一種頭孢噻呋長效注射液及其制備方法

專利名稱：：一種頭孢噻呋長效注射液及其制備方法
技術領域：
：本發明屬于動物藥品領域，具體涉及的是一種獸醫專用的頭孢類抗菌素一頭孢噻呋的改進制劑及其制備方法。技術背景頭孢噻呋(Ceftiofur，CEF)是獸醫專用的第三代頭孢類抗菌素，是第一個動物專用的頭孢類抗生素。頭孢噻呋的抗菌譜廣，抗菌活性強，對革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌及一些厭氧菌均有極強的抗菌活性；且具有穩定的e-內酰胺環，對于各種能產生e-內酰胺酶的細菌亦有良好的殺滅效果，不易產生耐藥菌株和交叉耐藥性，臨床上主要用于多種動物敏感菌引起的各種感染。因此，應用頭孢噻呋治療畜禽疾病意義重大。隨著各國畜牧業集約化、規模化、機械化程度的提高，臨床用藥也逐漸變成了一項較為繁鎖的工作，尤其是一些病程較長的疾病，更為臨床治療帶來了不便。因此，研制長效制劑已成為臨床治療工作的迫切需求。近年來，呼吸道疾病的發生率大幅攀升，中大型規模畜牧場正面臨嚴重的呼吸道疾病的困擾。目前畜禽呼吸道疾病的特點是發病率高、病程長、治愈難度大，現有的常規治療藥物一般需要連續給藥5-7天才能治愈，且治愈率往往不高，導致呼吸道疾病成為目前嚴重影響畜禽養殖經濟效益的疾病和阻礙畜牧業發展的重要因素。因此，如能開發一種對畜禽呼吸道疾病具有長效作用的新型獸藥制劑，不僅能夠降低用藥次數，減少頻繁給藥的弊端，提高動物的順應性，節省人力和物力，而且還能較長時間維持良好的治療效果。對藥物長效作用的研究，03146062.X已給出一種解決方案，是由具有速效作用的水溶性好的頭孢菌素鈉鹽或鉀鹽與具有緩釋作用的微水溶性的頭孢菌素游離酸或酯類頭孢菌素組成，通過不同藥物組分的溶解度不同調整藥物的釋放時間從而實現某一組分的緩釋。但是，由于制備工藝方面的不足，03146062.X方案仍存在藥物作用時間短(3天)、安全性差和臨床操作不便(實例所制備的注射劑不能用于肌內注射)等缺點。因此，通過制劑工藝改進，制備更安全有效且方便給藥的長效頭孢噻呋注射液，對當前極為流行的畜禽呼吸道疾病的治療更具實際意義。
發明內容本發明的目的是提供一種頭孢噻呋長效注射液的制備方法以及一種安全高效且用藥方便的頭孢噻呋長效注射液。為實現上述目的，本發明采取以下設計方案一種頭孢噻呋長效注射液的制備方法，由注射用油酯和助懸劑極細粉制成凝膠高分子化合物溶劑體系，再將含有鹽酸頭孢噻呋的無菌微粉加入，持續攪拌得到頭孢噻呋長效混懸注射液制劑。具體包括以下步驟1)將鹽酸頭孢噻呋無菌粉和抗氧劑分別經超微粉碎得到鹽酸頭孢噻呋無菌微粉和抗氧劑無菌微粉；2)制備助懸劑極細粉；3)將注射用油酯高溫滅菌后，置于室溫下備用；4)向步驟3)所得滅菌注射用油酯中加入步驟2)所得助懸劑極細粉，加熱并攪拌，制成透明的凝膠高分子化合物溶劑體系，然后在無菌室中置于室溫下備用；5)將步驟4)獲得的凝膠高分子化合物溶劑體系倒入無菌室膠體磨，邊攪拌邊加入步驟l)獲得的鹽酸頭孢噻呋無菌微粉、抗氧劑無菌微粉和局部止痛劑，待其充分混合后繼續攪拌(時間為60-120分鐘，優選為90分鐘)，得到頭孢噻呋長效混懸注射液。以上制備方法中，所述無菌微粉粒徑小于25微米；所述助懸劑極細粉過120目以上的藥篩。其中所述注射用油酯為注射用大豆油、棉籽油、蓖麻油中的一種和/或單硬脂酸甘油酯、二乙酸甘油酯、三乙酸甘油酯中的一種，優選注射用大豆油或三乙酸甘油酯或兩者的混合物；注射用油酯高溫滅菌溫度為150-160°C，時間為2-3小時。其中凝膠高分子化合物溶劑體系占制劑總體積的6090%，無菌微粉占制劑總體積的1040%。所述助懸劑選自硬酯酸鋁、聚乙烯吡咯烷酮和氫化蓖麻油中的一種或兩種的混合物；所述凝膠高分子化合物溶劑體系中助懸劑極細粉的重量/體積百分比濃度為l-3%，優選為1-2%。所述抗氧劑選自沒食子酸丙酯、a-生育酚和硫脲中的一種或兩種的混合物；所述局部止痛劑選自苯甲醇、三氯叔丁醇、鹽酸利多卡因及其鹽、丁卡因及其鹽、普魯卡因及其鹽中的一種。用以上方法制備得到的頭孢噻呋長效注射液也是本發明的
發明內容，其為混懸注射液。混懸注射液中鹽酸頭孢噻呋的重量/體積百分比濃度為5-30%，優選為5-10%。混懸注射液中包含抗氧劑和局部止痛劑等輔助成分中的一種或幾種。抗氧劑在制劑中重量/體積百分比濃度為0.01-5%，優選為0.5-3%;局部止痛劑在制劑中的重量/體積百分比濃度為0-3%，優選為0.5-1%。本發明頭孢噻呋長效注射液一次給藥(肌內注射)5mg/kg劑量可維持有效血藥濃度5.5天，臨床用量一般為5-7mg/kg體重，一次性肌內注射即可治愈各種細菌性呼吸道疾病，嚴重病例可在5-7天再注射一次。本發明得到的頭孢噻呋混懸注射液的通針性良好，藥物粒徑分布均勻，粒徑大于15Mm的顆粒數小于O.1%(標準為小于10%)，粒徑分布在7-15ixm范圍內的顆粒占總數的75%以上，可滿足混懸注射液的要求。