一種抗病毒金銀花中藥復方制劑及制備工藝的制作方法

專利名稱：：一種抗病毒金銀花中藥復方制劑及制備工藝的制作方法
技術領域：
：本發明涉及一種抗病毒的中藥，進一歩講是提供了一種抗病毒金銀花復方中藥注射制劑，同時還公開了其制備工藝，屬于中藥學制藥
技術領域：
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背景技術：
：目前，大多數感冒都是由病毒感染引起的，稱為病毒性感冒，流行性廣，一年四季經常發生，病毒性感冒如不能及時得到根治，還會引起其它疾病的發生，治療病毒性感冒的藥物雖然種類繁多，但療效顯著的藥物還很少見到，因而嚴重地影響了人們的工作、學習和生活。
發明內容本發明公開一種抗病毒金銀花復方中藥制劑，將其主要活性成分充分提取，制成制劑，具有明顯的抗病毒、抗菌、解熱鎮痛、抗炎和祛痰的作用。本發明還提供了上述中藥制劑的制備工藝，適合于工業化生產。本發明的中藥制劑是由以下重量份數原料制成的金銀花提取物4055、甘草提取物1825、黃芩提取物2535。具體制備工藝如下1、金銀花提取物制備金銀花加814倍量水煎煮提取二次，每次0.51.5小時，提取液濾過，合并。水提取液減壓濃縮至lg生藥/ml提取液，相對密度1.150-1.170(25°C);在攪拌下，向濃縮液中加入95y。乙醇3.7L，使藥液含醇量至75%,靜置24小時；取上清醇溶液，過濾，濾液回收乙醇至流浸膏狀(無醇味)，加水1.0L攪拌溶解，過濾，得到每ml相當于lg生藥的濾液，相對密度1.060-1.080(25°C);濾液通過裝有2L(乙醇溶脹后體積)經處理的SP-700大孔吸附樹脂柱，依次用4倍量樹脂柱體積的水洗脫，水洗脫液棄去；再用6倍量樹脂體積的20%乙醇洗脫，減壓回收20%乙醇洗脫液至濃縮液(相對密度1.080)，冷凍干燥，粉碎，即得金銀花提取物。2、金銀花提取物45g溶于200ml注射用水，溶解后，加入10%NaOH(0.25M)溶液，邊加邊攪拌調pH值在6.50~7.00之間；3、甘草提取物20g加入200ml注射用水中，加入10%NaOH(0.25M)溶液，邊加邊攪拌，溶解后，調pH值在6.5(T7.00之間；4、黃芩提取物35g加入400ml注射用水中，邊加邊攪拌，充分混懸后，加10%NaOH(O.25M)溶液調pH值至完全溶解為止，溶液呈黃綠色溶液，調pH值在6.507.00之間；5、將上述三種提取物的水溶液充分混合，pH值控制在6.50，.00之間。6、用0.45um微孔濾膜過濾后，加注射用水至1000ml，在無菌潔凈室內，采用截留相對分子質量1萬的超濾膜過濾后，灌裝，每瓶lml藥液。在本發明中，以金銀花為君藥，發揮清熱解毒，涼散風熱之功；佐以黃芩為清熱燥濕，瀉火解毒之能；就甘草的補脾益氣，清熱解毒，祛痰止咳，緩急止痛之力，調和諸藥共奏抗炎、解熱、抗菌、抗病毒之效，治療由外感風熱引起的感冒、發熱、咳嗽、咽喉腫痛等病癥，還可適用于細菌或病毒引起的高熱等危急重癥患者的治療。以下實驗證明本發明藥物制劑在抗病毒的藥效抗病毒作用通過觀察本發明制劑的體內、體外抗病毒作用，明確其抗病毒作用。本發明制劑對病毒所致細胞病變作用的影響用細胞維持液分別將病毒唑注射液、本發明制劑稀釋成不同濃度，加入已長成單層細胞管中，每一稀釋度接種4支細胞管，置35"培養，連續觀察7天，考察藥物對細胞毒性作用。