專利名稱：：一種供注射用的抗腫瘤長循環靶向脂質體的制作方法
技術領域：
：本發明涉及一種供注射用的抗腫瘤長循環耙向脂質體藥物組合物，采用具有腫瘤部位靶向功能的多肽和親水性聚乙二醇(PEG)同時修飾的脂質體進行裝載，將二種藥物抗血管藥物與抗腫瘤藥物聯合輸送到腫瘤部位，通過兩種藥物不同的釋放速率和作用機理，增強腫瘤治療效果。
背景技術：
：惡性腫瘤一直是困擾人類的重要疾病，目前尚無治愈癌癥的方法。原發腫瘤的生長和轉移依賴于新生血管的生成(angiogenesis)。腫瘤既可通過腫瘤血管從宿主獲取營養和氧氣，又可通過腫瘤血管源源不斷地向宿主輸送轉移細胞，并在機體的其他部位繼續生長和誘導血管形成，導致腫瘤轉移。因此，腫瘤的血管系統已成為一個嶄新的、有希望的抗腫瘤治療耙點。人們已致力于開發和研究破壞或抑制血管生成，有效地阻止腫瘤生長和轉移的藥物，這類藥物稱為腫瘤血管生成抑制劑(tumorangiogenesiinhibitor,TAI)。TAI通過切斷腫瘤賴以生長和轉移的營養來源和遷移通道，具有許多優勢(l)治療發生時，血管形成已被啟動，故TAI治療具有良好的特異性。(2)血管內皮細胞暴露于血流中，藥物能直接發揮作用，故劑量小、療效高。(3)內皮細胞基因表達相對穩定，不易產生耐藥性。(4)腫瘤血管內皮細胞的增殖速度較正常血管內皮細胞快許多倍，故TAI對正常組織毒性小。對于惡性實體瘤的傳統療法為手術切除腫瘤后再用抗腫瘤藥物進行化療。大部分的化療藥物沒有選擇性，這些藥物在殺傷腫瘤細胞的同時，也會對正常的細胞產生殺傷作用，因此會產生嚴重的副作用，如阿霉素的心臟毒性作用等。將抗腫瘤藥物用脂質體進行包載后可以明顯延長其在體內循環的時間，有利于抗腫瘤藥物向腫瘤區蓄積，從而增加了抗癌藥物的治療指數，即增加療效，減少了毒副作用。目前已有阿霉素脂質體、柔紅霉素脂質體、紫杉醇脂質體等產品上市。親水性的聚乙二醇(PEG)修飾的長循環脂質體能夠逃避血漿中的調理素的調理從而避免了被巨噬細胞攝取(故也稱為隱性脂質體)，顯著延長了其在循環系統中的滯留時間，血藥濃度也明顯提高。長循環脂質體經增強滯留和滲透作用(EPR)可增加被包載藥物向腫瘤組織內的蓄積，從而提高了抗癌藥物傳遞的靶向性。目前已有阿霉素隱性脂質體上市(DOXIL⑧，CAELYX⑧)。長循環脂質體能夠延長藥物在體內的循環時間，增強抗腫瘤藥物向腫瘤組織內的蓄積，但并不意味著一定能夠提高抗腫瘤藥物的療效。其原因之一在于大部分抗腫瘤藥物的靶點中位于細胞內，如細胞核內的DNA，藥物必須克服細胞膜這一屏障進入到細胞內才能發揮作用。脂質體包封的藥物進入細胞內主要有三種途徑，即擴散，膜融合以及被腫瘤細胞吞噬。已有研究表明，PEG修飾可穩定脂質體，減少藥物的釋放(進而減少藥物擴散)，并在一定程度上阻礙脂質體的融合和吞噬，因此長循環脂質體盡管能夠增加腫瘤組織中的濃度，但療效卻不一定有所增加。因此提高脂質體與腫瘤相關細胞的作用就很重要了。目前用配體修飾的長循環脂質體巳成為提高抗癌藥物靶向性的重要手段。國內外有學者用葉酸、轉鐵蛋白和單克隆抗體等來修飾隱性脂質體，以增加藥物傳遞的靶向性，動物試驗證明能夠顯著提高抗癌藥物的療效，相關產品有的已進入臨床研究。腫瘤組織能迅速生長，與腫瘤血管源源不斷的供應養分是分不開的。如果能阻斷腫瘤血供，也就可達到間接殺死腫瘤細胞的目的。在實體瘤內血管生成作用產生的新生血管內皮細胞表達幾種正常血管內皮細胞不表達或低表達的蛋白，包括整合素integrin和特定的血管生成因子受體，因而利用能與這些蛋白有選擇性親和作用的分子就可使細胞毒藥物定向殺傷新生血管內皮細胞。Arap等人借助噬菌體顯示文庫的選擇作用，分離到幾種能特異的結合于腫瘤血管的肽，一種是包含Arg-Gly-Asp(RGD)序列的能選擇性結合于和ovi35integrin的肽，另一種是含有Asn-Gly-Arg(NGR)序列的能特異結合細胞粘著分子的肽。有研究表明將阿霉素doxorubicin于這兩種肽相連，在動物實驗中證實這兩種連接物在減少化療藥物毒性的同時，殺傷人乳癌細胞裸鼠移植物細胞的作用卻比單純的化療藥物加強了。由于新生血管與腫瘤密切相關，近年來新生血管己成為腫瘤治療的重要靶標。在腫瘤新生血管和很多腫瘤細胞表面，都有稱為整合素的特異性受體的高表達，整合素分子有各種各樣的配體，其中含RGD序列的多肽因其分子量小(無抗原性)和特異性高而備受關注。已有報道用RGD修飾長循環脂質體作為抗癌藥物的載體，其原理在于RGD肽能夠特異性地與整合素ov/33結合，提高載體的靶向性，并通過破壞腫瘤的新生血管來切斷腫瘤的營養和氧氣的供應。我們曾申請一項中國發明專利(200510063388.0)，涉及一種供注射用的載抗癌藥物的長循環脂質體，其特征在于脂質體同時用PEG鏈和含RGD序列的線性多肽或含RGD類似物的線性片段修飾，但只裝載單一的抗腫瘤藥物。研究表明，這種新型載體的確可以在一定程度上增加腫瘤細胞內藥物的濃度，提高抗腫瘤效果。同樣，利用NGR肽修飾脂質體來裝載抗腫瘤藥物也已有相關報道，并且研究結果證實該載體同樣可以5增強腫瘤靶向治療效果。但是，與此相關的研究文獻資料均顯示僅包載單一的抗腫瘤藥物，與本發明中所述同時裝載抗血管藥物與抗腫瘤藥物的藥物組合有顯著不同。另一方面，直接破壞腫瘤血管，也能夠高效殺滅惡性腫瘤細胞。如DMXAA、CA4、ZD6126等小分子能使血管破壞，血流減少，大范圍缺氧，誘導腫瘤細胞壞死。而且，小分子抗血管藥物與抗腫瘤藥物的相加或協同作用已在研究中已得到證實。如CA4與順鉑和環磷酰胺合用，腫瘤的抑瘤率是單獨使用化療時的10~500倍；與紫杉醇合用的抗腫瘤效果也增強；CA4P與5-FU和阿霉素合用也有良好的效果，還能夠增強腫瘤對熱療和放療的敏感性；ZD6126具有獨特的抗腫瘤血管生成的作用，可直接引起腫瘤中血管內皮細胞的損傷。ZD6126可明顯增強順鉑和紫杉醇的放療活性，有效的減弱合用藥物的神經毒性等；DMXAA(AS1404)是一種小分子血管破壞藥物。DMXAA可以增強順鉑、環孢素和紫杉醇的放療、熱療以及免疫療法的抗腫瘤效應；血管內皮生長因子受體的單克隆抗體(如DC101)與阿霉素合用也可以有效地抑制平滑肌肉瘤等的生長。角鯊胺(squalamine)是一種氨基甾醇類的血管生成抑制劑，在體外對腫瘤細胞無毒性，但可增加順鉑的抗腫瘤作用，明顯抑制腫瘤新生血管生成。然而，目前抗血管藥物與抗腫瘤藥物的聯合應用還存在一些問題。目前的聯合用藥方案通常是抗血管藥物頻繁給藥，同時抗腫瘤藥物單次大劑量給藥。可以預期的結果是抗血管藥物封閉腫瘤血管而使血液中的化療藥難以進入局部；由于血管封閉缺氧還會直接導致腫瘤細胞耐藥，因為腫瘤缺氧區域的細胞增殖速度降低，而且缺氧誘導因子-a上調，后者與抗凋亡蛋白Bcl-2和多藥耐藥的產生有關。事實上，已有報導兩種藥物在某些腫瘤模型中出現了拮抗效應。關于腫瘤缺氧對聯合用藥抗癌效果的影響已引起了人們的關注。基于上述背景，我們設計了一種全新的藥物輸送系統，同時裝載兩類不同作用機理的藥物(抗血管藥物與抗腫瘤藥物)，以EPR效應增加被動耙向作用，以受體介導增加主動靶向作用和藥物在腫瘤細胞的蓄積，兩藥物可同步到達腫瘤部位，抗血管藥物先釋放或兩藥物同時釋放，抗腫瘤藥物可以在腫瘤血管枬塌封閉之前進入腫瘤組織中，局部血管的關閉可使抗腫瘤藥物蓄積在腫瘤中而減少或不再向體循環中重新分布，抗血管藥物破壞腫瘤血管，發揮饑餓效應，而抗腫瘤藥物對腫瘤細胞的殺滅作用可減少缺氧區域，阻礙了缺氧誘導因子的產生，使得兩種藥物在靶部位發揮積極的協同作用。綜上所述，本發明通過被動蓄積和主動轉運實現對腫瘤組織的靶向給藥，通過兩種完全不同作用機理的藥物的聯合應用，明顯提高腫瘤治療的效果。
