純氨基酸螯合物的生產方法及其用途的制作方法

專利名稱：：純氨基酸螯合物的生產方法及其用途的制作方法
技術領域：
：本發明是有關氨基酸螯合物復合物的生產方法以及其用途。更具體地說，本發明所生產的純氨基酸螯合物在很廣的pH值范圍內，其溶解性非常好，溶液的穩定性亦非常好，并且溶液穩定性持續的時間也非常長。
背景技術：
：在每日的飲食里補充適量的必要礦物質，對維持人體健康是非常重要。眾所周知，例如缺乏鈣可能引起骨質疏松，免疫學上的疾病，高血壓，關節炎，結腸癌，糖尿病，以及肥胖癥；缺乏鋅時，導致延長傷口的治愈，妨礙生長，延遲性成熟，懷孕后的伸展標記，疲勞，以及對感染的敏感性。以氨基酸螯合的金屬元素是人類動物和植物營養所必需的重要礦物質來源。補充氨基酸螯合物對人和動物的健康具有好處，在很多先前的醫學文獻中已得到充分證明。氨基酸螯合物的活躍輸送技巧是氨基酸螯合物被黏膜細胞攝取后，其氨基酸輸送載體把氨基酸金屬螯合物當作為單一的氨基酸去輸送，因此生物的有效吸收率非常高，若它是金屬的無機鹽，則不像有機鹽很不容易被人體吸收和消化。氨基酸螯合物是由天然的氨基酸與金屬離子反應產生含有一個或多個戊環的結構體，是由金屬原子，羧基氧，羰基碳，a碳和a氨基酸氮組成物所構成。但實際上各種氨基酸螯合物的結構是是由中心金屬離子的配位數和配位體(例如氨基酸)對金屬的摩爾比率而確定。一個特定原子的配位數是指在特定的化學反應中可與其它原子直接相鏈接的數量。例如，眾所周知鋅，鎂和鈷都有6個配位數，而鈣有時可能有6或者8個配位數。皮德科克和穆爾曾利用X射線研究的報告(2001,J.Biol.Inorg.Chem.6,479-489)含鈣的蛋白質結構發現Ca"平均有6個配位數。氨基酸螯合物的合成，一般是先把水溶性金屬鹽溶解在水中，然后加進于氨基酸配位體中，使金屬對配位體的摩爾比大約在1:1到1:4。作為制造氨基酸螯合物起始反應的水溶性金屬鹽，最常用的是硫酸離子或者氯離子。硫酸離子或氯離子等陰離子會與金屬離子結合并與氨基酸螯合物形成復合物。雖然先前的很多專利在技術方法上提供了在氨基酸螯合物的生產期間如何除去這些多余陰離子，但實際上尚有相當大數量的陰離子依然停留在螯合物環架結構內，并且/或者直接地與氨基酸螯合物中的金屬陽離子結合而連在一起。即以金屬鹽生產的氨基酸螯合物會有陰離子結合陽離子的不利因素，這些不利因素都與陰離子被攝綁在氨基酸螯合物的金屬陽離子上有關。例如，長期攝取這種氨基酸螯合物會導致硫酸陰離子或氯化物陰離子在身體組織內累積，進而消極地負作用影響身體健康。含有相當數量陰離子的氨基酸螯合物，特別是在強酸或堿性環境下，或在其它離子譬如磷酸鹽存在的前提下，時常展示很差的溶解性和穩定體。當這種氨基酸螯合物被應用在食品和飲料中時，氨基酸螯合物里的硫酸鹽或者氯離子經常能導致不好的氣味和口味。公知技術曾采用各種各樣的方法來改良氨基酸螯合物混雜有陰離子而導致的不利因素。例如，美國專利5,504,055和6,299,914號揭示，在氨基酸螯合物反應過程中加進pH值調解劑和懸浮穩定劑可以改進氨基酸螯合物的溶解度和穩定性。美國專利6,458,981號用金屬硫酸鹽與氫氧化轉一起來合成氨基酸螯合物，在反應中硫酸根與鈣就生成硫酸鈣而沉淀，自由硫酸離子進而從氨基酸螯合物中分離出去。
