一種油茶蒲提取物及其制備方法和用途的制作方法

專利名稱：：一種油茶蒲提取物及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及植物提取物領(lǐng)域。更具體地涉及從油茶果實(shí)的果殼中提取的有效部位及其制備方法和用途。
背景技術(shù)：
：油茶(CamelliaoleiferaAbel)是山茶科(Theaceae)山茶屬(Camellia)木本植物，是我國(guó)特有的油料樹種，主要分布在我國(guó)的江西、湖南、浙江、廣西、廣東、福建、貴州等地。油茶按花的顏色不同可分為白花油茶、紅花油茶和黃花油茶，種植最廣的為白花茶油，其中以普通油茶分布最廣。山茶油含有豐富的不飽和脂肪酸，有很高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，被譽(yù)為東方的橄欖油。目前中國(guó)油茶種植面積正逐年增加，油茶籽的產(chǎn)量也在逐步增長(zhǎng)。油茶蒲又稱茶包，為油茶果的外殼，約占油茶果總重量的2/3，是油茶生產(chǎn)的廢棄物，每年產(chǎn)量約有170多萬噸。在油茶產(chǎn)區(qū)，油茶蒲或作為燃料或被丟棄，利用率極低[中國(guó)油脂，1996，21(4):39-42]。有關(guān)油茶蒲的研究，有文獻(xiàn)報(bào)道利用油茶蒲生產(chǎn)碳酸鉀和焦磷酸鉀，對(duì)它的深入研究利用未見報(bào)道?？梢妼?duì)油茶蒲的開發(fā)和利用對(duì)振興油茶產(chǎn)業(yè)，增加油茶的附加值，實(shí)現(xiàn)油茶副產(chǎn)物的綜合利用，具有深遠(yuǎn)的意義。脂肪酸合酶(FattyAcidSynthase,FAS)，是催化乙酰輔酶A和丙二酰輔酶A合成內(nèi)源性長(zhǎng)鏈脂肪酸的關(guān)鍵酶，研究表明它是治療肥胖和癌癥的潛在靶點(diǎn)，關(guān)于它的研究越來越引起人們的關(guān)注，它的抑制劑因其潛在的減肥與抗癌功效更成為研究中的熱點(diǎn)。淺藍(lán)菌素(Cerulenin)是最早被發(fā)現(xiàn)的FAS抑制劑，但是它化學(xué)結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，有一定毒性，嚴(yán)重限制了其應(yīng)用范圍，Kuhajda等模擬淺藍(lán)菌素的抑制機(jī)制，合成及篩選出了化學(xué)結(jié)構(gòu)較為穩(wěn)定的FAS抑制劑C75。隨著人們對(duì)天然產(chǎn)物的青睞，人們?cè)絹碓较Ｍ麖奶烊划a(chǎn)物中尋找高效脂肪酸合酶抑制劑。本領(lǐng)域迫切需要提供更多的來源于天然植物的活性物質(zhì)，如高效FAS抑制劑，尤其是來自于目前被大量丟棄的天然原料的活性物質(zhì)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明旨在提供一種油茶蒲提取物。本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供所述油茶蒲提取物的制備方法。本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供所述油茶蒲提取物的用途。本發(fā)明的第四個(gè)目的是提供一種含有所述油茶蒲提取物的組合物。在本發(fā)明的第一方面，提供了一種油茶蒲提取物，以提取物總量計(jì)，所述提取物中含有5-70w/w^總黃酮(以戸丁計(jì))；所述油茶蒲是山茶科(Theaceae)山茶屬(CamelliaL)木本植物油茶的果實(shí)的果殼。在另一優(yōu)選例中，所述油茶蒲提取物在285nm和236nm處有兩個(gè)紫外吸收峰。在另一優(yōu)選例中，所述的提取物是經(jīng)醇-水溶劑提取的物質(zhì)，所述的醇選自甲醇或乙醇；更佳地，所述的提取物是經(jīng)醇濃度為0-100v/v%的醇-水溶劑提取的物質(zhì)，所述的醇選自甲醇或乙醇。在另一優(yōu)選例中，所述的油茶蒲提取物通過如下步驟獲得(1)將油茶蒲和醇_水溶劑混合，用選自下述的一種或多種方式提取得到油茶蒲提取物；浸提、熱回流提取、逆流提取、超聲波提取、或微波輻射提取。在另一優(yōu)選例中，所述的浸提條件為提取溫度為20-10(TC，提取時(shí)間0.1-5小時(shí)，料液比W/V:1:3-30;所述的微波輻射提取的條件為微波輻射功率為100-6000W，輻射時(shí)間為20秒-5小時(shí)(更佳地，2min-lh)，料液比為1:3_1:30(W/V);所述的超聲波提取的條件為料液比l:3-1:30(W/V)，超聲波功率50-5000W，超聲波作用時(shí)間12-180分鐘。在另一優(yōu)選例中，在步驟(1)后還包括下述步驟(2)分離純化；所述的分離純化選自柱層析、或膜分離。在本發(fā)明的第二方面，提供了一種如上所述的油茶蒲提取物的制備方法，所述的方法包括步驟(1)將油茶蒲和醇_水溶劑混合，用選自下述的一種或多種方式提取得到油茶蒲提取物；浸提、熱回流提取、逆流提取、超聲波提取、或微波輻射提取。