專利名稱：異甘草素作為癌分化誘導劑的應用的制作方法
技術領域：
本發明屬醫藥技術領域，具體涉及一種從甘草屬植物中提取的異黃酮類化合物——異甘 草素的新用途，特別涉及其作為癌分化誘導劑在制備抗腫瘤藥物中的應用。
背景技術：
異甘草素(2,4,4-trihydroxychalcone， isoliquiritigenin)是從甘草屬植物(Glycyrrhiza) 分離、純化的異黃酮類化合物，它可通過超臨界二氧化碳萃取技術萃取、氯仿萃取等方法提 取，再經大孔吸附樹脂技術和柱層析技術分離純化異甘草素(東北林業大學，異甘草素和甘 草酸提取純化工藝研究，2005)。中科院上海藥物研究所植化研究室對異甘草素的化學結構和 理化性質已有詳細的敘述。(黃酮體化合物鑒定手冊[M]，北京科學出版社，1981)。異甘草 素的分子式為C15H1204，結構式如下
異甘犖紫
異甘草素是甘草中的一種異黃酮化合物，它有著很強的藥理活性，具有抑制腫瘤細胞增 殖、誘導腫瘤細胞凋亡、抗病毒、抗自由基、松弛血管、抑制脂質過氧化等生物活性，其中 抗腫瘤作用是近年來的研究熱點。但作為腫瘤細胞分化的誘導劑從未見報道。
由受精卵到動物個體的發育過程中，細胞的分化是必不可少的環節。細胞分化是未定型 細胞在形態、特性及生化組成上向專一和特異性方向轉化，由原來較簡單的可塑性狀態向異 樣化穩定狀態轉化，產生具不同形態、功能的細胞類型的過程，是生物體形成組織、器官的 重要手段(Sci. Am. , 253:136-147， 1985; Cell differentiation, 18:67-68, 1986)。基于細胞 分化的重要性，它們發生及調控機制一直是生命科學中的研究熱點。發現能夠誘導、調節細 胞分化的藥物，無論從基礎理論研究，還是從實際應用角度，其重要意義不言而喻。這些藥 物將為治療多種疾病，如神經退行性疾病及白血病等開拓了道路，在器官移植中也是不可缺 少的。
腫瘤細胞的分化誘導和分化治療是八十年代以來腫瘤研究日益活躍的領域之一，傳統上 以細胞毒為主導的化療和其它療法雖已取得巨大成功，但也顯示了局限性，需要研究新的策 略和手段。分化治療的特點是以分化誘導劑誘導腫瘤細胞分化為正常或近似正常的功能細胞， 分化誘導劑在臨床有效劑量時可誘導腫瘤細胞逆轉為有功能的正常細胞，并不象常用的細胞 毒類藥物殺死腫瘤細胞。臨床大量采用的細胞毒類抗腫瘤藥物， 一方面可殺死快速增殖的惡 性腫瘤細胞，同時也會殺死機體內快速增婚的正常組織細胞，從而產生較為嚴重的不良反應。 而癌分化誘導劑在臨床治療劑量下對正常組織毒性弱，恰好補充傳統細胞毒化療的不足。
發明內容
本發明提供了一種異甘草素的新用途，即異甘草素誘導癌細胞再分化，可作為癌分化誘
導劑，從而為治療腫瘤提供了一種新的可供選擇的藥物。
本發明提供了異甘草素在作為制備治療白血病的藥物中的應用。 本發明提供了異甘草素在作為制備治療肝癌的藥物中的應用。 本發明提供了異甘草素在作為制備治療惡性黑色素瘤的藥物中的應用。 本發明提供的藥物組合物可以根據臨床需要，加入相應輔料，以片劑、丸劑、顆粒劑、
膠囊、懸浮液、溶液、糖攀、注射劑、霜劑、軟膏、凝膠劑、噴霧劑、口嚼劑或貼劑等制劑
形式存在。
本發明所述的異甘草素是從中藥甘草中提取分離獲得或人工方式合成，可采用任何已公 開文獻或專利方法提取制備。
