專利名稱：富含半乳糖的改性多糖在制備阻止結腸炎癌變的藥物中的應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及富含半乳糖的多糖在藥物制備中的應用，具體涉及富含半乳糖 的改性多糖在制備阻止結腸炎癌變的藥物中的應用。
背景技術：
炎癥性腸病(IBD)包括潰瘍性結腸炎與克隆氏病，是一類與免疫失調、 菌群紊亂及遺傳因素相關的自身免疫性疾病；在歐美國家，IBD的發病率高達 150-200/10萬[l];在亞洲地區，包括我國香港、上海，正呈快速躍升趨勢[2〗。 近年來，我國人群高熱量、高蛋白，低纖維食品攝入量明顯增多，IBD的發病 率逐年上升，目前尚無治療IBD的特效藥物。IBD尤其是漬瘍性結腸炎，反復 發作、遷延不愈容易引起癌變，在西方國家平均癌變率達25%，病程25-30年 患者的癌變率高達43%;結腸癌病死率高，位居腫瘤死亡率第三位[3-4]。由于 IBD發病人群日漸年輕化，發病年齡向20-30歲人群聚集，因此阻止IBD，尤 其是潰瘍性結腸炎的癌變是結腸癌發病率降低的重要措施，是提高患病人群生 活質量的重要手段。目前，針對性的預防措施包括①定期結腸鏡檢，早期診 斷治療；②進行預防性結腸切除術；③試用非甾體抗炎藥控制炎癥，以期預防 結腸癌發生[5]。這些方法或缺乏針對性，或具有傷害性、或長期使用具有嚴重 的副作用；因此，闡明炎癥性腸病尤其是潰瘍性結腸炎癌變的關鍵環節對炎癥 性腸病癌變的預防具有十分重要的意義。
一般認為，膳食中適當攝入新鮮蔬菜、水果等可降低腫瘤的發生率[6]。然 而膳食纖維是否可以阻止炎癥性腸病尤其是潰瘍性結腸炎向結腸癌轉變，尚無 研究報道。更無阻止炎癥性腸病尤其是潰瘍性結腸炎向結腸癌轉變的藥物用于 臨床。目前尚未檢索到與本項目類似的報道。 參考文獻 Delaunoit T， Limburg PJ， Goldberg函，Lymp JF， Loft:u,s EV Jr. Colorectal cancer prognosis among patients with inflammatory bowel disease. Clin GastroenterolH印atol 2006; 4(3): 335-342 [2] Sung JJY, Lau JYW， Goh KL, Leung WK. Increasing incidence of colorectal cancer
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發明內容
本發明提出了富含半乳糖的改性多糖在制備阻止結腸炎癌變的藥物中的應 用，以填補預防炎癥性腸病尤其是潰瘍性結腸炎癌變藥物的空白。
本發明提供的技術方案是富含半乳糖的改性多糖在制備阻止結腸炎癌變 的藥物中的應用，該改性多糖包括改性天然膠或改性植物多糖。
所述改性天然膠的制備方法是將果膠、瓜兒膠、刺槐豆膠經過酶水解
(pH=4-5)，或堿(pH==9-10)與酸(pH=3-5)水解，或硼氫化鈉還原，或甲醇 皂化后，醇沉、透析、半乳糖苷酶酶解(pH=4-6， 37°C)，以暴露末端半乳糖， 經過醇沉、透析、濃縮、凍干獲得改性天然膠。采用凝膠色譜法或分子量截流 方法，獲得目的分子量(5000-50000Da)的含半乳糖的天然膠；
所述改性植物多糖的提取方法是將蘆薈、枸杞子、蘋果、大麥或大黃粉 碎，乙醇回流去除脂溶性成分后，水回流、乙醇沉淀、透析、濃縮、凍干，獲得 粗多糖；將粗多糖經過半乳糖苷酶酶解(pH=4-6， 37°C)，以暴露末端半乳糖， 經過醇沉、透析、濃縮、凍干獲得改性天然膠。采用凝膠色譜法或分子量截流 方法，獲得目的分子量(5000-2.00000Da)的含半乳糖的多糖。
