專利名稱：：由高烏頭和獨一味組成的藥物組合物及其制備方法和用途的制作方法
技術領域：
：本發明涉及一種藥物組合物及其制備方法，特別涉及一種用于鎮痛抗炎的由高烏頭和獨一味組成的藥物組合物及其制備方法。
背景技術：
：高烏頭分布于河北蔚縣小五臺山、山西、青海日月山以東各縣、陜西、甘肅、湖北遣、四川及貴州等省。其根有毒，入藥，能消腫止痛、活血散瘀、祛風，主治骨折、風濕性腰腿痛、瘡布、梅毒、心悸、胃痛、跌打損傷等癥。該化合物安全性高，具有強力鎮痛作用及解熱、抗炎癥作用。獨一味，性苦，微寒。有小毒。該物種為中國植物圖譜數據庫收錄的有毒植物，其毒性為全草有小毒。生于高山強度風化的碎石灘中或高山草地，分布西藏、四川、甘肅等高原地區。具有活血祛瘀，消腫止痛作用。目前尚未有將兩味藥物合用于鎮痛和抗炎的藥物，二者的合用，提高了藥效，得到了前所未有的效果。
發明內容本發明目的在于提供一種用于鎮痛抗炎的藥物組合物；本發明另一個目的在于提供該組合物的制備方法。本發明目的是通過如下技術方案實現本發明藥物組合物的原料藥組成為高烏頭1-IO重量份獨一味1-10重量份。本發明藥物組合物的原料藥優選組成為高烏頭5重量份獨一味5重量份。本發明藥物組合物的原料藥優選組成為高烏頭4重量份獨一味6重量份。本發明藥物組合物的原料藥優選組成為高烏頭6重量份獨一味4重量份。本發明藥物組合物的原料藥優選組成為高烏頭2重量份獨一味9重量份。本發明藥物組合物的原料藥優選組成為高烏頭9重量份獨一味2重量份。本發明藥物組合物加入常規輔料，按照常規工藝，制成臨床或藥學上可接受的片劑、膠囊劑、散劑、軟膠囊劑、滴丸、蜜丸、丸劑、顆粒劑、蜜煉膏劑、緩釋制劑、速釋制劑、控釋制劑、口服液體制劑、注射制劑或外用制劑。本發明藥物組合物的制備方法為以下方法任意一種-將獨一味藥材用水提取一至三次，合并提取液，得獨一味提取物；或將獨一味藥材用20%-70%乙醇提取一至三次,合并提取液，回收乙醇至無醇味，繼續加水至提取液體積的1-10倍，離心，取上清液濃縮至干，得獨一味提取物；另取高烏頭用30%-無水乙醇浸泡，放出浸泡液，并繼續用乙醇滲漉，收集乙醇溶液，并回收乙醇，用鹽酸溶解殘留物，離心，取上清液，加入氨水溶液，調節pH值7-14后，用三氯甲烷萃取，合并三氯甲烷溶液，回收至干，得高烏頭提取物；將以上獨一味提取物及高烏頭的提取物混合，加入常規輔料，按照常規工藝，制成臨床或藥學上可接受的片劑、膠囊劑、散劑、軟膠囊劑、滴丸、蜜丸、丸劑、顆粒劑、蜜煉膏劑、緩釋制劑、速釋制劑、控釋制劑、口服液體制劑、注射制劑或外用制劑。或者將獨一味藥材用水提取一至三次，合并提取液，得獨一味提取物；或將獨一味藥材用20%-70%乙醇提取一至三次，合并提取液，回收乙醇至無醇味，繼續加水至提取液體積的1-10倍，離心，取上清液通過大孔吸附樹脂柱，先用水洗脫至流出液無色，再用乙醇解吸附，收集乙醇溶液，減壓回收乙醇，并濃縮至干，得獨一味提取物；另取高烏頭用30%-無水乙醇浸泡，放出浸泡液，并繼續用乙醇滲漉，收集乙醇溶液，并回收乙醇，用鹽酸溶解殘留物，離心，取上清液，加入氨水溶液，調節pH值7-14后，用三氯甲垸萃取，合并三氯甲烷溶液，回收至干，得高烏頭提取物；將以上獨一味提取物及高烏頭的提取物混合，加入常規輔料，按照常規工藝，制成臨床或藥學上可接受的片劑、膠囊劑、散劑、軟膠囊劑、滴丸、蜜丸、丸劑、顆粒劑、蜜煉膏劑、緩釋制劑、速釋制劑、控釋制劑、口服液體制劑、注射制劑或外6用制劑。本發明藥物組合物的制備方法優選為以下方法任意一種將獨一味藥材用水提取三次，合并提取液，得獨一味提取物；將獨一味藥材用50%乙醇提取三次，合并提取液，回收乙醇至無醇味，繼續加水至提取液體積的5倍，離心，取上清液濃縮至干，得獨一味提取物；另取高烏頭用70%乙醇浸泡，放出浸泡液，并繼續用乙醇滲漉，收集乙醇溶液，并回收乙醇，用鹽酸溶解殘留物，離心，取上清液，加入氨水溶液，調節pH值8-13后，用三氯甲烷萃取，合并三氯甲烷溶液，回收至干，得高烏頭提取物；將以上獨一味提取物及高烏頭的提取物混合，加入常規輔料，按照常規工藝，制成臨床或藥學上可接受的片劑、膠囊劑、散劑、軟膠囊劑、滴丸、蜜丸、丸劑、顆粒劑、蜜煉膏劑、緩釋制劑、速釋制劑、控釋制劑、口服液體制劑、注射制劑或外用制劑。或者將獨一味藥材用水提取三次，合并提取液，得獨一味提取物；或將獨一味藥材用50%乙醇提取三次，合并提取液，回收乙醇至無醇味，繼續加水至提取液體積的4倍，離心，取上清液通過大孔吸附樹脂柱，先用水洗脫至流出液無色，再用乙醇解吸附，收集乙醇溶液，減壓回收乙醇，并濃縮至干，得獨一味提取物；另取高烏頭用70%乙醇浸泡，放出浸泡液，并繼續用乙醇滲漉，收集乙醇溶液，并回收乙醇，用鹽酸溶解殘留物，離心，取上清液，加入氨水溶液，調節pH值8-13后，用三氯甲烷萃取，合并三氯甲烷溶液，回收至干，得高烏頭提取物；將以上獨一味提取物及高烏頭的提取物混合，加入常規輔料，按照常規工藝，制成臨床或藥學上可接受的片劑、膠囊劑、散劑、軟膠囊劑、滴丸、蜜丸、丸劑、顆粒劑、蜜煉膏劑、緩釋制劑、速釋制劑、控釋制劑、口服液體制劑、注射制劑或外用制劑。