在另一優(yōu)選例中，所述醇_水溶劑中醇的濃度為0-100v/v%;所述的浸提條件為提取溫度為20-10(TC，提取時(shí)間0.l-5小時(shí)，料液比W/V:1:3-30;所述的微波輻射提取的條件為微波輻射功率為100-6000W，輻射時(shí)間為20秒-5小時(shí)(更佳地，為2min-lh)，料液比為i:3-i:30(w/v);所述的超聲波提取的條件為料液比i:3-i:30(w/v)，超聲波功率50-5000W，超聲波作用時(shí)間12-180分鐘。在另一優(yōu)選例中，在步驟(1)后還包括下述步驟(2)分離純化；所述的分離純化選自柱層析、或膜分離。在另一優(yōu)選例中，所述的膜分離的條件為采用巻式超濾膜系統(tǒng)，操作壓力為0.4-1.2Mpa，操作溫度20-60°C。在另一優(yōu)選例中，所述的柱層析填料選自聚酰胺、硅膠、大孔樹脂、纖維素、瓊脂糖凝膠或葡聚糖凝膠。在本發(fā)明的第三方面，提供了一種如上所述的油茶蒲提取物在制備抑制脂肪酸合酶、減少脂肪或抗氧化的組合物中的應(yīng)用。在另一優(yōu)選例中，所述的油茶蒲提取物還具有抗菌、抗炎、抗輻射、脫敏、消除疲勞、緩解精神壓力、增強(qiáng)免疫功能、保護(hù)心腦血管、抗腫瘤預(yù)防癌癥、美白、和/或促進(jìn)頭發(fā)生長(zhǎng)的功能。在另一優(yōu)選例中，所述的組合物是功能性食品配料、膳食補(bǔ)充劑、天然藥物原料或化妝品功能成分。在本發(fā)明的第四方面，提供了一種組合物，以組合物總重量計(jì)，它含有重量百分比為1-99%的如上所述的油茶蒲提取物和藥學(xué)上或食品學(xué)上可接受的載體。在另一優(yōu)選例中，所述的組合物為飲料、酒類、膠囊、軟膠囊、粉劑、片劑、顆粒劑、口服液、噴霧劑及霜?jiǎng)?、乳劑、水劑和膏體。在另一優(yōu)選例中，所述的組合物為膠囊、粉劑、片劑、顆粒劑、口服液、噴霧劑、霜?jiǎng)?、乳劑、水劑、或浸膏。在另一?yōu)選例中，所述的組合物是功能性食品配料、膳食補(bǔ)充劑、天然藥物原料或化妝品功能成分。據(jù)此，本發(fā)明提供了來源于天然植物的活性物質(zhì)，尤其是來自于目前被大量丟棄的天然原料(如油茶蒲)的活性物質(zhì)。圖1是實(shí)施例7中所獲得的油茶蒲提取物XI的紫外圖譜，在200-400nm的波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，紫外光譜圖顯示，在285nm、236nm處有兩個(gè)明顯的紫外吸收峰。圖2是實(shí)施例7中所很多的油茶蒲提取物的液相圖譜；其中A是油茶蒲50X乙醇提取物IV的液相圖譜；B是油茶蒲提取物XIII的液相圖譜。圖3油茶蒲提取物液相圖譜特征性物質(zhì)紫外掃描圖譜；其中A是油茶蒲液相圖譜里出峰時(shí)間為10.9min的特征性物質(zhì)；B是油茶蒲液相圖譜里出峰時(shí)間為11.9min的特征性物質(zhì)圖4顯示了油茶蒲提取物對(duì)脂肪酸合酶的不可逆抑制作用具體實(shí)施例方式發(fā)明人通過對(duì)油茶生產(chǎn)的廢棄物-油茶蒲的深入研究，發(fā)現(xiàn)其中的水溶性有效部位具有良好的減肥功效和抗氧化作用，該有效部位中的黃酮是重要的活性成分，該有效部位在200-400nm的波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描顯示，285nm、236nm處有兩個(gè)明顯的紫外吸收峰。在此基礎(chǔ)上完成了本發(fā)明。油茶蒲提取物本發(fā)明提供的油茶蒲提取物是從山茶科(Theaceae)山茶屬(CamelliaL)木本植物油茶的果實(shí)的果殼——油茶蒲中得到的混合物?？捎糜诒景l(fā)明的油茶包括白花油茶、紅花油茶和黃花油茶，更佳地為白花油茶，如普通油茶(CamelliaoleiferaAbel)、攸縣油茶(CamelliayuhsienensisHu)、小口十油茶(CamelliamiocarpaHu)。本發(fā)明提供的油茶蒲提取物是油茶蒲的水溶性有效部位，其中含有多酚、黃酮；以油茶蒲干基計(jì)有效部位含量為l-30w/w^，黃酮在有效部位的含量以蘆丁計(jì)為5-70w/w%。本發(fā)明提供的油茶蒲提取物是經(jīng)醇濃度為0-100v/v%的醇-水溶劑提取的物質(zhì)，所述的醇選自甲醇或乙醇。所述的提取方式選自浸提、熱回流提取、逆流提取、超聲波提取、和/或微波輻射提取。本發(fā)明提供的油茶蒲提取物，在285nm和236nm處有兩個(gè)紫外吸收峰。當(dāng)采用下述條件的高效液相色譜測(cè)定本發(fā)明提供的油茶蒲提取物時(shí)，保留時(shí)間分別為4.2分鐘，7.8分鐘，10.9分鐘，11.9分鐘的峰的面積總和是所有峰面積之和的40-80%:固定相反相色譜柱(優(yōu)選C18);流動(dòng)相乙腈和0.5-2v/v%醋酸水溶液的混合溶液；流速lmL/min。較佳地，所述的高效液相色譜測(cè)定是梯度洗脫在0-60分鐘時(shí)間內(nèi)乙腈和0.5-2v/v^醋酸水溶液的體積比從1:9變化到1:2。本發(fā)明提供的油茶蒲提取物的形態(tài)沒有特別的限定，例如可以是粉末狀、膏狀、或是液體狀(包括糊狀)。