專利名稱：一種扁擔(dān)桿皮的提取物制備方法及其抗腫瘤用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及天然藥物領(lǐng)域，尤其是涉及一種扁擔(dān)桿皮(根皮和莖皮)的提 取物制備方法及其抗腫瘤用途。 技術(shù)背景扁擔(dān)桿(6Ve『/a G. 0011)為杉義樹科(77//13<^136)扁擔(dān)桿屬(^^ ^(3)柏」物，該屬植物全世界約有150種，為灌木或小喬木。據(jù)中國(guó)植物志記載我國(guó)有 27種和1存疑種，主要分布于云南、廣西、廣東和江西等省。在非洲和亞洲一 些國(guó)家地區(qū)，部分扁擔(dān)桿屬植物被作為民間草藥使用，多具有抗菌消炎作用。 ^口南非的<7re,/a occ/^/e/^aY/s和巴基其斤i旦的6"re『/a erj^力raea在民間4乍為 傳統(tǒng)草藥治療傷口纟田菌感染(D. S. Grierson, A. J. Afolayan. Antibacterial activity of some indigenous plants used for the treatment of wounds in the Eastern Cape, South Africa. Journal of Ethnopharmacology. 1999, 66 (1): 103-106 ; Mudassir A. Zaidi， Sidney A. Crow. Biologically active traditional medicinal herbs from Balochistan， Pakistan. Journal of Ethnopharmacology. 2005, 96 (1): 331-334 )。 Cre『/a Wco7or在蘇丹作為傳 統(tǒng)草藥治療皮膚膿胞瘡，還有鎮(zhèn)靜作用(M. W. Jaspers, A. L Bashir, L H. Zwaving. InvestigationofGrewiabicolorjuss. Journal of Ethnopharmacology. 1986， 17 (3): 205-211 )?！缎?lt;'務(wù)本*》記載小花扁4旦^N支 葉煮汁可治小兒蛔蟲病，《開寶本草》稱其可"主三蟲，下氣消谷"(唐慎微.重 修政和經(jīng)史證類備急本草.北京人民衛(wèi)生出版社，1975， 354 ),《中藥大辭典》 記載其全抹和枝葉能祛風(fēng)除濕，理氣消痞，可治小兒因蟲痃積，大人氣痞，脾 虛食少，婦女崩帶，風(fēng)濕(江蘇新醫(yī)學(xué)院編，中藥大辭典.科技出版社出版， 1986, 1747 )。我國(guó)部分地區(qū)民間亦用扁擔(dān)桿的根皮治療皮膚膿胞瘡等細(xì)菌感染。 但未見有扁擔(dān)桿根皮和莖皮的水一 乙醇提取物抗腫瘤作用報(bào)道。 發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供一種扁擔(dān)桿皮的提取物的制備方法。 本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供扁擔(dān)桿皮的提取物的新用途，即扁擔(dān)桿皮的提 取物在制備抗腫瘤藥中的應(yīng)用。本發(fā)明的第一個(gè)目的是這樣實(shí)現(xiàn)的將洗凈晾干后的扁擔(dān)桿根皮或莖皮先 進(jìn)行干燥，再粉碎得到粉末，然后在粉末中加入0%~100%的乙醇水溶液，加熱 回流提取l-3次，合并提取液，濃縮，干燥，得提取物。扁擔(dān)桿皮的提取物可直接藥用，也可通過加入藥用輔料制成片劑、膠嚢、 口月良液、軟膏、注射劑或乳劑等合適劑型使用。本發(fā)明的第二個(gè)目的是這樣實(shí)現(xiàn)的扁擔(dān)桿皮的提取物在制備抗腫瘤藥中 的應(yīng)用，抗腫瘤藥包括抗宮頸癌、肉瘤、白血病、皮膚癌、胃癌、肺癌、肝癌、 食管癌和乳腺癌藥。