專利名稱：：高效的胸腺肽腸溶片和注射用胸腺肽的制作方法
技術領域：
：本發明屬于醫藥
技術領域：
，具體而言，其涉及胸腺肽和生物素的藥物組合物及其制劑，尤其是胸腺肽腸溶片和注射用胸腺肽制劑。另外，本發明還涉及上述藥物組合物或制劑的應用，如用于預防和/或治療慢性肝炎、病毒性肝炎及肝硬化、各種原發性或繼發性T淋巴細胞缺陷病、自身免疫性疾病，細胞免疫功能低下相關的疾病等或制備相應藥物的用途。
背景技術：
：胸腺是人體的重要免疫器官，其能分泌多種重要的激素，如促胸腺生成素、胸腺肽等。其中，胸腺肽(又名胸腺素，thymosin)是胸腺組織分泌的具有生理活性的一組多肽，其最初是從小牛、豬的胸腺里面進行提取得到一類多肽激素，分子量在5000以下。目前已經能夠通過化學合成和基因工程手段獲得。胸腺肽具有調節和增強人體細胞免疫功能的作用，能促使有絲分裂原激活后的外周血中的T淋巴細胞成熟，增加T細胞在各種抗原或致有絲分裂原激活后各種淋巴因子(如a、Y干擾素、白介素2和白介素3)的分泌，增加T細胞上淋巴因子受體的水平。它同時通過對T4輔助細胞的激活作用來增強淋巴細胞的作用。因此，目前胸腺肽己經能夠廣泛應用于臨床治療，如預防和/或治療乙肝、丙肝等感染性疾病；非小細胞肺癌、惡性黑素瘤、肝癌、胃癌等惡性腫瘤；自身免疫性疾病，如重癥肌無力、系統性紅斑狼瘡、類風濕關節炎等，也用于皮膚病、過敏性紫癜、肺結核、上呼吸道感染等疾病的治療。胸腺肽也與其他藥物組合來治療疾病。例如，中國專利申請第99811382號公開了胸腺肽與拉米夫定的組合物用于治療乙型肝炎感染；中國專利申請第01813766號公開了使用胸腺肽、干擾素和利巴韋林治療丙型肝炎；中國專利申請第01815969號公開了使用胸腺肽和聚乙二醇化干擾素德組合物來治療丙型肝炎。但是，目前并沒有研究表明胸腺肽和生物素能組合提高免疫力從而預防和/或治療相關疾病的報道。生物素(Biotin)的化學結構中包括一個含有5個碳原子的羧基側鏈和兩個五元雜環，在體內由側鏈的羧基與酶蛋白的e-賴氨酸殘基結合，在脂類、糖、氨基酸和能量代謝中發揮輔酶的作用。生物素可以采用化學合成制備，但目前多采用微生物發酵技術來制備，如可以參見中國專利申請第85103248、93102377、94107234、97111201號等。當前，生物素除了作為維生素的補充劑外，其主要應用是作為標記分子來起標記的作用，從而應用于研究、檢測和診斷中。例如，有報道生物素可以標記胸腺肽或其類似物，用于科學研究，如參見BiolChem.2001Oct;382(10):1473-82等。另外，美國專利申請US2007243132A公開了一種油包水微乳劑，其中有效成分可選自包括胸腺肽和生物素的龐大的組，各成分之間是選擇的關系，也沒有明確提示胸腺肽和生物素能組合提高免疫力而共同制備成更高效的組合制劑。本發明人經過艱苦努力，令人驚訝地發現了胸腺肽和生物素的組合具有協同作用，能顯著提高免疫力，從而能夠更高效地預防和/或治療相應的疾病，和/或制備成預防或治療相應疾病的藥物組合物和制劑。因此，本發明人提出了一種包括胸腺肽和生物素的高效的藥物組合物和制劑，特別優選是腸溶片劑和注射劑，用于高效提高機體免疫力，從而更好地預防和/或治療相應疾病。另外，由于胸腺肽是多肽類物質，分子量較大，脂溶性差，不容易透過生物膜，尤其是胸腺肽口服時易被胃腸道中的酶降解成氨基酸、小肽而失去活性。因此本發明人經過艱苦努力，特別優化了一種腸溶片配方，不但通過口服給藥方便患者長期用藥，而且大大提高了其生物利用度，使得藥物更為高效。