油茶蒲提取物的制備方法本發(fā)明提供的油茶蒲提取物可以通過下述方法制備獲得(1)將油茶蒲和醇_水溶劑混合，用選自下述的一種或多種方式提取得到油茶蒲提取物；浸提、熱回流提取、逆流提取、超聲波提取、或微波輻射提取。本發(fā)明采用的油茶蒲原料可以進(jìn)行預(yù)處理，也可以不經(jīng)預(yù)處理。優(yōu)選的原料是5-50目的碎片，含水量在10w/w^以下。本發(fā)明提供的油茶蒲提取物是通過醇_水溶劑提取得到。所述的醇_水溶液是體積百分比為0-100%的醇溶液，可以使用本領(lǐng)域常用的醇類，如乙醇和甲醇，優(yōu)選乙醇。所述的提取方法是熱回流提取、逆流提取、微波輔助提取、超聲波輔助提取，或其組合。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，浸提條件為提取溫度為20-10(TC，提取時(shí)間0.1-5小時(shí)，料液比W/V:1:3-30。在本發(fā)明的_個(gè)實(shí)施例中，微波輔助提取的工藝參數(shù)為微波輻射功率100-6000W，輻射時(shí)間為20秒-5小時(shí)，料液比為1:3-30(W/V);較佳地，微波輻射功率為200-4000W(更佳地為500-4000W)，輻射時(shí)間為20秒-1小時(shí)(更佳地為20秒-15分鐘)，料液比為1:5-20(W/V)。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，超聲波輔助提取料液比1:3-30(W/V)，超聲波功率50-5000W，超聲波作用時(shí)間12-180分鐘；較佳地，超聲波輔助提取料液比1:5-30(W/V)或1:3-1:20(W/V)，超聲波功率200-2000W，超聲波作用時(shí)間18-60分鐘或20-120分鐘。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，熱回流輔助提取料液比1:3-30(W/V)，溫度60-100°C，提取時(shí)間0.3-5小時(shí)；更佳地，熱回流輔助提取料液比1:3-30(W/V)，80-100°C。在另一優(yōu)選例中，在步驟(1)后還可以輔以其他高效分離手段進(jìn)一步純化。可以使用本領(lǐng)域常規(guī)的方法進(jìn)行進(jìn)一步地分離純化，其中優(yōu)選膜分離或柱層析。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，所述的膜分離的條件為采用巻式超濾膜系統(tǒng)，操作壓力為0.3-2Mpa(較佳地為0.4-1.2Mpa)，操作溫度10_70°C(較佳地為20_50°C)。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，所述的柱層析填料選自聚酰胺、硅膠、或大孔樹脂。油茶蒲提取物的用途本發(fā)明提供的油茶蒲提取物具有抑制脂肪酸合酶、減少脂肪、和抗氧化的作用。本發(fā)明提供的油茶蒲提取物可有效地抗自由基、抗氧化、抗菌、抗炎、抗輻射、脫敏、消除疲勞、緩解精神壓力、增強(qiáng)免疫功能、調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝、減肥、保護(hù)心腦血管、抗腫瘤預(yù)防癌癥、美白、促進(jìn)頭發(fā)生長(zhǎng)。因此，本發(fā)明也提供了通過給需要的受試者施加有效量的所述油茶蒲提取物來預(yù)防、改善或治療所述疾病的方法。當(dāng)施用時(shí)，所用的油茶蒲提取物有效劑量可隨施用的模式和待治療的疾病的嚴(yán)重程度而變化。具體情況根據(jù)受試者的個(gè)體情況來決定，或者在熟練一是或營(yíng)養(yǎng)師可以判斷的范圍內(nèi)。如本文所用，術(shù)語"有效量"是指可對(duì)人和/或動(dòng)物產(chǎn)生功能或活性的且可被人或/或動(dòng)物所接受的量。含有油茶蒲提取物的組合物本發(fā)明提供一種組合物，以所述組合物總重量計(jì)，它含有重量百分比為1_99%的本發(fā)明提供的油茶蒲提取物和藥學(xué)上或食品學(xué)上可接受的載體。在本發(fā)明中，各種組合物可以按本領(lǐng)域熟知的方法配制，可以將油茶蒲提取物與藥學(xué)上或食品學(xué)上可接受的載體混合配制。藥學(xué)上或食品學(xué)上可接受的載體的成分是適用于人和/或動(dòng)物而無過度不良副反應(yīng)(如毒性、剌激和變態(tài)反應(yīng))的，即有合理的效益/風(fēng)險(xiǎn)比的物質(zhì)。所述的有藥學(xué)上或食品學(xué)上可接受的載體中還可以包含甘草提取物等天然提取物、維生素和微量元素等營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑及膳食纖維、糊精。"藥學(xué)上可接受的載體"指用于治療劑給藥的載體，包括各種賦型劑和稀釋劑。該術(shù)語指這樣一些藥劑載體它們本身并不是必要的活性成分，且施用后沒有過分的毒性。合適的載體是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所熟知的，可含有液體，如水、鹽水、甘油和乙醇。