RNAi介導的眼部靶標的抑制的制作方法

專利名稱：：RNAi介導的眼部靶標的抑制的制作方法
技術領域：
：本發明涉及干擾RNA組合物的領域，該組合物用于抑制青光眼特別是原發性開角型青光眼眼壓靶標的表達。
背景技術：
：青光眼是具有一定臨床特征的視神經異質化群體。青光眼視力的喪失是由于神經視網膜中的視網膜神經節細胞選擇性死亡造成的，臨床診斷表現為視野的特征性變化、神經纖維層缺損和視盤(ONH)的進行性凹陷。青光眼形成的主要危險因素之一是存在高眼壓(升高的眼內壓，IOP)。適當的眼內壓對于保持眼睛形狀和提供壓力梯度使房水向無血管角膜和晶狀體流動是必要的。普通眼壓性青光眼(NTG)的發病機理可能也涉及IOP水平，受益于降IOP藥物的患者可以證明這一,l對NTG患者進行眼壓測量時，一旦調整中央角膜厚度，可能就會發現這些患者中許多人有高眼壓。與青光目財關的升高的IOP是由于小梁(TM)中升高的房水排出受阻所致，小梁是位于目姊前房的虹膜-角膜角中微小的專門組織。TM的青光和積聚。另夕卜，青光眼的ONH中也發生變化。在青光眼中，ONH神經膠質細胞中存在形態學上的和移動性的變化。應答升高的IOP和/或短暫性腦缺血損傷，ONH細胞外基質組分發生變化以皿質細胞和視網膜神經節細胞軸突的形態發生改變。原發性青光眼起因于具有解剖學或生理學基礎的眼內液流動紊亂。繼發性青光B艮是由于眼損傷或眼外傷或原有疾病所致。原發性開角型青光眼(POAG)，也稱為慢性或單純性青光眼，占所有原發性青光眼的90%。POAG的特征在于小梁的變性，導致對眼中引流產生異常高的阻力。這種阻力的結果是導致IOP升高，IOP升高是為了驅動由眼睛正常產生的流體以克服增加的阻力。目前，抗青光眼的治療包括通過使用房水形成的抑制劑或增加眼色素層鞏膜外流量的試劑降低IOP、激光小梁成形術或小梁切除術(其為改善引流的過濾手術)。藥物學上的抗青光眼方法表現出多種不良副作用。例如，縮瞳藥如匹魯卡品可引起視力才莫糊和其他負面的視力副作用。全身性施用的碳酸酐酶抑制劑(CAI)也可引起惡心、消化不良、疲勞和代謝性酸中毒。另外，某些p受體阻滯劑已日益變得與嚴重的肺部副作用相關，這歸因于它們對肺組織中P-2受體的影響。仿交感神經作用的胺物引起心動過速、心律失常和高血壓。這種負面的副作用可能導致病人的M性減少或治療的終上此外，目前的IOP降低療法的療效相對較短，需絲天重復給藥，且在某些情況下，藥效隨時間而減弱。鑒于高眼壓在青光眼中的重要性以及以前治療方法的不足，需要有一種治療高目艮壓的改良的方法來解決其逸艮的根本原因。發明概述本發明是針對干擾RNA，該干擾RNA沉默高目艮壓耙標mRNA表達，從而降低開角型青光眼及高眼壓患者的眼內壓。高眼壓靶標包括碳酸酐酶II、IV和XII;pi和P2腎上腺素能受體；乙酰膽堿酯酶；Na+/K+-ATP酶和Na-K-2Cl協同轉運蛋白。本發明的干擾RNA有助于治療開角型青光BML高眼壓患者。本發明的一個實施方案提供了在受試者中減弱高眼壓把標mRNA表達的方法，該高目艮壓耙標mRNA是如碳酸酐酶II、IV或XII;pi或p2腎上腺素能受體；乙酰膽堿酯酶；貝3+/1<:+41酶或者~3-1<:-2<:1協同轉運蛋白mRNA。該方法包括給受試者施用組合物，該組合物包括有效量的具有19-49個核苷酸長度的干擾RNA和藥物可接受載體對受試者的眼部給藥，以減弱人體內高眼壓乾標的表達。在本發明的一個實施方案中，干擾RNA包括有義核苷酸鏈、反義核酸鏈和至少19個核苷酸的至少近乎完全連續互補的區域。另外，反義鏈在生理條件下與mRNA的部分雜充所述mRNA對應于SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:101、SEQIDNO:123、SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQIDNO:128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131、SEQIDNO:132、SEQIDNO:133或SEQIDNO:134，這些是有義cDNA序列，分別編碼碳酸酐酶II和IV、pi和P2腎上腺素能受體、乙酰膽堿酯酶(ACHE)的變體E4-E5、Na+/K+-ATP酶a2多肽、Na-K-2C1協同轉運蛋白NKCC2(SLC12A1)、碳酸酐酶XII變體1、乙酰膽堿酯酶變體E4-E6、Na+/K+-ATP酶al多肽變體1和2、Na+/K+-ATP酶a3多肽、Na+/K+-ATP酶a4多肽變體1和2、Na+/K+-ATP酶pi多肽變體1和2、Na+/K+-ATP酶卩2多肽、Na+/K+-ATP酶卩3多肽、Na-K-2C1協同轉運蛋白NKCC1(SLC12A2)和碳酸酐酶XII變體2。反義鏈有至少19個核苷酸的近乎完全連續互補的區域，該區域含有mRNA的雜交部分，所述mRNA分別對應于SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:101、SEQIDNO:123、SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQIDNO:128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131、SEQIDNO:132、SEQIDNO:133或SEQIDNO:134。這種組合物的施用減弱了受試者的高眼壓耙標mRNA的表達。在一個實施方案中，高眼壓靶標mRNA編碼碳酸酐酶II、IV或XII，而反義鏈在生理條件下與對應于SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:101或SEQIDNO:134的mRNA的部分雜交并且包含與分別對應于SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:101或SEQIDNO:134的mRNA的雜交部分有至少19個核苷酸近乎完全連續互補的區域。在另一個實施方案中，高B艮壓靶標mRNA編碼pi或P2腎上腺素能受體，而反義鏈在生理條件下與對應于SEQIDNO:3或SEQIDNO:4的mRNA的部分雜交，并且包含與分別對應于SEQIDNO:3或SEQIDNO:4的mRNA的雜交部分有至少19個核苷酸近乎完全連續互補的區域。在另外一個實施方案中，高目艮壓靶標mRNA編碼乙酰膽堿酯酶，而反義鏈在生理條件下與對應于SEQIDNO:5或SEQIDNO:123的mRNA的部分雜交，并且包含與分別對應于SEQIDNO:5或SEQIDNO:123的mRNA的雜交部分有至少19個核苷酸近乎完全連續互補的區域。在另一個實施方案中，高眼壓靶標mRNA編碼Na+/K+-ATP酶的亞基而反義鏈在生理條件下與mRNA的部分雜交(該mRNA對應于SEQIDNO:6>SEQIDNO:124SEQIDNO:125*SEQIDNO:SEQIDNO:127、SEQIDNO:12&SEQIDNO:12ASEQIDNO:13(XSEQIDNO:131或SEQIDNO:132),并且包含與mRNA的雜交部分有至少19個核苷酸近乎完全連續互補的區域(該mRNA分別對應于SEQIDNO:6SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQIDNO:128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131、或SEQIDNO:132)。在另一個實施方案中，高眼壓靼標mRNA編碼Na-K-2C1協同轉運蛋白，而反義鏈在生理條件下與對應于SEQIDNO:7或SEQIDNO:133的mRNA的部分雜充并且包含與分別對應于SEQIDNO:7或SEQIDNO:133的mRNA的雜交部分有至少19個核苷酸近乎完全連續互補的區域。在本發明的一個實施方案中，干擾RNA被設計成以mRNA為靶標，該mRNA對應于SEQIDNO:l，包含核苷酸232、527、721、728、809、810、855、856、921、1139、506、547、548、740、911、1009、1140、1149、1150、1151、1188、1194、1195、1223、1239、1456、1457、1458、100、158、166、247、286、318、322、328、371、412、482、504、505、541、734、772、777、814、972、998、1232、317或401。在本發明的另一個實施方案中，干擾RNA被i殳計成以mRNA為靶標，該mRNA對應于SEQIDNO:2，包含核苷酸213、252、258、266、399、457、463、490、595、1064、109、112、125、126、150、261、265、280、398、453、459、462、467、492、534、785、801、825、827、876、1003或1012。在本發明的另一個實施方案中，干擾RNA,皮設計成以mRNA為靶標，該mRNA對應于SEQIDNO:101，包含核苷酸191、239、274、275、341、389、412、413、423、687、689、695、710、791、792、794、983、993、994、995、691、1039、1568、2326、2332、2425、2433、2844、2845、2880、2884、2891、2954、2955、2956、2957、2964、2965、3006、3007、3012或3026。在另一個實施方案中，千擾RNA被設計成以mRNA為靶標，該mRNA對應于SEQIDNO:134，包含核苷酸687、1535、2293、2299、2392、2400、2811、2812、2847、2851、2858、2921、2922、2923、2924、2931、2932、2973、2974、2979或2993。本發明的另一個實施方案提供被設計成以mRNA為靶標的干擾RNA，該mRNA對應于SEQIDNO:3，包含核苷酸468、523、799、1563、1565、1569、1593、1613、1614、1626、310、322、726、769、772、801、802、1501、1576、1577、1579、1580、1581、1586、1590、1592、1594、1615、1616、1632、1633或1654。本發明的另一個實施方案提供被設計成以mRNA為靶標的干擾RNA,該mRNA對應于SEQIDNO:4，包含核苷酸32孓3751031、1046、1149、1163、1371、1401、1426、1880、283、607、608、609、619、623、722、857、1037、1091、1115、1124、1136、1137、1151、1164、1393、1394、1395、1406、1407、1427、1428、1429、1442、1725、1726、1756、1757、1758、1767、1790、1791、1792、1793、1803、1861、1869、1971、1972或1979。在本發明另一個實施方案中，干擾RNA被設計成以mRNA為靶標，該mRNA對應于SEQIDNO:123，包含核苷酸1875、1890、1891、2011、2012、2133或2134。本發明另一個實施方案提供被設計成以mRNA為把標的干擾RNA,該mRNA對應于SEQIDNO:5，包含核苷酸366、370、384、385、525、588、768、1045、1046、1061、1090、1232、1314、1316、1460、1461、1462、1528、1607、1705、1713、382、393、397、622、1131、1459、1530、2251、2885、2886、386、1231、1315、2047、2049、2053、2055、2057、2125、2126、2127、2250、2253、2258、2260、2318、2395、2397、2404、2405、2643、2645或2887。在另一個實施方案中，干擾RNA被設計成以mRNA為靶標，該mRNA對應于SEQIDNO:124，包含核苷酸2208、2275、2307、2526、2538、2592、2628、2979、2985、3093、3474、3504、3505、3506、3518、343、442、700、707、811、907、1059、1363、1594、1662、1758、1760、1896、2037或2147。在另一個實施方案中，干擾RNA被設計成以mRNA為靶標，該mRNA對應于SEQIDNO:125,包含核苷酸436、441、443、552、617、701、702、832、2204、2291或2495。本發明另一個實施方案提供被設計成以mRNA為乾標的干擾RNA，該mRNA對應于SEQIDNO:6，包含核苷酸471、1990、3080、3797、4037、4093、4225、4323、5213、5285、214、467、470、472、473、632、825、946、1693、1767、1768、2157、2263、2589、2590、2765、2988、3094、3144、3145、3344、3345、3418、3666、3828、3850、4040、4041、4061、4882、4894、4900、5040、5114、5115、5128、5129、5253、5296、5375、5384或5385。在本發明另一個實施方案中，干擾RNA被設計成以mRNA為靶標，該mRNA對應于SEQIDNO:126，包含核苷酸240、272、362、1836、1851、2103、2137、2138、2139、2157、2158、2160、2425、2580、2601、2646、2650、2794、2803、3116、3124、3126、3129或3377。在本發明另一個實施方案，干擾RNA設計成以mRNA為耙標，該mRNA對應于SEQIDNO:127，包含核普酸113、612、702、833、1101、1732、1733、1836、2070、2071、2143、2328、2475、2861、2862、2952、3203、3281、3377、3379、3470、3471、3554、3614、3615、3616、3617、3625、3626、3642、3646、3647、3653、3655、3797、3801、3803、3809或3810。在另一個實施方案中，干擾RNA被設計成以mRNA為靶標，該mRNA對應于SEQIDNO:128，包含核苦酸126、251、252、253、331、427、429、520、521、530、601、602、603、604、664、665、666、667、675、676、692、696、697、702、703、705、707、847、851、853、859或860。在另一個實施方案中，干擾RNA被設計成以mRNA為靶標，該mRNA對應于SEQIDNO:129，包含核苷酸1096、1099、1130、1131、1167、1299、1441、1450、1451、1452、1564、1746、1750、1751、1752、1795、203、204、214、222、224、225、226、380、525、591、612、613、615、635、636、663、664、669、699、765、790、839、840、841、卯0、909、933或947。在另一個實施方案中，干擾RNA被設計成以mRNA為乾標，該mRNA對應于SEQIDNO:130，包含核苦酸1063、1102、1106、1107、1108、1109、1111或1151。在另一個實施方案中，干擾RNA被設計成以mRNA為靶標，該mRNA對應于SEQIDNO:131，包含核苷酸653、654、771、773、841、849、853、917、918、926、927、931、981、983、984、996、998、1022、1023、1160、1214、1355、1356、1381、1394、1425、1474、1550、1620、1707、1740、1753、1825、1956、1965、2598、2599、2608、2828、2829、2888、3012或3251。在本發明另一個實施方案中，千擾RNA被設計成以mRNA為耙標，該mRNA對應于SEQIDNO:132，包含核苷酸292、434、438、457、459、488、490、498、499、592、639、723、774、775、788、857、858、910、911、930、931、932、1009、1010、1023、1024、1111、1146、1147、1220、1246、1321、1325、1326、1327、1331、1437、1548、1571、1785、1786或1787。本發明另一個實施方案提供被設計成以mRNA為耙標的干擾RNA，該mRNA對應于SEQIDNO:7，包含核苷酸675、974、1373、1780、2102、2151、2315、2542、2609、3197、67、71、73、353、405、864、911、912、913、1409、1748、1811、1935、1937、1993、2012、2346、2388、2437、2586、3007、3008、3022、3130、3210、3237或3271。本發明另一個實施方案提供被設計成以mRNA為靶標的干擾RNA，該mRNA對應于SEQIDNO:133，包含核苷酸748、749、753、1119、1169、1499、1509、1820、2081、2118、2147、2615、2644、2659、2663、2671、2672、2793、2812、2914、2948、3044、3334、3391、3480、3520、3549、3639、3840、3941、3944、4001、4995、4997、5141、5143、5249、5375、5834、5852、5981或6678。