Dhea制劑及方法

專利名稱：：Dhea制劑及方法
技術領域：
：本發明提供富含形式I或形式II多晶形物的DHEA的藥物制劑，其可用于各種治療應用。具體而言，本發明涉及與以前所用的制劑相比具有更一致的生物利用度的DHEA制劑。參考文獻Arlt，W.等人，J,Clin.Endocrinol.Metab.83(6):1928-1934(1998).Barker,E.V.等人，Endocrinology134:982-989(1994).Barrett-Connor等人，NewEngl.J.Med.315:1519(1986).Caira，M.R.等人，J.Chem.Crystallogr.25:393(1995).Chang,L.C.等人，J.Pharmaceut.Sci.84:1169-1179(1995).Comer,K.A.和Falany,C.N.，Mol.Pharmacol.41:645-651(1992).Cox，RJ.等人，AcaCrystallor.C46,334-336(1990).Falany，C.N.等人，Ann.NYAcad.Sci.774:59-72(1995).Frye和Maciel，J.Mag.Res.48:125(1982).Grodin，J.M.等人，J.Clin.Endo.Metab,36:207-214(1973).工業指南分析程序的Q2B生效方法(GUIDANCEFORINDUSTRY:Q2BVALIDATIONOFANALYTICALPROCEDURES:METHODO-LOGY)，HFD-210，CDER，Rockville,MD.Kuhnert-Brandstaetter,M.,藥物分析中的熱顯微方法(THE腹OMICROSCOPYINTHEANALYSISOFPHAMACEUTI-CALS)，PergamonPress,Oxford,U.K.(1971)Lacheline，G.C.等人，J.Clin.Endocrinol.Metab.49(6):892-898(1979).Longcope，C.,Ann.NYAcad.Sci.774:143-148(1995).MacDonald,J.C.,J.Mag.Res.38:381(1980).Meikle,A.W.等人，J.SteroidBiochem.Molec.Biol.293-304(1992).Orentreich,N.等人，J.Clin.Endocrinol.Metab.59:551-555(1984).VanCauter,E.，Horm.Res.32(2):45-53(1990).Yen.S.S,等人，Ann.NYAcad.Sd.774:128-142(1995).
背景技術：
：脫氫異雄酮(DHEA)，也稱為3—13—羥基雄一5—烯一17—酮、脫氫表雄酮、反一脫氫雄酮、A5—雄烯一3—13—醇一17—酮、以及普拉睪酮，其是在由膽固醇合成各種甾體的過程中形成的天然中間體。DHEA是人類中最豐富的甾體激素，而且主要由腎上腺皮質以非活性的硫酸酯(DHEA—S)形式產生。DHEA也在睪丸、卵巢和腦中產生。在成年早期(16—24歲)達到平臺水平后，在60—70歲之前總的血清DHEA(DHEA+DHEA—S)穩定下降至峰值的約5—10%(Orentreich等人，1984)。已有人建議用DHEA治療多種醫學病癥，如全身紅斑狼皰(第5,817,650號美國專利)、原發性腎上腺機能不全(第5,861,391號美國專利)、Addison病(同上)、性欲降低(第5,855,548號美國專利)、肥胖(第5,846,962號美國專利)、骨質疏松癥(第5,846,960和5,855,548號美國專利)、以及纖維肌痛(第5,935，949號美國專利)。DHEA可通過各種途徑給藥，而且是口服有效的。外源性給藥DHEA的藥代動力學很復雜，其原因是DHEA的內源性產生、DHEA和DHEA—S之間的可逆性相互轉化，其中DHEA—S是DHEA的主要代謝物，而且作為DHEA的儲備。DHEA在內源性產生時具有很大的晝夜變化，而DHEA—S水平在白天時幾乎沒有變化。血漿DHEA的變化與ACTH和Cortisol的變化相平行，其中在清晨最大，在白天時下降，而且在傍晚時達到最小的分泌活性(vanCauter,1990;Lacheline等人,1979;Yen等人，1995)。DHEA和DHEA—S都與血清白蛋白、球蛋白、以及甾體性激素結合球蛋白結合(Meikle等人，1992;Longcope，995)。口服給藥的DHEA僅有少部分以DHEA的形式在任何給定的時間出現在血液中；大多數通過肝和肝外組織中的磺基轉移酶轉化為DHEA—S(Barker,1994:Comer,1992;Faany,1995;Arlt，1998)。在包含DHEA硫酸酯酶的周邊組織中，DHEA—S又轉化為DHEA，所述組織包括淋巴細胞和巨噬細胞。DHEA隨后代謝為雄烯二酮和強效雄激素一一睪酮和二氫睪酮、以及雌激素一一雌酮和雌二醇。脂肪組織可起到腎上腺雄激素的大儲庫作用。