另外，這些載體中還可能存在輔助性的物質(zhì)，如填充劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑、助流劑、泡騰劑、潤(rùn)濕劑或乳化劑、矯味劑、PH緩沖物質(zhì)等。在本發(fā)明的另一優(yōu)選方式中，所述的食品學(xué)上可接受的載體或賦形劑可含有填充劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑、助流劑、泡騰劑、矯味劑、包覆材料、膳食制品、或緩釋劑。對(duì)于本發(fā)明所述的組合物的劑型沒有特別的限制，可以是任何適用于哺乳服用的劑型；優(yōu)選的，所述的劑型可選自膠囊、軟膠囊、粉劑、片劑、顆粒劑、口服液、噴霧劑、霜?jiǎng)?、乳劑、水劑或膏體等。本發(fā)明的組合物包括藥物組合物、食品組合物、保健品組合物、食品配料組合物、膳食補(bǔ)充劑組合物、天然藥物原料組合物、或化妝品功能成分組合物；也可以是保健飲料、酒類等。只要它們含有或基本上由茶蒲提取物組成即可。本發(fā)明提到的上述特征，或?qū)嵤├岬降奶卣骺梢匀我饨M合。本案說明書所揭示的所有特征可與任何組合物形式并用，說明書中所揭示的各個(gè)特征，可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特別說明，所揭示的特征僅為均等或相似特征的一般性例子。本發(fā)明的主要優(yōu)點(diǎn)在于1、建立了有效的提取工藝，可確定油茶蒲提取物及相關(guān)制劑的標(biāo)準(zhǔn)化；2、可保證達(dá)到藥品有效、安全、穩(wěn)定的三個(gè)基本要求；3、充分利用了以前被丟棄的油茶蒲，減少了資源浪費(fèi)，有利于環(huán)境保護(hù)；4、提供了山茶資源的利用度，提高了經(jīng)濟(jì)效益，有利于農(nóng)民的增收。下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說明，否則所有的百分比和份數(shù)按重量計(jì)。除非另行定義，文中所使用的所有專業(yè)與科學(xué)用語與本領(lǐng)域熟練人員所熟悉的意義相同。此外，任何與所記載內(nèi)容相似或均等的方法及材料皆可應(yīng)用于本發(fā)明方法中。文中所述的較佳實(shí)施方法與材料僅作示范之用。硝酸鋁-亞硝酸鈉比色法標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制準(zhǔn)確稱取以五氧化二磷為干燥劑減壓干燥(60°C，0.09Mpa)至恒重的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品，用60%乙醇溶解，定容至250mL，搖勻，得標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液，放置低溫暗箱內(nèi)，及時(shí)檢測(cè)。分別吸取標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液1.OmL，2.OmL，3.OmL，4.OmL，5.OmL，6.OmL于25mL容量瓶中，分別用60%乙醇添至10mL，加入5%化冊(cè)2溶液1.0mL，搖勻，放置6min，再加入10%A1(N0丄溶液1.0mL，6min后加入4XNaOH溶液10mL，混勻，再用30%的乙醇定容至刻度，搖勻，放置15min后在波長(zhǎng)510nm處測(cè)定吸光度A，得蘆丁含量y(mg/mL)與吸光度A間的回歸方程。樣品中黃酮含量的測(cè)定取待測(cè)液lmL于25mL容量瓶中，測(cè)定方法同標(biāo)準(zhǔn)品，測(cè)定其在510nm處的吸光度A，由回歸方程計(jì)算黃酮含量。提取物黃酮含量(％)=(黃酮類化合物質(zhì)量/提取物質(zhì)量)X100%福林酚比色法標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作精確稱取沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品25mg，用水溶解并定容至250mL，得0.lmg/mL的對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液。精密吸取對(duì)照樣品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.OmL于10mL容量瓶中，再加入lmL福林酚顯色劑，搖勻后再加入2mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)15%碳酸鈉溶液，定容至10mL，室溫下反應(yīng)2h后測(cè)定A760，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。