復合生物材料及其制備方法

文檔序號：1230106閱讀：238來源：國知局

專利名稱：復合生物材料及其制備方法
技術領域：
本發明涉及用于生物醫學應用的人工骨、牙科材料和再生支架 (scaffold)領域，尤其涉及包含膠原蛋白、磷酸轉材料和一種或多種糖胺聚糖的人工骨、牙科材料和再生支架及其前體。
背景技術：
天然骨是膠原蛋白、包括糖胺聚糖的非膠原蛋白有機相和磷酸鈣的生物復合體。其復雜的層級結構產生了出色的機械性能，包括高的硬度、強度和斷裂韌度，從而使骨能夠承受日常活動所產生的生理應力。本領域的研究人員面臨的挑戰是，如何使合成材料的組成和結構允許天然骨可以生長在人體或動物體中的合成材料里面和周圍。
已經發現，骨通過人體環境中形成的骨狀磷灰石層直接連接到人體中的磷酸鈣上(稱為生物活性的性能)。另一方面，已知膠原蛋白和包含膠原蛋白和例如糖胺聚糖等其它生物有機物質的共聚物是多種細胞附著和增殖的最佳基質，所述細胞包括人體中負責骨的生成和修復的那些細胞。
羥磷灰石是最通常用作骨替代材料的成分的磷酸鈣。但是，與例如透轉磷石、磷酸三鈣和磷酸八鈣等其它形式的磷酸鈣材料相比，羥磷灰石是較難溶的材料。由于該材料在人體中的再吸收速率特別低，所以當制備生物材料時，磷灰石的較低的溶解度是不利的。
例如羥磷灰石等磷酸鈣是機械硬度高的材料。但是，與天然骨相比，它們較脆。膠原蛋白是機械韌性高的材料，但是與天然骨相比，它具有較低的硬度。包含膠原蛋白和糖胺聚糖的共聚物的材料比單獨的膠原蛋白具有更高的韌性和硬度，但是，與天然骨相比，仍然具有較低的硬度。在現有技術中，在制備機械韌性超過羥磷灰石且硬度超過膠原蛋白和膠原蛋白與糖胺聚糖的共聚物的人工骨替代材料時，先前的嘗試包括通過機械混合合并膠原蛋白和磷灰石。這樣的機械方法描述在
EP-A-0164484中。
該技術的最新進展包括，通過機械混合羥磷灰石、膠原蛋白和軟骨素-4-硫酸酯來制備包含這些組分的骨替代材料。該技術描述在 EP-A-0214070中。該文獻還描述了軟骨素-4-硫酸酯與膠原蛋白的脫水熱交聯。已經發現，包含磷灰石、膠原蛋白和軟骨素-4-硫酸酯的材料具有良好的生物相容性。將磷灰石與膠原蛋白和需要時的軟骨素-4-硫酸酯機械混合，實際上形成被膠原蛋白/軟骨素-4-硫酸酯包覆的磷灰石顆粒。已經發現，盡管該材料是生物相容性的，但是在人體或動物體內，天然骨在內部的生長極為有限，而且不能重新形成合成材料的磷酸鈣相。

發明內容
本發明旨在解決至少一部分與現有技術相關的問題。
第一方面，本發明提供一種制備包含膠原蛋白、透鈣磷石和一種或
多種糖胺聚糖的復合材料的方法，所述方法包括以下步驟
提供包含膠原蛋白、鈣源和磷源以及一種或多種糖胺聚糖的酸性水
溶液；和
從該水溶液中一起沉淀出膠原蛋白、透鈣磷石和一種或多種糖胺聚糖以形成三元共沉淀物。
術語三元共沉淀物包涵三種化合物的沉淀物，其中，從相同溶液/分散液中基本上同時沉淀出所述化合物。這應與機械混合這些組分形成的材料不同，特別是與例如在不同溶液中單獨沉淀出的這些組分不同。共沉淀物的微結構基本上不同于機械混合其組分形成的材料。
在第一方面中，所述溶液優選具有2.5 6.5的pH，更優選2.5 5.5。更優選地，所述溶液具有3.0 4.5的pH。進而更優選地，所述溶液具有
3.8 4.2的pH。最優選地，所述溶液具有約為4的pH。
所述鈣源優選選自硝酸鈣、醋酸鈣、氯化,弓、碳酸鈣、烷氧基轉、氫氧化鈣、硅酸鈣、硫酸鈣、葡萄糖酸鈣和肝素的f丐鹽中的一種或多種。肝素的鈣鹽可以得自豬的腸粘膜。合適的鈣鹽可購自Sigma-Aldrichlnc.。所述磷源優選選自磷酸二氫銨、磷酸氫二銨、磷酸、二水合磷酸氫二鈉(Na2HP04'2H20，有時稱為GPR Sorensen鹽)和磷酸三甲酯、磷酸的堿金屬(例如Na或K)鹽、磷酸的堿土金屬(例如Mg或Ca)鹽中的一種或多種。
糖胺聚糖是含有長的無支鏈多糖的大分子族，所述多糖含有重復的二糖單元。優選地，所述一種或多種糖胺聚糖選自硫酸軟骨素、硫酸皮膚素(dermatin sulfate)、肝素、硫酸肝素、硫酸角質素和透明質酸。硫酸軟骨素可以是軟骨素-4-硫酸酯或軟骨素-6-硫酸酯，它們都可以從 Sigma-Aldrich Inc.得到。軟骨素-6-硫酸酯可以得自鯊魚軟骨。透明質酸可以得自人的臍帶，肝素得自豬的腸粘膜。
優選地，在三元共沉淀物的沉淀時，所述溶液具有4.0 5(TC的溫度。更優選地，所述溶液具有15 4(TC的溫度。所述溶液可以是室溫，即20 30°C，優選20 27。C的溫度。最優選地，該溫度為約25。C。
所述水溶液中鈣離子的濃度通常為0.00025 1摩爾/升，優選0.001 1摩爾/升。當所述方法還包括過濾和/或低溫干燥的附加步驟時，所述水溶液中鈣離子的濃度更優選為0.05 0.5摩爾/升(例如0.08 0.25摩爾/ 升)，最優選0.1 0.5摩爾/升。當所述方法還包括冷凍干燥和可選的注塑成型的附加步驟時，所述水溶液中鈣離子的濃度更優選為0.01 0.3摩爾 /升，最優選0.05 0.18摩爾/升。
優選地，所述溶液包含磷酸根離子，溶液中磷酸根離子的濃度通常為0，00025 1摩爾/升，優選0.001 1摩爾/升。當所述方法還包括過濾和/或低溫干燥的附加步驟時，溶液中磷酸根離子的濃度更優選為0.05 0.5摩爾/升，進而更優選0.1 0.5摩爾/升，例如0.1 0.35摩爾/升。當所述方法還包括冷凍干燥和可選的注塑成型的附加步驟時，溶液中磷酸根離子的濃度更優選為0.01 0.3摩爾/升，進而更優選0.05 0.18摩爾/升。
