專利名稱：：治療骨質疏松的口服液的制作方法
技術領域：
：本發明涉及治療骨質疏松的藥物
技術領域：
，特別涉及一種治療骨質疏松的口刀良液。
背景技術：
：骨質疏松是以低骨量和骨組織微結構退行性改變為主，伴有骨脆性增加的一種全身性代謝性骨骼疾病。骨痛及功能障礙是骨質疏松臨床最常見癥狀，而骨質疏松最嚴重的后果是骨質疏松性骨折，尤其是髖部骨折，骨質疏松病人一旦發生髖部骨折，一年內死亡率高達15%-20%,永久病殘率達50%,這一切給個人、家庭、社會和國家均會造成嚴重的危害。骨質疏松在西醫治療中，通過刺激成骨細胞增殖而促進骨形成的最強的藥物是氟化物，其余大多數用于治療骨質疏松的藥物均抑制破骨細胞。而治療骨質疏松癥的理想藥物應該是既抑制骨吸收又刺激骨形成。目前治療骨質疏松癥主要是用雌激素以及其他藥物輔助治療，可改善骨質疏松病人的骨密度及其相關癥狀。近年來人們發現西藥在治療骨質疏松方面有毒副作用大、遠期療效不肯定、價格昂貴等缺點，西藥僅能阻止和延緩病情的進一步發展。因此，需要發明一種新的治療骨質疏松的中藥口服液以解決上述問題。
發明內容本發明的主要目的在于基于現有技術的不足而提供一種毒副作用小、療效肯定、價格適宜的治療骨質疏松的中藥口服液。本發明提供一種治療骨質疏松的口服液，所述的治療骨質疏松的口服液由下述重量配比的原料制成淫羊藿1215、熟地15~20、黃芪15~20、杜仲15~20、補骨脂2030、骨碎補20~30、水適量。作為本發明優選實施方式，治療骨質疏松的口服液由下述重量配比的原料制成淫羊藿15、熟地20、黃芪20、杜仲20、補骨脂30、骨碎補30、水適量。本發明將淫羊藿、熟地、黃芪、杜仲、補骨脂、骨碎補6味中藥用于治療骨質疏松，功能主要為補肝益腎，強筋健骨，活血止痛。中醫認為，腎為先天之本，主生長發育。"腎藏精，主骨生髓。"腎藏精,精生髓，髓生骨，故骨者腎之所合也。腎精充足，骨髓化生有源，骨髂得養，則骨質致密。隨著年齡漸老，身體漸衰，精虧髓少，骨骼枯萎，引起骨質疏松。骨質疏松涉及的主要臟器在腎，基本病理以腎虧虛，精血不足為主。將其分型為肝腎兩虛，陰虛火旺，陽虛督寒，陰陽兩虛。肝腎虧虛，精血不能濡養筋骨以脈，當給予滋補肝腎，強筋壯骨類中藥。陰虛則肝血不足，腎精不充，治療以滋陰清熱，補腎強筋為主。采用補腎填精為主，輔以健脾養血、活血化瘀、祛風除濕、強筋壯骨諸法治療骨質疏松，其辨證施治和綜合治療手段的運用，能迅速有效地改善患者的臨床癥狀，且相對于西藥而言，成本低、毒副作用小，可有效地防治骨質疏松。所以，原發性骨質疏松癥相當于中醫學中的腎虛骨萎，補腎是中醫治療骨質疏松癥的主要方法。現代中醫對骨質疏松癥作了大量研究，郭氏等在比較腎氣虛證、腎陰虛證和腎陽虛證的骨密度情況時，發現腎陽虛證的骨密度低于腎氣虛證和腎陰虛證。比較腎精不足、腎陰虛、腎陽虛和腎陰陽俱虛四種證型的骨質疏松程度，發現腎陽虛和腎陰陽俱虛者骨質疏松程度最嚴重。中醫認為腎虛發展到該階段，不僅造成腎中物質基礎匱乏，而且腎的臟腑功能嚴重受損，故在治療方面溫補腎陽、陽中求陰顯得格外重要。本發明所用組方是經過前期篩選，臨床療效良好的組方，在組方中著重溫補腎陽、調補腎陰。本發明中補骨脂、淫羊藿、杜仲具有補腎固精、強筋壯骨之功效；黃芪具有強心、抗心肌缺血、提高免疫力、降糖、抗衰老、保護臟器等多種藥理作用；骨碎補具有補肝腎強筋骨的傳統功效，現代研究發現，它具有一定的改善軟骨細胞的功能，推遲細胞退行性變，降低骨關節病變率的作用；熟地具滋腎填精之功。六藥均歸腎經，共達補腎填精、生髓健骨的作用。