專利名稱：一種制備高純度莫西克汀的方法
技術領域：
本發明涉及藥物化學領域，具體而言，本發明涉及一種制備高純度莫西克汀的方法。
背景技術：
本發明涉及一種制備莫西克汀的方法。莫西克汀(INN: Moxidectin)是一種大環內酯類的
農用抗生素，主要用于治療牛羊等動物體內的寄生蟲病，可以通過鏈霉菌發酵產生尼莫克汀
(1NN:Nemadectin)，再通過化學反應得到。美國專利US4916154A (其全部內容在此引入作為
參考)提供了一種制備莫西克汀的方法，即將鏈霉菌發酵后產生的發酵液經過固液分離，浸取
后得到的尼莫克汀溶液通過萃取，硅膠柱層析，凝膠層析得到純度90%以上(HPLC)的尼莫克
汀，將提純的尼莫克汀通過上保護氧化，脫保護肟化反應得到莫西克汀，再經過硅膠柱層析得
到高純度的莫西克汀。該方法能得到純度90%以上的莫西克汀，但該方法工藝復雜，需要操作
及控制都繁瑣的硅膠凝膠層析，該層析溶劑用量較大，對進入硅膠柱的上柱物無水要求高，重
復使用性低，致使該層析收率降低，成本較高。
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發明內容
本發明致力于提供一種更簡單有效成本更低的制備高純度莫西克汀的方法。我們經過研究驚 奇的發現，通過固液分離，浸取后得到的尼莫克汀通過一種廉價的可以重復使用多次的大孔吸 附樹脂去除大部分發酵液殘留的糖類，蛋白質及一部分脂溶性雜質，經樹脂層析后得到的尼莫
克汀初步提純液純度在40% 50%,我們更驚奇的發現，上述初步提純液直接上保護反應得到上 保護液經過大孔吸附樹脂層析后得到純度85%以上的上保護物，該組分經過氧化，脫保護肟化 后經大孔吸附樹脂層析得到純度93%以上的莫西克汀溶液，從而我們可以通過常規的濃縮結晶 把莫西克汀從溶液中分離出來。
本發明涉及的預提純的尼莫克汀的制備方法參見THE JOURNAL OF ANTIBIOTICS(4， 1988， 519-528 )，其固形物所含的尼莫克汀含量在15%—25%，其全文在此引入作為參考。 本發明涉及的制備高純度的莫西克汀的方法的特征在于.-
(1) 將預提純的尼莫克汀溶液經大孔吸附樹脂層析，采用極性有機溶劑和水的混合溶液洗脫；
(2) 將上述洗脫液通過二氯甲垸萃取后經常規濃縮去除溶劑；
(3) 將上述濃縮物通過上保護反應得到上保護液；
(4) 將上述上保護液通過大孔吸附樹脂層析，所述層析用極性溶劑和水混合溶劑洗脫；
(5) 將上述上保護洗脫液經過氧化，脫保護，肟化反應得到莫西克汀反應液；
(6) 上述莫西克汀反應液經大孔吸附樹脂層析，所述層析用極性溶劑和水混合溶劑洗脫，得到 的洗脫液即為高純度的莫西克汀溶液；
(7) 如有需要可用常規的濃縮結晶技術將產物從溶液中分離出來。
其中步驟(1)進入樹脂柱的尼莫克汀溶液優選為經過固液分離，浸取后得到的尼莫克汀 溶液(參照THE JOURNAL OF ANTIBIOTICS(4, 1988 519-528 ))。其中步驟(1)大孔吸附 樹脂為一種非離子交換非極性的顆粒度較粗的大孔樹脂，其中優選20-40目的大孔吸附樹脂。 其中步驟(4) (6)大孔吸附樹脂為一種非離子交換非極性的顆粒度較細的大孔樹脂，其中優 選80-100目的大孔吸附樹脂；步驟(1) (4) (6)所述極性溶劑包括乙醇、丙酮或者甲醇， 優選溶劑為乙醇；在所述混合溶劑中，優選所述的極性溶劑的濃度為50%—90% (V/V)，更 優選50-75% (V/V );優選步驟(1) (4) (6)進入樹脂柱的料液濃度為0.5-1% (W/W)。
與現有技術中的方法相比，本發明的方法由于使用了大孔樹脂層析代替的硅膠層析分離， 該方法不僅穩定可控、容易工業化，而且提高了產品純度、質量和收率。
本發明測定尼莫克汀及莫西克汀的含量方法采用高效液相色譜法，下面通過實施例來進一 步闡述本發明所提到的方法。
具體實施例方式
下面通過實施例進一步說明本發明。應該理解的是，本發明實施例的制備方法僅僅是用于
