專利名稱：一種多烯紫杉醇脂質制劑及其制備方法
技術領域：
本發明涉及醫藥技術領域，具體涉及一種多烯紫杉醇脂質制劑及其制備方法。
背景技術：
多烯紫杉醇(Docetaxel， Taxotere )是一種半合成的抗腫瘤藥物，是FDA批 準的紫杉烷類抗癌藥物之一。多烯紫杉醇是從歐洲紫杉樹針葉中提取的無活性前體
(二萜紫杉垸io-脫乙酰基漿果赤霉素in)開始半合成制得的，其化學結構與紫杉
醇(Paclitaxel， Taxol )相比存在兩個改變，其一是在紫杉酚B環的C-10位置 上用羧基代替乙酰基，其二是C-13側鏈發生變化(例如在紫杉酚的側鏈上用N-叔 丁氧基羰基代替N-苯甲酰基)。化學結構的差別導致多烯紫杉醇和紫杉醇的活性有 所不同，其細胞毒作用是紫杉醇的1. 3-12倍。
多烯紫杉醇屬于微管解聚抑制劑，作用于微管/微管蛋白系統，促進微管雙聚 體裝配成微管，同時防止去多聚化過程而使微管穩定，使細胞發生G2/M期阻滯， 從而抑制癌細胞的有絲分裂和增殖，這種作用機理導致它與紫杉醇相比具有較少的 嚴重的副反應。臨床研究表明，多烯紫杉醇對各種腫瘤疾病具有良好的抗癌活性， 對于治療乳腺癌、非小細胞肺癌、胰腺癌、軟組織肉瘤、頭頸癌、胃癌、卵巢癌和 前列腺癌等有很好的療效。
多烯紫杉醇(Taxotere②)由法國安萬特公司開發，1996年獲得FDA批準，用 于蒽環類藥物化療失敗后的局部晚期或轉移性乳腺癌，1999年被批準局部晚期或轉 移性非小細胞肺癌(NSCLC)的二線應用，2002年11月被FDA批準與順鉑聯合使用， 用于不能切除的、局部晚期或轉移性NSCLC患者(之前未接受化療)的治療。之后， Taxotere1皮批準與潑尼松聯合應用于非雄激素依賴的(耐激素的)轉移性前列腺癌 患者的治療，與多柔比星和環磷酰胺聯用也被批準用于可手術的、結節陽性 (node-positive)乳腺癌患者的輔助治療。
由于多烯紫杉醇水溶性差，目前臨床使用的主要有凍干粉針和水針注射劑。目 前市售的多烯紫杉醇(Taxotere )采用聚山梨醇酯80 (吐溫80) /乙醇作為溶媒， 其規格為含有20mg (0.5ml)或80mg (2.0ml)多烯紫杉醇(無水的)單次劑量小 瓶，每ml含有40mg的多烯紫杉醇(無水的)和1040mg的吐溫80。 1&又(^6^ 要求使用前稀釋，因此配有無菌無熱原的單次劑量稀釋液，為含有13%乙醇的注射用水。 吐溫80和乙醇主要用于增加多烯紫杉醇的溶解度，但該溶媒的存在可引起溶 血及嚴重過敏反應，如低血壓和/或支氣管痙攣和/或全身性疹/紅斑。為降低過敏 反應的發生率和嚴重度，臨床需預先給予類固醇和其它組胺阻斷藥物，但是這種前 驅給藥法也存在一些不良反應，例如庫欣(Cushing' s)綜合征、傳染性并發癥、 高血糖癥、高血壓和精神病的效應(包括類固醇誘導的精神病)等，尤其是在長期 給藥時，溶劑也促進增塑劑從聚氧乙烯(PVC)袋和管中溶出，并可能產生與這些 試劑有關的其它不良反應，例如神經疾病和腫瘤細胞耐藥性。不良反應限制了該藥 物在臨床上的應用，因此，通過新的給藥系統或制劑來提高多烯紫杉醇的溶解特性， 進一步提高其生物利用度，降低其毒性是十分必要的。
發明內容