藥物動力學試驗結果(具體數據見試驗2)顯示，靜脈注射頭孢噻呋標準品后豬體內藥物動力學過程表現為一室開放模型，豬肌內注射本發明長效鹽酸頭孢噻呋混懸注射液和輝瑞公司生產的鹽酸頭孢噻呋混懸注射液(EXCENEL)后的藥物動力學過程均表現為有吸收的二室開放模型，與輝瑞公司的鹽酸頭孢噻呋混懸注射液EXCENEL的藥物動力學參數相比，本發明長效鹽酸頭孢噻呋混懸注射液的血藥峰濃度值比輝瑞公司的EXCENE1^顯著下降，而且消除半衰期明顯延長，符合長效制劑的藥物動力學規律。因此，本發明的鹽酸頭孢噻呋長效混懸注射液具有明顯的長效作用，用于治療動物呼吸道疾病具有明顯優勢，以0.2Pg/mL為最低有效濃度計算，一次給藥5mg/kg劑量可在5.5天內維持有效血藥濃度。該注射液是利用延緩釋放和延緩吸收的方法，制備過程中采用注射用大豆油等植物油或油酯與附加劑形成凝膠，以凝膠高分子化合物形式形成凝膠骨架物，制成藥物的油溶液，使微細的鹽酸頭孢噻呋無菌微粉分散于凝膠高分子化合物溶劑體系中，從而延緩藥物的擴散和溶出，以延長藥物有效作用時間(具有良好的緩釋作用)，提高對各種敏感菌所致疾病的治療效果，是治療當前呼吸道感染性疾病的良好藥物。本發明得到的混懸注射液符合要求，經肌內注射后具有明顯的長效作用，既提高了藥物的治療效果，克服了呼吸道疾病病程長、治療需多次給藥的缺點，又減少了因頻繁給藥造成的養殖場人力資源的浪費以及因多次給藥引起的動物應激反應(降低了用藥次數，減少頻繁給藥的弊端，提高動物的順應性，節省人力和物力，而且還能較長時間維持良好的治療效果)，是一種對畜禽呼吸道疾病具有長效作用的新型獸藥制劑，具有極高的推廣應用價值。下面結合具體實施例對本發明做進一步詳細說明。圖1為豬注射頭孢噻呋后(5mg/kg)血漿藥物濃度-時間曲線具體實施方式下述實施例中所用方法如無特別說明均為常規方法。所述百分比濃度如無特別說明均為質量/體積(w/v)百分比濃度或體積/體積(v/v)百分比濃度。本發明目標是獲得一種頭孢噻呋長效注射液。該注射液的藥用成分為鹽酸頭孢噻呋，藥物的溶劑體系主要為植物油或油酯，與附加劑形成凝膠，以凝膠高分子化合物形式形成凝膠骨架物，使微細的鹽酸頭孢噻呋無菌微粉分散于凝膠高分子化合物溶劑體系中制成具有長效作用的混懸注射液。其中凝膠高分子化合物溶劑體系占制劑總體積的6090%，無菌微粉占制劑總體積的1040%。在制備過程中藥物鹽酸頭孢噻呋中可加入抗氧劑，分別經超微粉碎得到粒徑小于25微米的無菌微粉；抗氧劑選自沒食子酸丙酯、a-生育酚和硫脲中的一種或兩種的混合物，抗氧劑在制劑中重量/體積百分比濃度為0.01-5%，優選為0.5-3%。溶劑體系由注射用油酯和助懸劑極細粉制成透明的凝膠高分子化合物溶劑體系。其中注射用油酯可以為注射用大豆油、棉籽油、蓖麻油中的一種和/或單硬脂酸甘油酯、二乙酸甘油酯、三乙酸甘油酯中的一種，優選注射用大豆油或三乙酸甘油酯或兩者的混合物；注射用油酯使用前需高溫滅菌，溫度為150-160°C，時間為2-3小時；助懸劑選自硬酯酸鋁極細粉、聚乙烯吡咯烷酮和氫化蓖麻油中的一種或兩種的混合物；溶劑體系中助懸劑極細粉的重量/體積百分比濃度為1-3%，優選為1-2%。混懸注射液中可加入局部止痛劑。局部止痛劑選自苯甲醇、三氯叔丁醇、鹽酸利多卡因及其鹽、丁卡因及其鹽、普魯卡因及其鹽中的一種，局部止痛劑在制劑中的重量/體積百分比濃度為0-3%,優選為0.5-1%。本發明中，凝膠高分子化合物溶劑體系、鹽酸頭孢噻呋無菌微粉、抗氧劑無菌微粉和局部止痛劑還需在膠體磨中充分攪拌混合才能得到頭孢噻呋長效混懸注射液。下面將通過具體的實施例對本發明作詳細的介紹，試驗中所用試劑和器械全部市購，藥物粒徑形態觀察使用光學顯微鏡，粒徑及分布測定使用顯微鏡測微尺，注射液的藥物含量采用高效液相色譜-紫外檢測法，藥物含量在5-lOOPg/mL范圍內與色譜峰面積呈良好線性相關，其線性方程為Y=179.74X—3331.7，R=0.9999。實施例1、頭孢噻呋長效注射液的制備用本發明的方法制備頭孢噻呋長效注射液，具體方法包括以下步驟1)取鹽酸頭孢噻呋無菌粉、抗氧劑(a-生育酚)，在無菌操作間中用超微粉碎機經超微粉碎得到粒徑小于25微米的鹽酸頭孢噻呋無菌微粉、a-生育酚無菌微粉；2)取助懸劑(硬脂酸鋁)，過120目藥篩，得到硬脂酸鋁極細粉；3)將注射用大豆油在150-160攝氏度下高溫滅菌2小時(2-3小時均可)后，置于室溫下備用；4)向步驟3)經滅菌的注射用大豆油900mL中加入步驟2)獲得的硬脂酸鋁極細粉10g，在300-500攝氏度下加熱并攪拌，制成透明的凝膠高分子化合物溶劑體系，然后在無菌室中置于室溫下備用；5)將歩驟4)獲得的凝膠高分子化合物溶劑體系倒入無菌室膠體磨，邊攪拌邊加入步驟1)獲得的鹽酸頭孢噻呋無菌微粉50g(已折合成純藥)、a-生育酚無菌微粉30g和局部止痛劑一苯甲醇5-10g，待其充分混合后繼續攪拌90分鐘(60-120分鐘均可)，再經分裝、充氮、密封等常規處理后，即得本例頭孢噻呋長效混懸注射液。