專利名稱：：一種含有褐藻多糖硫酸酯和蜂膠的組合物和其應用的制作方法
技術領域：
：本發明公開了一種藥用組合物，和其在調節人體免疫力中的應用。更具體地說，本發明公開了一種褐藻多糖硫酸酯和蜂膠作為活性成分的組合物。
背景技術：
：免疫系統是人體內最重要的生物系統之一，其功能對人體有很大影響。一旦出現免疫系統功能失調，將會導致人體對疾病抵抗能力弱化。近年來免疫失調、免疫功能低下人群比例越來越大，長期以往將導致免疫系統疾病患者急劇增多。免疫系統是人體抵御病原菌侵犯最重要的保衛系統，這個系統由免疫器官(骨髓、胸腺、脾臟、淋巴結、扁桃體、小腸集合淋巴結、闌尾等)、免疫細胞(淋巴細胞、單核吞噬細胞、中性粒細胞、嗜堿粒細胞、嗜酸粒細胞、肥大細胞、血小板等)，以及免疫分子(補體、免疫球蛋白、細胞因子等)組成。它是機體防衛病原體入侵最有效的武器，但其功能的亢進會對自身器官或組織產生傷害。在很多自身疾病中，免疫系統功能失常往往是一個重要致病原因。免疫系統各組分功能的正常是維持機體免疫功能相對穩定的保證，任何組分的缺陷或功能的亢進都會給機體帶來損害。免疫系統各組分廣布全身，錯綜復雜，特別是免疫細胞和免疫分子在機體內不斷地產生、循環和更新。免疫系統具有高度的辨別力，能精確識別自己和非己物質，以維持機體的相對穩定性；同時還能接受、傳遞、擴大、儲存和記憶有關免疫的信息，針對免疫信息發生正和負的應答并不斷調整其應答性，因此免疫系統功能的失調對人體極為不利人體的識別能力異常容易導致過敏現象的發生(使用某種食物、注射藥物出現過敏反應，甚至導致休克)，反之則會引起反復感染；人體的自我穩定能力異常，會使免疫系統對自身的細胞作出反應，引發自身免疫疾病。由此可見，人體免疫系統對人類的健康起著舉足輕重的作用，如果它的功能不穩定，人體很有可能會被病毒、細菌這些病原體侵害。由于免疫系統具有如此重要的作用，因此尋找一種無毒或者低毒、能夠有效調節人體免疫力的藥物成為一個值得關注的研究領域。海藻是海洋水產資源的重要組成部分，海藻門褐子綱海帶目海帶科海帶屬的海帶(Lam/.nar/ajaponicaaresch)是產量最高的海藻，我國的海帶產量位居世界首位。海帶又稱海洋蔬菜，含有豐富的功能性物質，如碘、甘露醇、維生素(A、B、C、F)、牛磺酸以及人體所需要的微量元素硒、鈷、鉻，是一種既有食用價值，又有藥用、保健、工業、農業價值的大型藻類產品，在《本草綱目》、《神農本草》、《食用本草》及《中國中草藥匯編》中均有記載。海帶中富含的多糖類物質，其結構迥異、性質不同，具有復雜的多方面的生物活性，在醫藥、化工、食品行業應用前景廣闊。褐藻多糖硫酸酯是一類硫酸化的多糖，存在于褐藻中，首先由Kylin于1913年用稀酸從海帶中提取出來。并定義為含有相當數量的巖藻糖(fucose)和硫酸基的多糖，或含有硫代ci一L一巖藻糖的多糖。現今根據國際命名原則統一稱為fucoidan(褐藻糖膠或褐藻聚糖，巖藻聚糖，褐藻多糖硫酸酯)，也有人稱其為fucan和fucosan。首次從褐藻掌狀海帶中提取出褐藻多糖硫酸酯以來，人們對不同來源的褐藻多糖硫酸酯進行了大量的研究。現在人們對褐藻多糖硫酸酯的組成有了較為清晰地了解，它是一類化學組成和結構非常復雜的多糖，以巖藻糖和硫酸基為主，隨著藻類的不同還含有半乳糖，木糖,糖醛酸等其他成分。海帶Fucoidan山巖藻糖。