其中，上述重量份與體積份的關系是g/ml的關系。藥效學進行了有效部位組方配比試驗，結果證明，高烏頭與獨一味聯合使用，可減少高烏頭的劑量，而鎮痛效果不降低，在抗炎試驗中，獨一味與高烏頭連用，可增強單獨用藥效果，也有增效作用。同時獨一味不增加高烏頭的毒性。在此基礎上進行了鎮痛試驗，對化學性剌激、炎性刺激、光熱剌激、電剌激等模型動物均有非常顯著的鎮痛作用，尤其對類風濕關節炎、惡7性腫瘤引起的疼痛具有顯著療效。圖l:第14天各組小鼠縮足反應百分率對照圖。下面實驗例和實施例用于進一步說明但不限于本發明。實驗例1對小鼠醋酸扭體的影響1.藥物與試劑藥物高烏頭；獨一味；本發明高中低劑量樣品；曲馬多(陽性對照)；醋酸，分析純，北京化工廠。2.動物昆明種小鼠，雄性，體重1822g，由軍事醫學科學院實驗動物中心提供，合格證號SCXK(軍)2002-001。3方法取小鼠70只，雌雄各半，按性別、體重隨機分為7組，每組10只，I組為陰性對照組，II組為高烏頭組，III組為獨一味組，IV組為本發明藥物低劑量組(高烏頭40mg+獨一味40mg/kg)，V組為本發明藥物中劑量組(高烏頭50mg+獨一味50mg/kg)，W為本發明藥物高劑量組(高烏頭60mg+獨一味60mg/kg)，W為陽性對照組(曲馬多)。口服給藥30分鐘后，分別向腹腔注射0.6%的醋酸溶液0.2ml/只，記錄15min內小鼠扭體次數。表1對醋酸致小鼠扭體次數的影響組別動物數劑量(只)mg(生藥量)/kg扭體次數抑制率(%)對照組(陰性I)10-29.80±12.54高烏頭組(II)1010022.90±5.6323.2獨一味組(m)1010019.3±6.3835.2本發明低劑量組(IV)108017.80±4.5740.3本發明中劑量組(V)1010015.40±3.8748.3本發明高劑量組(VI)1012010.70±1.6464.1對照組(陽性vn)10713.00±5.9656.44結果實驗結果顯示本實驗設對照組、陽性藥組曲馬多，獨-低、中、高劑量7組。由實驗結果可知，獨-作用(結果見表l)。其中，獨一味與高烏頭-實驗例2小鼠水浴甩尾試驗-味、高烏頭單一味藥及本發明味及高烏頭的高劑量均有鎮痛二者的合用，顯著提高了藥效。81.藥物與試劑藥物I組為陰性對照組，II組為高烏頭組，III組為獨一味組，IV組為本發明藥物低劑量組(高烏頭40mg+獨一味40mg/kg)，V組為本發明藥物中劑量組(高烏頭50mg+獨一味50mg/kg)，VI為本發明藥物高劑量組(高烏頭60mg+獨一味60mg/kg)，W組為陽性對照組(曲馬多，7mg/kg);2.動物昆明種小鼠，雄性，體重1822g，由軍事醫學科學院實驗動物中心提供，合格證號SCXK(軍)2002-001。3、方法先取小鼠70只，雄性，分層隨機分為對照組、樣品組，陽性組。給藥前先用秒表測定各小鼠的痛閾(小鼠自尾尖浸入50ec溫水中至尾部甩起的時間，以下稱甩尾潛伏期)，單次給藥后0.5h，lh，2h，4h，6h分別測定甩尾潛伏期，計算鎮痛率，進行組間t檢驗。鎮痛率=(甩尾潛伏期-痛閾)/痛閾X100%根據篩選結果比較二者之間的鎮痛作用。4、結果由實驗結果可知，獨一味及高烏頭的高劑量均有顯著的鎮痛協同作用(結果見表2)。<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>實驗例3抗炎作用試驗抗炎作用試驗——對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的作用(一)試驗材料1.藥物高烏頭；獨一味；本發明藥物低、中、高劑量組；曲馬多(陽性對照)；二甲苯；醋酸；角叉菜膠，Sigma產品。2.動物昆明種小鼠，體重18-22g，雌雄各半。3.儀器剃毛器、電子天平，秒表，鼠足容積測定器。(二)試驗方法和結果取小鼠70只，雌雄各半，按性別、體重隨機分為7組，每組10只，I組為陰性對照組，II組為高烏頭組，III組為獨一味組，IV組為本發明藥物低劑量組(高烏頭40mg+獨一味40mg/kg)，V組為本發明藥物中劑量組(高烏頭50mg+獨一味50mg/kg),VI組為本發明藥物高劑量組(高烏頭60mg+獨一味60mg/kg)，Vn為陽性對照組(曲馬多，7mg/kg)。口服給藥30分鐘后，用溫水將右耳擦拭干凈，滴二甲苯0.03ml致炎，40分鐘后，頸椎脫臼處死動物，剪下左右耳廓，在雙耳同一相應部位用直徑6mm的打孔器沖下耳片，用分析天平稱重。以兩耳片重量差為腫脹程度指標，比較給藥組與對照組間的差異，并求出抑腫率，結果見表3。