發明內容本發明涉及一種供注射用的抗腫瘤長循環靶向脂質體的藥物組合物，其組成為具有腫瘤部位靶向功能的多肽，聚乙二醇，脂質體，以及至少一種抗血管藥物和至少一種抗腫瘤藥物。其中具有腫瘤部位靶向功能的多肽，聚乙二醇，脂質體，以及藥物的比例為0.01%-10%:0.01%-20%:40%-99.88%:0.1%-30%。本發明將抗血管藥物和抗腫瘤藥物聯合包載在脂質體內，同時在脂質體表面用親水性的聚乙二醇(PEG)和具有腫瘤部位靶向功能的多肽進行修飾。所述具有腫瘤部位靶向功能的多肽為RGD肽及其類似物和NGR肽及其類似物。其中RGD肽是指，含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)連續序列的所有線性肽和環肽，包括含RGD序列的直鏈多肽片段，即三肽、四肽、五肽、六肽、七肽、八肽，以及含RGD序列的環狀多肽，即RGD-4C，c[RGDYK];RGD類似物片段包括含精氨酸-6-氨基已酸序列的線性或環狀片段。其中優選的為RGD-4C，c[RGDYK]和RGD線性三肽。其中NGR肽是指，含有天冬酰胺酸-甘氨酸-精氨酸(Asn-Gly-Arg，NGR)連續序列的線性肽和環肽，包括含NGR序列的直鏈多肽片段，如三肽、四肽、五肽、六肽、七肽、八肽，以及含NGR序列的環狀多肽。其中優選的為NGR線性三肽、CNGRC環肽、GGCNGRC環肽。本發明使用的聚乙二醇(PEG)其分子量為200-5000，優選的為2000-3000。本發明的組合物中多肽的連接方法，包括將含RGD或NGR序列的多肽末端氨基或羧基通過化學鍵合反應連接到PEG的末端。本發明的組合物中所述的脂質體是指，主要以磷脂和膽固醇為材料所制成的脂質雙分子層囊泡。磷脂包括大豆磷脂(SPC)，二月桂酰卵磷脂(DLPC)、二肉豆蔻酰卵磷脂(DMPC)、二棕櫚酰卵磷脂(DPPC)、二硬脂酰卵磷脂(DPPC)、二硬脂酰卵磷脂(DSPC)、l-肉豆蔻酰-2-棕櫚酰卵磷脂(MPPC)、l-棕櫚酰-2-肉豆蔻酰卵磷脂(PMPC)、1-棕櫚酰-2-硬脂酰卵磷脂(PSPC)、l-硬脂酰-2-棕櫚酰卵磷脂(SPPC)、蛋黃卵磷脂(EPC)、氫化豆磷脂(HSPC)、二油酰基卵磷脂(DOPC)、二月桂酰磷脂酰甘油(DLPG)、二棕櫚脂酰甘油(DPPG)、二硬脂酰磷脂酰甘油(DSPG)、二油酰磷脂酰甘油(DOPG)、二肉豆蔻酰磷脂酸(DMPA)、二棕櫚酰磷脂酸(DPPA)、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺(DMPE)、二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺(DPPE)、二肉豆蔻酰磷脂酰絲氨酸(DMPS)、二棕櫚酰磷脂酰二絲氨酸(DPPS)、腦磷脂酰絲氨酸(PS)、腦神經鞘磷脂(BSP)、二棕櫚酰神經鞘磷脂(DPSP)、二硬脂酰神經鞘磷脂(DSSP)、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)之一種或一種以上者。其中優選的為HSPC，EPC禾卩SPC。本發明的組合物中所述的脂質體主要以磷脂和膽固醇組成，其中磷脂與膽固醇的比例為0-1000:1，或1-1000:1，優選的為1-10:1。本發明的組合物中所述的脂質體同時裝載的藥物為抗血管藥物和抗腫瘤藥物。抗血管藥物包括新生血管抑制劑(angio-genesisinhibitors/AIs)和血管破壞藥物(vasculardisruptingagents/VDAs)。其中包括康貝司汀、ZD6126、范得它尼(ZD6474)、Iressa(ZD1839)、舒尼替尼(SU11248)、SU5416、a-2a干擾素(IFNa-2a)、白介素-12(IL-12)、煙曲霉素類似物(TNP-470)、阿曲生坦(ABT-627)、抗血管生成肽anginex、索拉非尼(BAY439006)、PTK787/ZK222584(vatalanib)、AG-013736、AG3340、沙利度胺(反應停Thalidomide)及其衍生物(雷尼度胺(CC-5013)和Actimid(CC-4047))、血管抑素(angiostatin)、內皮抑素(endostatin)、阿曲生坦(ABT-627)、Neovastat(AE941)、DMXAA，角鳘胺以及抗血管生成單抗(VEGFR-2單抗DCIOI，貝伐單抗(Bevacizumab)，EGFR單抗Erbitux)。其中優選的為康貝司汀(combretastatin,CA-4和CA-1)。抗腫瘤藥物包括鹽酸阿霉素、環磷酰胺、放線菌素、博來霉素、正定霉素，阿霉素、表阿霉素、絲裂霉素、甲氨喋呤、紫杉醇、多西紫杉醇、喜樹堿、羥基喜樹堿、柔紅霉素、5-氟脲嘧啶、卡鉑、卡氮芥(BCNU)、順鉑、龜臼乙叉甙、干擾素、長春堿、長春新堿、三本氧胺等。其中優選的為阿霉素、紫杉醇和多烯紫杉醇。本發明的組合物所述的脂質體中裝載的抗血管藥物和抗腫瘤藥物的比例為h1-100，優選的為1:1-10。本發明的藥物組合物可采用如下方法制備首先將磷脂(如DSPE)與PEG相連，形成PEG修飾的磷脂(DSPE-PEG)，再將PEG末端活化形成活化酯DSPE-PEG-BTC(或DSPE-PEG-NHS)，含RGD或NGR序列的多肽(以氺RGD承或承NGI^表示)或RGD類似物片段(以承RGDm承表示)與DSPE-PEG-BTC反應，形成DSPE-PEG-*RGD*、DSPE-PEG^NGR承等導向化合物，或DSPE-PEG-*RGDm*等導向化合物。例如取磷脂、膽固醇、DSPE-PEG、DSPE-PEG-*RGD*、DSPE-PEG-*NGR*，或DSPE-PEG^RGDmM乍為制備脂質體的原料，置圓底燒瓶中，加入有機溶劑溶解后，按脂質體制備方法，制備含RGD或NGR序列多肽或RGD類似物片段修飾的長循環脂質體；也可先制備長循環脂質體，將導向化合物插入到制備好的脂質體中形成長循環靶向脂質體。用擠壓過聚碳酯膜或者超聲等方法將脂質體的粒徑控制在lOOnm左右。抗血管藥物(如CA-4，DMXAA，ZD6126)與抗腫瘤藥物(如阿霉素，紫杉醇，多西紫杉醇)可在制備前直接加入或者通過其他方法裝載到已制備好的脂質體中。本發明的藥物組合物最優選的制備方法在實施例中。本發明的組合物優點本發明的組合物用含RGD或NGR序列的多肽與PEG同時修飾的脂質體作為載體，聯合包載抗血管藥物與抗腫瘤藥物，以便進一步提高抗腫瘤藥物的治療效果。本發明的組合物含RGD或NGR序列的多肽或RGD類似物片段，由于分子量小，因而抗原性較小，不易被免疫細胞所識別而導致消除加快；同時，含RGD或NGR序列的多肽與整合素受體的特異性結合作用較強，其靶向輸送作用已得到廣泛證實。