除第一種干擾RNA夕卜，本發明還提供向受試者施用第二種千擾RNA。該方法包括向受試者施用長度為19-49個核苷酸的第二種干擾RNA，所述第二種干擾RNA還包括有義核普酸鏈、反義核酸鏈和至少19個核苦酸的近乎完全連續互補的區域；其中第二種干擾RNA的反義鏈在生理條件下與mRNA的部分雜交，該mRNA對應于SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:101、SEQIDNO:123、SEQIDNO:124、SEQID戮125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQIDNO:128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131、SEQIDNO:132、SEQIDNO:133或SEQIDNO:134，而反義鏈與mRNA的第二個雜交部分有至少19個核苷酸的近乎完全連續互補的區域，該mRNA分別對應于SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:lOl、SEQIDNO:123、SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQIDNO:128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131、SEQIDNO:132、SEQIDNO:133或SEQIDNO:134。第二干擾RNA可能和第一干擾RNA以相同的mRNA為耗標或以不同的mRNA為乾標。另外，也可以以相似的方式施用第三種、第四種或第五種等千擾RNA。本發明的另一個實施方案是應受試者需要治療高眼壓的方法。該方法包括給受試者眼部施用組合物，該組合物包含有效量的長度為19-49個核苷酸的干擾RNA和藥物可接受載體。該干擾RNA含有有義核苷酸鏈、反義核苷酸鏈和至少19個核苷酸的近乎完全連續互補的區域.該反義鏈在生理務fr下與mRNA的部分雜交，該mRNA對應于SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:101、SEQIDNO:123、SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQIDNO:128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131、SEQIDNO:132、SEQTDNO:133或SEQIDNO:134，并且包含與mRNA的雜交部分有至少19個核苷酸近乎完全連續互補的區域，該mRNA分別對應于SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQID隱4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:101、SEQIDNO:123、SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQIDNO:128、SEQIDNO:129、SEQID隱130、SEQIDNO:131、SEQIDNO:132、SEQIDNO:133或SEQIDNO:134。由此治療高眼壓。本發明另一個實施方案是在受試者中減弱高眼壓靶標mRNA表達的方法，包括給受試者施用組合物，該組合物包含有效量的長度為19-49個核苷酸的單鏈干擾RNA和藥物可接受栽體。為減弱高眼壓乾標的表達，該單鏈干擾RNA在生理條件下與對應于序列標識符和反義鏈的上述核苷酸位點的mRNA的部分雜交。本發明另一個實施方案是在受試者中減弱高眼壓靶標mRNA表達的方法，包括給受試者施用組合物，該組合物包含有效量的長度為19-49個核苦酸的單鏈干擾RNA和藥物可接受栽體，其中，干擾RNA包含至少13個連續核苷酸的區域，該連續核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個核苷酸具有至少90%的序列互補性或至少90%的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:8、SEQIDNO:14誦SEQIDNO:100、SEQIDNO:102-SEQIDNO:122、SEQIDNO:135-SEQIDNO:717、SEQIDNO:720和SEQIDNO:721。當高眼壓靼標mRNA編碼碳酸酐酶時，干擾RNA包含至少13個連續核苷酸的區域，該連續核苷酸與以下^f壬一序列的3'端次末端的13個核苷酸具有至少90。/。的序列互補性或至少90%的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:8、SEQIDNO:14-SEQIDNO:32、SEQIDNO:83-SEQIDNO:IOO、SEQIDNO:102-SEQIDNO:122、SEQIDNO:135-SEQIDNO:219、SEQIDNO:720和SEQIDNO:721。當高眼壓靼標mRNA編碼l-腎上腺素能受體時，干擾RNA包含至少13個連續核苷酸的區域，該連續核苦酸與以下任一序列的3'端次末端的13個核苷酸具有至少90%的序列互補性或至少90%的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:33-SEQIDNO:52和SEQIDNO:220-SEQIDNO:282。當高眼壓乾標mRNA編碼ACHE時，干擾RNA包含至少13個連續核苷酸的區域，該連續核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個核苷酸具有至少90。/。的序列互補性或至少90%的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:53-SEQIDNO:62和SEQIDNO:283-333。當高眼壓耙標mRNA編碼ATP1A1時，干擾RNA包含至少13個連續核苷酸的區域，該連續核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個核苷酸具有至少卯％的序列互補性或至少90%的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:334-SEQIDNO:374'當高眼壓乾標mRNA編碼ATP1A2時，干擾RNA包含至少13個連續核苷酸的區域，該連續核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個核苷酸具有至少卯％的序列互補性或至少90%的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:63畫SEQIDNO:72和SEQIDNO:375-SEQIDNO:416。當高眼壓把標mRNA編碼ATP1A3時，干擾RNA包含至少13個連續核苷酸的區域該連續核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個核苷酸具有至少90%的序列互補性或至少90%的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:417-SEQIDNO:440。當高眼壓把標mRNA編碼ATP1A4時，干擾RNA包含至少13個連續核苷酸的區域，該連續核苷酸與以下任一序列的3，端次末端的13個核苷酸具有至少90%的序列互補性或至少90%的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:441-SEQIDNO:511,當高眼壓把標mRNA編碼ATP1B1時，干擾RNA包含至少13個連續核苷酸的區域，該連續核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個核苷酸具有至少卯％的序列互補性或至少90%的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:512-SEQIDNO:563。當高眼壓把標mRNA編碼ATP1B2時，干擾RNA包含至少13個連續核苷酸的區域，該連續核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個核苷酸具有至少90%的序列互補性或至少90%的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:564-SEQIDNO:606。當高眼壓乾標mRNA編碼ATP1B3時，干擾RNA包含至少13個連續核苷酸的區域，該連續核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個核苷酸具有至少90%的序列互補性或至少90%的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:607畫SEQIDNO:648。當高目^LH乾標mRNA編碼SLC12A1時，干擾RNA包含至少13個連續核苷酸的區域，該連續核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個核苷酸具有至少90%的序列互補性或至少90%的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:73-SEQIDNO:82和SEQEDNO:649-SEQIDNO:675。當高眼壓靶標mRNA編碼SLC12A2時，干擾RNA包含至少13個連續核苷酸的區域，該連續核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個核苷酸具有至少卯％的序列互補性或至少90%的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:676-SEQIDNO:717。在本發明的另一個實施方案中，連續核苷酸區域含有至少14個連續核苷酸，該連續核苷酸與序列標識符的序列的3'端次末端的14個核苷酸具有至少85。/。的序列互補性或至少85%的序列同一性。而在本發明的另一個實施方案中，連續核苷酸區域含有至少15、16、17或18個連續核苷酸，分別與序列標識符的序列的3'端次末端的15、16、17或18個核苷酸具有至少80%的序列互補性或至少80%的序列同一性。本發明的一個實施方案是包含干擾RNA的組合物和藥物可接受載體，該干擾RNA長度為19-49個核普酸并且具有SEQIDNO:8、SEQIDNO:14-SEQIDNO:IOO、SEQIDNO:102-SEQIDNO:122、SEQIDNO:135-SEQIDNO:717、SEQEDNO:720以及SEQIDNO:721中任何一個核苷酸序列或其互補序列。在一個實施方案中，干擾RNA是分離的。術語"分離的"意指干擾RNA是從其總的天然環境游離的。本發明的另一個實施方案是應受試者需要治療高眼壓的方法。該方法包括給受試者眼部施用組合物，該組合物包含有效量的長度為19-49個核苦酸的干擾RNA和藥物可接受載體，該千擾RNA包含至少13個連續核苷酸的區域，該連續核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個核苷酸具有至少90%的序列互補性或至少卯％的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:8、SEQIDNO:14-SEQIDNO:IOO、SEQIDNO:102-SEQIDNO:122、SEQIDNO:135-SEQIDNO:717、SEQIDNO:720和SEQIDNO:721，由此治療高眼壓。本發明的另一個實施方案是減弱受試者高眼壓靶標mRNA第一種變體的表達而不減弱高眼壓把標mRNA第二種變體的表達的方法。該方法包括給受試者施用組合物，該組合物包含有效量的長度為19-49個核苷酸的干擾RNA和藥物可接受載體，該干擾RNA包含至少13個連續核苷酸的區域，所述連續核苷酸與第一種變體的3，端次末端的13個核苷酸具有至少90%的序列互補性或至少90%的序列同一性，其中第一種變體mRNA的表達被減弱，而沒有減弱第二個變體mRNA的表達，且其中笫一種變體耙標mRNA是SEQIDNO:lOl、SEQIDNO:5、SEQIDNO:124、SEQIDNO:127或SEQIDNO:129，和第二種變體靶標mRNA是SEQIDNO:134、SEQIDNO:123、SEQIDNO:125、SEQIDNO:128或SEQIDNO:130。在以上所述方法的另一個實施方案中，第一種變體把標mRNA是SEQIDNO:134、SEQIDNO:123、SEQIDNO:125、SEQIDNO:128或SEQIDNO:130，并且第二種變體耙標mRNA是SEQIDNO:101、SEQIDNO:5、SEQIDNO:124、SEQIDNO:127或SEQIDNO:129。這里描述的任何實施方案在制備用于咸弱高眼壓mRNA表達的藥物中的用途也是本發明的實施方案。附圖筒述圖1提供western印跡，用抗CA2和肌動蛋白的抗體檢測以CA2siRNA#l、#3、#4和#5、無耙向對照siRNA和緩沖液對照(-siRNA)轉染的HeLa細胞。SiRNA濃度為100nM或1nM。箭頭指示30-kDaCA2蛋白和42-kDa肌動蛋白帶的位置。發明詳述RNA千擾(RNAi)是使用雙鏈RNA(dsRNA)來沉lt^因表達的過程。盡管不期望被理論所束縛，RNAi首先通過類RNaseIII酶-dicer將長dsRNA切割成小的千擾RNA(siRNA)。SiRNA是長度通常為約19-28個核香酸或20-25個核苦酸或21-22個核苷酸并且通常含有2-核苷酸的3，突出端以及5'磷酸和3'羥基末端的dsRNA。siRNA的一條鏈被摻入核糖核蛋白復合體即RNA誘導的沉默復合體(RISC)中。RISC利用這一siRNA鏈來識別與并入的siRNA鏈至少部分互補的mRNA分子，并且然后切割這些乾標mRNA或抑制它們的翻譯。因此，摻入RISC的siRNA鏈被稱為引導鏈或反義鏈。另一條siRNA鏈(稱為傳遞鏈或有義鏈)從siRNA上被除去，并且至少與靼標RNA有部分同源性。本領域技術人員公認，原則上siRNA的任一M都能被摻入RISC中并作為引導M作用。然而，siRNA設計(例如，在反義鏈的5'端降低的siRNA雙螺旋穩定性)能夠有利于反義鏈摻入RISC中。RISC介導的具有與引導鏈至少部分互補的序列的mRNA切割導致該mRNA和由該mRNA編碼的相關蛋白質的穩態水平降低。備選地，RISC也能通過抑制翻譯來減少相關蛋白質的表達，而不切割靶標mRNA。其他RNA分子和類RNA分子也能夠與RISC相互作用并沉默基因表達。能夠與RISC相互作用的其他RNA分子的實例包括短發夾RNA(shRNA)、單鏈siRNA、微小RNA(miRNA)和dicer-底物27聚體雙螺旋。除非另有說明，術語"siRNA"指雙鏈干擾RNA。能與RISC相互作用的類RNA分子的實例包括含有一個或多個經化學修飾的核苷酸、一個或多個脫氧核糖核苷酸、和/或一個或多個非磷酸二酯鍵連接的RNA分子。對于本討論的目的而言，將所有能與RISC相互作用并參與到RISC介導的基因表達的改變中的RNA或類RNA分子稱為"干擾RNA"。因此，SiRNA、shRNA、miRNA和dicer-底物27聚體雙螺旋都是"干擾RNA，，的亞群。本發明實施方案中的干擾RNA似乎以催化方式切割靶標mRNA，即干擾RNA能夠在亞化學計量上對乾標mRNA起抑制作用。與反義療法相比，在這樣的切割條件下提供療效所需要的干擾RNA明顯減少。本發明涉及到應用干擾RNA抑制高眼壓乾標mRNA的表達，從而減少開角型青光眼或高眼壓患者的眼內壓。高眼壓靶標包括碳酸酐酶II、IV和XII;pi和P2腎上腺素能受體；乙酰膽堿酯酶；Na+/K+-ATP酶亞基和Na-K-2C1協同轉運蛋白。根據本發明，外源提供的或內源表達的干擾RNA使眼部組織中高眼壓乾標mRNA沉默。碳酸酐酶催化二氧化碳的可逆水合并且似乎對房水分泌起調節作用。碳酸酐酶抑制劑通過減少產生的流體量來降低眼內壓力。碳酸酐酶抑制劑可作為滴眼液(多佐胺(dorzolamide)、布林佐胺(brinzolamide))或片劑/膠嚢(乙酰唑胺(acetazolamide)、醋甲唑胺(methazolamide))使用。滴眼液的副作用比片劑或膠嚢少，可以更好地被很多病人所接受。AZOPT⑧(布林佐胺)1。/o的眼懸浮液是典型的碳酸肝酶抑制劑(AlconLaboratories,Inc.,FortWorth,TX)。眼部P受體阻滯劑通過減少眼內產生的流體量來降低眼內壓力。這些藥物被分為兩類非選擇性卩受體阻滯劑(漆嗎心安(timolol)、左布諾洛爾(levobunolol)、美替洛爾(metipranolol)、卡替洛爾(carteolol))和卩-1選擇性受體阻滯劑(倍他洛爾(betaxolol))。通常劑量是每次每眼一滴，一天一至兩次，取決于所使用的藥物。該產品的實例是BETOPTICS⑧(鹽酸倍他洛爾(betaxololHCl))0.25。/o的眼懸浮液(AlconLaboratories,Ine.，FortWorth,TX)。乙酰膽堿酯酶的抑制劑通過阻斷造成乙酰膽堿水解的酶(乙酰膽堿酯酶)使乙酰膽堿保留在受體位點。乙酰膽堿積聚于受體，通過睫狀肌的收縮降低眼內壓力，與直接作用的膽喊能激動劑作用相似。