歡皮在抑制血管生成的藥理、藥效等研究領域尚處于空白階段。
發明內容
針對上述問題，本發明的目的是提供一種用于抑制血管生成的合歡皮提取物，以及闡述了它的制備方法和實際應用。
本發明的技術方案一種用于抑制血管生成的合歡皮提取物。
所述合歡皮提取物的制備方法，是用水來提取合歡皮的干燥樹皮、莖皮、葉、花、種子、豆莢或根，水提取液依次用乙醚、乙酸乙酯、正丁醇進行萃取后，分離合并正丁醇萃取相并且濃縮除去正丁醇溶劑、干燥制成合歡皮提取物粉末。 所述合歡皮提取物在制備抑制血管生成藥物中的應用，是該抑制血管生成藥物含有有效劑量的合歡皮提取物及常規藥用載體和/或賦形劑。 所述的應用，還指所述合歡皮提取物被制成片劑、粉劑、顆粒劑、膠囊劑、口服液、注射液、膏劑、霜劑或乳劑。 所述的應用，還指所述合歡皮提取物可以用于預防和/或治療至少一種選自下述之一的疾病癌癥和/或癌癥轉移，血管瘤，血管纖維瘤，新生血管性青光眼，糖尿病視網膜病變，早熟視網膜病及視網膜靜脈閉塞，視網膜變性，晶體后纖維組織增生，顆粒性結膜炎，血管生成引起的角膜疾病，更年期黃斑和黃斑變性，牛皮癬，老年盤狀斑變性及風濕性關節炎，銀屑病，毛細管擴張，膿性肉芽腫，傷口愈合中抑制斑痕形成，動脈粥樣硬化，脂溢性皮炎和痤疫。 所述的應用，還指所述合歡皮提取物有抗腫瘤血管生成及其他與血管生成有關疾病治療、預防的用途，以及有用于腫瘤化療和/或輔助化療的用途。 所述的應用，還指所述合歡皮提取物可以制成用于抑制血管生成的保健食品和化妝品。 本發明中合歡皮提取物可用常規方法制備。在實際需要的時候，在合歡皮提取物中可以加入一種或多種藥學上可接受的載體。所述載體包括藥學領域常規的稀釋劑，賦形
齊U、填充齊U、粘合齊U、潤濕劑、崩解齊U、吸收促進齊U、表面活性齊iJ、吸附載體、潤滑齊iJ、乳化齊iJ、
滲透壓調節劑，必要時還可以加入香味劑、甜味劑等。 本發明巧妙地以血管生成作為治療疾病的靶點，研究并闡明合歡皮提取物的藥用
療效和機制，為其新用途開發和發現藥物作用新的靶點提供科學依據和重要信息，是中醫藥理論新的發展方向。 本發明是結合最佳實施例進行描述的，然而在閱讀了本發明的上述內容后，本領
域技術人員能領會在公開的實施例中作許多改變也可獲得相同或類似的結果，而不超出本
發明的構思、精神和范圍。更具體地說，顯然有些化學和生理性的相關試劑可替代本文所公
開的試劑而得到相同或類似的結果。所有類似的取代和修飾對本領域技術人員來說，顯然
都認為是本發明的精神、范圍和構思及權利要求范圍內的，即所有上述這些等價形式都同樣落于本發明的權利要求書所限定的范圍。
圖1合歡皮水提取物各個有機溶液萃取相對人血管內皮細胞增殖的抑制作用
圖2合歡皮提取物對雞胚尿囊膜血管生成的抑制作用
具體實施例方式
下面的實例將具體說明本發明的操作方法，但不能作為對本發明的限定。
實施例一 本發明提供的合歡皮提取物的制備方法如下 合歡皮生藥材50g加水600mL煎煮提取兩次，每次提取兩小時，合并兩次水提取液，離心(8000rpm，20min)，取上清液，濃縮成100mL的浸膏。然后按體積比1 : 1的方式，依次用乙醚、乙酸乙酯、正丁醇三種溶劑在常溫下對濃縮浸膏進行萃取，每種溶劑均萃取4次，合并三個萃取相，濃縮回收有機溶液，冷凍干燥，備用。 實驗結果顯示，合歡皮水提取液的正丁醇萃取物粉末呈白色，干物質提取率為0. 52%。 實施例二 合歡皮提取物對人血管內皮細胞增殖的抑制作用。
將人微血管內皮細胞(HMEC-1，法國國家衛生醫學研究所惠贈)置于含lmmol谷氨酰胺，1 P g/mL氫化可的松，10ng/mL表皮生長因子(EGF)和15%小牛血清的MCDB-131培養液中培養(37°C、5% C02、95X濕度)。取對數生長期細胞，以105cell/mL細胞接種于96孔板，100 ii L/孔，每組設4個平行孔，放置于37°C 、5%濕化C02的培養箱過夜。加不同濃度本發明實施例一中制得的乙醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取物以及萃取后剩下的殘渣，培養72小時后，去掉上清液，每孔輕輕地加入10%三氯醋酸100 P L固定，靜置5min后移到4t:放置lh后倒掉固定液，用去離子水洗5次，空氣干燥。每孔加入0. 4%磺酰羅丹明B (SRB) 100 y L37t:培養箱放置30min，用1%醋酸液洗5次，空氣干燥。加100 y L 10Mm Tris堿液(pH10.5)溶解，自動分光光度儀在531nm波長處測定每個小孔的吸光度值(A)。上述實驗重復3次。抑制率(％)計算如下