半乳糖，木糖，糖醛酸，阿拉伯糖等單糖組成。以巖藻糖和半乳糖為主，二者比例大約為3:1。本發明的所述的褐藻多糖硫酸酯可以通過多種方式獲取，已經有多篇文獻和專利涉及到褐藻多糖硫酸酯的制備。包括CN1129109A則公開了由干海帶浸泡、數次過濾、二次乙醇提取、一次乙醇洗滌、配合調節ra范圍等的堿凝析法。CN1344565A則公開了另一種制備方法，包括原料預處理、控溫攪拌浸提、離心、濃縮、乙醇沉淀、無水乙醇脫水等步驟。CN1517356A則將巖藻聚糖硫酸酯配制成水溶液，加入過氧化氫、次氯酸或亞硝酸及其鹽，將所得混合溶液加熱，用截留分子量3000-5000的膜超濾，得到巖藻聚糖硫酸酯低聚糖。CN1670028A、CN1392160A、CN1197674A也分別公開了采用絮凝等方法制備海藻多糖，這些制備方法均是本發明所用褐藻多糖硫酸酯可以接受的。海帶硫酸多糖對小鼠腹腔巨噬細胞激活及細胞毒作用的影響(聊城大學學報，2004.17(2)56-57)研究認為海帶硫酸多糖能激活小鼠腹腔巨噬細胞，增強其免疫機能，對抵抗和殺死腫瘤細胞具有積極作用。海帶硫酸多糖對小鼠腹腔巨噬細胞的免疫調節作用(中國免疫學，2000.2(16))研究了一種包含L-巖藻糖、D-半乳糖等平均分子量為15000D的海帶多糖對小鼠吞噬細胞的激活作用。以腫瘤抑制率衡量，抑制腫瘤細胞病變有效率達到了86.5%。說明海帶多糖可以有效激活巨噬細胞，分泌細胞毒效應分子，提高巨噬細胞過氧化物酶活性以及吞噬功能。黃酮類化合物泛指兩個具有酚羥基的苯環(A-與B-環)通過中央三碳原子相互連結而成的一系列化合物黃酮類化合物。結構中常連接有酚羥基、甲氧基、甲基、異戊烯基等官能團。此外，它還常與糖結合成苷。多數科學家認為黃酮的基本骨架是由三個丙二酰輔酶A和一個桂皮酰輔酶A生物合成而產生的。經同位素標記實驗證明了A環來自于三個丙二酰輔酶A，而B環則來自于桂皮酰輔酶A.黃酮廣泛存在自然界的某些植物和漿果中，總數大約有4千多種,其分子結構不盡相同，如蕓香苷、橘皮苷、櫟素、綠茶多酚、花色糖苷、花色苷酸等都屬黃酮。不同分子結構的黃酮可作用于身體不同的器官，如山楂--心血管系統，蘭梅一眼睛，酸果一尿路系統，葡萄一淋巴、肝臟，接骨木果一免疫系統。蜂膠(plopolis)被譽為"紫色黃金"，是蜜蜂用從植物的嫩芽及樹干上采集的樹脂并混入自身上顎腺分泌物和蜂蠟混合而成的一種具有芳香氣味的膠狀固體物。蜂膠具有較強的抑菌作用，能治療多種疾病，并具有天然的抗氧化性能和增強機體的免疫功能。蜂膠的生物學、藥理學及醫療功效主要與蜂膠中所含的黃酮成分有關。蜂膠有"黃酮化合物寶庫"之美譽，含有40余種黃酮化合物，現己從蜂膠中分離鑒定出的黃酮類化合物有白楊素、芹菜素、金合歡素、槲皮素、高良姜素、蘆丁、山萘甲黃素、鼠李素、松屬素、5，7—二羥基一3，4一二甲基黃酮、5—羥基-4和7—二甲氧基雙氫黃酮等。但蜂膠來源不同，蜂膠黃酮成分及其含量不同，黃酮成分與產地及采集季節不同而有明顯差異。本發明指的黃酮涵蓋蜂膠中所有黃酮類化合物。蜂膠中黃酮類化合物的研究及應用(醫藥產業資訊，2006.4.3(11)130-131)論述了黃酮類化合物的醫藥用途，其中包括了蜂膠黃酮在提高人體免疫力中的應用。蜂膠黃酮增強免疫作用的研究(揚州大學學報農業與生命科學版，2006.3(27)21-23)PF(蜂膠黃酮)能促進免疫雛雞抗體生成和外周血淋巴細胞增殖，促進體外培養的雞脾臟T淋巴細胞增殖，且有一定的量效和時效關系。