DHEA在周邊組織中的芳構化被認為是絕經后婦女中絕大多數雌激素生物合成的原因(Grodin等人，1973)。藥物的生物利用度在其效力上起著非常重要的作用。有報道稱，DHEA具有至少三種、最多五種無水多晶形物形式，以及至少三種含水形式，這取決于環境條件和制備方法(Chang等人，1995)。已有人報道可根據紅外光譜學和粉末衍射分析來區分已知的形式，但是S3和S4形式在使用后一種方法時不能區分(同上)。支持本發明所做的工作表明存在第六種無水形式，在此稱為形式VI，其用固態NMR可檢測到，但用紅外光譜學或x一射線粉末衍射分析不能檢測到。雖然DHEA可從各種商業來源得到，但是這些物質在其多晶形物組成上有非常明顯的變化，這使得由于體內攝取時吸收的不同導致生物利用度的不同。因此，本發明的目的是提供富含形式I多晶形物或形式II多晶形物的DHEA制劑，以達到更一致的生物利用度和更可靠的效力。本發明還包括富含形式VI多晶形物的制劑。發明簡述本發明在其一個方面中包括包含脫氫異雄酮(DHEA)和至少一種藥物賦形劑的藥物制劑，其中脫氫異雄酮的至少85%是以形式1多晶形物存在。優選的是，至少90X的DHEA是以形式I多晶形物存在，更優選為95%，并最優選為大于99%。本發明還包括基本上由DHEA的形式I多晶形物組成的制劑。在第二個實施方案中，本發明還包括包含DHEA和至少一種藥物賦形劑的藥物制劑，其中DHEA的至少85%是以形式II多晶形物存在。優選的是，至少90^的DHEA是以形式II多晶形物存在，更優選為95%，并最優選為大于99%。本發明還包括包含DHEA和至少一種藥物賦形劑的藥物制劑，其中DHEA的至少85%是以形式VI多晶形物存在。優選的是，至少90%的DHEA是以形式VI多晶形物存在，更優選為95%，并最優選為大于99%。本發明還包括基本上由DHEA的形式VI多晶形物組成的制劑。本發明還包括制備DHEA膠囊和片劑的方法。在該方法中，至少一種固體藥物賦形劑與DHEA混合，其中至少85%的DHEA是以單獨的多晶形物存在，所述多晶形物選自于形式I和形式II，然后將固體組合物放入適用于口服給藥的膠囊中或者壓制成片劑。在另一個方面中，本發明包括向宿主給藥以得到緩解結果的方法，其中，給藥藥物學上可接受的量的DHEA，至少85%的DHEA是以單獨的多晶形物存在，所述多晶形物選自于形式I、形式II和形式VI，優選為形式I和形式II。這些方法可用于治療各種醫學病癥，如全身紅斑狼瘡、骨密度丟失、骨質疏松癥、慢性疲勞綜合癥或纖維肌痛，或者用于DHEA替代治療中。本發明還包括用于控制DHEA制劑之生物利用度的方法。在該方法中，向宿主給藥治療有效量的DHEA制劑，其中，制劑中的DHEA由預先選擇的己知比例的DHEA多晶形物組成。根據申請人的發現，即、DHEA的體內生物利用度取決于DHEA的多晶形物組成，因此與以前所達到的相比，上述制劑及方法可用于使DHEA制劑實現更為均勻的生物利用度。木發明的上述以及其他目的和特征通過以下描述將更易于理解。附圖簡述圖1禾tl2分別表示在接受單個劑量的DHEA(如下所述的制劑1、2或3)后72小時，人DHEA和DHEA—S的平均基線調節血清濃度，所述制劑包含不同比例的形式I、II和VI的DHEA;以及圖3禾卩4分別表示在多劑量研究的第7—10天時人DHEA和DHEA—S的平均基線調節血清濃度，其中在第7天給藥前0.5小時時開始，使用如下所述的DHEA帝ij劑，其包含形式I、II和VI的混合物(制劑3)或者純的形式I(制劑4)。發明的詳細描述1、DHEA多晶形物本發明涉及DHEA的藥物制劑，與本發明之前的制劑相比，其具有更為一致的生物利用度和藥代動力學性質。一個方面中，本發明涉及一種包含DHEA的藥物制劑，其中至少85%、優選至少90%、更優選至少95一99%的DHEA是以形式I的多晶形物存在。此等制劑在口服給藥時具有良好的胃腸道吸收性，顯示出良好的治療活性，而且在環境條件下是高度穩定的。在另一個方面中，本發明涉及一種包含DHEA的藥物制劑，其中至少85%、優選至少90%、更優選至少95—99X的DHEA是以形式n的多晶形物存在。此等制劑在口服給藥時具有良好的胃腸道吸收性、快的吸收速率(大于形式I的多晶形物)、以及良好的治療活性，而且在環境條件下也是高度穩定的。如在此所述，與市售具有隨機多晶形物組成的制劑相比，富含形式I或形式II的制劑具有更可預測的藥代動力學特性。富含形式VI的類似制劑也包括在本發明范圍中。A、DHEA多晶形物的制備通過各種分析技術分析，如X射線衍射r紅外(IR)光譜學、以及差示掃描熱量計(DSC)，已知DHEA有幾種不同的水合形式和無水晶體形式。無水形式包括形式I、II、m、IV和V，但后兩種形式僅能用DSC暫時觀察到。水合物(溶劑化物)包括形式Sl(1/4水合物)、S2(單水合物)、S3(單水合物)和S4(1/2甲醇化物)。DHEA和前體如DHEA乙酸酯可從各種來源購得(如SigmaChemicalCo.,St.Louis,MO;AldrichChemicalCompany,Inc.;Diosynth,Inc.;Pfaltz&Bauer,Inc.;ScheringAG)。