具體實施例方式為使本發明更加容易理解，下面將進一步闡述本發明的具體實施例。實施例1本發明藥物對去卵巢大鼠作用機制的研究1、動物的選擇和分組選用6月齡雌性SD大鼠，在水合氯醛麻醉下，行雙側卵巢切除術26只，假手術組8只。并將卵巢切除的大鼠分為病理對照組8只、雌二醇組9只和本發明藥物治療組9只。2、方劑配制按淫羊藿12~15、熟地1520、黃芪15~20、杜仲15~20、補骨脂20~30、骨碎補2030比例以20倍蒸餾水浸泡、煎煮，過濾液離心濃縮；用75°/乙醇沉淀，回收乙醇；調pH至7.0;加活性碳脫色；制成含生藥2g/m1的藥液。(注，下述實施例2、3、4也采取同樣的方法配置本發明藥物。)3、給藥方法及取材雌二醇組40jLig/kg,三天一次，本發明藥物治療組12g/kg,每天一次；假手術組、模型組每天灌生理鹽水。治療12周，行骨密度測定后，取血并分離血清，股骨用40%多聚曱醛固定。4、骨密度測定使用雙能X線骨密度檢測儀，應用小動物軟件，測定并分析大鼠左后肢股骨和脛骨的骨密度。表l各組大鼠的骨密度變化(X±S，g/cm2)組別鼠數股骨脛骨平均假手術組80.285±0.0330.256±0.0300.271±0.032模型組80.250±0.0140.233±0.0120.242±0.013雌二醇組90.261±0.0150.278±0.0100.270±0.013藥物治療組90.268±0.0190.273±0.0130.270±0.016注模型組與假手術組相比，差異有顯著性意義P<0.01;雌二醇組與模型組相比，差異有顯著性意義P<0.01。結果本發明藥物可提高去卵巢大鼠股骨和脛骨平均骨密度，本發明藥物中的有效成分與雌激素受體結合后，通過抑制破骨細胞的過度活動，促進小梁骨生成及其向編織骨轉化。5、骨形態計量學股骨石蠟包埋后，選擇股骨中點切片1-2張，HE染色后光鏡觀察，計算骨髓腔與骨小梁面積百分比，并對骨小梁的寬度進行測量。表2各組大鼠股變化(X土S)組另'J鼠數髓腔面積/骨小梁面積骨小梁寬度Um)假手術組80.269±0.0270.250±0.028模型組80.238±0.0110.227±0.009雌二醇組90.257±0.0160.297±0.013藥物治療組90.257±0.0190.290±0.015注模型組與假手術組相比，差異有顯著性意義P<0.05;雌二醇組與模型組相比，差異有顯著性意義P<0.05,藥物治療組與病理對照組相比，差異有顯著性意義P<0.05。結果手術組骨小梁多而完整，排列規則；卵巢切除組骨小梁明顯稀疏，排列不規則，骨髓腔增大；補腎中藥和雌二醇治療與模型組相比見骨小梁明顯致密，骨髓腔縮小。6、骨生化檢測檢測血清中雌二醇(E2)、卵泡刺激素(FSH)、黃體生成素(LH)、孕酮(PR0G)、皮質醇(C0R)、睪酮(T)的水平變化。表3各組大鼠血清激素水平測定結果(X±S)M~~~~^~~E2(pg/ml)~~LH(mlu/ml)FSH(mlu/ml)PROG(ng/ml)C0R(ng/ml)T(ng/ml)假手術組821.93±13.243.78±0.550.35±0.3432.44±18.3714.11±8.880.70±0.09模型組811.12±6.604.92±0.630.59±0.433.51±1.614.90±2.440.66±0.73雌二醇組957.12±0.0304.77±1.220.60±2.543.34±1.553.66±2.330.59±0.2中藥治療組928.83±16.925.89±0.231.11±1.352.44±0.6811.65±8.680.03±0.01注模型組與假手術組相比，差異有顯著性意義P<0.05;中藥治療組與模型組相比，差異有顯著性意義P<0.05。