腫脹度=右耳重量-左耳重量對照組耳片重量-給藥組耳片重量對照組耳片重量X100%試驗結果相對于陰性對照組，高烏頭組、獨一味組、本發明組均能抑制小鼠右耳腫脹。本發明抑制腫脹率明顯高于高烏頭組與獨一味組，表明本發明具有良好的抗炎作用，獨一味與高烏頭有協同作用。<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>實驗例4對佐劑關節炎大鼠抗炎作用的試驗(一)試驗材料1、主要藥物高烏頭；獨一味；本發明藥物低(高烏頭80mg+獨一味80mg/kg)、中(高烏頭100mg+獨一味100mg/kg)、高劑量組(高烏頭120mg+獨一味120mg/kg);醋酸可的松(陽性對照)。2、動物健康成年雄性SD大鼠50只，體重190210g(蘭州生物制品研究所實驗動物中心提供，合格證號醫動字第14-001)。(二)方法1、佐劑性關節炎(AdjuvantArthritis,AA)大鼠模型的建立弗氏完全佐劑(Freund，sCompleteAdjuvan，FCA)的制備無水羊毛脂加熱溶化后取1份置于研缽中，稍冷卻，邊研磨邊加入液體石臘2份。研磨0.5小時后，加熱至70°C10分鐘，然后高壓滅菌1小時，取出后按每毫升加入卡介苗7.5mg，研磨均勻，置4'C冰箱保存備用，使用前需混勻。動物造模前在相同光照條件下適應性喂養1周，于需造模大鼠右后足跖皮下進針至踝關節，注射上述佐劑O.lmL致炎，誘導關節炎發生。各組大鼠相同條件下喂養，自由攝食，飲水。室溫控制在1518'C，濕度70%左右。2、分組、給藥方法及相關指標測定隨機分為5組，分別為模型組、本發明藥物組合物低劑量組(高烏頭8011^+獨一味80mg/kg)、中劑量組(高烏頭100mg+獨一味100mg/kg)、高劑量組(高烏頭120mg+獨一味120mg/kg)、陽性藥醋酸可的松組(100mg/kg)，每組IO只。造模后第3天開始給藥，連續給藥至致炎后第24天。陽性對照組為腹腔注射給藥，其余組均為經皮給藥(每天l次)，模型組給等量生理鹽水。分別于給藥后測定各大鼠雙后肢足跖部周長，不同天數稱量大鼠體重，測量雙側足跖部周長，同時觀察大鼠全身炎癥反應及血管周圍炎癥程度，計算關節炎指數，由上述指標綜合判斷藥物作用。關節炎指數評分標準為0分，為無紅腫；l分，小趾關節稍腫；2分，趾關節和足趾腫脹；3分，踝關節以下足爪腫脹；4分，踝關節在內全部足爪腫脹；耳朵，一個紅斑計0.5分；尾巴，一個結節計0.5分；前肢，一個前肢腫脹計0.5分。給藥第24天測定完大鼠體重、關節周長和關節炎指數后，處死大鼠，取胸腺、脾和腎上腺稱重，計算臟器系數。3、統計學分析所有數據用均數士標準差(i士O表示，采用SPSS11.5統計軟件進行數據處理。進行單因素方差分析，方差具有齊性時用LSD檢驗，方差不齊用Dunnett'sT3檢驗進行各組間比較。P〈0.05表示差異有顯著性。(三)結果本發明藥物組合物高、中劑量可抑制大鼠致敏后第3-24天內注射足的腫脹，并且可抑制大鼠致敏后第16-24天內非注射足的腫脹；高、中劑量組的胸腺、腎上腺、脾指數均低于模型組，本發明藥物組合物高、中劑量組在致敏后第19-24天的體重均高于模型組(P<0.01，P〈0.05)。見表4表8。表4對佐劑性關節炎大鼠致敏后注射足足跖部周長的影響(mm,T±s)(n=10)致敏后天數模型組本發明物本發明物本發明物醋酸可的松高劑量組中劑量組低劑量組(10mg/kg)030.2±0.7530.2±0.630.2±0.6030.6±1.2030.1±0.70342.2±1.5539.4±2.15**41.0±1.7941.6±1.4936.5±2.46**642.8±2.3539.7±3.26*40.0±2.00*43.l土l.3735.3±1.55"841.9±1.4538.1±2.70"39.3±2.O(T40.8±2.0538.2土2.09"1039.6±0.8436.6±2.29**37.8±1.94*39.3±1.8538.2±1.17**1239.5±1.7236.6±2.48*37.8±1.78*37.9±2.0736.2±0.98**1445.7±3.0641.6±4.34*41.9±2.70*41.8±6.6238.1±1.3(T1646.8±4.8041.8±5.13*42.7土3.16*45.8±12.5737.9士1.64材1949.6±5.6042.5±5.89*43.3±4.34*42.7土7.62*37.7±1.68*'2145.7±3.0639.7±7.46*42.1±2.98*41.8±6.6238.0±1.41**2445.6±2.9939.2±7.18*41.2±4.26*41.7±3.00*37.8±1.33**與模型組相比，*P<0.05，**P<0.01表