富含所選多晶形物的DHEA制劑可通過在所選溶劑中在適當冷卻或者蒸發條件下結晶市售DHEA來制備。雖然已有其他人報道了制備上述穩定形式的條件(Chang等人，1995)，但本申請的中請人發現以前報道的用于制備形式I的方法，包括Chang描述的方法，所產生的產物包含其他在此稱為形式VI的多晶形物。因此，在此所述的改進方法是兩于制備純的形式I，不包括其他多晶形物。在一個優選方法中，純的形式I是如下制備的(a)從無水2—丙醇(或者丙酮或乙腈)中在氮氣流中于室溫下結晶DHEA約2天，產生晶體沉淀物，其主要包含形式I以及一些量的形式VI，然后(b)將沉淀物懸浮在乙酸乙酯(約100ml/30g的DHEA)中，在室溫下攪拌所得槳液約1周，接著過濾。濾餅在室溫下干燥過夜。。C一SSNMR分析(以下討論)顯示，該方法制得的產物由純的或者幾乎純(〉99%)的形式I組成，用。C一SSNMR沒有檢測到其他形式。高度富含形式II的DHEA可通過由四氫呋喃(THF)、二惡烷、氯仿或者氯仿與THF的混合物中快速結晶來制得。實施例1提供了由THF結晶的具體方法，其產生的產物用X射線粉末衍射表明是純的形式II。可如下制備其他的多晶形物。形式III可通過室溫下真空使形式S3或S4脫溶劑來制得。形式VI可以純的形式得到，或者以與形式I的混合物的形式得到，其中用異丙醇結晶粗DHEA(通過皂化DHEA乙酸酯制得的，如實施例l所述，沒有甲醇重結晶的步驟)，沒有隨后的漿液化步驟。形式Sl可通過在50—60%相對濕度下在二氯甲烷中的結晶來制備，或者通過用甲醇研磨30分鐘然后空氣干燥來制備。形式S2可通過在40%乙醇或者蒸餾水中結晶來制備，或者通過在乙腈、丙酮、乙酸乙酯或THF中緩慢蒸發來制備。形式S3可通過在60%相對濕度下用水替換甲醇半溶劑化物(形式S4)的甲醇分子來制備。形式S4(1/2甲醇化物)可通過冷卻DHEA的甲醇溶液來制備。制備各種多晶形物的其他方法可參見Chang等人(1995)。B、DHEA制劑的表征為制備富含所選之DHEA多晶形物的DHEA制劑，根據本發明，重要的是能夠定量地測定DHEA物質的多晶形物含量，以確定所希望的多晶形物相對于有可能存在的其他多晶形物的富含程度。為此可使用任何合造的方法，只要該方法具有足夠的靈敏度以及精確度，以使主要優選的多晶形物的含量測定在±5%、優選±2.5%或更低之內。另外可以理解的是，測量多晶形物時所選擇的技術不能測定所有可能的多晶形物，或者其有可能以兩種或更多種多晶形物之和的形式測量某些單個多晶形物。但是，如以下所述，在測量形式I、n和VI時，這些限制不是所關心的，或者可通過結合補償方法的結果來克服。Bl、X—射線粉末衍射X—射線粉末衍射是測定晶體物質之多晶形物形式的工業標準，其可用于測定形式I+VI、II、III、Sl、S2、S3禾QS4的相對量。但是，如固態核磁共振(見以下所述)所示，該技術不能區別形式I和VI。在支持本發明所進行的研究中，如上所述制備形式I、II、III、Sl、S2、S3和S4的基本上均勻的DHEA樣品。形式VI用與形式I的36:64混合物(VI:I)進行研究。如以下材料和方法部分中所述，收集粉末衍射X—射線數據，以鑒別各種多晶形物的特征峰。所觀察到的衍射圖譜通常與以前所報道的形式I、Sl、S2禾nS4(Cox等人，1990;Caira等人，1995)的晶體結構一致。表1總結了對于各多晶形物檢測到的不同反射。DHEA樣品中的各多晶形物的相對含量可根據標準定量X—射線方法通過積分對于樣品中各DHEA多晶形物而言獨特的峰高度或峰面積來測定，其中優選枳分峰面積。發現形式I樣品的衍射圖與形式I/VI混合物的一樣，這表明X—射線衍射單獨僅能定量這些多晶形物之和。一種或者其他的形式的濃度必須獨立地通過其他技術來測定，優選用如下所述的固態NMR。表1:多晶形物的獨特反射<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>*峰位置以20度數給出，s二強，ra二中等，w二弱典型情況下，XRPD分析可通過肉眼檢查衍射圖來簡化，以確定何種多晶形物以可檢測濃度存在，然后限制積分相應于這些多晶形物的獨特反射。通常情況下，對于無水制劑，僅存在形式I、II和/或VI，沒有水合物S1—S4。濃度約為5%的少量多晶形物組分就可以容易地進行定量，其檢測的下限是約為2%。在測定包含其他物質如藥物賦形劑的藥物制劑中的DHEA多晶形物含量時，計算在有和沒有DHEA吋這些其他物質的不同衍射圖譜，從而將此等其他物質引起的反射減掉。B2、固態NMR(SSNMR)固態。C一NMR也可用于檢測和定量多晶形物或者晶體物質，而且比XRPD技術更為靈敏。但是，因為其昂貴而且費時，所以不是一種常規方法。在本發明的研究中，如上所述，需要13C—SSNMR區別DHEA的形式I和VI。可用于定量多晶形物I、II、VI和S1—S4的獨特共振峰見表2所示。通常情況下，各種多晶形物在10—18ppm(低磁場)和115—124ppm(高磁場)(ppni相對于金剛烷)中具有獨特的共振位移。