專利名稱：人乳頭瘤病毒16型e7蛋白功能拮抗肽及其編碼基因與應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及HPV 16型E7蛋白功能拮抗肽及其編碼基因與應用。
背景技術：
宮頸癌(cervical cancer, CC)的病死率位于全球婦女癌癥死亡率的第二位，近 二十多年來有關人乳頭瘤病毒(humanpapillomavirus, HPV)及其在宮頸癌發病中 作用的大量研究認為，HPV感染是大多數宮頸癌發生和發展的必要條件(Schiffman MH， Brinton LA. The epidemiology of cervical carcino genesis. Cancer, 1995， 76:1888-1901. Cruickshank ME. The role of human papillomavirus in risk management. Gynaecol Practice, 2003 , 3:229-233.)。據報道，來自22個國家的宮頸癌標本中有99.7 0/o可檢領lJ至ljHPV-DNA(Lang J H . To receive the global chanllenge and opportunity for preventing cervical cancer . Chin JO bstet Gynecol,2002,37:129-131. Walboomers JM， Jacobs MV, Manos MM, a/. Human papillomavirus is a necessary cause of invasive cervical cancer worldwide. J .Pathol ,1999 ，189 (1) : 12-19.)，其中與宮頸癌相關的有 16、18、31、33、45和58等10余型HPV誦DNA(AnHJ, ChoNH, Lee SY， "a/. Correlation of cervical carcinoma and precancerous lesions with human papillomavirus ( HPV) genotypes detected with the HPV DNA chip microarray method. Cancer , 2003,97 (7): 1672-1680.)。目前，宮頸癌傳統治療方法療效不佳，復發率較高。研究表明，治療 后殘余的HPV病毒顆粒DNA是導致其高復發的重要原因，因此利用現代免疫學及分 子生物學方法研制針對HPV感染的疫苗、抗體及治療藥物等成為宮頸癌治療研究的 熱點。
目前針對HPV的研究主要集中在預防性疫苗和治療性疫苗的開發上。由于HPV 病毒不能在體外增殖，因此生產減毒疫苗不可行。但其衣殼蛋白L1與L2表達后均能 自我裝配或形成假病毒顆粒(VLP) (Harro CD ， Pang YY, Roden RB a/. Safety and immunogenicity trial in adult volunteers of a human papillomavirus 16 LI virus-like particle vaccine. J Natl Cancer Inst ,2001 ,93 :284-292.)， VLP作為預防性疫苗接種可激 發體內的CD4+淋巴細胞介導的體液免疫反應，刺激機體產生保護性中和抗體及產生 有效的局部免疫反應(Koutsky LA , Ault KA , Wheeler CM , a/. A controlled trial ofa human papillomavirus type 16 vaccine. N Engl J Med ，2002 , 347(21) :1645-1651)。但
其成本較高，且HPV是一個多亞型病毒，不同亞型病毒間缺少群共同抗原決定簇， 因此多價疫苗可否對不同亞型HPV產生有效的保護作用尚需實驗證明。
HPV治療性疫苗有望清除由HPV感染所引起的腫瘤病灶及生殖器尖銳濕疣，阻 斷低危型病變向宮頸癌轉變的過程。已證明HPV的E6和E7蛋白在細胞發生惡變中發 揮重要作用，E6和E7蛋白選擇性表達于宮頸癌細胞，可分別使抑癌蛋白p53和pRb 失活，導致細胞周期紊亂，還可以激活端粒酶并使細胞永生化，其持續表達是使腫 瘤細胞轉化和維持惡性特征所必需的。由于正常人體內不存在此病毒蛋白，且其抗 原性、特異性均較強，因此E6和E7蛋白已成為HPV治療性疫苗研究的重要靶標。目
前的研究主要包括治療性蛋白疫苗和治療性基因疫苗。有報道稱，E7n.20和E7s6.93