優選地，在沉淀之前，溶液中膠原蛋白與一種或多種糖胺聚糖的總
量的重量比為8:1 30:1。更優選地，膠原蛋白與一種或多種糖胺聚糖總量的重量比為10:1 12:1，最優選該比例為11:1 23:2。
優選地，三元共沉淀物中膠原蛋白與透鈣磷石的重量比為10:1 1:100，更優選5:1 1:20，進而更優選3:2 1:10，最優選3:2 1:4。
在沉淀之前，所述溶液中膠原蛋白的濃度通常為1 20g/L，更優選 1 10g/L。當所述方法還包括過濾和/或低溫干燥的步驟時，所述溶液中膠原蛋白的濃度更優選為1 10 g/L，進而更優選1.5 2.5 g/L，最優選 1.5 2.0 g/L。當所述方法包括冷凍干燥和可選的注塑成型時，在沉淀之前，所述溶液中膠原蛋白的濃度優選為5 20g/L，更優選5 12g/L，最優選9 10.5g/L。
在沉淀之前，所述溶液中一種或多種糖胺聚糖的總濃度通常為 0.01 1.5 g/L，更優選0.01 1 g/L。當所述方法還包括過濾和/或低溫干燥的附加步驟時，所述溶液中一種或多種糖胺聚糖的總濃度更優選為 0.03 1.25 g/L，進而更優選0.125 0.25 g/L，最優選0.13 0.182 g/L。當所述方法還包括冷凍干燥和可選的注塑成型的附加步驟時，所述溶液中一種或多種糖胺聚糖的總濃度更優選為0.15 1.5 g/L，進而更優選 0.41 1.2g/L，最優選0.78 0.96g/L。
優選所述溶液包含鈣離子，膠原蛋白與鈣離子的重量比通常為 1:40 500:1。當所述方法還包括過濾和/或低溫干燥的附加步驟時，膠原蛋白與鈣離子的比更優選為1:40 250:1，進而更優選1:13 5:4，最優選 1:13 1:2。當所述方法還包括冷凍干燥和可選的注塑成型的附加步驟時，膠原蛋白與鈣離子的比更優選為1:8 500:1，進而更優選5:12 30:1 ，最優選5:5 5:1。
沉淀可以通過下列方式實現在酸性水溶液中混合膠原蛋白、鈣源、磷源和一種或多種糖胺聚糖；或使溶液靜止直到沉淀發生，攪動溶液，使用例如氨水等堿性滴定劑滴定，加入例如預制透鈣磷石等成核劑；改變鈣源的加入速率；或者采用這些方法的任意組合。
第二方面，本發明提供一種制備包含膠原蛋白、磷酸八鈣和一種或7
多種糖胺聚糖的復合生物材料的方法，所述方法包括以下步驟
提供包含膠原蛋白、透鈣磷石和一種或多種糖胺聚糖的復合材料，
禾口
通過水解將復合材料中的至少一部分透鈣磷石轉化為磷酸八鈣。術語生物材料包涵與人體或動物體可生物相容的材料。在第二方面中，所述復合材料優選包含或基本上由以下物質組成含有膠原蛋白、透鈣磷石和一種或多種糖胺聚糖的三元共沉淀物。所述三元共沉淀物可以用這里所述的與本發明第一方面有關的方法形成。
優選地，透鈣磷石水解為磷酸八鈣的步驟包括使所述三元共沉淀物與水溶液接觸，所述水溶液的pH等于或大于磷酸八鈣比透鈣磷石在熱
力學上更穩定時的pH。優選地，該水溶液具有6 8的pH。更優選地，該水溶液具有6.3 7的pH。最優選地，該水溶液具有約6.65的pH。所述水溶液可以包括，例如用滴定劑、緩沖液、被另一種含鈣化合物和/或含磷化合物所飽和的溶液控制pH的去離子水。優選的水溶液包含使用氨水滴定到所需pH的醋酸。
優選地，透鈣磷石水解為磷酸八鈣的步驟在20 5(TC的溫度下進行，更優選30 4(TC，進而更優選36 38'C，最優選約37'C。
優選地，透鈣磷石水解為磷酸八鈣的步驟進行12 144小時，更優選18 72小時，最優選24 48小時。
第三方面，本發明提供一種制備包含膠原蛋白、磷灰石和一種或多種糖胺聚糖的復合生物材料的方法，所述方法包括以下步驟
提供包含膠原蛋白、透鈣磷石和一種或多種糖胺聚糖的復合材料，
和
通過水解將復合材料中的至少一部分透鈣磷石轉化為磷灰石。磷灰石是一類包含鈣和磷酸根的礦物質，它具有通式Ca5(P04)3(X)，其中X可以是離子，通常為OH—、 F—和Cl—以及本領域技術人員知道的其它離子。磷灰石也包括取代的磷灰石，例如硅取代的磷灰石。磷灰石包括羥磷灰石，羥磷灰石是磷灰石的具體例子。羥磷灰石也可以用硅取代。
在第三方面中，復合材料優選包含或基本由以下物質組成包含膠原蛋白、透鈣磷石和一種或一種糖胺聚糖的三元共沉淀物。所述三元共沉淀物可以按照這里所述的與本發明第一方面有關的方法形成。
優選地，透鈣磷石水解為磷灰石的步驟包括使所述三元共沉淀物與水溶液接觸，所述水溶液的pH等于或大于為磷灰石比透f丐磷石在熱力學上更穩定時的pH。優選地，為了將透鈣磷石轉化為磷灰石，該水溶液
具有6.65 9，更優選7 8.5，進而更優選7.2 8.5的pH。所述水溶液可以包括，例如用滴定劑、緩沖液、被另一種含鈣化合物和/或含磷化合物所飽和的溶液控制pH的去離子水。
優選地，透l丐磷石水解為磷灰石的步驟在20 5(TC的溫度下進行，更優選30 4(TC，進而更優選36 38"C，最優選約37"C。
優選地，透鈣磷石水解為磷灰石的步驟進行12 288小時，更優選 18 72小時，最優選24 48小時的時間。
增加透鈣磷石向磷酸八鈣和/或磷灰石轉化的速率的方法包括提高 (i)溫度，(ii)溶液中透鈣磷石的濃度和或(iii)攪拌速度。