但是，因為在低磁場區一些峰相互疊加，所以高磁場區通常能夠得到更好的定量結果。表2:。C一SSNMR峰位<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>a:Pouchert,C.J.,THEALDRICHLIBRARYOFNMRSPECTRA,compoundnumberl2，578-4(1983).b:已知在結構中具有2個非晶形依賴性的分子所選擇的共振峰可通過任何已知的定量技術來定量，如MacDonald(1980)描述的曲線擬合技術。對于不同濃度范圍的形式I和VI的混合物的研究表明，對于形式VI的獨特峰的響應是線性的，這表明積分方法對于測定樣品中形式VI相對于其他多晶形物如形式I的比例是可靠的。支持本發明所進行的其他研究確定，用SSNMR和X—射線衍射測定多晶形物具有良好的一致性。B3、紅外光譜學紅外光譜學也提供了用于測定DHEA制劑中多晶形物含量的另一種方法。該技術的細節可參見Chang等人(1995)。但是，與X—射線衍射一樣，似乎該技術不能區別形式I和形式VI。C、DHEA形式I和形式II的穩定性用XRPD監測的14天應力研究表明，在室溫和5(TC下，在高達84%的相對濕度(RJH)時DHEA的形式I和形式II在2周內對于固體形式轉化都是穩定的。如表3所示，14天的數據表明，形式I在室溫和95XRH時在2周內是穩定的。但是，形式II在此條件下轉化為S2。在5(TC和95%RH時，形式I轉化為S2;在5CTC和75%或更高的RH時，形式II部分地轉化為S1。在這些樣品中觀察到很少量的重量增加(<0.8%)。(在50"C吋觀察到的繭量丟失可能是因為殘留的溶劑、樣品的升華、和/或熱分解)。在25t758XRH或者4(TC/75XRH下，1、2、3和6個月后，如表中所示，形式I對于固體形式轉化仍保持穩定。總之，形式I和II在室溫和非飽和濕度下的熱條件下都是穩定的，形式I具有更大的穩定性。表3:DHEA形式I和II的穩定性<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>(a)未測定(b)溫度為40。CII、制劑和給藥包含本發明之DHEA組合物的制劑可以為各種劑型，如片劑、膠囊、粉末、控釋制劑、混懸劑、乳劑、栓劑、乳膏、軟膏、洗劑、或者氣霧劑，而且優選為適用于簡單給藥精確劑量的固體劑型。組合物通常包括常規藥物載體或賦形劑，并可另外包括其他藥劑、載體、輔劑等。優選的是，制劑包含約0.5—75重量％、更優選約5—25重量％的DHEA，其剩余部分由合適的藥物賦形劑組成。對于口服給藥，此等賦形劑可包括藥物級的乳糖、甘露醇、淀粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、滑石、纖維素、葡萄糖、明膠、蔗糖、碳酸鎂等。通常情況下，本發明的制劑可用例如膠囊或片劑進行口服給藥，以快速吸收到血流中以及分布在身體的各腔室中。給藥的量和頻率將取決于患者以及以下將詳細描述的治療應用來變化。在另一種方法中，固體制劑可以栓劑給藥，例如當口服給藥產生矛盾時。當以固體制劑使用組合物進行口服給藥時，所述制劑可以是片劑、顆粒、粉末、膠囊等劑型。對于口服給藥的膠囊制劑，具有所希望的多晶形物組分的DHEA與至少一種藥物賦形劑混合，然后將固體組合物放置在適用于胃腸道轉運的膠囊容器中。在優選實施方案中，至少90%、更優選至少95%、并最優選超過99X的DHEA是以單個多晶形物存在，所述多晶形物選自于形式I、II或VI，優選形式I或II，并最優選形式I。對于口服給藥的片劑制劑，具有所希望的多晶形物組成的DHEA與至少一種藥物賦形劑混合，然后根據已知的方法壓制固體組合物形成片劑，以用于在胃腸道中轉運。片劑組合物通常與添加劑一起配制，所述添加劑例如是糖或纖維素載體，粘合劑如淀粉糊或甲基纖維素，填料，崩解劑，或者其他通常用于制造藥物中的添加劑。本發明的制劑也可經皮或者通過吸入給藥于患者。制備各種常規劑型的方法對于本領域技術人員是已知的而且也是顯而易見的；例如可參見Remington'sPharmaceuticalSciences(第19版，Williams&Wilkins,1995)。III、藥代動力學如以下數據所示，富含多晶形物形式I或形式II的DHEA制劑可良好地在體內被吸收，而且在治療上是活性的。本發明的申請人還發現，市售得到的DHEA在其多晶形物組成中有非常明顯的變化，潛在地導致治療生物利用度和效力的變化。這些問題可通過本發明來克服。本發明提供了己知組成的DHEA制劑，其具有更可靠的治療性質，特別是具有一致的生物利用度。A、單劑量研究實施例2描述了一個有34位絕經后婦女參加的研究，其中這些婦女口服給藥三種DHEA制劑，這些制劑都是由巿售DHEA制得的膠囊劑型。這些制劑以單劑量給藥，每個劑量為4個不透明的2號膠囊，每個膠囊包含50mg的DHEA、152nig的乳糖(對于制劑3為169mg)、108mg的玉米淀粉和3mg的硬脂酸鎂。制劑的多晶形物組成的區別見下表4所示。