參照《中華人民共和國獸藥典混懸注射液標準》，對該長效頭孢噻呋混懸注射液的外觀性狀，微粒大小，沉降體積比，重新分散性，抽針試驗等項目進行檢測，結果外觀性狀，重新分散試驗，抽針試驗等各項指標均符合要求，沉降體積比(標準為90%以上，即要求1小時沉降體積小于10%)接近100%，制劑的粒度分布均勻，平均粒徑為8.63Mm,粒徑大于15Mm的顆粒數小于0.1%(標準為10%)，粒徑分布在7-15nm范圍內的顆粒占總數的75%以上，藥物含量為投藥量的98.6%。實施例2、頭孢噻呋長效注射液的制備用本發明的方法制備頭孢噻呋長效注射液，具體方法包括以下步驟1)取鹽酸頭孢噻呋無菌粉、抗氧劑(a-生育酚)，在無菌操作間中用超微粉碎機經超微粉碎得到粒徑小于25微米的鹽酸頭孢噻呋無菌微粉、a-生育酚無菌微粉；2)取助懸劑(硬脂酸鋁)，過120目藥篩，得到硬脂酸鋁極細粉；3)將注射用大豆油在150-160攝氏度下高溫滅菌2小時(2-3小時均可)后，置于室溫下備用；4)向步驟3)經滅菌的注射用大豆油900mL中加入步驟2)獲得的硬脂酸鋁極細粉15g，在300-500攝氏度下加熱并攪拌，制成透明的凝膠高分子化合物溶劑體系，然后在無菌室中置于室溫下備用；5)將步驟4)獲得的凝膠高分子化合物溶劑體系倒入無菌室膠體磨，邊攪拌邊加入步驟1)獲得的鹽酸頭孢噻呋無菌微粉50g(己折合成純藥)、a-生育酚無菌微粉30g和局部止痛劑一三氯叔丁醇5-10g，待其充分混合后繼續攪拌90分鐘(60-120分鐘均可)，再經分裝、充氮、密封等常規處理后，即得符合標準的頭孢噻呋長效混懸注射液。對該長效頭孢噻呋混懸注射液的外觀性狀，微粒大小，沉降體積比，重新分散試驗，抽針試驗等項目進行檢測，結果外觀性狀，重新分散試驗，抽針試驗等各項指標均符合要求，沉降體積比接近100%，制劑的粒度分布均勻，平均粒徑為8.47Mra，粒徑大于15幽的顆粒數小于0.1%，粒徑分布在7-15um范圍內的顆粒占總數的75%以上，藥物含量為投藥量的99.3%。實施例3、頭孢噻呋長效注射液的制備用本發明的方法制備頭孢噻呋長效注射液，具體方法包括以下步驟1)取鹽酸頭孢噻呋無菌粉、抗氧劑(a-生育酚)，在無菌操作間中用超微粉碎機經超微粉碎得到粒徑小于25微米的鹽酸頭孢噻呋無菌微粉、a-生育酚無菌微粉；2)取助懸劑(聚乙烯吡咯烷酮)，過120目藥篩得到聚乙烯吡咯烷酮極細粉；3)將注射用三乙酸甘油酯在150-160攝氏度下高溫滅菌2小時(2-3小時均可)后，置于室溫下備用；4)向步驟3)經滅菌的注射用三乙酸甘油酯900mL中加入步驟2)獲得的聚乙烯吡咯烷酮極細粉20g，在300-500攝氏度下加熱并攪拌，制成透明的凝膠高分子化合物溶劑體系，然后在無菌室中置于室溫下備用；5)將步驟4)獲得的凝膠高分子化合物溶劑體系倒入無菌室膠體磨，邊攪拌邊加入步驟1)獲得的鹽酸頭孢噻呋無菌微粉50g(已折合成純藥)、a-生育酚無菌微粉30g和局部止痛劑一鹽酸利多卡因5-10g，待其充分混合后繼續攪拌90分鐘(60-120分鐘均可)，再經分裝、充氮、密封等常規處理后，即得符合標準的頭孢噻呋長效混懸注射液。對該長效頭孢噻呋混懸注射液的外觀性狀，微粒大小，沉降體積比，重新分散試驗，抽針試驗等項目進行檢測，結果外觀性狀，沉降體積比，重新分散試驗，抽針試驗等各項指標均符合要求，制劑的粒度分布均勻，平均粒徑為8.34Mra，粒徑大于15Rii的顆粒數小于O.1%，粒徑分布在7-15um范圍內的顆粒占總數的75X以上，藥物含量為投藥量的99.2%。實施例4、頭孢噻呋長效注射液的制備用本發明的方法制備頭孢噻呋長效注射液，具體方法包括以下步驟1)取鹽酸頭孢噻呋無菌粉、抗氧劑(a-生育酚)，在無菌操作間中用超微粉碎機經超微粉碎得到粒徑小于25微米的鹽酸頭孢噻呋無菌微粉、a-生育酚無菌微粉；2)取助懸劑一硬脂酸鋁和聚乙烯吡咯垸酮過120目藥篩后按重量1:1混合，得到助懸劑極細粉；3)將注射用棉籽油在150-160攝氏度下高溫滅菌2小時(2-3小時均可)后，置于室溫下備用；4)向步驟3)經滅菌的注射用棉籽油900mL中加入步驟2)獲得的硬脂酸鋁和聚乙烯吡咯垸酮極細粉25g，在300-500攝氏度下加熱并攪拌，制成透明的凝膠高分子化合物溶劑體系，然后在無菌室中置于室溫下備用；5)將步驟4)獲得的凝膠高分子化合物溶劑體系倒入無菌室膠體磨，邊攪拌邊加入步驟1)獲得的鹽酸頭孢噻呋無菌微粉50g(已折合成純藥)、ct-生育酚無菌微粉20g和局部止痛劑一丁卡因5-10g，待其充分混合后繼續攪拌90分鐘(60-120分鐘均可)，再經分裝、充氮、密封等常規處理后，即得符合標準的頭孢噻呋長效混懸注射液。對該長效頭孢噻呋混懸注射液的外觀性狀，微粒大小，沉降體積比，重新分散試驗，抽針試驗等項目進行檢測，結果外觀性狀，沉降體積比，重新分散試驗，抽針試驗等各項指標均符合要求，制劑的粒度分布均勻，平均粒徑為8.51陶，粒徑大于15Wn的顆粒數小于0.1%，粒徑分布在7-15iim范圍內的顆粒占總數的75X以上，藥物含量為投藥量的98.7%。