本發明的目的是提供一種多烯紫杉醇脂質制劑及其制備方法。 本發明提供的多烯紫杉醇脂質制劑，包括如下組分多烯紫杉醇、聚乙二醇-
十二羥基硬脂酸酯和磷脂；所述磷脂中磷脂酰膽堿含量大于80%。
所述制劑中還包括助溶劑；所述助溶劑為碳原子總數為三以下的一元醇、二元
醇或三元醇。
所述助溶劑具體可為無水乙醇、丙二醇、甘油中的至少一種。 所述制劑中還可包括PH調節劑。 所述pH調節劑具體可為無水檸檬酸。
所述制劑可包括如下質量份的各組分多烯紫杉醇O. 1-5，聚乙二醇-十二羥基 硬脂酸酯15-50，磷脂5-20，助溶劑30-80，無水檸檬酸0. 1_0. 2。
所述制劑具體可包括如下質量份的各組分多烯紫杉醇l，聚乙二醇-十二羥基 硬脂酸酯15-50，磷脂5-20，助溶劑30-80，無水檸檬酸O. 18。
當然，該所述制劑也可以僅由如下質量份的各組分組成多烯紫杉醇l，聚乙 二醇-十二羥基硬脂酸酯15-50，磷脂5-20，助溶劑30-80，無水檸檬酸O. 18。
上述多烯紫杉醇脂質制劑為淡黃色油狀液體，穩定性良好，稀釋后能自發乳化 形成粒徑為10-200nm范圍的納米粒子。
本發明還提供了一種制備所述的多烯紫杉醇脂質制劑的方法，包括如下步驟
1)將所述磷脂加入助溶劑，45-55X:加熱溶解，得到溶液A;將多烯紫杉醇、 無水檸檬酸和聚乙二醇-十二羥基硬脂酸酯加入助溶劑、常溫溶解，得到溶液B;2)將溶液A和溶液B混合。
本發明還提供了一種多烯紫杉醇納米制劑，是用生理鹽水溶液、葡萄糖水溶液 或注射用水將所述多烯紫杉醇脂質制劑稀釋5-100倍，優選稀釋20倍，得到的納 米制劑。
上述多烯紫杉醇納米制劑可直接作為注射用劑。 以上多烯紫杉醇納米制劑的制備方法也屬于本發明的保護范圍。 發明人針對多烯紫杉醇臨床應用存在的問題，采用高純度磷脂和一種新的增溶 劑SolutoWHS15 (聚乙二醇-十二羥基硬脂酸酯)，制成一種新的脂質制劑，可以 降低毒性及過敏反應，同時該制劑在臨用時用生理鹽水溶液、葡萄糖水溶液、或注 射用水稀釋后可自發乳化成納米級的粒子，吸收效果大大增強，從而藥效得以進一 步提高。
Solutol HS15，是一種新型的高性能、極低毒性的增溶劑，其優越性體現在
① 高增溶能力與吐溫80的對比研究表明，Solutol HS15對疏水藥物的溶解 能力隨著溶劑濃度的增加而呈線性增加，而使用吐溫80時，在達到較高濃度時藥 物的溶解量并沒有進一步增加。而另一實驗表明，隨著20%的Solutol HS15的使用， 不同藥物如克霉唑、雌二醇、磺胺噻唑、心痛定、酰胺咪嗪、吡羅昔康等的水溶性 增加，根據分子結構不同其水溶解度被提高10-100因數，不管化學結構或藥物溶 解的最大劑量怎樣，膠粒的直徑不變，均在13nm左右。Solutol HS15的這種高增 溶能力使低容量高劑量的注射成為可能。
② 低組胺釋放使用前無需使用抗組胺劑和類皮質激素。與吐溫80相比，靜 脈注射SolutoWHS15后，狗的血清組胺水平低很多倍，15min后吐溫80組的血清 組胺水平大于50000nMo1，而Solutol HS15組僅為220nMol; 60min后吐溫80組的 血清組胺水平為247 nMol，而Solutol HS15組僅為8nMo1。