本發明的PEG的長循環作用也己被證明切實有效的。本發明利用上述長循環靶向脂質體同時包載抗血管藥物與抗腫瘤藥物，其中PEG修飾可增加EPR效應，含RGD或NGR序列多肽或RGD類似物修飾可增加主動耙向效果并增加藥物在腫瘤組織的蓄積,而脂質體中同時裝載的兩種藥物可在腫瘤部位先后或同時釋放，抗血管藥物封閉血管，使抗腫瘤藥物在腫瘤部位滯留蓄積并發揮殺傷腫瘤細胞的作用。脂溶性的抗血管藥物以分子狀態分散在脂質體的脂質雙層中，可以釋放較快，而蒽環類抗腫瘤藥物由于在脂質體中產生不溶性沉降而釋放較慢，因此物理裝載的兩種藥物就可以方便地實現不同的釋放速度，先釋放的抗血管藥物可封閉血管，使抗腫瘤藥物多數還沒有釋放出來就被關在腫瘤組織中，避免了抗腫瘤藥物再分布進入體循環，因此特別有利于高效地殺傷腫瘤細胞。總而言之，本發明充分發揮了長循環靶向載體的特點，以及兩種不同作用機理的藥物特點，合理整合了載體和藥物的優勢，為這兩種藥物的聯合應用提供了新的思路，不同于現有抗血管藥物與抗腫瘤藥物治療方案(二種普通注射劑的應用)，或已有的關于含RGD多肽修飾的長循環脂質體作為單一抗腫瘤藥物的研究報導。本發明的藥物組合物制備方法生產簡單。只需要合成導向化合物，然后按常規方法制備脂質體，抗血管藥物與抗腫瘤藥物可按性質不同采用不同的加入方法，獲得的包封率都可以達到治療需要。特別是本發明不需要采用化學連接的方法來控制釋放，通過物理包載兩種不同類型的藥物，就可以方便地實現兩種藥物的順序釋放，簡單易行，有利于技術的產業化。通過研究已證實，本發明的藥物組合物可以在體外先后釋放抗血管藥物和抗腫瘤藥物，而且體內的抗腫瘤效果明顯提高。圖1、同時包載CA-4和阿霉素的長循環脂質體L[CD]中兩種藥物的釋放行為比較。圖2、同時包載CA-4和阿霉素的RGD修飾的長循環脂質體RGD-L[CD]中兩種藥物的釋放行為比較。圖3、各種制劑給藥開始后10天內瘤體大小變化情況(近交系雄性C57BL/6小鼠，黑色素瘤B16F10)。圖4、瘤體大小實物照片(近交系雄性C57BL/6小鼠，黑色素瘤B16F10)。具體的實施方式通過以下實施例進一步說明本發明，但不作為本發明的限制。實施例l、同時包載CA-4和阿霉素的RGD修飾的長循環脂質體RGD-L[CD]脂質體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:CA-4(25:1.28:6.24:2)(單位:mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-RGD及CA-4置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉蒸發成均勻的透明薄膜。加入123mM的硫酸銨溶液，水浴超聲至出現藍色乳光。再擠壓過200nm的聚碳酯膜5次。將制得的脂質體過SephadexG50柱，用PBS緩沖液(pH7.4)作為流動相洗脫，收集脂質體部分，將收集到的脂質體置40。C水浴中加熱，加入阿霉素粉末孵育20分鐘，并時時振搖，即得本品。實施例2、同時包載CA-4和阿霉素的RGD修飾的長循環脂質體RGD-L[CD]脂質體的處方分別為HSPC:CHOL:DSPE-PEG:CA-4(25:1.28:6.24:2)(單位mg)。精密稱取處方量的HSPC,CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-RGD及CA-4置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37t減壓旋轉蒸發成均勻的透明薄膜。加入123mM的硫酸銨溶液，水浴超聲至出現藍色乳光。再擠壓過200nm的聚碳酯膜5次。將制得的脂質體過SephadexG50柱，用PBS緩沖液(pH7.4)作為流動相洗脫，收集脂質體部分，將收集到的脂質體置40。C水浴中加熱，加入阿霉素粉末孵育20分鐘，并時時振搖，即得本品。實施例3、同時包載CA-4和阿霉素的RGD修飾的長循環脂質體RGD-L[CD]脂質體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:CA-4(25:1.28:6.24:2)(單位:mg)。精密稱取處方量的EPC,CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-RGD及CA-4置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉蒸發成均勻的透明薄膜。加入50mM的硫酸銨溶液，水浴超聲至出現藍色乳光。再擠壓過200nm的聚碳酯膜5次。將制得的脂質體過SephadexG50柱，用PBS緩沖液(pH7.4)作為流動相洗脫，收集脂質體部分，將收集到的脂質體置37。C水浴中加熱，加入阿霉素粉末孵育20分鐘，并時時振搖，即得本品。實施例4、同時包載CA-4和阿霉素的RGD類似物修飾的長循環脂質體RGDm-L[CD]脂質體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:CA-4(25:1.28:6.24:2)(單位:mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-RGDm(RGDm為RGD類似物)及CA-4置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉蒸發成均勻的透明薄膜。加入50mM的硫酸銨溶液，水浴超聲至出現藍色乳光。再擠壓過200nm的聚碳酯膜5次。將制得的脂質體過SephadexG50柱，用PBS緩沖液(pH7.4)作為流動相洗脫，收集脂質體部分，將收集到的脂質體置37。C水浴中加熱，加入阿霉素粉末孵育20分鐘，并時時振搖，即得本品。上述制得阿霉素脂質體的粒徑應控制在100nm左右。實施例5、同時包載CA-4和阿霉素的長循環脂質體L[CD〗脂質體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:CA-4(25:1.28:6.24:2)(單位:mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG及CA-4置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉蒸發成均勻的透明薄膜。加入50mM的硫酸銨溶液，水浴超聲至出現藍色乳光。再擠壓過200nm的聚碳酯膜5次。將制得的脂質體過SephadexG50柱，用PBS緩沖液(pH7.4)作為流動相洗脫，收集脂質體部分，將收集到的脂質體置37。C水浴中加熱，加入阿霉素粉末孵育20分鐘，并時時振搖，即得本品。上述制得阿霉素脂質體的粒徑應控制在100nm左右。