發明內容本發明的目的上提供一種生產氨基酸螯合物的方法，更具體地說，這種方法能使氨基酸與金屬直接反應生產出更為理想純凈的氨基酸螯合物，此反應產物僅僅含有純凈的氨基酸螯合物。依照本發明，本發明的生產純氨基酸螯合物的新方法是一個含有二個步驟的方法。此方法的第一個步驟是將金屬離子與氨基酸接觸產生氫氧基氨基乙酸鹽。在這一步驟的反應中，金屬離子是選自金屬氧化物或金屬氫氧化物。第二步驟是將第一步驟所產生的氫氧基氨基乙酸鹽再與至少有一個含多量的氨基化合物反應，此生成的氨基酸螯合物結構是由一個金屬與多個氨基酸的配位體結合所構成，而其氨基酸配位體的數量與金屬離子的配位數是相等的。這種含氨基的化合物(配位體)是氨基酸，也可為縮二氨酸，縮三氨酸，或者一種多縮氨酸。本發明的再一個第二個步驟，包括可以連續分成幾個子步驟進行。這是將第一個步驟所產生的氫氧基氨基乙酸鹽再與多個不同含氨基的化合物接觸反應生成氨基酸螯合物，此結構是由一個金屬與多個不同氨基酸的配位體結合所構成，而此氨基酸配位體的數量與金屬離子的配位數是相等。如果該氨基酸配位體中含有天冬氨酸或谷氨酸且含有至少兩個不同氨基酸則會更為理想。進一步而言，前述含氨基的化合物(配位體)是氨基酸，也可為縮二氨酸、縮三氨酸、或者一種多縮氨，亦可能是這些的混合本發明的最后一個課題，就是從反應液中分離氨基酸螯合物并干燥的。本發明的功效、用途本發明所生產的氨基酸螯合物，由于沒有混雜任何譬如硫酸鹽和氯離子外來離子，因此無任何味道。在很廣的pH值范圍內，不但溶解性非常好，其溶液穩定性亦非常好，持續的時間也非常長。在常溫下又非常容易溶解，無需附加任何pH值調解劑，溶解劑和懸掛浮穩定劑。本發明的氨基酸螯合物可以應用在飲料，食品，營養滋補品和醫藥中。應用在飲料的包括萃取物或汁液，其它任何形式譬如果實、種子、根塊莖、芽尖部，葉子以及其它的部位。本發明所生產的氨基酸螯合物更可應用于牛奶制品或其它代替產品，特別是鋅氨基酸螯合物，能非常有效地增強免疫低下的小白鼠免疫功能。本發明的詳細說明本發明是有關生產氨基酸螯合物的方法及其用途，以及以此方法所制造出來的純氨基酸螯合物。此純氨基酸螯合物不但在很廣的pH值范圍內(pH2-11)溶解性非常好。在幅度很廣的貯存溫度下，既使被暴露在如磷酸鹽那樣易反應的陰離子，其溶液穩定性極為良好，持續的時間也非常長。為使本發明更為明了，在本說明書中所使用的詞語先予詳細加以注明如下。氨基酸螯合物是指金屬離子與氨基酸配位體結合形成的一個雜環結A純氨基酸螯合物是指沒有外來的陽離子或陰離子例如氫氧根，硫酸根和氯離子等與氨基酸螯合物結合或捆在一起，而所謂純氨基酸螯合物的意思是雜環結構中的中心的金屬離子配位數是完全只與氨基酸配位體提供的電子結合在一起，金屬離子與氨基酸配位體的結合是離子鍵，共價鍵并且/或者是配位共價鍵。一個特定的金屬原子配位數，是在螯合反應中，可與這個金屬原子直接相鏈接的其它原子的總數量。純氨基酸配位體(Ligand):包括任何氨基酸，比如丙氨酸(alanine)、精氨酸(arginine簡稱Arg)、天冬酰氨酸(asparagine)、天冬氨酸(asparticacid簡稱Asp)、半胱氨酸(cysteine)、胱氨酸(cystine)、谷氨酸(glutamicacid簡稱Glu)、谷酰氨酸(glutamine)、甘氨酸(glycine簡稱Gly)、組氨酸(histidine簡稱His)、異白氨酸(isoleucine)、白氨酸(leucine)、賴氨酸(lysine簡稱Lys)、甲硫氨酸(methionine簡稱Met)、鳥氨酸(ornithine)、苯丙氨酸(phenylalanine)、脯氨酸(proline)、絲氨酸(serine簡稱Ser)、蘇氨酸(threonine簡稱Thr)、色氨酸(tryptophane)，酪氨酸(tyrosine)、綴氨酸(valine)、硒半胱氨酸(selenocysteine)和吡咯賴氨酸(pyrrolysine)，以及包括縮二氨酸(dipeptides)，縮三氨酸(tripetides)，或者多縮氨酸(polypeptides)，也可為以上幾種的混合。金屬指任何人體，動物，或植物營養所需的必要礦物元素，包括銅(Cu)，鋅(Zn)，鐵(Fe)，鉻(Cr)，鈷(Co)，鎂(Mg)，錳(Mn)，硒(Se)，硼(B)以及鉬(Mb)及其它元素，也可為金屬氫氧化物或者氧化物。"