③ 低溶血作用與吐溫80的對比研究表明，雖然隨著增溶劑濃度的增加溶血 作用增強，但是吐溫80組的紅血球溶解量高于Soluto^HS15組10倍以上，表明 這種新的增溶劑具有較低的毒性和刺激性。
此外這種新的增溶劑還具有較高的生理耐受性、較低的粘度，并且可以采用蒸 汽滅菌法，無需昂貴的無菌制造工藝，目前該溶劑已收入德國藥典，在美國和加拿 大已通過用于人體注射的審定。
本發明提供的多烯紫杉醇脂質制劑由于選用了新型的增溶劑Solutol⑧HS15以及合適的載體材料，大大提高了多烯紫杉醇的溶解性，同時可避免使用吐溫80帶 來的毒副作用，提高了多烯紫杉醇制劑的安全性和順應性；而且該制劑稀釋后自發 乳化形成納米粒子，用于靜脈注射，可以增加多烯紫杉醇的體內吸收，并且通過控 制其乳化粒度的大小可達到腫瘤靶向的目的；本發明的制備工藝簡單易行，適合工 業化生產。
以下的實施例便于更好地理解本發明，但并不限定本發明。
圖1為多烯紫杉醇納米制劑乳化后粒度檢測結果-光強粒度多峰分布 圖2為多烯紫杉醇納米制劑乳化后粒度檢測結果-光強粒度正態分布
具體實施例方式
下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規方法。 實施例1、多烯紫杉醇脂質制劑的制備
一、 多烯紫杉醇脂質制劑的制備
1、 稱取5g磷脂(德國Lipoid公司)和10g無水乙醇，45。C水浴加熱溶解， 得到溶液A。
2、 稱取lg多烯紫杉醇、15gHS15 (德國BASF公司)、0. 18g檸檬酸、20g甘 油、50g無水乙醇，常溫溶解，得到溶液B。
3、 將溶液A和溶液B混合，室溫攪拌、混合均勻，過濾，得到多烯紫杉醇脂 質制劑，通氮氣保護，密封保存。
二、 多烯紫杉醇納米制劑的制備
將步驟一制備的多烯紫杉醇脂質制劑用20倍體積的葡萄糖溶液稀釋，得到多 烯紫杉醇納米制劑。
三、 多烯紫杉醇納米制劑的粒徑測定
用美國Brookhaven儀器公司的ZetaPALS激光動態光散射儀檢測多烯紫杉醇納 米制劑的粒徑。多烯紫杉醇納米制劑的平均粒徑為76nm。 6個月后，再次檢測多烯 紫杉醇納米制劑的粒徑，平均粒徑為74nm，無明顯變化。
實施例2、多烯紫杉醇脂質制劑的制備
一、多烯紫杉醇脂質制劑的制備
1、稱取8g磷脂(德國Lipoid公司)和12g丙二醇，55'C水浴加熱溶解，得 到溶液A。2、 稱取lg多烯紫杉醇、30gHS15 (德國BASF公司)、0. 18g檸檬酸、50g無 水乙醇，常溫溶解，得到溶液B。
3、 將溶液A和溶液B混合，室溫攪拌、混合均勻，過濾，得到多烯紫杉醇脂 質制劑，通氮氣保護，密封保存。
二、 多烯紫杉醇納米制劑的制備
將步驟一制備的多烯紫杉醇脂質制劑用20倍體積的生理鹽水稀釋，得到多烯 紫杉醇納米制劑。
三、 多烯紫杉醇納米制劑的粒徑測定
用美國Brookhaven儀器公司的ZetaPALS激光動態光散射儀檢測多烯紫杉醇納 米制劑的粒徑。在25±0. 1'C的穩定環境下，粒徑檢測結果見圖l和圖2。結果表 明，多烯紫杉醇納米制劑的平均粒徑為18. 4nm。 6個月后，再次檢測多烯紫杉醇納 米制劑的粒徑，平均粒徑為23.8nm，無明顯變化。
實施例3、多烯紫杉醇脂質制劑的制備
一、 多烯紫杉醇脂質制劑的制備