Na+/K+-ATP酶抑制劑例如烏本苷、一氧化氮供體和內皮素降低Na+/K+-ATP酶的活性，減小由睫狀突分泌房水的驅動力。氯化物轉運抑制劑，例如利尿酸改變小梁細胞容量以增加流出易度。除非另外注明，這里引用的核酸序列都是按5，到3'方向書寫的。這里使用的術語"核酸"，指DNA或RNA或其修飾形式，包含存在于DNA(腺嘌呤"A"、胞嘧啶"C"、鳥噤呤"G"、胸腺嘧啶"T")或RNA(腺嘌呤"A"、胞嘧咬"C"、鳥嘌呤"G"、尿嘧啶"U，，)中的嘌呤或嘧咬堿基。這里提供的干擾RNA可能包含"T"堿基，特別是在3'末端，盡管"T"4^通常并不存在于RNA中。"核酸，，包括術語"寡核苷酸，，和"多核苷酸，，并且可以指單鏈分子或雙鏈分子。雙鏈分子通過A和T堿基、C和G威基、人和11>^之間的Watson-Crick堿基配對而形成。雙鏈分子的雙鏈之間可以是部分、基本或完全的互補，并形成一個雙螺旋雜交體，其鍵強度取決于M序列互4卜的性質和禾呈度。很容易vM目應的DNA序列推斷出mRNA序列。例如，SEQIDNO:l提供對應于編碼碳酸酐酶IImRNA的DNA的有義鏈序列。mRNA序列與DNA有義妙列是一樣的，其中，"U"堿基代替"T"堿基。因此，從SEQIDNO:l可知碳酸酐酶II的mRNA序列；從SEQIDNO:2可知碳酸酐酶IV的mRNA序列；從SEQIDNO:3可知pi-腎上腺素能受體的mRNA序列；從SEQIDNO:4可知卩2-腎上腺素能受體的mRNA序列；從SEQIDNO:5可知乙酰膽堿酯酶剪接變體E4-E5的mRNA序列；從SEQIDNO:6可知Na+/K+-ATP酶a2的mRNA序列；從SEQIDNO:7可知Na畫K-2Cl協同轉運蛋白Al的mRNA序列；從SEQIDNO:101可知碳酸酐酶XII變體1的mRNA序列；從SEQIDNO:123可知乙酰膽堿酯酶剪接變體E4-E6的mRNA序列；從SEQIDNO:124可知Na+/K+-ATP酶al，變體1的mRNA序列；從SEQIDNO:125可知Na+/K+-ATP酶al，變體2的mRNA序列；從SEQIDNO:126可知Na+/K-ATP酶a3的mRNA序列；從SEQIDNO:127可知Na+/K+-ATP酶a4，變體1的mRNA序列；從SEQIDNO:128可知Na+/K+-ATP酶a4，變體2的mRNA序列；從SEQIDNO:129可知Na+/K+-ATP酶pi變體1的mRNA序列；從SEQIDNO:130可知Na+/K+-ATP酶卩l，變體2的mRNA序列;從SEQIDNO:131可知Na+/K+-ATP酶p2的mRNA序列；從SEQIDNO:132可知Na+/K+-ATP酶(33的mRNA序列；從SEQIDNO:133可知Na-K-2C1協同轉運蛋白A2的mRNA序列；從SEQIDNO:134可知碳酸酐酶XII，變體2的mRNA序列。碳酸酐酶II、IV和XII的mRNA(CA2，CA4和CA12):正如在ncbi.nlm.nih.gov上美國國立生物技術信息中心的GenBank數據庫所描述的，碳酸酐酶(CA)II、IV和XII是催化二氧化碳可逆水合的鋅金屬酶大家族成員。碳酸酐酶涉及重要的生理過程例如代謝組織和肺部之間C(V碳酸氫鹽的呼吸和運輸、pH和C02的內穩態、在多種組織和器官中的電解質分泌、生物合成反應(如糖異生、脂肪生成和尿素生成)、骨吸收、鈣化作用和肺瘤發生。已鑒定出14種不同的碳酸酐酶同工酶具有不同的亞細胞定位和組織分布。碳酸酐酶II;U&質同功酶，而碳酸酐酶IV和XII是膜結合的。已鑒定出編碼CA-XII基因的不同亞型的兩個轉錄變體；變體1編碼較長的亞型，而變體2與變體1轉錄物相比缺少一個內編碼的外顯子，從而與亞型l相比缺少了ll個氨基酸的區段。全身施用碳酸酐酶抑制劑(CAI)有利于降低青光眼特征的升高的眼內壓(IOP)。存在于晚狀突的同工酶抑制作用(磺胺易感同工酶CAII和CAIV)降低碳酸氫鹽和房水分泌的速率，從而導致IOP降低25-30%。然而，存在于眼外組織的多種CA同功酶的抑制作用產生副作用，包括四肢的麻痹和麻刺感、金屬味、抑郁癥、疲乏、不適、重量減輕、性欲減少、腸胃道刺激、代謝性酸中毒、腎結石和短暫性近視。GenBank數據庫以登記號NM—000067提供CA2的DNA序列，其在"序列表"中被提供為SEQIDNO:l。SEQIDNO:l提供DNA的有義鏈序列，對應于編碼CAII的mRNA(除了"1">^替代"11">5^)。CAII的編碼序列來自核苷酸66-848。與以上所迷的CA2mRNA序列相當的是選擇性剪接體、等位形式、同工酶或其同源物。同源物指來源于其它哺乳動物物種并且與SEQIDNO:l同源的CA2mRNA(即直系同源物)。與SEQIDNO:l有關的CA2核酸序列包括GenBank登記號M77181、X03251、BC011949、BC035424、CR536526、CR54187S、J03037、M36532、S69526和Y00339的那些序列。GenBank數據庫以登記號NM—000717提供CA4的DNA序列，在"序列表，，中以SEQIDNO:2提供。SEQIDNO:2提供DNA的有義絲列，對應于編碼CAIV的mRNA(除了"T"^5^替代了"U"堿基)。CAIV的編碼序列來自核苷酸47-985。與以上所述的CA2mRNA序列相當的是選擇性剪接體、等位形式、同工酶或其同源物。同源物指來源于其它哺乳動物物種并且與SEQIDNO:l同源的CA2mRNA(即直系同源物)。與SEQIDNO:2有關的CA4核酸序列包括GenBank登記號L10955、BC057792、BC069649、BC074768、CR541766和M83670的那些序列，GenBank數據庫以登記號NM—001218提供CA12的DNA序列，在"序列表，，中以SEQIDNO:lOl提供。SEQIDNO:101提供DNA的有義鏈序列，對應于編碼CAXII變體1的mRNA(除了"1">^替代了"U">5^)。CAXII變體1的編碼序列來自核苷酸157-1221。與以上所述的CA12變體1的mRNA序列相當的是選擇性剪掩體、等位形式、同工酶或其同源物。同源物指來源于其它哺乳動物物種并且與SEQIDNO:101同源的CA12mRNA(即直系同源物)。GenBank數據庫為以登記號NM—206925提供CA12變體2的DNA序列，在"序列表，，中以SEQIDNO:134提供。SEQIDNO:134提供DNA的有義鏈序列，對應于編碼CAXII變體2的mRNA(除了"T"堿基替代了"U"CAXII變體2的編碼序列來自核苷酸157-1188。與變體1相比，變體2缺少內編碼的外顯子。與以上所述的CA12變體2mRNA序列相當的是選擇性剪接體、等位形式、同工酶或其同源物。同源物指來源于其它哺乳動物物種并且與SEQIDNO:134同源的CA12mRNA(即直系同源物)。腎上腺素能受體-pi和-p2mRNA(ADRB1和ADRB2):正如在ncbi.nlm.nih.gov上美國國立生物4支術信息中心的GenBank數據庫所描述的，腎上腺素能受體(亞型al、a2、pi和(52)是介導荷爾蒙腎上腺素和神經遞質去甲腎上腺素的生理效應的G蛋白偶聯受體的原型家族。GenBank數據庫以登記號NM—000684提供ADRB1的DNA序列，在"序列表"中以SEQIDNO:3提供。SEQIDNO:3提供DNA的有義鏈序列，對應于編碼pi-腎上腺素能受體的mRNA(除了"T"g替代了"U"堿基)。PI-腎上腺素能受體的編碼序列是核苷酸87-1520。與以上所述的ADRB1mRNA序列相當的是選擇性剪接體、等位形式或其同源物。同源物是指來源于其它哺乳動物物種并且與SEQIDNO:3同源的ADRB1mRNA(即直系同源物)。與SEQIDNO:3有關的ADRB1核酸序列包括GenBank登記號AF169006、AF169007、AY567837和J03019的那些序列。GenBank數據庫以登記號NM—000024提供ADRB2的DNA序列，在"序列表"中以SEQIDNO:4提供。SEQIDNO:4提供DNA的有義鏈序列，對應于編碼p2-腎上腺素能受體的mRNA(除了"T"堿基替代了"U")。P2-腎上腺素能受體的編碼序列是核苦酸220-1461。與以上所述的ADRB2mRNA序列相當的是選擇性剪接體、等位形式或其同源物。同源物是指來源于其它哺乳動物物種的并與SEQIDNO:4同源的ADRB2mRNA(即直系同源物)。與SEQIDNO:4有關的ADRB2核酸序列包括GenBank登記號AF022953、AF022954、AF022955、AF022956、AF169225、AF202305、AF203386、AY011291、J02960、Y00106、AY136741、BC012481、BC063486、BC073856、M15169和X04827的那些序列。乙酰膽堿酯酶剪接變體E4-E6和E4-E5(ACHE):正如在ncbi.nlm.nih.gov上美國國立生物技術信息中心的GenBank數據庫所描述的，乙酰膽堿酯酶在神經肌肉接頭和腦膽喊能突觸水解神經遞質乙酰膽堿，從而終止信號傳輸。同時也發現在紅血細胞膜上，其構成了Yt血型抗原。乙酰膽堿酯酶以多種分子形式存在，其具有相似的催化性能，但在其寡聚體組裝和對細胞表面的細胞翁附模式上不同。它是由單個ACHE基因編碼的，且基因產物的結構多樣性來自選擇性的mRNA剪接以及催化亞基和結構亞基的翻譯后締合。在腦、肌肉和其它組織中發現的乙酰膽堿酯酶的主要形式是親水型，該親水型與膠原性亞基或含脂的結構亞基形成二硫鍵連接的寡聚體。另一方面，主要表達于紅細胞組織的選擇性剪接體在C-末端不同，且含有帶GPI-錨定位點的可切割的疏水肽。它通過翻譯后加入的磷酸肌醇(PI)的部分與膜締合。剪接變體E4-E6是主要的轉錄物并且產生于外顯子4至外顯子6的剪接。剪接變體E4-E5產生于外顯子4至外顯子5的選擇性剪接。GenBank數據庫以登記號NM—015831提供ACHE剪接變體E4-E5的DNA序列，在"序列表，，中以SEQIDNO:5提供。SEQIDNO:5提供DNA的有義鏈序列，對應于編碼乙酰膽堿酯酶E4-E5的mRNA(除了"T"堿基替代了"U"堿基)。乙酰膽堿酯酶E4-E5的編碼序列是核苷酸95-1948。與以上所述的ACHEmRNA序列相當的是選擇性剪接體、等位形式或其同源物。同源物是指來源于其它哺乳動物物種并與SEQIDNO:5同源的ACHEmRNA(即直系同源物)。與SEQIDNO:5有關的ACHE核^列包括GenBank登記號ACOl1895、AF002993、AF312(B2、AY750146、CH236956、L06484、L42812、S71129、AF334270、BC026315、BC036813、28M55040和NM一000665那些序列，GenBank數據庫以登記號NM—000665提供ACHE剪接變體E4-E6的DNA序列，在"序列表，，中以SEQIDNO:123提供。SEQIDNO:123提供DNA的有義鏈序列，對應于編碼乙酰膽堿酯酶E4-E6變體的mRNA(除了，，T，，堿基替代了"U")。乙酰膽堿酯酶E4-E6的編碼序列是核苷酸95-1939'與以上所述的ACHEmRNA序列相當的是選擇性剪接體、等位形式或其同源物。同源物是指來源于其它哺乳動物物種的并與SEQIDNO:123同源的ACHEmRNA(即直系同源物)。與SEQIDNO:123有關的ACHE核酸序列包括GenBank登記號NM—015831、AC011895、AF002993、AF312032、AY750146、CH236956、L06484、L42812、S71129、AF334270、BC026315、BC036813和M55040那些序列。Na+/K+-ATP酶a和pmRNA(ATPl-Al變體l、-Al變體2、-A2、-A3、-A4變體1、-A4變體2、-Bl變體1、-B1變體2、-B2和-B3):正如在GenBank數據庫所描述，由所述基因編碼的蛋白質屬于P-型陽離子轉運ATP酶家族，并屬于Na+/K+-ATP酶亞家族。Na+/K+-ATP酶是整合的膜蛋白，負責建立和維持用于鈉離子和鉀離子跨越質膜的電化學梯度。這些梯度對于滲透調節、各種有機和無機分子的鈉偶聯的轉運以及神經和肌肉的電興奮性是必不可少的。該酶由兩個亞基組成，即大的催化亞基(a或A)和較小的糖蛋白亞基(p或B)。Na+/K+-ATP酶的催化亞基由多基因編碼。GenBank數據庫以登記號NM—000701提供ATP1A1變體1的DNA序列，在"序列表"中以SEQIDNO:124提供。SEQIDNO:124提供DNA的有義,列，對應于編碼Na+/K+-ATP酶亞基Al變體1的mRNA(除了"T"^J^替代了"U"堿基)。Na+/K+-ATP酶亞基Al變體1的編碼序列是核苷酸299-3370。與以上所述的ATP1A1變體1mRNA序列相當的是選擇性剪接體、等位形式或其同源物。同源物是指來源于其它哺乳動物物種并且與SEQIDNO:124同源的ATP1A1變體1mRNA(即直系同源物)。GenBank數據庫以登記號NM_001001586提供ATP1A1變體2的DNA序列，在"序列表"中以SEQIDNO:125提供。SEQIDNO:125提供DNA的有義鏈序列，對應于編碼Na+/K+-ATP酶亞基Al變體2的mRNA(除了，，T"堿基替代了"U"^&)。Na+/K+-ATP酶亞基Al變體2的編碼序列是核苷酸299-2344。與以上所述的ATP1A1變體2mRNA序列相當的是選擇性剪接體、等位形式或其同源物。同源物是指來源于其它哺乳動物物種并且與SEQIDNO:125同源的ATP1A1變體2mRNA(即直系同源物)。GenBank數據庫以登記號NM—000702提供ATP1A2的DNA序列，在"序列表，，中以SEQIDNO:6提供。SEQIDNO:6提供DNA的有義M^列，對應于編碼Na+/K+-ATP酶A2亞基的mRNA(除了，，T"堿基替代了"U">5^J0。Na+/K+-ATP酶A2亞基的編碼序列^1核苷酸105-3167。與以上所述的ATP1A2mRNA序列相當的是選擇性剪接體、等位形式或其同源物。同源物是指來源于其它哺乳動物物種并且與SEQIDNO:6同源的ATP1A2mRNA(即直系同源物)。與SEQIDNO:6有關的ATP1A2核,列包括GenBank登記號J05096、M27578、AB018321、AK091617、AK124581、AK126573、AL831991、AL831997、BC013680、BC047533、BC052271、M16795和Y07494的那些序列。GenBank數據庫以登記號NM—152296提供ATP1A3的DNA序列，在"序列表，，中以SEQIDNO:126提供。SEQIDNO:126提供DNA的有義鏈序列，對應于編碼Na+/K+-ATP酶A3亞基的mRNA(除了，，T"堿基替代了"U"堿基)。3+/1<:+-人1酶A3亞基的編碼序列是核苷酸155-3196。與以上所迷的ATP1A3mRNA序列相當的是選擇性剪接體、等位形式或其同源物。同源物是指來源于其它哺乳動物物種并且與SEQIDNO:126同源的ATP1A3mRNA(即直系同源物)。GenBank數據庫以登記號NM—144699提供ATP1A4變體1的DNA序列，在"序列表"中以SEQIDNO:127提供。SEQIDNO:127提供DNA的有義鏈序列，對應于編碼Na+/K+-ATP酶A4亞基變體1的mRNA(除30了"1">$^替代了"11"堿基)。Na+/K+-ATP酶A4亞基變體1的編碼序列是核普酸469-3558。與以上所述的ATP1A4變體1mRNA序列相當的是選擇性剪接體、等位形式或其同源物。同源物是指來源于其它哺乳動物物種并且與SEQIDNO:127同源的ATP1A4變體1mRNA(即直系同源物)。GenBank數據庫以登記號NM—01001734提供ATP1A4變體2的DNA序列，在"序列表，，中以SEQIDNO:128提供。SEQIDNO:128提供DNA的有義鏈序列，對應于編碼Na+/K+-ATP酶A4亞基變體2的mRNA(除了，，T，，^^替代了"U"堿基)。Na+/K+-ATP酶A4亞基變體2的編碼序列是核普酸111-608。與以上所述的ATP1A4變體2mRNA序列相當的是選擇性剪接體、等位形式或其同源物。同源物是指來源于其它哺乳動物物種并且與SEQIDNO:128同源的ATP1A4變體2mRNA(即直系同源物)。GenBank數據庫以登記號NM—001677提供ATP1B1變體1的DNA序列，在"序列表，，中以SEQIDNO:129提供。SEQIDNO:129提供DNA的有義鏈序列，對應于編碼Na+/K+-ATP酶Bl亞基變體1的mRNA(除了，，T，，4^替代了，，U，，磁J^)。Na+/K+-ATP酶Bl亞基變體1的編碼序列是核苷酸122-1033。與以上所述的ATP1B1變體1mRNA序列相當的是選擇性剪接體、等位形式或其同源物。同源物是指來源于其它哺乳動物物種并且與SEQIDNO:129同源的ATP1B1變體1mRNA(即直系同源物)。GenBank數據庫以登記號NM—001001787提供ATP1B1變體2的DNA序列，在"序列表，，中以SEQIDNO:130提供。SEQIDNO:130提供DNA的有義^^列，對應于編碼Na+/K"-ATP酶Bl亞基變體2的mRNA(除了"T，，^^替代了"U">^J0。Na+/K+-ATP酶Bl亞基變體2的編碼序列是核苷酸122-1027。與以上所述的ATP1B1變體2mRNA序列相當的是選擇性剪接體、等位形式或其同源物。同源物是指來源于其它哺乳動物物種并且與SEQID31NO:130同源的ATP1B1變體2mRNA(即直系同源物)。GenBank數據庫以登記號NM_001678提供ATP1B2的DNA序列，在"序列表，，中以SEQIDNO:131提供。