多肽疫苗經動物實驗證明能誘發細胞毒性T淋巴細胞反應(DeMarco F ， Hallez S ， Brulet JM , ef a/. DNA vaccines against HPV-16 E7 expressing tumour cells. Anticancer Res ，2003 ，23 :1449-1454); L1-E7嵌合蛋白疫苗在動物實驗中可分別激發針對L1的 體液免疫和E7的細胞免疫(程浩，葉俊，■含HPV16E7的病毒樣顆粒誘導小鼠 產生特異性CTL反應。中華皮膚科雜志2005年5月第38巻第5期291-293。 Wakabayashi MT ， DaSilva DM , Potkul RK, " a/. Comparison of human papillomavirus type 16 LI chimeric virus21ike particles versus LI/ L2 chimeric virus-like particles in tumor revention. Intervirology ， 2002 ， 45 : 300-307.); HSP65-E7融合蛋白疫苗可誘導 針對E7蛋白的細胞免疫(Chu NR, Wu HB， Wu T, " a/. Immunotherapy of a human papillomavirus(HPV) type 16 E7-expressing tumor by administration of fusion protein conprising Mycobacterium bovis bacilli Calmette Guerin(BCG) hsp65 and HPV 16 E7. Clin Exp Immunol, 2000,121(2):216-225.);利用重組牛痘病毒構建的TA-HPV疫苗融 合了E6和E7蛋白的基因，在臨床實驗中證明可誘發體內特異性的細胞毒性T淋巴細 胞反應和特異性的血清反應(Kaufmann AM, Stem PL, Rankin EM， W a/. Safety and immunogenicity of TA-HPV,A recombinant vaccinia virus expressing modified human papillomavirus (HPV) 16 and HPV18 E6 and E7 genes in women with progressive cervical cancer. Clin Cancer Res ,2002 , 8 (12): 3676-3685.)。但多肽疫苗免疫原性較 弱，且存在MHC-I類分子限制性，使其應用具有一定的局限性；而基因疫苗的安全
性和誘導有效免疫反應的作用還有待進一步的改善。
預防性疫苗和治療性疫苗需通過誘發體內產生有效的細胞免疫及體液免疫來發揮作用，具有一定的時效性，且多數疫苗免疫原性較弱，需合適的佐劑輔助才可 誘發機體產生有效的免疫應答；同時由于HPV病毒亞型的多樣性，尚未有廣譜性的 針對不同亞型HPV的有效疫苗的報道。隨著對HPV病毒研究的深入，研究可直接作 用于HPV E6和E7蛋白并阻斷其活性的疫苗成為了一個新的熱點(Veldman T, Horikawa I, Barrett Carl J， " a/. Transcriptional activation of the telomerase hTERT gene by human papillomavirus type 16E6 oncoprotein. J Virol， 2001,75(9):4467-4472. Nishimura A, Nakahara T, Ueno T，" a/. Requirement of E7 oncoprotein for viability of HeLa cells. Microbes Infect. 2006 Jan 17.)。研究發現，E7蛋白致癌作用的關鍵是干擾 視網膜母細胞瘤蛋白pRb與轉錄因子E2F的結合，從而導致細胞增殖周期紊亂；E7 蛋白還可以通過與pRb相關蛋白pl07或pl30的結合，使蛋白質磷酸化而滅活，并釋 放后續轉錄因子E2F使細胞過度增殖，在宮頸癌發生、演進中起到重要作用(Gammoh N， Grm HS, Massimi a/. Regulation of human papillomavirus type 16 E7 activity through direct protein interaction with the E2 transcriptional activator. J Virol. 