需制備同時包含磷灰石和磷酸八鈣的本發明的生物材料。可以同時采用本發明第二和第三方面的方法，制備既包含磷酸八鈣又包含磷灰石的材料。三元共沉淀物中的透鈣磷石可以先轉化為磷酸八H然后磷酸八鈣可以部分地轉化為磷灰石。通常在8.0或8.0以上的pH下水解約12 小時，從而將透鈣磷石或磷酸八鈣全部或接近全部(即至少98%)轉化為磷灰石。因此，材料中透鈣磷石和/或磷灰石的部分轉化可以通過水解小于12小時的時間來實現。
優選地，磷酸八韓水解為磷灰石的步驟在6.65 10，更優選7.2 10，進而更優選8 9的pH下進行。
優選地，磷酸八鈣水解為磷灰石的步驟在20 5(TC的溫度下進行，更優選30 4(TC，進而更優選36 38'C，最優選約37'C。
優選地，磷酸八鈣水解為磷灰石的步驟進行2 144小時的時間，更優選12 96小時，最優選24 72小時。
在本發明的第二和第三方面中，透鈣磷石向磷酸八鈣和/或磷灰石的
轉化優選在30 4(TC的溫度下進行。更優選地，該轉化在36 38"C的溫度下進行。最優選地，該轉化在約37。C的溫度下進行。
優選地，本發明的方法還包括以下步驟使三元共沉淀物中的一種或多種糖胺聚糖和膠原蛋白交聯。關于三元共沉淀物，它包括包含膠原蛋白、透鈣磷石和一種或多種糖胺聚糖的三元共沉淀物和該共沉淀物的衍生物。該衍生物包括至少一部分透鈣磷石已轉化為磷酸八鈣和/或磷灰石的共沉淀物，和已經定形或成型或進行了任何化學或機械處理的共沉淀物。使用任何常規技術均可以實現交聯。
優選地，至少一部分透鈣磷石轉化為磷酸八鈣和/或磷灰石，在透,丐磷石轉化為磷酸八鈣和/或磷灰石之前使糖胺聚糖與膠原蛋白交聯。該交
聯可以通過下列方式實現對三元共沉淀物進行Y射線照射、紫外線照
射、脫水加熱處理、用例如葡萄糖、甘露糖、核糖等單糖和蔗糖進行非酶糖基化、使該三元共沉淀物與戊二醛、乙基二甲氨基丙基碳二亞胺和/ 或去甲二氫愈創木酸中的一種或多種接觸，或上述方法的任意組合。在本領域中這些都是常規方法。
優選地，如果至少一部分透鈣磷石轉化為磷酸八鈣和/或磷灰石，則在透鈣磷石轉化為磷酸八鈣和/或磷灰石之后使糖胺聚糖和膠原蛋白交聯。透f丐磷石轉化為磷灰石和/或磷酸八鈣之后的交聯可以通過上述的一種或多種方法，或通過脫水加熱處理，或這些方法的任意組合來實現。脫水加熱處理包括使基材在升高的溫度下經歷低壓環境。脫水加熱處理
的溫度可以為95 135°C。如果要使脫水加熱處理通常在18 36小時完成，則該溫度優選為100 110°C，最優選105 110°C。如果要使脫水加熱處理通常在4 8小時完成，則該溫度優選為120°C 135°C，最優選 125。C 135。C。
優選地，在透鈣磷石轉化為磷酸八鈣和/或磷灰石之前和之后都使膠原蛋白和糖胺聚糖交聯。
本發明的方法可以包括以下步驟使復合生物材料成形為適合用作骨或牙科替代物的結構。可以在三元共沉淀物形成之后，但是在透鈣磷石的任何轉化或膠原蛋白與糖胺聚糖交聯發生之前進行該步驟。
備選地，使生物材料成形的步驟可以在透f丐磷石轉化磷灰石和/或磷酸八鈣或膠原蛋白與糖胺聚糖交聯之后進行。
優選地，使用選自下列技術的技術使復合材料成形(i)過濾和/或低溫干燥，(ii)冷凍干燥，(iii)注塑成型和(iv)冷壓。溫度為15 40
°C，最優選35 4(TC的過濾和/或低溫干燥通常產生致密顆粒形式的材
料。冷凍干燥通常產生開孔形式。根據所用染料的形狀，注塑成型可以產生多種形狀/形態的材料。冷壓通常產生致密丸狀形式。
本發明還提供一種適合轉變為合成生物材料的前體材料，所述前體材料包含復合材料，所述復合材料包含膠原蛋白、透f丐磷石和一種或多
種糖胺聚糖。優選地，所述復合材料包含或基本上由以下物質組成包
含膠原蛋白、透鈣磷石和一種或多種糖胺聚糖的三元共沉淀物。所述三元共沉淀物可以根據本發明第一方面的方法制備。
本發明還提供一種包含膠原蛋白、透鈣磷石和一種或多種糖胺聚糖的復合生物材料，該生物材料可以用這里描述的本發明的方法得到。
本發明還提供一種包含膠原蛋白、磷酸八鈣和一種或多種糖胺聚糖的復合生物材料，該生物材料可以用本發明第二方面的方法得到。
本發明還提供一種包含膠原蛋白、磷灰石和一種或多種糖胺聚糖的復合生物材料，該生物材料可以用本發明第三方面的方法得到。
本發明還提供一種包含膠原蛋白、糖胺聚糖和透鈣磷石的三元共沉淀物的復合生物材料。
本發明還提供一種包含一種和多種磷酸鈣材料的顆粒、膠原蛋白和一種或多種糖胺聚糖的生物材料，其中所述膠原蛋白和所述一種或多種糖胺聚糖交聯并形成母體，所述磷酸鈣材料的顆粒分散在所述母體中，所述磷酸鈣材料選自透鈣磷石、磷酸八鈣和/或磷灰石中的一種或多種。
如果沒有其他說明，下面的描述與本發明的復合生物材料的所有方面都相關。
優選使膠原蛋白和一種或多種糖胺聚糖交聯。
膠原蛋白優選以5(干)重量％ 90(干)重量％的量存在在所述材料中，更優選15重量％ 60(干)重量％，更優選20(干)重量％ 40(干)重量
優選地，一種或多種糖胺聚糖以0.01(干)重量％ 12(干)重量％的量
存在在所述材料中，更優選1(干)重量％ 5.5(干)重量％，最優選1.8(干) 重量％ 2.3(干)重量％。
優選地，如果所述材料包含透轉磷石，則膠原蛋白與透轉磷石的重量(干)比為10:1 1:100，更優選5:1 1:20，最優選3:2 1:10，例如3:2 1:4。