圖1為異甘草素處理72 h對HL-60細胞活性的影響
圖2為異甘草素處理72 h對HL-60細胞形態的影響，其中A為正常對照組，B為10. 0 u g/ml異甘草素處理組，C為15. 0 u g/ml異甘草素處理組，D為1. 5。/。 DMS0處理組。 圖3為異甘草素處理72 h對HL-60細胞NBT還原能力的影響 圖4為異甘草素處理72 h對HL-60細胞克隆形成能力的影響 圖5為異甘草素對人肝癌Bel-7402細胞活性的影響 圖6異甘草素對肝癌細胞Y-谷氨酞轉肽酶(Y-GT)活性的影響 圖7為異甘草素對肝癌細胞酪氨酸一 a —酮戊二酸轉氨酶(TAT)活性的影響 圖8異甘草素對Bd-7402肝癌細胞分泌甲胎蛋白(AFP)的影響 圖9異甘草素對Bd-7402細胞分泌白蛋白(ALB)的影響 圖10異甘草素對Bel-7402肝癌細胞克隆形成能力的影響 圖11為異甘草素對B16細胞活性的影響 圖12為異甘草素對B16黑色素瘤細胞分泌黑色素的影響 圖13為異甘草素對B16黑色素瘤細胞克隆形成率的影響
具體實施例方式
以下結合實驗例對本發明進行說明，但本發明并不受限于該實施例。 實驗例l異甘草素誘導人白血病細胞分化 1. 1實驗材料
異甘草素，購自江西本草天工科技有限公司，純度99.8% (HPLC法測定)。HL-60人早幼 粒急性白血病細胞系，購自中國典型培養物保藏中心(武漢大學保藏中心)，培養于含10%胎 牛血清、100 U/ml青霉素、100 ug/ml鏈霉素的DMEM培養基(GIBCO)。 1.2 MTT法和臺盼藍拒染法測定細胞活力
取處于對數生長期的HL-60細胞，臺盤蘭染色進行活細胞計數，調整細胞濃度為lX10'Vml， 于96孔培養板中每孔加入100 ul細胞懸液，置于5% C02，37'C培養箱中培養24h。 HL-60細胞分為以下各組①正常對照組以完全培養液培養,不加其他任何藥物；②異甘草素給藥組， 按以下劑量給藥0.1 ug/ml， 1.0 ug/ml， 2.5 Ug/ml， 5.0 ug/ml， 10.0 ug/ml， 20.0 yg/ml;③陽性對照組(DMS0組)體積分數為1.5% DMS0。各組細胞給藥處理48h后，每 孔取100ul細胞懸液，臺盼藍染色計數死細胞和活細胞數目，計算細胞死亡率
死亡率(%) = 7翻數_^x勵 、J (活細胞數+死細胞數)
余下細胞加入MTT溶液IO yl (5mg/ml)，繼續培養4 h，離心(1000 gX 10 min)，輕輕吸去 上清，每孔加入150 ulDMSO，振蕩溶解甲臢結晶。酶標儀檢測570 nm吸光值(0D57。)以630 nm波長作為參考波長。按下式計算藥物對細胞增殖的抑制率
抑制=纖？值-給，歸x賺 、 對照組OD值
結果表明(如圖l)，異甘草素可濃度依賴性地抑制HL-60細胞的增殖，但在IO iig/ml 以下濃度時，細胞死亡率并未增加，表明異甘草素在10 yg/ml以下濃度時對腫瘤細胞增殖 的抑制作用不是通過殺死腫瘤細胞起抑瘤作用的。
1.3異甘草素對細胞形態的影響