2006 80(4): 1787-97. Zhang B， Chen W, Roman A. The E7 proteins of low- and high-risk human papillomaviruses share the ability to target the pRB family member pi30 for degradation. Proc Natl Acad Sci USA. 2006 10;103(2):437-42. Caldeira S, Dong W， Tommasino M. Analysis of E7/Rb associations. Methods Mol Med. 2005;119:363-79.)。 因此，研究可以阻斷或抑制E7蛋白的活性作用，從而恢復pRb蛋白抑癌活性的拮抗 劑將成為宮頸癌治療的新途徑。Accardi L等通過篩選噬菌體抗體庫獲得了抗 HPV16-E7的單鏈抗體，利用真核表達載體構建重組表達質粒后轉染HPV-16陽性腫 瘤細胞SiHa，實驗證明，該單鏈抗體可以有效地抑制E7蛋白的活性，對細胞轉化起 至l」逆轉作用(Accardi L, Dona MG, Di Bonito P, W a/. Intracellular anti-E7 human antibodies in single-chain format inhibit proliferation of HPV16-positive cervical carcinoma cells. Int J Cancer. 2005 Sep 10;116(4):564-70. Griffin H, Elston R, Jackson D， d a/. Inhibition of papillomavirus protein function in cervical cancer cells by intrabody targeting. J Mol Biol. 2006 Jan 20;355(3):360-78. Epub 2005 Nov 14.)，提示 E7蛋白可作為HPV相關惡性腫瘤或宮頸癌前期病變治療的重要靶標。
通過對E7蛋白的結構分析發現，該蛋白2區中的LXCXE位點(25-29aa)以及3 區的鋅指結構區是其結合pRb的關鍵位點，鋅指結構區的突變可完全破壞E7蛋白的 轉化和永生化能力。LiuX等利用X-射線晶體衍射對E7蛋白CR3鋅指結構進行分析后發現，E7-CR3包含了兩個保守性的片段，其中一個片段為結合pRb所必需，而另一 片段為結合E2F所必需(Liu X, Clements A, Zhao a/. Structure of the human Papillomavirus E7 oncoprotein and its mechanism for inactivation of the retinoblastoma tumor suppressor. J Biol Chem. 2006 Jan 6;281(l):578-86.)。研究證明，不同亞型HPV 病毒E7蛋白均具有保守性LXCXE位點以及CR3鋅指結構區(Alonso LG, Smal C， Garcia-Alai MM， a/. Chaperone holdase activity of human papillomavirus E7 oncoprotein. Biochemistry. 2006 Jan 24;45(3》657-67. Fiedler M, Campo-Fernandez B, Laich A,eZ,a/. Purification and characterisation of the E7 oncoproteins of the high-risk human papillomavirus types 16 and 18. J Virol Methods. 2005 Dec 26.)，且HPV E7蛋白 與人體蛋白之間無任何同源性，因此以E7蛋白保守性LXCXE位點以及CR3鋅指結構 區為靶標，找尋作用于該位點的小分子化合物，可望獲得廣譜性且可與不同亞型 HPVE7蛋白結合并抑制其與pRb結合的小分子抑制劑。
