抗豬藍耳病卵黃抗體飼料添加劑和注射劑及其制備方法

專利名稱：抗豬藍耳病卵黃抗體飼料添加劑和注射劑及其制備方法
技術領域：
本發明屬于飼料添加劑和醫藥領域，特別涉及一種抗豬藍耳病卵黃抗體 飼料添加劑和注射劑及其制備方法。
背景技術：
目前，豬病毒性疾病仍是當前嚴重制約養豬業健康發展的主要傳染病。 全國每年均有上億頭豬在不同季節發生病毒性傳染病。豬一旦感染發病，則 有起病急，臨床癥狀嚴重，極易傳播擴散，以及病死率和死亡率均較高的特 點，對養殖業危害極大。藍耳病由豬群被藍耳病病毒感染引起的，豬藍耳病比較普遍，且非常嚴 重。但從當前藍耳病發病特點來看，發病已由過去母豬繁殖障礙為主轉為以 保育豬的呼吸道病綜合征為主。在臨床上見有初產母豬常發生流產、早產及產死胎等；經產母豬常出現滯后產、不發情或屢配不孕，而流產與死胎的大 為減少，亞臨床感染增多；斷奶后的仔豬發病率上升，病情嚴重，死亡率增 高。臨床上常見藍耳病與圓環病毒II型、或與豬藍耳病毒或與偽狂犬病毒混 合感染，同時繼發多種細菌感染，如肺炎支原體、放線桿菌、鏈球菌及巴氏 桿菌等。使病情復雜化，出現發熱、腹式呼吸、腹瀉、后軀麻痹、共濟失調、 眼瞼水腫、皮下水腫、消瘦等癥狀，造成死亡率增高。豬藍耳病至今尚無有效的治療藥物和治療方法。近年來曾經有人ii行過 用中草藥制劑預防和治療豬病毒性疾病的試驗，但治愈率較低。抗生素及磺胺類藥物基本無效。在獸醫臨床上，卵黃抗體已廣泛用于雞(傳染性法氏嚢、新城疫、雞白 痢等)、鴨(肝炎)、鵝(小鵝瘟)、犢牛(腹瀉)、仔豬(黃白瘌、豬輪狀病 毒腹瀉)、羔羊(輪狀病毒腹瀉)等疫病的緊急治療和預防。卵黃抗體制備筒 單，而且具有性質均一、易提取、可有效避免非特異性免疫反應發生等特性， 在免疫技術、免疫監測、人畜治療等方面有很大的發展潛力。國內的研制工3作主要集中在對禽類疾病的防治，江蘇省農業科學研究院畜牧獸醫研究所已 獲得防治雞傳染性法氏嚢、新城疫、雞白痢、鴨肝炎、小鵝瘟等多聯高免卵黃抗體注射液；華西醫科大學一項防治禽病的卵黃抗體針劑已取得生物獸藥 證書；四川省養豬研究所研制了大腸桿菌卵黃抗體注射液。抗雞法氏嚢病、 雞新城疫、鴨病毒性肝炎高免卵黃廣泛用于治療雞法氏嚢病、雞新城疫、鴨 病毒性肝炎，均取得滿意結果。03128310.1提供一種預防仔豬腹瀉的特異性卵黃抗體及其制備方法與應用；200410084558.9提供一種抗仔豬病毒性疫病復合卵黃抗體制劑的制備方法；200410084559.3提供一種抗仔豬細菌性疫病復合卵黃抗體制劑的制備方法；200510027330.0提供一種抗豬偽狂犬病卵黃抗體的制備方法；03117507.4提供一種抗仔豬黃痢、白痢病原菌卵黃抗體及其制備和應用；02103667.5提供一種豬傳染性胃腸炎病毒卵黃抗體和抗原及其制備。目前，有關用豬藍耳病卵黃抗體的制備方法還未見報道。因此，提供一種抗豬藍耳病卵黃抗體飼料添加劑和注射劑及其制備方法，有效預防和治療豬藍耳病，是該技術領域科研人員急需開發的新課題之一。發明內容本發明的目的是克服現有技術的不足，提供一種抗豬藍耳病卵黃抗體飼 料添加劑和注射劑及其制備方法。為實現上述目的本發明所采用的實施方式如下 一種抗豬藍耳病卵黃抗 體飼料添加劑，其特征在于以豬藍耳病疫苗免疫非免疫產蛋母雞，再收集免 疫產蛋母雞卵黃并提取、制備。抗豬藍耳病卵黃抗體飼料添加劑方便預防喂 食，非常適宜豬使用。