收集加藥處理72 h的細胞懸液，離心(1000 gX10 min)收集細胞沉淀，涂片，標本用 甲醇固定iO分鐘，用滴管把吉姆薩染色液布滿玻片上，注意不要有氣泡，染色15min。用 自來水沖去玻片上多余的染料，自然干燥，二甲苯透明，甘油封片，于顯微鏡下觀察并拍照。 光鏡下觀察，未處理組細胞胞衆較少、嗜堿性,核大而圓，核漿比例大，核染色質分散,主要為 早幼粒細胞；ISL處理后，細胞胞漿豐富，胞核變小，核漿比例縮小，胞核出現凹陷呈桿狀、腎 形、分葉狀、或多核，染色質致密變粗，核仁減少或消失，多為晚幼粒、桿狀核、多核細胞(占 50%以上)，細胞趨向成熟粒系分化(如圖2)。 1. 4異甘草素對HL-60細胞NBT還原能力的影響
取異甘草素處理過的HL-60細胞，臺盤蘭染色法進行活細胞計數，取lX10h個細胞，離心 (1500 gX5 min)，棄上清，力n 100 |il的5 mg/ml NBT溶液(溶于DMEM培養基)重懸細胞， 混勻，再加入100 pi 2叫/ml PMA,將細胞置于37。C水浴中30 min，最后加入200 pl 4'C 預冷的l mol/1 HC1結束反應。離心棄上清，加入600 pl DMSO，混勻后加于96孔板，在酶 標儀上測定其560 nm的吸光度。
正常成熟粒細胞和DMSO誘導分化的HL-60細胞可被PMA誘導呼吸爆發，產生大量超氧陰 離子，可還原NBT產生藍紫色甲臢顆粒，表明細胞象成熟髓系粒細胞分化。I一IO jag/ml異 甘草素可濃度依賴性地促進HL-60細胞還原NBT的能力，表明異甘草素誘導HL-60細胞象成 熟粒細胞分化(如圖3)。
1.5異甘草素對HL-60細胞表面分化抗原表達的影響
以1.5% DMSO或10 yg/ml異甘草素處理HL-60細胞72 h，離心(1000 gx10 min)， 以完全培養液調整細胞濃度至lxl07ml。各取100" 1細胞懸液，分別加入F1TC標記的CD14或PE標記的CDllb熒光標記抗體10 nl，室溫孵育30 min，流式細胞儀測定陽性細胞比率。 DMS0和10ug/ml異甘草素處理后，CDllb和CD14細胞表面抗原陽性表達率明顯升高， 表明DMSO和異甘草素均誘導HL-60細胞向巨噬細胞方向分化，異甘草素作用優于DMSO(表1 )。
表1 異甘草素對HL-60細胞CDllb和CD14表面抗原陽性細胞的影響
陽性細胞率(％)
CD14
CDllb
Control 2.63 ±0.13 7.70 ±1.04
1.5%DMSO 3.10±0.13* 11.4±1.1*
10 ug/ml異甘草素 20.4±2.3" 26.4±3.9(T
1.6異甘草素對HL-60細胞克隆形成能力的影響
細胞處理同1.2實驗，以O. 1 ug/ml， 1.0 ug/ml， 5.0 ug/ml， 10.0 u g/ml異甘草 素處理72 h，臺盼藍染色計數，調整活細胞濃度為1Xl(T細胞/ml。 6 g/L瓊脂糖的RPM1640 培養液1. 5 mL鋪于直徑3 cm的培養皿中，形成底層瓊脂，含有不同濃度藥物處理過的1000個 細胞的3.3 g/L低熔點瓊脂糖的RPMI 1640培養液1.0 mL鋪于平皿中，形成上層瓊脂。另設 未處理細胞作正常對照，每處理設4個平行。培養2周后，倒置相差顯微鏡下觀察細胞克隆形 成情況，以細胞數〉50個的克隆計為一個克隆，計算細胞克隆形成率。
克隆形成率(%) =^1111^x100
接種細胞數
結果表明，l一10ii g/ml異甘草素可濃度依賴性地抑制HL-60細胞克隆形成(如圖4)。
1. 7統計學處理
