專利名稱：：琥珀酸作為抗精神疾病藥物增效劑的用途的制作方法
技術領域：
：本發明涉及琥珀酸(succinicacid)作為抗精神疾病藥物的增效劑的用途。技術背景隨著社會的轉型與發展，我國精神疾患在增多，精神疾病在我國疾病總負擔中排列首位，占疾病總負擔的20%。目前，我國有精神疾病患者約1600萬人，另外還有癲癇患者約600萬人，精神分裂癥總患病率為0.641%，抑郁障礙總患病率為6.87%，中國每年有20萬人自殺，是全球總數的1/5，精神疾病對我國健康的影響越來越嚴重，并己成為童要的社會負擔。精神分裂癥發病機制與中腦多巴胺(DA)系統功能過度或敏化密切相關。最近研究結果表明Y-酪氨酸(GABA)-谷氨酸(Glu)也與精神分裂癥密切相關。中腦腹側被蓋區(Ventraltegmentalarea,VTA)是腦內DA能神經元集中的腦區，研究其功能活動所表現的特征行為可作為揭示腦內精神活動的突破口。目前臨床精神疾病大多是西藥多種合用，巴比妥類中樞神經抑制和精神安定劑氯丙嗪、異丙嗪、奮乃靜、利眠寧、巴比安納等。很多精神患者根本無法治好，只能長期用藥，停藥后又復發，這些西藥有強迫性，依賴性，而且副作用很大，如記憶力衰退、反應遲鈍、性功能障礙、惡心、頭疼等。面對這一殘酷現實，尋找一種抗精神疾病藥物的增效劑，既可以提高抗精神疾病藥物的藥效，又可以減少抗精神疾病藥物的用量，因此，減少了抗精神疾病的藥物的毒副作用是世界各國醫藥界研究的熱點。而天然藥物更是得到人們的青睞。
發明內容本發明的目的是提供一種琥珀酸作為抗精神疾病藥物增效劑的用途，所述精神疾病為精神分裂。琥珀酸可以是合成的，也可以是天然提取的。琥珀酸和抗精神疾病的藥物可以混合制成藥劑，或者也可以分別制成藥劑。本實驗室不僅利用苯環己哌啶制備了化學性精神分裂癥模型，還利用電刺激點燃(kindling)技術成功制備了類似人類的慢性點燃模型，點燃機制與長時程增強(LTP)和多種神經遞質受體變化有關，能導致神經可塑性變化，具有永久性，其可能涉及精神分裂病因和發病的基本神經生物學原理。本發明人用點燃技術成功建立精神分裂動物模型，經典和非經典抗精神病藥(D!受體特異性拮抗劑SCH23390、氟哌啶醇、氯氮平、硫必利、苯丙胺等藥物)可抑制其精神病癥狀，不僅論證了經典精神分裂DA假說，同時證明了化學性和電刺激性精神分裂模型的可用性和穩定性，在精神分裂機制方面說明了神經遞質GABA—Glu系統和DA遞質通過D2和D4亞型受體在精神分裂模型的重要作用。并且，本發明人采用傳統全細胞膜片鉗技術和制霉菌素(nystatin)穿孔膜片鉗技術研究琥珀酸對海馬CA1區神經元電壓依賴性鈣電流的作用，采用紅外可視全細胞膜片鉗記錄技術研究琥珀酸在海馬CA1區對突觸前GABA能神經活性物質釋放的影響，并在大鼠PTZ化學性點燃模型和大鼠杏仁核電刺激性點燃模型上研究琥珀酸的抗精神分裂癥的效果，探討琥珀酸抑制精神分裂的機制，探索琥珀酸可能作為腦內神經調質(neuralmodulator)的證據，并與其他傳統的抗精神疾病的藥物合用證明了琥珀酸的減副增效作用，為開發琥珀酸作為天然的抗精神分裂增效劑提供實驗依據。本發明利用上述模型證明了琥珀酸可以作為抗精神疾病藥物增效劑，并證明了其抗精神病作用及其機制，在臨床完成了其增效作用的研究，結果如下1、抗精神疾病實驗結果顯示，琥珀酸在海馬CA1區以濃度依賴的方式增強突觸前GABA能神經遞質的自發性釋放;在海馬CA1區對髙電壓激活的鈣通道的作用呈濃度依賴性，琥珀酸濃度越高，對鈣通道電流的抑制作用越強；還能抑制大鼠杏仁核電刺激點燃和PTZ化學點燃，多方面證實了琥珀酸具有抗精神疾病的作用。2、抗精神疾病作用機制實驗結果顯示，琥珀酸抗點燃機制可能通過GABAA受體與增強GABA能系統功能有關。3、琥珀酸的減副增效作用臨床試驗結果顯示，利培酮合并琥珀酸與氟哌啶醇治療精神分裂癥急性期的興奮、激越有同樣的效果，但副反應小，耐受性好，安全性高，有利于精神分裂癥的全程治療，與單用利培酮相比，利培酮合并琥珀酸治療效果好，不良反應少。