發明內容在現有技術缺乏高效的胸腺肽藥物的情況下，本發明的目的在于為了克服現有技術的不足，提供了高效的藥物組合物，其包括胸腺肽和生物素。該組合物不但能保持胸腺肽的藥理作用，而且生物素的添加能協同促進藥效的發揮。另外，本發明還提供了該藥物組合物的制劑和應用，具體涉及用于預防和/或治療慢性肝炎、病毒性肝炎及肝硬化、各種原發性或繼發性T淋巴細胞缺陷病、自身免疫性疾病、細胞免疫功能低下相關的疾病和腫瘤性疾病等方面的應用。另外，本發明還特別提供了一種腸溶片配方。具體而言，在第一方面，本發明提供了一種藥物組合物，其包括胸腺肽和生物素。該藥物組合物能發揮胸腺肽和生物素的協同作用，顯著提高免疫力，從而能夠更高效地預防和/或治療相應的疾病。本發明人經過無數次工藝研究實驗和藥效學試驗發現將胸腺肽和生物素以適當比例進行組合，療效顯著高于僅有胸腺肽的單位藥，具有明顯的增效作用，大大的提高了胸腺肽的生物利用度。優選本發明藥物組合物基本由胸腺肽和生物素組成，即該藥物組合物中用于提高機體免疫力的活性成分由胸腺肽和生物素；最優選本發明藥物組合物由胸腺肽和生物素組成。在本發明中，"藥物組合物"為本領域技術人員所常規理解的，是其中成分混合而成的用于預防和/或治療疾病的產物。因此，本發明的藥物組合物并不是用于檢測、診斷的生物素和其他多肽類物質化學共價連接的綴合物。胸腺肽是本領域技術人員所熟知的，其可以是由動物提取的天然胸腺肽，其通常是從動物(如豬、牛、羊等哺乳動物)的胸腺提取的；也可以是通過化學合成的胸腺肽或其衍生物，如通過常規的肽合成技術進行，相關細節可參考《SolidPhasePeptideSynthesis》(第二版)(PierceChemicalCo"Rockford,IUinois(1984));也可以是基因工程制備的胸腺肽或其衍生物，如通過《分子克隆實驗指南》(科學出版社(2002))等手冊所述的流程和工具(如酶、實驗設備等)構建出含有相應核酸的表達載體，將其導入到宿主細胞中并在合適的條件下進行表達。胸腺肽的具體的實例很多，如中國專利200410087075、02805917、99805957、93120725、93119346等文獻所述的。因此，本文所用的"胸腺肽"包括是由動物提取的、化學合成的、或基因工程制備的，優選是胸腺素a，更優選是胸腺素al。另外，本文所用的"胸腺肽"也包括胸腺肽的藥學上可接受的鹽，如鹽酸、磷酸、硫酸、乙酸、琥珀酸、馬來酸、檸檬酸鹽或氫氧化物、銨、碳酸鹽等。本發明所用的"生物素"是已知的化合物，可以通過微生物發酵或化學合成來制備，但不包括生物素與其他多肽類物質綴合形成的復合物，通常這類復合物用于免疫學檢測領域，明顯背離了本發明的宗旨。在本發明第一方面的藥物組合物中，優選其中胸腺肽和生物素的重量比為1-50:0,01-2.0，更優選為2-30:0.05-1.0，更優選為10-25:0.1-0.8，在本發明的具體實施方式中，胸腺肽和生物素的重量比為20:0.5。