結果本發明藥物可提高實驗動物的雌二醇水平，但睪酮水平下降，提示本發明藥物促進了睪酮向雌二醇的代謝轉化過程。實施例2本發明藥物對大鼠骨tt質干細胞增殖與分化的影響(1)試劑胎牛血清(杭州四季青公司產品)，DMEM培養基(美國Gibco公司產品)，胰酶及四曱基偶氮唑鹽(MTT試劑為Sigma公司產品)，i咸性磷酸酶(ALP)試劑盒。(2)儀器倒置顯微鏡(Nikon公司)，C02培養箱、細胞培養板(美國Gibco公司產品)，723型分光光度儀、ELX808酶標儀(美國BioTek/^司產品)。(3)MSCs分離與培養:取大鼠股骨，去兩端沖出骨髓。力口10%培養基，置37。C，5%C02，以約(2~5)x107cm2密度種于培養瓶中，放入5%0)2培養箱內培養，待細胞長滿后進行傳代。(4)不同濃度的本發明藥物對ALP活性的影響表l不同濃度本發明藥物對ALP活性的影響(x±s)注a與對照組相比P復Ol。結果低濃度組的a值在2、3d時明顯高于對照組(P<0.05)，在1、2、5d時與對照組比較差異無統計學意義(P>0.05)。(5)不同濃度本發明藥物對成骨細胞增殖的影響表2不同濃度本發明藥物對成骨細胞增殖的影響(A,x±s)吸光度1d2d3d4d5d0.203±0.0120.337±0.021b0.452±0.023b0.522±0.0140.542±0.0140.326±0.020a0.046±0.032a0.580±0.051a0.661±0.033a0.661±0.033a0.521±0.035a0.605±0.028a0.693±0.228b0.802±0.045a0.802±0.045a0.166±0.0110.266±0.0430.365±0.0520.468±0.0550.468+0.055注與對照組相比aP<0.01，bP<0.05結果在l、2、3、4、5d時，中、高濃度組的A值明顯高于對照組(p<0.01)。低濃度組的A值(6)不同濃度本發明藥物對礦化結節數的影響表3不同濃度本發明藥物對礦化結節數的影響(x±s)nId2d3d4d5d40.256±0.042a0.389±0.052a0.456±0.028a0.233±0.045a0.112±0.023a40.387±0.056a0.561±0.071a0.862±0.061a0.402±0.025a0.223±0.027a40.210±0.023a0.367±0.Olla0.488±0.053a0.325±0.014a0.214±0.042a40.136±0.0720.235±0.0260.468±0.0250.221±0.0130.108±0.036礦化結節1.23±0.35a1.45±0.28a1.56±0.33a0.22±0.12別度度度組濃濃濃照組低中高對n4444別度度度組濃濃濃昭w組低*高對444別度度度組組濃濃濃照低中高對8注a與對照組相比P<0.05。結果在2,3d時明顯高于對照組(pW.05),在1、2、5d時與對照組比較差異無顯著性(p〉0.05)。本實驗顯示，誘導分化培養出現礦化結節，茜素紅染色陽性，ALP染色、骨釣素免疫組化染色均呈陽性，提示誘導培養液具有誘導MSCs定向分化成骨細胞具有成骨能力。