優選地，如果所述材料包含磷酸八鈣，則膠原蛋白與磷酸八f丐的重量(干)比為10:1 1:100，更優選5:1 1:20，最優選3:2 1:10。
優選地，膠原蛋白與一種或多種糖胺聚糖的總量的重量(干)比為 8:1 30:1，更優選10:1 30:1 ，進而更優選10:1 12:1 ，最優選11:1 23:2。
本發明的復合生物材料可以用作骨或牙科的替代材料。
本發明還提供了包含本發明的復合生物材料的人工骨材料、骨移植物、骨嫁接物、骨替代物、骨支架、填充物、涂料或粘固劑。術語涂料包括任何包含本發明的生物材料或前體的涂料。涂料可以施用于修復件、骨或任何欲用在人體或動物體中的基材的外表面或內表面上，該涂料中包含顆粒材料。本發明的復合物可以用于礦化生物材料的體內和體外修復，包括但不局限于骨和牙科材料。本發明的生物材料可以用于同種異體移植物和自身移植物的生長。
本發明的包含磷酸八鈣的生物材料可以不含有或基本不含有任意前體透l丐磷石相。在該生物材料的磷酸鈣材料的總量中，該生物材料可以包含小于2重量％的透鈣磷石。
磷酸鈣材料可以包含或基本上由相純(phase pure)的磷酸八鈣或磷灰石組成。相純是指優選含有至少98%，更優選至少99%和最優選至少 99.5%的所需要的相(用X射線衍射測定)。備選地，根據生物材料所需要的性能，該生物材料可以包含磷酸八鈣和磷灰石的混合物。
本發明的包含透鈣磷石的材料可以用作制備生物材料的前體材料，或本身適合用作生物材料。
本發明的方法可以使用遵從下列順序的方法來進行，可以整體地或
部分地應用該方法來制備膠原蛋白、一種或多種糖胺聚糖和一種或多種磷酸鈣組分的生物復合物。下列說明是以舉例的方式提供，適用于本發明的方法的任何方面。
I:在酸性PH下膠原蛋白、糖胺聚糖(GAG)和磷酸鈣透轉磷石的三元共
沉淀
進行該步驟，以通過溶液沉淀同時形成復合物的三種(或三種以上)
組分，和控制三種(或三種以上)各個相的比例。通過改變pH、溫度、老化時間、鈣離子濃度、磷離子濃度、膠原蛋白濃度和糖胺聚糖濃度中的一個或一個以上來實現對復合物的組成性能(具體是膠原蛋白糖胺聚糖CaP (磷酸鈣)的比例)的控制。pH可以維持恒定(例如使用緩沖液、pH電位滴定或其它方法)或使其變化。可能的次級(污染物)相包括其它酸性磷酸鈣(例如三斜磷鈣石、磷酸氫鈣)和包括滴定的副產物和其它反應物(例如磷酸銨、硝酸銨)的混合物。在該步驟中也可以加入輔助交聯(例如葡萄糖、核糖)或增加體內響應(例如生長因子、基因轉錄因子、硅、促尿鈉排泄肽)的添加劑。
II:凈形狀的形成
進行該步驟以制備最終復合物形式的所需構造，特別強調對孔結構的控制。該技術的例子包括過濾和低溫干燥(產生致密顆粒形式)、冷凍干燥(產生開孔形式)、注塑成型(根據染料類型產生多種形狀)和冷壓 (產生致密的丸狀形式)。
III:初級交聯
進行該步驟優選可以確保當放在pH升高的溶液中時，復合物的糖
胺聚糖含量不會迅速流失，而且可以提高復合物的機械和降解性能。該技術的例子包括低溫物理技術(例如Y射線照射、紫外線照射、脫水加熱處理)、化學技術(例如用單糖的非酶糖基化、戊二醛、乙基二甲氨基丙基碳二亞胺、去甲二氫愈創木酸)或組合方法(例如同時非酶糖基化
和Y射線照射)。在需要轉化為磷酸八鈣時(即步驟IV中)，在低于約37 'C的溫度下有利地進行初級交聯，以防止透鈣磷石相轉化為其脫水形式三斜磷鈣石，三斜磷鈣石是不易水解為磷酸八鈣的磷酸鈣。
IV:水解
可以進行該步驟，以便從透鈣磷石將CaP相(在生理pH下具有高溶解度的相)部分地或完全地水解為磷酸八鈣和/或磷灰石(在生理pH 下具有較低溶解度的相)和基本上除去任何可溶性污染相(例如硝酸銨、磷酸氫鈣)。在水解為磷酸八鈣(OCP)的t青況中，在約6.65和約37°C 溫度下將選定的pH有利地維持恒定約24 48小時(使用緩沖液、pH電位滴定或其它方法)。如步驟I的情況，在水解步驟(步驟IV)中也可以加入輔助交聯(例如葡萄糖、核糖)或增加體內響應(例如生長因子、基因轉錄因子、硅、促尿鈉排泄肽)的添加劑。
V:次級交聯
進行該步驟以進一步調整復合物的機械和降解性能。可以使用上述步驟III中列出的任何或全部交聯程序以實現次級交聯。
提供下列實施例和附圖以幫助進一步理解本發明。不應認為實施例和附圖限定了本發明的范圍。實施例或附圖中描述的任何特征適用于以上說明的任何方面。

圖1是共沉淀后的復合物的X射線衍射譜圖(Cu-Ka照射)；圖2是三元共沉淀物的掃描電子顯微鏡(SEM)顯微照片；圖3是三元共沉淀物的透射電子顯微鏡(TEM)顯微照片；圖4表示在105。C和50毫托脫水加熱處理48小時后的復合物的X 射線衍射譜圖，表明透鈣磷石相轉化為其脫水形式三斜磷鈣石；
圖5是設定離子濃度和硝酸鈣氫氧化鈣的比的組合，以維持pH
=4.0;
圖6表示確定含有磷酸鈣與膠原蛋白+糖胺聚糖的質量比為1:1的三元共沉淀物漿體的pH 4.0下的合成條件；
圖7是除去游離水后的膠原蛋白/糖胺聚糖/透鈣磷石三元共沉淀物
的X射線衍射譜圖(CU-K(X照射)；
圖8是CaP :膠原蛋白+糖胺聚糖二l:l的三元共沉淀物表面的二次電子(SE)和反向散射電子(BSE)照片；
圖9表示EDAC交聯后的膠原蛋白/糖胺聚糖/透鈣磷石三元共沉淀物的X射線衍射譜圖(Cu-Ka照射)；