高溶解度表明本發明的純氨基酸螯合物溶解性非常好，其溶液穩定性，持續的時間亦非常長，譬如(1)在很廣的pH值范圍內(pH2-12)的溶液中，(2)在包含有磷酸和/或檸檬酸的溶液里，或(3)在果汁那樣的飲料和/或牛奶(等)，本發明所生產的純氨基酸螯合物不需要添加任何助溶劑去幫助提升其溶解性。無味道的意思是本發明的純氨基酸螯合物跟純水比較沒有不愉快的味道之意。本發明生產純氨基酸螯合物的新方法是含有二個步驟的方法。此方法的第一個步驟是將金屬氫氧化物或氧化物與氨基酸接觸反應產生氫氧基氨基乙酸鹽。第二個步驟一般是包括3個子步驟生產(a)金屬與配位體的摩爾比為1:4，(b)金屬與氨基酸配位體的鍵數量與中心金屬離子的配位數是相等的純氨基酸螯合物。特別要強調的是本發明的方法可以在溫度范圍10°C-35°C的常溫內就能很滿足地完成。但若有需要反應溫度控制在35°C-80。C，其反應完成時間則可減少。用之于本發明生產沒有任何干擾離子的純氨基酸螯合物的反應公式，有以下四個步驟步驟l:生產氫氧基a-氨基乙酸金屬鹽Me(OH)2+HA1—A'MeOH(1)其中的HA'可為任何L-氨基酸，或縮二氨酸，縮三氨酸，或者多縮氨酸。Me(OH)2為金屬氧化物，A'MeOH為氫氧氨基乙酸金屬鹽。步驟2:氫氧基a-氨基乙酸金屬鹽轉換成氨基酸螯合物A'MeOH+HA2~>MeA1A2(2)其中的HA2可為任何L-氨基酸，或縮二氨酸，縮三氨酸，或者多縮氨酸。MeA'AZ為含二個氨基化合物的氨基酸螯合物HA3+MeAV—MeA'A2A3(3)其中的H^可為任何L-氨基酸，或縮二氨酸，縮三氨酸，或者多縮氨酸。MeA'W為含三個氨基化合物的氨基酸螯合物HA4+MeA1A2A3—MeA1A2A3A4(4)其中的HA"可為任何L-氨基酸，或縮二氨酸，縮三氨酸，或者多縮氨酸。MeA1A2A3A4為含四個氨基化合物的氨基酸螯合物本領域技術人員都了解本發明生產純氨基酸螯合物的新方法步驟2的反應式(4)中的氨基酸螯合產品的酸堿度PH是會受選用于步驟1及步驟2中的氨基酸所影響。以反應式(4)所生產得到的透明溶液(其中含有本發明的純氨基酸螯合物)，這個透明的溶液寧可先被過濾，然后干燥成固體粉末，進而得到純氨基酸螯合物產品。多種不同的干燥設備可用來干燥本發明的氨基酸螯合物，如噴霧干燥設備，鼓烘干機、液體床烘干機、閃爍干燥器、旋轉蒸發器、傳動機盤烘干機及真空烘干機等等。干燥步驟可以是一步或者多步過程進行。本發明的上述各種生產方法中HA1，HA2，HAS和HA4可以是同一個氨基酸。也可以在HA1，HA2，H^和HAA的中至少包括有一個天冬氨酸或者谷氨酸。在HA1，HA2，H八s和HA4中也可以隨便包括至少兩種不同的氨基酸。本領域技術人員都知道本發明中的天冬氨酸或者谷氨酸，在純氨基酸螯合物的合成中不但作為配位體還是pH值的調解劑和/或穩定劑，而且更可作為促進氨基酸螯合物的溶解度。依照本發明的方法所生產的純氨基酸螯合物具有以下的物理化學屬性第一，純氨基酸螯合物的pH可被控制在一個特定的值。這是選擇及變更混合不同的氨基酸與金屬離子反應而達成，因此不需加pH值的調解劑或者pH值緩沖系統去調解氨基酸螯合物去達到人和動物體最佳的吸收條件。第二，本發明的氨基酸螯合物非常容易溶于水，甚至可用來做非常濃縮的糖漿。第三，本發明的純氨基酸螯合物能溶解在非常低的pH值溶液中例如pH值2，本發明的純氨基酸螯合物也能溶解在如pH值11非常高的pH值溶液中并且在長時間下的貯存仍很穩定。而且，本發明的氨基酸螯合物在酸性飲料，果汁和牛奶里亦很穩定。這種純氨基酸螯合物的溶解性和穩定屬性，尤其適合并大范圍地應用在醫藥，保健食品中。第四，由于本發明的純氨基酸螯合物不含有硫酸鹽或氯離子等外來的陰離子。從而，本發明的純氨基酸螯合物基本上并無味道。