虎杖苷分散片及其制備方法和應用的制作方法

專利名稱：虎杖苷分散片及其制備方法和應用的制作方法
技術領域：
本發明屬于藥品制備工藝和臨床應用領域。涉及一種治療或預防高原缺氧所致的高原肺 水腫和急性高原反應的藥物組合，特別是涉及一種以中藥提取物虎杖苷為主要原料制成的藥 物組合。
背景技術：
高原性肺水腫(HAPE)是人們由低海拔快速進入高海拔地區(一般3000米以上)后2 5 天內發生的非心源性肺水腫，是一種重型急性高原病，起病急、進展快、危害大，若不及時救治， 可能危及生命。常見臨床表現為患者由低海拔到高海拔、高海拔到更高海拔后短時間內出現 呼吸困難、發紺、咳嗽、咯白色、黃色稀痰或粉紅色泡沫痰，呼吸急促，心率加快，雙側或一 側肺出現濕性羅音，患者多伴有嚴重肺動脈壓升高。發病個體差異很明顯，具有上呼吸道疾患 或感染者更易發生,有縮窄性肺循環如單側肺動脈缺失者更加危險，是高原病致死的主要原 因。雖然在中老年人病情可能更為嚴重，但HAPE影響的多是健康年輕人。
現代研究表明缺氧可直接刺激肺動脈平滑肌細胞引起肺血管收縮，導致肺動脈高壓。缺 氧性肺血管收縮是缺氧對肺動脈平滑肌細胞的直接作用，無須神經體液因素參與。傳統認為缺 氧性肺動脈高壓可改善肺內通氣血流比例，改善血氣交換，因而具有代償意義。近年研究發現， 缺氧性肺動脈高壓可能是導致高原肺水腫最主要的發病原因。由于缺氧性肺血管收縮為非均 勻性血管收縮,造成肺內壓力與血流分布不均勻，血流過多區域的血管壁承受不了張力使得管 壁完整性破壞，進而發生肺水腫。下列因素認為與髙原肺水腫的發生直接相關(l)肺動脈高 壓致肺毛細血管滲漏；(2)缺氧引起一氧化氮(N0)、 一氧化氮合酶(NOS)下調和肺動脈壁結構 變化(3)炎癥的發生。針對上述發病因素，對HAPE的治療主要為吸氧、降低肺動脈壓、抗 炎、利尿、對癥及一氧化氮吸入等。緊急情況下，吸氧是首選的治療手段，所有的髙山病都 可以用高壓氧暫時緩解癥狀；治療藥物以吸入低濃度NO、注射或口服支氣管擴張劑、鈣拮抗 劑硝苯地平、利尿劑乙酰唑胺和呋塞米為主。NO氣體吸入雖然療效較好,但使用不方便,須用 特殊儀器。當吸入過量時毒性也較大，因此限制其應用。中藥單方和復方制劑可以預防或輕 癥，單方包括紅景天、枸杞、人參、刺五加等。復方制劑有復方黨參、黃苓復方、多參高山 片、益心康膠囊、復方天棘膠囊、高原康膠囊和三康膠囊等。多用于HAPE的預防或輕癥的治 療，可預防其發生或明顯降低其發生的癥狀。
在肺動脈高壓的臨床救治中，積極降低缺氧性肺動脈高壓是治療成功的關鍵。廣譜的降 壓藥如酚妥拉明、硝普鈉，硝苯吡啶等，雖然可以降低肺動脈壓，但引起廣泛的體循環壓力
改變，因而效果不理想。天然藥物中紅景天、銀杏葉制劑等在抗缺氧方面有一定效果，但缺 乏對一種或幾種藥物聯合應用針對降低肺動脈高壓的對比研究資料，目前對高原肺水腫尚無 有效的防治藥物。
虎杖苷(Polydatin， PD)是從傳統中藥虎杖(Polygonum Cuspidatum Sieb. et Zucc)根 莖中提取的天然單體，也稱為白藜蘆醇苷。在植物中分布廣，含量高，具有較強的生物活性。 現代藥理學研究表明，虎杖苷對心肌細胞、血管平滑肌細胞、抗血小板聚集、改善微循環等 有顯著作用，此外還能減輕多種因素造成的組織器官損傷，具有保護肝細胞，降血脂及抗脂 質過氧化等作用。近十年來，國內外學者對虎杖苷的化學結構、性質、提取分離、藥理作用 以及含量測定等做了許多研究，但多集中于心血管系統和燒燙傷外用應用。而在特殊環境下 如高原、寒冷、勞累等，對生物體的作用如何還知之甚少。我們從虎杖中提取出純度大于98% 的虎杖苷單體，并進行了結構鑒定和制備工藝的研究，經藥效學實驗發現虎杖苷對低氧大鼠 肺動脈高壓模型具有預防肺動脈壓升高，提高血氧飽和度水平，改善右心功能及降低血液粘 滯度的作用，特別是其降低缺氧所致肺動脈高壓的同時，血氧分壓和體循環動脈壓不受影響 的優點，克服了血管擴張劑的降低體循環血壓等副作用，為降低肺動脈高壓，防治HPAE提供 了很好的選擇機會，并為進一步進行藥學和臨床評價奠定了良好的基礎，有望成為防治高原 肺水腫的理想藥物。此外，虎杖苷具有的抗缺氧和改善微循環，松弛血管、支氣管平滑肌，擴 張小動脈，對痙攣性血管擴張作用更強的特點，對初進高原人群更快地習服環境，降低急性高 原病的發生有一定的作用。由于高壓氧、吸入NO等防治高原急性反應需要特殊設備，而藥物 防治高原反應攜帶方便，方法簡單，適合在進入高原人群中推廣應用。故虎杖苷還在幫助適應
高原環境減輕急性高原病的癥狀方面具有較好的用途。
隨著對虎杖苷研究的不斷深入，人們對虎杖苷在大鼠體內藥代動力學進行了探索，結果 表明，在同等劑量下，靜脈注射虎杖苷吸收快，血藥濃度較高，而口服虎杖苷吸收較慢，且 血藥濃度明顯低于靜脈注射，由此提示，虎杖苷普通制劑如片劑、膠囊等，存在著生物利用 度低，起效慢等問題。眾所周之，在高原特殊環境條件下發生的高原肺水腫和急性高原反應， 除急救時采取靜脈注射外，平時更多是預防給藥和維持治療，應以口服制劑為方便。因此， 研究吸收快，生物利用度高的虎杖苷制劑具有重要意義。由于虎杖苷目前僅有注射液在進行 二期臨床研究，并無新藥上市。因此，我們從新藥制劑研究角度開發具有效果更好的口服制 劑。

發明內容
本發明的目的在于提供一種具有防治高原肺水腫和急性高原反應的中藥提取物虎杖苷分 散片，它吸收好，服用方便，穩定性好，崩解時間短，符合高原地區用藥的特點。本發明也
提供了所述虎杖苷分散片的制備方法及其應用。 技術方案
本發明虎杖苷分散片的原料的重量組成為虎杖苷50~100，微晶纖維50~250，羧甲基淀 粉鈉50~100，交聯聚乙烯吡咯烷酮15 50，硬酯酸鎂1~8， 5%聚維酮1(3。 50 %乙醇溶液適量。
本發明的制備方法包括下述順序的步驟
(1) 將原輔料分別過100目篩，按處方量稱取虎杖苷、微晶纖維、羧甲基淀粉鈉、交聯
聚乙烯吡咯烷酮，混合均勻；
(2) 用5%聚維酮1(3。50%乙醇溶液作潤濕劑制軟材，18~24目篩制粒，濕顆粒于60 80。C 條件下進行干燥；
(3) 用18-24目篩整粒，加入硬脂酸鎂混勻，壓片，即得本發明的虎杖苷分散片。每片 含虎杖苷50mg或100mg。
本發明的虎杖苷分散片作為預防或治療缺氧所致高原肺水腫和急性高原反應的藥物來應用。
有益效果
(1) 本發明的虎杖苷分散片由主藥和特定的速崩劑及優良的賦形劑混合制粒壓片而成， 長期貯存質量穩定。
(2) 本發明建立了虎杖苷分散片中主藥虎杖苷含量測定的HPLC方法，并對含量進行了 限度規定，靈敏度高，專屬性強。
(3) 吸收好，崩解和溶出是口服制劑吸收的限速過程，虎杖苷分散片由藥物與特定的速 崩劑及優良的賦形劑組成，與普通片劑、膠囊劑相比，口服后迅速崩解成均勻的混合物溶液， 所以吸收較快、充分，提高了虎杖苷的生物利用度。由于其在3分鐘內能迅速崩解分散均勻， 因此具有普通片劑無法比擬的崩解和溶出性能，服用后吸收快，生物利用度高。