實驗結果均以^c土s表示，采用單因素方差分析進行組間顯著性比較，樣本均數間比較采 用t檢驗。'示P〈0.05，表明給藥組與正常組比較有顯著性差異；"示P〈0.01，表明給藥組與 正常組比較有極顯著性差異。
上述結果證明異甘草素可濃度依賴性地誘導白血病細胞再分化，抑制腫瘤的生長。
實驗例2:異甘草素誘導人肝癌細胞分化
2.1實驗材料
異甘草素，購自江西本草天工科技有限公司，純度99.8% (HPLC法測定)。Bel-7402人 肝癌細胞系，購自中國典型培養物保藏中心(武漢大學保藏中心)，培養于含10%胎牛血清、 100 U/ml青霉素、100 ug/ml鏈霉素的DMEM培養基(GIBCO)。 AFP免疫組化試劑盒購自北 京中山生物技術有限公司，甲胎蛋白(AFP)、白蛋白(ALB)放免測定盒購自中國原子能科學研究 院，酪氨酸—a —酮戊二酸轉氨酶(TAT)和y -谷氮酰轉肽酶(y -GT)檢測試劑盒購自上海長征 醫學科學有限公司。
2. 2 MTT法和臺盼藍拒染法測定細胞活力
取處于對數生長期的Bel-7402細胞，臺盤蘭染色進行活細胞計數，調整細胞濃度為1X
107ml,于96孔培養板中每孔加入100 ul細胞懸液，置于5%0)2，37°〇培養箱中培養2化。取出培養板，加入不同濃度的藥物處理①正常對照組以完全培養液培養，不加其他任何藥物；
②異甘草素給藥組，按以下劑量給藥0. lug/ml， 1.0 ug/ml， 2.5 ng/ml， 5.0 ug/ml，
7.5 ug/ml， 10.0 ug/ml， 15.0 ug/ml， 20.0 ug/ml;③陽性對照組，(DMS0組):體積分
數為1.5% DMSO。各組細胞給藥處理72 h后，每孔取100u 1細胞懸液，臺盼藍染色計數死
細胞和活細胞數目，計算細胞死亡率
#中,0/、 ,麟 腦 死亡率(％) = 7-100
、,(活細胞數+死細胞數)
另一相同處理的培養板，每孔加入MTT溶液IO "1 (5 mg/ml in DMEM)，繼續培養4 h， 離心(1000 gX10 min)，輕輕吸去上清，每孔加入150 ul DMSO，振蕩溶解甲臢結晶。酶標 儀檢測570 nm吸光值(0D57。)以630 nm波長作為參考波長。按下式計算藥物對細胞增殖的抑 制率-
翻=趙？ 值x畫
對照組OZ)值
結果表明(如圖5)，異甘草素可濃度依賴性地抑制Be1-7402人肝癌細胞的增殖，20 .u g/ml 抑制率(％)達109. 8±7. 70，同時細胞死亡率(％)增加(13. 5±1. 55 ^3. 12±0. 23，代O. 01)。 但在10 yg/ml異甘草素可明顯抑制細胞增殖，抑制率74.2±5.85，但細胞死亡率(％)并 未增加(3.36±0.34 w 3. 12±0.23)，，更低濃度雖也對細胞增殖具有抑制作用，但細胞死 亡率未見明顯升高。表明異甘草素在10 yg/ml以下濃度時對腫瘤細胞增殖的抑制作用不是 通過殺死腫瘤細胞起抑瘤作用的。
2.3異甘草素對肝癌細胞特異性標志物Y-谷氨酞轉肽酶(Y-GT)和酪氨酸一a—酮戊二酸 轉氨酶(TAT)活性的影響
如2.1實驗O. lyg/ml， 1.0 ug/ml， 5.0 u g/ml和10. 0 u g/ml異甘草素處理72 h 的人肝癌Bel-7402細胞用2. 5 g/L胰酶消化收集,2000 X g離心10 min后，加入預冷的2. 5 g/L 脫氧膽酸鈉溶解細胞，再4°C 12000Xg離心20min,收集上清液供測定。按酶促反應試劑盒說 明測定Y -GT和TAT活性。總蛋白質含量用考馬斯亮藍法測定。Y -GT或ALP比活力計算公式 如下