實施例5、頭孢噻呋長效注射液的制備用本發明的方法制備頭孢噻呋長效注射液，具體方法包括以下步驟1)取鹽酸頭孢噻呋無菌粉、抗氧劑一a-生育酚和硫脲(按重量l:l混合)，在無菌操作間中用超微粉碎機經超微粉碎得到粒徑小于25微米的鹽酸頭孢噻呋無菌微粉、ct-生育酚無菌微粉；2)取助懸劑(氫化蓖麻油)，過120目藥篩，得到氫化蓖麻油極細粉；3)將注射用大豆油在150-160攝氏度下高溫滅菌2小時(2-3小時均可)后，置于室溫下備用；4)向步驟3)經滅菌的注射用大豆油900mL中加入步驟2)獲得的氫化蓖麻油極細粉30g，在300-500攝氏度下加熱并攪拌，制成透明的凝膠高分子化合物溶劑體系，然后在無菌室中置于室溫下備用；5)將步驟4)獲得的凝膠高分子化合物溶劑體系倒入無菌室膠體磨，邊攪拌邊加入步驟1)獲得的鹽酸頭孢噻呋無菌微粉50g(已折合成純藥)、a-生育酚和硫脲無菌微粉30g和局部止痛劑一普魯卡因5-10g，待其充分混合后繼續攪拌90分鐘(60-120分鐘均可)，再經分裝、充氮、密封等常規處理后，即得符合標準的頭孢噻呋長效混懸注射液。對該長效頭孢噻呋混懸注射液的外觀性狀，微粒大小，沉降體積比，重新分散試驗，抽針試驗等項目進行檢測，結果外觀性狀，沉降體積比，重新分散試驗，抽針試驗等各項指標均符合要求，制劑的粒度分布均勻，平均粒徑為8.23Wn，粒徑大于15陶的顆粒數小于0.1%，粒徑分布在7-15nm范圍內的顆粒占總數的75X以上，藥物含量為投藥量的98.9%。實施例6、頭孢噻呋長效注射液的制備用本發明的方法制備頭孢噻呋長效注射液，具體方法包括以下步驟1)取鹽酸頭孢噻呋無菌粉、抗氧劑一a-生育酚和沒食子酸丙酯(按重量l:1混合)，在無菌操作間中用超微粉碎機經超微粉碎得到粒徑小于25微米的鹽酸頭孢噻呋無菌微粉、a-生育酚和沒食子酸丙酯無菌微粉；2)取助懸劑一硬脂酸鋁，過120目藥篩，得到硬脂酸鋁極細粉；3)將注射用三乙酸甘油酯在150-160攝氏度下高溫滅菌2小時(2-3小時均可)后，置于室溫下備用；4)向步驟3)經滅菌的注射用三乙酸甘油酯900raL中加入步驟2)獲得的硬脂酸鋁極細粉15g，在300-500攝氏度下加熱并攪拌，制成透明的凝膠高分子化合物溶劑體系，然后在無菌室中置于室溫下備用；5)將步驟4)獲得的凝膠高分子化合物溶劑體系倒入無菌室膠體磨，邊攪拌邊加入步驟l)獲得的鹽酸頭孢噻呋無菌微粉100g(已折合成純藥)、a-生育酚和沒食子酸丙酯無菌微粉30g和局部止痛劑一苯甲醇5-10g，待其充分混合后繼續攪拌90分鐘(60-120分鐘均可)，再經分裝、充氮、密封等常規處理后，即得符合標準的頭孢噻呋長效混懸注射液。對該長效頭孢噻呋混懸注射液的外觀性狀，微粒大小，沉降體積比，重新分散試驗，抽針試驗等項目進行檢測，結果外觀性狀，沉降體積比，重新分散試驗，抽針試驗等各項指標均符合要求，制劑的粒度分布均勻，平均粒徑為8.41陶，粒徑大于15陶的顆粒數小于O.1%，粒徑分布在7-15um范圍內的顆粒占總數的75X以上，藥物含量為投藥量的99.4%。實施例7、頭孢噻呋長效注射液的制備用本發明的方法制備頭孢噻呋長效注射液，具體方法包括以下步驟1)取鹽酸頭孢噻呋無菌粉、抗氧劑一硫脲，在無菌操作間中用超微粉碎機經超微粉碎得到粒徑小于25微米的鹽酸頭孢噻呋無菌微粉、a-生育酚無菌微粉；2)取助懸劑一聚乙烯吡咯烷酮，過120目藥篩，得到聚乙烯吡咯烷酮極細粉；3)將注射用蓖麻油在150-160攝氏度下高溫滅菌2小時(2-3小時均可)后，置于室溫下備用；4)向步驟3)經滅菌的注射用蓖麻油750mL中加入步驟2)獲得的聚乙烯吡咯烷酮極細粉15g，在300-500攝氏度下加熱并攪拌，制成透明的凝膠高分子化合物溶劑體系，然后在無菌室中置于室溫下備用；5)將步驟4)獲得的凝膠高分子化合物溶劑體系倒入無菌室膠體磨，邊攪拌邊加入步驟l)獲得的鹽酸頭孢噻呋無菌微粉200g(已折合成純藥)、硫脲無菌微粉30g和局部止痛劑一三氯叔丁醇5-10g，待其充分混合后繼續攪拌90分鐘(60-120分鐘均可)，再經分裝、充氮、密封等常規處理后，即得符合標準的頭孢噻呋長效混懸注射液。對該長效頭孢噻呋混懸注射液的外觀性狀，微粒大小，沉降體積比，重新分散試驗，抽針試驗等項目進行檢測，結果外觀性狀，沉降體積比，重新分散試驗，抽針試驗等各項指標均符合要求，制劑的粒度分布均勻，平均粒徑為8.36Wn，粒徑大于15^的顆粒數小于0.1%，粒徑分布在7-15um范圍內的顆粒占總數的75X以上，藥物含量為投藥量的99.1%。實施例8、頭孢噻呋長效注射液的制備'用本發明的方法制備頭孢噻呋長效注射液，具體方法包括以下步驟1)取鹽酸頭孢噻呋無菌粉、抗氧劑一硫脲，在無菌操作間中用超微粉碎機經超微粉碎得到粒徑小于25微米的鹽酸頭孢噻呋無菌微粉、a-生育酚無菌微粉；2)取助懸劑一硬脂酸鋁，過120目藥篩，得到硬脂酸鋁極細粉；3)將注射用二乙酸甘油酯在150-160攝氏度下高溫滅菌2小時(2-3小時均可)后，置于室溫下備用；4)向步驟3)經滅菌的注射用二乙酸甘油酯650mL中加入步驟2)獲得的硬脂酸鋁極細粉15g，在300-500攝氏度下加熱并攪拌，制成透明的凝膠高分子化合物溶劑體系，然后在無菌室中置于室溫下備用；5)將步驟4)獲得的凝膠高分子化合物溶劑體系倒入無菌室膠體磨，邊攪拌邊加入步驟l)獲得的鹽酸頭孢噻呋無菌微粉300g(已折合成純藥)、硫脲無菌微粉30g和局部止痛劑一鹽酸利多卡因5-10g，待其充分混合后繼續攪拌90分鐘(60-120分鐘均可)再經分裝、充氮、密封等常規處理后，即得符合標準的頭孢噻呋長效混懸注射液。