樣品中多酚含量的測(cè)定移取待測(cè)定提取液0.5mL于25mL容量瓶中，然后移取稀釋后的提取液O.5mL于10mL容量瓶中，依次加入lmL福林酚顯色劑及2mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)15%碳酸鈉溶液并定容，按上述標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定方法測(cè)定吸光值，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算總酚的沒食子酸當(dāng)量。提取物中多酚的含量(％)=(粗提物中多酚含量/粗提物質(zhì)量)X100%高效液相色譜測(cè)定Waters2695高效液相分離單元，Waters2996二極管陣列檢測(cè)器；色譜柱LunaC18(200X4.6mm100A5y);流動(dòng)相乙腈/1%醋酸；流速lmL/min;進(jìn)樣量20yL;洗脫梯度如下時(shí)間(min)0515201%醋酸(％)90203010乙腈(％)10807090脂肪酸合酶活性測(cè)定方法全反應(yīng)測(cè)定測(cè)活體系為100mmol/LKH2P04_K2HP04緩沖液，pH7;含有l(wèi)mmoL/LEDTA;3踐ol/LAcCoA;10iimol/LMalCoA;35iimol/L膽PH，37。C恒溫，力口入10iigFAS啟動(dòng)反應(yīng)，用北京普析通用TU-1810紫外-可見分光光度計(jì)連續(xù)監(jiān)測(cè)340nm光吸收變化。反應(yīng)總體積為2ml。最初2分鐘吸收值的變化為直線代表該反應(yīng)的初速度?？旖Y(jié)合(可逆)抑制的測(cè)定被測(cè)萃取液樣品加到測(cè)活系統(tǒng)中，再加FAS啟動(dòng)反應(yīng)，測(cè)定酶的活性為Ai，以萃取溶劑代替萃取液樣品的測(cè)活結(jié)果為Ao。Ai/Ao為剩余活性，此值越低抑制能力越強(qiáng)。此抑制通常為可逆抑制。半抑制濃度的測(cè)定在不同的萃取液加量下測(cè)定對(duì)FAS的快結(jié)合抑制，以剩余活性對(duì)每毫升測(cè)活溶液含萃取物的干重(yg/ml)作圖。由剩余活性隨抑制劑量增加而降低的曲線上可估出活性被抑制一半時(shí)的抑制濃度即為半抑制濃度(IC50)。此參數(shù)值越小抑制能力越強(qiáng)。8慢結(jié)合(不可逆)抑制的速度常數(shù)測(cè)定抑制劑加到FAS溶液中，混勻后25t:放置，在不同的時(shí)間間隔取混合溶液測(cè)定酶活性At，只加同樣量的萃取溶劑時(shí)的測(cè)活作為對(duì)照Ao。At/Ao為該時(shí)刻的剩余活性(RemainingActivity,R.A.)。實(shí)施例1用水超聲輔助提取油茶蒲提取物I(1)取油茶蒲，粉碎后過50目篩，置于容器中，加入10倍重量的水，6(TC超聲波提取20分鐘;(2)將上述提取液4000轉(zhuǎn)/分鐘的條件下離心10分鐘，取上清液，定容，以備使用；(3)取提取液，6(TC烘干后，計(jì)算油茶蒲提取物I得率為11.9%(w/w)。采用硝酸鋁-亞硝酸鈉比色法測(cè)定每100克干茶蒲中總黃酮含量為3.05克，油茶蒲提取物I中總黃酮含量為25.6%(以蘆丁計(jì))。采用福林酚比色法測(cè)定總酚得率為2.31%，油茶蒲提取物I中總酚含量為19.4%(以沒食子酸計(jì))。實(shí)施例2用50%乙醇超聲輔助提取油茶蒲提取物II(1)取油茶蒲，粉碎后過50目篩，置于容器中，加入10倍重量的50%乙醇溶液，3(TC超聲波提取30分鐘；(2)將上述提取液4000轉(zhuǎn)/分鐘的條件下離心IO分鐘，取上清液，濃縮，噴霧干燥，得油茶蒲提取物II。采用硝酸鋁-亞硝酸鈉比色法測(cè)定油茶蒲提取物中黃酮含量為28.5%(以蘆丁計(jì))。采用福林酚比色法測(cè)定油茶蒲提取物中總酚含量為21.4%(以沒食子酸計(jì))。實(shí)施例340%乙醇微波輔助提取油茶蒲提取物III(1)取油茶蒲，粉碎后過50目篩，置于容器中，加入10倍重量的40%乙醇溶液，700W微波輔助提取2分鐘；(2)將上述提取液真空減壓抽濾，取上清液，得油茶蒲提取物III。采用硝酸鋁-亞硝酸鈉比色法測(cè)定油茶蒲提取物中黃酮含量為29.8%(以蘆丁計(jì))。采用福林酚比色法測(cè)定油茶蒲提取物中總酚含量為22.0%(以沒食子酸計(jì))。實(shí)施例4用50%乙醇熱回流提取油茶蒲提取物IV(1)取油茶蒲，粉碎后過50目篩，置于容器中，加入10倍重量的50%乙醇溶液，IO(TC熱回流輔助提取2小時(shí)；(2)將上述提取液真空減壓抽濾10分鐘，取上清液，濃縮，噴霧干燥得油茶蒲提取物IV。采用硝酸鋁-亞硝酸鈉比色法測(cè)定油茶蒲提取物中黃酮含量為29.6%(以蘆丁計(jì))。采用福林酚比色法測(cè)定油茶蒲提取物中總酚含量為22.4%(以沒食子酸計(jì))。實(shí)施例5用100%甲醇超聲波輔助提取的油茶蒲提取物XVII(1)取油茶蒲，粉碎后過50目篩，置于容器中，加入IO倍重量的100%甲醇溶液，3(TC超聲波輔助提取30分鐘；(2)將上述提取液真空減壓抽濾10分鐘，取上清液，濃縮，噴霧干燥得油茶蒲提取物XVII。采用硝酸鋁-亞硝酸鈉比色法測(cè)定油茶蒲提取物中黃酮含量為29.4%(以蘆丁計(jì))。采用福林酚比色法測(cè)定油茶蒲提取物中總酚含量為23.1%(以沒食子酸計(jì))。