(4) 服用方便，虎杖苷分散片可加水分散后口服，也可將其含于口中用水吞服，服用更 為方便。
具體實施例方式
以下發明通過具體試驗例進一步闡述本發明，不以任何形式構成對本發明的限制。 試驗例1虎杖苷分散片制備、檢査和含量測定
按制備1000片投料計算，原料的重量組成為虎杖苷50g，微晶纖維150g，羧甲基淀 粉鈉100g,交聯聚乙烯吡咯烷酮30g, 5%聚維酮1(3。 50 %乙醇溶液適量，硬酯酸鎂3g,共制 成1000片。片劑規格每片含虎杖苷50mg，理論片重約0.33g。將原輔料分別過100目篩， 按處方量稱取虎杖苷、微晶纖維、羧甲基淀粉鈉、交聯聚乙烯吡咯烷酮，混合均勻；用5%聚
維酮K3。 50%乙醇溶液適量作潤濕劑制軟材，24目篩制粒，濕顆粒于70'C干燥至含水量5 7%， 過16目篩整粒。加入硬脂酸鎂,混合均勻。測定顆粒中主藥的含量，確定片重，壓片，即得本 發明的虎杖苷分散片，每片含虎杖苷50mg，理論片重約330mg。 性狀本品為白色至類白色片，氣微，味苦。
鑒另ij:取本品研細，稱取1.0g，加乙酸乙酯100ml，置索氏提取器中回流至提取液無色， 回收醋酸乙酯液，殘渣加甲醇使溶解并定容于5mL量瓶，搖勻，作為供試品溶液。吸取供試品溶 液3 u 1，虎杖苷對照品溶液2 u L,分別點于同一含0. 5%CMC-Na溶液的硅膠G薄層板上，以三 氯甲烷-丙酮-甲酸-水(3. 5 : 5 : 0. 3 : 0. l)為展開劑，展開，取出，晾干后在105'C烘10min,取 出，放置至室溫，紫外燈下(365nm)檢視，供試品在與對照品相應的色譜位置，顯相同顏色 的斑點。
檢査①分散均勻性取虎杖苷分散片2片，置100ml水中振搖，在20士1。C水中，應 在3分鐘內完全崩解并能通過2號篩(中國藥典2005版二部附錄)。②溶出度考察分別取 虎杖苷分散片各6片，照溶出度測定法(中國藥典2005年版二部附錄XC第1法)，以0. lmol/L 鹽酸溶液900ml為溶出介質，轉速為100r/min,依法操作，在10， 20, 30， 45min時，取溶液 10ml (并及時補加同溫介質10ml)經0. 45 U m微孔濾膜濾過，作為供試品溶液;另取虎杖苷對照 品10mg，精密稱定，置100ml量瓶中，加溶出介質使溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取lml，置 100ml量瓶中，加溶出介質稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。分別取供試品溶液和照品溶 液，，以含量測定項下色譜條件進樣，測定峰面積，計算每片的溶出量。限度達到標示量的 88%，符合規定。③其他應符合片劑項下的有關的各項規定。
含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2005年版二部附錄VD)測定。
色譜條件與系統適應性用十八烷基硅垸鍵合硅膠為填充劑；乙腈-水(20:80)為流動相；
檢測波長為306nrn;理論板數以虎杖苷峰計算應不低于4000，在此色譜條件下，虎杖苷色譜 峰與其它組分色譜峰得以較好分離，虎杖苷峰與雜質峰的分離度應符合要求。