實施例3本發明藥物拮抗地塞米松促骨髄基質細胞向成脂細胞分化的研究(l)MSCs的分離與培養待細胞長滿后進行傳代，使用第3代細胞進行實驗，分地塞米松(1x1(Tmol/L)組、地塞米松加本發明藥物(80mg/L)組與對照組(常規血清培養)。倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況。(2)本發明藥物與地塞米松對MSCs增殖的影響表1本發明藥物與地塞米松對MSCs增殖的影響(x±s)~~n光吸收值(l，2，3d)123A~§0.166±0.0110.201±0.043*0.223±0.052*B30.145±0.0120.211±0.021*0.234±0.023*_g_30.253±0.0120.644±0.0211.232±0.023**與對照組相比P<0.05，A:地塞米+>組，B:地塞米松加本發明藥物組，C:對照組。結果MTT檢測顯示，地塞米松可抑制MSCs的增殖，本發明藥物不能干預地塞米^f^對MACs的抑制作用。(3)本發明藥物與地塞米;^MSCs石威性》壽酸酶的影響表2本發明藥物與地塞米松對MSCs堿性磷酸酶的影響(x±s)^~~ALP(mU/104細胞)(7，14，21d)123A30.134±0.2111.201±1.043*5.lll土l.223*B30.141±0.2351.223土0.021*6.234±2.023*C30.141±0.2350.532±0.0513.234±1.045*p復05，~~A:地塞米松組，B地塞米松加本發明藥物組，C:對照組結果地塞米松可顯著增強骨髓基質細胞的堿性磷酸酶活性。(4)本發明藥物與地塞米松MSCs對三酰甘油含量的影響表3本發明藥物與地塞米松對MSCs三酰甘油含量的影響(x±s)~n三酰甘油(txmol/104細胞)(7，14，21d)123A30.134±0.211"""0.201±1.0431.111±1.223*~B30.141±0.2350.223±0.0210.014±1.023C30.143±0.1230.153±0.0340.019±1.032p<0.05,A:地塞米松組，B地塞米松加本發明藥物組，C:對照組。結果本發明藥物可以逆轉糖皮質激素的促成脂肪作用，誘導骨髓基質細胞向成骨細胞，促進骨髓基質細胞在體外向成骨細胞分化。實施例4本發明藥物對骨髓細胞增殖的影響(1)分組對照組，喂水；對照組，喂藥；假去勢組(只切一刀)，喂水；假去勢組(只切一刀)，喂藥；單去勢組只切一邊卵巢)，喂水；單去勢組(只切一邊卵巢)，喂藥；去勢組(全去卵巢)，喂水；去勢組(全去卵巢)，喂藥；所有實驗小鼠在手術后的第八天才喂藥(每只150ul，每天一次)或喂水作對照，30天后取肝，骨髓,血，骨作測試之用。(2)測量指標LI-6，LI-6R，LI-7，LI-7R，gpl30，BMP—1，BMP-2,BMP-3,BMP—4,BMP-5，BMP-6BMP-7,及cbfal。結果(1)本發明藥物可下調骨髓細胞IL-6/IL-7等細胞因子的表達。IL-6/IL-7是最強的骨吸收刺激因子，它對骨重建的調節破骨細胞前體細胞，使其分化為破骨細胞,發揮骨吸收重建的作用。(2)本上調BMP-7的表達。BMP-7具有強烈的骨誘導活性，在骨骼發育的不同階段具有一定的調節作用，它可促進成骨細胞增殖和堿性磷酸酶的活性，表明BMP-7對成骨細胞的作用。實施例5本發明藥物劑型的改造新劑型-一雙骨湯(1)雙骨湯組成淫羊藿15、熟地20、黃芪20、杜仲20、補骨脂30、骨碎補30適應癥骨質疏松癥、骨性關節炎。規格750ML/袋。用法每日一次，每次一袋，6-8周一個療程。