對照組A值一藥物組A值
抑制率(％) =-Xioo%
對照組A值一空白組A值 根據所得的結果計算其半數抑制量(IC5。)。 實驗結果如圖1所示，合歡皮水提取物的正丁醇萃取部位對HMEC-1細胞有抑制增
殖的活性，其半數抑制量約為55ii g/mL，而乙醚萃取部位、乙酸乙酯萃取部位以及萃取后的
水液則沒有活性體現，提示合歡皮的活性成分經過萃取后富集于正丁醇萃取部位之中。 實施例三合歡皮提取物抑制雞胚尿囊膜血管生成(CAM實驗)。 實驗樣品為本發明實施例一中制得的合歡皮水提取物正丁醇萃取部位。 白皮種蛋，參考張樹成的方法張樹成，吳志奎，王蕾，等.研究中藥血管生成活性
和作用的雞胚絨毛尿囊膜試驗模型的應用.中國中醫基礎醫學雜志，1999，5 :16-19.制備
雞胚尿囊膜。用打孔器制備直徑為6mm的微孔濾膜圓片，濕熱高壓消毒。設合歡皮提取物
給藥組(250i!g/mL)和生理鹽水陰性對照組。將藥物滴于濾紙上，制成藥膜，吹干備用。雞
胚培養3d后分組，將藥膜貼于CAM的部位。加藥48h后，觀察藥膜周圍的血管數，并攝影記錄。 CAM是經典的血管生成評價模型。實驗結果如圖2所示，生理鹽水陰性對照組CAM血管生成非常明顯，整體呈鮮紅色，血管在藥膜下呈放射狀生長，血管粗大，血液充盈，血管分支較多，毛細血管密度大。合歡皮提取物給藥組濃度為250ii g/mL時則明顯抑制了血管生成，放射狀生長的血管數目大為減少，血管主要以零星、雜亂、葉脈樣等表現形式存在，血管細小，稀疏，血管分支少，血管色淡淺黃，在藥膜片下及周圍局部鮮有血管區，或者血管斷裂或消失。 實施例四合歡皮提取物的片劑制備工藝。 按本發明實施例一中的制備方法制得的合歡皮水提取物正丁醇萃取部位白色粉末，加水溶解制成相對密度為1.0(60°C )的清膏，清膏加入糊精后混勻，噴霧制粒，過14目篩整粒，加入0.2%硬脂酸鎂，混勻，壓制成片，包薄膜衣，消毒后包裝即可。用法和用量每日3次，每次4片，每片0. 25克，飯后30分服用，3個月為一療程。
權利要求
一種用于抑制血管生成的合歡皮提取物。
2. 權利要求1所述合歡皮提取物的制備方法，其特征是用水來提取合歡皮的干燥樹皮、莖皮、葉、花、種子、豆莢或根，水提取液依次用乙醚、乙酸乙酉旨、正丁醇進行萃取后，分離合并正丁醇萃取相并且濃縮除去正丁醇溶劑、干燥制成合歡皮提取物粉末。
3. 權利要求1、2所述合歡皮提取物在制備抑制血管生成藥物中的應用，其特征是該抑制血管生成藥物含有有效劑量的合歡皮提取物及常規藥用載體和/或賦形劑。
4. 根據權利要求3所述的應用，其特征在于所述合歡皮提取物被制成片劑、粉劑、顆粒劑、膠囊劑、口服液、注射液、膏劑、霜劑或乳劑。
5. 根據權利要求3所述的應用，其特征在于所述合歡皮提取物是用于預防和/或治療至少一種選自下述之一的疾病癌癥和/或癌癥轉移，血管瘤，血管纖維瘤，新生血管性青光眼，糖尿病視網膜病變，早熟視網膜病及視網膜靜脈閉塞，視網膜變性，晶體后纖維組織增生，顆粒性結膜炎，血管生成引起的角膜疾病，更年期黃斑和黃斑變性，牛皮癬，老年盤狀斑變性及風濕性關節炎，銀屑病，毛細管擴張，膿性肉芽腫，傷口愈合中抑制斑痕形成，動脈粥樣硬化，脂溢性皮炎和痤瘡。
6. 根據權利要求3所述的應用，其特征是該提取物有抗腫瘤血管生成及其他與血管生成有關疾病治療、預防的用途，還有用于腫瘤化療和/或輔助化療的用途。
7. 根據權利要求3所述的應用，其特征是該提取物在制備抑制血管生成的保健食品中的應用，或者在制備抑制血管生成的化妝品中的應用。
全文摘要
本發明涉及一種用于抑制血管生成的合歡皮提取物及其制備方法和實際應用，其特征在于用水來提取合歡皮的干燥樹皮、莖皮、葉、花、種子、豆莢或根，然后水提取液依次用乙醚、乙酸乙酯、正丁醇進行萃取，分離合并正丁醇萃取相并且濃縮除去正丁醇溶劑、冷凍干燥制成合歡皮提取物粉末。此種合歡皮提取物有抗腫瘤血管生成及其它與血管生成有關疾病治療、預防的用途；其可以在抑制血管生成的藥物中使用；或者在制備抑制血管生成的保健食品中的應用；或者在制備抑制血管生成的化妝品中的應用。
文檔編號A61P27/02GK101766675SQ20081024277
公開日2010年7月7日 申請日期2008年12月30日 優先權日2008年12月30日
發明者馮磊, 周泉生, 張蓮芬, 花慧, 邱麗穎, 金堅, 陳蘊 申請人:江南大學;周泉生