本發明的特點本發明以galectin-3為藥物耙點，采用galectin-3的外源性 配體調節galectin-3及其配體的變化，阻止galectin-3與其配體的結合，從而調節galectin-3在炎癥性腸病尤其是潰瘍性結腸炎發生發展過程中對細胞增殖與 凋亡的影響，達到阻止炎癥性腸病尤其是潰瘍性結腸炎癌變的目的。此外源性 配體為富含半乳糖的多糖。
癌癥是一種可以預防的疾病，本發明的目的旨在提供一種阻止炎癥性腸病 尤其是漬瘍性結腸炎癌變的藥物，這種藥物是富含半乳糖的多糖，可影響炎癥 性腸病尤其是潰瘍性結腸炎發病中期和結腸癌高表達的半乳糖凝集素家族成員 galectin-3。本項目研究表明，在潰瘍性結腸炎向結腸癌轉變的過程中，galectin -3的核質比經歷了規律性地變化炎癥早期表達明顯下降，炎癥中期則明顯升 高；炎癥晚期、癌前病變到癌癥早期的表達明顯下降；結腸癌轉移時，galectin -3表達再次明顯增高。依據galectin -3可以識別半乳糖并結合的特點，我們采 用富含半乳糖多糖預防IBD的癌變，根據galectin -3的變化規律設計了藥物的 給藥時間，在galectin -3高表達的結腸炎癥中期給予IBD大鼠富含半乳糖多糖 后可以阻止卯％以上的結腸癌發生。
圖1是果膠結構模式圖； 圖2是瓜爾膠結構模式圖。
具體實施例方式
下面將結合實施例對本發明做詳細的說明。 本發明涉及的多糖原料說明如下
果膠參見圖l， 一種多糖膠，由半乳糖醛酸聚合構成
瓜爾膠參見圖2， 一種非離子多糖膠主要由半乳糖和甘露糖聚合而成； 屬于天然半乳甘露聚糖，它以聚甘露糖為分子主鏈，D-吡喃甘露糖單元之間以 P (1-4)鍵連接。而D--吡喃半乳糖則以a (l-6)鍵連接在聚甘露糖主鏈上。瓜爾
膠中甘露糖與半乳糖單元之摩爾比為2:i。
刺槐豆膠為無色、無味的植物胚乳精制多糖，主要含有甘露糖及半乳搪。 目前已知果膠、瓜兒膠、刺槐豆膠等含有半乳糖單糖的天然膠具有調節腸道菌 群、降血脂的作用，但該作用也未在制藥領域中得到應用。
蘆薈多糖、枸杞子多糖、蘋果多糖、大棗多糖及大黃多糖富含半乳糖，具有明顯的免疫調節作用，該作用尚未在制藥領域中得到應用。 上面所說的富含半乳糖的改性多糖的制備方法如下
所述的改性天然膠的制備方法是將含有半乳糖的天然膠經過多糖酶
(pH=4-5)水解后，或者經過堿(pH二-9-10)與酸(pH=3-5)水解后，或者通 過甲醇皂化(1NNaOH，24小時)，或者通過硼氫化鈉還原后，醇沉、透析、濃 縮、凍干，獲得改性天然膠。改性天然膠經過半乳糖苷酶水解(PH=4-6， 37°C)， 醇沉、透析、濃縮、凍干。凝膠層析或分子量截流獲得目的分子量(5000-50000Da) 的含有半乳糖的改性天然膠。其具體的制備方法通過實施例1 4進行詳細地說 明。
所述的改性植物多糖的提取方式為:將蘆薈、枸杞子、蘋果、大棗、大黃等 粉碎，乙醇回流去除脂溶性成分后，熱水提取、乙醇沉淀、透析、濃縮、凍干， 獲得粗多糖。粗多糖經過半乳糖苷酶水解(PH=4-6， 37°C)，暴露末端半乳糖， 經過醇沉、透析、濃縮、凍干，獲得具有Galectin-3親和力的多糖，然后采用 凝膠層析或分子量截流等方法分離純化得到5000-200000Da多糖組分。其具體 的制備方法通過實施例5 8進行詳細地說明。
本發明還提供了富含半乳糖的改性多糖在制備阻止炎癥性腸病癌變，特別 是結腸炎的藥物中的應用在1， 2-二甲肼(DMH)或氧化偶氮甲烷(AOM) 或右旋葡聚糖酐鈉(DSS)或l， 2-二甲肼(DMH)合用右旋葡聚糖酐鈉(DSS) 或氧化偶氮甲垸(AOM)合用右旋葡聚糖酐鈉(DSS)誘導小鼠從潰瘍性結腸炎 向結腸癌發展的過程中，將上述天然膠按照50mg/kg， 100mg/kg， 200mg/kg， 植物多糖按照100mg/kg， 200mg/kg， 400mg/kg在galectin-3表達變化的結腸炎 癥中期給予小鼠，在模型的第20周，處死一半小鼠，進行大體觀察和結腸組織 病理觀察。結果表明，對照組20只給予DMH+DSS的小鼠在第20周全部18-10 只小鼠發展成為結腸腺癌，而每組20只給予DMH+DSS+多糖的小鼠1-6只發 展為結腸腺癌，其余小鼠全部被控制在炎癥狀態。至第40周處死剩余小鼠，結 果表明，給予多糖用于預防潰瘍性結腸炎癌變小鼠結腸仍然處于炎癥狀態，未 見到腫瘤生成。