4、琥珀酸急性毒性試驗結果顯示，其LD5Q值為7.52g.kg"，95%可信限為6.30-8.98g'kg—1，毒性較低。圖1是琥珀酸在海馬CA1區對smIPSCs頻率的影響示意圖；圖2是琥珀酸對海馬CA1區smIPSCs幅度的影響示意圖；圖3是相對幅度與相對頻率曲線圖；圖4是琥珀酸對smIPSCs頻率和幅度的影響示意圖；圖5是琥珀酸對低電壓激活的鈣通道電流的作用示意圖；圖6是琥珀酸對高電壓激活的鈣通道電流的作用示意圖。具體實施方式下面將通過具體實施例對本發明作進一步闡述，但是，該實施例僅為了說明本發明而不是限制本發明，這些實施例不以任何方式限制本發明的范圍。本領域的技術人員在權利要求的范圍內所做出的某些改變和調整也應認為屬于本發明的范圍。實施例l:制劑的制備琥珀酸的提純將天然藻類1000公斤粉碎成粗粉，加酸調至pH值至3-4后，用75%乙醇回流提取3次，合并回收溶劑，得浸膏85kg。醇浸膏溶于水中后，以水飽和正丁醇萃取4次，正丁醇層回收溶劑后的27kg，正丁醇部分進行低壓硅膠柱層析，以硅膠H拌樣，并干法裝柱，加壓進行柱色譜層析，以氯仿-甲醇(20:1-1:1)梯度依次洗脫，將10:1洗脫部分再次進行低壓柱色譜層析，得天然琥珀酸31g，將得到的天然琥珀酸溶于超純水-無水乙醇(l:8)溶劑中，緩慢在磁性攪拌器上加熱50-8(TC至溶解，然后逐漸冷卻，即得到無色結晶，濾去上清液，按上述方法反復進行重結晶操作，揮去乙醇，干燥，過80目篩制成琥珀酸粉末備用。按此方法操作得到的天然琥珀酸純度可達99%以上。片劑的制備天然琥珀酸250mg乳糖100mg微晶纖維素110mg羧甲醛纖維素鈣10mg無水硅酸10mg羧基丙酰纖維素"mg硬脂酸鎂5mg共500mg將琥珀酸、乳糖、羧甲醛纖維素鈣和無水硅酸混合均勻，然后用異丙醇溶解羧基丙酰纖維素，把上述幾種成分混合，用濕式法制粒，將制成的顆粒與硬脂酸鎂混合，制成每片含天然琥珀酸500mg的片劑。膠囊的制備天然琥珀酸250mg藥用淀粉245mg硬脂酸鎂5mg共500mg各自稱量出上述各成份混合均勻，填充膠囊，制成每個含天然琥珀酸500mg的膠囊劑。試驗例l:琥珀酸抗精神疾病的實驗研究琥珀酸在海馬CA1區對突觸前GABA能神經活性物質釋放的影響琥珀酸在海馬CA1區以濃度依賴的方式增強突觸前GABA能神經遞質的自發性釋放。正常對照組smIPSCs頻率為1.8140±1.5307Hz，給予l(T4mol/L的琥珀酸后，smIPSCs的頻率為2.3458土1.9684Hz(見表l，圖l);正常對照組的電流平均幅度為40.5010±31.0375Pa，10"mol/L琥珀酸組為42.8670士32.7417Pa(見表2，圖2，3和4)。表1琥珀酸在海馬CA1區對smIPSCs頻率的影響分組琥珀酸濃度(mol/L)細胞數頻率(Hz)相對頻率1061.81401210-661.9400a1.0715a310-562.0385a1.1162a410-462.3458b1.2937b與正常對照組比較Y>0.05,Y<ft05表2琥珀酸在海馬CA1區對smIPSCs幅度的影響分組琥珀酸濃度(mol/L)細胞數幅度(pA)相對頻率10640.50101210"6640.9675a1.0037a3l(T5641.3088a1.0173a410"4642.8670a1.0579a與正常對照組比較^>0.05琥珀酸對CA1區神經元鈣離子通道的影響在倒置相差顯微鏡下可觀察到分離的神經元有良好的形態學特征，胞體呈三角形，并可見長度為100mm左右的近端樹突。電壓鉗模式下，不同濃度的琥珀酸(10'6、IO-5、IO-4、10-3、IO-2、10"mol/L)在海馬CA1區神經元均未引出任何內向或外向電流。為記錄低電壓激活的鈣通道的電流，采用傳統全細胞膜片鉗技術，用含r的電極內液。