5對佐劑性關節炎大鼠致敏后非注射足足跖部周長的影響(mm，^±s)(n=10)本發明物本發明物本發明物醋酸可的松致敏后天數模型組高劑量組中劑量組低劑量組(10mg/kg)030.2±0.7530.2±0.6030.2±0.6030.6±1.2030.1±0.741029.4±1.4930.9±3.6231.9±3.9631.8±4.6428.8±1.751232.3±2.2132.9±5.2233.5±4.2933.4±5.3329.4±1.11"1434.2±3.1233.4±3.3632.9±3.9634.0±5.6029.1±1.14*'1641.9±1.4538.1±2.70*'39.3±2.00"40.8±2.0438.4±2.06"1939.6±0.8436.6±2.29**37.9±2.07*39.3±1.8538.2±1.17**2137.4±4.4832.5±3.20*32.9±4.35*35.1±5.5429.2±0.60*'2438.9±3.0329.7±2.69林31.4±2.84**34.8±4.49*29.0±0.63**與模型組相比，*P〈0.05，*卞〈0.01表6對佐劑性關節炎大鼠致敏后關節炎指數的影響(^士s)(n=10)致敏后天數模型組本發明物高劑量組本發明物中劑量組本發明物低劑量組醋酸可的松(10mg/kg)125.0±0.93.6±0.8**3.8±0.7"4.6±0.50.3±0.5**145.6±0.83.9±0.7**4.8±0.9**5.1±0.70.6±0.5**166.6±0.84.5±0.5"5.0±0.9**6.0±0.91.8±0.4**196.9±1.04.9士1.(T5.5±1.2**6.4±1.11.9±0.5"217.6±0.95.3±1.2"5.7±1.r'6.6±0.9*2.0±0.4"247.9±0.45.7±1.3料6.0±0.9**6.9±1.0*2.1±0.5"與模型組相比，*P<0.05，**P〈0.01.表7對佐劑性關節炎大鼠致敏后體重的影響(g，^±s)(n=10)致敏后天數模型組本發明物本發明物本發明物醋酸可的松高劑量組中劑量組低劑量組(10mg/kg)0219±13220±10218±23225±14225±156215±17214±15214±10214±73213±1710216±16224±20214±10216±13203±2812209±19224±15207±13213土16207±2114202±18222±17213±24211±17205±18161恥±28220±16214±25207±20207±1319189±19216±15M212±25'207±20210±27'21191±18215±2廣214±25'208±20219±26"24193±19217±16**216±24'209±20211±25**與模型組相比，*P〈0.05，，〈0.0113表8對佐劑性關節炎大鼠致敏后重要臟器系數的影響(T±s)動物數劑量胸腺脾腎上腺組別(只)(g生藥/kg)(rag/g)(mg/g)(mg/g)模型組10一1.34±0.646.62±1.610.41±0.03本發明物10120mg+120mg/kg0.87±0.14*5.00±0.99*0.32±0.06**本發明物10100mg+腦mg/kg0.83±0.25*5.29±0.78*0.33±0.08'本發明物1080mg+80mg/kg1.24±0.495.25±1.980.39±0.11醋酸可的松10lOmg/kg0.59±0.12"4.09±0.71**0.30±0.06"與模型組相比，*P〈0.05，，〈0.01實驗例5本發明藥物組合物外用緩解癌性疼痛的作用研究一、實驗材料與方法1.實驗動物、瘤株、藥物及儀器C57BL/6L近交系小鼠，體重18±2克，四周齡，雌性；由中國醫學科學院實驗動物中心繁育場提供，合格證京動許字017。實驗動物使用許可證號syxk(京)2002-0016。小鼠肺癌(Lewis)瘤株由中國醫學科學院腫瘤研究所中心實驗室常規保存。硫酸四氫帕馬丁注射液，廣西南寧百會藥業集團有限公司生產，批號H45021113;高烏頭；獨一味；本發明藥物低劑量(高烏頭80mg+獨一味80mg/kg)、中劑量(高烏頭100mg+獨一味100mg/kg)、高劑量(高烏頭120mg+獨一味120mg/kg)。58011TouchTestSensoryEvaluator(NorthCoastMedical,Inc.MorganHill，CA95037,USA);PE34冷熱板測痛儀(NorthCoastMedical,Inc.MorganHill,CA95037,USA);自制鐵絲網和鐵架。2.分組隨機分為8組，每組8只。