本發明人等更為吃驚地發現，用本發明的方法生產的一種鈷氨基酸螯合物竟有一種甜的味道。公知的發明工藝在計算氨基酸螯合物中的金屬所占螯合物比率，總是依據金屬離子與配位體的摩爾比率。但是這些氨基酸螯合物中所含有的其它陰離子如硫酸鹽或氯離子等可能與金屬結合，特別是當pH值調整劑或溶劑或穩定劑被加在氨基酸螯合物中時。應注意本發明的純氨基酸螯合物的生產方法，僅以金屬氧化物或者金屬氫氧化物與氨基酸配位體反應，并且其金屬與氨基酸配位體之間的結合鍵數與金屬離子的配位數相同。從而，本發明生產的氨基酸螯合物中的金屬含量的計算是不基于金屬離子與配位體的摩爾比率，而是基于配位體的實際數結合金屬離子來計算。由此，本發明的氨基酸螯合物中的金屬含量將比公知的發明工藝所報告的較低。本發明生產的氨基酸螯合物適合用于人類，動物和禽類的營養產品。這樣的產品或作品包括飲料，食品，營養滋補品，以及粉狀，藥片，膠囊和液體的醫藥劑。具體實施例方式以下是本發明氨基酸螯合物的合成實施例，這些實施例為本發明的范例，并不限制本發明的技術范圍。實施例1將3.7923克天冬氨酸溶解在200mL的蒸餾水中，2.1100克的氫氧化鈣被加在溶液中并攪動20分鐘，待pH值是10.30時，4.3433克甘氨酸被加到反應溶液中并且攪動30分鐘，測pH值得8.75。最后，3.9098克的天冬氨酸被加到反應溶液中并且攪動反應混合物40分鐘，生成pH值6.83的透明溶液后并用旋轉蒸發器(TokyoRikakikaiCo.,Ltd.EyelaDigitalWaterBathSB-1000)蒸發去水，再在真空(GardnerDenverWelchVacuumTechnology,Inc.,Skokie,IL,USA.Welch1400)幫助下干燥成固體。本方法所生產的純氨基酸螯物經測試得鈣和氨基酸的比率為l:4(Ca:2Asp:2Gly)。以紅外線光譜儀(FT-IR)、核磁共振儀NMR分析顯示氨基酸螯合物(Ca:2Asp:2Gly)的四個氨基酸配位體完全與金屬鈣結合并無非結合鍵自由氨基酸殘余物留在螯合物中。實施例2將天冬氨酸(3.7912克)溶解在含有氫氧化鈣(2.1094克)200mL的水中，讓反應進行20分鐘。待pH值是10.30且穩定后加5.9866克絲氨酸并且攪動直到pH值降低到8.52且穩定(大約30分鐘)。最后，天冬氨酸3.7862克被加到反應溶液中并攪動反應混合物105分鐘。最后得pH值6.89的透明溶液置于旋轉蒸發器移走水，再在真空泵幫助下干燥成固體。本方法所生產的純氨基酸螯合物中的鈣和氨基酸的比率為l:4(Ca:2Asp:2Ser)。實施例3將2.1135克氫氧化鈣和3.7985克天冬氨酸加入200mL的水中進行反應，連續攪動并讓反應進行20分鐘。待反應液的pH值達到10.30并且趨于穩定，加入6.7999克的蘇氨酸并連續攪拌大約30分鐘直到pH值降低到8.50且穩定。然后，加入天冬氨酸3.8012克并且攪動120分鐘。生成pH值6.90的透明液用旋轉蒸發器去水，在真空泵下進一步干燥。最后的氨基酸螯合物產品是白色的粉末，鈣與氨基酸比率為l:4(Ca:2Asp:2Thr)。實施例4將3.8101克天冬氨酸溶解在200mL的蒸餾水的后加入氫氧化鈣2.1199克，連續攪動并讓反應進行20分鐘。待反應液的pH值達到10.40并且趨于穩定后8.3634克賴氨酸被加入并且攪動30分鐘，直到反應溶液的pH值降低到9.91。最后，加進天冬氨酸3.8091克使溶液繼續反應70分鐘生成pH值9.09的透明液。用旋轉蒸發器去水再在真空泵下進一步干燥。得白色的氨基酸螯合物產品粉末，其鈣與氨基酸比率為l:4(Ca:2Asp:2Lys)。實施例5將含有3.6938克天冬氨酸和2.0707克氫氧化鈣的200mL反應水溶液，連續攪動并進行反應48分鐘。