1、 稱取12g磷脂(德國Lipoid公司)和12g丙二醇，5(TC水浴加熱溶解，得 到溶液A。
2、 稱取lg多烯紫杉醇、36g HS15 (德國BASF公司)、6g甘油、0. 18g檸檬 酸、34g無水乙醇，常溫溶解，得到溶液B。
3、 將溶液A和溶液B混合，室溫攪拌、混合均勻，過濾，得到多烯紫杉醇脂 質制劑，通氮氣保護，密封保存。
二、 多烯紫杉醇納米制劑的制備
將步驟一制備的多烯紫杉醇脂質制劑用20倍體積的注射用水稀釋，得到多烯 紫杉醇納米制劑。
三、 多烯紫杉醇納米制劑的粒徑測定
用美國Brookhaven儀器公司的ZetaPALS激光動態光散射儀檢測多烯紫杉醇納 米制劑的粒徑。多烯紫杉醇納米制劑的平均粒徑為126. 9rnn。 6個月后，再次檢測 多烯紫杉醇納米制劑的粒徑，平均粒徑為101. 9nm，無明顯變化。
實施例4、多烯紫杉醇脂質制劑的制備
一、多烯紫杉醇脂質制劑的制備
1、稱取20g磷脂(德國Lipoid公司)和10g無水乙醇，45。C水浴加熱溶解，得到溶液A。
2、 稱取lg多烯紫杉醇、50gHS15 (德國BASF公司)、0. 18g檸檬酸、20g無 水乙醇，常溫溶解，得到溶液B。
3、 將溶液A和溶液B混合，室溫攪拌、混合均勻，過濾，得到多烯紫杉醇脂 質制劑，通氮氣保護，密封保存。
二、 多烯紫杉醇納米制劑的制備
將步驟一制備的多烯紫杉醇脂質制劑用20倍體積的葡萄糖溶液稀釋，得到多 烯紫杉醇納米制劑。
三、 多烯紫杉醇納米制劑的粒徑測定
用美國Brookhaven儀器公司的ZetaPALS激光動態光散射儀檢測多烯紫杉醇納 米制劑的粒徑。多烯紫杉醇納米制劑的平均粒徑為178nm。 6個月后，再次檢測多 烯紫杉醇納米制劑的粒徑，平均粒徑為181nm，無明顯變化。
實施例5、急性毒性試驗
1、 實驗動物及分組
健康昆明種小鼠(18-22g) 100只，雌雄各半。將小鼠隨機分為10組，每組IO只。
2、 多烯紫杉醇注射液的制備
按市售多烯紫杉醇注射液規格配制每ml含40mg多烯紫杉醇和1040mg吐溫80的 樣品，用含13%乙醇的注射用水稀釋4倍，得到多烯紫杉醇注射液，作為對照組受試 物。
3、 給藥
對照組I (IO只小鼠)腹腔注射多烯紫杉醇注射液，給藥劑量為100mg/Kg。 對照組II (IO只小鼠)腹腔注射多烯紫杉醇注射液，給藥劑量為150mg/Kg。 實驗組I (IO只小鼠)腹腔注射實施例l制備的多烯紫杉醇脂質制劑，給藥 劑量為100mg/Kg。
實驗組II (IO只小鼠)腹腔注射實施例l制備的多烯紫杉醇脂質制劑，給藥 劑量為150mg/Kg。
實驗組III (IO只小鼠)腹腔注射實施例2制備的多烯紫杉醇脂質制劑，給藥 劑量為100mg/Kg。
實驗組IV (IO只小鼠)腹腔注射實施例2制備的多烯紫杉醇脂質制劑，給藥劑量為150mg/Kg。
實驗組V (IO只小鼠)腹腔注射實施例3制備的多烯紫杉醇脂質制劑，給藥 劑量為100mg/Kg。
實驗組VI (IO只小鼠)腹腔注射實施例3制備的多烯紫杉醇脂質制劑，給藥 劑量為150mg/Kg。
實驗組VH (IO只小鼠)腹腔注射實施例4制備的多烯紫杉醇脂質制劑，給藥 劑量為100mg/Kg。