治療組高烏頭組，接種Lewis肺癌細胞3.0X105L—i個；獨一味組，接種Lewis肺癌細胞3.0X105L—i個；本發明藥物低劑量組(高烏頭80mg+獨一味80mg/kg)，接種Lewis肺癌細胞3.0X1051/i個；本發明藥物中劑量組(高烏頭100mg+獨一味100mg/kg)，接種Lewis肺癌細胞3.OX105L—i個；本發明藥物高劑量組(高烏頭120mg+獨一味120mg/kg)，接種Lewis肺癌細胞14酸四氫帕馬丁組，接種Lewis肺癌細胞3.0X1051/'個；模型組生理鹽水組，接種Lewis肺癌細胞3.0X1051/i個；空白組假手術組，接種等體積的生理鹽水。3.造模按SchweiMJ等報道的方法，建立小鼠骨癌痛模型。動物麻醉(乙醚麻醉)后，仰臥，腹部朝上，左側后肢剪毛，75%酒精消毒股骨及脛骨處皮膚，膝關節處沿著股直肌肌腱方向切一長約0.5-lcm的皮膚切口，小心暴露髕骨，先用一次性無菌lm注射器針頭在髕骨沿股骨長軸方向穿刺打孔，然后換上10ul注射器進入股骨骨髓腔，緩慢注入10ul含Lewis小鼠肺癌細胞(3.0X1051/1)至股骨。注射完畢后用骨臘封住針孔。無菌棉簽蘸生理鹽水清洗創口，皮膚縫合，假手術組動物左側髕骨上段注入等體積的生理鹽水，其余操作同模型組。4.給藥①高烏頭組、獨一味組、本發明藥物低劑量組(高烏頭80mg+獨一味80mg/kg)、本發明藥物中劑量組(高烏頭100mg+獨一味100mg/kg)、本發明藥物高劑量組(高烏頭120mg+獨一味120mg/kg):加入一定量透皮吸收劑，外用敷于小鼠股骨骨轉移部位，注意避開皮膚傷口縫合處，24h更換一次。造模第10天開始給藥，連用5天。②硫酸四氫帕馬丁組按6.498mg/kg，皮下注射于骨轉移部位。造模第14天給藥。③模型組涂擦生理鹽水，0.5ml/只，每日一次。造模第IO天開始，連用5天。④空白對照組涂擦生理鹽水，0.5ml/只，每日一次。造模第10天開始，連用5天。5.痛行為測量痛行為測量分別在第10天各組用藥前及第14天各組用藥后進行，高烏頭組、獨一味組、本發明藥物低劑量組、本發明藥物中劑量組、本發明藥物高劑量組、生理鹽水組和假手術組于末次給藥后5h，硫酸四氫帕馬丁組于給15藥后30min，測量痛相關行為包括觸誘發痛覺超敏和熱刺激痛覺過敏。(1)用小鼠足底對2gVonFrey纖維(NorthCoastMedical,USA,型號58011)剌激的縮足反應百分率(縮足反應百分率=縮足次數+5乂100%)來反應觸誘發痛。具體方法2gVonFrey纖維刺激小鼠左側足底中部，56秒觀察小鼠縮足反應。每只動物每種纖維試驗5次，兩次試驗之間至少間隔2分鐘。動物對VonFrey纖維剌激的縮足反應百分率為縮足次數+5X100%。(2)用小鼠熱板法測量熱刺激痛閾，先將熱板溫度恒定在(50+1)'C，然后將小鼠放置在熱板上，待出現添后足時所需要的時間值(s)即為該動物的痛閾值，每只小鼠測3次，間隔5min以上，取3次均值作為該動物的熱刺激痛閾值(篩選基礎痛閾在1030s的動物用于實驗)。6.統計學分析所有數據用均數士標準差(^±0表示，采用SPSS11.5統計軟件進行數據處理。進行單因素方差分析，方差具有齊性時用LSD檢驗，方差不齊用Dunnett'sT3檢驗進行各組間比較。P〈0.05表示差異有顯著性。二、結果1、痛覺超敏以小鼠對2gvonFrey纖維刺激的縮足反應來測量機械性痛覺超敏。造模前各組小鼠縮足反應百分率無明顯差別；造模第10天各組用藥前，模型組、對照組及治療組縮足反應百分率較空白組增多(P〈0.01)，提示小鼠產生觸誘發痛行為。造模第14天，治療組縮足反應百分率減少，與模型組比較(P〈0.01);對照組縮足反應百分率接近治療組，較模型組減少(P〈0.01)。各組小鼠左側足底對2gvonFrey纖維刺激的縮足反應百分率分別為高烏頭組26.01%±4.39%、獨一味組32.94%±2.78%、本發明藥物低劑量組31.03%±6.26%、本發明藥物中劑量組25.53%±2.31%、本發明藥物高劑量組24.69%±4.19%、陽性對照組23.38%±3.09%、模型組63.70%±8.15%、空白組10.38%±2.62%(結果見附圖1)。2、痛覺過敏造模前各組小鼠熱刺激痛閾無明顯差異；造模第10天各組用藥前，模型組熱刺激痛閾較空白組下降(P<0.05)。造模第14天，治療組熱刺激痛閾明顯延長，與對照組比較無明顯差異，與模型組比較差異顯著(P〈0.01);見表9。<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>綜上，我們在小鼠股骨癌痛模型成功復制的基礎上，首次應用該模型研究和探討本發明藥物緩解癌性疼痛療效及機制。結果表明，本發明藥物在小鼠股骨癌痛模型上治療有效，并能減輕骨癌痛小鼠的痛行為，主要對輕、中度骨破壞的癌痛小鼠有效。