實(shí)施例6大孔樹脂精制的油茶蒲提取物V(1)取油茶蒲50%乙醇提取物IV，溶于水；(2)取凈品級(jí)的D101大孔樹脂(購自杭州德佳科學(xué)儀器有限公司)，裝柱；(3)上樣后，分別以水、20%乙醇、40%乙醇、80%乙醇、100%乙醇洗脫兩個(gè)柱體積，分別收集后濃縮干燥得油茶蒲提取物V。采用硝酸鋁-亞硝酸鈉比色法測(cè)定各洗脫組分的黃酮含量(表1)。其中40%乙醇洗脫部分的黃酮含量最高，達(dá)到54.94%，水洗脫部分的黃酮含量最低，為1.74%。表lD101精制后各組分的黃酮含量<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>實(shí)施例7油茶蒲不同濃度乙醇水溶液提取物對(duì)脂肪酸合酶的可逆抑制作用(1)取油茶蒲，粉碎后過50目篩，置于容器中，加入10倍重量的水溶液，3(TC超聲波提取30分鐘；(2)將上述提取液4000轉(zhuǎn)/分鐘的條件下離心IO分鐘，取上清液，真空濃縮干燥，得油茶蒲提取物VI。將上述方法中的水溶液分別以不同濃度的乙醇-水溶劑(如10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%)代替，再用同樣的方法制備得到油茶蒲提取物VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV、XVI。脂肪酸合酶活性采用乙酰輔酶A、丙二酰輔酶A、NADra為底物的標(biāo)準(zhǔn)測(cè)活方法測(cè)定，計(jì)算提取物對(duì)該酶的半抑制濃度。結(jié)果如表2所示表2不同溶劑的提取物對(duì)脂肪酸合酶的半抑制濃度<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>結(jié)果表明，隨著提取溶劑中乙醇濃度的增加，提取物對(duì)脂肪酸合酶的抑制作用先增強(qiáng)后降低，40-50%乙醇提取物的抑制作用最強(qiáng)；隨著乙醇濃度的增加，提取物中的黃酮含量也呈現(xiàn)先增加后降低，其中70%乙醇提取物的黃酮含量最高。油茶蒲提取物中的黃酮含量與其對(duì)脂肪酸合酶的抑制作用呈現(xiàn)一定的相關(guān)性，抑制活性最強(qiáng)的物質(zhì)主要為極性較大部位，因此乙醇濃度升高到一定程度后，不利于這部分物質(zhì)的提取而使提取物對(duì)脂肪酸合酶的抑制作用減弱。實(shí)施例8油茶蒲提取物對(duì)脂肪合酶的不可逆抑制作用(1)取油茶蒲提取物VI，配制成一定濃度的溶液；(2)將一定量的油茶蒲提取物VI溶液與酶保溫后，在不同的時(shí)間從保溫體系中取酶與提取物的混合物，加入底物乙酰輔酶A、丙二酰輔酶A、NADra測(cè)定酶的剩余活性。樣品與酶液進(jìn)行保溫，混合保溫體系中的樣品濃度為0.025mg/ml經(jīng)過135分鐘后，酶活只剩下不到30%，見圖4。結(jié)果表明，油茶蒲提取物VI對(duì)脂肪酸合酶存在很強(qiáng)的不可逆抑制作用。實(shí)施例9油茶蒲提取物對(duì)小鼠的減肥降脂作用(1)取油茶蒲提取物VI，配成一定濃度的溶液；(2)ICR小鼠在實(shí)驗(yàn)環(huán)境下喂普通飼料7d，稱體重，隨機(jī)分成5組正常對(duì)照組、模型組、陽性對(duì)照組(奧利司他50mg/kg)、高劑量組(油茶蒲提取物VI300mg/kg)、低劑量組(油茶蒲提取物VI150mg/kg)。正常對(duì)照組動(dòng)物從實(shí)驗(yàn)開始至結(jié)束用普通飼料喂養(yǎng)，其余各組動(dòng)物均喂?fàn)I養(yǎng)飼料(蛋黃粉10%+豬油10%+普通飼料8%)。正常對(duì)照組、模型組每天灌胃給予等量蒸餾水，其余各組按上述劑量每天灌胃給予各試驗(yàn)物；(3)每周記錄體重1次；6周后，各組小鼠禁食12h，稱重，眼眶采血，分離血清，隨即頸椎脫臼處死，快速取肝臟(稱重后保存于液氮罐中)，分離睪丸、腎臟周圍脂肪，稱重。具體試驗(yàn)結(jié)果如表3、表4、表5、表6所示。表3小鼠體重變化表<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>表4小鼠血脂變化表<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>表5小鼠腎周及睪丸周圍脂肪重量<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>表6小鼠血液瘦素水平<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>結(jié)果表明，油茶蒲提取物能顯著減輕小鼠體重，使小鼠睪丸、腎臟周圍脂肪量明顯減少，同時(shí)具有顯著地調(diào)節(jié)血脂作用。實(shí)施例10油茶蒲提取物的抗氧化作用對(duì)油茶蒲提取物的清除自由基(ABTS+、DPraO能力進(jìn)行了測(cè)定。