當反應液的pH值達到10.80，加入2.0978克甘氨酸到反應溶液中并且攪動30分鐘，待pH值降低到9.60并且趨于穩定，再加入4.1663克甲硫氨酸，連續攪動并讓反應進行大約35分鐘。當溶液的pH值是9.12時，加入天冬氨酸3.7495克于反應液中，進行反應大約130分鐘，此時pH值為6.71。最后，生成液用旋轉蒸發器去水，再在真空泵下更進一步千燥得白色的氨基酸螯合物產品粉末，鈣與氨基酸比率為l:4(Ca:2Asp:Gly:Met)。FT-IR,NMR分析顯示氨基酸螯合物(Ca:2Asp:Gly:Met)的四個氨基酸配位體完全與金屬鈣結合。實施例6先將4.2482克谷氨酸溶解在200mL的水中，然后加入2.1407克氫氧化鈣于谷氨酸溶液中攪動并進行反應大約20分鐘，溶液的pH值大約在10.44時加入3.4476克蘇氨酸并攪動反應液30分鐘，使反應液的pH值降低到9.08并且趨于穩定。再加入3.0383克絲氨酸，攪動反應20分鐘并使反應液的pH值降低到8.72。最后加入3.4630克天冬氨酸攪動并進行反應大約190分鐘，使反應液的pH值再降低到7.00，生成pH值7.00的透明液。用旋轉蒸發器去水，再在真空泵下進一步干燥得純氨基酸螯合物，其鈣與氨基酸比率為l:4(Ca:Glu:Thr:Asp)。實施例7先將3.7117克天冬氨酸溶解在200mL的水中，然后加入1.7043克氫氧化鎂在天冬氨酸的水溶液中，攪動并進行反應大約30分鐘，溶液的pH值大約在9.26。此時加入3.3213克蘇氨酸攪動大約100分鐘使其溶液的pH值大約降低到8.79。然后加入2.9309克絲氨酸并攪動直到pH值降低到8.54并且穩定(大約35分鐘)。最后，加入谷氨酸4.0622克并攪動大約190分鐘。生成pH值6.80透明液。然后用旋轉蒸發器去水，再在真空泵下進一步干燥。最后生產得純氨基酸螯合物，其鎂與氨基酸比率為l:4(Mg:Asp:Thr:Ser:Glu)。實施例8先將3.7086g克天冬氨酸溶解在200mL的水中，然后加入2.5539克氫氧化鈷在天冬氨酸的水溶液中，攪動并進行反應大約45分鐘使溶液的pH值大約在5.99。此時加入4.8528克精氨酸并攪動大約120分鐘使溶液的pH值大約再升到8.45。加入2.0093克甘氨酸并攪動大約150分鐘直到pH值降低到7.68。最后，加入谷氨酸4.0973克并攪動大約12小時反應得pH值5.99溶液。并將此反應溶液過濾，然后用旋轉蒸發器去水再在真空泵下進一步干燥。得純氨基酸螯合物，其鈷與氨基酸比率為l:4(Co:Asp:Arg:Gly:Glu)。實施例9取3.7539克天冬氨酸溶解在200mL的水中，然后，加入2.6258克氫氧化鈷在天冬氨酸的水溶液中，攪動并進行反應大約45分鐘，使溶液的pH值大約在6.27。此時加入3.3595克蘇氨酸并攪動大約60分鐘使溶液的pH值大約降低到5.86并趨于穩定。下一步，加入精氨酸4.9131克并攪動大約50分鐘直到pH值升到7.66。加入2.1154克甘氨酸并攪動大約240分鐘反應得pH值7.56溶液。然后用旋轉蒸發器去水，再在真空泵下更進一步干燥。最后生產得純氨基酸螯合物其鈷與氨基酸比率l:4(Co:Asp:Thr:Arg:Gly)。實施例10取3.8163g克天冬氨酸溶解在200mL的水中，然后加入2.3252克氧化鋅在天冬氨酸的水溶液中，攪動并進行反應大約2.5個小時，使溶液的pH值大約在6.73。加入精氨酸9882克并攪動大約1個小時，此時的溶液pH值升到9.51。然后加入3.8150克天冬氨酸，攪動大約4個小時使溶液的pH值降大約在7.40。最后過濾溶液，蒸發水份，并在真空下干燥得純鋅氨基酸螯合物，其金屬與氨基酸比為l:4(Zn:2Asp:2Arg)。