一種抗豬藍耳病卵黃抗體銅料添加劑的制備方法，其特征在于包括制備 豬藍耳病病毒免疫原；將免疫原對健康產蛋母雞進行免疫，免疫原注射劑量 為0.5-3.0ml/只雞；收集免疫8-10天后的雞下的蛋，留取含有抗豬藍耳病的卵 黃抗體的效價不小于l :64的雞蛋備用；用0.01M無菌磷酸鹽緩沖液液稀釋、0.5%羥丙曱基纖維素、鄰苯二曱酸鹽處理，取上述液體進行巴氏殺菌消毒法， 在常規噴霧干燥器中進行噴霧干燥得到飼料添加劑；該飼料添加劑內含有效 價>1 : 64的抗豬藍耳病的卵黃抗體。該飼料添加劑制備用于防治豬藍耳病。一種抗豬藍耳病卵黃抗體注射劑，其特征在于以豬藍耳病疫苗免疫非免 疫產蛋母雞，再收集免疫產蛋母雞卵黃抗體并提取、制備。抗豬藍耳病卵黃 抗體注射劑在抗豬藍耳病發病后使用，藥效更快。一種抗豬藍耳病卵黃抗體注射劑的制備方法，其特征在于將豬藍耳病疫 苗免疫非免疫產蛋母雞，通過基礎免疫和強化免疫后用血凝抑制試驗測定免 疫卵ffl效價，達標(效價>1 : 64)后收獲卵黃用無菌蒸餾水對倍稀釋，用乳 酸液進行酸處理去除雜蛋白、抽濾液進行鹽析，除鹽后調整IgY的濃度分裝， 即成抗豬藍耳病卵黃抗體注射劑；該注射劑內含有效價>1 : 64的抗豬藍耳病 的卵黃抗體；其lgY的得率達95。/。以上， 一個免疫卵一般可得IgY80-110mg。 該注射劑制備用于治療豬藍耳病。本發明的有益效果是抗豬藍耳病卵黃抗體是治療豬藍耳的特異性生物 制品，是一種被動免疫制劑，同時還有鑒別診斷和緊急預防接種等作用，具 有較高的推廣應用價值。卵黃抗體的使用，在免疫學理論中可成為被動免疫。 當免疫缺陷、疫苗缺乏及免疫失敗時，可利用卵黃抗體注射、口服替代主動 免疫接種，發揮抗病作用。抗豬藍耳病卵黃抗體都是通過提高豬機體對抗豬 藍耳病卵黃抗體的抗體水平來防治抗豬藍耳病的。抗豬藍耳病卵黃抗體飼料 添加劑喂食豬，既使用簡便，又特適宜豬使用。由豬藍耳病病毒引起的豬藍 耳病，可直接給豬飼喂本發明產品，有效率可達85.2%以上。也可添加于飼料 中用于預防豬藍耳病。抗豬藍耳病卵黃抗體注射劑治療豬藍耳病，l-2天見效， 臨床治愈率可達90 %以上。使用本發明的卵黃抗體注射治療患藍耳病的豬， 試驗組臨床癥狀比對照組明顯減輕，且試驗組的死亡率顯著低于對照組，具 有明顯的防治豬藍耳病作用。本發明的抗豬藍耳病卵黃抗體飼料添加劑和注 射劑防治豬藍耳病效果顯著。該方法成本低，見效快，無副作用，不會產生 耐藥性菌林，制備工藝簡單，原料來源廣泛，使用方便，易于在基層推廣。
具體實施方式
以下結合實施例，對依據本發明提供的具體實施方式
詳述如下實施例l抗豬藍耳病卯黃抗體制劑的制備方法利用豬藍耳病市售疫苗通過基礎免疫和強化免疫，第一輪次以豬藍耳病 疫苗免疫非免疫產蛋母雞，免疫劑量呈2M梯度增加，每個輪次間間隔10天， 第三輪次免疫結束后10天，經卯黃抗體效價測定后收集免疫卵，無菌獲取卵黃，用0.01M無菌磷酸鹽緩沖液液稀釋、0.5%羥丙曱基纖維素、鄰苯二曱酸鹽 處理，抽濾液噴霧干燥，將粉劑封裝保存。 實施例2抗豬藍耳病卵黃抗體注射劑的制備方法將豬藍耳病疫苗免疫非免疫產蛋母雞，通過基礎免疫和強化免疫后用血凝抑制試驗測定免疫卵m效價，達標后收獲卵黃用無菌蒸餾水對倍稀釋，用乳酸液進行酸處理去除雜蛋白、抽濾液進行鹽析，除鹽后調整IgY的濃度分裝，即成抗豬藍耳病卵黃抗體注射劑。該注射劑內含有效<介>1 : 64的抗豬藍耳病的卵黃抗體。該注射劑可制備用于治療豬藍耳病。其lgY的得率達95。/。以上， 一個免疫卵一般可得IgY 80-110mg。 