鉗制電壓-90mV，在去極化至-80mV時開始出現內向電流，在去極化至-30禾B-20mV時，電流達到最大值，隨后電流幅度逐漸減少。給予不同濃度的琥珀酸(10—6、10'5、10'4、l(T3、10—2和10'1mol/L)對低電壓激活的鈣通道電流未見任何影響。正常對照組最大電流幅度為46.17±6.84pA，10—6、10—5、10—4、l(T3、10—2和10"mol/L各琥珀酸組的依次為47.37±5.48pA，44.97±5.14pA，48.21±7.44pA，45.67±8.94pA，46.79±5.11pA，49.01±7,98pA,與正常對照組相比差異無顯著意義(P>0.05)。見表3，圖5。表3琥珀酸在海馬CA1區對低電壓激活的鈣通道電流的作用(；士力分組琥珀酸濃度(mol/L)細胞數電流幅度(pA)10646.17±6.84210-6647.37±5.48a3644.97±5.14a410-4648.21±7.44a10-3645.67±8.94a610-2646.79±5.11a710"649.01±7.98a與正常對照組比較a尸〉ao5為記錄高電壓激活的鈣通道電流，采用nystatin穿孔膜片鉗方法，鉗制電壓-50mV。琥珀酸在海馬CA1區對高電壓激活的鈣通道的作用呈濃度依賴性，琥珀酸濃度越高，對鈣通道電流的抑制作用越強。正常對照組的電流幅度為580.05±17.32pA，10—6、l(T5、10—4、10-3、10—2和10"mol/L，各琥珀酸組的依次為563.74±16.65pA，517.99±15.24pA，444.66±13.26pA，405.32±19.11pA，269.03±9.96pA，86.41士3.25pA，通過配對f檢驗與正常對照組相比有顯著性差別(尸<0.01)。各組的平均電流值及比較見表4，圖6。表4琥珀酸在海馬CA1區對高電壓激活的鈣通道的作用(；士力分組琥珀酸濃度(mol/L)細胞數電流幅度(pA)106580.05±17.32210-66563.74±16.65a310-56517.99±15.24a4lO-46444.66±13.26a510-36405.32±19.11a6l(T26269.03±9.96a7lO.1686.41±3.25a與正常對照組比較YO.W琥珀酸對PTZ化學點燃發作的抑制作用琥珀酸100400mg'kg"ip均降低平均Ono，s分級并呈量效關系(尸<0.05，尸<0.01)，6級發作的百分率也明顯降低(尸<0.05，尸O.Ol)(表5)。表5琥珀酸對大鼠PTZ點燃發作的抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>與給藥前比較aP>0.05b尸〈0.05,e尸〈ftW，X±S,W=9琥珀酸對電刺激點燃發作的影響琥珀酸對電刺激點燃大鼠的ADT具有影響并呈劑量效應關系。在每次給予不同劑量琥珀酸前四天，給動物注射生理鹽水測定其ADT并記錄EEG、放電潛時、ADD和發作強度等指標。琥珀酸預處理后30min，再次測定ADT。結果發現琥珀酸100~400mg.kg—1ip均可顯著升高ADT，并呈劑量效應關系，在400mg'kg"時作用最明顯(P<ftWA對照條件下用ADT刺激動物都表現第V級反應。琥珀酸100400mg'kg"處理后用原先ADT刺激，一般不能誘發AD或只出現短暫的癇性放電，此時大鼠無或只有輕微反應(一般達不到V級反應)。記錄每只大鼠的Racine's分級，計算V級發作百分率，結果發現100400mg'kg—1ip的琥珀酸可降低平均發作強度(表6)，同時Racine'sV級發作百分率也明顯降低^<0.^人表6琥珀酸對杏仁核點燃大鼠各種發作指標的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>與給藥前對照組比較ap^.眠b尸〈(.M，e尸〈O.W.