本研究為本發明藥物的臨床應用提供了新的實驗依據。實驗例6本發明藥物組合物對佐劑性關節炎大鼠鎮痛作用的影響本實驗采用佐劑性關節炎(AdjuvantArthritis,AA)大鼠疼痛模型。研究AA大鼠灌服本發明藥物后痛閾的變化，現將實驗結果報告如下。1、材料1.1藥物本發明藥物低劑量(高烏頭40mg+獨一味40mg/kg)、中劑量(高烏頭50mg+獨一味50mg/kg)、高劑量(高烏頭60mg+獨一味60mg/kg)、阿司匹林片(陽性對照藥)。1.2實驗動物健康成年雄性SD大鼠70只，體重190210g(蘭州生物制品研究所實驗動物中心提供，合格證號醫動字第14_001)。2、方法2.1AA大鼠模型的建立弗氏完全佐劑(Freund'sCompleteAdjuvan，FCA)的制備無水羊毛脂加熱溶化后取1份置于研缽中，稍冷卻，邊研磨邊加入液體石臘2份。研磨0.5小時后，加熱至7(TC10分鐘，然后高壓滅菌l小時，取出后按每毫升加入卡介苗7.5mg研磨均勻，置4-C冰箱保存備用。使用前需混勻。于需造模大鼠右后足跖皮下進針至踝關節，注射上述佐劑0.1mL致炎，誘導關節炎發生。2、2分組及給藥方法大鼠隨機分為7組，每組10只，高烏頭組(A)、獨一味組(B)、本發明藥物低劑量組(高烏頭40mg+獨一味40mg/kg)(C)、中劑量組(高烏頭50mg+獨一味50mg/kg)(D)、高劑量組(高烏頭60mg+獨一味60mg/kg)(E)、阿司匹林組(陽性對照，100mg/kg)(F)、模型組(生理鹽水10mL/kg)(G)。致炎后第17天開始灌胃給藥，每天l次，連續10天。各組大鼠相同條件下喂養，自由攝食，飲水。室溫控制在1518'C,濕度70%左右。2.3AA大鼠的測痛試驗選出模型組、高烏頭組、獨一味組、阿司匹林組及本發明藥物大、中、小劑量組，于致炎前用輻射熱照射右側踝關節內側，記錄縮腿反應潛伏期(秒)作為基礎痛閾。測得基礎痛閾后，按上述方法造模型給藥，并分別于末期給藥后30、60、90、120、150分鐘各測一次炎癥部位的縮腿痛閾。3、統計學分析由第三作者，采用SPSSIO.O軟件完成統計處理。組間顯著性差異進行One-WayANOVA分析。4、設計、實施、評估者實驗設計為第一、二作者，干預實施為第一、三作者，評估為第四作者，均受過專業培訓，采用盲法評估。5、結果關節炎疼痛過敏大鼠灌胃本發明藥物后30150分鐘內，關節炎局部的縮腿閾明顯提高，表明本發明藥物能提高炎性疼痛模型痛閾值，對慢性炎癥性疼痛有鎮痛作用，峰值在給藥后3090分鐘，持續150分鐘以上。結果見表10。表10本發明藥物組合物對AA大鼠痛閾的影響(f±S)，(n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>注與模型組比較，*P<0.05本實驗結果表明，灌胃本發明藥物后佐劑性關節炎大鼠痛閾明顯升高，且呈一定的劑量相關性。證明本發明藥物對慢性疼痛具有確切的鎮痛作用。下述實施例均能實現上述實驗例的效果。具體實施方式實施例l:膠囊的制備高烏頭20g獨一味80g,將獨一味藥材用30%乙醇提取2次，合并提取液，回收乙醇至無醇味，繼續加水至提取液體積的2倍，離心，取上清液濃縮至干，得獨一味提取物；另取高烏頭用80%乙醇浸泡，放出浸泡液，并繼續用乙醇滲漉，收集乙醇溶液，并回收乙醇，用鹽酸溶解殘留物，離心，取上清液，加入氨水溶液，調節pH值8后，用三氯甲垸萃取，合并三氯甲烷溶液，回收至干，得高烏頭提取物；將以上獨一味及高烏頭的提取物混合，加入常規輔料，按照常規工藝，制成臨床或藥學上可接受的膠囊劑。實施例2:片劑的制備高烏頭80g獨一味30g將獨一味藥材用水提取3次，合并提取液，得獨一味提取物；另取高烏頭用40%乙醇浸泡，放出浸泡液，并繼續用乙醇滲漉，收集乙醇溶液，并回收乙醇，用鹽酸溶解殘留物，離心，取上清液，加入氨水溶液，調節PH值12后，用三氯甲烷萃取，合并三氯甲垸溶液，回收至干，得高烏頭提取物;將以上獨一味及高烏頭的提取物混合，加入常規輔料，按照常規工藝，制成臨床或藥學上可接受的片劑。實施例3:口服液的制備高烏頭40g獨一味60g將獨一味藥材用40%乙醇提取1次，合并提取液，回收乙醇至無醇味，繼續加水至提取液體積的5倍，離心，取上清液濃縮至干，得獨一味提取物;另取高烏頭用30%乙醇浸泡，放出浸泡液，并繼續用乙醇滲漉，收集乙醇溶液，并回收乙醇，用鹽酸溶解殘留物，離心，取上清液，加入氨水溶液，調節pH值10后，用三氯甲垸萃取，合并三氯甲垸溶液，回收至干，得高烏頭提取物；將以上獨一味及高烏頭的提取物混合，加入常規輔料，按照常規工藝，制成臨床或藥學上可接受的口服液。