發明內容本發明的目的在于提供一種褐藻多糖硫酸酯組合物及其在調節人體免疫力領域的應用。發明人研究發現通過將褐藻多糖硫酸酯、蜂膠或蜂膠或同類提取物組合，對調節人體免疫力具有協同的、突出的效果，其長期使用安全性和效果均優于現有產品。本發明的創造性在于采用褐藻多糖硫酸酯，結合蜂膠或其黃酮類提取物作為組合物，并將其用于調節人體免疫力。本發明組合物，不僅保留了褐藻多糖硫酸酯本身的調節免疫功能，同時加入蜂膠輔助調節功效。考慮到蜂膠還具有抗氧化、清除自由基和延緩衰老的功效，本發明組合物具有廣泛的適用性。應用于受眾人群時，能全方位提高得他們的身體素質。應用本發明可同時調節體液免疫、吞噬細胞、淋巴系統免疫能力，與市場上現有的單一調節體液免疫的藥品/保健品相比，本發明組合物的作用是全方位的。單純的褐藻多糖硫酸酯藥品/保健品和蜂膠多集中于調節身體的某個特定方面的機能，導致一方面使用者在選擇產品的時候出現困惑，另一方面更重要的是來源于多個不同廠家的藥品/保健品在安全性、毒性等方面無法獲得統一的保證，給消費者的用藥/食用安全構成一定威脅。試驗證明，本發明的組合物可以有效提高人體免疫力和抗疲勞能力，同時進一步的實驗證明本發明不僅是安全無害的，其功效相對于單獨的褐藻多糖硫酸酯、蜂膠均有長足的提高。本發明所用的蜂膠不僅可以是天然收獲的蜂膠，也可以是對其進行提取獲得的黃酮類提取物，根據本領域常識和業已上市的保健品成分公開分析，本領域技術人員容易知道人參、西洋參、海參等參類植物提取物、黃芪提取物也可以獲得結構與功效與蜂膠黃酮相似的黃酮類物質，因此本發明技術方案實質上還包含了這些植物的黃酮成分。同時，蜂膠中可以直接提取黃酮，也可采取一些簡單的提取方法獲得蜂膠提取物，使得其中包含有黃酮類物質、芳香酸和酯等成分，很顯然，這是涵蓋在本發明范圍之內的。本發明的技術方案涵蓋了褐藻多糖硫酸酯和蜂膠提取物的組合物。本發明技術方案提供了一種褐藻多糖硫酸酯和蜂膠或其黃酮類提取物的組合物，包含活性成分褐藻多糖硫酸酯和具有明顯協同作用活性的蜂膠或其黃酮類提取物，褐藻多糖硫酸酯和蜂膠或蜂膠黃酮類提取物重量份數比可以是1:100-100:1，優選為l:30-30:1，最優選為1:10-10:1。本發明發明人同時研究了將褐藻多糖硫酸酯、蜂膠或其黃酮類提取物組合物加入維生素C所帶來的效果改善，申請人的實驗顯示維生素C可以在本發明組合的基礎上進一步對本發明效果有所提高，因此本發明還包括著這樣一個技術方案在本發明組合物的基礎上，加入適量維生素C來改善本發明的實施效果。本發明所用的褐藻多糖硫酸酯取材于海藻類生物，包括任何可以提供褐藻多糖硫酸酯的植物，包括馬尾藻、裙帶菜、羊棲菜、鼠尾藻、海黍子、昆布、泡葉藻或墨角藻等，優選的植物為海帶、馬尾藻，無論是人工養殖的還是天然生長的。從這些植物中獲得的褐藻多糖硫酸酯方法可以引用
背景技術：