目前噬菌體肽庫技術已成功應用于新型多肽藥物的篩選中，該技術的優勢在 于，可以獲得與靶分子特異性結合的高親和力的短肽，且短肽的DNA序列可知，可 同時為蛋白表位分析及空間構象分析提供有效的依據(McLaurin J, Cecal R, Kierstead ME a/: Therapeutically effective antibodies against amyloid-beta peptide target amyloid-beta residues 4-10 and inhibit cytotoxicity and fibrillogenesis. Nat Med. 2002 ;8(11): 1263-9. Casey JL, Coley AM, Anders RP " a/: Antibodies to malaria peptide mimics inhibit Plasmodium falciparum invasion of erythrocytes. Infect Immun.2004 Feb;72(2): 1126-34.)。在針對HPV蛋白功能的研究中，Fujii T等利用噬菌 體肽庫技術，以HPVE2蛋白為篩選靶分子獲得了E2蛋白拮抗肽，實驗證明，篩選 獲得的短肽在細胞內可以有效的抑制E2蛋白的活性(Fujii T， Austin D, Guo D，W a/. Peptides inhibitory for the transcriptional regulatory function of human papillomavirus E2. Clin Cancer Res. 2003 Nov l;9(14):5423-8.)，該結果為利用噬菌體肽庫技術篩選 有效的針對HPV E7蛋白活性的小分子短肽抑制劑提供了有利的證據。
發明內容
本發明的一個目的是提供一種HPV 16型E7蛋白功能拮抗肽。 本發明所提供的HPV 16型E7蛋白功能拮抗肽，其氨基酸序列如序列表中序列 l所示。
本發明的另一個目的是提供一種HPV 16型E7蛋白功能拮抗肽的編碼基因。所述HPV 16型E7蛋白功能拮抗肽的編碼基因，其脫氧核糖核苷酸序列如序列 表中序列2所示。
含有上述HPV 16型E7蛋白功能拮抗肽編碼基因的重組表達載體、轉基因細胞 系和重組菌也屬于本發明的保護范圍。
所述重組表達載體具體可為重組噬菌體。
本發明的七肽可用于制備預防和/或治療由HPV16感染所致疾病的藥物。 本發明以HPV16型E7蛋白作為靶蛋白篩選噬菌體展示七肽庫，采用耙蛋白分子
競爭性洗脫的方式，通過篩選獲得了能夠與HPV16型E7蛋白特異性結合并可抑制其
功能活性的七肽。該七肽具有以下優點
① 能夠阻斷HPV 16型E7蛋白的生物學活性，抑制HPV 16型E7蛋白與其配體蛋 白pRb的結合，達到恢復pRb生物學活性的目的，該七肽可用于制備預防和/或治療 由HPV感染所致疾病(如宮頸癌)的藥物，亦可為利用基因治療手段進行宮頸癌治 療提供可用的藥物前體。
② 滲透力強、易于到達病變部位，且該短肽針對的耙蛋白為HPV特異性表達 蛋白，與人體內正常蛋白無同源性，因此無毒副作用，使用較為安全。短肽的免疫 原性較弱，不易誘發機體產生抗短肽的免疫應答。
③ 分子特異性強，易于人工合成，純化工序簡便，容易實現規模化生產，并可 結合計算機輔助分子模擬技術對篩選獲得的短肽分子進行相關的改造以提高其親 和力及活性。
本發明的HPV 16型E7蛋白功能拮抗肽的獲得為短肽型HPV 16型E7蛋白功 能抑制劑的研發奠定了基礎，可結合腺病毒載體或其他基因工程載體進行宮頸癌基 因治療藥物的研發。本發明的HPV 16型E7蛋白功能拮抗肽在制備HPV感染所致 的宮頸癌的藥物中具有廣泛的應用價值及廣闊的市場前景。
圖1為噬菌體克隆的ELISA鑒定結果
圖2為陽性噬菌體克隆的競爭性ELISA鑒定結果
圖3為陽性噬菌體克隆對HPV 16型E7蛋白與其配體蛋白pRb結合的抑制實 驗結果
圖4為陽性噬菌體克隆測序圖具體實施方式
下面結合具體實施例對本發明做進一步詳細說明。
實施例1、以HPV16型E7蛋白為靶蛋白篩選得到本發明的重組噬菌體七肽 本發明利用商品化噬菌體展示七肽庫(New England BioLabs公司)來篩選獲得 HPV 16型E7蛋白功能拮抗肽。
一、以HPV16型E7蛋白為耙蛋白進行篩選
1、 將HPV16型E7蛋白(Santa Cruz公司)用pH8.6的碳酸鹽緩沖液稀釋為 100mg/L，取100uL上述稀釋過的HPV 16型E7蛋白包被聚苯乙烯酶聯板，4。C孵 育過夜；
2、 倒去酶聯板中的蛋白溶液，將酶聯板用TBS-Tween(10mmol/LTris'HCl,pH 7.5,50Ommol/L NaCl,lmL/L Tween 20)洗滌5次后，加入5g/L BSA于37。C封閉2h;
3、 酶聯板再經TBS-Tween洗滌5次后，加入噬菌體展示七肽庫(New England BioLabs公司)lOuL (含噬菌體顆粒1.7X1011個)禾B90uLTBS，于室溫條件下搖床