制劑1包含82%的形式I、0%的形式11、和18X的形式VI，而制劑2包含22%的形式1、44%的形式II、和33X的形式VI(用SSNMR)。與制劑2非常類似，制劑3包含18%的形式I、43%的形式II、禾卩39%的形式VI。這些制劑中的平均粒徑根據所用的測量技術而不同，但通常在50—150um范圍內，其中制劑1中的顆粒略大(表5)。表4:制劑l一3中的多晶形物比例<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>表5:粒徑<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>在給藥以前和給藥后的各時間收集血樣，并通過免疫分析法測定DHEA和DHEA—S的濃度。時間對DHEA和DHEA—S濃度的圖分別見圖1和2。參考圖1，制劑1的曲線顯示在給藥后約3小時達到最大濃度，隨后在約12小吋后較快速地下降至最大濃度的一半，然后在約72小時后逐漸下降至最大濃度的三分之一。制劑2和3更快速地達到最大濃度，在給藥后的I小時內，然后與制劑1類似地濃度分兩個階段下降。這些結果表明，形式I和形式II在口服給藥時都具有高的生物利用度。這些數據還表明，形式II比例高的制劑2和3更快速地被吸收，與制劑1相比產生更高的生物利用度(用AUC測量高約6—14X)。DHEA—S的曲線顯示類似的圖形。所有制劑都在約3小時后達到最大濃度，這表明DHEA快速地轉化為其主要的代謝物一一硫酸酯形式。曲線的形狀也非常類似，但制劑1與制劑2和3相比表現出一致性更低濃度的DHEA—S，這與圖1中所示的DHEA結果一致。這些結果又一次表明制劑1的生物利用度比制劑2和3的低。由該研究估算的平均藥代動力學參數(見實施例1)示于下表6禾口7中。AUC(曲線下面積)是吸收程度的一個指標；C^和T,^是吸收速率的指標。所有樣品的血清DHEA濃度都在定量分析限以上。基線調節值是通過從各血清濃度值減掉給藥前1天時的血清濃度來得到的。表6:血清DHEA的基線調節平均藥代動力學參數單劑量研究<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>表7:血清DHEA—S的基線調節平均藥代動力學參數單劑量研究<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>B、多劑量研究實施例3描述了一個開標、隨機、三階段交叉藥代動力學研究，其中向39位健康的絕經后婦女口服給藥2種DHEA膠囊制劑。這些制劑以單劑量給藥，每個劑量為4個不透明的2號膠囊，每個膠囊包含50mg的DHEA、152mg(制劑4)或者169mg(制劑3)的乳糖、108mg的玉米淀粉和3mg的硬脂酸鎂。制劑3的DHEA多晶形物組成見上表4所示(18%形式1，43%形式11，和39W形式VI，用SSNMR測定)。制劑4包含基本上純(約100%)的形式I的DHEA，其用在此所述的方法制備的。在兩個各7天的研究階段的每個早晨的相同時間給藥所述劑量，這兩個7天的研究階段用一個7天洗出階段分開。在第l一6天給藥前5分鐘得到血清樣品，用于測量DHEA和DHEA—S底值。在各研究階段的第7天吋，在給藥前30分鐘得到血清樣品，然后在直至給藥后的72小時內以各種吋間間隔得到血清樣品，并如實施例3所述用免疫分析測定DHEA和DHEA—S的濃度。表8和9顯示了這兩種制劑的基線調節的藥代動力學參數AUCM4_16S(吸收程度)、T,，^和C,(吸收速率)。AUC144—168值代表單劑量間隔(第7天)，其是多劑量研究的標準。表8:血清DHEA的基線調節平均藥代動力學參數多劑量研究<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>表9:血清DHEA—S的基線調節平均藥代動力學參數多劑量研究<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>與上述單劑量研究的結果一致，從吸收速率和吸收度方面看，與制劑3(多晶形物的混合物)相比，制劑4(約100%的形式1)的生物利用度略低。在第7天給藥前0.5小吋一第10天的時間對DHEA和DHEA—S的濃度的圖分別示于圖3和4中。同樣，這些圖表明雖然兩種制劑都被快速吸收，但是形式II比例高的制劑3更快速地被吸收，而且比包含純的形式I的制劑4具有更高的生物利用度。IV、DHEA制劑的生物等價在一個方面中，本發明涉及控制DHEA制劑之生物利用度并實現不同制劑之間的生物等價的方法。例如，可由不同批次的DHEA制備包含不同比例的DHEA和賦形劑的的不同DHEA制劑，而且它們在體內表現出不同的生物利用度。如上所述，本發明的發明人發現因為DHEA來源不同DHEA之間在它們的多晶形物組成(1)上也有顯著的變化，而且(2)相同來源但批次不同也產生顯著的變化，所以由市售DHEA制得的藥物制劑有可能在它們的體內生物利用度上產生顯著的變化。本發明還包括控制DHEA制劑的生物利用度的方法。