中所述的技術方法，所獲得的分子量在十萬數量級水平上。從海帶、馬尾藻、海黍子中獲得的褐藻多糖硫酸酯平均分子量分別為350KD、550KD、980KD。本發明應用時，可以使用這些分子量比較高的褐藻多糖硫酸酯，優先選用分子量在5000D-200KD之間的低分子量的褐藻多糖硫酸酯，所用低分子量褐藻多糖硫酸酯可以從海藻中提取也可以從高分子量褐藻多糖硫酸酯解聚而來。需要指出的是，隨著技術的持續進步，可供本發明應用的褐藻多糖硫酸酯分子量變化是落在本發明范圍內的。所用的褐藻多糖硫酸酯的純度不小于50%，優選為不小于70%，更優選為不小于90%，最佳是不小于95°/。。根據所用藻類種類不同，所獲得的褐藻多糖硫酸酯主要的基團巖藻糖、硫酸基含量存在一定的差異，但這種差異不影響本發明應用于防治化學性肝損傷，所帶來的只是保健效果的強化或者弱化，這是屬于本發明范圍之內的。本發明所指的褐藻多糖硫酸酯涵蓋化學上所普遍接受的褐藻多糖硫酸酯定義的一類化學物質。本發明所用的黃酮可以是蜂膠中提純出的黃酮也可以是含有黃酮成分的蜂膠初步提取物，還可以使蜂膠藥材、蜂膠原料等。己經有多種方案公開了提取黃酮的方法。中國專利申請CN2003101100850,CN031317529,CN031506488等均公開了若干從蜂膠中提取黃酮化合物組分的方法。蜂膠黃酮提取方法研究(食品科學，2003.5(24)100-10)綜述了現有的若干種從蜂膠中獲得黃酮的技術工藝。在本發明中，一個優選的工藝是將蜂膠原料或者蜂膠藥材粉碎成粗粉，按照每g粗粉對應5-10倍質量的50°/。-95%的乙醇進行浸提，溶液溫度控制在50-80°C，浸提2-5次，每次1-3小時。合并濾液，然后減壓回收溶劑，干燥即可得本發明所述的蜂膠黃酮。本發明針對的保健品泛指可以提高和保護人體健康狀態的產品，包括食物和飲料。所指的食物包括但不限于小麥制品、淀粉制品、肉類制品、植物提取物、奶乳、保健糖等；所指的飲料包括所有人體可飲用的液體制品包括普通的飲用飲料和用于提高特定機能的功能飲料，比如運動飲料。本發明的組合物可以與其它營養物質或輔料結合使用。這些營養物質包括淀粉、糊精、葡萄糖、乳糖、甘露糖、蔗糖、微晶纖維素、糖漿、多種氨基酸、鈣鐵鋅等。本發明組合物制劑時還可與輔料搭配，可接受的輔料包括賦形劑、抗氧劑、PH調節劑、防腐劑、等滲劑等任何藥學/營養學上安全性有保證的輔料。本發明組合物可以制備為多種類型，包括膠囊、片劑、粉劑、溶液劑、顆粒、口含品等，改變保健品的形狀屬于本發明的覆蓋范圍。申請人對本發明組合物功能進行了分析，發現根據實際情況調節本發明使用量對調節人體免疫力有積極作用。具體實施例方式如下實施例旨在說明本發明具體實施方案，并不限定本發明保護范圍。在下列實施例中，所用的蜂膠黃酮是這樣制備的將蜂膠藥材粉碎成粗粉，按照每g粗粉對應7倍質量的80。/。的乙醇進行浸提，溶液溫度控制在65。C，浸提3次，每次2小時。合并濾液，然后減壓回收溶劑，干燥即可得本發明蜂膠黃酮。制備實施例1褐藻多糖硫酸酯2mg蜂膠黃酮20mg淀粉20mg甘露醇20mg葡萄糖15mg微晶纖維素10mg硅膠lmg將上述成分攪拌混勻成組合物，測定重量后制成膠囊。制備實施例2褐藻多糖硫酸酯60mg蜂膠黃酮10mg淀粉20mg葡萄糖15mg微晶纖維素15mg硅膠2mg將上述成分攪拌混勻成組合物，制成口含片。制備實施例3褐藻多糖硫酸酯25mg蜂膠黃酮2.5mg血紅素鐵7mg維生素C6ug葉酸100ug將上述成分混勻研磨成粉末溶解于水至500ml，進行密封、滅菌和分裝，制備為符合特定規格的口服液。在大規模生產中本發明制備口服液可以在用量上進行放大，充分溶解后進行罐裝然后密封、滅菌和分裝為符合規格的口服液，比如500ml，1L等。