實施例11取3.7482克天冬氨酸溶解在200mL的水中，然后加入2.2833克氧化鋅在天冬氨酸的水溶液中，攪動并進行反應大約2個小時，此時pH值6.66。在此的后加入8.2299克賴氨酸并攪動反應溶液反應大約1個小時使溶液pH值升到9.35。最后，加進天冬氨酸3.7490克反應大約12個小時，生成pH值7.64溶液。將生成的溶液過濾，然后蒸發，并在真空下干燥。這方法生產所得的氨基酸螯合物的金屬與氨基酸的比率是l:4(Zn:2Asp:2Lys)。實施例12先將3.7036克天冬氨酸溶解在200mL的水中。此后，加入2.7186克氫氧化銅并攪動反應30分鐘，此時的pH值是4.11。然后加入8.154克賴氨酸于溶液中進一步攪動反應溶液60分鐘使溶液pH值升到9.74。最后，加3.7041克天冬氨酸到反應溶液中反應大約90分鐘。這時反應溶液的pH值降低到5.81并趨于穩定。過濾透明的生成液，蒸發，并在真空下干燥成為固體粉末。本反應生成的最后產物純氨基酸螯合物，其金屬與氨基酸的比率是l:4(Cu:2Asp:2Lys)。實施例13取1.0081克氫氧化銅物和3.2103克組氨酸混合溶解在200mL的水中并使它反應大約3個小時，此時的反應溶液pH值是9.31。此后加入1.3802克天冬氨酸到反應液中并反應大約45分鐘，此反應溶液的pH值是6.49。最后，加入0.7817克甘氨酸到反應液中并反應大約30分鐘使溶液的pH達到6.52并且趨于穩定。如前所述實施例將最后生成透明的溶液過濾，蒸發，然后在真空泵下干燥成固體。這個反應生成的最后產物是純氨基酸螯合物，金屬與氨基酸的比率是1:4(Cu:Asp:2His:lGly)。實施例14表格l是上列實施例中的ll種不同金屬氨基酸螯合物，在四種不同酸性及兩種不同堿性溶液中的溶解度和穩定性測試結果。進行測定的四種酸性溶液，分別是蒸餾水稀釋的(l)鹽酸溶液，pH3.5，(2)鹽酸溶液，pH2，(3)磷酸溶液，pH3.5，(4)磷酸溶液，pH2。兩種堿性溶液分別是(1)pH11氫氧化鈉稀釋液，(2)pH9氫氧化鈉稀釋液。同時也測定了在橙汁中(pH值3.76)，以及在牛奶中(pH值6.66)的溶解度和穩定性。在每一5mL的測試溶液中都溶解有0.2克氨基酸螯合物樣品，酸性溶液和堿性溶液儲存在22°C，橙汁和牛奶的儲存在4°C。四周的后對溶液進行是否有沉淀物檢査。發現沒有一個被測試樣品在儲存四周的后有沉淀產生。由本測試得知本發明生產的各種氨基酸螯合物可適用于各種飲料、果汁和乳奶以及保健食品中。實施例15氨基酸鋅螯合物(Zn:2Asp:2Lys)對環磷酰胺模型組小白鼠碳粒廓清實驗取健康小白鼠雌雄各半，體重18-22g，在實驗室適應4日后均衡隨機分成7組每組10只。此7組分別為空白組，環磷酰胺所致免疫功能低下組(簡稱CTX);環磷酰胺所致免疫功能低下組+給予硫酸鋅(對照組)(17mg/kg);環磷酰胺所致免疫功能低下組+給予氨基酸鋅螯合物(57mg/kg);環磷酰胺所致免疫功能低下組+給予氨基酸鋅螯合物(114mg/kg);環磷酰胺所致免疫功能低下組+給予氨基酸鋅螯合物(228mg/kg);環磷酰胺所致免疫功能低下組+給予氨基酸鋅螯合物(456mg/kg)。從給藥后第10天開始(除空白組外)6組均腹腔注射環磷酰胺(50mg/kg)，每日一次連續四天，給藥容積為10ml/kg。空白組和環磷酰胺模型組給予等容量蒸餾水。于第16天末次給藥60分鐘后，尾靜脈用生理鹽水稀釋3倍的印度墨汁注射，給藥容積為10ml/kg，分別于注射后1分鐘和11分鐘從眼眶后靜脈取血40pl，溶于4ml0.1%碳酸鈉(Na2C03)，溶液中搖勻，置于721分光光度計在波長600nm下比色測定光密度(簡稱OD)，并以0.1%忖&20)3溶液校零。最后將小白鼠處死,稱其體重、肝重和脾重.