圖10表示EDAC交聯的膠原蛋白/糖胺聚糖/CaP三元共沉淀物在37 。C和pH 6.67下向磷酸八鈣轉化72小時后，形成膠原蛋白/糖胺聚糖/磷酸八鈣生物復合物后的X射線衍射譜圖(Cu-Ka照射)；
圖11是設定離子濃度和硝酸鈣氫氧化鈣的比的組合，以維持pH =4.5;
圖12表示確定含有磷酸鈣與膠原蛋白+糖胺聚糖的質量比為3:1的三元共沉淀物槳體的pH4.5下的合成條件；
圖13表示除去游離水后的膠原蛋白/糖胺聚糖/透鈣磷石三元共沉淀物的X射線衍射譜圖(Cu-Kot照射)；
圖14表示EDAC交聯后的膠原蛋白/糖胺聚糖/透鈣磷石三元共沉淀物的X射線衍射譜圖(Cu-Ka照射)；
圖15表示EDAC交聯的膠原蛋白/糖胺聚糖/CaP三元共沉淀物在37 'C和8.50的pH下向磷灰石轉化72小時后，形成膠原蛋白/糖胺聚糖/磷灰石生物復合物的X射線衍射譜圖(Cu-Ka照射)；
圖16表示經Y射線照射次級交聯后的EDAC交聯的膠原蛋白/糖胺聚糖/Ap三元共沉淀物的X射線衍射譜圖17表示剛剛進行三元共沉淀和干燥(步驟I和II)后的復合物的 X射線衍射譜圖18表示初級交聯(步驟III)后的共沉淀物顆粒的結構的SEM顯微照片；
圖19表示水解為磷酸八鈣的過程(步驟IV)的XRD譜圖；禾口
圖20表示復合物的TEM圖。
具體實施方式
實施例1
實施例1是上述合成方法的例子，僅僅進行步驟I III。在室溫(20 25°C)和約3.2的pH (用氨水滴定來維持)下進行三元共沉淀。在本實施例中，共沉淀物在37。C下干燥，通過脫水加熱處理進行交聯。在本實施例中既不進行CaP的水解轉化，也不進行次級交聯。
材料
膠原蛋白復原(reconstituted)的提取了胃蛋白酶的豬皮膠原蛋白(端膠原(atelocollagen)); 85%1型，15%111型；Japan Meat Packers (日本
大阪)。
糖胺聚糖來自鯊魚軟骨的軟骨素-6-硫酸酯；鈉鹽；Sigma-Aldrich Inc
(美國密蘇里州圣路易斯) 鈣源(i)氫氧化鈣Ca(OH)2; Sigma-Aldrich Inc (美國密蘇里州圣路易斯)；(ii)硝酸f丐；Ca(N03)2'4H20; Sigma-Aldrich Inc (美國密蘇里州圣路易斯)；
磷源磷酸H3P04; BDHLaboratory Supplies (英國普爾(Poole)) 滴定劑氨水；NH3; BDH Laboratory Supplies (英國普爾)
程序
步驟I
溶液A:
一在室溫下將Ca(OH)2溶解在0.48摩爾/升的H3P04中至0.12摩爾/升的
濃度，使用氨水將得到的溶液滴定至p1^3.2。
懸浮液B:
一將軟骨素-6-硫酸酯溶解在去離子水中至3.2 g/L的濃度。然后在恒定
攪拌下，以1.5的硝酸根:氫氧根的摩爾比將Ca(N03)"H20和Ca(OH)2
加到軟骨素硫酸酯溶液中，制備出總鈣濃度為2.4摩爾/升的懸浮液。
_將0.144 g的膠原蛋白加到20 ml的溶液A中，使用均質器混合至溶
解。然后在恒定攪拌下將4 ml的懸浮液B加到溶液A中。
一持續攪拌60分鐘，監測pH以確保pH維持在3.15 <pH< 3.30的范圍
中。然后使得到的漿體在室溫下老化24小時。
步驟II
_使所述漿體在37。C下風干5天，用去離子水洗滌剩余的三元共沉淀物，接著在37r下再干燥24小時。
—所得到的三元共沉淀物的X射線衍射譜圖表示在圖1 (Cu-K(oc)照射) 中，SEM照片表示在圖2中。
步驟III
在105r和50毫托的真空下脫水加熱處理(DHT) 48小時使三元共沉淀物交聯。脫水加熱處理后的三元共沉淀物的TEM照片表示在圖3中。圖4表示脫水加熱處理后的三元共沉淀物的X射線衍射譜圖，表明透鈣磷石相轉化為其脫水形式三斜磷鈣石。
實施例2
實施例2是上述合成方法的例子，僅僅進行步驟1 IV。在室溫和 pH 4.0下進行三元共沉淀。在本實施例中，通過仔細控制氫氧化鈣和硝酸鈣的濃度實現pH的控制，該方法也能控制三元共沉淀物中透鈣磷石與膠原蛋白+糖胺聚糖的質量比。然后將得到的三元共沉淀物冷凍至-20。C，放置在真空下，然后加熱使游離水(即冰)升華。使用l-乙基3-(3-二甲氨基丙基)碳二亞胺處理進行初級交聯。然后通過在約37"C和6.67的pH 下水解將得到的干燥的三元共沉淀物轉化為磷酸八鈣。在本實施例中，不進行次級交聯。
MM
I型由牛腱溶解的酸，Integra Life Sciences Plainsboro,美國新澤西州糖胺聚糖來自鯊魚軟骨的軟骨素-6-硫酸酯；鈉鹽；Sigma-Aldrich Inc
(美國密蘇里州圣路易斯) 鈣源(0氫氧化鈣Ca(OH)2; Sigma-Aldrich Inc (美國密蘇里州圣路易斯)；(ii)硝酸轉；Ca(N03)2.4H20; Sigma-Aldrich Inc (美國密蘇里州圣路易斯)；
磷源磷酸H3P04; BDH Laboratory Supplies (英國普爾)
滴定劑無
交聯劑(i)l-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亞胺^EDAC); Sigma-Aldrich Inc (美國密蘇里州圣路易斯)；(ii) N-羥基琥珀酰亞胺(=NHS); Sigma-Aldrich Inc (美國密蘇里州圣路易斯)