下面將描述本發明所涉及富含半乳糖的改性多糖的制備方法，以及該藥物的特性以及對1， 2-二甲肼(DMH)或氧化偶氮甲烷(AOM)或右旋葡聚糖酐鈉(DSS) 或1， 2-二甲肼(DMH)合用右旋葡聚糖酐鈉(DSS)或氧化偶氮甲垸(A0M)合 用右旋葡聚糖酐鈉(DSS)誘導的小鼠潰瘍性結腸炎相關結腸癌的藥理實驗結果 來說明該藥物在制藥領域中的新用途，但本發明并不局限于下述實施例。
所述的臨床給藥時間是通過監測galectin -3在潰瘍性結腸炎病程中高表達 的時間點。
實施例1
取100g果膠，微濕潤后，與果膠酶37"孵育4小時(pH=4-6)，調pH值 至中性，過夜，采用HPLC檢測酯化度，醇沉、透析、測定分子量，凝膠層析 或分子量截流，獲得分子量5000-50000Da的果膠。
實施例2
取100g瓜兒膠，微濕潤后，回流4小時(pH=9-10)，調pH值至中性，過 夜，再回流2小時(pH=3-4)，醇沉、透析、濃縮、凍干。采用半乳糖苷酶水 解(pH二4-6， 37°C),醇沉、透析、濃縮、凍干。凝膠層析或分子量截流獲得目 的分子量(5000-50000Da)的瓜兒膠。
實施例3
取100g刺槐豆膠，微濕潤后，用甲醇回流(1NNaOH， 24小時)，調pH 值至中性，過夜，醇沉、透析、濃縮、凍干。采用半乳糖苷酶水解(pH:=4-6， 37°C)，醇沉、透析、濃縮、凍干。凝膠層析或分子量截流獲得目的分子量 (5000-50000Da)的刺槐豆膠。
實施例4
將2g果膠分批加入400mL 0.5M的HCl/咪唑溶液(pH=7)，強力攪拌至溶 液各相均勻，稱取10gNaBH4少量多次加入到上述溶液中，室溫下強力攪拌4h， 加入25 mL乙酸終止反應，繼續攪拌30min后加入足量無水乙醇出現膠狀沉淀， 過濾，60。/。乙醇和5Q/oHCl洗滌沉淀2次，60%乙醇洗滌沉淀2次，足量無水乙 醇再次沉淀，減壓抽濾至干，6(TC烘箱干燥過夜，獲得改性果膠。然后采用半 乳糖苷酶水解(pH=4-6， 3'rC)，醇沉、透析、濃縮、凍干。凝膠層析或分子量 截流獲得目的分子量(5000-50000Da)的果膠。實施例5
取100g蘆薈粗多糖，用半乳糖苷酶水解以暴露末端半乳糖(pH=4.5-6.5， 37°C)。改構多糖經過醇沉、透析、濃縮、獲得凍干粉。采用凝膠層析分離純化 或分子量截流而得到5000-200000Da多糖組分。
實施例6
取100g枸杞子粗多糖，用半乳糖苷酶水解以暴露末端半乳糖(pH二4.5-6.5， 37°C)。改構多糖經過醇沉、透析、濃縮、獲得凍干粉。采用凝膠層析分離純化 或分子量截流而得到5000-200000Da多糖組分。
實施例7
取100g蘋果粗多糖，用半乳糖苷酶水解以暴露末端半乳糖(pH=4.5-6.5， 37°C)。改構多糖經過醇沉、透析、濃縮、獲得凍干粉。采用凝膠層析分離純化 或分子量截流而得到5000-200000Da多糖組分。
實施例8
取100g大棗粗多糖，用半乳糖苷酶水解以暴露末端半乳糖(pH=4.5-6.5, 37°C)。改構多糖經過醇沉、透析、濃縮、獲得凍干粉。采用凝膠層析分離純化 或分子量截流而得到5000-200000Da多糖組分。
實施例9
取140只ICR小鼠，分為2次試驗，每次試驗各70只，分別為模型組(10 只)、改性果膠3個劑量治療組(各20只)。采用l， 2-二甲肼(DMH)和右旋葡 聚糖酐鈉(DSS)誘導小鼠結腸癌模型，檢測galectin-3的核質表達變化，在 galectin-3高表達時給予改性果膠50~200mg/kg預防結腸癌的形成。小鼠在SPF 標準的動物試驗室詞養。采用雙盲法，分別在模型復制的第20周、第40周各 處死一半小鼠，觀察小鼠的結腸腫瘤形成情況。試驗重復2次。結果表明，模 型組小鼠在第20周，2次試驗的18只小鼠形成了結腸癌，而給予果膠干預的 小鼠在第20周僅見到3只小鼠出現腫瘤，繼續飼養20周，仍然未見到其余小 鼠結腸癌的形成。說明改性果膠能夠非常明顯地抑制結腸炎相關的癌癥形成。