y-GT/TAT活性(nmol/L)
比活力 (nmol/mg protein)
總蛋白濃度(mg/L)
Bel-7402細胞是我國學者自建的一株肝癌細胞株，組織化學及形態學證明，它具有典型 的肝癌特征，AFP分泌陽性，不少報告指出肝組織癌變后，肝細胞的多種功能和酶發生明顯 變化，AFP分泌增加，Alb分泌降低，Y—GT活性升高和TAT活性降低，上述變化的逆轉可 以作為肝癌細胞分化的生化標記。異甘草素處理可濃度依賴性地致細胞內Y —GT活性降低(如 圖6)，細胞內TAT活性升高(如圖7)，表明異甘草素使癌細胞表型向正常方向分化。 2.4異甘草素對Bel-7402細胞分泌甲胎蛋白(AFP)和白蛋白(ALB)的影響
于6孔培養板每孔接種2X1Q5個細胞，培養24h后，加入異甘草素至終濃度分別為0. lug/ml， 1.0 ixg/ml， 5.0 u g/ml和10. 0 ng/ml，另設不加藥組作正常對照，處理72 h。.棄去含藥培養基，加入不含藥物的無血清培養基，繼續培養24h。收集培養基，2000 gX 10 niin離心,取上清冷凍干燥。細胞用2.5 g/L胰酶消化，用臺盼藍染色計數活細胞數目。 將干燥后的培養基溶于PBS中，以放免方法測定培養基中AFP和ALB的含量，根據活細胞數 將最終結果換算為ng/107個細胞。
結果表明，異甘草素可濃度依賴性地降低細胞AFP分泌量(圖8)，增加ALB分泌量(圖 9)，說明細胞象正常肝細胞表型逆轉。 2.5異甘草素對Bel-7402細胞克隆形成能力的影響
細胞處理同2.3實驗，以不同濃度異甘草素處理72 h，臺盼藍染色計數，調整活細胞濃 度為1Xl(^細胞/ml。 6 g/L瓊脂糖的RPM1640培養液1. 5 mL鋪于直徑3 cm的培養皿中，形 成底層瓊脂，含有不同濃度藥物處理過的1000個細胞的3. 3 g/L低熔點瓊脂糖的RPMI 1640 培養液1.0mL鋪于平皿中，形成上層瓊脂。另設未處理細胞作正常對照，每處理設4個平行。 培養2周后,倒置相差顯微鏡下觀察細胞克隆形成情況，以細胞數>50個的克隆計為一個克隆， 計算細胞克隆形成率。
克隆形成率(％) =^111^x100
接種細胞數
結果表明(圖IO)異甘草素處理后，BEL-7402細胞克隆形成率明顯下降，且有濃度依賴 性，表明異甘草素可抑制腫瘤惡性增殖表型。 2.6統計學處理
實驗結果均以z土j表示，采用單因素方差分析進行組間顯著性比較，樣本均數間比較采 用t檢驗。與正常對照組比較'P〈0.05表示有顯著性差異；"P〈0.01表示有極顯著性差異。
上述結果證明異甘草素可濃度依賴性地誘導肝癌細胞再分化，抑制腫瘤的生長。
實驗例3:異甘草素誘導惡性黑色素瘤細胞分化 3.1實驗材料
異甘草素，購自江西本草天工科技有限公司，純度99.8% (HPLC法測定)。B16小鼠黑色 素瘤細胞株，購自中國典型培養物保藏中心(武漢大學保藏中心)，以含10%胎牛血清、100 U/ml 青霉素、100 yg/ml鏈霉素的DMEM培養基(GIBCO)培養于37°C，5% C〇2，飽合濕度的二氧 化碳培養箱。