說明本發明，而不是對本發明的限制，在本發明的構思前提下對本發明制備方法的簡單改進都 屬于本發明要求保護的范圍。除非另有說明，本發明中的百分數是重量百分數，另外，本發明 說明書中的(W/W)是指重量比或者重量比濃度，(V/V)是指體積比或者體積比濃度。
實例l:制備高純度莫西克丁的方法
1，鏈霉菌發酵產生的發酵液經固液分離，浸取后的得到的尼莫克汀預提純液100g，純度15 %,流過大孔吸附樹脂柱，樹脂型號HP-20 (40目，三菱化學，日本)，柱內填充物體積10L， 流完后改用乙醇水溶液梯度洗脫，從50%—90% (V/V)梯度洗脫，控制洗脫流速每小時1一L5 倍柱體積，收集尼莫克汀組分，洗脫組分加入1/10體積的二氯甲烷萃取后減壓濃縮至干。濃縮 物中含尼莫克汀85g，含量46%。
2，上述尼莫克汀濃縮物經上保護反應(常規反應)后得到上保護物80g，流過大孔吸附樹 脂柱，樹脂型號H-60 (80目，購自南京林化研究所)，柱內填充物體積10L,流完后改用乙醇水 洗脫劑洗脫，從60%—80% (V/V)梯度洗脫，控制洗脫流速每小時1 — 1.5倍柱體積收集含上 保護液純度在85%以上的組分，加入1/10(V/V)洗脫液體積的二氯甲烷萃取，減壓濃縮至干。 該濃縮物中含上保護物68g，純度87.8%。
3，上述上保護濃縮物經氧化，脫保護，肟化反應(常規反應)后得到莫西克汀55g,流過 大孔吸附樹脂柱，樹脂型號H-60 (80目，購自南京林化研究所)，柱內填充物體積10L，流完后 改用乙醇水洗脫劑洗脫，從50%—70% (V/V)梯度洗脫，控制洗脫流速每小時1一1.5倍柱體 積，收集含莫西克汀純度在93X以上的組分，合并后含莫西克汀42g，純度94.8X，加入1/10(V/V) 洗脫液體積的二氯甲垸萃取，減壓濃縮至干。
4，將上述濃縮物加入無水乙醇至莫西克汀濃度40%，溶解過濾后放入冰箱48小時后過濾干 燥得到固體的莫西克汀，經測定莫西克汀含量94.6% (折干)。
實例2:制備高純度莫西克丁的方法
l，鏈霉菌發酵產生的發酵液經固液分離，浸取后的得到的預提純液，純度18%，固形物中含 尼莫克汀1.2% (W/W) 120g，流過大孔吸附樹脂柱，樹脂型號XAD-1600 (40目，羅姆-哈斯公司 生產，美國)，柱內填充物體積12L，流完后改用丙酮水溶液梯度洗脫，從50%—80% (V/V) 梯度洗脫，控制洗脫流速每小時1一1.5倍柱體積，收集尼莫克汀組分，洗脫組分加入1/10體 積的二氯甲垸萃取后減壓濃縮至干。濃縮物中含尼莫克汀98g，含量43.6%。
2,上述尼莫克汀濃縮物經上保護反應后得到上保護物95g，流過大孔吸附樹脂柱，樹脂型號 H-60 (80目，南京林化研究所)，柱內填充物體積10L，流完后改用丙酮水洗脫劑洗脫，從60
% — 75% (V/V)梯度洗脫，控制洗脫流速每小時1一1.5倍柱體積收集含上保護液純度在85% 以上的組分，加入1/10(V/V)洗脫液體積的二氯甲烷萃取，減壓濃縮至干。該濃縮物中含上保護 物80g，純度86. 5%。
3, 上述上保護濃縮物經氧化，脫保護，肟化反應后得到莫西克汀65g，流過大孔吸附樹脂柱， 樹脂型號H-60 (80目，南京林化研究所)，柱內填充物體積IOL，流完后改用丙酮水洗脫劑洗脫， 從50%—70% (V/V)梯度洗脫，控制洗脫流速每小時1一1.5倍柱體積，收集含莫西克汀純度 在93%以上的組分，合并后含莫西克汀48g，純度93.5%，加入1/10(V/V)洗脫液體積的二氯 甲垸萃取，減壓濃縮至干。
4, 將上述濃縮物加入無水乙醇至莫西克汀濃度40%,溶解過濾后放入冰箱48小時后過濾干 燥得到固體的莫西克汀，經測定莫西克汀含量93.2% (折干)。
實例3:制備高純度莫西克丁的方法
1, 鏈霉菌發酵產生的發酵液經固液分離，浸取后的得到的預提純液，純度13.8%，固形物 中含尼莫克汀0.8% (W/W) 80.6g，流過大孔吸附樹脂柱，樹脂型號HP-20 (40目，三菱化學， 日本)，柱內填充物體積10L，流完后改用乙醇水溶液85%濃度洗脫，控制洗脫流速每小時l一 1.5倍柱體積，收集尼莫克汀組分，洗脫組分加入1/10體積的二氯甲垸萃取后減壓濃縮至干。 濃縮物中含尼莫克汀68.2g，含量41.5%。