對該長效頭孢噻呋混懸注射液的外觀性狀，微粒大小，沉降體積比，重新分散試驗，抽針試驗等項目進行檢測，結果外觀性狀，沉降體積比，重新分散試驗，抽針試驗等各項指標均符合要求，制劑的粒度分布均勻，平均粒徑為8.57ta，粒徑大于15Mm的顆粒數小于0.1%，粒徑分布在7-15um范圍內的顆粒占總數的75X以上，藥物含量為投藥量的98.8%。實施例9、頭孢噻呋長效注射液的制備用本發明的方法制備頭孢噻呋長效注射液，具體方法包括以下步驟1)取鹽酸頭孢噻呋無菌粉、抗氧劑一沒食子酸丙酯，在無菌操作間中用超微粉碎機經超微粉碎得到粒徑小于25微米的鹽酸頭孢噻呋無菌微粉、沒食子酸丙酯無菌微粉；2)取助懸劑一氫化蓖麻油，過120目藥篩，得到氫化蓖麻油極細粉；3)將注射用三乙酸甘油酯在150-160攝氏度下高溫滅菌2小時(2-3小時均可)后，置于室溫下備用；4)向步驟3)經滅菌的注射用三乙酸甘油酯800raL中加入步驟2)獲得的氫化蓖麻油極細粉15g，在300-500攝氏度下加熱并攪拌，制成透明的凝膠高分子化合物溶劑體系，然后在無菌室中置于室溫下備用；5)將步驟4)獲得的凝膠高分子化合物溶劑體系倒入無菌室膠體磨，邊攪拌邊加入步驟l)獲得的鹽酸頭孢噻呋無菌微粉100g(已折合成純藥)、沒食子酸丙酯無菌微粉30g和局部止痛劑一丁卡因5-10g，待其充分混合后繼續攪拌90分鐘(60-120分鐘均可)，再經分裝、充氮、密封等常規處理后，即得符合標準的頭孢噻呋長效混懸注射液。對該長效頭孢噻呋混懸注射液的外觀性狀，微粒大小，沉降體積比，重新分散試驗，抽針試驗等項目進行檢測，結果外觀性狀，沉降體積比，重新分散試驗，抽針試驗等各項指標均符合要求，制劑的粒度分布均勻，平均粒徑為8.49陶，粒徑大于15Mm的顆粒數小于0.1%，粒徑分布在7-15ura范圍內的顆粒占總數的75X以上，藥物含量為投藥量的99.2%。實施例10、頭孢噻呋長效注射液的制備用本發明的方法制備頭孢噻呋長效注射液，具體方法包括以下步驟1)取鹽酸頭孢噻呋無菌粉、抗氧劑一沒食子酸丙酯，在無菌操作間中用超微粉碎機經超微粉碎得到粒徑小于25微米的鹽酸頭孢噻呋無菌微粉、沒食子酸丙酯無菌微粉；2)取助懸劑一氫化蓖麻油，過120目藥篩，得到氫化蓖麻油極細粉；3)將注射用大豆油和三乙酸甘油酯(l:l混合)在150-160攝氏度下高溫滅菌2小時(2-3小時均可)后，置于室溫下備用；4)向步驟3)經滅菌的注射用大豆油和三乙酸甘油酯750mL中加入步驟2)獲得的氫化蓖麻油極細粉15g，在300-500攝氏度下加熱并攪拌，制成透明的凝膠高分子化合物溶劑體系，然后在無菌室中置于室溫下備用；5)將步驟4)獲得的凝膠高分子化合物溶劑體系倒入無菌室膠體磨，邊攪拌邊加入步驟1)獲得的鹽酸頭孢噻呋無菌微粉100g(已折合成純藥)、沒食子酸丙酯無菌微粉30g和局部止痛劑一普魯卡因5-10g，待其充分混合后繼續攪拌90分鐘(60-120分鐘均可)，再經分裝、充氮、密封等常規處理后，即得符合標準的頭孢噻呋長效混懸注射液。對該長效頭孢噻呋混懸注射液的外觀性狀，微粒大小，沉降體積比，重新分散試驗，抽針試驗等項目進行檢測，結果外觀性狀，沉降體積比，重新分散試驗，抽針試驗等各項指標均符合要求，制劑的粒度分布均勻，平均粒徑為8.25Mm，粒徑大于15陶的顆粒數小于O.1%，粒徑分布在7-15yra范圍內的顆粒占總數的75%以上，藥物含量為投藥量的98.7%。實施例11、頭孢噻呋長效注射液的制備用本發明的方法制備頭孢噻呋長效注射液，具體方法包括以下步驟1)取鹽酸頭孢噻呋無菌粉、抗氧劑一沒食子酸丙酯，在無菌操作間中用超微粉碎機經超微粉碎得到粒徑小于25微米的鹽酸頭孢噻呋無菌微粉、沒食子酸丙酯無菌微粉；2)取助懸劑一聚乙烯吡咯垸酮，過120目藥篩，得到聚乙烯吡咯垸酮極細粉；3)將注射用單硬脂酸甘油酯在150-160攝氏度下高溫滅菌2小時(2-3小時均可)后，置于室溫下備用；4)向步驟3)經滅菌的注射用單硬脂酸甘油酯850mL中加入步驟2)獲得的聚乙烯吡咯烷酮極細粉15g，在300-600攝氏度下加熱并攪拌，制成透明的凝膠高分子化合物溶劑體系，然后在無菌室中置于室溫下備用；5)將步驟4)獲得的凝膠高分子化合物溶劑體系倒入無菌室膠體磨，邊攪拌邊加入步驟1)獲得的鹽酸頭孢噻呋無菌微粉100g(已折合成純藥)、沒食子酸丙酯無菌微粉50g和局部止痛劑一苯甲醇5-10g，待其充分混合后繼續攪拌90分鐘(60-120分鐘均可)，再經分裝、充氮、密封等常規處理后，即得符合標準的頭孢噻呋長效混懸注射液。對該長效頭孢噻呋混懸注射液的外觀性狀，微粒大小，沉降體積比，重新分散試驗，抽針試驗等項目進行檢測，結果外觀性狀，沉降體積比，重新分散試驗，抽針試驗等各項指標均符合要求，制劑的粒度分布均勻，平均粒徑為8.38陶，粒徑大于15Mm的顆粒數小于0.1%，粒徑分布在7-15um范圍內的顆粒占總數的75X以上，藥物含量為投藥量的99.1%。