實施例10
取140只ICR小鼠，分為2次試驗，每次試驗各70只，分別為模型組(10只)、酶解果膠3個劑量治療組(各20只)。連續給予2%右旋葡聚糖酐鈉(DSS) 5天，停藥2天，為一個循環，共進行4個循環，誘導小鼠結腸癌模型，檢測 galectin-3的核質表達變化，在galectin-3高表達時給予酶解果膠50~200mg/kg 預防結腸癌的形成。小鼠在SPF標準的動物試驗室飼養。采用雙盲法，分別在 模型復制的第20周、第40周各處死一半小鼠，觀察小鼠的結腸腫瘤形成情況。 試驗重復2次。結果表明，模型組小鼠在第20周，2次試驗的20只小鼠形成 了結腸癌，而給予酶解果膠干預的小鼠在第20周僅見到2只小鼠出現腫瘤，繼 續飼養20周，仍然未見到其余小鼠結腸癌的形成。說明酶解果膠能夠非常明顯 地抑制結腸炎相關的癌癥形成。 實施例11
取140只ICR小鼠，分為2次試驗，每次試驗各70只，分別為模型組(IO 只)、皂化果膠3個劑量治療組(各20只)。采用氧化偶氮甲烷(AOM)腹腔 注射15mg/l(g誘導小鼠結腸癌模型，檢測galectin-3的核質表達變化，在 galectin-3高表達時給予皂化果膠50 200mg/kg預防結腸癌的形成。小鼠在SPF 標準的動物試驗室詞養。采用雙盲法，分別在模型復制的第20周、第40周各 處死一半小鼠，觀察小鼠的結腸腫瘤形成情況。試驗重復2次。結果表明，模 型組小鼠在第20周，2次試驗的19只小鼠形成了結腸癌，而給予皂化果膠干 預的小鼠在第20周僅見到5只小鼠出現腫瘤，繼續飼養20周，仍然未見到其 余小鼠結腸癌的形成。說明皂化果膠能夠非常明顯地抑制結腸炎癥相關的癌癥 形成。
實施例12
取140只ICR小鼠，分為2次試驗，每次試驗各70只，分別為模型組(IO 只)、水解瓜兒膠3個劑量治療組(各20只)。采用1， 2-二甲肼(DMH)和右旋 葡聚糖酐鈉(DSS)誘導小鼠結腸癌模型，檢測galectiii-3的核質表達變化，在 galectin-3高表達時給予水解瓜兒膠50~200mg/kg預防結腸癌的形成。小鼠在 SPF標準的動物試驗室飼養。采用雙盲法，分別在模型復制的第20周、第40 周各處死一半小鼠，觀察小鼠的結腸腫瘤形成情況。試驗重復2次。結果表明， 模型組小鼠在第20周，2次試驗的18只小鼠形成了結腸癌，而給予水解瓜兒膠干預的小鼠在第20周僅見到4只小鼠出現腫瘤，繼續詞養20周，仍然未見
到其余小鼠結腸癌的形成。說明水解瓜兒膠能夠非常明顯地抑制結腸炎相關的
癌癥形成。
實施例13
取140只ICR小鼠，分為2次試驗，每次試驗各70只，分別為模型組UO 只)、酶解瓜兒膠3個劑量治療組(各20只)。連續給予P/。右旋葡聚糖酐鈉(DSS) 5天，停藥2天，為一個循環，共進行4個循環，誘導小鼠結腸癌模型誘導小 鼠結腸癌模型，檢測galectin-3的核質表達變化，在galectin-3高表達時給予酶 解瓜兒膠50 200mg/kg預防結腸癌的形成。小鼠在SPF標準的動物試驗室飼養。 采用雙盲法，分別在模型復制的第20周、第40周各處死一半小鼠，觀察小鼠 的結腸腫瘤形成情況。試驗重復2次。結果表明，模型組小鼠在第20周，2次 試驗的20只小鼠形成了結腸癌，而給予酶解瓜兒膠干預的小鼠在第20周僅見 到5只小鼠出現腫瘤，繼續詞養20周，仍然未見到其余小鼠結腸癌的形成。說 明酶解瓜兒膠能夠非常明顯地抑制結腸炎相關的癌癥形成。
實施例14