2, 上述尼莫克汀濃縮物經上保護反應后得到上保護物63.8g，流過大孔吸附樹脂柱，樹脂型 號H-60 (80目，南京林化研究所)，柱內填充物體積10L，流完后改用乙醇水溶液75%洗脫，控 制洗脫流速每小時l一l. 5倍柱體積收集含上保護液純度在85%以上的組分，加入1/10(V/V)洗 脫液體積的二氯甲垸萃取，減壓濃縮至干。該濃縮物中含上保護物53.8g，純度86.2%。
3, 上述上保護濃縮物經氧化，脫保護，肟化反應后得到莫西克汀43.6g，流過大孔吸附樹脂 柱，樹脂型號H-60 (80目，南京林化研究所)，柱內填充物體積7L，流完后改用乙醇水溶液70% 洗脫，控制洗脫流速每小時1一1.5倍柱體積，收集含莫西克汀純度在93%以上的組分，合并后 含莫西克汀29.6g，純度93.6%,加入1/10(V/V)洗脫液體積的二氯甲垸萃取，減壓濃縮至干。
4, 將上述濃縮物加入無水乙醇至莫西克汀濃度40%,溶解過濾后放入冰箱48小時后過濾干 燥得到固體的莫西克汀，經測定莫西克汀含量93.2% (折干)。
權利要求
1.一種制備高純度莫西克汀的方法，其特征在于(1)將預提純的尼莫克汀溶液經大孔吸附樹脂層析，采用極性有機溶劑和水的混合溶液洗脫；(2)將上述洗脫液通過二氯甲烷萃取后經常規濃縮去除溶劑；(3)將上述濃縮物通過上保護反應得到上保護液；(4)將上述上保護液通過大孔吸附樹脂層析，所述層析用極性溶劑和水混合溶劑洗脫；(5)將上述上保護洗脫液經過氧化，脫保護，肟化反應得到莫西克汀反應液；(6)上述莫西克汀反應液經大孔吸附樹脂層析，所述層析用極性溶劑和水混合溶劑洗脫，得到的洗脫液即為高純度的莫西克汀溶液；(7)如有需要可用常規的濃縮結晶技術將產物從溶液中分離出來。
2. 根據權利要求1的方法，其中步驟(1)進入樹脂柱的預提純的尼莫克汀溶液為經過固液分 離，浸取后得到的尼莫克汀溶液。
3. 根據權利要求1的方法，其中步驟(1)的大孔吸附樹脂為一種非離子交換非極性的20-40 目的大孔吸附樹脂。
4. 根據權利要求l的方法，其中步驟(4)和(6)的大孔吸附樹脂為一種非離子交換非極性的 80-100目的大孔吸附樹脂。
5. 根據權利要求l一4之一的方法，其中步驟(1) 、 (4)或(6)所述極性有機溶劑選自乙醇、 丙酮和甲醇。
6. 根據權利要求5的方法，其中步驟(1) 、 (4)或(6)所述極性有機溶劑為乙醇。
7. 根據權利要求5的方法，所述的極性溶劑的濃度為50%_90% (V/V)。
8. 根據權利要求7的方法，所述極性溶劑的濃度為50% — 75% (V/V)。
9. 根據權利要求l的方法，其中步驟(l)、 (4)或(6)進入樹脂柱的料液濃度為0.5-1% (W/W)。
全文摘要
本發明涉及一種制備高純度莫西克汀的方法，該方法包括以下步驟(1)將預提純的尼莫克汀溶液經大孔吸附樹脂層析，采用極性有機溶劑和水的混合溶液洗脫；(2)將上述洗脫液通過二氯甲烷萃取后經常規濃縮去除溶劑；(3)將上述濃縮物通過上保護反應得到上保護液；(4)將上述上保護液通過大孔吸附樹脂層析，所述層析用極性溶劑和水混合溶劑洗脫；(5)將上述上保護洗脫液經過氧化，脫保護，肟化反應得到莫西克汀反應液；(6)上述莫西克汀反應液經大孔吸附樹脂層析，所述層析用極性溶劑和水混合溶劑洗脫，得到的洗脫液即為高純度的莫西克汀溶液，如有需要可用常規的濃縮結晶技術將產物從溶液中分離出來。本發明的方法由于使用了大孔樹脂層析代替的硅膠層析分離，該方法不僅穩定可控、容易工業化，而且提高了產品純度、質量和收率。
文檔編號A61P33/00GK101372492SQ200810126358
公開日2009年2月25日 申請日期2008年6月26日 優先權日2007年6月29日
發明者繆建玉 申請人:浙江海正藥業股份有限公司