下面是扁擔(dān)桿根皮和莖皮的提取物(GE)抗腫瘤作用的藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)和數(shù)據(jù)1.扁擔(dān)桿根皮的乙醇水溶液(0% ~ 100% )提取物GE ( 0% ~簡(jiǎn))對(duì)小鼠宮 頸癌U14和小鼠S180肉瘤的影響按無(wú)菌操作程序，從接種后7 ~ 9d腫瘤生長(zhǎng)及動(dòng)物健康程度較好的瘤源動(dòng)物 中抽取腹水，用生理鹽水稀釋成2. 5~3x 10'/ml瘤細(xì)胞懸液。取昆明種小鼠50 只(宮頸癌U14實(shí)驗(yàn)小鼠為雌性；S180肉瘤實(shí)驗(yàn)小鼠雌雄各半)，體重20g士2g, 于每只小鼠右腋皮下接種O. 2ml。隨機(jī)分成生理鹽水(NS)組、環(huán)磷酰胺(CTX) 組、高中低劑量給藥組，每組各10只。接種24h后開始灌胃給藥，NS組給予O. 2ml 生理鹽水、CTX組給予CTX 25mg/kg，給藥組給予^是耳又物100、 250、 500mg/kg, 每天l次，連續(xù)10天。于末次給藥24h后處死動(dòng)物，稱體重，完整剝離瘤塊，用 濾紙吸干后稱重，求抑瘤率。統(tǒng)計(jì)方法采用方差分析。抑瘤率(。/。)"NS組平均瘤重-實(shí)驗(yàn)組平均瘤重)/NS組平均瘤重x 100%表l扁擔(dān)桿根皮的乙醇水溶液(0% 100%)提取物GE (0% 100%)對(duì)小鼠宮頸癌U14和小鼠S180肉瘤 的抑制作用(—s， n=10)_組別劑量(mg/kg.d)瘤重(g)抑瘤率U14S180U14S180NS-1.207±0.4131.549 ±0.498--CTX250.574±0.1730.722±0.23852.44%53.39%GE(0%)腦0.854±0.2361.224±0.41229.25%20.98%2500.729 ±0.2400.987±0.28239.60%36.28%5000.552±0.2380.802±0.25854.27%48.22%GE(10%)1000.825±0.3121.302±0.51031.65%15.94%2500.739±0.2161.034±0.30738.77%33.25%5000.601 ±0.2280.853 ±0.30650.21%44.93%GE(30%)1000.884±0.2191.339±0.48726.76%13.56%2500.802 ±0.2341.204±0.37633.55%22.27%5000.658±0.1870.905 ±0.28945.48%41.57%GE(50%)1000細(xì)±0.3211.303±0.45828.09%15.88%2500.792 ±0.2781.189 ±0.34234.38%23.24%5000.632±0.1560.918±0.25647.64%40.74%GE(70%)1000.889 ±0.2471.287±0.35626.35%16.91%2500.810±0.3031.125±0.36032.89%27.37%5000.659±0.1360.903±0.19845.40%41.70%GE(90%)1000,卯9±0.2571.152±0.38324.69%25.63%2500.785 ±0.2290.958±0.31334.96%38.15%5000.687±0.2230.823 ±0.32743.08%46.87%GE(100%) 訓(xùn)0.920 ±0.2311.101 ±0.36423.78%28.92%2500.801 ±0.2430.962 ±0.28733.64%37.90%5000.696±0.3010.819±0.28942.34%47.13%注給藥組瘤重與NS組比PO.Ol由表1可以看出，扁擔(dān)桿根皮的不同濃度乙醇提取物(GE)以劑量依賴方 式抑制小鼠宮頸癌U14和S180肉瘤實(shí)體瘤的瘤重，抑瘤率均超過30°/ ，即有明 顯的抗腫瘤作用。2.扁擔(dān)桿根皮的乙醇水溶液(0% ~ 100°/。)