實驗組VIII (IO只小鼠)腹腔注射實施例4制備的多烯紫杉醇脂質制劑，給藥 劑量為150mg/Kg。
觀察給藥后實驗組與對照組小鼠的毒性反應癥狀。
結果表明給藥劑量為100mg/kg時，對照組小鼠表現出明顯的毒性反應癥狀， 四肢伏地、呼吸急促、狀態萎靡，給藥后3天有小鼠死亡， 一周后小鼠死亡率為20%; 而注射多烯紫杉醇脂質制劑的4組小鼠毒性反應癥狀較輕，表現為反應遲緩、狀態 萎靡、體重減輕，給藥后一周小鼠無死亡。
給藥劑量為150mg/kg時，對照組小鼠給藥后l天出現死亡， 一周后小鼠死亡率 為70%;而注射多烯紫杉醇脂質制劑的4組小鼠毒性反應癥狀有所減輕，實驗組II、 IV、 VI、 VE1分別在給藥后第2天、第3天、第2天、第3天開始有小鼠死亡，給藥后一 周小鼠死亡率分別為40%、 50%、 50%、 40%，低于對照組。
以上實驗結果表明，與多烯紫杉醇注射液相比較，多烯紫杉醇脂質制劑的毒性 有所降低。
權利要求
1、一種多烯紫杉醇脂質制劑，包括如下組分多烯紫杉醇、聚乙二醇-十二羥基硬脂酸酯和磷脂；所述磷脂中磷脂酰膽堿含量大于80％。
2、 如權利要求l所述的制劑，其特征在于所述制劑中還包括助溶劑；所述助 溶劑為碳原子總數為三以下的一元醇、二元醇或三元醇。
3、 如權利要求2所述的制劑，其特征在于所述助溶劑為無水乙醇、丙二醇、 甘油中的至少一種。
4、 如權利要求1至3中任一所述的制劑，其特征在于所述制劑中還包括pH調 節劑。
5、 如權利要求4所述的制劑，其特征在于所述pH調節劑為無水擰檬酸。
6、 如權利要求5所述的制劑，其特征在于所述制劑包括如下質量份的各組分 多烯紫杉醇0.1-5，聚乙二醇-十二羥基硬脂酸酯15-50，磷脂5-20，助溶劑30-80， 無水檸檬酸0. 1-0.2。
7、 如權利要求6所述的制劑，其特征在于所述制劑包括如下質量份的各組分 多烯紫杉醇l，聚乙二醇-十二羥基硬脂酸酯15-50，磷脂5-20，助溶劑30-80，無水 檸檬酸O. 18。
8、 一種制備權利要求7所述的多烯紫杉醇脂質制劑的方法，包括如下步驟1) 將所述磷脂加入助溶劑，45-55t:加熱溶解，得到溶液A;將多烯紫杉醇、無 水檸檬酸和聚乙二醇-十二羥基硬脂酸酯加入助溶劑、常溫溶解，得到溶液B;2) 將溶液A和溶液B混合。
9、 一種制備多烯紫杉醇納米制劑的方法，是用生理鹽水溶液、葡萄糖水溶液或 注射用水將權利要求1至7中任一所述多烯紫杉醇脂質制劑稀釋5-100倍，優選稀釋 20倍，得到的納米制劑。
10、 一種多烯紫杉醇納米制劑，是用權利要求9所述方法制備得到的。
全文摘要
本發明公開了一種多烯紫杉醇脂質制劑及其制備方法。本發明的多烯紫杉醇脂質制劑，包括如下組分多烯紫杉醇、聚乙二醇-十二羥基硬脂酸酯和磷脂。本發明提供的多烯紫杉醇脂質制劑，提高了多烯紫杉醇制劑的安全性和順應性，該制劑稀釋后可自發乳化形成納米粒子用于靜脈注射，增加多烯紫杉醇的體內吸收，并且可達到腫瘤靶向的目的。本發明的制備工藝簡單易行，適合工業化生產。
文檔編號A61K9/127GK101632637SQ20081011697
公開日2010年1月27日 申請日期2008年7月22日 優先權日2008年7月22日
發明者張小寧, 晚 王, 鄔月明, 文 邰, 郝艷麗 申請人:清華大學