程序步驟I
—選擇透鈣磷石與膠原蛋白+糖胺聚糖的目標質量比為1:1。
一在200 ml的總反應體積中，膠原蛋白+糖胺聚糖的濃度設定為21
mg/ml 。
_使用pH變量的經驗三維圖(在恒定的[C^+]與[P]反應物離子比為1.0 下制作)，改變(i)離子濃度,Ca2+] = [H3P04])和(ii)硝酸鈣:氫氧化鈣的比，確認pH恒定為4.0的點的軌跡。這表示在圖5中(設定離子濃度和硝酸鈣氫氧化鈣的比的組合，以維持pH二4.0)。 —將該點的軌跡疊加在具有相同的坐標軸的透鈣磷石質量產率的圖上，確認它與21 mg/ml的曲線的交點，使得可以設定反應物濃度，在該反應物濃度下，在pH為4.0 ( [Ca2+] = [H3P04] =0.1383摩爾/升； Ca(N03)2'4H20 :Ca(OH)2 =0.1356)時，可以制備含有磷酸鈣(21 mg/ml)與膠原蛋白+糖胺聚糖(21 mg/ml)的質量比為1:1的三元共沉淀物漿體。見圖6:確定含有磷酸鈣與膠原蛋白+糖胺聚糖的質量比為1:1 的三元共沉淀物漿體的pH 4.0下的合成條件。 —將3.8644 g的膠原蛋白分散在冰浴中冷卻的171.4 ml的0.1383摩爾/ 升的H3P04中，使用配備直徑19 mm的定子的均質器在15000轉/分鐘下混合90分鐘，制備高粘度的膠原蛋白分散液。
一通過周期地振蕩來分散溶解糖胺聚糖，使0.3436 g軟骨素-6-硫酸酯溶解在室溫下的14.3 ml的0.1383摩爾/升的磷酸中，制備糖胺聚糖溶液。一 90分鐘后，在15,000轉/分鐘的連續均質下，將14.3ml糖胺聚糖溶液以約0.5 ml/分鐘的速率加到攪拌中的膠原蛋白分散液中，所得到的高粘度膠原蛋白/糖胺聚糖分散液總共混合90分鐘。
_在混合90分鐘后，在15,000轉/分鐘的恒定攪拌下，用30分鐘將1.804
g的Ca(OH)2和0.780 g的Ca(N03)2'4H20加到高粘度膠原蛋白/糖胺聚糖
分散液中，制備膠原蛋白/糖胺聚糖/CaP三元共沉淀物漿體，此后再向漿
體中混入14.3 ml的0.1383摩爾/升的磷酸。
_三元共沉淀物漿體的pH約為4.0。
_使三元共沉淀物漿體在25。C下停留48小時。
步驟II
—將三元共沉淀物漿體放在-2(TC的冷凍機中，使其固化過夜。
一然后從冷凍機中取出冷凍的漿體，放在約80毫托的真空中，使溫度
升至室溫，這樣使冰從漿體中升華，使其進行48小時。
_除去游離水后的膠原蛋白/糖胺聚糖/透鈣磷石三元共沉淀物的X射線
衍射譜圖(Cu-K(oi)照射)表示在圖7中，共沉淀物表面的SEM照片表
示在圖8中(CaP:膠原蛋白+糖胺聚糖=1:1的三元共沉淀物表面的二次
電子(SE)和反向散射電子(BSE)照片)。
步驟III
一在完全除去游離水之后，使得到的1.25 g的干三元共沉淀物在40 ml 的去離子水中水合20分鐘。
—將20 ml的0.035摩爾/升的EDAC和0.014摩爾/升的NHS的溶液加到含有三元共沉淀物和去離子水的容器中，在緩和攪拌和室溫下使三元共沉淀物交聯2小時。
_除去EDAC溶液，用磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌三元共沉淀物，在溫和攪拌下在新鮮的PBS中，在37。C下培養2小時。一在PBS中2小時后，用去離子水洗滌三元共沉淀物，在溫和攪拌下在 37。C下培養兩個10分鐘的間隔。
_然后將三元共沉淀物在37。C下干燥72小時。圖9表示EDAC交聯后的膠原蛋白/糖胺聚糖/透鈣磷石三元共沉淀物的X射線衍射譜圖(Cu-K(a) 照射)。
步驟IV
_將交聯的三元共沉淀物顆粒放在50ml37X:的去離子水中，使用氨水將溶液的pH調節為6.67。
_溫度和pH維持恒定48小時，此后過濾出共沉淀物，在去離子水中洗滌，在37。C下風干。
—轉化為磷酸八鈣后的共沉淀物的X射線衍射譜圖表示在圖10中 (EDAC交聯的膠原蛋白/糖胺聚糖/CaP三元共沉淀物在37。C和pH 6.67 下向磷酸八鈣轉化72小時后，形成膠原蛋白/糖胺聚糖/磷酸八鈣生物復合物，Cu-K(a)照射)。
實施例3
實施例3是上述合成方法的例子，進行步驟1 V。在室溫和約4.5 的pH下進行三元共沉淀。如在實施例2中，通過仔細控制氫氧化鈣和硝酸鈣濃度實現pH控制，不使用滴定劑。然后將得到的三元共沉淀物冷凍至-2(TC，放置在真空下，然后加熱使游離水(即冰)升華。使用l-乙基 3-(3_二甲氨基丙基)碳二亞胺處理進行初級交聯。然后將得到的干燥的共
沉淀物在pH 8.50和37'C下轉化為磷灰石。使用Y射線照射進行次級交聯。
材料
I型由牛腱溶解的酸，Integra Life Sciences Plainsboro，美國新澤西州
糖胺聚糖來自鯊魚軟骨的軟骨素-6-硫酸酯；鈉鹽；Sigma-Aldrich Inc
(美國密蘇里州圣路易斯) 鈣源(i)氫氧化鈣Ca(OH)2; Sigma-Aldrich Inc (美國密蘇里州圣路易斯)；(ii)硝酸鈣；Ca(N03)2.4H20; Sigma-Aldrich Inc (美國密蘇里州圣路易斯)；
磷源磷酸H3P04; BDH Laboratory Supplies (英國普爾) 滴定劑無