依下式計算廓清指數K和吞噬指數a:K=(lgODl-lgOD2)/t2-tl，c^Kl/3x體重/(肝重+脾重)其中K為廓清指數(indexofcarbonclearancetest),a為吞噬指數(phagocyticindex),lg為對數(Logarithm)，OD1和OD2為不同時間所取血樣的光密度，t2-tl為取兩血樣的時間差。由表2可以看出本實驗的環磷酰胺造模塊與空白組相比的吞噬指數a明顯降低，表明環磷酰胺造模成功。氨基酸鋅螯合物(114mg/kg，228mg/kg)使環磷酰胺所致免疫低下小白鼠的廓清指數K明顯提升。而氨基酸鋅螯合物(114mg/kg，228mg/kg及456mg/kg)使環磷酰胺所致免疫低下小白鼠的吞噬指數a均明顯提升。這表明氨基酸鋅螯合物對免疫低下的小白鼠明顯地有效增強免疫功能。表2.氨基酸鋅螯合物對免疫低下小白鼠碳粒廓清實驗的影響組齊U量(mg/kg)Ka空白組0.0346±0.01925.1112±1.2048CTX170.0172±0細93扁5士1.3710弁CTX+硫酸鋅0.0247±0.02494.2988±1.4347CTX+氨基酸鋅螯合物570.0307±0.02334.6179±1.6439CTX+氨基酸鋅螯合物1140.0528土0.0482※5.6575士1.3132※※CTX+氨基酸鋅螯合物2280.0406i0.0232※5.3520士1.2832※※CTX+氨基酸鋅螯合物4560.0448±0.03825.5209士1馬2※P為機率(probabiity)※P<0.05※※P<0.01給藥組與CTX比較#P<0.05CTX與空白比較實施例16氨基酸鋅螯合物(Zn:2Asp:2Lys)對環磷酰胺模型組小白鼠溶血素實驗取健康小白鼠雌雄各半，體重18-22g。在實驗室適應4日后均衡隨機分成7組,每組IO只。用于觀察藥物對環磷酰胺所致免疫功能低下小鼠的影響。此7組分別為空白組，環磷酰胺所致免疫功能低下組(CTX);環磷酰胺所致免疫功能低下組+給予硫酸鋅對照組(17mg/kg);環磷酰胺所致免疫功能低下組+給予氨基酸鋅螯合物(57mg/kg);環磷酰胺所致免疫功能低下組+給予氨基酸鋅螯合物(114mg/kg);環磷酰胺所致免疫功能低下組+給予氨基酸鋅螯合物(228mg/kg);環磷酰胺所致免疫功能低下組+給予氨基酸鋅螯合物(456mg/kg)。連續灌胃給藥16天給藥容積為10ml/kg。空白組和環磷酰胺模型組給予等容量蒸餾水。于給藥后第9天開始，所有組鼠均腹腔注射20%綿羊紅細胞混懸液0.2ml生理鹽水進行免疫。從給藥后第10天開始除空白組外的其它6組均腹腔注射環磷酰胺(CTX)50mg/kg，每日一次連續4天給藥容積為10ml/kg。于第16天末次給藥60分鐘后摘眼球取血，離心(2000轉/分鐘,5分鐘)，取血清稀釋500倍，取稀釋血清1ml與5%綿羊紅細胞混懸液0.5ml生理鹽水、10%補體1ml混合，放入37。C恒溫箱中保溫10min后在0。C冰柜中中止反應。離心(2000轉/分鐘，5分鐘)，取上清液lml加都氏試劑3ml搖勻放置10分鐘，以721分光光度計540nm比色測定光密度(OD)。另設一不加血清的空白對照，取其上清液作為比色調零基準計算血清的半數溶血素值HC50=樣品的吸光度值/綿羊紅細胞半數溶血時的吸光度x稀釋倍數。由表3看出環磷酰胺造模塊與空白組相比的溶血素水平明顯降低，表明環磷酰胺造模成功。氨基酸鋅螯合物(57mg/kg，114mg/kg，228mg/kg及456mg/kg)使環磷酰胺所致免疫低下小白鼠的溶血素水平明顯提升。這表明氨基酸鋅螯合物對免疫低下的小白鼠有效明顯地增強免疫功能。