實施例6、同時包載CA-4和阿霉素的RGD修飾的長循環脂質體RGD-L[CD]基本理化性質本發明制備的同時包載CA-4和阿霉素的長循環脂質體L[CD]和RGD-L[CD]基本理化性質比較見表l:<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>本發明制備的同時包載CA-4和阿霉素的RGD修飾的長循環脂質體L[CD]和RGD-L[CD]體外釋放行為見圖1和圖2:在生理鹽水中，兩種脂質體L[CD]和RGD-L[CD]釋藥情況如下CA-4在5小時內釋放50%左右，12小時釋放70%以上。而阿霉素48小時內釋放不超過20%。結果顯示在脂質體表面進行的RGD的修飾并未顯著影響脂質體中阿霉素的釋放行為。CA-4的釋放速率均顯著大于阿霉素的釋放速率，即兩種藥物的釋放具有時間上的先后順序。實施例7、同時包載CA-4和阿霉素的RGD修飾的長循環脂質體RGD-L[CD]腫瘤治療藥效學腫瘤細胞黑色素瘤B16F10細胞株購自協和醫科大學基礎細胞所，用RPMI1640培養液培養。動物近交系雄性C57BL/6小鼠在進行實驗研究之前在無菌恒溫條件下飼養一周(室溫保持22'C)。腫瘤移植黑色素瘤B16F10細胞在含10%小牛血清的RPMI-1640培養液中培養。臨用前，用胰酶將細胞消化，用RPMI1640培養液洗滌，800rpm離心5分鐘，去除上清液，重新將細胞混勻懸浮在RPMI1640(不含血清)中，將細胞濃度調整到lxl06cells/200Ml，然后用lml注射器將細胞懸液按每只鼠200/xl液體體積在小鼠右側腋皮下注射，完成腫瘤細胞接種。給藥方案腫瘤接種后每天觀察腫瘤生長情況。接種后第8天平均腫瘤體積達到50mm3，將小鼠分組標號(n=6rats/group)，開始使用各種載藥脂質體進行腫瘤治療。采用尾靜脈注射給藥。每48h給藥一次，共給藥5次。每次給藥劑量CA-4為25mg/kg，阿霉素為0.8mg/kg。對照組尾靜脈注射等體積的生理鹽水。數據記錄與統計處理使用游標卡尺測量各組小鼠腫瘤大小的長寬徑，并根據公式計算腫瘤體積。V=[lengthx(width)2]/2[123]。并稱量小鼠體重。于最后一次給藥后2天處死小鼠，稱取瘤重和體重，計算去瘤體重。各組制劑給藥開始后10天內瘤體大小變化情況見圖3，瘤體實物照片見圖4。實施例8、同時包載DMXAA(—種血管破壞劑)和阿霉素的RGD修飾的長循環脂質體脂質體的處方分別為HSPC:CHOL:DSPE-PEG:DMXAA(20:1.5:5:2)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-RGD及DMXAA置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。4(TC減壓旋轉蒸發成均勻的透明薄膜。加入150mM的硫酸銨溶液，水浴超聲至出現藍色乳光。再擠壓過200nm的聚碳酯膜5次。將制得的脂質體過SephadexG50柱，用PBS緩沖液(pH7.4)作為流動相洗脫，收集脂質體部分，將收集到的脂質體置40。C水浴中加熱，加入阿霉素粉末孵育20分鐘，并時時振搖，即得本品。上述制得阿霉素脂質體的粒徑應控制在100nm左右。實施例9、同時包載ZD6126(—種新生血管抑制劑)和阿霉素的RGD修飾的長循環脂質體脂質體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:ZD6126(25:2:5:2)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-RGD及ZD6126置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉蒸發成均勻的透明薄膜。加入100mM的硫酸銨溶液，水浴超聲至出現藍色乳光。再擠壓過200nm的聚碳酯膜5次。將制得的脂質體過SephadexG50柱，用PBS緩沖液(pH7.4)作為流動相洗脫，收集脂質體部分，將收集到的脂質體置37。C水浴中加熱，加入阿霉素粉末孵育20分鐘，并時時振搖，即得本品。實施例10、同時包載CA-4和紫杉醇(PTX)的RGD修飾的長循環脂質體脂質體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:CA-4:PTX(25:1.5:5:2:1)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL,DSPE-PEG，DSPE-PEG-RGD，紫杉醇及CA-4置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉蒸發成均勻的透明薄膜。精密吸取適量生理鹽水加入梨形瓶中，渦旋振蕩使脂膜完全脫落，在50'C水浴條件下超聲20min至出現淡藍色乳光，并于4'C室冷藏備用。實施例11、同時包載CA-4和多烯紫杉醇(DTX)的RGD線性三肽修飾的長循環脂質體脂質體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:CA-4:DTX(25:1.5:5:2:1)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-RGD，紫杉醇及CA-4置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37t減壓旋轉蒸發成均勻的透明薄膜。精密吸取適量生理鹽水加入梨形瓶中，渦旋振蕩使脂膜完全脫落，在5CTC水浴條件下超聲20min至出現淡藍色乳光，并于4'C室冷藏備用。實施例12、同時包載CA-4和多烯紫杉醇(DTX)的環狀RGD修飾的長循環脂質體脂質體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE陽PEG:CA-4:DTX(25:1.5:5:2:1)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC,CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-RGD-4c，多烯紫杉醇及CA-4置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉蒸發成均勻的透明薄膜。。精密吸取適量生理鹽水加入梨形瓶中，渦旋振蕩使脂膜完全脫落，在5(TC水浴條件下超聲20min至出現淡藍色乳光，并于4。C室冷藏備用。上述制得多烯紫杉醇脂質體的粒徑應控制在100nm左右。實施例13、同時包載CA-4和阿霉素(DOX)的環狀RGD修飾的長循環脂質體脂質體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:CA陽4(25:1.28:6.24:2)(單位:mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-RGD-4c及CA-4置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉蒸發成均勻的透明薄膜。加入150mM的硫酸銨溶液，水浴超聲至出現藍色乳光。再擠壓過200nm的聚碳酯膜5次。將制得的脂質體過SephadexG50柱，用PBS緩沖液(pH7.4)作為流動相洗脫，收集脂質體部分，將收集到的脂質體置37。