取140只ICR小鼠，分為2次試驗，每次試驗各70只，分別為模型組(IO 只)、皂化瓜兒膠3個劑量治療組(各20只)。采用氧化偶氮甲垸(AOM)腹腔 注射15mg/kg誘導小鼠結腸癌模型，檢測galectin-3的核質表達變化，在 galectin-3高表達時給予皂化瓜兒膠50 200mg/kg預防結腸癌的形成。小鼠在 SPF標準的動物試驗室詞養。采用雙盲法，分別在模型復制的第20周、第40 周各處死一半小鼠，觀察小鼠的結腸腫瘤形成情況。試驗重復2次。結果表明， 模型組小鼠在第20周，2次試驗的20只小鼠形成了結腸癌，而給予皂化瓜兒 膠干預的小鼠在第20周僅見到7只小鼠出現腫瘤，繼續飼養20周，仍然未見 到其余小鼠結腸癌的形成。說明皂化瓜兒膠能夠非常明顯地抑制結腸炎相關的 癌癥形成。
實施例15
取140只ICR小鼠，分為2次試驗，每次試驗各70只，分別為模型組(10 只)、酶解刺槐豆膠3個劑量治療組(各20只)。采用1,2-二甲肼(固H)和右旋葡聚糖酐鈉(DSS)誘導小鼠結腸癌模型，檢測galectin-3的核質表達變化， 在galectin-3高表達時給予酶解刺槐豆膠50~200mg/kg預防結腸癌的形成。小 鼠在SPF標準的動物試驗室詞養。采用雙盲法，分別在模型復制的第20周、 第40周各處死一半小鼠，觀察小鼠的結腸腫瘤形成情況。試驗重復2次。結果 表明，模型組小鼠在第20周，2次試驗的18只小鼠形成了結腸癌，而給予酶 解剌槐豆膠干預的小鼠在第20周僅見到5只小鼠出現腫瘤，繼續飼養20周， 仍然未見到其余小鼠結腸癌的形成。說明酶解刺槐豆膠能夠非常明顯地抑制結 腸炎相關的癌癥形成。 實施例16
取140只ICR小鼠，分為2次試驗，每次試驗各70只，分別為模型組(IO 只)、水解剌槐豆膠3個劑量治療組(各20只)。連續給予1%右旋葡聚糖酐鈉 (DSS)5天，停藥2天，為一個循環，共進行4個循環，誘導小鼠結腸癌模型 誘導小鼠結腸癌模型，檢測galectin-3的核質表達變化，在galectin-3高表達時 給予水解刺槐豆膠50 200mg/kg預防結腸癌的形成。小鼠在SPF標準的動物試 驗室飼養。采用雙盲法，分別在模型復制的第20周、第40周各處死一半小鼠， 觀察小鼠的結腸腫瘤形成情況。試驗重復2次。結果表明，模型組小鼠在第20 周，2次試驗的20只小鼠形成了結腸癌，而給予水解刺槐豆膠干預的小鼠在第 2.0周僅見到4只小鼠出現腫瘤，繼續飼養20周，仍然未見到其余小鼠結腸癌 的形成。說明水解刺槐豆膠能夠非常明顯地抑制結腸炎相關的癌癥形成。
實施例17
取140只ICR小鼠，分為2次試驗，每次試驗各70只，分別為模型組(10 只)、皂化刺槐豆膠3個劑量治療組(各20只)。采用氧化偶氮甲烷(AOM)腹 腔注射15mg/kg誘導小鼠結腸癌模型，檢測galectin-3的核質表達變化，在 galectin-3高表達時給予皂化刺槐豆膠50~200mg/kg預防結腸癌的形成。小鼠在 SPF標準的動物試驗室飼養。采用雙盲法，分別在模型復制的第20周、第40 周各處死一半小鼠，觀察小鼠的結腸腫瘤形成情況。試驗重復2次。結果表明， 模型組小鼠在第20周，2次試驗的20只小鼠形成了結腸癌，而給予皂化刺槐 豆膠干預的小鼠在第20周僅見到9只小鼠出現腫瘤，繼續飼養20周，仍然未見到其余小鼠結腸癌的形成。說明皂化剌槐豆膠能夠非常明顯地抑制結腸炎相 關的癌癥形成。 實施例18
取140只ICR小鼠，分為2次試驗，每次試驗各70只，分別為模型組(10 只)、改性枸杞子多糖3個劑量治療組(各20只)。采用l， 2-二甲肼(DMH)和 右旋葡聚糖酐鈉(DSS)誘導小鼠結腸癌模型，檢測galectin-3的核質表達變化， 在galectin-3高表達時給予改性枸杞子多糖100 400mg/kg預防結腸癌的形成。 小鼠在SPF標準的動物試驗室飼養。采用雙盲法，分別在模型復制的第20周、 第40周各處死一半小鼠，觀察小鼠的結腸腫瘤形成情況。試驗重復2次。結果 表明，模型組小鼠在第20周，2次試驗的18只小鼠形成了結腸癌，而給予改 性枸杞子多糖干預的小鼠在第20周僅見到5只小鼠出現腫瘤，繼續飼養20周， 仍然未見到其余小鼠結腸癌的形成。說明改性枸杞子多糖能夠非常明顯地抑制 結腸炎相關的癌癥形成。