對照品溶液的制備精密稱取在6(TC減壓干燥2小時虎杖苷對照品適量，置棕色量瓶中， 用稀乙醇溶解制成每lml含0.05mg的溶液，即得。
供試品制備方法分別精密取虎杖苷分散片樣品，研成細粉，取約lg，精密稱定，置10ml 量瓶中，力卩50%乙醇約7ml，超聲處理(功率250W,頻率59kHz) 10min，再加50%乙醇稀釋 至刻度，用0.45ixm微孔膜濾過，作為供試品溶液。
樣品測定按上述供試液的制備項下方法分別制備樣品，按色譜條件項下條件測定，精 密吸取供試品溶液20 ii 1對照品溶液10 u 1注入HPLC儀，按外標法計算含量。
本品按標示量計算，虎杖苷含量應在90%~110%之間。
試驗例2 虎杖苷的急性毒性試驗
按最大耐受量(MTD)測定法，將虎杖苷配成12.0%水混懸液，給30只小鼠一日內灌胃 給藥兩次(總容量為2X40ml kg—0，總劑量為9. 6g kg—'(相當于原生藥1920g);給30只 大鼠灌胃20.0%虎杖苷水混懸液， 一日內灌胃給藥兩次(總容量為2X20ml *kg—')，總劑量為 8g，kg—'(相當于原生藥1000g)，均觀察兩周無動物死亡。實驗結果表明該藥的毒性很低，給 小鼠和大鼠灌胃均無法測其LD5。。結論虎杖苷對小鼠和大鼠的MTD分別為9.6g'kg—l和 8g kg—1;該劑量是臨床成人擬推薦用藥劑量(4. 08mg kg—1)的2352. 9和1960. 8倍。
試驗例3虎杖苷的大鼠長期毒性試驗
實驗采用SD大鼠160只，雌雄各半；區分性別、隨機分為對照組及虎杖苷160mg/kg、 320mg/kg、 640mg/kg劑量組(分別為推薦臨床用量的39.2、 78.4、 156. 8倍)，每周灌胃給藥 6d，連續給藥26周。在用藥13周、26周和停藥4周后分別取樣進行血液學、血液生化學及 病理組織學檢查。結果虎杖苷小、中、大劑量組三次檢測的結果表明大鼠一般體征(包 括大、小便，毛色、行為和飲食等情況)沒有異常變化；體重，HB、 RBC、 PLT、 WBC總數及 分類等血液指標，血清ALT、 AST、 BUN、 CRE、 GLU等血液生化指標，臟器重量和系數等未見 異常變化，且與對照組比較均無顯著性差異(P>0.05);組織學檢査肉眼觀察各給藥組動 物的臟器與對照組比較未發現明顯異常。鏡下組織學檢查，大劑量組與對照組動物各臟器均 未見明顯病理性改變。結論虎杖苷連續灌胃給予大鼠26周，未發現藥物對大鼠引起全身或 局部的毒性反應。
試驗例4虎杖苷對大鼠低壓低氧性肺動脈髙壓的預防作用及初步機制探討
實驗動物健康雄性SD大鼠60只，體重(250±20) g，由第四軍醫大學實驗動物中心 提供，動物合格證號Scxk (軍)字第2002-005號。
試劑與儀器虎杖苷(第四軍醫大學藥物研究所自制，生產批號XW070925-A， HPLC檢 測純度大于98%);西地那非(陜西世紀榮泰生物科技發展有限公司)；低壓低氧艙(第四軍 醫大學生理實驗室)；圖象采集處理系統(德國Axioskop-40蔡司系統，MIC00152); RM-6280 四道生理記錄儀(美國)；RT-9600生化分析儀(深圳雷杜生命科學股份有限公司)；TDZ5-WS 多管架自動平衡離心機(湖南賽特湘儀離心機儀器有限公司)；NO、 NOS試劑盒(購自南京建 成生物工程研究所)。