C水浴中加熱，加入阿霉素粉末孵育20分鐘，并時時振搖，即得本品。上述制得阿霉素脂質體的粒徑應控制在100nm左右。實施例14、同時包載CA-4和紫杉醇(PTX)的環狀RGD修飾的長循環脂質體脂質體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:CA-4:PTX(25:1.5:5:2:1)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-RGD-4c，紫杉醇及CA-4置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉蒸發成均勻的透明薄膜。。精密吸取適量生理鹽水加入梨形瓶中，渦旋振蕩使脂膜完全脫落，在5(TC水浴條件下超聲20min至出現淡藍色乳光，并于4'C室冷藏備用。上述制得紫杉醇脂質體的粒徑應控制在100nm左右。實施例15、同時包載CA-4和DOX的環狀RGD修飾的長循環脂質體脂質體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:CA-4(25:1.28:6.24:2)(單位:mg)。精密稱取處方量的EPC,CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-c[RGDyk]及CA-4置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉蒸發成均勻的透明薄膜。加入150mM的硫酸銨溶液，水浴超聲至出現藍色乳光。再擠壓過200nm的聚碳酯膜5次。將制得的脂質體過SephadexG50柱，用PBS緩沖液(pH7.4)作為流動相洗脫，收集脂質體部分，將收集到的脂質體置37。C水浴中加熱，加入阿霉素粉末孵育20分鐘，并時時振搖，即得本品。上述制得阿霉素脂質體的粒徑應控制在100nm左右。實施例16、同時包載CA-4和紫杉醇(PTX)PTX的環狀RGD修飾的長循環脂質體脂質體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:DMXAA:PTX(25:1.5:5:2:1)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL,DSPE-PEG，DSPE-PEG-c[RGDyk]，紫杉醇及CA-4置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉蒸發成均勻的透明薄膜。精密吸取適量生理鹽水加入梨形瓶中，渦旋振蕩使脂膜完全脫落，在5(TC水浴條件下超聲20min至出現淡藍色乳光，并于4'C室冷藏備用。實施例17、同時包載CA-4和多烯紫杉醇(DTX)的環狀RGD修飾的長循環脂質體脂質體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:DMXAA:DTX(25:1.5:5:2:1)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-c[RGDyk]，多烯紫杉醇及CA-4置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉蒸發成均勻的透明薄膜。精密吸取適量生理鹽水加入梨形瓶中，渦旋振蕩使脂膜完全脫落，在50'C水浴條件下超聲20min至出現淡藍色乳光，并于4X:室冷藏備用。實施例18、同時包載DMXAA和DOX的環狀RGD修飾的長循環脂質體脂質體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:DMXAA(25:1.28:6.24:2)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC,CHOL,DSPE-PEG，DSPE-PEG-RGD-4c及DMXAA置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉蒸發成均勻的透明薄膜。加入150mM的硫酸銨溶液，水浴超聲至出現藍色乳光。再擠壓過200nm的聚碳酯膜5次。將制得的脂質體過SephadexG50柱，用PBS緩沖液(pH7.4)作為流動相洗脫，收集脂質體部分，將收集到的脂質體置37。C水浴中加熱，加入阿霉素粉末孵育20分鐘，并時時振搖，即得本品。實施例19、同時包載DMXAA和紫杉醇(PTX)PTX的環狀RGD修飾的長循環脂質體脂質體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:DMXAA:PTX(25:1.5:5:2:1)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-RGD-4c，紫杉醇及DMXAA置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉蒸發成均勻的透明薄膜。精密吸取適量生理鹽水加入梨形瓶中，渦旋振蕩使脂膜完全脫落，在5(TC水浴條件下超聲20min至出現淡藍色乳光，并于4i:室冷藏備用。實施例20、同時包載DMXAA和多烯紫杉醇(DTX)的環狀RGD修飾的長循環脂質體脂質體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:DMXAA:DTX(25.:1.5:5:2:1)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-RGD-4c，多烯紫杉醇及DMXAA置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉蒸發成均勻的透明薄膜。精密吸取適量生理鹽水加入梨形瓶中，渦旋振蕩使脂膜完全脫落，在5(TC水浴條件下超聲20min至出現淡藍色乳光，并于4'C室冷藏備用。實施例21、同時包載ZD6126和阿霉素(DOX)的環狀RGD修飾的長循環脂質體脂質體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:ZD6126(25:1.28:6.24:2)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-RGD-4c及ZD6126置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉蒸發成均勻的透明薄膜。加入150mM的硫酸銨溶液，水浴超聲至出現藍色乳光。再擠壓過200nm的聚碳酯膜5次。將制得的脂質體過SephadexG50柱，用PBS緩沖液(pH7.4)作為流動相洗脫，收集脂質體部分，將收集到的脂質體置37。C水浴中加熱，加入阿霉素粉末孵育20分鐘，并時時振搖，即得本品。