實驗l:頭孢噻呋長效注射液局部刺激試驗為確保頭孢噻呋長效混懸注射液的安全性，以實施例2所得鹽酸頭孢噻呋長效混懸注射液為樣品，按照"局部剌激試驗技術規范"的規定，進行了肌內注射和皮下注射兩種給藥途徑的局部刺激試驗，以了解注射本發明所得頭孢噻呋長效混懸注射液后是否產生局部刺激性反應，確定適宜臨床的安全給藥途徑。具體試驗方法包括如下一、試驗材料1、受試藥品5%長效鹽酸頭孢噻呋混懸注射液(實施例2制)。2、試驗動物隨機挑選健康成年新西蘭大白兔36只，體重2.06±0.13kg，雌雄各半。3、飼料家兔標準小顆粒飼料，自由采食。給藥前飼喂l周，適應環境。二、試驗方法1、試驗設計將36只健康成年新西蘭大白兔隨機分為6個處理組，每組6只，雌雄各半。將其中3個處理組的大白兔分別肌內注射推薦劑量1倍劑量(5mg/kg)、2倍劑量(10mg/kg)和5倍劑量(25mg/kg)的長效鹽酸頭孢噻呋混懸注射液，另外3個處理組的大白兔分別皮下注射推薦劑量1倍劑量、2倍劑量和5倍劑量的長效鹽酸頭孢噻呋混懸注射液，注射后評價大白兔注射部位是否產生局部刺激性反應。2、給藥試驗前24小時用于肌內注射的健康成年新西蘭大白兔于用剪毛剪剪去兩側股四頭肌部位的兔毛，用于皮下注射的白兔剪去背部兩側兔毛，再用手術刀片刮去短毛。試驗時健康白兔先用碘酊和乙醇消毒，肌內注射刺激試驗在右側股四頭肌注入藥物，同時在左側股四頭肌注入等體積的滅菌生理鹽水作對照；皮下刺激試驗在右側背部皮下注入藥物，左側背部皮下注入等體積的滅菌生理鹽水作對照。3、取樣注射后每間隔6h觀察一次皮膚表面的反應及變化情況。48h后大白兔由耳靜脈注入空氣處死，剖開背部皮膚和股四頭肌，觀察注射部位的反應情況，按表1的評分標準確定反應級數；并觀察注射部位的藥液吸收情況，檢查注射局部是否產生充血、水腫、硬結、變性或壞死等刺激性反應，必要時取注射部位組織做病理切片，并觀察有無炎癥。表l刺激反應評分標準<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>三、試驗結果高、中、低三組新西蘭大白兔皮下注射和肌內注射本發明所得頭孢噻呋長效混懸注射液后48h內均健康狀況良好，活動正常，皮膚表面亦未見異常反應，刺激反應級數和對照組一樣均為O級，且其注射部位的藥液吸收良好，注射局部亦無充血、水腫、硬結、變性或壞死等刺激性反應現象。試驗結果表明肌內注射和皮下注射高、中、低劑量的本發明所得頭孢噻呋長效混懸注射液對新西蘭大白兔均無刺激作用。通過該實驗說明，本發明的頭孢噻呋長效混懸注射液在推薦劑量下肌內注射和皮下注射均具有較好的安全性，也方便給藥。而類似混懸注射液(例如03146062.X介紹)只能皮下注射而不能肌內注射，安全性較差，給藥途徑受到限制。實驗2:頭孢噻呋長效注射液在豬體內的藥物動力學試驗為驗證本發明頭孢噻呋長效混懸注射液的長效作用，以實施例2所得鹽酸頭孢噻呋長效混懸注射液樣品為例進行肌內注射，進行了豬體內的藥物動力學研究，并與輝瑞公司生產的鹽酸頭孢噻呋混懸注射液(EXCENEL)進行了比較研究，同時進行了鹽酸頭孢噻呋標準品靜脈注射的藥物動力學研究，對本發明的頭孢噻呋長效混懸注射液的長效作用、生物利用度進行綜合評價，具體試驗方法包括如下一、試驗材料1、主要試劑和藥品鹽酸頭孢噻呋原粉(山東久隆精細化工有限公司)；頭孢噻呋標準品(中國獸醫藥品監察所)；去呋喃甲酰基頭孢噻呋(DFC)標準品(Sigma公司)；二硫赤蘚醇(Sigma公司)；高效液相色譜系統(日本島津)；5%長效鹽酸頭孢噻呋混懸注射液(實施例2制)；5%美國輝瑞公司的鹽酸頭孢噻呋混懸注射液(EXCENEL)由市場購入。2、溶液的配制標準儲備液(500Pg/mL):取去呋喃甲酰基頭孢噻呋標準品5mg溶解于適量甲醇中，配制成500Pg/mL的10mL的標準儲備液。在-2CTC，避光條件下，標準貯備液可穩定保存l個月。標準添加溶液(10Pg/mL):從冰箱中取出標準儲備液(500Pg/mL)回至室溫，取標準儲備液0.2mL于容量瓶中，加0.1M乙酸銨溶液稀釋并定容至10mL。在-20°C，避光條件下，標準添加液可穩定保存l周。標準工作液分別取50、100、200、400、800、1000叱的10Pg/mL去呋喃甲酰基頭孢噻呋標準ie備液于10mL容量瓶中，用0.1M乙酸銨定容至刻度，依次獲得濃度為50、100、200、400、800、1000ng/mL的標準工作液。血漿藥物提取液稱取19g硼酸鈉和3.7g氯化鈉，加適量水溶解，稀釋定容至1000mL，配制成硼酸鹽緩沖液(pH9)，然后再稱取適量二硫赤蘚醇加入硼酸鹽緩沖液(PH9)中，配成濃度為0.4%(W/V)的血漿藥物提取液。HPLC流動相稱取適量醋酸銨用水稀釋定容至0.OIM，然后和甲醇按76:24(V/V)的比例混合配制成流動相，脫氣處理后，用孔徑為0.22ym的微孔濾膜過濾。3、主要儀器設備高效液相色譜儀(含LC-10ATvp泵，DGU-12A脫氣設備，SPD-M10Avp紫外檢測儀，Class-VP5.03工作站，日本Shiraadzu);TDL-40B離心機(上海安亭科學儀器廠);GM-0.33II隔膜真空泵(天津騰達過濾器件廠)；冊-l渦動混合器(上海滬西分析儀器廠)；CX-100超聲波清洗器(北京醫療設備二廠)。4、試驗動物挑選健康雜交長大白豬15頭，70日齡，體重20.2-23.6kg。飼養在清潔動物房中，自由飲水，詞喂不含抗菌藥物的全價日糧，每天定時給料一次。給藥前飼養l周，以適應環境。二、試驗方法1、給藥將試驗動物隨機分成三組，每組5頭，第一組耳緣靜脈一次性注射鹽酸頭孢噻呋標準品，第二組肌內注射本發明制鹽酸頭孢噻呋長效混懸注射液(5%)，第三組肌內注射美國輝瑞公司的EXCENE1J)(5%)，三組動物的給藥劑量均為5mg/kg，其中肌內注射的給藥方式為后腿部肌肉一次性注射頭孢噻呋注射液。2、樣品采集靜脈注射頭孢噻呋標準品后分別在豬給藥前(Oh)和給藥后0.083、0.167、0.25、0.5、0.75、1、2、3、4、8、12、24、48、72小時前腔靜脈采血10mL，肌內注射本發明制鹽酸頭孢噻呋長效混懸注射液和美國輝瑞公司的EXCENE1J)后分別在豬給藥前(0h)和給藥后O.13、0.25、0.5、1、2、4、6、8、12、24、48、72、96、120、144、168、192、216和240h前腔靜脈采血10mL，所采血液均在含有抗凝劑肝素鈉的試管中室溫靜置2h后2500rpm離心，取上層血漿，-2(TC保存。3、血液樣品處理吸取血漿O.5mL于50mL具塞離心管中，加入7mL提取液，渦動1min;50°C水浴15min，水浴時每隔3min渦動10s。放置室溫后將提取液轉移至已活化的30mgHLB小柱上，調節流速至1滴/秒，用2.0mL甲醇水(5:95)洗滌，用2.0mL醋酸乙腈(5:95)洗脫，35t:氮氣吹至0.2raL以下，用0.1M醋酸銨溶液定容至0.5mL，用0.2陶有機濾膜過濾后取10014進HPLC測定。4、標準曲線的繪制分別取濃度為50、100、200、400、800、1000ng/mL標準工作溶液各100W進HPLC分析。以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標繪制標準曲線。5、回收率和精密度試驗分別取空白血槳樣品，添加一定體積的去呋喃甲酰基頭孢噻呋標準添加溶液，使樣品中藥物濃度為O.1Pg/mL、0.5Pg/mL、2Pg/mL，按上述樣品前處理方法分別處理后HPLC測定，一日內每個濃度取4個平行樣品，分別測定，計算回收率和日內變異系數。6、色譜條件紫外檢測器；柱溫室溫；色譜柱SymstryC18(5Wn，4.6mmX150讓i.d.);檢測波長266nm;流動相為0.01mol/L醋酸氨溶液甲醇(76:24);流速為0.5mL/min;進樣量100tiL。7、數據處理三組動物給藥后的血藥濃度-時間數據采用中國藥理學會數學專業委員會編制的3P97藥代動力學軟件對藥-時數據進行處理；對自制的和輝瑞公司的頭孢噻呋混懸注射液的主要藥物動力學參數的差異顯著性，用SPSS12.0統計軟件的T檢驗程序進行檢驗。三、試驗結果1、血漿藥物含量檢測方法的回收率和精密度血漿藥物含量測定方法在藥物濃度為0.05-5Pg/mL范圍內與峰面積呈良好線性關系，其線性方程為Y=9.8782X+519.22，R=0.999。檢測限和定量限分別為0.05和0.16Pg/mL。藥物在0.1-2Pg/raL添加水平時，平均回收率為75.2-89.7%，變異系數為4.8-6.9%(詳見表2)。表2豬血漿添加去呋喃甲酰基頭孢噻呋回收率(n=4)添加濃度(Pg/mL)平均回收率(％)變異系數(％)<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>2、藥-時數據靜脈注射頭孢噻呋標準品后不同時間點采血測得的藥物濃度見表3;肌內注射自制長效鹽酸頭孢噻呋混懸注射液后不同時間點采血測得的藥物濃度見表4;肌內注射美國輝瑞公司的鹽酸頭孢噻呋混懸注射液后不同時間點采血測得的藥物濃度見表5。表3靜脈注射頭孢噻呋標準品后的血漿藥物濃度(Pg/mL)時間血漿藥物濃度(Pg/mL)<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>表4肌內注射本發明長效頭孢噻呋混懸注射液后的血漿藥物濃度(Pg/mL)<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>表5肌內注射輝瑞公司EXCENEL^后的血漿藥物濃度(Pg/mL)<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>ND未檢出(notdetectable)3.藥代動力學參數根據表3、表4和表5中數據，用中國藥理學會數學專業委員會編制的3P97藥代動力學軟件分別用一、二、三室模型擬合，經F檢驗，根據擬合優度值、AIC和R2進行模型判斷，結果表明豬肌內注射自制長效鹽酸頭孢噻呋混懸注射液和輝瑞公司的鹽酸頭孢噻呋混懸注射液后的體內藥代動力學過程均表現為有吸收的二室開放模型，靜脈注射頭孢噻呋標準品后豬體內藥代動力學過程表現為一室開放模型，其主要藥物動力學參數分別見表6和表7。