在該方法中，給藥治療有效量的DHEA制劑，該制劑包含預先選擇的已知比例的DHEA多晶形物。也就是說，DHEA制劑是用己知比例(和量)的一種或多種DHEA多晶形物制得的，例如使用如上所述的合適結晶條件，或者混合合適量的所希望的多晶形物。可選擇多晶形物比例以提供所希望的DHEA生物利用度，例如基于用以上所述的方法和實施例2中的方法評估生物利用度。根據本申請的申請人的發現，即、DHEA的體內生物利用度取決于DHEA的多晶形物組成，與以前所達到的相比，該方法可用于實現DHEA制劑之更均勻且更可預測的生物利用度。V、適應癥已有報道稱DHEA可用于治療許多醫學病癥。可治療的示例性病癥包括例如全身性紅斑狼瘡(McGuire等人，第5,817,650號美國專利)，其中給藥劑量為約25—500mg/天，并可任選地與糖皮質激素如潑尼松共同給藥。在治療原發性腎上腺機能不全或Addison病(S.S.C.,Yen等人，第5,861,391號美國專利)時，糖皮質激素也可用于補充DHEA，其給藥劑量為0.25—2.0mg/kg。DHEA也可用于增強對病毒感染的免疫應答(第5,077,284號美國專利)，例如治療無免疫應答的患者，如AIDS患者，其劑量為4O0mg/天。根據Coeman等人(第4,518,595號美國專利)，糖尿病可通過每天給藥120—480g/kg來治療，或者其量等于約0.1—0.4重量%的食物攝取量。骨密度丟失，如骨質疏松癥或骨質稀少患者中，也可用DHEA治療(參見例如Labrie，第5,776,923號美國專利)，其典型劑量為每天約32mg/kg。DHEA對于治療慢性疲勞綜合癥或者纖維肌痛也是有效的，例如參見Wh'te，第5,935,949號美國專利。令人感興趣的其他病癥和建議劑量總結于下表中。最佳劑量、頻率和治療吋間在個體患者之間總是不同的，而且本領域技術人員可通過已知方法來確定。表10:用DHEA治療的所選病癥<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>由以上可以看出本發明的目的和特征是如何實現的。本發明提供富含多晶形物形式I、形式II、或形式VI的DHEA藥物制劑，優選富含形式I或形式n,并更優選形式I。與以前所用包含不同量的多種DHEA多晶形物的DHEA制劑相比，本發明的制劑可產生一致的生物利用度。富含DHEA形式I的制劑高度穩定，而且所形成的藥物制劑可在長時間保持恒定水平的DHEA活性(例如超過1或2年)。図此，富含形式I的制劑具有長的儲存期，這對于藥物產品是非常令人希望的。富含形式II的制劑也是穩定的，但比形式I的制劑略差，另外比形式I的制劑具有更快速的體內吸收速率(和更高的效力)。因此，富含形式II的制劑也是有治療價值的。可根據以下實施例進一步理解本發明，這些實施例僅是說明性的，而絕不是對本發明范圍的限制。實施例材料和方法X—射線粉末衍射(XRPD):XRPD分析是在SiemensD-500X-射線粉末衍射計-Kristaloflex或者ShimadzuXRD-600X-射線粉末衍射計上進行的，其中后者使用CuKa照射(1.5406埃)。Siemens儀器裝配有IBM適應性界面，并使用DIFFRACAT軟件(SOCABIM，1994)。狹縫I和II設定為1°,而照射用KevexPsiPeltier冷卻的硅檢測器過濾，其中狹縫III為1°，而IV是0.15°。每天分析硅標準物以檢査儀器并進行調整。將少量的粉末壓在零背景的嵌有石英的鋁制樣品容器中。Shimadzu儀器裝配有精細焦距的X—射線管。管功率設定在40kV/40mA。擴張和散射狹縫設定為1°，而接收狹縫設定為0.15。。衍射輻射用Nal閃爍檢測器檢測。使用4—40°2e的9一29連續掃描，速度為37min(0.4sec/0.02。歩)。每天分析硅標準物以檢査儀器并進行調整，而且每天分析氧化鋁標準物以檢查X—射線管輸出。用于分析的各樣品是如下制得的用杵將樣品壓在玻璃或石英樣品容器上。定量工作(峰高度和面積的測量)通常在Shimadzu儀器上進行。使用在WindowsNT上運行的GRAMS/325.05版進行XRPD峰高度和面積的測量。在定量FII與FI+FVI的比例時，e—2e連續掃描在預定的范圍(17—23°2e)中進行，選擇的掃描范圍是0.5—3.07min，通常是17min(0.4sec/0.02。步)，每個樣品進行三次。XRPD文件轉換為ASCII格式，并讀入在WindowsNT上運行的GRAMS/325.05版。對于每個掃描，測量獨特的形式I峰(通常為18.5—20.2°29)和獨特的形式II峰(通常為20.5—21.2°2()范圍內測定20.8。20)的峰面積和高度。使用標準化的FI和FII的混合物，范圍是在FI中0—100%FII，間隔為10%，但也包括包含5%FII的樣品，由此產生標準曲線。對每個樣品測得的3個高度(或面積)進行平均，并將該平均值輸入用標準曲線定義的等式中。固態NMR方法(SSNMR):SSNMR光譜是在GeneralElectricOmegaPSG，lOMHz光譜儀上得到的，其中使用約50mg的樣品，該樣品在5mm直徑的氧化鋯轉片中。