輕搖孵育lh;
4、 用TBS-Tween洗滌酶聯板10-15次后，加入濃度為800mg/L的HPV 16型 E7蛋白進行競爭性洗脫，室溫條件下搖床輕微振蕩孵育lh;
5、 收集洗脫液，測定噬菌體滴度，擴增后用于下一輪篩選；
6、 重復上述l-5的步驟，共進行三輪篩選，將第三輪篩選獲得的洗脫液經梯度 稀釋后與大腸桿菌ER2738 (NewEnglandBioLabs)侵染后鋪板，24h后挑取培養平 板上的單個藍斑加至2mL大腸桿菌ER2738培養液內，37。C空氣搖床250rpm振蕩孵育 4.5h，以擴增單克隆噬菌體；其中，第二輪和第三輪篩選除TBS-Tween的濃度與第 一輪不同外，其它方法均與第一輪篩選相同。第二輪和第三輪篩選的TBS-Tween組 成如下10mmol/L Tris'HCl,pH 7.5,500mmol/L NaCl,5mL/L Tween 20。
7、 將上述步驟6獲得的噬菌體培養液10,000rpm離心后取上清，加入160uL PEG8000-NaCl沉淀過夜，次日離心棄上清，將沉淀溶于200uL PBS緩沖液中，測定 單個噬菌體克隆的滴度。
為得到親和力較強的特異性噬菌體克隆，在上述三輪篩選中，逐漸提高洗滌液 TBS-Tween中Tween的含量(第一輪篩選時，洗滌液中Tween的含量為lmL/L;第二 輪和第三輪篩選時，洗滌液中Tween的含量均為5mL/L)，以去除非特異性結合的 噬菌體克隆。同時用靶蛋白競爭性洗脫的方式替代傳統的酸性緩沖液洗脫，以提高 特異性陽性噬菌體克隆的獲得率。二、 陽性噬菌體克隆的ELISA鑒定
親和性篩選的目的在于獲得特異性結合的噬菌體克隆，但不能完全去除非特異 性結合的噬菌體克隆，因此對篩選獲得的噬菌體單克隆要進行必要的鑒定，以確定 其與耙蛋白的特異性結合。
1、 將HPV16型E7蛋白用pH8.6的碳酸鹽緩沖液稀釋為100mg/L，取100uL上述 稀釋過的HPV 16型E7蛋白包被聚苯乙烯酶聯板，4。C孵育過夜；
2、 倒去酶聯板中的蛋白溶液，經PBST洗滌5次后，每孔內加入200uL 10g/L的 脫脂奶粉，37"C封閉2h;
3、 PBST洗滌5次后，每孔內加入100uL上述步驟一篩選得到的單克隆噬菌體的 培養上清(約2.5Xl()Hpfu) ， 37。C水浴箱孵育lh;
4、 PBST洗滌5次后，每孔內加入100uLHRP-抗M13抗體(GE Healthcare公司)， 37'C水浴箱孵育30min;
5、 PBST洗滌5次后，每孔內加入100uLTMB顯色液作用2min，并以100uL2M
H2S04終止反應，測定反應液的A45o值。
每個單克隆噬菌體均設未包被HPV 16型E7蛋白的酶聯孔作為對照，以排除非特 異性吸附的陰性噬菌體克隆對實驗結果的影響。
噬菌體克隆的ELISA鑒定結果如圖1所示，其中，圖la為第l一20個單克隆噬菌 體的ELISA鑒定結果，圖lb為第21—40個單克隆噬菌體的ELISA鑒定結果。結果表 明，挑取的40個單克隆噬菌體中，有8個單克隆噬菌體可與HPV16型E7蛋白特異性 結合，分別為A-5、 A-9、 A-15、 A-17; B-3、 B-6、 B-15、 B-17 (以八450值高于1
且蛋白包被孔A450值高于未包被蛋白孔A450值3倍為陽性標準)，此8個噬菌體克隆
為陽性噬菌體克隆。
三、 陽性噬菌體克隆的競爭性ELISA鑒定
為鑒定陽性噬菌體克隆與HPV 16型E7蛋白的特異性結合，以上述步驟二獲得的 陽性噬菌體克隆作為阻斷劑，抑制HPV16型E7蛋白與其相應單克隆抗體的結合，以 檢驗陽性噬菌體克隆的拮抗活性。
1、 HPV 16型E7蛋白的包被及封閉過程同步驟二的1和2;
2、 將上述步驟二獲得的陽性噬菌體克隆倍比稀釋為1X1013、 1X1011、 1X109、 lX10、BlX105pfii/mL，取50uL上述各濃度的陽性噬菌體克隆分別與50uL抗HPV 16-E7單克隆抗體(NeoMarkers公司)(1:1000)混勻，37。C孵育30min;3、 將上述步驟1的酶標板用PBST洗滌5次后，加入100uL上述步驟2的混合液， 37"孵育30min，同時以同樣稀釋倍數的原庫噬菌體(New England BioLabs公司) 作為對照；
4、 酶標板用PBST洗滌5次后，加入HRP-兔抗鼠多克隆抗體(深圳晶美) (1:3000) ， 37。C孵育30min;
5、 酶標板用PBST洗滌5次后，加入TMB顯色液顯色2min， 2MH2S04終止反應，
測定反應液的A450值，計算抑制率。