SEQIDNO:131提供DNA的有義鏈序列，對應于編碼Na+/K+-ATP酶B2亞基的mRNA(除了"T，M5^替代了"U"堿基)。Na+/K+-ATP酶B2亞基的編碼序列是核苷酸584-1456。與以上所述的ATP1B2mRNA序列相當的是選擇性剪掩體、等位形式或其同源物。同源物是指來源于其它哺乳動物物種并且與SEQIDNO:131同源的ATP1B2mRNA(即直系同源物)。GenBank數據庫以登記號NM_001679提供ATP1B3的DNA序列，在"序列表"中以SEQIDNO:132提供。SEQIDNO:132提供DNA的有義鏈序列，對應于編碼Na+/K+-ATP酶B3亞基的mRNA(除了"T，，堿基替代了，，U，，礎J^)。Na+/K+-ATP酶B3亞基的編碼序列是核苷酸175-1014。與以上所述的ATP1B3mRNA序列相當的是選擇性剪接體、等位形式或其同源物。同源物是指來源于其它哺乳動物物種并且與SEQIDNO:132同源的ATP1B3mRNA(即直系同源物)。Na-K-2C1協同轉運蛋白(SLC12A1和SLC12A2):鈉-鉀-氯化物協同轉運蛋白(Na-K-2Cl協同轉運蛋白或NKCC)便于Na+、K+和CT離子的偶聯協同轉運i^越質膜。有兩種亞型NKCC1和NKCC2。NKCC1在包括眼睛的大多數組織中表達。相比之下，NKCC2主要在腎中表達，然而，有證據證明這一亞型在眼睛中也有較低水平的表達。NKCC1由SLC12A2基因(溶質載體家族12，成員2)編碼且NKCC2由SLC12A1基因編碼。小梁細胞具有有力的Na-K-2C1協同轉運蛋白。該協同轉運蛋白的活性由神經遞質和激素調節，如去甲腎上腺素降低協同轉運活性，或血管加壓素增強協同轉運活性。GenBank數據庫以躬己號NM—000338提供SLC12A1的DNA序列，在"序列表，，中以SEQIDNO:7提供。SEQIDNO:7提供DNA的有義妙列，對應于編碼Na-K-2C1協同轉運蛋白NKCC2的mRNA(除了"T，M5^替代了"U，，4^i0。Na-K-2C1協同轉運蛋白NKCC2的編碼序列是核苷酸20-3319。與以上所述的Na-K-2C1NKCC2協同轉運蛋白mRNA序列相當的是選擇性剪接體、等位形式或其同源物.同源物指來源于其它哺乳動物物種并且與SEQIDNO:7同源的Na-K-2C1協同轉運蛋白NKCC2mRNA(即直系同源物)。與SEQIDNO:7有關的SLC12A1核斷列包括GenBank登記號AJ005332、AJ005333、AB032525、AB032527、BC040138、BX647067、BX647484和U58130的那些序列。GenBank數據庫以登記號NM_001046提供SLC12A2的DNA序列，在"序列表，，中以SEQIDNO:133提供。SEQIDNO:133提供DNA的有義鏈序列，對應于編碼Na-K-2Cl協同轉運蛋白NKCC1的mRNA(除了"T"堿基替代了"U")。Na-K-2C1協同轉運蛋白NKCC1的編碼序列是核苷酸165-3803,與以上所述的Na-K-2C1NKCC1協同轉運蛋白mRNA序列相當的是選擇性剪接體、等位形式或其同源物。同源物指來源于其它哺乳動物物種并且與SEQIDNO:133同源的Na-K-2C1協同轉運蛋白NKCC1mRNA(即直系同源物)。mRNA的減弱表達這里使用的短語"mRNA的減弱表達"，意指施用或表達一定量的千擾RNA(如siRNA)，通過切割mRNA或直接抑制翻譯來減少靶標mRNA翻譯成蛋白質，靶標mRNA或相應蛋白質的表達的降低通常稱為"敲除"，并且是相對于所報道的施用或表達無靶標對照RNA(如無耙標對照siRNA)后的水平。這里的實施方案考慮到包括并在50%-100%之間的表達量的敲除。然而，對于本發明的目的而言，不必要達到這樣的敲除水平。在一個實施方案中，施用靶向高眼壓耙標之一的單獨的千擾RNA以降低IOP。在其它實施方案中，施用靶向相同的高眼壓耙標(如CA2)的兩個或多個千擾RNA以降低IOP。還有一些實施方案中，施用靼向多個高眼壓靶標(如CA2和ADRB2)的兩個或多個干擾RNA以降低IOP。通常通過使用定量聚合酶鏈式反應(qPCR)擴增測定mRNA水平，或免疫吸附試驗(ELISA)測定蛋白質水平來評估敲除。蛋白質水平的分析為mRNA切割和翻譯抑制兩者提供了評估。測定敲除的其它技術包括RNA溶液雜交、核酸S^護、northern雜交、用基因芯片的基因表達監控、抗體結合、放射性免疫測定以及熒光激活的細胞分析。通過觀察青光眼癥狀的改善，例如眼內壓的改善、視野喪失的改善或視盤變化的改善，推斷在人體或哺乳動物中也存在這里所述的靶標的抑制作用。本發明實施方案中的干擾RNA似乎以催化方式切割耙標mRNA，即干擾RNA能夠在亞化學計量上對乾標mRNA起抑制作用。與反義療法相比，在這樣的切割條件下提供療效所需要的干擾RNA明顯減少。干擾RNA:在本發明的一個實施方案中，干擾RNA(如siRNA)有有義鏈和反義鏈，并且有義鏈和反義鏈包含至少19個核苷酸的至少近乎完全連續互補的區域。在本發明的另一個實施方案中，干擾RNA包含至少13、14、15、16、17或18個連續核苷酸的區域，分別與mRNA中相應靶標序列的3，端次末端的13、14、15、16、17或18個核苷酸有一定百分比的序列互補性或序列同一性。干擾RNA每條鏈的長度包含19-49個核苷酸，還可能包含19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48或49個核普酸的長度。siRNA的反義鏈是siRNA的活性導向劑，因為反義鏈被摻入RISC中，從而使RISC識別與反義siRNA鏈至少有部分互補的耙標mRNA以用于切割或抑制翻譯。在本發明中，通過使用可獲得的設計工具選擇耙標mRNA序列中的干擾RNA靶標序列(如siRNA把標序列)。通過轉染表達乾標mRNA的細胞iM^驗對應于這些靼標序列的干擾RNA，隨后如上所述通過敲除來評估。選擇產生50%-100%表達的敲除的干擾RNA用作進一步分析。選擇siRNA的靶標序列的技術由Tuschl，T.等人，"ThesiRNAUser34Guide",修訂于2004年5月6日提供，可獲于Rockefeller大學網站；也可由Ambion公司的Ambion網站上"siRNADesignGuidelines"中的TechnicalBulletin#506提供；也可以通過其它基于網絡的設計工具，例如，Invitrogen、Dharmacon、IntegratedDNATechnologies、Genscript或Proligo網站獲知，起始搜索參數可包括介于35%-55%之間的G/C含量和19-27個核普酸之間的siRNA長度。靶標序列可以定位于mRNA的編碼區或定位于mRNA的5'或3'端非翻譯區。在一個實施方案中，碳酸酐酶II的19個核苷酸的DNA耙標序列存在于SEQIDNO:l的核苷酸232-250中5'-CCCTGAGGATCCTCAACAA-3'SEQIDNO:8。用作靶向SEQIDNO:8的相應mRNA序列并且具有21個核苷酸鏈和2-核苷酸3'突出端的本發明的siRNA是5，-CCCUGAGGAUCCUCAACAA跳3，SEQIDNO:93-NNGGGACUCCUAGGAGUUGUU-5'SEQIDNO:10。每個"N，，殘基可以是任何核苷酸(A、C、G、U、T)或修飾的核苷酸。3'末端可以具有的"N，，殘基數目在1、2、3、4、5和6之間并包括它們。任一^Ji的"N"殘基可以相同(如UU、AA、CC、GG或TT)也可以不同(如AC、AG、AU、CA、CG、CU、GA、GC、GU、UA、UC或UG)。3'突出端可以相同也可以不同。在一個實施方案中，兩^^都有3，UU突出。耙向SEQIDNO:8的相應mRNA序列并且具有21個核苷酸鏈和在每M上有3'UU突出端的本發明的siRNA是5'畫CCCUGAGGAUCCUCAACAAUU畫3'SEQIDNO:ll3'-UUGGGACUCCUAGGAGUUGUU-5'SEQIDNO:12。干擾RNA也可能有5'核苷酸的突出端或其可能有平末端。靶向SEQIDNO:8的相應mRNA序列并且具有19個核苷酸鏈和平末端的本發明的siRNA是5，-CCCUGAGGAUCCUCAACAA-3，SEQIDNO:7223國GGGACUCCUAGGAGUUGUU畫5'SEQIDNO:723.雙鏈干擾RNA(如siRNA)的鏈可以連結形成一個發夾或莖環結構(如shRNA)。靶向SEQIDNO:8的相應mRNA序列并且具有19個>5^對的雙鏈莖區域和3'UU突出端的本發明的shRNA是/\/HUH本領域普通技術人員/^PN是核苷酸A、T、C、G、U或其修飾形式。環中核苷酸N的數目在3-23或5-15或7-13或4-9或9-11之間并包括它們，或者核苷酸N的數目是9。環中的一些核苷酸可能涉及與環中其他核苷酸的堿基對相互作用。可用來形成環的寡核苷酸序列的實例包括5，畫UUCAAGAGA-3'(Brummelkamp，T.R.等人，(2002)Science296:550)和5'誦UUUGUGUAG誦3，(Castanotto，D.等人，(2002)RNA8:1454)。本領域技術人員公認產生的單鏈寡核苷酸形成莖環或發夾結構，該結構包含能與RNAi系統相互作用的雙鏈區域。上面確定的siRNA靶標序列能在3'末端延伸以利于dicer底物27聚體雙螺旋的設計。通過6個核苷酸在碳酸酐酶I1DNA序列(SEQIDNO:l)中識別的19個核苷酸的DNA靶標序列(SEQIDNO:8)的延伸，得到25個核苷酸的DNA靶標序列，其存在于SEQIDNO:1中的核苷酸232-256:5'國CCCTGAGGATCCTCAACAATGGTCA誦3，SEQIDNO:724。靶向SEQIDNO:724的相應mRNA序列的本發明的dicer底物27聚體雙螺狄5國CCCUGAGGAUCCUAACAAUGGUCA-3，SEQIDNO:718S'-UUGGGACUCCUAGGAGUUGUIIACCAGU-S'SEQIDNO:719。有義鏈3'末端的兩個核苷酸(即SEQIDNO:718的CA核苦酸)可能是用于提高的加工的脫氧核苷酸。正如在這里提供的，從19-21個核苷酸耙標序列的dicer底物"聚體雙螺旋的設計在整合DNA技術(IDT)網站和Kim，D.-H.等人(February，2005)NatureBiotechnology23:2;222-226中有進一步的討論。當通過化學合成產生干擾RNA時，在一條或兩^(如果存在)的5'末端核苷酸5'位置的磷酸化作用能增強結合的RKC復合體的siRNA有效性和特異性，但是因為磷酸化作用能在細胞內發生，所以并不需要進行磷酸化。表1列出CA2、CA4以及CA12變體1和變體2的DNA序列(分別是SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:101和SEQIDNO:134)中的siRNA靶標序列的實例，以如上闡明的方式從其設計本發明的siRNA。CA2、CA4以及CA12變體l和變體2分別編碼碳酸酐酶n、IV以及XII變體1和2。表1.CA2、CA4和CA12的siRNA乾標序列<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table>TGCCATTAGCATGCCTCAT2973216GCCATTA(3CATGCCTCATG2974217TAGCATGCCTCATGCATCA29792182993219表2列出ADRB1和ADRB2DNA序列(分別是SEQIDNO:3和SEQIDNO:4)中的siRNA靶標序列的實例，按如上闡明的方式從其中設計本發明的siRNA。如上所述，ADRBl和ADRB2分別編碼卩l-和p2-腎上腺素能受體。表2.ADRB1和ADRB2的siRNA把標序列M)RB1乾標序列起始核苷酸位置，參考SEQIDNO:3SEQID恥TCCTTCTTCTGCGAGCTGT46833TCGAGACCCTGTGTGTCAT52334GCATCATGGCCTTCGTGTA79935GA&CGAG6AGATCTGTGTT156336ACGAG6AGATCTGTGTTTA15S537GGAGATCTGTGTTTACTTA156938GATAGCA(3GTGAACTCGAA159339CCCACAATCCTCGTCTGAA161340CCACAATCCTCOTCTGAAT161441TCTGAATCATCCGAGGCAA162642GCAATGTGCTGGTGATCGT310220TGATCOTGGCCATCGCCAA322221AAGTGCTGCGACTTCGTCA726222CGTCCGTAGTCTCCTTCTA769223CCGTA(3TCTCCTTCTACGT772224ATCATGGCCTTCGTGTACC801225TCATG(3CCTTCGTOTACCT802226CCTCG(3AATCCAAGGTGTA1501227TOTGTTTACTTAA(3ACCGA1576228GTGTTTACTTAAGACCGAT1577229GTTTACTTAAGACCGATAG1579230TTTACTTAAGACCGATAGC1580231TTACTTAA說CCGATAGCA1581232TAAGACCGATAGCAGGT說1586233ACCGATA(3CAGGTGAACTC1590234C(3ATAGCA66TGAACTCGA1592235ATAGCAGGTGAACTCGAAG1594236CACAATCCTCGTCTGAATC161523741<table>tableseeoriginaldocumentpage42</column></row><table>ATGTATCTACCTCACTATT1758271CCTCACTATTCAA(3TATTA1767272TAATATATTGCTGCTGOTA1790273AATATATTGCTGCTCSGTAA1791274ATATATTGCTGCTGGTAAT1792275TATATT(3CT(3CTGOTAATT1793276CTGGTAATTTGTATCTGAA1803277GAOTATCTCGGACCTTTCA1861278C郞ACCTTTCAGCTGTGAA1869279CGAGCAAAGGTCTAAAGTT197128019722811979282表3列出剪接變體E4-E5和E4-E6的ACHEDNA序列(分別是SEQIDNO:S和SEQIDNO:lM)中siRNA靶標序列的實例，按如上闡明的方式從其中設計本發明的siRNA.如上所述，ACHE編碼乙酰膽堿酯酶。表3.ACHE的siRNA乾標序列ACHEE4-E5乾標序列起始核苷酸位置，參考SEQIDBTOs5SE(2IDNOsCCAGAGTGTCTGCTACCAA38253GCTACCAATATGTGGACAC39354CCAATATGTGGACACCCTA39755GCTGOTGTCCATGAACTAC62256TCATCAACGCGGGAGACTT113157GGTCTACGCCTACOTCTTT145958153059225160288561GCTGCAAATAAACTGTTAC288662AGTGTCT(3CTACCAATATG386283A說CAAC6AGTCTCTCATC1231284GGCTGTGGTCCTGCATTAC1315285CTTCCTCCTCAAACCGAGA2047286TCCTCCTCAAACCGAGAGA2049287CCTCAAACCGAGAGACTCA2053288TCAAACCGAGAGACTCACA2055289AAACCGAGAGACTCACACT2057290CCACGCCTTTGTTOTTTGA2125291CACGCCTTTGTTGTTTGAA2126292ACOCCTTTGTTOTTTGA&T212729343GGCTATAACG6TCAACCAT2250294TATAACGGTCAACCATTTC2253295CGGTCAACCATTTCT(3TCT2258296GTCAACCATTTCTGTCTCT2260297CCOTCTTCCGGTCATTCTT2318298CCTCTCGTCTTTCGCACAT2395299TCTCOTCTTTCGCACATTC2397300TTTC(3CACATTCTCCT(3AT2404301TTCGCACATTCTCCTGATC2405302AGAACCAGTTCGACCACTA2643303AACCAGTTCGACCACTACA2645304CTGCAAATAAACTGTTACA2887305ACHEE4-E5和E4-E6乾標序歹'J起始核苷酸位置，參考SEQID恥5SEQIDNOsTAGACGCTACAACCTTCCA366306CGCTACAACCTTCCAGAGT370307AGAGTGTCTGCTACCAATA384308GAGTGTCT(3CTACCAATAT385309CTGTCCTCGTCTGGATCTA525310ATGGCCGCTTCTTG6TACA588311CGACATCAGTGACGCTOTT768312GCACGTGCTGCCTCAAGAA1045313CAC6TGCTGCCTCAAGAAA1046314GAAAGCGTCTTCCG(3TTCT1061315TGTGGTAGATGGAGACTTC1090316GACAAC(3AGTCTCTCATCA1232317AGGCTGTGGTCCTGCATTA13"318GCTGTGGTCCTGCATTACA1316319GTCTACGCCTACGTCTTTG1460320TCTACGCCTACGTCTTTGA1461321CTACGCCTACGTCTTTGAA1462322CGGCTACGAGATCGAGTTC1528323CAGCGACTGATGCGATACT1607324郞CTCAGCAGTACGTTAGT1705325ACTACGTTAGTCTGGACCT1713326ACHEE4誦E6^lfc沖示序歹iJ起始核苷酸位置，參考SEQIDNO:123SEQID恥sACATGGTGCACTG(3AAC!AA1875327AGAACCAGTTCGACCACTA1890328GAACCAGTTCGACCACTAC1891329GGCTATAACACAGACGAGC201133044GCTATAAC&CAGACGAGCC2012331GCTGCAAATAAACTGTTAC21333322134333表4列出Na+/K+-ATP酶A和B亞基DNA序列(ATP1Al變體1，SEQIDNO:124;ATP1A1變體2，SEQIDNO:125;ATP1A2，SEQIDNO:6;ATP1A3,SEQIDNO:126;ATP1A4變體1，SEQIDNO:127;ATP1A4變體2,SEQIDNO:128;ATP1B1變體1，SEQIDNO:129;ATP1B1變體2,SEQIDNO:130;ATP1B2，SEQIDNO:131和ATP1B3,SEQIDNO:132)中siRNA靶標序列的實例，按如上闡明的方式從其中i更計本發明的siRNA'表4.ATP1A和ATP1B的siRNA耙標序列ATP1A1變體1靶標序列起始核苷酸位置，參考SEQIDNO:124SEQID恥s2208334TGCCAAGGCCTGCGTAGTA2275335TAAAGGACATGACCTCCGA2307336AGCAAGCTGCT(3ACATGAT252S337ACAT(3ATTCTTCTGGATGA2538338GTC(3TCTGATCTTTGATAA2592339CTTATACCTTAACCAGTAA.2628340GGATCAACGATGTGGAAGA2979341ACGATGTGGAAGACAGCTA2985342CC說CTTGGTCATCTCTAA3093343TA66AAAGCACC6CAGCAT3474344AGAC(3TCCTGGAATGAAGC3504345GACGTCCTGGAATGAA6CA3505346ACGTCCTGGAATGAAGCAT35063473518348ATP1A1變體1和變體2的共有靶標序列起始核香酸位置，養考SEQIDNO:124SEQID恥TTCAGAACAAGGTGATAAA343349442350GGTGCTATCAGCCGTTGTA700351TCAGCCGTTGTAATC&TAA707352811353CAGAATCATATCTGCAA&T907354CACGTGGTATTCTTGTCTA1059355CTGCTTAGTGAAGAACTTA13"35645<table>tableseeoriginaldocumentpage46</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage47</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage48</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage49</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage51</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage52</column></row><table>TAATATGCCGTGCTATGTA1325639AATATGCCGTGCTATGSTAA1326"0ATATGCCGTGCTATGTAAA1327641GCCGTGCTATGTAAATATT1331642T(3CAA(3AAAT(3TGGTATGT1437643ATGCTGAATTA(3CCTCGAT154864415716451785646GCAGACTGTG說CTGTAAT1786647CA說CT(3TGGACT(3TAATA1787648表5列出SLC12A1和SLC12A2的DNA序列(分別是SEQIDN0:7和SEQIDNO:13"中siRNA靶標序列的例子，按如上闡明的方式從其中設計本發明的siRNA。如上面所述，SLC12A1和SLC12A2分別編碼Na-K-2C1協同轉運蛋白NKCC2和NKCC1。表5.SLC12A1的siRNA把標序列Sl!C12Alfe標序歹'J起始核苷酸位置，參考SEQIDNO:7SEQIDNOsCCACCATAGTAACGACAAT67573GGA2VTGGAATGGGA6GCAA974746GGATGAACTGCAAT郞TT137375CCATGCCTCTTATGCCAAA178076CCT(3CTCTCCTGGACATAA210277GCATCTGCTGTGAAGTCTT2151786CCTCAG6CTTA(3GAAGAA23157966AAGCGACTATCAAAGAT2542806CTGGCAA(3TT6AACATTA2S0981GCAAGAAAG郞ATCCATAT319782TAATACCAATC(3CTTTCAA67649ACCAATCGCTTTCAAOTTA71650CAATC(3CTTTCAAGTTAGT73651ATA6AGTACTATCGTAACA353652CCASCCTGCTTGAGATTC&405653CTGTAGTAGATCTACTTAA8S4S54ACCAATGACATCCGGATTA911655CCAAT說CATCCGGATTAT912656CAATGACATCCG(3ATTATA913657GGCTATGACTTCTCAA(3AT1409S58GCCTCATATGCACTTATTA1748659AGACCTGCGTATG6AATTT1811S6053<table>tableseeoriginaldocumentpage54</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage55</column></row><table>如上面的例子所述，本領域任一技術人員能夠使用表l-5中提供的靶標序列信息來設計干擾RNA，該千擾RNA具有比表1-5中提供的序列更短或更長的長度，通過參考在SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:101、SEQIDNO:123、SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQIDNO:128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131、SEQIDNO:132、SEQIDNO:133或SEQIDNO:134中的序列位置，以及對分別與SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:101、SEQIDNO:123、SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQIDNO:128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131、SEQIDNO:132、SEQIDNO:133或SEQIDNO:134互補或近似互補的核苷酸的增加或缺失而實現。由siRNA和其他形式的干擾RNA引導的耙標RNA切割反應是高度序列特異的。通常，這里所述的用作抑制mRNA的siRNA實施方案是siRNA,其包含在序列上與耙標mRNA的部分一致的有義核苷酸鏈和與耙標mRNA的部分完全互補的反義核苷酸鏈。然而，對于實施本發明不需要反義siRNA鏈和耙標mRNA之間或反義siRNA鏈與有義siRNA鏈之間100%的序列互補。因此，舉例而言，本發明允許由于基因突變、菌抹多態性或進化趨異而可以預計的序列變化。在本發明的一個實施方案中，siRNA的反義鏈與乾標mRNA具有至少19個核苷酸的至少近乎完全連續互補。這里使用的"近乎完全"意指siRNA的反義鏈與耙標mRNA的至少部分是"基本互補的，，，并且siRNA的有義鏈與靶標mRNA的至少部分是"基本一致的"。如本領域所有普通技術人員公知，"同一性"是指通過匹配序列之間核苷酸的順序和特征來確定核苷酸序列之間的序列關聯程度。在一個實施方案中，siRNA的反義鏈與粑標mRNA序列具有80%和80%-100%之間的互補，例如，85%、90%或95%的互補，這被認為是近乎完全的互補并且可以在本發明中應用。"完全的"連續互補是指相鄰^&對的標準Watson-Crick戚基配對。"至少近乎完全的"連續互補包括在這里用到的"完全的，，互補。設計用于測定同一性或互補性的計算機方法來確定核苷酸序列的最大匹配程度，例如BLASTN(Altschul，S.F,等人(19卯)J.Mol.Biol.215:403-410)。術語"同一性百分數"描述連續核苷酸在第一個核酸分子中的百分比，該術語也描述一系列相同長度的連續核苷酸在第二個核酸分子中所占的百分比。術語"互補百分數"描述連續核苷酸在第一個核酸分子中的百分比，該核酸分子能按Watson-Crick原則與第二個核酸分子中一系列連續核苷酸進行威基配對。乾標mRNA(有義鏈)和siRNA中的一#^(有義鏈)之間的關系就是同一性。siRNA的有義鏈，如果存在，也被稱為傳遞鏈。耙標mRNA(有義鏈)和siRNA的另一^^(反義鏈)之間的關系就是互補。siRNA的反義鏈也被稱為引導鏈。以5'到3'的方向書寫的核酸序列的次末端^是倒數第二個威基，即3'端威基的相鄰威基。以5'到3'的方向書寫的核酸序列的次末端13個g是3，端^5lJ^目鄰的最后13個堿基序列，且不包括3'端堿基。相似地，以5'到3'的方向書寫的核酸序列的次末端14、15、16、17或18個>5^分別是3'端堿勤目鄰的最后14、15、16、17或18個磁J^序列，且不包括3'端短語"與任何一個(序列標識符)的3'末端次末端的13個核苷酸具有至少90%序列互補性或至少卯％序列同一性的至少^^有13個連續核苷酸的區域"允許一個核苷酸取代。兩個核苷酸的取代(即11/13=85%同一性/互補性)不包括在這樣的短語中。在本發明的一個實施方案中，連續核苷酸區域是至少14個連續核苷酸的區域，該區域與每個序列標識符識別的序列3'末端次末端的14個核苷酸具有至少85%序列互補性或至少85%序列同一性。兩個核普酸的取^R(即12/14=86%同一性/互補性)不包括在這樣的短語中。在本發明的另一個實施方案中，連續核苷酸的區域是至少15、16、17或18個連續核苷酸的區域，該區域與序列標識符的序列3，末端次末端的14個核苷酸具有至少80%序列互補性或至少80%序列同一性。三個核苷酸的取代不包括在這樣的短語中。mRNA中對應于SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:101、SEQIDNO:123、SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQIDNO:128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131、SEQIDNO:132、SEQIDNO:133或SEQIDNO:134的耙標序列可能在mRNA的5'或3'端非翻譯區以及在mRNA的編碼區。雙鏈干擾RNA的一條或兩條鏈可能含有1至6個核苷酸的3'突出端，該3'突出端可能是核糖核苷酸或脫氧核糖核苷酸或其混合物。突出端的核苷酸不是堿基配對的。在本發明的一個實施方案中，干擾RNA包括TT或UU的3'突出端。在本發明的另一個實施方案中，干擾RNA包括至少一個平末端。該末端通常含有5'磷酸基或3'羥基，在其他實施方案中，反義鏈具有5'磷酸基，而有義鏈含有5'羥基。在另外一些實施方案中，該末端通過共價加入其他分子或功能團而被進一步修飾。雙鏈siRNA的有義鏈和反義鏈可能是如上所述的兩條單鏈的雙螺旋形式，也可能是單獨的分子，其中互補區域是威基配對的并通過發夾環共價連接以形成單獨的鏈。普遍認為，稱為dicer的蛋白質在細胞內切割發57夾以形成兩個單獨的堿基配對的RNA分子的干擾RNA。通過添加、刪除、取代或修飾一個或多個核苷酸，千擾RNA可不同于自然形成的RNA。非核苷酸材料可能結合到干擾RNA的5'末端或者3'末端或者其內部。通常設計這樣的修飾來增加干擾RNA的核酸酶抗性、改善細胞的4HX、增強細胞的靶向性、協助追蹤千擾RNA、進一步改善穩定性或減少干擾素通路的活化作用潛能。例如，干擾RNA可能在突出端末端包含噤呤核苷酸。例如，膽固醇通過吡咯烷接頭連接到siRNA分子有義鏈的3，末端也給siRNA提供穩定性。進一步j奮飾包括例如3'末端生物素分子、已知具有細胞穿透性能的肽、納米顆粒、擬肽類、熒光染料或樹狀聚體。可以在分子的^部分、糖基部分或磷酸部分修飾核苷酸并在本發明的實施方案中發揮作用。修飾包括用如烷基、烷氧基、氛基、脫氮、鹵素、羥基、巰基或其組合物取代。可以用更穩定的類似物取代核苷酸，如用脫氧核糖核苷酸取代核糖核苷酸，或具有糖基修飾例如用2'氨基、2'O-甲基、2'甲氧基乙基或2，-0，4'-C亞甲基橋取代2'-羥基。核苷酸的嘌呤或嘧啶類似物的例子包括黃噤呤、次黃噪呤、氮雜嘌呤、甲硫基腺噤呤、7-脫氮腺苷以及O-修飾的和N-修飾的核苷酸。核苷酸的磷酸基可通過用氮或硫(硫代磷酸)來取代磷酸基中的一個或多個氧來修飾。修飾有利于，例如，增強功能性，提高穩定性或滲透性或指導定位或靶向。反義干擾RNA鏈可以有一個或多個區域與SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:101、SEQIDNO:123、SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQIDNO,128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131、SEQIDNO:132、SEQIDNO:133或SEQIDNO:134的部分并不互補。非互補區域可能是在互補區域的或兩個互補區域之間的3，端、5'端或這兩個末端同時。可通過化學合成、體外轉錄，或者使用dicer或其它具有相似活性的合適的核酸酶切割較長的雙鏈RNA而外源性生成干擾RNA。可從商業供應商如AmbionInc.(Austin,TX)、Invitrogen(Carlsbad,CA)或Dharmacon(Lafayette,CO)處獲得化學合成的千擾RNA，該干擾RNA是使用常規的DNA/RNA合成儀、從保護的核糖核苷亞磷酰胺中制得。可通過例如利用溶劑或樹脂的萃取，沉淀、電泳、層析或這些方法的結合來純化干擾RNA。備選地，可以使用沒有純化或經過極少純化的干擾RNA以避免因樣品加工處理而造成的損失。干擾RNA也可以從質粒或病毒表達載體或從最小表達盒(例如由PCR產生的片段，其包含一個或多個啟動子和干擾RNA的一個或多個合適的模板)進行內源表達。商品化的shRNA的基于質粒的表達載體的實例包括pSilencer系列產品(Ambion，Austin,TX)和pCpG-siRNA(InvivoGen，SanDiego,CA)。表達干擾RNA的病毒栽體可能來源于多種病毒，包括腺病毒、腺相關病毒、慢病毒(如HIV、FIV和EIAV)和皰滲病毒。商品化的表達ShRNA的病毒栽體的實例包括pSilenceradeno(Ambion，Austin，TX)和pLenti6/BLOCK-iTTM-DEST(Invitrogen,Carlsbad,CA)。病毒載體的選擇、從栽體表達干擾RNA的方法和傳遞病毒栽體的方法都在本領域普通技術人員的能力范圍之內。用作生產PCR產生的shRNA表達盒的試劑盒的實例包括SilencerExpress(Ambion,Austin,TX)和siXpress(Minis,Madison,WT)。可以從本領域普通技術人員已知的多種真核啟動子包括polIII啟動子(如U6或HI啟動子)或者polII啟動子(如巨細胞病毒啟動子)中表達干擾RNA。本領域的那些技術人員承認這些啟動子也適用于允許干擾RNA的誘導表達。在生理條件下雜交在在本發明的某些實施方案中，干擾RNA的反義鏈與在體內作為RISC復合物部分的mRNA雜交。"雜交"指其中單鏈核酸與互補或近乎互補的4^序列相互作用以形成稱為雜交體的氫鍵復合物的過程。雜交反應具有靈敏性和選擇性。在體外，雜交的特異性(即嚴緊性)由例如在預雜交和雜交溶液中的鹽或甲酰胺的濃度以及雜交溫度控制，這些操作是本領域所熟知的。特別地，嚴緊性通過59降低鹽濃度、增加甲酰胺濃度或升高雜交溫度而增強。例如，在大約50%甲酰胺、37°C-42GC時產生高嚴緊性條件。在大約35%-25%甲酰胺、300C-35°C時產生降低的嚴緊性務降。用于雜交的嚴緊性條件的實例提供在Sambrook，J.，1989，MolecularCloning:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,N.Y.中。嚴緊性雜交條件的其它實例包括400mMNaCl、40mMPIPES,pH6.4、1mMEDTA、50°C或70°C下12-16小時后再洗滌；或者在70。C、lxSSC或50。C、lxSSC和50。/。甲酰胺中雜交后，在700C、0.3xSSC中洗滌；或者在70。C、4xSSC或50°C、4xSSC和50%甲酰胺中雜交后，在67°(:、lxSSC中洗滌。