表3氨基酸鋅螯合物對小白鼠溶血素實驗免疫低下組的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>※※P〈0.01※※※P〈0.001與CTX組比較###p<0.05CTX組與空白組比較<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>權利要求1、一種生產氨基酸螯合物的方法，其方法包括兩個步驟第一個步驟是選自金屬氧化物或金屬氫氧化物的金屬離子與氨基酸反應產生氫氧基氨基乙酸鹽；第二步驟是第一個步驟所產生的氫氧基氨基乙酸鹽再與至少含有一個夠量的氨基的化合物與金屬離子反應，生成由一個金屬離子與多個氨基酸的配位體結合構成氨基酸螯合物，而其氨基酸配位體的數量與金屬離子的配位數是相等。2、如權利要求1所述的生產氨基酸螯合物的方法，其中，離子是選自硼、鈣、鉻、鈷、銅、鐵、鎂、錳、鉬、硒和鋅的金屬氧化物或金屬氫氧化物。3、如權利要求1所述的生產氨基酸螯合物的方法，其中，第一步驟的氨基酸為天冬氨酸和谷氨酸。4、如權利要求1所述的生產氨基酸螯合物的方法，其中，第二步驟的氨基化合物是一種氨基酸，選自丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺酸，天冬氨酸、半胱氨酸、胱氨酸、谷氨酸、谷酰氨酸、甘氨酸、組氨酸、異白氨酸、白氨酸、離氨酸、甲硫氨酸、鳥氨酸、苯丙氨酸、吡咯啶甲酸、絲氨酸、羥丁氨酸、色氨酸，酪氨酸、纈氨酸、硒半胱氨酸和吡咯賴氨酸。5、如權利要求4所述的生產氨基酸螯合物的方法，其中，氨基化合物包括縮二氨酸，縮三氨酸，或者多縮氨酸。6、如權利要求1所述的生產氨基酸螯合物的方法，其中，第二步驟至少包括兩個子步驟，第一子步驟是將氫氧基氨基乙酸鹽與一個含氨基的化合物反應生成第一個反應生成液，第二子步驟是以第一個反應生成液與第二個含氨基的化合物反應；第二個含氨基的化合物是具足夠量從而生成含有第二個氨基化合物的第二個反應生成液；此第二個反應生成物是由一個金屬離子與二個氨基酸的配位體結合所構成，而且其氨基酸配位體的數量與金屬離子的配位數是相等。7、如權利要求1所述的生產氨基酸螯合物的方法，其中，第二個步驟包括有如下子步驟，第一子步驟是把第一步驟所生成的氫氧基氨基乙酸鹽與一個含氨基的化合物反應生成相應的反應生成液，隨后將這個相應反應生成液又與不同的含氨基的化合物反應，最后是將前一步生成的相應的反應生成液與最后的一個含氨基的化合物反應從而生成含有最后產品的反應生成液；此最后產品是由一個金屬離子與多個氨基酸的配位體結合所構成，其氨基酸配位體的數量與金屬離子的配位數是相等。8、如權利要求l、6或7所述的生產氨基酸螯合物的方法，其中，所述的方法制成的氨基酸螯合物適用于人類、動物或禽類的營養產品，這種營養產品包括飲料、食品、營養滋補品以及抬狀、片狀、膠囊及液體。9、如權利要求8所述的生產氨基酸螯合物的方法，其所生產的氨基酸螯合物，特別是鋅氨基酸螯合物能非常顯著有效地增強免疫低下的小鼠免疫功能。全文摘要一種純氨基酸螯合物的生產方法及其用途，第一個步驟是將金屬氧化物或金屬氫氧化物先與氨基酸反應生成氫氧基氨基乙酸鹽。第二步驟是在第一個步驟所產生的氫氧基氨基乙酸鹽再與至少一個含氨基的化合物反應，而這個含有夠量的氨基的化合物與金屬離子反應。因此生成的氨基酸螯合物結構是由一個金屬離子與多個氨基酸的配位體結合所構成，而其氨基酸配位體的數量與金屬離子的配位數是相等，然后從反應生成液中分離純氨基酸螯合物。此第二個步驟也可以包括連續的幾個子步驟去與多個含氨基的化合物去反應。如上生成的純氨基酸螯合物可以應用到飲料，食品，保健品和醫藥中，特別是鋅氨基酸螯合物能非常顯著有效地增強免疫低下的小白鼠免疫功能。文檔編號A61K31/185GK101302171SQ200810127419公開日2008年11月12日申請日期2008年6月30日優先權日2008年6月30日發明者柯江忠,謝雪菊申請人:瑞發醫藥股份有限公司