3. 2 MTT法和臺盼藍扎染法測定細胞活力
取處于對數生長期的B16細胞，臺盼蘭染色進行活細胞計數，調整細胞濃度為lX107ml， 取2塊96孔培養板，每孔加入IOO Hl細胞懸液，置于5% C02，37'C培養箱中培養24h。 96孔板 各孔中補充含有異甘草素的完全培養基，至終濃度分別為O. 1 iig/ml, 1.0 iig/inl， 2.5 yg/ml， 5.0 ug/ml， 7.5 ug/ml， 10.0 yg/ral， 15.0 ug/ml， 20.0 ug/ml，另設不加藥 處理組為正常對照組，每處理設4個平行孔。細胞繼續培養72 h后，取一96孔板，2.5g/L胰蛋白酶消化細胞后，臺盼藍染色計數各孔死活細胞數目，計算各處理組細胞死亡率
^+^,。八 死細胞數 mn
死亡率(,(活纖數+死細胞數)x賺
另一培養板細胞加入MTT溶液IO yl (5mg/ml)，繼續培養4 h，輕輕吸去上清，每孔加入150 Hl DMSO，振蕩溶解甲臢結晶。酶標儀檢測570 nm吸光值(0D57。)以630 nm波長作為參考波 長。按下式計算藥物對細胞增殖的抑制率
抑制率，對廳s;r灘遷
結果表明(圖11)，異甘草素可濃度依賴性地抑制B16細胞的增殖，20 u g/ml抑制率(％) 達109.8土7. 70,同時細胞死亡率(％)增加(18. 3±2. 41 w4. 14±0. 59, P<0. 01 )。但在10 u g/ml異甘草素可明顯抑制細胞增殖，抑制率75. 4±5. 42，但細胞死亡率(％)并未增加(4. 63 ±0.42 ks4. 14±0.59),更低濃度雖也對細胞增殖具有抑制作用，但細胞死亡率未見明顯升 高。表明異甘草素在10 u g/ml以下濃度時對腫瘤細胞增殖的抑制作用不是通過殺死腫瘤細 胞起抑瘤作用的。
3. 3異甘草素對B16細胞分泌黑色素的影響
取對數生長期的B16細胞，以2.5g/L的胰蛋白酶充分消化，以含10%小牛血清的完全培 養液稀釋并接種于6孔板上，使成3Xl(f細胞/ L，置培養箱中溫育24h后，加入含異甘草素 的完全培養液，使異甘草素的終濃度為0. 1 u g/ml， 1.0 ug/ml， 5.0 " g/ml和10.0 ug/ml， 正常對照組加等量的完全培養液，繼續培養72 h，實驗結束前用PBS洗滌3次，胰酶消化， 計數，1000 gX10 min離心收集細胞，溶十1 ml含I mol/L NaOH和10% DMSO溶液中，室 溫放置30min， 400nm處測定吸光度，換算為10"個細胞的吸收度。實驗重復三次。
結果表明，異甘草素可濃度依賴性地誘導B16細胞表達黑色素(圖12)。
3.4異甘草素對B16細胞軟瓊脂克隆形成能力的影響
細胞處理同3. 3實驗，以不同濃度異甘草素處理72 h，胰蛋白酶消化后臺盼藍染色計數， 調整活細胞濃度為1 X 1(^細胞/ml。 6 g/L瓊脂糖的RPM1640培養液1. 5 mL鋪于直徑3 cm的 培養皿中，形成底層瓊脂,含有不同濃度藥物處理過的1000個細胞的3. 3 g/L低熔點瓊脂糖的 RPMI 1640培養液1.0 mL鋪于平皿中，形成t層瓊脂。另設未處理細胞作正常對照，每處理 設4個平行。培養2周后，倒置相差顯微鏡下觀察細胞克隆形成情況，以細胞數〉50個的克隆 計為一個克隆，計算細胞克隆形成率。