使用高功率質子去偶聯和交叉極化，其中磁角在約5kHz下旋轉。如Frye和Maciel(1982)所述，使用KBr的Br信號通過檢測側帶調節磁角。化學位移在外部參考金剛垸在29.50ppm處的CH共振。如MacDonald(1980)所述對所選擇的峰進行積分曲線擬合。使用以下峰測量形式I、II和VI:在118.8禾口120.3ppm處的峰的和(形式1)、在119.8ppm處的峰(形式II)、以及在118.5ppm處的峰(形式VI)。多晶形物含量的測定:為測定包含DHEA的材料中各種可能的DHEA多晶形物的量，使用以下3步法。1、肉眼檢查XRPD圖形，以定量地證實僅存在無水形式。2、定量分析XRPD,以測定在形式FI、FII禾n/或FVI混合物中存在的形式FII的量。3、定量分析SSNMR，以測定形式FI和FVI的存在量。實施例l:DHEA和多晶形物I和II的制備DHEA的合成:在甲醇中使用碳酸鉀進行皂化，由此用DHEA乙酸酯(得自于Diosynth，Chicago,IL或者Beriichem,Montville,NJ)制備DHEA。于回流下將產物溶解在6份甲醇中，任何添加炭，并通過過濾除去。蒸發甲醇，直至殘留3份的體積，然后將溶液冷卻至15°C，并在該溫度下保持1小時，接著過濾。濕產物用8.5份的水回流以除去甲醇，過濾，然后在9CTC下真空干燥。最終產物的干燥失重小于等于0.5%，而對于殘留甲醇為小于等于0.01%。形式I的制備:在氮氣中將30g如上制得的DHEA放置在500ml燒瓶內。添加無水2—丙醇(異丙醇)，直至所有的DHEA都溶解。在氮氣中攪拌所得的溶液2天，在此期間所有的溶劑都被蒸發。SSNMR分析表明，產物包含形式I和VI的混合物，其中主要是形式I。為將形式VI組分轉化為形式I，將產物(30g)添加在約100ml的乙酸乙酯中，然后在室溫下攪拌所得漿液1周，接著過濾。濾餅在室溫下干燥過夜，然后由單個篩網(75iim)中通過，產生9.0g粒徑〉75um的顆粒和3.2g粒徑<75txm的顆粒。^C一NMR分析粒徑〉75um的部分，表明僅存在形式I。形式II的制備:在氮氣中將30g的DHEA放置在500ml燒瓶內。添加無水四氫呋喃，直至所有的DHEA都溶解。在氮氣中攪拌所得的溶液3天，在此期間所有的溶劑都被蒸發。從燒瓶中取出固體，而且SSNMR分析表明僅為形式II(Siemens衍射計)。實施例2:口服給藥DHEA制劑的藥代動力學單劑量研究本研究是開標、隨機、三階段的交叉藥代動力學研究，其中有34位健康的絕經后婦女參加。受試者在給藥前的夜里聯系，而且開始保持禁食一夜，其中在給藥前10小吋不吃、喝任何東西(包括不允許喝水)。在給藥前30分鐘抽取血清樣品以測定DHEA和DHEA—S，然后在受試者接受200mg口服劑量的DHEA(4個制劑1或2的膠囊)和8盎司水后0、0.5、i、1.5、2、3、4、6、8、10、2、16、24、48和72小時時抽血清樣品測量DHEA和DHEA—S。在下一個給藥前，每個給藥期間跟隨7天的洗出期。用非極性溶劑萃取后，在EndocrineSciencesInc.用放射免疫分析(RIA)測定DHEA濃度。方法有效數據表明回收范圍是92—99%，撿測限(LOD)是18.9.ng/d，定量限(LOQ)為87.5ng/dl，分析內精度小于等于5。％，而分析間精度小于等于10%。用對照圖監測內部分析對照。在酶解DHEA—S后，在EndocrineSciencesInc.用放射免疫分析(RIA)測定DHEA—S濃度。方法有效數據表明回收范圍是86—106%，檢測限(LOD)是3.6ng/dl，分析內精度小于等于7%，而分析間精度小于等于10%。用對照圖監測內部分析對照。各膠囊包含50mg的DHEA(制劑l、2或3)以及賦形劑，該賦形劑包括152rag的乳糖(對于制劑3為169mg)、108mg的玉米淀粉、以及3mg的硬脂酸鎂。稱重并通過14號不銹鋼篩網篩選所有單個組分，使它們不結塊，由此制備原料量的制劑(約150kg)。除硬脂酸鎂外，使用Patterson-Kelly雙殼10立方英尺的干燥V型混合器混合所有組分至少10分鐘。添加硬脂酸鎂，并摻混在上述混合物中至少5分鐘。從混合物的不同區域取樣，用HPLC(isocratic，1ml/min45:45:10乙腈:水甲基叔丁基醚，Synchropak柱(C18RP—P—100，5微米，250X4.6mmi.d.，得自于Thinchrom,Inc.,Lafayette,IN))定量DHEA的重量含量，由此證實已均勻化。稱重后，將混合物放入不透明的2號明膠膠囊(Capsugd或Shionogi)中，填充重量為313mg。藥代動力學數據的產生以及統計學分析:使用MicrosoftExcel、SAS和WmNonlm"目于數據形成、統計學分析、以及患者數據的藥代動力學(PK)評估。減去基線(-0.5小時和0小時血清濃度的平均值)，由此計算經調節的血清濃度。小于0的任何經調節的值都設定為0。