在第二方面，本發明提供了一種藥物制劑，其包括本發明第一方面所述的藥物組合物和藥學上可接受的輔劑。藥學上可接受的輔劑包括藥學上可接受的各種輔料、載體，有賦形劑、稀釋劑、填充劑、吸收促進劑、酶抑制劑、崩解劑、潤滑劑、潤濕劑和/或粘合劑等，它們與活性成分相容。通過藥學教科書或試驗手冊，運用藥學上可接受的輔劑制備常規的藥物制劑對本領域普通技術人員來說是熟知的。本發明的藥物制劑包含本發明第一方面所述的藥物組合物作為活性成分，將該藥物組合物和藥學上可接受的輔劑組合在一起，配制成各種制劑，優選為固體制劑和液體制劑。本發明的制劑可以為單位劑量形式，如片劑、丸劑、膠囊(包括持續釋放或延遲釋釋放形式)、粉劑、混懸劑、顆粒劑、酊劑、糖槳劑、乳液劑、懸浮液、針劑、粉針劑(包括凍干粉針劑)、等劑型以及各種緩釋劑型，從而適合各種給藥形式，例如口服、非腸道注射、粘膜、肌肉、靜脈內、皮下、眼內、皮內或經過皮膚等的給藥形式。本發明優選的是片劑、膠囊、注射劑或注射用凍干粉。例如，可以選用生理鹽水與本發明的藥物組合物配制成注射劑。因為胸腺肽在胃腸道中易被酶降解，而且生物素也只是在小腸處進行吸收，所以本發明尤其優選的口服藥物制劑是口服腸溶制劑，優選是腸溶膠囊或腸溶片，更優選是腸溶片。其中，優選每片腸溶片中含有1-50mg胸腺肽和0.01-2.0mg生物素，更優選含有2-30mg胸腺肽和0.05-1.0mg生物素，更優選含有10-25mg胸腺肽和0.1-0.8mg生物素，在本發明的具體實施方式中，每片含有20mg胸腺肽和0.5mg生物素。本發明的腸溶片含有藥用輔料說明書第4/7頁和腸溶包衣材料，例如藥用輔料可以選自能與活性成分相容的藥學上可接受的填充劑、吸收促進劑、酶抑制劑、崩解劑、潤滑劑、潤濕劑或粘合劑中的一種或幾種。這些輔料或材料本身可以是常規的并記載于教科書或試驗手冊中，例如吸收促進劑選自脂肪酸、膽酸及其鹽、殼寡糖、卡波姆、泊洛沙姆、吐溫-80、十二烷基硫酸鈉的一種或幾種。但是，本發明人通過極大量的實驗，從中優化了配方，使其效果優于現有腸溶片。本發明優選吸收促進劑為吐溫-80和泊洛沙姆的組合。具體而言，本發明特別提供了一種胸腺肽腸溶片，其含胸腺肽、吐溫80和泊洛沙姆，其中吐溫80和泊洛沙姆的重量比為1:1-20(優選為1:8)，而且其中泊洛沙姆與胸腺肽的重量比為0.2-20:1(優選為10:1)，最優選胸腺肽、吐溫80和泊洛沙姆的重量比為10:1:8。這樣的配方可以通過跨細胞同道合細胞旁路途徑，也可以因為細胞緊密連接的完整性改變和(或)外排系統功能的失效來增加藥物的滲透性，從而進一步提高藥物的溶出速率和生物利用度。泊洛沙姆能影響藥物在細胞中的轉運，機理比較復雜，一般認為，泊洛沙姆可以使腸蠕動變慢，藥物在胃腸道中的滯留時間長，吸收增加，從而提高藥物的生物利用度。吐溫作為藥物的吸收促進劑的機理，一般認為，吐溫可以潛入細胞膜，并與之成為一個整體，從而能改變細胞的微黏度，使細胞親水雙分子層的丟失；它可以溶解細胞膜中的特定成分，通過局部細胞膜的成分改變來改變蛋白的結構和功能，進而抑制頂端極化外排系統，從而增加藥物在腸道中的滲透率，進一步提高藥物的生物利用度。