實驗實施例1實驗項目急性毒性試驗實驗材料小白鼠，健康狀況良好。本發明組合物，其中褐藻多糖硫酸酯蜂膠黃酮質量比3:1實驗方法急毒性試驗選擇小白鼠40只，雌雄各20只，體重為18-22g。按照雌雄小鼠各隨機分成四個劑量組16.00，7.27，3.31,1.50g/KG(bw),小鼠灌胃后連續觀察15d，記錄毒性表現和死亡情況。試驗結果表l小鼠急毒性試驗結果劑量組(g/kgmm.Bw)試驗動物數死亡動物數試驗動物數死亡動物數<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>假定生產的保健品以成人60kg體重日攝入量0.05g/kg.bw,對照我們采用的最高對照組，相當于成人攝入量的320倍。試驗觀察十四天未見中毒癥狀，死亡數為零。受試物對兩種性別的小鼠急毒性LDso均大于15.OOg/kg.bw.根據現行的毒性分級，屬于無毒級別。實驗實施例2實驗材料選用雌性小鼠，隨機分為四組，體重18-22g。本發明組合物，其中褐藻多糖硫酸酯蜂膠黃酮3:l，溶解于去離子水制成混懸液。注射用環磷酰胺(cyclophospha—mide，Cy)，用于免疫力低下模型構建。綿羊紅細胞(she印e—rythrocyte，SRBC)。實驗方法按照人體正常使用量成人60kg體重日攝入量0.05g/kg.Bw，設計分成高中低三個劑量組0.25，0.10，0.05g/kg.Bw(劑量分別相當于正常人使用量的5，2，1倍)，每組十只。另外設置褐藻多糖硫酸酯對照組、蜂膠黃酮對照組、模型組、陰性對照組，分別給予0.10g/kg.Bw的褐藻多糖硫酸酯、蜂膠黃酮、蒸餾水、蒸餾水，分別記為A對照組、B對照組、模型組、對照組。采用灌胃給藥，每日一次。20天后測定各項免疫指標。其中在第十五天時除陰性對照組外每只小鼠腹腔注射Cy50mg/kg(對照組給予等容量生理鹽水)連續2d，制備免疫功能低下的動物模型.第二十天每鼠尾靜脈注入離心后50%的印度墨汁(O.lml/10g)，2min和10min后分別從眼球取血401，并將其加到4ml0.1%Na線溶液中，600nm波長測定吸光度值，按文獻方法測定吞噬指數。記錄小鼠體重，活殺取胸腺并稱濕重，以小鼠胸腺重/體重(mg/g)作為胸腺指數。半數溶血值、淋巴細胞轉化率的測定方法采用常規的文獻方法。DTH測試方法如下制備DTH模型，第十五天每鼠腹部涂1%DNFB丙酮麻油溶液50ml致敏，次日同劑量強化l次，同時除對照組外制備免疫低下模型，該模型構建方法參考上述用于測試胸腺指數、吞噬指數的模型構建方法。致敏后三天，將1%DNFB溶液均勻涂抹于小鼠右耳進行攻擊。攻擊24h，引頸處死小鼠，剪下左右耳殼，用直徑9mm打孔器打下圓耳片稱重，左右耳片之差為腫脹度。抗疲勞能力測試無關于免疫力，因此沒有模型組，也無需采用免疫力低下模型構建，只需對照組即可。