對于DHEA和DHEA一S，由濃度一時間數據評估峰值血清濃度(Cmax)和到達峰值濃度的時間(Tmax)。測定所有處理中觀察到的最大血清DHEA和DHEA—S濃度(Cmax)以及相應的取樣時間(Tmax)。T,以各處理開始后的時間表示。DHEA和DHEA—SAUC(曲線下面積)值用線性梯形方法由0—72小時(AUC(.72))或者最后可測量的濃度來確定。O—無限范圍內的濃度一時間曲線下的面積(AUC.M)使用以下等式確定AUC()-oo二AUC^t+Clast/kel其中AUC^是用線性梯形方法測定的0—最后可測量濃度(Clasl)時的濃度一時間曲線下的面積，而、是終止消除速率常數。終止消除速率常數是通過在終止消除期間對單個濃度對數和時間進行線性回歸而測定的。消除速率常數是如下評估的對濃度的自然對數和取樣時間進行回歸分析，取樣在規定的范圍內進行多次。使用最后三個點、然后最后四個點重復進行回歸。用0.693除以k。,計算出半衰期(tl/2)。描述DHEA和DHEA—S在處理期間的藥代動力學的主要藥代動力學參數是0—72小吋的血清濃度曲線下的面積(AUCV72))、最大血清濃度(C隨)、以及到達最大血清濃度的時間(T隨)。這些參數的比較可使用RPOCGLM軟件(PCSAS，6.10版)通過分析方差(ANOVA)模型來進行。實施例3:口服給藥DHEA制劑的藥代動力學單劑量研究本研究是一個開標、隨機、穩態、雙治療交叉的研究，其針對健康的絕經后婦女中DHEA的藥代動力學/藥效學。在兩個各7天的研究階段中都給藥DHEA,其中間隔7天的洗出期(第l一7天和第15—21天)。受試者在每個研究階段的7天中在早晨的相同時間口服給藥單個200mg劑量的DHEA(4個50mg膠囊)。指示受試者在各DHEA給藥前禁食10小時。每個膠囊包含50mg的DHEA和藥物賦形劑(169mg(制劑3)或者152mg(制劑4)的乳糖、108mg的玉米淀粉和3mg的硬脂酸鎂)，使膠囊的總填充重量對于制劑3和制劑4分別為330和313mg。受試者在每個研究期間隨機接受這兩種制劑中的一種。制劑3的DHEA多晶形物組成見上表4所示(18%形式1，43°%形式II，和39%形式VI，用SSNMR測定)。制劑4包含基本上純(約100%)的形式I的DHEA，其用在此所述的方法制備的。在各硏究階段的第1禾n6天，在口服給藥DHEA200mg前5分鐘，得到血清樣品，以測量DHEA和DHEA—S的底值。在各研究階段的第7天時，受試者接受相同的早餐(給藥后2小時)、午餐(給藥后6小時)和晚餐(給藥后10小時)。進行完整的藥代動力學研究，在給藥前30分鐘得到血清樣品，然后在給藥后0、1、1.5、2、2.5、3、4、6、8、12、24、36、48、60和72小時再得到血清樣品。在QuestDiagnosticsInc.、Nichol'sInstitute用放射免疫分析(RIA)測定DHEA的濃度。方法有效數據表明定量下限(LLOQ)為約10ng/dl。基本上如上述實施例2產生藥代動力學參數并進行統計學分析。該研究中血清DHEA和DHEA—S的估算平均藥代動力學參數總結在以上的表8和9中(部分IIIB)。雖然已參考具體的方法和實施方案描述了本發明，但應認識到，在不偏離本發明精神的情況下還可進行各祌改進。權利要求1、一種藥物制劑，其包括脫氫異雄酮(DHEA)以及至少一種藥物賦形劑，其中至少85％的DHEA是以形式I的多晶形物存在。2、如權利要求1所述的制劑，其中，至少90%的所述脫氫異雄酮(DHEA)是以形式I的多晶形物存在。3、如權利要求1所述的制劑，其中，至少95%的所述脫氫異雄酮(DHEA)是以形式I的多晶形物存在。4、如權利要求1所述的制劑，其中，至少99。/^的所述脫氫異雄酮(DHEA)是以形式I的多晶形物存在。5、一種制備固體DHEA制劑的方法，所述方法包括使至少一種固體藥物賦形劑與如權利要求l一4之一所述的脫氫異雄酮(DHEA)混合。6、如權利要求5所述的方法，其進一步包括以下步驟將固體制劑放入適用于胃腸道轉運的膠囊容器中。7、如權利要求5所述的方法，其進一步包括將固體制劑壓制成片劑的步驟。8、如權利要求1_4之一所述的DHEA制劑在制備用于治療全身性紅斑狼瘡、預防或減少骨密度丟失、或治療慢性疲勞綜合癥或纖維肌痛的藥物組合物中的應用。9、如權利要求1所述的制劑在制備DHEA生物利用度一致的藥物組合物中的應用。全文摘要本發明公開了一種用于治療應用的經改進的藥物制劑，其包括富含經選擇的多晶形物形式的脫氫異雄酮(DHEA)。在一個實施方案中，該制劑為固體形式，并包括DHEA以及至少一種藥物賦形劑，其中至少85％的DHEA是選自于形式I的多晶形物和形式II的多晶形物的單個多晶形物。本發明還公開了制備和使用所述制劑的方法。文檔編號A61K9/48GK101543500SQ20081018435公開日2009年9月30日申請日期2000年3月16日優先權日1999年3月18日發明者杰格迪什·帕拉斯拉姆普里阿,瑪克辛·B·揚克,肯尼斯·E·施瓦茨,馬克·J·格威斯申請人:基因實驗室技術公司