實驗分組 大鼠隨機分為6組對照組、低壓低氧組(HPH組)；虎杖苷低劑量組 (5mg'kg—0、中劑量組(10 mg*kg—')、高劑量組(20 mg kg—');陽性對照組(西地那非 1.7 mg kg—"，每組10只。
預防和低壓低氧處理陽性對照組大鼠ig給藥，預防各組均ip虎杖苷，正常組和低壓
低氧組ip等體積生理鹽水。除正常組大鼠置于常壓環境中飼養外，其余各組均于給藥后置于 全自動調節低壓低氧艙內，模擬海拔5000米高度(大氣壓50kPa)，每天8小時，持續21天， 低壓低氧動物艙與負壓緩沖艙相連，并有小孔與外界相通，可使外界空氣進入氧艙，以負壓 監測儀監測艙內負壓值，通過負壓反饋電路調節，使其維持在目標值。置足量鈉石灰和無水 氯化鈣吸收艙內產生的二氧化碳和水蒸氣。
肺動脈和頸動脈平均壓的測定各組大鼠均于21天造模后3%戊巴比妥鈉麻醉，仰臥固 定，做頸正中切口，自右頸外靜脈插管，經上腔靜脈、右心房、右心室至肺動脈，通過壓力 傳感器連接生理記錄儀，測平均肺動脈壓(mean pulmonary arterial pressure, mPAP);左 頸總動脈插管測平均頸動脈壓(mean carotid arterial pressure, mCAP)。
右心室肥厚指數的測定測壓完成后處死大鼠，取心臟，去心房，游離右心室(RV)和 左心室+室間隔(LV+S)，洗去血液，用濾紙吸去表面水分后分別稱重，計算反映右心肥厚程 度的RV/ (LV+S)比值。
肺血管組織學檢査取大鼠右肺用10%中性福爾馬林液固定24小時，沿肺門橫斷取材， 石蠟包埋切片，HE染色；彈力纖維VG染色。顯微鏡下觀察結合圖像分析軟件測定低氧性肺 血管重塑情況，測量與呼吸性支氣管和肺泡伴行的肺細小動脈中膜平滑肌細胞核密度(SMC， 每1000um2中細胞核數)、中膜厚度(media thickness of pulmonary arterioles, PAMT) 以及肺細小動脈管壁厚度占血管外徑的百分比(WT%)和管壁面積與血管總面積的百分比 (WA%)。
血清和肺組織勻漿中NO含量、NOS和cNOS活性的測定從大鼠左頸總動脈采血4 mL， 3000r/min 4'C離心10分鐘，吸取上清4。C冷藏待測。取各組大鼠相同部位肺組織lg,用冷 生理鹽水制成10%肺勻漿，2500r/min4。C離心10分鐘，取上清4。C冷藏待測。具體操作嚴格 按照試劑盒說明書進行。
統計學處理實驗數據以均數士標準差(；士S)表示，多組間樣本均數比較采用方差分析 進行統計學處理，全部數據經SPSS10.0統計軟件進行統計分析。
結果 1、檢測虎杖苷干預21天大鼠mPAP、 RV/ (LV+S)、 PAMT、 SMC、 WTW和WA^各指 標對照組依次為18.35±2.39 mmHg、 21.93±1.66%、 13.49±2.77Mra、 5.91±1.23、 31.04±3.43%和42.83±4. 36%;低壓低氧組為32. 05±3. 19 mmHg 、 36. 94±2.67%、 27.91士4.43Mm、 9. 32±1.67、 49. 41±4. 59%和71. 72±4. 64%，顯著高于對照組(P<0.01); 虎杖苷中、高劑量組和陽性對照組各指標明顯低于低壓低氧組(P〈0.05或P〈0.01)。 2、血 清中NO含量、NOS和cNOS活性對照組依次為66. 34±5. 41卿1 L—\ 23. 18±1. 44 U mL—1 和14. 51 ±1.46 U'mL—、低壓低氧組為41. 07±3. 7lMmol L—、 12. 59±1.50 U mL—1和