提取物GE ( 0% ~ 100% )對(duì)人腫瘤 細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用細(xì)胞抹人早幼粒白血病細(xì)胞HL-60,人表皮鱗癌細(xì)胞A4 31，人低分化胃 癌細(xì)胞BGC-823，人肺癌細(xì)胞A549,人肝癌細(xì)胞SMMC-7721 ，人食管癌細(xì)胞Eca 109，人宮頸癌細(xì)力包Hela,人乳腺癌細(xì)胞MCF-7。藥物及配制提取物GE采用培養(yǎng)液配制，實(shí)驗(yàn)終濃度為1、 3、 10、 30和 lOOjug/ml;陽(yáng)性對(duì)照藥5-氟尿嘧咬(5Fu )采用培養(yǎng)液配制；陰性對(duì)照為培養(yǎng) 液。實(shí)驗(yàn)方法采用MTT法對(duì)所選的8種細(xì)胞林進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期、 狀態(tài)良好的肺瘤細(xì)胞，用含l 0°/。胎牛血清的RPMI164O培養(yǎng)液將細(xì)胞濃度調(diào)整為2 xl05/ml, ^接種于96孔;tl中，加入各相應(yīng)濃度藥物，于37。C, 5。/aC02培養(yǎng)箱中 培養(yǎng)，各種藥物每濃度設(shè)6個(gè)平行孔。培養(yǎng)48小時(shí)后，每孔加入MTT溶液10u 1, 使其終濃度為5 mg/ml。繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)后，吸去各孔中上清液，加入DMSO 200 U 1 ，平板搖床上震搖5分鐘，用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在57Onra波長(zhǎng)下測(cè)定各孔的吸光 值。按下式計(jì)算細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率(％)=(對(duì)照組吸光值-實(shí)驗(yàn) 組吸光值)/對(duì)照組吸光值x 100%;并用回歸法求出受試藥物對(duì)各種腫瘤細(xì)胞的 半數(shù)殺傷濃度(IC5。)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果根皮提取物GE對(duì)以上8個(gè)腫瘤細(xì)胞林的半數(shù)殺傷濃度(IC5。)均 小于20 n g/ml，特別是對(duì)人早幼粒白血病細(xì)胞HL-60抑制作用優(yōu)于陽(yáng)性對(duì)照5-氟尿嘧啶(見表)，說明GE均有明顯的抗腫瘤作用。表2受試藥物對(duì)8個(gè)腫瘤細(xì)胞株的半數(shù)殺傷濃度(IC50)細(xì)胞株ic50((ig/ml)GE (0%)GE (0%)GE (30%)GE (50%)GE (70%)GE (90%)GE (100o/fl,) 5FuHL-600.0530.0470.0680,039O麓0.0410.120.87A4317,357.189.229,5612.1212.3614.782.35BGC-82312.7613.4517.8718.1217.0918.1719.042.10A54914.2814.6912.0714.3415.0917.9815.345.38SMMC-777.979.1811.388.279.659.7612.471.9821Eca 1095.085.1511.838.2712,8415.0414.5712.03Hela4.644.834.097.547.707.899.453.86MCF-711.9712.0712.5810.0615.3919.5219.025.13高效液相色譜和抗胂瘤實(shí)驗(yàn)研究還表明扁擔(dān)桿莖皮不同濃度乙醇水溶液提取物與相對(duì)應(yīng)的根皮提取物的化學(xué)成分和抗腫瘤效果基本一致。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明，但應(yīng)理解本發(fā)明的范圍非僅 限于這些實(shí)施例的范圍。