實施例22、同時包載ZD6126和紫杉醇(PTX)的環狀RGD修飾的長循環脂質體脂質體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:ZD6126:PTX(25:1.5:5:2:1)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-RGD-4c，紫杉醇及ZD6126置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉蒸發成均勻的透明薄膜。精密吸取適量生理鹽水加入梨形瓶中，渦旋振蕩使脂膜完全脫落，在5(TC水浴條件下超聲20min至出現淡藍色乳光，并于4'C室冷藏備用。實施例23、同時包載ZD6126和多烯紫杉醇的環狀RGD修飾的長循環脂質體脂質體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:ZD6126:DTX(25:1.5:5:2:1)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-RGD-4c，多烯紫杉醇及ZD6126置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉蒸發成均勻的透明薄膜。精密吸取適量生理鹽水加入梨形瓶中，渦旋振蕩使脂膜完全脫落，在5(TC水浴條件下超聲20min至出現淡藍色乳光，并于4'C室冷藏備用。實施例24、同時包載CA-4和阿霉素(DOX)的NGR線性三肽修飾的長循環脂質體脂質體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:CA-4(25:1.28:6.24:2)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG,DSPE-PEG-NGR及CA-4置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉蒸發成均勻的透明薄膜。加入150mM的硫酸銨溶液，水浴超聲至出現藍色乳光。再擠壓過200nm的聚碳酯膜5次。將制得的脂質體過SephadexG50柱，用PBS緩沖液(pH7.4)作為流動相洗脫，收集脂質體部分，將收集到的脂質體置37。C水浴中加熱，加入阿霉素粉末孵育20分鐘，并時時振搖，即得本品。上述制得阿霉素脂質體的粒徑應控制在100nm左右。實施例25、同時包載CA-4和紫杉醇(PTX)的NGR線性三肽修飾的長循環脂質體脂質體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:CA-4:PTX(25:1.5:5:2:1)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-NGR，紫杉醇及CA-4置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉蒸發成均勻的透明薄膜。精密吸取適量生理鹽水加入梨形瓶中，渦旋振蕩使脂膜完全脫落，在50'C水浴條件下超聲20min至出現淡藍色乳光，并于4'C室冷藏備用。實施例26、同時包載CA-4和多烯紫杉醇(DTX)的NGR線性三肽修飾的長循環脂質體脂質體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:CA-4:DTX(25:1,5:5:2:1)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-NGR，紫杉醇及CA-4置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉蒸發成均勻的透明薄膜。精密吸取適量生理鹽水加入梨形瓶中，渦旋振蕩使脂膜完全脫落，在50。C水浴條件下超聲20min至出現淡藍色乳光，并于4"C室冷藏備用。實施例27、同時包載CA-4和多烯紫杉醇(DTX)的環狀NGR修飾的長循環脂質體脂質體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE陽PEG:CA-4:DTX(25:1.5:5:2:1)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-GGcNGRc，多烯紫杉醇及CA-4置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉蒸發成均勻的透明薄膜。。精密吸取適量生理鹽水加入梨形瓶中，渦旋振蕩使脂膜完全脫落，在50'C水浴條件下超聲20min至出現淡藍色乳光，并于4'C室冷藏備用。上述制得多烯紫杉醇脂質體的粒徑應控制在100nm左右。實施例28、同時包載CA-4和阿霉素(DOX)的環狀NGR修飾的長循環脂質體脂質體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:CA-4(25:1.28:6.24:2)(單位:mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-GGcNGRc及CA-4置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉蒸發成均勻的透明薄膜。加入150mM的硫酸銨溶液，水浴超聲至出現藍色乳光。再擠壓過200nm的聚碳酯膜5次。將制得的脂質體過SephadexG50柱，用PBS緩沖液(pH7.4)作為流動相洗脫，收集脂質體部分，將收集到的脂質體置37。C水浴中加熱，加入阿霉素粉末孵育20分鐘，并時時振搖，即得本品。上述制得阿霉素脂質體的粒徑應控制在100nm左右。實施例29、同時包載CA-4和紫杉醇(PTX)的環狀RGD修飾的長循環脂質體脂質體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:CA-4:PTX(25:1.5:5:2:1)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-GGcNGRc，紫杉醇及CA-4置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉蒸發成均勻的透明薄膜。。精密吸取適量生理鹽水加入梨形瓶中，渦旋振蕩使脂膜完全脫落，在50'C水浴條件下超聲20min至出現淡藍色乳光，并于4。C室冷藏備用。上述制得紫杉醇脂質體的粒徑應控制在100nm左右。實施例30、同時包載DMXAA和DOX的NGR線性三肽修飾的長循環脂質體脂質體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:DMXAA(25:1.28:6.24:2)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC,CHOL,DSPE-PEG，DSPE-PEG-NGR及DMXAA置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37t:減壓旋轉蒸發成均勻的透明薄膜。加入150mM的硫酸銨溶液，水浴超聲至出現藍色乳光。