雜交溫度比雜交體的熔點(TnO大約低5-10"C,使用下面的計算方法確定19-49個>5^對長度的雜交體的熔點Tm:Tm0C=81.5+16.6(log10[Na+)+0.41(%G+C)-(600/N),其中N是雜交體中g數，且Na+是雜交緩沖液中鈉離子的濃度。上述體外雜交測定提供預測在候選siRNA和把標之間的結合是否具有特異性的方法。然而，在RISC復合物體系中，用不能證明體外雜交的高嚴緊性的反義鏈也能對靶標進行特異性的切割。單鏈干擾RNA:如上所述，千擾RNA最終作為單^作用。已發現單鏈(ss)干擾RNA能影響mRNA沉默，但是比雙鏈RNA效率低。因此，本發明的實施方案也提供施用ss干擾RNA，其在生理條件下與SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:lOl、SEQIDNO:123、SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQIDNO:128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131、SEQIDNO:132、SEQIDNO:133或SEQIDNO:134的部分雜交，并有至少19個核苷酸的至少近乎完全連續互補的區域，雜交部分分別對應于SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:lOl、SEQIDNO:123、SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQIDNO:128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131、SEQIDNO:132、SEQIDNO:133或SEQIDNO:134。與上述ds干擾RNA—樣，ss干擾RNA長度為19-49個核苷酸。ss干擾RNA含有5，端磷酸或在原位或體內的5'端位置被磷酸化。術語"5'磷酸化"用于描述，例如，具有磷酸基團的多核苷酸或寡核苷酸，該磷酸基團在所述多核苷酸或寡核苷酸的5'末端經由酯鍵連接到糖(例如核糖、脫氧核糖或相同的類似物)的C5羥基上。與ds干擾RNA—樣，通過化學合成或體外轉錄或從載體或表達盒內源性表達得到ss干擾RNA。可以通過激酶加入5'端磷酸基，或5'端磷酸可以由RNA的核酸酶切割生成。施用與ds干擾RNA—樣。在一個實施方案中，施用具有保護的末端和核酸酶抗性修飾的ss千擾RNA來實現沉默。ss干擾RNA可以干燥貯存或溶解于水溶液中。為了抑制退火或為了穩定，該溶液可以包含緩沖液或鹽。發夾干擾RNA:發夾千擾RNA是單個分子(如單個寡核苷酸鏈)，包含莖環或發夾結構中的干擾RNA的有義鏈和反義鏈兩者(如shRNA)。例如，shRNA能從DNA載體表達，其中編碼有義干擾RNA鏈的DNA寡核香酸通過短的間隔區與編碼反向互補的反義干擾RNA鏈的DNA寡核苷酸相連接。如果出于所選擇表達載體的需要，可以加入3，末端T，s和形成限制性位點的核苷酸。得到的RNA轉錄物自身折疊以形成莖環結構。給藥模式可以通過眼組織注射如眼周、結膜、筋膜嚢(subtenon)、前房內(intracameral)、玻璃體內(intravitreal)、眼內、視網膜下、結膜下、眼球后或淚管內(intracanalicular)的注射；或通過使用導管或其他放置裝置如視網膜藥丸、眼內插入、栓劑或包含多孔的、非多孔的或^狀物質的M物直接運用到眼睛；通過局部眼滴劑或藥骨；或通過盲管中或#^的相鄰鞏膜(鞏膜睫狀體(transcleral))或在眼內的緩慢釋放裝置將干擾RNA直接遞送到眼部。前房內注射可通過角膜進入前房，讓藥劑到達小梁。淚管內注射可^靜脈收集管引流施萊姆管或^施萊姆管。預期可以進行全身的或腸道外施用，包括但不限于靜脈內、皮下和經口給藥。受試者需要治療高眼壓或有iL艮成高眼壓危險的受試者是患有高眼壓或具有;Ul成有高眼壓危險的人或哺乳動物，所述高眼壓與這里所述的靶標的不需要或不適當的表達或活性有關，所述耙標即碳酸酐酶II、IV或XII;pi-或卩2-腎上腺素能受體；乙酰膽堿酯酶；Na+/K+-ATP酶或Na-K-2C1協同轉運蛋白。與這類病癥有關的目艮部結構可能包括例如眼、視網膜、脈絡膜、晶狀體、角膜、小梁、虹膜、視神經、視盤、鞏膜、眼房、玻璃體房或睫狀體。受試者也可能是眼部細胞、細胞培養物、器官或活體外(exvivo)器官或組織。制劑和劑量藥物制劑包括重量比可高達99%的本發明的干擾RNA或其鹽，其與生理可接受的眼科栽體介質如水、緩沖液、生理鹽水、甘氨酸、透明質酸、甘露醇等等混合。本發明的干擾RNA以溶液、懸浮液或乳劑的形式施用。下面是本發明可能實施的制劑的實例。<table>tableseeoriginaldocumentpage62</column></row><table>重量含量％干擾RNA達到99;0.1-99;0.1-50;0.5-10.0磷酸鹽緩沖液l，O糾氯銨0.01多乙氧基醚0.5純凈水(不含RNA酶)q.s.達到100%重量含量％干擾RNA達到99;0.1-99;0.1-50;0.5-10.0磷酸二氬鈉0.05磷酸氳二鈉0.15(無水)氯化鈉0.75EDTA二鈉鹽0.05聚氧乙烯蓖麻油0.1糾氯銨0.01HC1和/或NaOHpH7.3-7.4純凈水(不含RNA酶)q.s.達到100%重量含量％干擾RNA達到99;0.1-99;0.1-50;0.5-10.0磷酸鹽緩沖液1.0羥丙基-p-環糊精4.0純凈水(不含RNA酶)q.s.達到100%一般來說，本發明實施方案中有效量的干擾RNA在靶細胞表面產生的細胞外濃度從100pM至100nM，或從1nM至50nM，或從5nM至約IOnM或至約25nM。達到這一局部濃度所需的劑量取決于許多的因素，包括給藥方法、給藥位點、在給藥位點和耙細胞或組織之間的細胞層數、局部給藥還是全身給藥等等。給藥位點上的濃度比在靶細胞或組織表面的濃度可能高出很多。將組合物局部施用到眼睛表面，每天一至四次，或根據臨床醫師的常規判斷按更大范圍的給藥時間表如每日、每周、雙周、每月或更長時間施用。制劑的pH大約是pH4-9或pH4.5-pH7.4。通過增加作用的持續時間，從而允許減少給藥次數和增強受試者M性，用針對高眼壓耙標mRNA的siRNA對受試者的治療比用小分子局部眼藥滴劑被期望更為有利。雖然正確的給藥方案取決于臨床醫師的決定，干擾RNA可以按臨床醫師指導在每只眼中滴一滴的方法施用。制劑的有效量可能取決于許多因素，例如受試者的年齡、種族和性別，高B艮壓的嚴重性、靶標基因轉錄物/蛋白質轉換的比率、干擾RNA效能和干擾RNA穩定性。在一個實施方案中，將干擾RNA按治療劑量局部施用到眼睛并到達小梁、視網膜或視盤，從而改善與高眼壓相關的疾病。可接受的栽體目W"可接受的栽體指那些至多引起很少到無眼刺激的載體，如果需要提供適當的防腐，并且以均勻劑量輸送一種或多種本發明的干擾RNA。用作施用本發明實施方案的干擾RNA的可接受栽體包括陽離子脂質體介導的轉染試劑TransIT-TKO(MinisCorporation,Madison,WI)、LIPOFECTIN、Lipofectamine、OLIGOFECTAMINETM(Invitrogen,Carlsbad,CA)或DHARMAFECTTM(Dharmacon，Lafayette,CO);聚陽離子如聚乙烯亞胺；陽離子肽如Tat、多^t氨酸或穿膜肽(Antp肽)；或脂質體。脂質體形成于標準的小泡形成脂質和固醇，如膽固醇，并可包括把標分子例如對內皮細胞表面抗原具有結合親和力的單克隆抗體。此外，脂質體可以是加入PEG的脂質體。可以在溶液、懸浮液或者在生物溶蝕的或非生物溶蝕的給藥裝置中傳遞干擾RNA。可以將干擾RNA單獨施用，也可以作為共價綴合物的組成成分，與陽離子脂質體、陽離子多肽或陽離子聚合物^或包裹在靶向的64或非把向的納米顆粒中施用。為了眼部給藥，可將干擾RNA與眼科可接受的防腐劑、共溶劑、表面活性劑、增粘劑、滲透促進劑、緩沖液、氯化鈉或水結合，以形成水溶的無菌眼科懸浮液或溶液。可通過將干擾RNA溶解于生理上可接受的等滲水溶緩沖液來制備眼科溶液制劑。另外，眼科溶液可能包括眼科學的可接受的表面活性劑來協助溶解抑制劑。可將增粘劑如羥甲基纖維素、羥乙基纖維素、甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮或類似物添加到本發明的組合物中，以提高化合物的滯留。為了制備無菌眼藥骨制劑，將干擾RNA與防腐劑在合適載體(如礦物油、液體羊毛脂或白凡士林)上結合。根據本領域已知的用于制備其它目艮科制劑的方法，通過將干擾RNA懸浮于由例如CARBOPOL-940(BFGoodrich,Charlotte,NC)或其相似物的組合制備的親水基質中可制備無菌眼用^^制劑。例如VISCOAT(AlconLaboratories,Inc.,FortWorth,TX)可用作眼內注射.本發明的其他組合物可能包含滲透促進藥劑如cremephor和TWEEN⑧80(聚氧乙烯山梨醇單月桂酸酯，SigmaAldrich，StLouis,MO)，其中干擾RNA較少滲透入眼中。試劑盒本發明的實施方案提供試劑盒，其包括用于減弱在這里所述mRNA在細胞中的表達的試劑。試劑盒包含siRNA或shRNA表達載體。對于siRNA和非病毒的shRNA表達載體，該試劑盒也可能包含轉染試劑或其他合適的傳遞載體。對于病毒的shRNA表達載體，該試劑盒也可能包含病毒載體和/或用于產生病毒載體的必需組分(例如，包裝細胞系以及用于包裝的包含病毒載體模板和額外的輔助栽體的載體)，該試劑盒也可能包含陽性和陰性對照siRNA或shRNA表達載體(例如，無耙向對照siRNA或靼向無關mRNA的siRNA)。該試劑盒也可能包含用作評估指定耙標基因的敲除的試劑(例如，用于檢測耙標mRNA的定量PCR的引物和探針和/或針對western印跡的相應蛋白質的抗體)。備選地，該試劑盒可能包含siRNA序列或shRNA序列和使用說明以及用于通過體外轉錄產生siRNA或構建shRNA表達栽體的必需物質。還提供試劑盒形式的藥物組合，其包括(在包裝的組合中)適于接受與此的密閉容器裝置的載體裝置，和包括干擾RNA組合物和眼科可接受載體的第一種容器裝置。如果需要，該試劑盒還可以包括一種或多種常規的藥物學試劑盒組分，例如含有一種或多種藥物可接受載體的容器、額外的容器等等，這對于本領域技術人員而言是顯而易見的。該試劑盒也可以包括作為插件或作為標簽的用于指示施用的組分量的印刷的使用說明、用于施用的指南和/或用于混合組分的指南。干擾RNA在例如人體小梁(TM)細胞中敲除內源靶標基因表達水平的能力在體外按以下方式評估。將轉化的人TM細胞，例如指定的細胞系GTM-3或HTM畫3(見Pang，I.H.等人，1994.Curr.EyeRes.13:51-63)，在轉染之前24小時在標準生長培養基(如用10%牛胎兒血清增補的DMEM)中鋪板培養。根據制造商的說明書，使用Dharmafectl(DhLafayette,CO)在干擾RNA濃度從0.1nM至100nM范圍內進行轉染。無把向對照千擾RNA和核纖素蛋白A/C干擾RNA(Dharmacon)作為對照。在轉染后24小時，使用例如TAQMAN⑧正向和反向引物和包含耙位點的探針系列(AppliedBiosystems,FosterCity，CA)，通過定量PCR來評估乾標mRNA水平。可在轉染后約72小時(實際時間取決于蛋白質的更新率)例如通過western印跡評估靶標蛋白質水平。從培養細胞中分離RNA和/或蛋白質的標準技術是本領域技術人員所熟知的。為減少非特異性、脫乾效應的幾率，應該使用會產生期望的敲除耙基因表達水平的可能的最低濃度干擾RNA。本發明的干擾RNA敲除CA2蛋白質表達7jC平的能力在如下的實施例1中得以進一步例證。實施例1用于在HeLa細胞中特異性沉默CA2的干擾RNA本研究檢測CA2-干擾RNA在培養的Hda細胞中敲除內源CA2表達水平的能力。HeLa細胞的轉染是使用CA2siRNA的標準體外濃度(IOOnM和1nM)或無乾向對照siRNA和DharmaFECTTM1轉染試劑(DhLafayette,CO)完成的。所有的siRNA溶解在1xsiRNA緩沖液中，該緩沖液是含有20mMKC1、6mMHEPES(pH7.5)、0.2mMMgCl2的水溶液。在轉染后72小時，通過western印跡分析來評估CA2蛋白質表達和肌動蛋白蛋白質表達(上樣對照)。CA2siRNA是雙鏈干擾RNA，其對以下乾標序列具有特異性siCA2#l靶向SEQIDNO:721;siCA2#3把向SEQIDNO:15;siCA2糾耙向SEQIDNO:720;siCA2弁5乾向SEQIDNO:141。如圖1中western印跡數據顯示，相對于非乾向對照siRNA，四個CA2siRNA中的每一個在100nM和1nM都顯著降低CA2表達。把向SEQIDNO:720的SiCA2糾和靼向SEQIDNO:141的siCA2#5顯得特別有效。這里引用的參考文獻被特別并入作為參考，其提供示例性的操作或其他的細節作為對在此闡明的那些內容的補充。在本公開的指導下，本領域普通技術人員將會認可，可以對這里公開的實施方案進行明顯的修飾而不背離本發明的精神或范圍。在^/>開的指導下，在這里公開的所有實施方案都能夠得到實現和執行而無需過度的實驗。在^/>開及其等同的實施方案中公布本發明的全部范圍。說明書不應該被過于狹隘的解釋為本發明要求保護的全部范圍。除非另有說明，在這里使用的術語"a"和"an"意指"一個"、"至少一個"或"一個或多個"。序列表〈110〉愛爾康公司<120〉RNAi介導的眼部靶標抑制<130>45263P008W02〈140〉尚未指定〈141>2006-02-01<150>US60/648,926<151>2005-02-01<歸US60/753,364<151>2005-12-22〈歸724<170>Patentlnversion3.3<210〉1<211〉1551〈212〉DNA<213>智人(Homos即iens)<400〉1accgccagcg60tggcata鄉120ceitacagcca180tccctgagga240a犯gcagtgc300cactggggtt360gcagaacttc420c犯cctgatg480cttcagaaag540actaacttcg600tcactgacca660agcgtcagca720cccgaagaac780aaagcttcct840tttcccttta900agttttctag960ccaattgtca1020ttttctgtaa1080agcatgtagg1140幼3gtag幼t1200tcaggtaaaa1260tcaagatgtt1320tta犯tatga1380ttatctgtaa1440tatatcataa1500t1551〈210〉2〈211〉1104<212〉DNA<213>智人ggcgcccaagcgaccatgtcacttccccatagtatgaccctcctc幼caatc卿gg鄉cacUgatggacttggttcagactggccgtttgttgatgtatcctcgtggcccctcctctgcgagcaggttgstggtggagCta￡LgC￡LC￡Lacccttcatctgcttgacaccacag犯tatgtgatgagcaggttgagtgctagtcatgatatatt肌agaattctgttgtaaattgttatcttaataaatccgccgccgcccatcactggtgccaagggattccctgaagtggtcatgctacccctggatacaaggttcactggaacacctctaggtattgctggattcccctccttccttctggaatgtgttgaaattccaactggcgctggtcccatagatctacctttcttacttgaaactgctgtgaggataag犯ctcacaattg犯atccat6Lgtctatgtaataaaac11taaaatttaatgaaattagagttattgtattttcagatcggtggggtacggcagagcgccagtcccctgtctgttcaacgtggggcacttacagagcatactgaaatatggggtttttgaaggattaaaacaagaatccctgggtgacctggaccagctcagcgtctgtatccggtg8LUtggtagacttactgctggttggtcacaagataagta犯ccagacttttgaattgtgatacaga兆atatattcCCgELttCCtgaacacaacggcccctgttgatttcctatgaagtttgatgagattgattcaattttgggaattggcagcgcagggc卿agattactggacttgtgctcaaacttcaatggcactgei6Lgaeiaaataatgaaaccctggttgaataaaatgtgctttgtttaagtaccttgatgctgcttttattgagctagacagagatatgtatatttcctctaataaaaccctgccccgacctgagcaccatcgacacttc犯gc犯ctctctcaggacgtttcactttgaaatatgctagctgtgcagtaaaccgggctgctgacttcctacccaggcggaacccatcggagggtgaacaggcaaatctcttcgggtgctttgtgtctgaagactagatggtagtagtctttgttcaca幼ac3taggtt犯ggca犯gttcatgattcaaagttatcattcagac幼ttcagaattc<2ctcggtgcgcgaccccggctcagaggactctttgctgtcccgcaagatgcggatgctgct60ggcgctcctggccctctccgcggcgcggccatcggccagtgcagagtcacactggtgcta120cgaggttcaagccgagtcctccaactacccctgcttggtgccagtcaagtggggtggaaa180ctgccagaaggaccgccagtcccccatcaacatcgtcaccaccaaggcaaaggtggacaa240aaaactgggacgcttcttcttctctggctacgataagaagcaaacgtggactgtccaaaa300taacgggcactcagtgatgatgttgctggagaacaaggccagcatttctggaggaggact360gcctgccccataccaggccaaacagttgcacctgcactggtccgact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12>腿<213〉人工序列<220〉<223〉靶標序列<400〉613tacattgaagaccttaaga<210>614<211〉19<212>腿<213>人工序列<220><223>革巴標序列<400〉614agaccttaagaagtttcta<210〉615<211〉19<212>DNA<213>人工序列<220〉<223〉靶標序列<400〉615gaccttaagaagtttctaa616<211>19<212〉DNA<213〉人工序列<220><223〉靶標序列<400>616gtUatgttgcatgtcagt<210〉617<211>19<212>DNA<213〉人工序列〈220><223>靶標序列<400〉617tggtatgaatgatcctgat<210>618<211>19<212〉DNA<213>人工序列<220〉<223〉靶標序列<400〉618tgaaggagtgccaaggata<210>619<211>19<212>DNA<213〉人工序列<220>〈223〉靶標序列<400>619tgtagcagtttatcctcat<210〉620<211>19<212〉DNA<213>人工序列<220〉〈223>靶標序列<400〉620gtagcagtttatcctcata<210〉621<211>19<212>DNA199<213>人工序列<220〉<223>靶標序列<400〉621ctcataatggaatgatag3〈210>622<211>19<212〉DNA<213〉人工序列<220〉<223〉靶標序列<400>622agccattggttgctgttca<210>623<211〉19<212〉DNA<213〉人工序列<220><223〉靶標序列<400>623gccattggttgctgttcag<210〉624<211〉19<212>腿<213〉人工序列<220〉<223〉靶標序列<400〉624gtaacagttgagtgcaaga<210〉625<211〉19<212>腿<213〉人工序列<220><223>靶標序列<400>625taacagttgagtgcaagat<210>626<211>19<212>DNA<213〉人工序列<220〉<223〉耙標序列<626tgatggatcagccaaccta<210〉627<211>19<212〉DNA<213>人工序列<220><223〉靶標序列<400〉627gatggatcagccaacctaa<210>628<211〉19<212〉隨<213〉人T:序列<220〉<223>耙標序列<400>628atggatcagccaacctaaa<210〉629<211>19<212>DNA<213〉人工序列<220〉<223〉靶標序列<400>629gcatagtatgagtaggata<210>630<211>19<212>DNA<213〉人工序列<220><223〉耙標序列<400〉630catagtatgagtaggatat<210〉631<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>耙標序列<400>631ggatatctccacagagtaa191919191919201<210>632〈211〉19<212>DNA<213>人工序列<220><223>耙標序列<400>632gatatctccacagagtaaa<210〉633<211>19<212>飄<213>人工序列<220><223>靶標序列<400>633agaaaggtgtgtggtacat<210〉634<211>19<212>DNA<213〉人工序列<220〉<223>靶標序列<400>634ataacgtgcttccagatca<210>635<211>19<212〉腿<213>人工序列<220><223〉耙標序列<400>635taacgtgcttccagatcat<210>636<211〉19<212〉畫<213>人工序列<220〉<223>靶標序列■>636agtgtacagtcgccagata<210〉637<211>19<212>腿<formula>formulaseeoriginaldocumentpage203</formula><400>642gccgtgctatgtaaatatt<210>643<211〉19<212>腿<213〉人工序列<220〉<223>靶標序列<400〉643tgcaagaaatgtggtatgt<210>644<211>19<212>DNA<213>人工序列<220〉<223>靶標序列<400>644atgctgaattagcctcgat<210〉645<211〉19<212〉DNA〈213〉人工序列<220〉<223〉靶標序列<400〉645ttgattaagagcacaaact<210>646<211〉19〈212〉DNA<213〉人工序列<220><223〉靶標序列〈400〉646agcagactgtggactgtaa<210>647<211〉19<212>隨<213>人工序列<220><223>靶標序列<400>647gcagactgtggactgtaat191919191919<210>648<211〉19〈212〉DNA<213〉人工序列<220><223〉靶標序列<400〉648cagactgtggactgtaata<210〉649〈211〉19<212〉DNA<213〉人工序列<220><223〉耙標序列<400〉649taataccaatcgctttcaa<210>650<211〉19<212〉DNA<213>人工序列〈220〉<223〉靶標序列<400〉650accaatcgctttcaagtta<210〉651<211>19<212>隨<213>人工序列<220><223〉靶標序列<400〉651caatcgctttcaagttagt<210〉652<211〉19<212>DNA<213>人工序列<220〉<223>靶標序列<400〉652atagagtactatcgtaaca<210>653<211〉19<212>DNA〈213〉人工序列19191919<220><223〉靶標序列<400>653ccagcctgcttgagattca<210>654<211>19<212>DNA<213>人工序列〈220〉<223>靶標序列<400>654ctgtagtagatctacttaa<210>655〈211〉19<212>隠<213〉人工序列<220〉<223>靶標序列<400〉655accaatgacatccggatta<210>656〈211〉19<212>DNA<213>人工序列<220><223〉靶標序列<400>656ccaatgacatccggattat<210>657<211〉19<212>陽<213〉人工序列<220>〈223〉靶標序列<400〉657c組gacatccggattata<210〉658〈211>19<212〉DNA<213〉人工序列<220><223>耙標序列19191919<400〉658ggctatgacttctcaagat<210>659<211>19<212>DNA<213>人工序列<220〉<223>耙標序列<400〉659gcctcatatgcacttatta<210〉660<211>19<212〉纖<213〉人工序列<220><223〉靶標序列<400>660agacctgcgtatggaattt<210>661<211〉19<212〉隨<213>人.匸序列<220><223>靶標序列<400〉661acgtctatgtgacttgtaa<210〉662<211〉19<212>腿<213>人工序列<220><223〉靶標序列<400>662gtctatgtgacttgtaaga<210>663<211>19<212>DNA<213〉人工序列<220><223>靶標序列<400〉663ttcctacgtgagtgcttta<210〉664<211>19<212>DNA<213>人工序列<220〉<223〉靶標序列<400>664gacaatgctctggaattaa<210>665<211>19<212>DNA<213〉人工序列<220〉<223〉靶標序列<婦665ctctggtgattggatataa<210〉666<211〉19<212>DNA<213>人工序列<220〉<223>耙標序列〈400〉666tgacagetg3ttg3gaacta<210〉667<211〉19<212>腿<213>人工序列〈220〉<223〉耙標序列<400〉667tgagattggcgtggttata<210〉668<211>19<212>腿<213>人工序列<220><223〉耙標序列<400〉668gcatccgaggcttgtttaa<210〉669<211>19<212>DNA<213>人工序列208<220><223〉靶標序列<400>669accatatcgtctccatgaa<210>670<211>19<212>腿<213〉人工序列<220><223〉靶標序列<400〉670ccatatcgtctccatgaaa<210〉671〈211〉19<212>腿<213〉人工序列<220><223>靶標序列<400>671tgaaagctgcaaagattta<210〉672<211〉19<212>DNA<213>人工序列<220><223〉靶標序列<400>672tcgactgaatgaactctta<210〉673<211>19<212>DNA<213〉人工序列<220><223>靶標序列<400>673ccatatcggatttgttgta<210>674<211>19<212>DNA〈213〉人工序列<220〉<223>靶標序列<400>674ggttggaaatcctcacaaa<210>675<211>19<212>DNA<213>人工序列〈220〉<223>靶標序列<400〉675cttactagttagaggaaat<210>676<211>19<212>腿<213〉人工序列<220〉<223>靶標序列<400〉676accaccagcactactatta<210〉677<211>19〈212>DNA<213>人工序列<220><223〉耙標序列<400〉677ccaccagcactactattat<210>678<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>耙標序列<400〉678cagcactactattatgata<210〉679<211>19〈212〉DNA<213〉人工序列<220><223〉耙標序列<400>679ctatcagtccttgtaataa19<210>680<211>19<212>DNA<213〉人工序列<220><223〉靶標序列<400>680attgtctacttcagcaata<210>681<211〉19<212〉DNA<213〉人工序列<220>〈223〉靶標序列<400>681tattggtgatttcgtcata<210〉682<211>19<212>腿<213〉人工序列<220><223>靶標序列<400〉682ttcgtcataggaacattta〈210〉683<211>19<212〉DNA<213〉人工序列<220><223〉靶標序列<400〉683taatgacactatcgtaaca<210〉684<211>19<212>DNA<213〉人工序列<220><223〉靶標序列<400>684gatgtttgctaaaggttat<210〉685<211〉19<212〉DNA<213〉人工序列211<formula>formulaseeoriginaldocumentpage212</formula>agagatgtccatcgatcaa〈210>691<211>19<212>DNA<213>人工序列<220〉<223>靶標序列<400>691ccatcgatcaagccaaata<210>692<211>19<212〉DNA〈213〉人工序列<220〉<223>靶標序列<400>692catcgatcaagccaaatat<210>693〈211〉19<212>DNA<213〉人「序列<220><223〉靶標序列<400〉693ggtcgtatgaagccaaaca<210〉694<211〉19<212〉DNA<213〉人工序列<220〉<223〉靶標序列<400>694cacttgtccttggatttaa<210〉695<211〉19〈212〉腿<213>人工序列<220><223〉靶標序列<400〉695tagtggttattcgcctaaa<210〉696<211〉191919191919<212〉DNA<213>人工序列<220><223〉靶標序列<400>696atctcatcttcaaggacaa<210〉697<211〉19<212〉腿<213>人工序列<220〉<223>靶標序列<400〉697cgatttagatacttccaaa<210>698<211〉19<212>DNA<213>人工序列<220〉<223〉靶標序列<400>698tcattggtggaaagataaa<210>699<211〉19<212〉DNA<213〉人工序列<220〉<223〉靶標序列<699ttagcaagUccggataga<210>700<211>19<212〉畫<213〉人工序列<220〉<223〉靶標序列<400〉700gaaatcattgagccataca<210〉701<211>19<212〉DNA<213>人工序列<220〉19191919<223>耙標序列<400>701agcaagatattgcagataa<210>702<211〉19<212>■<213〉人工序列<220><223〉耙標序列<400〉702gatgaaccatggcgaataa<210〉703<211〉19<212〉DNA<213>人工序列<220〉<223>耙標序列<400>703cattcaagcacagctaata<210〉704<211>19<212>DNA<213〉人工序列<220〉<223〉靶標序列<400〉704ttcagtgcctagtgtagta<210〉705<211〉19<212>隨<213>人工序列<220〉<223>靶標序列<400>705aggaaagttgctccattga<210>706<211〉19<212>腿<213>人工序列<220〉<223>耙標序列<400>706aaagttgctccattgataa191919191919<210〉707<211>19<212〉腿<213>人工序列<220〉<223〉靶標序列<400>707caatcttaatggtgattct<210〉708<211〉19<212>腿<213〉人工序列<220><223>靶標序列<400>708ttgacatcatagtctagta<210>709<211>19<212>畫<213〉人工序列<220><223>靶標序列<400>709gacatcatagtctagtaaa<210>710<211〉19<212〉腿<213〉人T.序列<220><223>靶標序列<400>710gtgtgtgtgtgtgtatata<210〉711<211〉19<212〉DNA<213〉人工序列<220〉<223〉靶標序列<400>711gtgtgtgtgtgtatatata<210〉712〈211〉19<212〉腿1919191919<213>人工序列<220>〈223〉靶標序列<400>712taggcaaactttggtttaa<210>713〈211>19<212>腿<213>人工序列<220〉〈223〉耙標序列<400〉713ggagaatacttcgcctaaa<210>714<211〉19<212>腿<213〉人工序列<220〉<223>耙標序列<400〉714tgagtatgacctaggtata<210>715<211〉19<212〉DNA<213>人工序列<220><223>耙標序列<400〉715agagatctgataacttgaa<210>716<211〉19<212>腿<213〉人工序列<220><223>耙標序列<400〉716ggtaasgac3gtagaaata<210〉717<211>19<212>脆〈213〉人工序列<220><223〉靶標序列19191919<400〉717tttaagctctggtggatga19<210><211><212〉〈213〉71825RNA人工序列<220〉<223>有義鏈<400〉718cccugaggauccucaacaaugguca25<210>719<211〉27<212>隨<213>人工序列<220><223>反義鏈<400〉719ugaccmiuguugaggauccucaggguu27<210>720<211>19<212〉腿<213>人工序列<220><223>靶標序列<400>720ggatggcacttacagattg<210>721<211>19<212〉DNA<213>人工序列<220〉<223>靶標序列<400>721gaaatatgctgcagaactt<210〉722<211〉19<212〉RNA<213>人工序列<220><223〉有義鏈<400〉722cccugaggauccucaacaa<210>723<211〉19<212>隨<213〉人工序列<220><223>反義鏈<400〉723uuguugaggauccucaggg<210>724<211〉25<212>DNA<213>人工序列<220><223〉靶標序列<400>724ccctgaggatcctcaacaatggtca19192權利要求1.