7. 19± 1. 85 U mL—、顯著低于對照組(P<0. 01);肺組織勻漿中NO含量、N0S和cN0S活性 對照組依次為O. 397±0.060 Mmol (g prot) —'、0. 752±0. 044 U (mg prot)—'和0. 511±0. 064 U (mg prot)—、低壓低氧組為0. 316±0. 046陶o1 (g prot) -'、 0. 605±0. 069 U (mg prot) —'和0.387士0.030 U (mg prot)—、顯著低于對照組(P<0.01);而虎杖苷中、高劑量組和 陽性對照組血清和肺組織勻漿中各指標均高于低壓低氧組(P<0. 05或P<0. 01)。
結論 虎杖苷給藥21天可有效預防大鼠低壓低氧導致的肺動脈高壓和肺小動脈的 結構重建，其作用機制可能與上調血清、肺組織中NO含量和增強NOS活性有關。
權利要求
1.一種虎杖苷分散片，其原料的重量組成為虎杖苷50～100，微晶纖維50～250，羧甲基淀粉鈉50～100，交聯聚乙烯吡咯烷酮15～50，硬酯酸鎂1～8，5％聚維酮K30 50％乙醇溶液適量。
2. —種權利要求1所述的虎杖苷分散片的制備方法，其特征在于采用以 下順序的步驟(1) 將原輔料分別過100目篩，按處方量稱取虎杖苷、微晶纖維、羧甲 基淀粉鈉、交聯聚乙烯吡咯垸酮，混合均勻；(2) 用5%聚維酮&3()50%乙醇溶液作潤濕劑制軟材，18 24目篩制粒， 濕顆粒于60 80'C條件下進行干燥； '(3) 用18~24目篩整粒，加入硬脂酸鎂混勻，壓片，即得本發明的虎杖 苷分散片。
3. 根據權利要求1~2所述以虎杖苷作為主藥用于治療或預防缺氧所致的 高原肺水腫和急性高原反應，其特征在于虎杖苷原料為中藥虎杖提取物， 純度大于98%;它具有顯著降低肺動脈高壓，改善肺通氣功能、改善微循環 和抑制肺血管組織的重構。
全文摘要
本發明提供了一種虎杖苷分散片及其制備方法和應用。涉及一種治療或預防高原缺氧所致的高原肺水腫和急性高原反應的分散片劑藥物組合，屬于藥品制備工藝和臨床應用領域。其原料的重量組成為虎杖苷50～100，微晶纖維50～250，羧甲基淀粉鈉50～100，交聯聚乙烯吡咯烷酮15～50，硬酯酸鎂1～8，5％聚維酮K₃₀ 50％乙醇溶液適量。制備方法是將原輔料分別過100目篩，按處方量稱取虎杖苷、微晶纖維、羧甲基淀粉鈉和交聯聚乙烯吡咯烷酮混合均勻，用5％聚維酮K₃₀ 50％乙醇溶液適量作濕潤劑制軟材，18～24目篩制粒，濕顆粒在60～80℃條件下干燥，用18～24目篩整粒，加入硬脂酸鎂混勻，壓片，即得所需分散片。虎杖苷分散片具有主藥含量穩定，穩定性好，崩解時間短，生物利用度高，服用方便等獨特性能。對治療或預防缺氧所致高原肺水腫和急性高原反應有良好的效果。
文檔編號A61K31/7028GK101361721SQ20081023160
公開日2009年2月11日 申請日期2008年10月6日 優先權日2008年10月6日
發明者孫紀元, 陽 李, 倩 楊, 畢琳琳, 王劍波, 王四旺, 珊 繆, 青 苗 申請人:中國人民解放軍第四軍醫大學