實施例3抗豬藍耳病卵黃抗體的飼料添加劑的制備方法其制備方法包括制備豬藍耳病病毒免疫原；將免疫原對健康產蛋母雞進 行免疫，免疫原注射劑量為0.5-3.0ml/只雞；收集免疫8-10天后的雞下的蛋， 留取含有抗豬藍耳病的卵黃抗體的效價不小于l :64的雞卵備用；用0.01M無 菌磷酸鹽緩沖液液稀釋、0.5%羥丙曱基纖維素、鄰苯二甲酸鹽處理，取上述 液體進行巴氏殺菌消毒法、在常規噴霧干燥器中進行噴霧干燥得到飼料添加 劑。該飼料添加劑內含有效價>1 : 64的抗豬藍耳病的卵黃抗體。該飼料添加 劑可制備用于防治豬藍耳病。實施例4186曰齡健康商品蛋雞，對蛋雞進行免疫，第一次每羽肌注豬藍耳病疫苗 5頭份，7天后，第二次每羽肌注豬藍耳病疫苗10頭份。基礎免疫后10天，進 行加強免疫，每次間隔10天，共進行3次。第一次每羽肌注豬痘血毒2mL,第 二次注2.5mL,第三次注3mL。6在最后一次免疫后15天，隨機取5枚高免蛋，無菌抽取蛋黃各3mL,分別 用等量pH7.2 PBS混勻，然后各加入6 mL的氯仿，室溫下作用30 min, 3000 r/min 離心20min，分成三層取上清液分別作豬藍耳病正向間接血凝實驗，檢測豬藍 耳病抗體效價。收集效價在1:32以上的蛋作高免蛋。用1%新潔爾滅消毒蛋殼，在無菌條件下收集卵黃，置組織搗碎機中用3000 r/min勻漿l min，加等量滅菌生理鹽水攪勻后分裝于滅菌玻璃瓶中，加青霉素、 鏈霉素各2000 IU/mL進行常規安全性和無菌4企驗。初診為豬藍耳病的豬，按 每千克體重0.5-l mL的劑量確定用量，選擇肌肉豐滿的部位進行多點肌肉注 射，嚴重者間隔3-4日可再次注射。同時要飲用白糖水、維生素或葡萄糖水溶 液，輔助給予青飼料等含維生素豐富的食物。應用實例l:抗豬藍耳病卵黃抗體治療豬藍耳病的臨床報告2007年10月10日天津郊區某豬場在外地購進仔豬416頭，10月13日部分豬 出現食欲減少、嗜睡、體溫升高、大便干燥等癥狀，遂請當地獸醫進行治療 無效，已死亡9頭。通過對病較嚴重的32頭豬進行臨床檢查，體溫41-41.2。C, 80%的豬出現嗜睡、停食、干球便、糞表面有白色腸粘膜，少數豬出現拉稀、 皮膚發紅、數頭豬出現蘭耳、四肢內側、腹部呈紫色血斑、眼結膜發炎、眼 瞼水腫，公豬包皮腫大、積尿，有的站立不穩，有共濟失調等精神癥狀，后 期四3支無法站立，衰竭而死亡。解剖病變心臟有出血點，肝胂大有灰色塊狀病變，脾不腫大，但邊緣 有梗死，腹股溝淋巴、腸系膜淋巴腫大充血、膀胱出血、胃大面積有出血斑， 回盲瓣有糠麩樣螯狀物，肺萎縮，肺尖葉與胸膜粘連等。臨床診斷疑似豬痘或藍耳病。實驗實診斷經天津市動物疫病預防控制中心實驗室"^斷為藍耳病。使用自制抗豬藍耳病卵黃抗體，配合抗生素治療防繼發疾病，同時堅持 天天消毒，加強護理等綜合措施。10月21日使用抗豬藍耳病卯黃抗體，每頭1.0ml治療。連續2天使用抗豬藍 耳病卵黃抗體，每頭1.0ml治療，并配合使用抗生素進行治療。10月29日觀察，拉稀的癥狀減少，精神癥狀消失，便秘有所好轉。10月31日，對全場隨機^r查35頭豬，體溫均在38-39。C之間，當天停藥觀察。11月2日豬場病情日趨穩定，部分豬食欲提高。 10月26日除少數豬體溫升高，90%的豬已恢復正常。 C區2棟l號寧中發病時間短的豬10頭，于10月22日-25日注射抗豬藍耳病 卵黃抗體至今無l頭死亡。C區2棟10號圈中發病時間長且病情比較重豬IO頭，于10月22日-25日注射 抗豬藍耳病卵黃抗體已死亡3頭，存活4頭。結論抗豬藍耳病卵黃抗體用于治療豬藍耳病效果較好，特別是在病發 早期、前期效果更為理想。當前治療動物病毒性疾病，抗病毒藥品種太少， 抗豬藍耳病卵黃抗體是防治豬藍耳病的有效藥物。豬藍耳病病毒的感染，嚴 重威脅豬的健康，造成了重大經濟損失。