表6肌內注射頭孢噻呋混懸注射液后的主要藥物動力學參數(n=5)<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>表7靜脈注射頭孢噻呋標準品的主要藥物動力學參數(n=5)<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>4、制劑的長效作用檢測長效制劑的研制目標是通過適宜制劑載體和附加劑的合理配制及理想的制劑工藝使藥物進入體內后緩慢吸收和釋放，從而使血液中藥物峰濃度降低并延長有效血藥濃度的持續時間，相應藥物動力學參數的具體表現應為血藥達峰時間更遲、血藥峰值更低、消除半衰期更長。從表6和圖1中可以看出，本發明鹽酸頭孢噻呋長效混懸注射液與輝瑞公司的EXCENE1^的藥物動力學參數相比，本發明頭孢噻呋長效混懸注射液的血藥濃度達峰值時間更遲1.5倍，最高血藥濃度低了2.34倍，消除半衰期延長了1.65倍。因此，本發明所制得的頭孢噻呋混懸注射液的藥物動力學參數符合長效制劑的藥物動力學規律，且血藥濃度高于3倍最低抑菌濃度(0.06jxg/mL)的維持時間(T>0.2，即血藥濃度高于0.2Pg/mL的持續時間)延長了L55倍，表明本發明所制得的頭孢噻呋混懸注射液具有明顯長效作用，以5mg/kg劑量一次性肌內注射，有效血藥濃度可維持135.36小時(約5.5天)。該時間也較03146062.X介紹的長效混懸注射液3天的藥效時間要長。權利要求1、一種頭孢噻呋長效注射液的制備方法，由注射用油酯和助懸劑極細粉制成的凝膠高分子化合物溶劑體系，再將含有鹽酸頭孢噻呋的無菌微粉加入，持續攪拌得到頭孢噻呋長效混懸注射液。2、根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于具體包括以下步驟1)將鹽酸頭孢噻呋無菌粉和抗氧劑分別經超微粉碎得到鹽酸頭孢噻呋無菌微粉和抗氧劑無菌微粉；2)制備助懸劑極細粉；3)將注射用油酯高溫滅菌后，置于室溫下備用；4)向步驟3)所得的滅菌注射用油酯中加入步驟2)所得的助懸劑極細粉，加熱并攪拌，制成透明的凝膠高分子化合物溶劑體系，然后在無菌室中置于室溫下備用；5)將步驟4)獲得的凝膠高分子化合物溶劑體系倒入無菌室膠體磨，邊攪拌邊加入步驟l)獲得的鹽酸頭孢噻呋無菌微粉、抗氧劑無菌微粉和局部止痛劑，待其充分混合后繼續攪拌，得到頭孢噻呋長效混懸注射液。3、根據權利要求1或2所述的制備方法，其特征在于所述無菌微粉粒徑小于25微米；所述助懸劑極細粉過120目以上的藥篩。4、根據權利要求1或2所述的制備方法，其特征在于所述注射用油酯為注射用大豆油、棉籽油、蓖麻油中的一種和/或單硬脂酸甘油酯、二乙酸甘油酯、三乙酸甘油酯中的一種，優選注射用大豆油或三乙酸甘油酯或兩者的混合物；注射用油酯高溫滅菌溫度為150-16(TC，時間為2-3小時。5、根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于凝膠高分子化合物溶劑體系占制劑總體積的6090%，無菌微粉占制劑總體積的1040%。6、根據權利要求l所述的制備方法，其特征在于所述助懸劑選自硬酯酸鋁、聚乙烯吡咯烷酮和氫化蓖麻油中的一種或兩種的混合物；所述凝膠高分子化合物溶劑體系中助懸劑極細粉的重量/體積百分比濃度為1-3%。7、根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于所述抗氧劑選自沒食子酸丙酯、a-生育酚和硫脲中的一種或兩種的混合物；所述局部止痛劑選自苯甲醇、三氯叔丁醇、鹽酸利多卡因及其鹽、丁卡因及其鹽、普魯卡因及其鹽中的一種。8、頭孢噻呋長效注射液，為用以上任一權利要求所述方法制備得到的混懸注射液。9、根據權利要求8所述的頭孢噻呋長效注射液，其特征在于制劑中所述鹽酸頭孢噻呋的重量/體積百分比濃度為5-30%。10、根據權利要求9所述的頭孢噻呋長效注射液，其特征在于抗氧劑在制劑中重量/體積百分比濃度為0.01-5%;局部止痛劑在制劑中的重量/體積百分比濃度為0-3%。全文摘要本發明公開了一種頭孢噻呋長效注射液及其制備方法。該頭孢噻呋長效注射液是含有鹽酸頭孢噻呋的混懸注射液，所述藥物的溶劑體系的主要成分為注射用植物油、油酯。本發明注射液的制備工藝操作簡單，制備的混懸注射液符合要求，經肌內注射后具有明顯的長效作用，既提高了藥物的治療效果，克服了呼吸道疾病病程長、治療需多次給藥的缺點，又減少了因頻繁給藥造成的養殖場人力資源的浪費以及因多次給藥引起的動物應激反應，是一種對畜禽呼吸道疾病具有長效作用的新型獸藥制劑，具有極高的推廣應用價值。文檔編號A61P31/04GK101401787SQ200810226889公開日2009年4月8日申請日期2008年11月19日優先權日2008年11月19日發明者湯樹生,俊肖,肖希龍申請人:肖希龍;湯樹生;肖俊