更具體地，該特定腸溶片是由以下制備方法制備而得的，該制備方法包括以下步驟1)制備片芯將胸腺肽、甘露醇、微晶纖維素、泊洛沙姆、交聯PVP和羧甲基淀粉鈉混合均勻，制成胸腺肽混合物；將生物素溶于乙醇中，加入吐溫80，混合均勻，并與上述胸腺肽混合物制成軟材，制粒并干燥；然后加入硬脂酸鎂和微粉硅膠，混合均勻，壓片，得到片芯；2)制備包衣液將腸溶材料用乙醇進行溶解，混合均勻，得到包衣液；3)包衣將步驟l)制備的片芯置噴上步驟2)制備的包衣液，使包衣增加的重量占片芯重量的8-10%，得到腸溶片。本發明的腸溶片的優點具體有1、劑量小，生物利用度高。采用生物素作為輔酶，增加胸腺肽在腸道中的滲透率，提高生物利用度；采用吐溫80和泊洛沙姆以一定的比例組合作為吸收促進劑，大大提高了胸腺肽的生物利用度。2、安全性好。作為吸收促進劑的表面活性劑，用量較小，在安全范圍內還是在臨床應用中，還是在毒理試驗中均未見毒性反應及刺激作用。3、方便服用、攜帶、運輸。劑型為口服腸溶片，避免了以往注射劑型給藥不方便的缺點。4、成本較低。本發明的藥物輔料均是常見的藥用輔劑，生產簡單，適合我國國情。在第三方面，本發明提供了本發明提供本發明第一方面的藥物組合物的制備方法，其包括將胸腺肽和生物素混合的過程。例如，該制備方法可以包括將胸腺肽和生物素按相應藥物組合物中所占的比例混合的過程。在第四個方面，本發明提供本發明第二方面的藥物制劑的制備方法，其包括將胸腺肽、生物素和藥學上可接受的輔劑混合的過程。例如，該制備方法可以包括將合成的胸腺肽、生物素和藥學上可接受的輔劑按相應藥物制劑中所占的比例混合的過程。在一個具體實施方式中，藥物制劑的制備方法包括1)制備片芯；2)制備包衣液；和3)包衣。在第五個方面，本發明提供本發明第一方面所述的藥物組合物在制備用于慢性肝炎、病毒性肝炎、肝硬化、原發性或繼發性T淋巴細胞缺陷病、自身免疫性疾病、細胞免疫功能低下相關的疾病或腫瘤性疾病輔助性治療的藥物中的應用。給藥的劑量和形式一般由醫師根據患者的具體情況(如年齡、體重、性別、患病時間、身體狀況等)確定。如以腸溶片形式口服給藥，以藥物組合物或藥物制劑中的胸腺肽計，給藥的劑量為1-50mg胸腺肽/每名成人患者，優選為2-30mg，更優選為10-25mg。給藥形式根據各種藥物制劑的劑型來確定，適合的給藥形式有口服、非腸道注射、粘膜、肌肉、靜脈內、皮下、眼內、皮內或經過皮膚等給藥形式，本發明優選口服和注射的給藥形式，尤其優選口服形式。為了便于理解，以下將通過具體的實施例對本發明進行描述。需要特別指出的是，這些描述僅僅是示例性的描述，并不構成對本發明范圍的限制。依據本說明書的論述，本發明的許多修改對所屬領域技術人員來說都是顯而易見了。另外，本發明引用了現有公開文獻，這些文獻是為了更清楚地描述本發明，它們的全文內容均納入本文之中，就好像它們的全文已經在本文中重復敘述過一樣。具體實施例方式本發明以下將提供具體的實施例，其中有未詳盡之處可以參考中國專利申請200610021429、陳步實等《胸腺肽片腸溶衣處方》、簡炎林等《胸腺肽膠囊的研制》等現有技術或教科書、試驗手冊中的內容。在下文中，如無其他定義，"復合胸腺肽腸溶片"指的是含有胸腺肽和生物素的腸溶片。實施例一、復合胸腺肽腸溶片的制備處方組成胸腺肽20g生物素0.5g甘露醇100g微晶纖維素5g吐溫802g泊洛沙姆16g交聯PVP40g羧甲基淀粉鈉20g硬脂酸鎂3g微粉硅膠1.5g_^_約70ml_制成畫片制備方法1.