再擠壓過200nm的聚碳酯膜5次。將制得的脂質體過SephadexG50柱，用PBS緩沖液(pH7.4)作為流動相洗脫，收集脂質體部分，將收集到的脂質體置37。C水浴中加熱，加入阿霉素粉末孵育20分鐘，并時時振搖，即得本品。實施例31、同時包載DMXAA和DOX的環狀NGR修飾的長循環脂質體脂質體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:DMXAA(25:1.28:6.24:2)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL,DSPE-PEG，DSPE-PEG-GGcNGRc及DMXAA置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉蒸發成均勻的透明薄膜。加入150mM的硫酸銨溶液，水浴超聲至出現藍色乳光。再擠壓過200nm的聚碳酯膜5次。將制得的脂質體過SephadexG50柱，用PBS緩沖液(pH7.4)作為流動相洗脫，收集脂質體部分，將收集到的脂質體置37。C水浴中加熱，加入阿霉素粉末孵育20分鐘，并時時振搖，即得本品。實施例32、同時包載DMXAA和紫杉醇(PTX)的NGR線性三肽修飾的長循環脂質體脂質體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:DMXAA:PTX(25:1.5:5:2:1)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-NGR，紫杉醇及DMXAA置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉蒸發成均勻的透明薄膜。精密吸取適量生理鹽水加入梨形瓶中，渦旋振蕩使脂膜完全脫落，在5(TC水浴條件下超聲20min至出現淡藍色乳光，并于4'C室冷藏備用。實施例33、同時包載DMXAA和紫杉醇(PTX)的環狀NGR修飾的長循環脂質體脂質體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:DMXAA:PTX(25:1.5:5:2:1)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-GGcNGRc,紫杉醇及DMXAA置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉蒸發成均勻的透明薄膜。精密吸取適量生理鹽水加入梨形瓶中，渦旋振蕩使脂膜完全脫落，在5(TC水浴條件下超聲20min至出現淡藍色乳光，并于4。C室冷藏備用。實施例34、同時包載DMXAA和多烯紫杉醇(DTX)的NGR線性三肽修飾的長循環脂質體脂質體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:DMXAA:DTX(25:1.5:5:2:1)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-NGR，多烯紫杉醇及DMXAA置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉蒸發成均勻的透明薄膜。精密吸取適量生理鹽水加入梨形瓶中，渦旋振蕩使脂膜完全脫落，在5(TC水浴條件下超聲20min至出現淡藍色乳光，并于4D室冷藏備用。實施例35、同時包載DMXAA和多烯紫杉醇(DTX)的環狀NGR修飾的長循環脂質體脂質體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:DMXAA:DTX(25:1.5:5:2:1)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-GGcNGRc，多烯紫杉醇及DMXAA置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉蒸發成均勻的透明薄膜。精密吸取適量生理鹽水加入梨形瓶中，渦旋振蕩使脂膜完全脫落，在50'C水浴條件下超聲20min至出現淡藍色乳光，并于4'C室冷藏備用。實施例36、同時包載ZD6126和阿霉素(DOX)的NGR線性三肽修飾的長循環脂質體脂質體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:ZD6126(25:1.28:6.24:2)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-NGR及ZD6126置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉蒸發成均勻的透明薄膜。加入150mM的硫酸銨溶液，水浴超聲至出現藍色乳光。再擠壓過200nm的聚碳酯膜5次。將制得的脂質體過SephadexG50柱，用PBS緩沖液(pH7.4)作為流動相洗脫，收集脂質體部分，將收集到的脂質體置37。C水浴中加熱，加入阿霉素粉末孵育20分鐘，并時時振搖，即得本品。實施例37、同時包載ZD6126和阿霉素(DOX)的環狀NGR修飾的長循環脂質體脂質體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:ZD6126(25:1.28:6.24:2)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-GGcNGRc及ZD6126置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉蒸發成均勻的透明薄膜。加入150mM的硫酸銨溶液，水浴超聲至出現藍色乳光。再擠壓過200nm的聚碳酯膜5次。將制得的脂質體過SephadexG50柱，用PBS緩沖液(pH7.4)作為流動相洗脫，收集脂質體部分，將收集到的脂質體置37。C水浴中加熱，加入阿霉素粉末孵育20分鐘，并時時振搖，即得本品。實施例38、同時包載ZD6126和紫杉醇(PTX)的NGR線性三肽修飾的長循環脂質體脂質體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:ZD6126:PTX(25:1.5:5:2:1)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-NGR，紫杉醇及ZD6126置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉蒸發成均勻的透明薄膜。精密吸取適量生理鹽水加入梨形瓶中，渦旋振蕩使脂膜完全脫落，在50。C水浴條件下超聲20min至出現淡藍色乳光，并于4t:室冷藏備用。實施例39、同時包載ZD6126和紫杉醇(PTX)的環狀NGR修飾的長循環脂質體脂質體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:ZD6126:PTX(25:1.5:5:2:1)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-GGcNGRc，紫杉醇及ZD6126置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉蒸發成均勻的透明薄膜。