實施例4:丸劑的制備高烏頭50g獨一味50g將獨一味藥材用50%乙醇提取2次，合并提取液，回收乙醇至無醇味，繼續加水至提取液體積的6倍，離心，取上清液濃縮至干，得獨一味提取物；另取高烏頭用50%乙醇浸泡，放出浸泡液，并繼續用乙醇滲漉，收集乙醇溶液，并回收乙醇，用鹽酸溶解殘留物，離心，取上清液，加入氨水溶液，調節pH值9后，用三氯甲烷萃取，合并三氯甲垸溶液，回收至干，得高烏頭提取物；將以上獨一味及高烏頭的提取物混合，加入常規輔料，按照常規工藝，制成臨床或藥學上可接受的丸劑。實施例5:顆粒劑的制備高烏頭20g獨一味90g取上述原料藥加入常規輔料按照常規工藝，制成顆粒劑。實施例6:注射劑的制備高烏頭90g獨一味20g取上述原料藥加入常規輔料按照常規工藝，制成注射劑。實施例7:顆粒劑的制備高烏頭60g獨一味40g將獨一味藥材用50%乙醇提取三次，合并提取液，回收乙醇至無醇味，繼續加水至提取液體積的3倍，離心，取上清液通過大孔吸附樹脂柱，先用20水洗脫至流出液無色，再用70%乙醇解吸附，收集乙醇溶液，減壓回收乙醇，并濃縮至干，得獨一味提取物；另取高烏頭用70%乙醇浸泡，放出浸泡液，并繼續用乙醇滲漉，收集乙醇溶液，并回收乙醇，用鹽酸溶解殘留物，離心，取上清液，加入氨水溶液，調節pH值13后，用三氯甲烷萃取，合并三氯甲烷溶液，回收至干，得高烏頭提取物；將以上獨一味提取物及高烏頭的提取物混合，加入常規輔料，按照常規工藝，制成顆粒劑。實施例8:貼劑的制備高烏頭20g獨一味40g將獨一味藥材用70%乙醇提取2次，合并提取液，回收乙醇至無醇味，繼續加水至提取液體積的5倍，離心，取上清液通過大孔吸附樹脂柱，先用水洗脫至流出液無色，再用70%乙醇解吸附，收集乙醇溶液，減壓回收乙醇，并濃縮至干，得獨一味提取物；另取高烏頭用無水乙醇浸泡，放出浸泡液，并繼續用無水乙醇滲漉，收集乙醇溶液，并回收乙醇，用鹽酸溶解殘留物，離心，取上清液，加入氨水溶液，調節pH值10后，用三氯甲烷萃取，合并三氯甲烷溶液，回收至干，得高烏頭提取物；將以上獨一味提取物及高烏頭的提取物混合，加入常規輔料，按照常規工藝，制成貼劑。實施例9:軟膏的制備高烏頭50g獨一味20g將獨一味藥材用60%乙醇提取三次，合并提取液，回收乙醇至無醇味，繼續加水至提取液體積的4倍，離心，取上清液通過大孔吸附樹脂柱，先用水洗脫至流出液無色，再用60%乙醇解吸附，收集乙醇溶液，減壓回收乙醇，并濃縮至干，得獨一味提取物；另取高烏頭用30%乙醇浸泡，放出浸泡液，并繼續用30%乙醇滲漉，收集乙醇溶液，并回收乙醇，用鹽酸溶解殘留物，離心，取上清液，加入氨水溶液，調節pH值12后，用三氯甲烷萃取，合并三氯甲烷溶液，回收至干，得高烏頭提取物；將以上獨一味提取物及高烏頭的提取物混合，加入常規輔料，按照常規工藝，制成軟膏。實施例10:噴霧劑的制備高烏頭100g獨一味10g將獨一味藥材用水提取三次，合并提取液，得獨一味提取物；另取高烏21頭用90%乙醇浸泡，放出浸泡液，并繼續用90%乙醇滲漉，收集乙醇溶液，并回收乙醇，用鹽酸溶解殘留物，離心，取上清液，加入氨水溶液，調節pH值10后，用三氯甲烷萃取，合并三氯甲烷溶液，回收至干，得高烏頭提取物；將以上獨一味提取物及高烏頭的提取物混合，加入常規輔料，按照常規工藝，制成噴霧劑。實施例11:軟膠囊的制備高烏頭10g獨一味100g將獨一味藥材用70%乙醇提取3次，合并提取液，回收乙醇至無醇味，繼續加水至提取液體積的3倍，離心，取上清液濃縮至干，得獨一味提取物；另取高烏頭用70%乙醇浸泡，放出浸泡液，并繼續用乙醇滲漉，收集乙醇溶液，并回收乙醇，用鹽酸溶解殘留物，離心，取上清液，加入氨水溶液，調節pH值10后，用三氯甲垸萃取，合并三氯甲烷溶液，回收至干，得高烏頭提取物；將以上獨一味及高烏頭的提取物混合，加入常規輔料，按照常規工藝，制成臨床或藥學上可接受的軟膠囊劑。權利要求1、一種具有鎮痛抗炎作用的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物的原料藥組成為高烏頭1-10重量份獨一味1-10重量份。2、如權利要求1所述的一種具有鎮痛抗炎作用的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物的原料藥組成為高烏頭4重量份獨一味6重量份。3、如權利要求1所述的一種具有鎮痛抗炎作用的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物的原料藥組成為高烏頭6重量份獨一味4重量份。4、如權利要求1所述的一種具有鎮痛抗炎作用的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物的原料藥組成為高烏頭2重量份獨一味9重量份。5、如權利要求1所述的一種具有鎮痛抗炎作用的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物的原料藥組成為高烏頭9重量份獨一味2重量份。