(1)對(duì)ABTS自由基的清除作用ABTS工作液的配制先配制7mmol/LABTS(購自美國(guó)Sigma公司)儲(chǔ)備液和140mmol/L過硫酸鉀(K2S208)溶液，然后取5mL7mmol/LABTS儲(chǔ)備液和88iiL140mmo1/L過硫酸鉀溶液混合后得ABTS+儲(chǔ)備液，再將該儲(chǔ)備液在室溫條件下避光儲(chǔ)備12-16h，最后將生成的ABTS、儲(chǔ)備液用無水乙醇稀釋，使其在3(TC、734nm波長(zhǎng)下的吸光度為0.70±0.02，即得到ABTS+自由基工作液。Trolox標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作準(zhǔn)確稱取Trolox標(biāo)準(zhǔn)品(購自美國(guó)Sigma公司)10mg，用甲醇溶解定容至10ml，分別吸取0、60、120、180、240、300、420iiL的標(biāo)準(zhǔn)液用甲醇稀釋至lmL。在試管中加入3.OmL的ABTS+自由基工作液，分別加入30yL不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，混合，3(TC靜置6min，在734nm波長(zhǎng)下讀取吸光值(Abs)，以Trolox的濃度對(duì)自由基的清除率做標(biāo)準(zhǔn)曲線。提取物清除ABTS自由基的能力的測(cè)定在試管中加入3.OmL的ABTS+自由基工作液，再加入30iiL的lmg/mL的待測(cè)樣品，混合，30。C靜置6min，在734nm波長(zhǎng)下讀取吸光值(Abs)，并在Trolox標(biāo)準(zhǔn)曲線上獲得待測(cè)樣品相應(yīng)的Trolox當(dāng)量濃度，定義為TEAC值。TEAC值越大表明抗氧化物質(zhì)抗氧化活性越強(qiáng)。結(jié)果見表7。表7茶蒲提取物抗清除ABTS自由基能力<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>結(jié)果表明，油茶蒲提取物有很強(qiáng)的清除ABTS自由基的能力，其中，提取物XI較VI、XIII有更強(qiáng)的清除ABTS自由基的能力，lmg/mL的提取物XI的TEAC當(dāng)量為783.8mg/L，但是較維生素C的清除ABTS自由基的能力弱。(2)對(duì)DPra自由基的清除作用采用DPra分析法測(cè)定油茶蒲提取物的清除自由基能力。該分析方法的原理是DPPH自由基是一種穩(wěn)定的以氮為中心的自由基，在515nm波長(zhǎng)處有最大吸收，其甲醇溶液呈紫色，且其濃度與吸光度呈線性關(guān)系。當(dāng)在DPPH甲醇溶液中加入自由基清除劑后，自由基清除劑可以與DPra自由基結(jié)合或發(fā)生替代，使DPra自由基數(shù)量減少，直至達(dá)到穩(wěn)定。具體分析方法如下取待測(cè)液2mL及2X10—4mol/LDPffl溶液2mL加入同一具塞試管中搖勻，在室溫下密閉靜置30min，用試劑空白作參比，于517nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，根據(jù)下列公式計(jì)算每種待測(cè)樣品對(duì)DPra自由基的清除率清除率(%)=[l-(As卿dmp錫aJ/Ac。一JX100%其中Asample為加提取液后DPra溶液的吸光度；Asampleblank為提取液的吸光度；A。。ntMl為未加提取液時(shí)DPra溶液的吸光度。以待測(cè)樣品濃度為橫坐標(biāo)，以清除率值為縱坐標(biāo)繪制待測(cè)樣品清除DPra自由基的曲線。根據(jù)曲線的線性回歸方程，計(jì)算得到DPra自由基清除率為50%時(shí)的待測(cè)樣品濃度，定義為半抑制濃度(ic5。)。根據(jù)iCs。判斷待測(cè)樣品清除DPra自由基的能力，iCs。越小表示其清除自由基能力越強(qiáng)。結(jié)果見表8。表8茶蒲提取物抗清除DPra自由基能力待測(cè)樣品清除DPPH自由基的能力線性回歸方程回歸系數(shù)(r)IC5o(mg/mL)油茶蒲100。/。乙醇提取物XVIY=1235.4X+12.1580.99980.0306油茶蒲70°/。乙醇提取物xniY=1844.8X+6.54780.99590.0236維生素cY=4008.8X+10.450.99830扁9結(jié)果表明，油茶蒲提取物xni較xvi的清除DPra自由基能力強(qiáng)，這可能與其黃酮含量相關(guān)。實(shí)施例11組合物實(shí)施例將油茶蒲提取物配入化妝品的防曬基質(zhì)中，按照下面的配方和方法配制化妝品。表9防曬化妝品配料表原料空白樣品羊毛脂5.00g5.00g<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>制備方法將A液和B液分別加熱至72-82t:，連續(xù)攪拌直至各種成分全部溶解，邊攪拌邊將A液加入B液，繼續(xù)攪拌直至所形成的乳劑冷卻至室溫(15-30°C)，最后得到lOOg防曬標(biāo)準(zhǔn)品。實(shí)施例12含油茶蒲提取物的化妝品組合物抗紫外輻射的作用將實(shí)施例11獲得的化妝品通過測(cè)定其防曬系數(shù)(sunprotectfactor,SPF)評(píng)價(jià)茶蒲提取物抗紫外輻射的性能。