以陽性噬菌體克隆競爭抑制抗HPV 16-E7單克隆抗體與HPV 16型E7蛋白的結 合，來判斷陽性噬菌體克隆與HPV16型E7蛋白的特異性結合，陽性噬菌體克隆的競 爭性ELISA鑒定結果如圖2所示。其中，橫坐標A、 B、 C、 D和E分別表示陽性噬菌 體克隆和對照噬菌體的滴度分別為1X1013、 1X1011、 1X109、 lX10、PlX105pfu/ml。 結果表明，陽性噬菌體克隆能夠阻斷HPV16型E7蛋白與其相應抗體的結合，且抑制 效果隨著陽性噬菌體克隆滴度的升高而增大。而對照的噬菌體克隆不能夠阻斷HPV 16型E7蛋白與其相應抗體的結合。
四、陽性噬菌體克隆對HPV 16型E7蛋白與其配體蛋白pRb結合的抑制實驗 為了獲得可與HPV 16型E7蛋白結合，并能夠阻斷HPV 16型E7蛋白與其配體蛋 白pRb結合的拮抗肽，要通過競爭性抑制實驗來證明所獲得的陽性噬菌體克隆的拮 抗活性。
1、 HPV 16型E7蛋白的包被及封閉過程同步驟二的1和2;
2、 將上述步驟1的酶標板用PBST洗滌5次后，每孔加入上述步驟二獲得的陽性 噬菌體克隆上清50uL (陽性噬菌體克隆的濃度為lX10^pfu/ml) ， 37。C孵育30min， 同時以濃度為1.0xl(^pfu/ml的原庫噬菌體作為對照；
3、 將pRb蛋白(購自ActiveMotif公司)梯度稀釋為5、 10、 20、 40和80mg/L, 分別取50uL不同濃度的pRb蛋白加入到上述步驟2的孔內，37。C孵育30min;
4、 PBST洗滌5次后，每孔內加入100uLHRP-抗M13抗體(GE Healthcare公司)， 37"C水浴箱孵育30min;
5、 PBST洗滌5次后，每孔內加入100uLTMB顯色液作用2min，并以100uL2M
H2S04終止反應，測定反應液的A45o值。
陽性噬菌體克隆對HPV16型E7蛋白與其配體蛋白pRb結合的抑制實驗結果如 圖3所示。結果表明，陽性噬菌體克隆可與pRb蛋白競爭，與HPV16型E7蛋白結合，表明陽性噬菌體克隆具有特異地與HPV 16型E7蛋白結合的活性，并可有效的抑制 HPV16型E7蛋白與其配體蛋白pRb的結合，是HPV16型E7蛋白功能拮抗肽。而對 照的噬菌體克隆不能抑制HPV16型E7蛋白與其配體蛋白pRb的結合。 六、陽性噬菌體克隆的測序
經上述實驗鑒定，共獲得5個具有拮抗HPV 16型E7蛋白結合活性的陽性噬菌 體克隆，將這5個陽性噬菌體克隆進行DNA測序，測序圖如圖4所示。結果發現 這5個陽性噬菌體克隆中插入的七肽的編碼基因序列一致，具體脫氧核糖核苷酸序 列如序列表中序列2所示，其編碼的七肽的氨基酸序列如序列表中序列1所示。序列表
<160> 2
<210〉 1
<211> 7
〈212〉 PRT
<213> 人乳頭瘤病毒(Humanpapillomavirus)
<400〉 1
Gin Pro Lys Gly Leu Asp Trp 1 5
<210〉 2 〈211〉 21 〈212> 薩
<213〉 人乳頭瘤病毒(Humanpapillomavirus)
〈400〉 2
cagccgaagg gtcttgattg g 2權利要求
1、一種七肽其氨基酸序列如序列表中序列1所示。
2、 權利要求l所述七肽的編碼基因。
3、 含有權利要求2所述基因的重組表達載體。
4、 根據權利要去3所述的重組表達載體，其特征在于所述重組表達載體為 重組噬菌體。
5、 含有權利要求2所述基因的轉基因細胞系。
6、 根據權利要去5所述的轉基因細胞系，其特征在于所述細胞系為導入權 利要求3或4所述的重組表達載體的轉基因細胞系。
7、 含有權利要求2所述基因的重組菌。
8、 根據權利要求7所述的重組菌，其特征在于所述重組菌為導入權利要求3 或4所述的重組表達載體的重組菌。
9、 權利要求1所述的七肽在制備預防和/或治療由HPV16感染所致疾病的藥物 中的應用。
全文摘要
本發明公開了一種HPV 16型E7蛋白功能拮抗肽及其編碼基因與應用。本發明的HPV 16型E7蛋白功能拮抗肽，其氨基酸序列如序列表中序列1所示。本發明以HPV 16型E7蛋白作為靶蛋白，篩選可結合HPV 16型E7蛋白并抑制其與pRb蛋白結合活性的小分子短肽，獲得了一組具有一致序列的HPV 16型E7蛋白功能拮抗肽，可以作為治療HPV感染誘發的宮頸癌的候選藥物。本發明的HPV 16型E7蛋白功能拮抗肽在制備HPV感染所致的宮頸癌的藥物中具有廣泛的應用價值及廣闊的市場前景。
文檔編號A61P31/20GK101550181SQ20081010335
公開日2009年10月7日 申請日期2008年4月3日 優先權日2008年4月3日
發明者羅海波, 黃來強 申請人:清華大學深圳研究生院