在受試者中減弱高眼壓靶標mRNA表達的方法，該方法包括向受試者施用包含有效量的長度為19-49個核苷酸的干擾RNA和藥物可接受載體的組合物，該干擾RNA包含至少13個連續核苷酸的區域，該連續核苷酸與以下任一序列的3′端次末端的13個核苷酸具有至少90％的序列互補性或至少90％的序列同一性，所述序列為SEQIDNO8、SEQIDNO14-SEQIDNO32、SEQIDNO83-SEQIDNO100、SEQIDNO102-SEQIDNO122、SEQIDNO135-SEQIDNO219、SEQIDNO720和SEQIDNO721。2.權利要求l的方法，其中高眼壓耙標mRNA編碼碳酸酐酶II，且所述干擾RNA包含至少13個連續核苷酸的區域，該連續核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個核苷酸具有至少卯％的序列互補性或至少90%的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:8、SEQIDNO:14-SEQIDNO:22、SEQIDNO:83-SEQIDNO:100、SEQIDNO:135-SEQIDNO:155、SEQIDNO:720和SEQIDNO:721,3.權利要求l的方法，其中高眼壓靶標mRNA編碼碳酸6f酶IV，且所述千擾RNA包含至少13個連續核苷酸的區域，該連續核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個核苷酸具有至少90%的序列互補性或至少90%的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:23-SEQIDNO:32和SEQIDNO:156-SEQIDNO:177。4.權利要求1的方法，其中高目艮壓靶標mRNA編碼碳酸酐酶XII,且所述干擾RNA包含至少13個連續核苷酸的區域，該連續核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個核普酸具有至少90%的序列互補性或至少90%的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:102-SEQEDNO:122和SEQIDNO:178-SEQIDNO:219。5.權利要求1的方法，其中連續核苷酸的區域是至少14個連續核苷酸的區域，該區域與序列標識符的序列的3'端次末端14個核苷酸具有至少85%的序列互補性或至少85%的序列同一性。6.權利要求l的方法，其中連續核苷酸的區域是至少15、16、17或18個連續核苷酸的區域，該區域分別與序列標識符的序列的3'端次末端15、16、17或18個核苷酸具有至少80%的序列互補性或至少80%的序列同一性。7.權利要求1的方法，其中干擾RNA是shRNA。8.權利要求1的方法，其中干擾RNA是miRNA。9.權利要求l的方法，其中干擾RNA是siRNA。10.組合物在制備用于治療受試者高眼壓的藥物中的用途，該組合物包含有效量的長度為19-49個核苷酸的干擾RNA和藥物可接受載體,該干擾RNA包含至少13個連續核苷酸的區域，該連續核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個核苷酸具有至少卯％的序列互補性或至少90%的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:8、SEQIDNO:14-SEQIDNO:32、SEQIDNO:83-SEQIDNO:100、SEQIDNO:102-SEQIDNO:122、SEQIDNO:135-SEQIDNO:219、SEQIDNO:720和SEQIDNO:721。11.權利要求10的用途，其中干擾RNA包含至少13個連續核苷酸的區域，該連續核苦酸與以下任一序列的3'端次末端的13個核苷酸具有至少90%的序列互補性或至少90%的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:8、SEQIDNO:14-SEQIDNO:22、SEQIDNO:83-SEQIDNO:IOO、SEQIDNO:135-SEQIDNO:155、SEQIDNO:720和SEQIDNO:721。12.權利要求10的用途，其中該干擾RNA包括至少13個連續核苷酸的區域，該連續核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個核苷酸具有至少卯％的序列互補性或至少90%的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:23-SEQIDNO:32和SEQIDNO:156-SEQIDNO:177。13.權利要求10的用途，其中干擾RNA包括至少13個連續核苷酸的區域，該連續核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個核苷酸具有至少90%的序列互補性或至少90。/。的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:102-SEQIDNO:122和SEQIDNO:178-SEQIDNO:219。14.權利要求10的用途，其中干擾RNA是shRNA。15.權利要求10的用途，其中制備組合物用于局部、玻璃體內、鞏膜睫狀體、眼周、結膜、筋膜嚢、前房內、視網膜下、結膜下、目姊后或淚管內的施用。16.權利要求10的用途，其中從能表達干擾RNA的表達栽體經由體內表達制備用于施用的組合物。17.權利要求10的用途，其中干擾RNA是miRNA。18.權利要求10的用途，其中干擾RNA是siRNA。19.減弱受試者高眼壓靶標mRNA第一種變體表達而不減弱高眼壓靶標mRNA第二種變體表達的方法，其包括對受試者施用組合物，該組合物包含有效量的長度為19-49個核苷酸的干擾RNA和藥物可接受栽體，該干擾RNA包含至少13個連續核苷酸的區域，該連續核苷酸與第一種變體的3'端次末端的13個核苷酸具有至少90%的序列互補性或至少90%的序列同一性，其中第一種變體mRNA的表達被減弱，而沒有減弱第二種變體mRNA的表達，并且其中第一種變體靶標mRNA是SEQIDNO:101，和第二種變體把標mRNA是SEQIDNO:134。20.減弱受試者高眼壓靶標mRNA第一種變體表達而不減弱高眼壓靶標mRNA第二種變體表達的方法，其包括對受試者施用組合物，該組合物包含有效量的長度為19-49個核苷酸的干擾RNA和藥物可接受載體，該干擾RNA包含至少13個連續核苷酸的區域，該連續核苷酸與第一種變體的3，端次末端的13個核苷酸具有至少90%的序列互補性或至少90%的序列同一性，其中第一種變體mRNA的表達被減弱，而沒有減弱第二種變體mRNA的表達，并且其中第一種變體耙標mR]VA是SEQIDNO:134,和第二種變體靶標mRNA是SEQIDNO:101。21.減弱受試者高眼壓耙標mRNA表達的方法，其包括對受試者施用組合物，該組合物包含有效量的長度為19-49個核苷酸的干擾RNA和藥物可接受載體，該干擾RNA包舍有義核苷酸鏈、反義核苷酸鏈和至少19個核苷酸的至少近乎完全連續互補的區域；其中反義鏈在生理條件下與對應于SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:101或SEQIDNO:134的mRNA的部分雜交，并且具有至少19個核苷酸的、分別與對應于SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:101或SEQIDNO:134的mRNA的雜交部分至少近乎完全連續互補的區域，其中高眼壓靶標mRNA的表達被減弱。22.權利要求21的方法，其中高目艮壓靶標mRNA編碼碳酸酐酶II，并且反義鏈在生理條件下與對應于SEQIDNO:l的mRNA的部分雜交，且含有至少19個核普酸的、與對應于SEQIDNO:l的mRNA的雜交部分至少近乎完全連續互補的區域。23.權利要求21的方法，其中高眼壓粑標mRNA編碼碳酸酐酶IV，并且反義鏈在生理條件下與對應于SEQIDNO:2的mRNA的部分雜交，且含有至少19個核苷酸的、與對應于SEQIDNO:2的mRNA的雜交部分至少近乎完全連續互補的區域。24.權利要求21的方法，其中高目艮壓靶標mRNA編碼碳酸酐酶XII，并且反義鏈在生理^ff下與對應于SEQIDNO:101或SEQIDNO:134的mRNA的部分雜交，且含有至少19個核苷酸的、與對應于SEQIDNO:lOl或SEQIDNO:134的mRNA的雜交部分至少近乎完全連續互補的區域。25.權利要求21的方法，其中將反義鏈設計為乾向對應于SEQIDNO:l的mRNA，所述mRNA包含核苷酸232、527、721、728、809、810、855、856、921、1139、506、547、548、740、911、1009、1140、1149、1150、1151、1188、1194、1195、1223、1239、1456、1457、1458、100、158、166、247、286、318、322、328、371、412、482、504、505、541、734、772、777、814、972、998、1232、317或401。26.權利要求21的方法，其中將反義鏈設計為靶向對應于SEQIDNO:2的mRNA，所述mRNA包含核苷酸213、252、258、266、399、457、463、490、595、1064、109、112、125、126、150、261、265、280、398、453、459、462、467、492、534、785、801、825、827、876、1003或1012。27.權利要求21的方法，其中將反義鏈設計為靶向對應于SEQIDNO:101的mRNA,所述mRNA包含核苷酸191、239、274、275、341、389、412、413、423、687、689、695、710、791、792、794、983、993、994、995、691、1039、1568、2326、2332、2425、2433、2844、2845、2880、2884、2891、2954、2955、2956、2957、2964、2965、3006、3007、3012或3026。28.權利要求21的方法，其中將反義鏈設計為靶向對應于SEQIDNO:134的mRNA，所述mRNA包含核苷酸687、1535、2293、2299、2392、2400、2811、2812、2847、2851、2858、2921、2922、2923、2924、2931、2932、2973、2974、2979或2993。29.權利要求21的方法，其還包括向受試者施用長度為19-49個核苷酸的第二種干擾RNA，并且所述第二種干擾RNA包括有義核苷酸鏈、反義核苷酸鏈和至少19個核香酸的至少近乎完全互補的區域；其中第二種干擾RNA的反義鏈在生理條件下與對應于SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:101或SEQIDNO:134的mRNA的第二部分雜交，且反義鏈含有至少19個核苷酸的、與分別對應于SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:101或SEQIDNO:134的mRNA的第二雜交部分至少近乎完全連續互補的區域。30.權利要求21的方法，其中通過環形核苷酸序列連結有義核苷酸鏈和反義核苦酸鏈。31.組合物在制備用于治療受試者高眼壓的藥物中的用途，該組合物包含有效量的長度為19-49個核苷酸的干擾RNA和藥物可接受載體，該干擾RNA包含有義核苷酸鏈、反義核苦酸鏈和至少19個核苷酸的至少近乎完全互補的區域；其中反義鏈在生理M下與對應于SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:101或SEQIDNO:134的mRNA的部分雜交，并且具有至少19個核苷酸的、與分別對應于SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:101或SEQIDNO:134的mRNA的雜交部分至少近乎完全連續互補的區域。32.權利要求31的用途，其中通過環形核苷酸序列連結有義核苷酸鏈和反義核香酸鏈。33.權利要求31的用途，其中制備組合物用于局部、玻璃體內、鞏膜睫狀體、眼周、結膜、筋膜嚢、前房內、視網膜下、結膜下、B姊后或淚管內的施用。34.權利要求31的用途，其中從能表達干擾RNA的表達載體經由體內表達制備用于施用的組合物。35.減弱受試者高眼壓耙標mRNA的表達的方法，其包括向受試者施用組合物，該組合物包含有效量的長度為19-49個核苷酸的干擾RNA和藥物可接受載體，其中單鏈干擾RNA在生理條件下與對應于SEQIDNO:l的mRNA的部分雜交，所述部分包含核苷酸232、527、721、728、809、810、855、856、921、1139、506、547、548、740、911、1009、1140、1149、1150、1151、1188、1194、1195、1223、1239、1456、1457、1458、100、158、166、247、286、318、322、328、371、412、482、504、505、541、734、772、777、814、972、998、1232、317或401，并且該干擾RNA含有與對應于SEQIDNO:l的mRNA的雜交部分至少近乎完全連續互補的區域；或其中單鏈干擾RNA在生理條件下與對應于SEQIDNO:2的mRNA的部分雜交，所述部分包含核苷酸213、252、258、266、399、457、463、4卯、595、1064、109、112、125、126、150、261、265、280、398、453、459、462、467、492、534、785、801、825、827、876、1003或1012，并且該干擾RNA含有至少19個核苷酸的、與對應于SEQIDNO:2的mRNA的雜交部分至少近乎完全連續互補的區域；或其中單鏈干擾RNA在生理條件下與對應于SEQIDNO:lOl的mRNA的部分雜交，所迷部分包含核苷酸191、239、274、275、341、389、412、413、423、687、689、695、710、791、792、794、983、993、994、995、691、1039、1568、2326、2332、2425、2433、2844、2845、2880、2884、2891、2954、2955、2956、2957、2964、2965、3006、3007、3012或3026，并且該干擾RNA含有至少19個核苷酸的、與對應于SEQIDNO:101的mRNA的雜交部分至少近乎完全連續互補的區域；或其中單鏈干擾RNA在生理條件下與對應于SEQIDNO:134的mRNA的部分雜交，所迷部分包含核苷酸687、1535、2293、2299、2392、2400、2811、2812、2847、2851、2858、2921、2922、2923、.2924、2931、2932、2973、2974、2979或2993，并且該干擾RNA含有至少19個核苷酸的、與對應于SEQIDNO:134的mRNA的雜交部分至少近乎完全連續互補的區域；其中高眼壓乾標mRNA的表達由此被減弱。36.權利要求35的方法，其中千擾RNA是miRNA。37.權利要求35的方法，其中千擾RNA是siRNA。38.包含干擾RNA和藥物可接受載體的組合物，所述干擾RNA長度為19-49個核苷酸并且含有SEQIDNO:8、SEQIDNO:14-SEQIDNO:32、SEQIDNO:83-SEQIDNO:100、SEQIDNO:102-SEQIDNO:122、SEQIDNO:135—SEQIDNO:219、SEQIDNO:720和SEQIDNO:721中任一的核香酸序列或其互補序列。39.權利要求38的組合物，其中干擾RNA是shRNA。40.權利要求38的組合物，其中干擾RNA是siRNA。41.權利要求38的組合物，其中干擾RNA是miRNA。全文摘要提供抑制高眼壓靶標mRNA表達的RNA干擾以降低開角型青光眼或高眼壓患者中升高的眼內壓。高眼壓靶標包括碳酸酐酶II、IV和XII；β1和β2腎上腺素能受體；乙酰膽堿酯酶；Na⁺/K⁺-ATP酶和Na-K-2Cl協同轉運蛋白。通過施用本發明的干擾RNA來治療高眼壓。文檔編號A61K31/713GK101444525SQ200810213139公開日2009年6月3日申請日期2006年2月1日優先權日2005年2月1日發明者A·F·克拉克,A·R·謝帕德,J·E·查特爾頓,M·B·瓦克斯申請人:愛爾康公司