當豬發生豬藍耳病病時，可立即口 服或皮下注射卵黃抗體，能阻止豬藍耳病病毒進入細胞，中和病毒數量，經 2-10小時就可發現豬精神好轉，食欲增加。目前，抗豬藍耳病卵黃抗體是治療 豬藍耳病的有效藥物之一。本試驗結果表明，抗豬藍耳病卵黃抗體注射劑對 于抗豬藍耳病具有良好的治療效果。應用實例2:河北滄州某豬場累計購入仔豬449頭，購入后結果相繼發病，死亡12頭， 經臨床癥狀和實驗室診斷診斷為豬藍耳病。對剩下的437余頭豬進行了豬藍 耳病卵黃抗體治療。按每千克體重l mL的劑量確定用量，選擇肌肉豐滿的部 位進行多點肌肉注射，嚴重者間隔2日可再次注射豬藍耳病卵黃抗體。同時要 飲用白糖水、維生素或葡萄糖水溶液，輔助給予青菜、水果等含維生素豐富 的食物，結果康復359頭，有效率為82.2%。臨床試用表明，患藍耳病豬經豬藍 耳病卵黃抗體治療后的有效率高達93.5%。制成的豬藍耳病卵黃抗體，注入動 物機體后，具有療效好、安全可靠、無毒副作用和成本低等優點。上述參照實施例對該抗豬藍耳病卵黃抗體飼料添加劑和注射劑及其制備 方法進行的詳細描述，是說明性的而不是限定性的，可按照所限定范圍列舉 出若干個實施例，因此在不脫離本發明總體構思下的變化和修改，應屬本發 明的保護范圍之內。
權利要求
1、一種抗豬藍耳病卵黃抗體飼料添加劑，其特征在于以豬藍耳病疫苗免疫非免疫產蛋母雞，再收集免疫產蛋母雞卵黃并提取、制備。
2、 一種根據權利要求1所述的抗豬藍耳病卵黃抗體飼料添加劑的制備方 法，其特征在于包括制備豬藍耳病病毒免疫原；將免疫原對健康產蛋母雞進 行免疫，免疫原注射劑量為0.5-3.0ml/只雞；收集免疫8-10天后的雞下的蛋， 留取含有抗豬藍耳病的卵黃抗體的效價不小于l :64的雞蛋備用；用0.01M無 菌磷酸鹽緩沖液液稀釋、0.5%羥丙曱基纖維素、鄰苯二曱酸鹽處理，取上述 液體進行巴氏殺菌消毒方法，在常規噴霧干燥器中進行噴霧千燥得到飼料添 加劑；該飼料添加劑'內含有效價> 1 : 64的抗豬藍耳病的卵黃抗體。
3、 一種抗豬藍耳病卵黃抗體注射劑，其特征在于以豬藍耳病疫苗免疫非 免疫產蛋母雞，再收集免疫產蛋母雞卵黃抗體并提取、制備。
4、 一種根據權利要求3所述的抗豬藍耳病卵黃抗體注射劑的制備方法， 其特征在于將豬藍耳病疫苗免疫非免疫產蛋母雞，通過基礎免疫和強化免疫 后用血凝抑制試驗測定免疫卵HI效價，達標后收獲卯黃用無菌蒸餾水對倍稀 釋，用乳酸液進行酸處理去除雜蛋白、抽濾液進行鹽析，除鹽后調整IgY的濃 度分裝，即成抗豬藍耳病卵黃抗體注射劑；該注射劑內含有效價>1 : 64的抗 豬藍耳病的卵黃抗體。
全文摘要
本發明公開了一種抗豬藍耳病卵黃抗體飼料添加劑和注射劑及其制備方法。所述抗豬藍耳病卵黃抗體飼料添加劑，以豬藍耳病疫苗免疫非免疫產蛋母雞，再收集免疫產蛋母雞卵黃并提取、制備。所述抗豬藍耳病卵黃抗體注射劑，以豬藍耳病疫苗免疫非免疫產蛋母雞，再收集免疫產蛋母雞卵黃抗體并提取、制備。所述抗豬藍耳病卵黃抗體都是通過提高豬機體對抗豬藍耳病的抗體水平來防治抗豬藍耳病的。本發明的有益效益是抗豬藍耳病卵黃抗體飼料添加劑方便預防喂食，非常適宜豬使用。抗豬藍耳病卵黃抗體注射劑在抗豬藍耳病發病后使用，藥效更快。本發明療效顯著，成本低、見效快，無毒副作用，不會產生耐藥性菌株；制備簡單，原料來源廣泛，使用方便，易于推廣。
文檔編號A61P31/00GK101259272SQ20081005280
公開日2008年9月10日 申請日期2008年4月18日 優先權日2008年4月18日
發明者古長慶 申請人:天津生機集團股份有限公司