制備片芯將處方中的胸腺肽、甘露醇、微晶纖維素、泊洛沙姆、交聯PVP、羧甲基淀粉鈉分別過65目篩，備用。將過完篩的輔料混合均勻，然后將過完篩的胸腺肽與混合均勻的輔料等量遞加混合均勻。將生物素溶于50ml乙醇中，加入處方量的吐溫-80溶解成均一溶液。以該乙醇溶液作為粘合劑，制成軟材，20目篩制粒，干燥。中間體檢測合格后，用18目篩整粒，加入處方量的硬脂酸鎂和微粉硅膠混合均勻，壓片。2.制備包衣液將腸溶材料采用乙醇進行溶解，混合均勻，得到包衣液3.包衣工藝取片芯置包衣鍋中，調節進口溫度為65-75°C，出口溫度為30-40°C，開啟包衣鍋，調節轉速為15轉/分，將上述包衣液用噴槍噴入，控制腸溶衣增重占片芯8-10%，保溫10min，得到腸溶片劑，經質量檢驗合格后，用鋁塑泡罩包裝，即得胸腺肽腸溶片。實施例二、復合胸腺肽腸溶片的藥效學試驗胸腺肽腸溶片對小鼠E花環形成率的影響。1、實驗材料1.l動物昆明種小鼠，早S各半，體重22士2g，由西安交通大學醫學院實驗動物中心提供。質量合格證陜醫動證字08-18號。1.2藥物醋酸氫化可的松注射液(規格5ml:25mg，生產廠家丹東醫創藥業有限責任公司，批號070305)、胸腺肽注射液規格2ml:20mg，生產廠家西安迪賽生物藥業有限公司，批號071220)、胸腺肽腸溶膠囊(規格5mg，生產廠家上海寶龍藥業有限公司，批號061108)、復合胸腺肽腸溶片。2.試驗方法取在實驗室生活一周的健康昆明種小鼠70只，隨機分成6組，每組IO只，分別為正常對照組、陰性對照組(0.5。/。CMC-Na溶液)、陽性對照組(胸腺肽注射液，3mg/kg)、胸腺肽組(0.5。/。CMC-Na液，劑量為6.0mg胸腺肽/kg)、復合胸腺肽大劑量組(0.5。/。CMC-Na液，劑量為6.0mg胸腺肽/kg和0.15mg生物素/kg)、復合胸腺肽中劑量組(0.5。/。CMC-Na液，劑量為3.0mg胸腺肽/kg和0.075mg生物素/kg)、復合胸腺肽小劑量組(0.5%CMC-Na液，劑量為1.5mg胸腺肽/kg和0.0375mg生物素/kg)。免疫低下小鼠的制備按每日10mg劑量給予皮下注射氫化可的松，連續7天。然后，除陽性對照組腹腔注射外，其余各組灌胃給藥。連續給藥七天，第八天取血進行試驗。采用E花環形成試驗，看E花環計數200個淋巴細胞，算出花環形成百分率。花環形成細胞花環形成百分率％=具體試驗結果見表1花環形成細胞+不形成花環淋巴細胞xlOO%<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>實驗結果表明，復合胸腺肽大、中劑量組具有明顯增強和調節細胞免疫的功能，小劑量組與陰性對照組相比沒有明顯的差異，而中劑量組和高劑量組均能顯著提高免疫低下小鼠的E花環形成率(P<0.01)，這也說明免疫低下的小鼠的花環形成百分率與胸腺肽的劑量呈現正相關關系。值得注意的是，胸腺肽組與陰性對照組相比，E花環形成率沒有明顯的顯著差異；而本發明的復合胸腺肽在中劑量時，就己經具有顯著的調節細胞免疫的功能；本發明的復合胸腺肽在大劑量時，其藥效甚至與陽性對照的注射劑型相當，盡管用量較大，但是考慮到口服的方便性和安全性，更有應用前景。