實施例19
取140只ICR小鼠，分為2次試驗，每次試驗各70只，分別為模型組(10 只)、改性枸杞子多糖3個劑量治療組(各20只)。連續給予1%右旋葡聚糖酐 鈉(DSS) 5天，停藥2天，為一個循環，共進行4個循環，誘導小鼠結腸癌模 型誘導小鼠結腸癌模型，檢測galectin-3的核質表達變化，在galectin-3高表達 時給予改性枸杞子多糖100 400mg/kg預防結腸癌的形成。小鼠在SPF標準的 動物試驗室飼養。采用雙盲法，分別在模型復制的第20周、第40周各處死一 半小鼠，觀察小鼠的結腸腫瘤形成情況。試驗重復2次。結果表明，模型組小 鼠在第2'0周，2次試驗的20只小鼠形成了結腸癌，而給予改性枸杞子多糖干 預的小鼠在第20周僅見到4只小鼠出現腫瘤，繼續飼養20周，仍然未見到其 余小鼠結腸癌的形成。說明改性枸杞子多糖能夠非常明顯地抑制結腸炎相關的 癌癥形成。
實施例20
取140只ICR小鼠，分為2次試驗，每次試驗各70只，分別為模型組(IO 只)、改性枸杞子多糖3個劑量治療組(各20只)。采用采用氧化偶氮甲烷(AOM)腹腔注射15mg/kg誘導小鼠結腸癌模型，檢測galectin-3的核質表達變化，在 galectin-3高表達時給予改性枸杞子多糖100 400mg/kg預防結腸癌的形成。小 鼠在SPF標準的動物試驗室飼養。采用雙盲法，分別在模型復制的第20周、 第40周各處死一半小鼠，觀察小鼠的結腸腫瘤形成情況。試驗重復2次。結果 表明，模型組小鼠在第20周，2次試驗的20只小鼠形成了結腸癌，而給予改 性枸杞子多糖千預的小鼠在第20周僅見到7只小鼠出現腫瘤，繼續飼養20周， 仍然未見到其余小鼠結腸癌的形成。說明改性枸杞子多糖能夠非常明顯地抑制 結腸炎相關的癌癥形成。 實施例21
取140只ICR小鼠，分為2次試驗，每次試驗各70只，分別為模型組(IO 只)、改性蘆薈多糖3個劑量治療組(各20只)。采用1， 2-二甲肼(DMH)和右 旋葡聚糖酐鈉(DSS)誘導小鼠結腸癌模型，檢測galectin-3的核質表達變化， 在galectin-3高表達時給予改性戸薈多糖100~400mg/kg預防結腸癌的形成。小 鼠在SPF標準的動物試驗室飼養。采用雙盲法，分別在模型復制的第20周、 第40周各處死一半小鼠，觀察小鼠的結腸腫瘤形成情況。試驗重復2次。結果 表明，模型組小鼠在第20周，2次試驗的18只小鼠形成了結腸癌，而給予改 性蘆薈多糖干預的小鼠在第20周僅見到5只小鼠出現腫瘤，繼續飼養20周， 仍然未見到其余小鼠結腸癌的形成。說明改性蘆薈多糖能夠非常明顯地抑制結 腸炎相關的癌癥形成。
實施例22
取140只ICR小鼠，分為2次試驗，每次試驗各70只，分別為模型組(IO 只)、改性蘆薈多糖3個劑量治療組(各20只)。連續給予1%右旋葡聚糖酐鈉 (DSS) 5天，停藥2天，為一個循環，共進行4個循環，誘導小鼠結腸癌模型 誘導小鼠結腸癌模型，檢測galectin-3的核質表達變化，在galectin-3高表達時 給予改性蘆薈多糖100~400mg/kg預防結腸癌的形成。小鼠在SPF標準的動物 試驗室詞養。采用雙盲法，分別在模型復制的第20周、第40周各處死一半小 鼠，觀察小鼠的結腸腫瘤形成情況。試驗重復2次。結果表明，模型組小鼠在 第20周，2次試驗的20只小鼠形成了結腸癌，而給予改性蘆薈多糖干預的小鼠在第20周僅見到4只小鼠出現腫瘤，繼續詞養20周，仍然未見到其余小鼠
結腸癌的形成。說明改性盧薈多糖能夠非常明顯地抑制結腸炎相關的癌癥形成。
實施例23