結果1表2對小鼠遲發型變態反應DTH的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>結果2:表3對正常小鼠免疫器官胸腺指數的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>結果3:表4對小鼠巨噬細胞功能的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>高劑量106.971±0.04結果4:表5對小鼠淋巴細胞轉化率的影響組別動物數轉化率對照組100.997±0.0524模型組100.583±0.0421A對照組100.770±0.0304B對照組100.784±0.0612低劑量100.850±0.0170中劑量100.908±0.0114高劑量100.900±0.0070結果5:表6對小鼠體液免疫能力的影響組別動物數半數溶血值對照組10184.80±14.10模型組10159.13±12.04A對照組10168.22±12.11B對照組10160.47±15.03低劑量10170.67±11,92中劑量10179.27±11.21高劑量10177.22±10.70結果6:表7對小鼠抗疲勞能力的影響組別動物數游泳時間min對照組1032.80±7.10A對照組1079.22±12.10B對照組1050.47±15.00低劑量1068.67±10.52中劑量1089.27±11.20高劑量10118.02±10.50上述試驗結果顯示，本發明組合物有效提高了人體免疫能力。對比對照實驗組的的數據，本發明提高免疫力的效果優于單獨使用單一成分。應用本發明組合物具有調節免疫功能的作用，并且這種調節作用涵蓋了調節體液系統和吞噬細胞及淋巴系統，能夠全方位的增強人體免疫力。表現在l.在正常劑量下全方位的增強免疫功能，包括體液免疫、吞噬細胞、淋巴免疫，而單獨的褐藻多糖硫酸酯或者蜂膠黃酮作用沒有這么全面。比如蜂膠黃酮單一組分淋巴免疫效果較好，但是體液免疫、抗疲勞效果不佳。2.把本發明組合物單位濃度提高一定劑量(比如5倍量)，可以抑制增強效果，或者降低人體免疫機能。說明本發明組合物可以雙向調節免疫機能，高劑量下對免疫力亢奮有一定抑制作用。權利要求1.一種藥用組合物，其特征是該組合物包含褐藻多糖硫酸酯和蜂膠或蜂膠黃酮類提取物。2.根據權利要求1的組合物，包含褐藻多糖硫酸酯和蜂膠。3.根據權利要求1的組合物，包含褐藻多糖硫酸酯和蜂膠的黃酮提取物。4.根據權利要求1的組合物，其特征是褐藻多糖硫酸酯和蜂膠或蜂膠黃酮類提取物的重量比為1:100-100:1。5.根據權利要求1的組合物，其特征是組合物可以是藥物或保健品的形式。6.根據權利要求1的組合物，其特征是組合物中還含有藥學可接受的輔料或保健品可接受的添加劑。7.根據權利要求1的組合物，其特征是組合物中還可含有維生素C。8.根據權利要求1的組合物，組合物為片劑、丸劑、膠囊劑、顆粒劑、粉劑、口服液或糖漿。9.以上任一權利要求中的組合物在制備治療調節人體免疫力的藥物或保健品中的用途。全文摘要本發明公開了一種褐藻多糖硫酸酯組合物及其在調節免疫力中的應用，所述組合物含有褐藻多糖硫酸酯和蜂膠或其黃酮類提取物作為活性調節成分。試驗表明，本發明組合物應用于藥品或者保健品長期服用對調節人體免疫系統平衡、增強對疾病抵御能力有輔助作用，同時本發明對提高人體的抗疲勞能力也有促進作用。本發明同時公開了組合物的制備工藝。文檔編號A61K9/14GK101361757SQ20081011949公開日2009年2月11日申請日期2008年9月1日優先權日2008年9月1日發明者郝守祝申請人:北京世紀博康醫藥科技有限公司