^±;，"=9試驗例2:琥珀酸抗精神疾病的作用機制實驗研究琥珀酸對GABAA受體拮抗劑苦味毒誘發小鼠驚厥的作用琥珀酸200-400mg'kg"ip，可明顯延長GABAA拮抗劑苦味毒驚厥小鼠潛伏期，并在此范圍內呈量效關系。與生理鹽水組比較，200mg'kg—1組潛伏期平均延長5.1min(<0.(5義400mg'kg"組潛伏期則平均延長8.4min。<ftW>>(表7)。表7琥珀酸對GABAA受體拮抗劑苦味毒誘發小鼠驚厥的影響組別劑量動物數驚厥動物數潛伏期(mg-kg")(x±s，min)生理鹽水10108.9±3.4a琥珀酸20010914.0±5.4b琥珀酸40010817.3±3.2C與生理鹽水對照組比較bP<ft05,e尸〈O.W試驗例3:琥珀酸減副增效的臨床試驗研究利培酮合并琥珀酸和氟哌啶醇肌注治療精神分裂的對照研究研究對象均來自于2003年9月至2004年2月在我院的住院患者，符合-2-R精神分裂診斷標準，PASS總分^60分，PASS興奮(5條目興奮、敵意、不合作、沖動控制障礙、幻覺行為)因子分215分，5條中至少有3條為中度及以上。年齡18-60歲。排除患有重大軀體疾病或神經系統疾病者、及妊娠期或哺乳期婦女。符合上述標準者共56例，隨機分為兩組。利培酮組28例，男性20例，女性8例，平均年齡為(32±14)歲。氟哌啶醇組28例，男性21例，女性7例，平均年齡為(33±16)歲。兩組間在年齡、體格檢査、既往史、住院次數及病程上差異無顯著性(P>0.05)。利培酮組在l周內將利培酮漸增至l3mg/d，平均(2.23±0.56)mg/d，合并琥珀酸，平均(0.50±0.241)g。氟哌啶醇組肌注氟哌啶醇10~25mg/d，平均(16.20±4.50)mg/d，一周后改為口服。在后續階段的治療，利培酮為25mg/d，平均(3.85±0.67)mg/d;氟哌啶醇12~30mg/d，平均(19.23±5.75)mg/d。觀察期間不合并使用其它抗精神病藥物、抗抑郁藥、抗躁狂藥和ECT。出現錐體外系反應時可合并使用安坦。分別于用藥前、用藥l周末、8周末時采用PASS量表評定藥物的療效，TESS量表評定藥物不良反應的發生情況。結果顯示，兩組間治療前PASS總分、興奮因子分經t檢驗，差異無顯著性(PX).05);治療第1周末，兩組各時點的PASS總分、興奮因子分均有明顯下降，同一組間治療前和治療后比較，PASS總分有顯著性差異(P〉0.05)，興奮因子分差異有顯著性差異(P〈0.01)，兩組間在減分率上比較無顯著性差異(P〉0.05)。在第8周末，利培酮組的PASS量表總分與治療前比較，差異有顯著性(P<0.01)，在減分率方面兩組間比較差異有顯著性(P〉0.05)，見表8。不良反應評定(見表9)表8利培酮和氟哌啶醇各時點的PASS量表總分、興奮因子分及減分率比較<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>同一組間治療前后比較a尸<0.05，bP<ftW;兩組間比較，Y<(9.05表9利培酮組、氟哌啶醇組TESS量表各項不良反應發生率比較<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>以上不良反應是指觀察期內累計出現的例數，3尸<19.05，由表9可見，在急性興奮期內，利培酮組不良反應主要為靜坐不能4例(14.3%)、頭昏3例(10.7%)、震顫、口干和視物模糊及嗜睡各2例(7.1%)，且程度多為輕至中度，明顯較氟哌啶醇組輕且少。氟哌啶醇組不良反應主要為震顫、靜坐不能各10例(35.7%)，肌強直、口干和視物模糊各9例(32.1%)和嗜睡6例(21.4%)。兩組間比較，在肌強直和震顫方面的差異有顯著性(P<ftW)，在靜坐不能、口干視物模糊和嗜睡方面的差異也有顯著性(P<0.05)。