取140只ICR小鼠，分為2次試驗，每次試驗各70只，分別為模型組(10 只)、改性戶薈多糖3個劑量治療組(各20只)。采用采用氧化偶氮甲烷(AOM) 腹腔注射15mg/kg誘導小鼠結腸癌模型，檢測galectin-3的核質表達變化，在 galectin-3高表達時給予改性蘆薈多糖100 400mg/kg預防結腸癌的形成。小鼠 在SPF標準的動物試驗室飼養。采用雙盲法，分別在模型復制的第20周、第 40周各處死一半小鼠，觀察小鼠的結腸腫瘤形成情況。試驗重復2次。結果表 明，模型組小鼠在第20周，2次試驗的19只小鼠形成了結腸癌，而給予改性 蘆薈多糖干預的小鼠在第20周僅見到7只小鼠出現腫瘤，繼續飼養20周，仍 然未見到其余小鼠結腸癌的形成。說明改性蘆薈多糖能夠非常明顯地抑制結腸 炎相關的癌癥形成。
實施例24
取140只ICR小鼠，分為2次試驗，每次試驗各70只，分別為模型組(10 只)、改性大黃多糖3個劑量治療組(各20只)。采用l， 2-二甲肼(DMH)和右 旋葡聚糖酐鈉(DSS)誘導小鼠結腸癌模型，檢測galectin-3的核質表達變化， 在galectin-3高表達時給予改性大黃多糖100~400mg/kg預防結腸癌的形成。小 鼠在SPF標準的動物試驗室飼養。采用雙盲法，分別在模型復制的第20周、 第40周各處死一半小鼠，觀察小鼠的結腸腫瘤形成情況。試驗重復2次。結果 表明，模型組小鼠在第20周，2次試驗的18只小鼠形成了結腸癌，而給予改 性大黃多糖干預的小鼠在第20周僅見到5只小鼠出現腫瘤，繼續飼養20周， 仍然未見到其余小鼠結腸癌的形成。說明改性大黃多糖能夠非常明顯地抑制結 腸炎相關的癌癥形成。
實施例25
取140只ICR小鼠，分為2次試驗，每次試驗各70只，分別為模型組(IO 只)、改性大黃多糖3個劑量治療組(各20只)。連續給予1°/。右旋葡聚糖酐鈉 (DSS) 5天，停藥2天，為一個循環，共進行4個循環，誘導小鼠結腸癌模型誘導小鼠結腸癌模型，檢測galectin-3的核質表達變化，在galectin-3高表達時 給予改性大黃多糖100~400mg/kg預防結腸癌的形成。小鼠在SPF標準的動物 試驗室詞養。采用雙盲法，分別在模型復制的第20周、第40周各處死一半小 鼠，觀察小鼠的結腸腫瘤形成情況。試驗重復2次。結果表明，模型組小鼠在 第20周，2次試驗的20只小鼠形成了結腸癌，而給予改性大黃多糖干預的小 鼠在第20周僅見到6只小鼠出現腫瘤，繼續詞養20周，仍然未見到其余小鼠 結腸癌的形成。說明改性大黃多糖能夠非常明顯地抑制結腸炎相關的癌癥形成。 實施例26
取140只ICR小鼠，分為2次試驗，每次試驗各70只，分別為模型組(10 只)、改性大黃多糖3個劑量治療組(各20只)。采用采用氧化偶氮甲烷(AOM) 腹腔注射15mg/kg誘導小鼠結腸癌模型，檢測galectin-3的核質表達變化，在 galectin-3高表達時給予改性大黃多糖100 400mg/kg預防結腸癌的形成。小鼠 在SPF標準的動物試驗室飼養。采用雙盲法，分別在模型復制的第20周、第 40周各處死一半小鼠，觀察小鼠的結腸腫瘤形成情況。試驗重復2次。結果表 明，模型組小鼠在第20周，2次試驗的18只小鼠形成了結腸癌，而給予改性 大黃多糖干預的小鼠在第20周僅見到8只小鼠出現腫瘤，繼續飼養20周，仍 然未見到其余小鼠結腸癌的形成。說明改性大黃多糖能夠非常明顯地抑制結腸 炎相關的癌癥形成。
實施例27
取140只ICR小鼠，分為2次試驗，每次試驗各70只，分別為模型組(IO 只)、改性蘋果多糖3個劑量治療組(各20只)。采用l， 2-二甲肼(DMH)和右 旋葡聚糖酐鈉(DSS)誘導小鼠結腸癌模型，檢測galectiri-3的核質表達變化， 在galectin-3高表達時給予改性蘋果多糖100 400mg/kg預防結腸癌的形成。小 鼠在SPF標準的動物試驗室飼養。采用雙盲法，分別在模型復制的第20周、 第40周各處死一半小鼠，觀察小鼠的結腸腫瘤形成情況。試驗重復2次。結果 表明，模型組小鼠在第20周，2次試驗的18只小鼠形成了結腸癌，而給予改 性蘋果多糖干預的小鼠在第20周僅見到3只小鼠出現腫瘤，繼續飼養20周， 仍然未見到其余小鼠結腸癌的形成。說明改性蘋果多糖能夠非常明顯地抑制結腸炎相關的癌癥形成。