結果表明，異甘草素可濃度依賴性地抑制B16黑色素細胞表達黑色素(圖12)。
3.5異甘草素對B16細胞體內成瘤能力測定
取對數生長期的B16細胞，0.25%胰蛋白酶消化后接種于 ml培養瓶，培養24h后，分別加入l.O yg/ml， 5.0 ug/ml和10. 0 " g/ml濃度的異甘草素處理72 h，胰蛋白酶消 化收集細胞，臺盼藍染色計數活細胞數，調整細胞濃度至lXl(T細胞/ml。于C57BL/6小鼠腋 下接種上述瘤細胞懸液0.2 ml，另設未處理組作為正常對照組，每組接種15只小鼠，于接 種次日每日觀察成瘤情況，記錄可觸及腫瘤出現時間，接種3周后處死小鼠，剝取瘤組織， 稱重。
結果表明(如表l)，結果表明，異甘草素處理腫瘤細胞體內腫瘤形成能力明顯降低，腫 瘤大小也明顯降低，且有一定的濃度依賴性。
表l.異甘草素對黑色素瘤B16體內成瘤能力的影響
組別藥物濃度 (ti g/ml)成瘤率平均瘤重 (g)
正常對照組15/151. 99±0. 87
異甘草素組1.07/150.83±0. 65"
異甘草素組5. 05/15**0. 64 ±0.71**
異甘草素組10.03/15**0.45±0. 57**
3. 6統計學處理
成瘤率實驗數據采用X2檢驗；其它實驗結果均以；±5表示，采用單因素方差分析進行組
間顯著性比較，樣本均數間比較采用t檢驗。^示P〈0.05，表明給藥組與正常組比較有顯著性 差異；"示P〈0.01，表明給藥組與正常組比較有極顯著性差異。
上述結果證明異甘草素可濃度依賴性地誘導黑色素瘤細胞再分化，降低其體內成瘤能力， 抑制腫瘤的生長。
以上所有研究表明，異甘草素在低于10ng/ml濃度時，可濃度依賴性地抑制多種腫瘤細 胞增殖和克隆形成能力，誘導腫瘤細胞表現為正常細胞表型，表明異甘草素可誘導腫瘤再分 化。上述研究證明異甘草素可作為分化誘導劑用于臨床白血病和多種實體瘤的治療。
權利要求
1.異甘草素作為制備癌分化誘導劑的藥物中的應用。
2. 根據權利要求l所述藥物，其特征在于用于制備供臨床使用的各種制劑，包括采用常規或 特殊制劑工藝制備而成的經口服或非口服途徑方式給藥的制劑。
3. 如權利要求l所述的應用，其特征在于用于制備治療白血病的治療藥物中的應用。
4. 如權利要求l所述的應用，其特征在于用于制備治療肝癌的治療藥物中的應用。
5. 如權利要求l所述的應用，其特征在于用于制備治療惡性黑色素瘤的治療藥物中的應用。
6. 如權利要求l所述的應用，其特征在于用于制備治療其他惡性腫瘤的治療藥物中的應用。
全文摘要
本發明屬醫藥技術領域。本發明公開了異甘草素作為制備誘導腫瘤分化藥物的應用。發明人經過試驗，證明異甘草素在低濃度時，不能殺死腫瘤細胞，但具有誘導白血病、肝癌、惡性黑色素瘤等腫瘤細胞逆轉為正常有功能細胞的作用。根據這一作用，異甘草素可添加相應藥用輔料制備成口服或注射制劑，應用于臨床治療各種惡性腫瘤，具有療效確切、無明顯毒副作用、可長期連續用藥的優點，明顯優于現有臨床治療藥物。
文檔編號A61K31/12GK101627982SQ20081007291
公開日2010年1月20日 申請日期2008年7月17日 優先權日2008年7月17日
發明者偉 付, 婷 劉, 張玉柯, 忌 李, 李德芳, 王振華, 鄭秋生, 陳紅梅 申請人:石河子大學