利用膠帶法測(cè)定樣品的防曬系數(shù)。①將3M膠帶剪成1.lcmX4.5cm大小，粘貼在石英比色皿透光側(cè)表面上。②接通電源，預(yù)熱分光光度計(jì)，選定多波長(zhǎng)測(cè)量，測(cè)量參數(shù)分兩次分別設(shè)定為TX和Abs設(shè)定紫外線波長(zhǎng)分別為290nm-400nm，波長(zhǎng)間隔為5nm。③將貼有膠帶的石英比色皿置于樣品光路和參比光路中，調(diào)整儀器零點(diǎn)。稱量9.9mg待測(cè)樣品，將樣品均勻涂在石英比色皿3M膠帶上。⑤將制備好的樣品比色皿置與37t:的干燥箱里，干燥15分鐘。⑥將待測(cè)樣品比色皿置與樣品光路中，取另一貼有膠帶的石英池置于參比光路中，分別測(cè)定UVB區(qū)設(shè)定波長(zhǎng)紫外線吸光度值和透射率，取各測(cè)定數(shù)值的算術(shù)均值。⑦依次測(cè)定5個(gè)平行樣品，計(jì)算均值，在算均值的算術(shù)均數(shù)及為該樣品的吸光度值和透射率。⑧利用下列公式計(jì)算樣品的SPF值。SPF=-1-H=柳I(抓A)其中E(A):北緯40度，太陽頂角20度，夏天中午陽光不同波長(zhǎng)的輻射強(qiáng)度。:為不同波長(zhǎng)光的紅斑效應(yīng)系數(shù)。T(A):為不同波長(zhǎng)樣品的透射率。結(jié)果空白組的SPF值為8.72±2.19，樣品組的SPF值為17.13±3.38(SPF>15為超級(jí)防曬)，所以茶蒲水提物VI具有較強(qiáng)的抗紫外輻射性能。在本發(fā)明提及的所有文獻(xiàn)都在本申請(qǐng)中引用作為參考，就如同每一篇文獻(xiàn)被單獨(dú)引用作為參考那樣。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書所限定的范圍。權(quán)利要求一種油茶蒲提取物，其特征在于，以提取物總量計(jì)，所述提取物中含有5-70w/w％總黃酮(以蘆丁計(jì))；所述油茶蒲是山茶科(Theaceae)山茶屬(CamelliaL)木本植物油茶的果實(shí)的果殼。2.如權(quán)利要求l所述的油茶蒲提取物，其特征在于，在285nm和236nm處有兩個(gè)紫外吸收峰。3.如權(quán)利要求l所述的油茶蒲提取物，其特征在于，所述的提取物是經(jīng)醇-水溶劑提取的物質(zhì)，所述的醇選自甲醇或乙醇；優(yōu)選所述的提取物是經(jīng)醇濃度為0-100v/v%的醇-水溶劑提取的物質(zhì)，所述的醇選自甲醇或乙醇。4.如權(quán)利要求1所述的油茶蒲提取物，其特征在于，所述的提取物通過如下步驟獲得(1)將油茶蒲和醇-水溶劑混合，用選自下述的一種或多種方式提取得到油茶蒲提取物；浸提、熱回流提取、逆流提取、超聲波提取、或微波輻射提取。5.—種如權(quán)利要求l-4任一所述的油茶蒲提取物的制備方法，其特征在于，所述的方法包括步驟(1)將油茶蒲和醇_水溶劑混合，用選自下述的一種或多種方式提取得到油茶蒲提取物；浸提、熱回流提取、逆流提取、超聲波提取、或微波輻射提取。6.如權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述醇-水溶劑中醇的濃度為0-100v/v%;所述的浸提條件為提取溫度為20-10(TC，提取時(shí)間0.1-5小時(shí)，料液比W/V:1:3-30;所述的微波輻射提取的條件為微波輻射功率為100-6000W，輻射時(shí)間為20秒-5小時(shí)(優(yōu)選2min-lh)，料液比為1:3-1:30(W/V);所述的超聲波提取的條件為料液比1:3-1:30(W/V)，超聲波功率50-5000W，超聲波作用時(shí)間12-180分鐘。7.如權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，在步驟(1)后還包括下述步驟(2)分離純化；所述的分離純化選自柱層析、或膜分離。8.—種如權(quán)利要求l-4任一所述的油茶蒲提取物在制備抑制脂肪酸合酶、減少脂肪或抗氧化的組合物中的應(yīng)用。9.一種組合物，其特征在于，以組合物總重量計(jì)，它含有重量百分比為1_99%的如權(quán)利要求1-4任一所述的油茶蒲提取物和藥學(xué)上或食品學(xué)上可接受的載體。10.如權(quán)利要求9所述的組合物，其特征在于，所述的組合物為飲料、酒類、膠囊、軟膠囊、粉劑、片劑、顆粒劑、口服液、噴霧劑及霜?jiǎng)⑷閯?、水劑和膏體。全文摘要本發(fā)明公開了一種油茶蒲提取物及其制備方法和用途。以提取物總量計(jì)，所述提取物中含有5-70w/w％總黃酮(以蘆丁計(jì))；所述油茶蒲是山茶科(Theaceae)山茶屬(CamelliaL)木本植物油茶的果實(shí)的果殼。文檔編號(hào)A61P35/00GK101744948SQ20081020735公開日2010年6月23日申請(qǐng)日期2008年12月19日優(yōu)先權(quán)日2008年12月19日發(fā)明者吳曉琴,姜天甲,康海權(quán),沈建福,王徐卿,陳秋平申請(qǐng)人:浙江大學(xué)