實施例28
取140只ICR小鼠，分為2次試驗，每次試驗各70只，分別為模型組(IO 只)、改性蘋果多糖3個劑量治療組(各20只)。連續給予1%右旋葡聚糖酐鈉 (DSS)5天，停藥2天，為一個循環，共進行4個循環，誘導小鼠結腸癌模型 誘導小鼠結腸癌模型，檢測galectin-3的核質表達變化，在galectin-3高表達時 給予改性蘋果多糖100~400mg/kg預防結腸癌的形成。小鼠在SPF標準的動物 試驗室詞養。采用雙盲法，分別在模型復制的第20周、第40周各處死一半小 鼠，觀察小鼠的結腸腫瘤形成情況。試驗重復2次。結果表明，模型組小鼠在 第20周，2次試驗的20只小鼠形成了結腸癌，而給予改性蘋果多糖干預的小 鼠在第20周僅見到6只小鼠出現腫瘤，繼續詞養20周，仍然未見到其余小鼠 結腸癌的形成。說明改性蘋果多糖能夠非常明顯地抑制結腸炎相關的癌癥形成。
實施例29
取140只ICR小鼠，分為2次試驗，每次試驗各70只，分別為模型組(IO 只)、改性蘋果多糖3個劑量治療組(各20只)。采用采用氧化偶氮甲烷(AOM) 腹腔注射15mg/kg誘導小鼠結腸癌模型，檢測galectin-3的核質表達變化，在 galectin-3高表達時給予改性蘋果多糖100 400mg/kg預防結腸癌的形成。小鼠 在SPF標準的動物試驗室飼養。采用雙盲法，分別在模型復制的第20周、第 40周各處死一半小鼠，觀察小鼠的結腸腫瘤形成情況。試驗重復2次。結果表 明，模型組小鼠在第20周，2次試驗的18只小鼠形成了結腸癌，而給予改性 蘋果多糖干預的小鼠在第20周僅見到8只小鼠出現腫瘤，繼續飼養20周，仍 然未見到其余小鼠結腸癌的形成。說明改性蘋果多糖能夠非常明顯地抑制結腸 炎相關的癌癥形成。
本發明不僅限于說明書中所列舉的實施例，而且還包括未羅列的但依據本 發明思路的內容。本發明的藥物劑型可以是片劑、膠囊劑，供口服。
權利要求
1、富含半乳糖的改性多糖在制備阻止結腸炎癌變的藥物中的應用，改性多糖包括改性天然膠或改性植物多糖。
2、 如權利要求1所述的富含半乳糖的改性多糖在制備阻止結腸炎癌變的藥物中的應用，其特征在于所述改性天然膠的制備方法是將果膠、瓜兒膠、刺槐豆膠經過酶水解(pH二4-5)，或堿(pH二9-10)與酸(pH:3-5)水解，或硼氫 化鈉還原，或甲醇皂化后，醇沉、透析、濃縮、凍干；采用半乳糖苷酶水解(p^4-6， 37°C)，醇沉、透析、濃縮、凍干。
3、 如權利要求1或2所述的富含半乳糖的改性多糖在制備阻止結腸炎癌變 的藥物中的應用，其特征在于所述改性植物多糖的制備方法是從蘋果、聲薈、 枸杞子、大棗或大黃獲得的粗多糖，經過半乳糖苷酶水解以暴露末端半乳糖(pH=4.5-6.5， 37°C)，改構多糖經過醇沉、透析、濃縮、獲得凍干粉。
全文摘要
本發明涉及富含半乳糖的多糖在藥物制備中的應用，具體涉及富含半乳糖的改性多糖在制備阻止結腸炎癌變的藥物中的應用。本發明為填補預防炎癥性腸病尤其是潰瘍性結腸炎癌變藥物的空白，現提供的技術方案是富含半乳糖的改性多糖在制備阻止結腸炎癌變的藥物中的應用，該改性多糖包括改性天然膠或改性植物多糖。本發明以galectin-3為藥物靶點，采用galectin-3的外源性配體調節galectin-3及其配體的變化，阻止galectin-3與其配體的結合，從而調節galectin-3在炎癥性腸病尤其是潰瘍性結腸炎發生發展過程中對細胞增殖與凋亡的影響，達到阻止炎癥性腸病尤其是潰瘍性結腸炎癌變的目的。
文檔編號A61K31/736GK101306013SQ20081015008
公開日2008年11月19日 申請日期2008年6月19日 優先權日2008年6月19日
發明者莉 劉, 陽 孫, 李宇華, 梅其炳 申請人:中國人民解放軍第四軍醫大學