6、如權利要求1-5任一所述的藥物組合物，其特征在于取原料藥加入常規輔料，按照常規工藝，制成臨床或藥學上接受的片劑、膠囊劑、散劑、軟膠囊劑、滴丸、蜜丸、丸劑、顆粒劑、蜜煉膏劑、緩釋制劑、速釋制劑、控釋制劑、口服液體制劑、注射制劑或外用制劑。7、如權利要求1-5任一所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于該方法為以下方法任意一種將獨一味藥材用水提取一至三次，合并提取液，得獨一味提取物；或將獨一味藥材用20。％-70%乙醇提取一至三次，合并提取液，回收乙醇至無醇味，繼續加水至提取液體積的i-io倍，離心，取上清液濃縮至干，得獨一味提取物；另取高烏頭用30%-無水乙醇浸泡，放出浸泡液，并繼續用乙醇滲漉，收集乙醇溶液，并回收乙醇，用鹽酸溶解殘留物，離心，取上清液，加入氨水溶液，調節pH值7-14后，用三氯甲垸萃取，合并三氯甲垸溶液，回收至干，得高烏頭提取物；將以上獨一味提取物及高烏頭的提取物混合，加入常規輔料，按照常規工藝，制成臨床或藥學上可接受的片劑、膠囊劑、散劑、軟膠囊劑、滴丸、蜜丸、丸劑、顆粒劑、蜜煉膏劑、緩釋制劑、速釋制劑、控釋制劑、口服液體制劑、注射制劑或外用制劑；或將獨一味藥材用水提取一至三次，合并提取液，得獨一味提取物；或將獨一味藥材用20%_70%乙醇提取一至三次，合并提取液，回收乙醇至無醇味，繼續加水至提取液體積的卜10倍，離心，取上清液通過大孔吸附樹脂柱，先用水洗脫至流出液無色，再用乙醇解吸附，收集乙醇溶液，減壓回收乙醇，并濃縮至干，得獨一味提取物；另取高烏頭用30%-無水乙醇浸泡，放出浸泡液，并繼續用乙醇滲漉，收集乙醇溶液，并回收乙醇，用鹽酸溶解殘留物，離心，取上清液，加入氨水溶液，調節pH值7-14后，用三氯甲垸萃取，合并三氯甲垸溶液，回收至干，得高烏頭提取物；將以上獨一味提取物及高烏頭的提取物混合，加入常規輔料，按照常規工藝，制成臨床或藥學上可接受的片劑、膠囊劑、散劑、軟膠囊劑、滴丸、蜜丸、丸劑、顆粒劑、蜜煉膏劑、緩釋制劑、速釋制劑、控釋制劑、口服液體制劑或注射制劑或外用制劑。8、如權利要求7所述的制備方法，其特征在于該方法為以下方法任意一種將獨一味藥材用水提取三次，合并提取液，得獨一味提取物；或將獨一味藥材用50%乙醇提取三次，合并提取液，回收乙醇至無醇味，繼續加水至提取液體積的5倍，離心，取上清液濃縮至干，得獨一味提取物；另取高烏頭用70%乙醇浸泡，放出浸泡液，并繼續用乙醇滲漉，收集乙醇溶液，并回收乙醇，用鹽酸溶解殘留物，離心，取上清液，加入氨水溶液，調節PH值8-13后，用三氯甲垸萃取，合并三氯甲烷溶液，回收至干，得高烏頭提取物；將以上獨一味提取物及高烏頭的提取物混合，加入常規輔料，按照常規工藝，制成臨床或藥學上可接受的片劑、膠囊劑、散劑、軟膠囊劑、滴丸、蜜丸、丸劑、顆粒劑、蜜煉膏劑、緩釋制劑、速釋制劑、控釋制劑、口服液體制劑、注射制劑或外用制劑；或將獨一味藥材用水提取三次，合并提取液，得獨一味提取物；或將獨一味藥材用50%乙醇提取三次，合并提取液，回收乙醇至無醇味，繼續加水至提取液體積的4倍，離心，取上清液通過大孔吸附樹脂柱，先用水洗脫至流出液無色，再用乙醇解吸附，收集乙醇溶液，減壓回收乙醇，并濃縮至干，得獨一味提取物；另取高烏頭用70%乙醇浸泡，放出浸泡液，并繼續用乙醇滲漉，收集乙醇溶液，并回收乙醇，用鹽酸溶解殘留物，離心，取上清液，加入氨水溶液，調節pH值8-13后，用三氯甲垸萃取，合并三氯甲垸溶液，回收至干，得高烏頭提取物；將以上獨一味提取物及高烏頭的提取物混合，加入常規輔料，按照常規工藝，制成臨床或藥學上可接受的片劑、膠囊劑、散劑、軟膠囊劑、滴丸、蜜丸、丸劑、顆粒劑、蜜煉膏劑、緩釋制劑、速釋制劑、控釋制劑、口服液體制劑、注射制劑或外用制劑。9、如權利要求1-5任一藥物組合物在制備具有鎮痛抗炎作用的藥物中的應用。10、如權利要求9所述的應用，其特征在于其中所述的鎮痛抗炎是指類風濕關節炎、惡性腫瘤引起的疼痛。全文摘要本發明公開了一種具有鎮痛抗炎作用的藥物組合物及其制備方法。該藥物組合物包括高烏頭和獨一味兩味原料藥，將原料藥經過水或乙醇提取、濃縮、干燥等工藝制成提取物，合并提取物，加入常規輔料制成常規各種劑型。實驗證明高烏頭與獨一味聯合使用，可減少高烏頭的劑量，而鎮痛效果不降低，在抗炎試驗中，獨一味與高烏頭連用，可增強單獨用藥效果，也有增效作用。因此，本發明藥物組合物具有鎮痛抗炎的作用，尤其適用于類風濕關節炎、惡性腫瘤引起的疼痛，具有較好的臨床和市場前景。文檔編號A61K36/185GK101683399SQ200810180489公開日2010年3月31日申請日期2008年11月28日優先權日2008年9月28日發明者張櫻山,張鐵軍,李富銀,陳維武,雷菊芳申請人:甘肅奇正藏藥有限公司