精密吸取適量生理鹽水加入梨形瓶中，渦旋振蕩使脂膜完全脫落，在5(TC水浴條件下超聲20min至出現淡藍色乳光，并于4。C室冷藏備用。實施例40、同時包載ZD6126和多烯紫杉醇的NGR線性三肽修飾的長循環脂質體脂質體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:ZD6126:DTX(25:1.5:5:2:1)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC,CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-NGR，多烯紫杉醇及ZD6126置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉蒸發成均勻的透明薄膜。精密吸取適量生理鹽水加入梨形瓶中，渦旋振蕩使脂膜完全脫落，在5(TC水浴條件下超聲20min至出現淡藍色乳光，并于4。C室冷藏備用。實施例41、同時包載ZD6126和多烯紫杉醇的環狀NGR修飾的長循環脂質體脂質體的處方分別為EPC:CHOL:DSPE-PEG:ZD6126:DTX(25:1.5:5:2:1)(單位mg)。精密稱取處方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-GGcNGRc,多烯紫杉醇及ZD6126置梨形瓶中，加適量氯仿溶解。37'C減壓旋轉蒸發成均勻的透明薄膜。精密吸取適量生理鹽水加入梨形瓶中，渦旋振蕩使脂膜完全脫落，在50'C水浴條件下超聲20min至出現淡藍色乳光，并于4'C室冷藏備用。權利要求1.一種供注射用的抗腫瘤長循環靶向脂質體的藥物組合物，其組成為具有腫瘤部位靶向功能的多肽，聚乙二醇，脂質體，以及至少一種抗血管藥物和至少一種抗腫瘤藥物。2.根據權利要求1所述的組合物，其特征在于，其中具有腫瘤部位靶向功能的多肽，聚乙二醇，脂質體，以及藥物的比例為0.01%-10%:0.01%-20%:40%-99.88%:0.1%-30%。3.根據權利要求1所述的組合物，其特征在于，腫瘤部位靶向功能的多肽選自RGD肽及其類似物或NGR肽及其類似物。4.根據權利要求1所述的組合物，其特征在于，所述RGD肽及其類似物選自含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸連續序列的所有線性肽和環肽，包括含RGD序列的直鏈多肽片段，即三肽、四肽、五肽、六肽、七肽、八肽，以及含RGD序列的環狀多肽，S卩RGD-4C，c[RGDYK];RGD類似物選自含精氨酸-6-氨基已酸序列的線性或環狀片段；所述NGR肽及其類似物選自含有天冬酰胺酸-甘氨酸-精氨酸連續序列的線性肽和環肽，包括含NGR序列的直鏈多肽片段，如三肽、四肽、五肽、六肽、七肽、八肽，以及含NGR序列的環狀多肽。5.根據權利要求1所述的組合物，其特征在于，所述RGD肽及其類似物選自RGD-4C、c[RGDYK]或RGD線性三肽；所述NGR肽及其類似物選自NGR線性三肽、CNGRC環肽或GGCNGRC環肽。6.根據權利要求1所述的組合物，其特征在于，所述聚乙二醇的分子量為200-5000。7.根據權利要求1所述的組合物，其特征在于，所述脂質體是以磷脂和膽固醇為材料制成的脂質雙分子層囊泡，其中磷脂與膽固醇的比例1-1000:1;所述磷脂選自大豆磷脂、二月桂酰卵磷脂、二肉豆蔻酰卵磷脂、二棕櫚酰卵磷脂、二硬脂酰卵磷脂、二硬脂酰卵磷脂、l-肉豆蔻酰-2-棕櫚酰卵磷脂、1-棕櫚酰-2-肉豆蔻酰卵磷脂、l-棕櫚酰-2-硬脂酰卵磷脂、l-硬脂酰-2-棕櫚酰卵磷脂、蛋黃卵磷脂、氫化豆磷脂、二油酰基卵磷脂、二月桂酰磷脂酰甘油、脂酰磷脂酰甘油、二油酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酸、二棕櫚酰磷脂酸、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺、二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺、二肉豆蔻酰磷脂酰絲氨酸、二棕櫚酰磷脂酰二絲氨酸、腦磷脂酰絲氨酸、腦神經鞘磷脂、二棕櫚酰神經鞘磷脂、二硬脂酰神經鞘磷脂或二硬脂酰磷脂酰乙醇胺之一種或一種以上者。8.根據權利要求1所述的組合物，其特征在于，所述抗血管藥物選自新生血管抑制劑和血管破壞藥物，其中新生血管抑制劑選自康貝司汀、ZD6126、范得它尼(ZD6474)、Iressa(ZD1839)、舒尼替尼(SU11248)、SU5416、a-2a干擾素(IFNa-2a)、白介素-12(IL-12)、煙曲霉素類似物(TNP-470)、阿曲生坦(ABT-627)、抗血管生成肽anginex、索拉非尼(BAY439006)、PTK787/ZK222584(vatalanib)、AG-013736、AG3340、沙利度胺(反應停Thalidomide)及其衍生物(雷尼度胺(CC-5013)和Actimid(CC-4047))、血管抑素(angiostatin)、內皮抑素(endostatin)、阿曲生坦(ABT-627)、Neovastat(AE941)、DMXAA，角鯊胺以及抗血管生成單抗(VEGFR-2單抗DCIOI，貝伐單抗(Bevacizumab)，EGFR單抗Erbitux);所述抗腫瘤藥物選自鹽酸阿霉素、環磷酰胺、放線菌素、博來霉素、正定霉素，阿霉素、表阿霉素、絲裂霉素、甲氨喋呤、紫杉醇、多西紫杉醇、喜樹堿、羥基喜樹堿、柔紅霉素、5-氟脲嘧啶、卡鉑、卡氮芥、順鉑、龜臼乙叉甙、干擾素、長春堿、長春新堿或三苯氧胺。9.根據權利要求1所述的組合物，其特征在于，脂質體中裝載的抗血管藥物和抗腫瘤藥物的比例為1:1-100。10.權利要求1所述的組合物的制備方法，其特征在于，取制備脂質體的原料，置圓底燒瓶中，加入有機溶劑溶解后，按脂質體制備方法，制備含RGD或NGR序列多肽或RGD類似物片段修飾的長循環脂質體；或先制備長循環脂質體，將導向化合物插入到制備好的脂質體中形成長循環靶向脂質體；用擠壓過聚碳酯膜或者超聲等方法將脂質體的粒徑控制在100nm左右；抗血管藥物與抗腫瘤藥物在制備前直接加入或者通過其他方法裝載到已制備好的脂質體中。全文摘要本發明涉及一種供注射用的抗腫瘤長循環靶向脂質體，其特征在于將抗血管藥物與抗腫瘤藥物聯合，采用具有腫瘤部位靶向功能的多肽和親水性聚乙二醇(PEG)同時修飾的脂質體進行裝載，將二種藥物輸送到腫瘤部位，通過兩種藥物不同的釋放速率和作用機理，增強腫瘤治療效果。文檔編號A61K47/42GK101327190SQ20081013458公開日2008年12月24日申請日期2008年7月29日優先權日2008年7月29日發明者強張,烜張,張翼飛,汪貽廣,王堅成申請人:北京大學