交聯劑(i)l-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亞胺^EDAC); Sigma-Aldrich Inc (美國密蘇里州圣路易斯)；(ii) N-羥基琥珀酰亞胺(=NHS); Sigma-Aldrich Inc (美國密蘇里州圣路易斯)
程序步驟I
一選擇透鈣磷石與膠原蛋白+糖胺聚糖的目標質量比為3:1。一在200ml的總反應體積中，使膠原蛋白+糖胺聚糖的濃度為10mg/ml。 —使用pH變量的經驗三維圖(在恒定的[C^+]與[P]反應物離子比為1.0 下)，改變(i)離子濃度^P[Ca2+] = [H3P04])和(ii)硝酸鈣氫氧化鈣的比，確認pH恒定為4.5的點的軌跡。這表示在圖11中(設定離子濃度和硝酸鈣氫氧化鈣的比的組合，以維持pH二4.5)。一將該點的軌跡疊加在透鈣磷石質量產率的圖上(具有相同的坐標軸)，確認它與30mg/ml(即3倍于膠原蛋白+糖胺聚糖的濃度)的曲線的交點，使得可以設定反應物濃度，在該反應物濃度下，在pH為4.5 ([Ca2+]= [H3P04] =0.1768摩爾/升；Ca(N03)2'4H20 : Ca(OH)2 =0.049)下，可以制備含有磷酸鈣(30mg/ml)與膠原蛋白+糖胺聚糖(lOmg/ml)的質量比為3:1的三元共沉淀物漿體。這表示在圖12中確定含有磷酸鈣與膠原蛋白+糖胺聚糖的質量比為3:l的三元共沉淀物漿體的pH4.5下的合成條件。
一將1.837 g的膠原蛋白分散在冰浴中冷卻的171.4 ml的0.1768摩爾/ 升的H3P04中，使用配備直徑19 mm的定子的均質器在15000轉/分鐘下
混合90分鐘，制備膠原蛋白分散液。
_通過周期地振蕩分散溶解糖胺聚糖，使0.163 g軟骨素-6-硫酸酯在室溫下溶解在14.3 ml的0.1768摩爾/升的磷酸中，制備糖胺聚糖溶液。一 90分鐘后，在15,000轉/分鐘的連續均質下，將14.3ml糖胺聚糖溶液以約0.5 ml/分鐘的速率加到混合的膠原蛋白分散液中，所得到的膠原蛋白/糖胺聚糖分散液總共混合90分鐘。
一在90分鐘的混合后，在15,000轉/分鐘的恒定攪拌下，用30分鐘將
2.498 g的Ca(OH)2和0.380 g的Ca(N03)2.4H20加到膠原蛋白/糖胺聚糖分
散液中，制備膠原蛋白/糖胺聚糖/CaP三元共沉淀物漿體，此后再向混合
漿體中加入14.3 ml的0.1768摩爾/升的磷酸。
_三元共沉淀物漿體的pH約為4.5。
一使三元共沉淀物漿體在25T:下停留48小時。
步驟II
一將三元共沉淀物漿體放在-20。C的冷凍機中，使其冷凍過夜。 _然后從冷凍機取出冷凍的漿體，放在約80毫托的真空中，使溫度升至室溫，這樣使冰從漿體中升華，使其進行48小時。除去游離水后的膠原蛋白/糖胺聚糖/透鈣磷石三元共沉淀物的X射線衍射譜圖(Cu-K(a)照射)表示在圖13中。
步驟III
一在完全除去游離水之后，使得到的1.25 g的干三元共沉淀物在40 ml 的去離子水中水合20分鐘。
一將20 ml的0.018摩爾/升EDAC和0.007摩爾/升NHS的溶液加到含有三元共沉淀物和去離子水的容器中，在緩和攪拌和室溫下使三元共沉淀物交聯2小時。
一除去EDAC溶液，用磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌三元共沉淀物，在溫和攪拌下在新鮮的PBS中，在37℃下培養2小時。
一在PBS中2小時后，用去離子水洗滌三元共沉淀物，在溫和攪拌和
37"C下培養兩個10分鐘的間隔。
一然后將三元共沉淀物在37。C下干燥72小時。EDAC交聯后的膠原蛋白/糖胺聚糖/透鈣磷石三元共沉淀物的X射線衍射譜圖(Cu-K(a)照射) 表示在圖14中。
步驟IV
一將交聯的三元共沉淀物顆粒放在37°C的50 ml的預先用透f丐磷石飽和的去離子水中，使用氨水將溶液的pH調節為8.50。一維持溫度和pH恒定72小時，此后過濾出共沉淀物，在去離子水中洗滌，在37"C下風干。轉化為磷灰石后的共沉淀物的X射線衍射譜圖表示在圖15中(EDAC交聯的膠原蛋白/糖胺聚糖/CaP三元共沉淀物在37°C 和8.50的pH下向磷灰石轉化72小時后，形成膠原蛋白/糖胺聚糖/磷灰石生物復合物，Cu-K(oO照射)。
步驟V
一將干燥的膠原蛋白/糖胺聚糖/Ap三元共沉淀物進行32.1 kGy劑量的y 射線照射。圖16表示y射線照射后的X射線衍射譜圖(經y射線照射的次級交聯后的EDAC交聯的膠原蛋白/糖胺聚糖/Ap三元共沉淀物)。
實施例4 材料
膠原蛋白復原的提取了胃蛋白酶的豬皮膠原蛋白(端膠原)；85%1型， 15%111型；Japan Meat Packers (日本大阪)。
糖胺聚糖來自鯊魚軟骨的軟骨素-6-硫酸酯；鈉鹽；Sigma-Aldrich Inc
(美國密蘇里州圣路易斯) 鈣源(i)氫氧化鈣Ca(OH)" Sigma-Aldrich Inc (美國密蘇里州圣路易斯)；(ii)硝酸鈣；Ca(N03)2'4H20; Sigma-Aldrich Inc (美國密蘇里州圣路易斯)；
磷源磷酸H3P04; BDH Laboratory Supplies (英國普爾)
滴定劑氨水；NH3; BDH Laboratory Supplies (英國普爾)
程序步驟I
_在室溫下將Ca(OH)2溶解在0.48摩爾/升的H3P04中至0.12摩爾/升的