(2)雙骨湯治療骨質疏松骨折臨床分析對60例不同部位骨質疏松性骨折的患者服用雙骨湯后觀察血清骨性堿磷酶、I型前膠原羧基端肽、骨鈣素、骨強度和骨折愈合情況。(3)放射學表1兩組骨折病例治療后》文射學結果[例(％)]_§J|_^_n無骨痂少量骨痂骨痂明顯未愈合~延緩愈合li73018卿11(37)1(3)1(3)6(20)23(77)306(20)18(60)6(20)01(3)29(97)60242971752注采用Mann-whitneyU檢驗，統計量6周，Z=-3.327，兩側概率P<0.001;12周，Z=-2.270,P<0.05,兩組在6周與12周差異均有統計學意義。(4)生化指標ii經紹經、r驗療分對治合<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>表2兩組骨折病例治療后骨形成生化指標結果(X±S)分組^T^<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>注采用HotellingT才企-驗，與骨折組比較，aP<0.05，bP<0.01。(5)骨強度表3兩組骨折病例治療后骨強度結果(例)注采用Mann-whitneyIU全'瞼，統計量6周，Z=-3.327，兩側概率P〈0.001;12周，Z=-2.270，P<0.05,兩組在6周與12周差異均有統計學意義。由上述實施例可知1、本發明藥物可提高去卵巢大鼠股骨和脛骨平均骨密度2、本發明藥物提取液可誘導培養液具有誘導MSCs定向分化為成骨細胞并具有成骨能力3、本發明藥物可以逆轉糖皮質激素的促成脂肪作用，并誘導骨髓基質細胞向成骨細胞分化。4、本發明藥物萃取液可下調骨髓細胞IL-6/IL-7等細胞因子的表達，表明本發明藥物對骨重建的調節破骨細胞前體細胞，使其分化為破骨細胞，發揮骨吸收重建的作用。5、本發明藥物萃取液上調BMP-7的表達。表明本發明藥物激活骨誘導活性,促進成骨細胞增殖和堿性磷酸酶的活性，具有成骨作用。6、本發明藥物(雙骨湯)治療絕經后骨質疏松性骨折的腎虛癥狀有較好的緩解作用。最后所應當說明的是，以上實施例僅用以說明本發明的技術方案而非對本發明保護范圍的限制，盡管參照較佳實施例對本發明作了詳細說明，本領域的普通技術人員應當理解，可以對本發明的技術方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發明技術方案的實質和范圍。1權利要求1.一種治療骨質疏松的口服液，其特征在于，所述的治療骨質疏松的口服液由下述重量配比的原料制成淫羊藿12～15、熟地15～20、黃芪15～20、杜仲15～20、補骨脂20～30、骨碎補20～30、水適量。2.如權利要求l所述的治療骨質疏松的口服液，其特征在于，所述的治療骨質疏松的口服液由下述重量配比的原料制成淫羊藿15、熟地20、黃芪20、杜仲20、補骨脂30、骨碎補30、水適量。全文摘要本發明提供一種治療骨質疏松的口服液，所述的治療骨質疏松的口服液由下述重量配比的原料制成淫羊藿12～15、熟地15～20、黃芪15～20、杜仲15～20、補骨脂20～30、骨碎補20～30、水適量。本發明將淫羊藿、熟地、黃芪、杜仲、補骨脂、骨碎補6味中藥用于治療骨質疏松，功能主要為補肝益腎，強筋健骨，活血止痛。文檔編號A61K36/185GK101485774SQ20081022034公開日2009年7月22日申請日期2008年12月24日優先權日2008年12月24日發明者涂平生申請人:涂平生