權利要求1、一種藥物組合物，其包括胸腺肽和生物素，優選其由胸腺肽和生物素組成。2、根據權利要求1所述的藥物組合物，其中胸腺肽和生物素的重量比為1-50:0.01-2.0，優選為2-30:0.05-1.0。3、根據權利要求l或2所述的藥物組合物，其中胸腺肽是由動物提取的、化學合成的、或基因工程制備的，優選胸腺肽是胸腺素al。4、一種藥物制劑，其包括權利要求1-3之任一所述的藥物組合物和藥學上可接受的輔劑。5、根據權利要求4所述的藥物制劑，其為片劑、膠囊、注射劑或注射用凍干粉。6、根據權利要求5所述的藥物制劑，其為腸溶片。7、根據權利要求6所述的藥物制劑，其特征在于每片中含有l-50mg胸腺肽和0.01-2.0mg生物素，優選含有2-30mg胸腺肽和0.05-1.0mg生物素。8、根據權利要求5或6所述的藥物制劑，其含有藥用輔料和腸溶包衣材料，所述藥用輔料選自能與活性成分相容的藥學上可接受的填充劑、吸收促進劑或者酶抑制劑、崩解劑、潤滑劑、潤濕劑或粘合劑中的一種或幾種。9、根據權利要求8所述的藥物制劑，其中吸收促進劑選自脂肪酸、膽酸及其鹽、殼寡糖、卡波姆、泊洛沙姆、吐溫-80、十二烷基硫酸鈉的一種或幾種，優選吸收促進劑為吐溫-80和泊洛沙姆的組合。10、權利要求l-3之任一所述的藥物組合物在制備用于預防和/或治療慢性肝炎、病毒性肝炎、肝硬化、原發性或繼發性T淋巴細胞缺陷病、自身免疫性疾病、細胞免疫功能低下相關的疾病或腫瘤性疾病輔助性治療的藥物中的應用。11、一種胸腺肽腸溶片，其含胸腺肽、吐溫80和泊洛沙姆，其中吐溫80和泊洛沙姆的重量比為1:1-20，優選為l:8，而且其中泊洛沙姆與胸腺肽的重量比為0.2-20:1。12、根據權利要求ll所述的腸溶片，其由包括以下步驟的制備方法制備而得1)制備片芯將胸腺肽、甘露醇、微晶纖維素、泊洛沙姆、交聯PVP和羧甲基淀粉鈉混合均勻，制成胸腺肽混合物；將生物素溶于乙醇中，加入吐溫80，混合均勻，并與上述胸腺肽混合物制成軟材，制粒并干燥；然后加入硬脂酸鎂和微粉硅膠，混合均勻，壓片，得到片芯；2)制備包衣液將腸溶材料用乙醇進行溶解，混合均勻，得到包衣液；3)包衣將步驟l)制備的片芯置噴上步驟2)制備的包衣液，使包衣增加的重量占片芯重量的8-10%，得到腸溶片。全文摘要本發明涉及胸腺肽和生物素的藥物組合物及其制劑，如胸腺肽腸溶片和注射用胸腺肽制劑，具體如胸腺肽腸溶片，其含胸腺肽、吐溫80和泊洛沙姆，其中吐溫80和泊洛沙姆的重量比為1∶1-20，優選為1∶8，而且其中泊洛沙姆與胸腺肽的重量比為0.2-20∶1。另外，本發明還涉及上述藥物組合物或制劑的應用，如用于預防和/或治療慢性肝炎、病毒性肝炎及肝硬化、各種原發性或繼發性T淋巴細胞缺陷病、自身免疫性疾病、細胞免疫功能低下相關的疾病和腫瘤性疾病的輔助治療等或制備相應藥物的用途。尤其是本發明的藥胸腺肽腸溶片在腸內能被迅速釋放，提高藥物的吸收速度，使藥物的生物利用度大大增強。文檔編號A61P1/16GK101380461SQ20081016692公開日2009年3月11日申請日期2008年9月27日優先權日2008年9月27日發明者吳建中申請人:吳建中