利培酮合并琥珀酸與利培酮治療精神分裂癥的對照研究研究對象為2003年9月至2004年2月在我院住院的患者，年齡18-60歲，符合CCMD-3精神分裂癥診斷標準，PANSS總分^60分，PANSS興奮因子(5個條目興奮、敵意、不合作、沖動控制障礙、幻覺行為)分^15分，且5條中至少有3條為中度及以上。排除患有重大軀體疾病或神經系統疾病者及妊娠期或哺乳期婦女。符合上述標準者共56例，隨機分為兩組。利培酮合并琥珀酸組(以下稱研究組)28例，男性20例，女性8例，平均年齡為(32.23±14.602)歲，平均住院次數為(1.45±0.722)次，平均病程為(8.43±3.478)年。利培酮組(以下稱對照組)28例，男性21例，女性7例，平均年齡為(33.72±16.713)歲，平均住院次數為(1.33士0.652)次，平均病程為(7.93±3.018)年。兩組間在年齡、住院次數及病程上差異無顯著性(P〉0.05)。研究組在1周內將利培酮漸增至l~3mg/d,平均(2.23±0.561)mg/d，并用琥珀酸，0.25~0.75g，平均(0.50±0.241)g。對照組在1周內將利培酮漸增至l~3mg/d，平均(2.19±0.436)mg/d，在后續階段的治療中，利培酮為2~5mg/d，平均(3.85±0.687)mg/d;觀察期間不合并使用其它抗精神病藥物、抗抑郁藥、抗躁狂藥、ECT，睡眠障礙合并2mg氯硝西泮，出現錐體外系反應時合并使用安坦。分別于治療前和治療8周末時采用PANSS量表評定藥物的療效，TESS量表評定藥物不良反應的發生情況。結果研究組和對照組治療前PANSS總分、興奮因子分經t檢驗，差異無顯著性(P>0.05);治療8周末，兩組間PANSS總分、興奮因子分的變化均有顯著性差異(P<0.05)。詳見表10。表10研究組和對照組治療前后PANSS總分和興奮因子分比較項目Si5治療前分值治療后分值~~治療前后差值~~^1~尸值三種不良反應評定(見表11-13):表ll研究組和對照組不良反應比較<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>表12研究組和對照組不良反應比較(續)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>表13研究組和對照組不良反應比較(續)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>在急性興奮期內，研究組不良反應主要為震顫、靜坐不能、視物模糊和頭昏，程度多為輕至中度，而對照組不良反應主要為肌強直、震顫、靜坐不能、口干、視物模糊、嗜睡和頭昏。兩組間不良反應的發生率存在顯著性差異(P<0.01)，但兩組間每種不良反應的發生率均無顯著性差異(P〉0.05)。琥珀酸與其它常規口服抗精神分裂癥的藥物同時使用，也證明了琥珀酸具有明顯的增效作用。試驗例4:琥珀酸急性毒性試驗琥珀酸小鼠灌胃的急毒測定小鼠灌胃給藥后觀察7d，記錄各組死亡情況，孫氏改良法計算其LDso值為7.52g'kg"，95%可信限為6.30-8.98g'kg"，毒性較低。權利要求1、琥珀酸在制備抗精神疾病藥物中增效劑的應用。2、根據權利要求l所述的應用，其特征在于精神疾病為精神分裂癥。3、根據權利要求l一2任意一項所述的應用，其特征在于琥珀酸和抗精神疾病的藥物混合制成藥劑，或者分別制成藥劑。全文摘要本發明涉及琥珀酸作為抗精神疾病藥物增效劑的用途。琥珀酸作為抗精神疾病的增效劑與抗精神疾病藥物同時使用，既可以提高抗精神疾病藥物的藥效，又可以減少該藥物的用量，因此，減少了抗精神疾病的藥物的毒副作用。文檔編號A61P25/00GK101269057SQ20081010081公開日2008年9月24日申請日期2008年2月22日優先權日2008年2月22日發明者旺岳,張泮民,王冠軍,王春霞,逄淑濤申請人:青島大學;青島市精神衛生中心