實(shí)施例1:扁擔(dān)桿根皮提取物的制備將洗凈晾干后的扁擔(dān)桿根皮lkg先進(jìn)行干燥，再粉碎得到粉末，然后用水 或不同濃度的乙醇水溶液(見表3 )將粉末在室溫下浸泡12h后，加熱回流提取 3次，每次2h,濾過，合并濾液，減壓蒸干得扁擔(dān)桿根皮提取物千膏(GE), 產(chǎn)量見表3。表3扁擔(dān)桿根皮不同濃度乙醇水溶液提取物產(chǎn)量乙醇水溶液濃度(％)010305070卯訓(xùn)GE(根皮)(g)1101201401601509180實(shí)施例2:扁擔(dān)桿莖皮提取物的制備將洗凈晾干后的扁擔(dān)桿莖皮lkg先進(jìn)行干燥，再粉碎得到粉末，然后用水 或不同濃度的乙醇水溶液(見表4 )將粉末在室溫下浸泡12h后加熱回流提取3 次，每次2h，濾過，合并濾液，減壓蒸干得扁擔(dān)桿莖皮提取物干膏(GE)，產(chǎn) 量見表4。表4扁擔(dān)桿莖皮不同濃度乙醇水溶液提取物產(chǎn)量乙醇水溶液濃度(％)01030507090100GE(莖皮)(g)1011081251461358473實(shí)施例3:用本技術(shù)領(lǐng)域公知的方法，以扁擔(dān)桿根皮提取物干膏(GE )為原料，制成 抗宮頸癌乳劑。 實(shí)施例4:用本技術(shù)領(lǐng)域公知的方法，以扁擔(dān)桿莖皮提取物干膏(GE)為原料，制成 抗乳腺癌片。 實(shí)施例5:用本技術(shù)領(lǐng)域公知的方法，以扁擔(dān)桿莖皮提取物干膏(GE)為原料，制成 抗食管癌注射液。 實(shí)施例6:用本技術(shù)領(lǐng)域公知的方法，以扁擔(dān)桿根皮提取物干膏(GE)為原料，制成 抗白血病月交囊。 實(shí)施例7:用本技術(shù)領(lǐng)域/>知的方法 抗胃癌口服液。實(shí)施例8:用本技術(shù)領(lǐng)域公知的方法 抗皮膚癌軟膏。 實(shí)施例9:用本#支術(shù)4貞域/>知的方法 抗肝癌膠嚢。 實(shí)施例10:用本^支術(shù)領(lǐng)域/>知的方法 抗肺癌口服液。以扁擔(dān)桿根皮提取物干膏(GE)為原料，制成 以扁擔(dān)桿根皮提取物干膏(GE)為原料，制成 以扁擔(dān)桿莖皮提取物干膏(GE)為原料，制成 以扁擔(dān)桿根皮提取物干膏(GE)為原料，制成
權(quán)利要求
1、一種扁擔(dān)桿皮的提取物制備方法，其特征在于將洗凈晾干后的扁擔(dān)桿根皮或莖皮先進(jìn)行干燥，再粉碎得到粉末，然后在粉末中加入0％～100％的乙醇水溶液，加熱回流提取1-3次，合并提取液，濃縮，干燥，得提取物。
2、 如權(quán)利要求1所述的扁擔(dān)桿皮的提取物制備方法，其特征在于扁擔(dān)桿皮的 提取物可直接藥用，也可通過加入藥用輔料制成片劑、膠嚢、口服液、軟膏、 注射劑或乳劑等合適劑型使用。
3、 扁擔(dān)桿皮的提取物在制備抗腫瘤藥中的應(yīng)用。
4、 如權(quán)利要求3所述的扁擔(dān)桿皮提取物在制備抗腫瘤藥中的應(yīng)用，其特征在于 抗肺瘤藥包括抗宮頸癌、肉瘤、白血病、皮膚癌、胃癌、肺癌、肝癌、食管癌 和乳腺癌藥。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種扁擔(dān)桿皮的提取物制備方法及其抗腫瘤用途，它將洗凈晾干后的扁擔(dān)桿根皮或莖皮先進(jìn)行干燥，再粉碎得到粉末，然后在粉末中加入0％～100％的乙醇水溶液，加熱回流提取1-3次，合并提取液，濃縮，干燥，得提取物。本發(fā)明通過多種實(shí)驗(yàn)證實(shí)了扁擔(dān)桿皮的提取物具有明顯的抗腫瘤作用。
文檔編號(hào)A61P35/00GK101244100SQ20081007069
公開日2008年8月20日 申請(qǐng)日期2008年2月27日 優(yōu)先權(quán)日2008年2月27日
發(fā)明者劉建群, 吳繼梅, 寇曉莉, 沁 洪 申請(qǐng)人:江西中醫(yī)學(xué)院