濃度，制備出溶液A，將所得到的溶液滴定至pH為3.2。
一將軟骨素-6-硫酸酯溶解在去離子水中至3.2 g/L的濃度，制備出懸浮
液B。在恒定攪拌下，以1.5的硝酸根:氫氧根的摩爾比將Ca(N03)2.4H20
和Ca(OH)2加到軟骨素硫酸酯溶液中，制備總鈣濃度為2.4摩爾/升的懸浮液。
—將0.144 g的膠原蛋白加到20 ml的溶液A中，使用均質器混合至溶解。然后在恒定攪拌下將4 ml的懸浮液B加到溶液A中。持續攪拌60 分鐘，監測pH以確保pH維持在3.15〈pH〈3.30的范圍中。然后使所得到的漿體在室溫下老化24小時。
步驟II
_使所述漿體在37。C下風干5天，用去離子水洗滌剩余的三元共沉淀物，接著在37'C下再干燥24小時。
步驟III
_將共沉淀物放在稀醋酸(pH=3.2)中，用30 kGy的Y射線照射劑量照射。然后從溶液中除去交聯的沉淀物，洗滌，在37"C下風干。
步驟IV
一將交聯的共沉淀物顆粒放在37"C的50ml去離子水中，使用氨水將溶液的pH調節為6.65。維持恒定溫度和pH 48小時，此后過濾出共沉淀物，在去離子水中洗滌，在37"C下風干。
步驟V
2_將交聯的水解的共沉淀物顆粒放在室溫的真空箱中，施加50毫托的
真空度，然后將溫度升高至105°C。 24小時后，將溫度降至室溫，釋放真空。
圖17表示剛剛進行三元共沉淀和干燥(步驟I和II)后的復合物的 X射線衍射譜圖。該譜圖證實主要存在的相是透鈣磷石。
圖18表示初級交聯(步驟in)后的共沉淀物顆粒的結構的SEM顯微照片。值得注意的是顆粒在微觀結構的均一性質。
水解為磷酸八鈣的過程(步驟IV)表示在圖19的XRD譜圖中。在 12.5。透鈣磷石峰強度逐漸減弱，在4.5。磷酸八鈣(OCP)的主峰增強，這表明無機相用48小時轉化為OCP。
復合物的TEM圖表示在圖20中。可以看出，分散在膠原蛋白/糖胺聚糖母體中的10 20nm的低縱橫比的磷酸鈣晶體呈無規分布。
本發明的復合生物材料可以用作可生物吸收的材料。可以預期，移植后，由該材料制備的構件將完全吸收，僅僅留下健康的再生的組織，絲毫不留下移植物本身。
權利要求
1. 一種材料，所述材料包含三元共沉淀物，所述三元共沉淀物包含膠原蛋白、磷酸鈣材料和一種或多種糖胺聚糖。
2. 如權利要求l所述的材料，其中所述磷酸鈣材料選自透轉磷石、磷酸八鈣和/或磷灰石中的一種或多種。
3. 如權利要求2所述的材料，其中所述磷酸鈣材料選自透鈣磷石和磷酸八鈣的組合；透鈣磷石和磷灰石的組合；或磷酸八f丐磷灰石的組合。
4. 如權利要求1所述的材料，其中所述材料適合轉變為合成生物材料。
5. 如權利要求l所述的材料，其中所述三元共沉淀物由膠原蛋白、透鈣磷石和一種或多種糖胺聚糖組成。
6. 如權利要求l所述的材料，其中所述材料是復合生物材料。
7. 如權利要求6所述的材料，所述復合生物材料用作骨或牙科替代材料。
8. 如權利要求1 7中任一項所述的材料，其中所述膠原蛋白與所述一種或多種糖胺聚糖已被交聯。
9. 如權利要求1 7中任一項所述的材料，其中所述膠原蛋白以5 重量％ 90重量％的量存在在所述材料中。
10. 如權利要求9所述的材料，其中所述膠原蛋白以15重量％ 60 重量％的量存在在所述材料中。
11. 如權利要求1 7中任一項所述的材料，其中所述一種或多種糖胺聚糖以0.01重量％ 12重量。％的量存在在所述材料中。
12. 如權利要求ll所述的材料，其中所述一種或多種糖胺聚糖以1 重量％ 5.5重量％的量存在在所述材料中。
13. 如權利要求1 7中任一項所述的材料，其中，所述材料包含透鈣磷石時，膠原蛋白與透鈣磷石的重量比為10:1 1:100。
14. 如權利要求13所述的材料，其中所述膠原蛋白與透鈣磷石的重量比為5:1 1:20。
15. 如權利要求1 7中任一項所述的材料，其中，所述材料包含磷酸八鈣時，膠原蛋白與磷酸八鈣的重量比為10:1 1:100。
16. 如權利要求15所述的材料，其中所述膠原蛋白與磷酸八鈣的重量比為5:1 1:20。
17. 如權利要求1 7中任一項所述的材料，其中膠原蛋白與一種或多種糖胺聚糖總量的重量比為8:1 30:1。
18. 如權利要求1所述的材料，所述材料包含一種或多種磷酸鈣材料的顆粒、膠原蛋白和一種或多種糖胺聚糖，其中所述膠原蛋白和所述一種或多種糖胺聚糖交聯形成母體，所述磷酸鈣材料的顆粒分散在所述母體中，和所述磷酸鈣材料選自透鈣磷石、磷酸八鈣和/或磷灰石中的一種或多種。
19. 一種包含權利要求1 7或18中任一項所述材料的人工骨材料、骨移植物、骨嫁接物、骨替代物、骨支架、填充物、涂料或粘固劑。
全文摘要
一種制備包含膠原蛋白、透鈣磷石和一種或多種糖胺聚糖的復合材料的方法，所述方法包括以下步驟提供包含膠原蛋白、鈣源和磷源以及一種或多種糖胺聚糖的酸性水溶液；和從所述水溶液中一起沉淀出膠原蛋白、透鈣磷石和一種或多種糖胺聚糖以形成三元共沉淀物。
文檔編號A61L27/28GK101391117SQ20081016901
公開日2009年3月25日申請日期2004年10月28日優先權日2003年10月28日
發明者塞麗娜·貝斯特, 威廉·邦菲爾德, 安德魯·林恩, 魯思·卡梅倫申請人:劍橋企業有限公司

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