病毒毒力測定用細胞維持液分別將流感病毒亞甲1型(H1N1)、腺病毒3型(ADV:,)、單純皰疹病毒II型(HSV-II)三種病毒以10倍遞次稀釋成5個不同稀釋度，分別加入己長成單層細胞的96孔培養板中，然后置35'C、5%(:02溫箱內孵育2小時，更換維持液，連續觀察3小時，記錄細胞病變程度。同時設TH常細胞對照組。計算病毒半數感染量(TCIDM)。以測定病毒毒力。藥物對三種病毒的抑制測定分別以200u130TCI"。的三種病毒感染HeLa細胞，37'C、5y。C()2溫箱內孵育1小時吸出，加入無毒界限的病毒唑和本發明制劑細胞維持液，35°C、5。/。C02溫箱內繼續培養，觀察3天，記錄細胞病變程度，測定藥物對三種病毒的抑制。本發明制劑對小鼠流感病毒性肺炎的影響取昆明種小鼠，隨機分組，取小鼠肺適應性流感病毒8個稀釋度，每只小鼠經乙5醚輕度麻醉后分別滴鼻感染，以死亡和生存為觀察指標，24小時死亡的不予統計。每天觀察，直至感染后14天為止，計算出病毒的半數致死量(LD5)。另取小鼠隨機分組，設本發明制劑三個組、病毒嘩(70mg/kg)、病毒對照組、IH常組共六個組。乙醚輕度麻醉后，以15LD5(,的流感病毒液滴鼻感染小鼠，IH常組以生理鹽水滴鼻。于感染前一天開始腹腔注射給藥，連續5天，每R1次，病毒對照組、正常對照組給予同體積的生理鹽水，感染后4天處死小鼠，取出鼠肺，沖洗兩次，吸干表面水分，稱出肺重，計算肺指數與抑制率，與病毒對照組，進行組間t檢驗。本發明制劑對小鼠體內病毒顆粒增值的影響取小鼠隨機分組，同樣設本發明制劑三個組、病毒唑(70mg/kg)、病毒對照組、正常組共六個組。乙醚輕度麻醉后，以IOOOLI的流感病毒液滴鼻感染小鼠，正常組以生理鹽水滴鼻。于感染前一天開始腹腔注射給藥，每R1次，病毒對照組、IH常對照組給予同體積的生理鹽水。在病毒增殖高峰時(感染后48小時)解剖取肺，固定，制成組織切片后，加入FM1兔免疫血清，再加標有熒光素的氧抗兔IgG-FITC，每只小鼠鏡下計數30個細支氣管中含有特異性熒光顆粒的支氣管數，計算出各組特異性熒光顆粒細支氣管比率，進行組間比較。結論病毒唑濃度在250ug/ml以下，本發明制劑濃度在畫tig/ml，對HSV-II、體1、ADV,細胞均無毒性作用。H1N1病毒、ADV:,病毒、HSV-II病毒對Hela細胞的TCIDs。分別是10—"/200ul、10—2.7200ii1、10—:'7200ii1。1000iig/ml的本發明制劑對流感病毒亞甲1型(H1N1)、腺病毒3型(ADV3)、單純皰疹病毒II型(HSV-n)三種病毒致Hela細胞病變有較好的保護作用，尤其對HlNl、HSV-II病毒有較強的抗病毒作用。對小鼠流感病毒性肺炎模型，本發明制劑75、150mg/kg兩個劑量組能顯著降低小鼠肺指數和升高肺指數抑制率，與病毒唑對照組比較有明顯差異性。對小鼠肺內病毒顆粒增殖的研究發現，本發明制劑37.5、75、150mg/kg三個劑量下出現的特異性熒光顆粒比率分別是58.9%、53.4%、42.1%,具有一定的量效關系；表明對小鼠肺內病毒顆粒增殖有顯著的抑制作用。②抗菌作用體外抑菌作用將本發明制劑用滅菌水稀釋成不同濃度，分別定量地加到熱溶解后的肉湯瓊脂培養基中，攪勻，制成含藥培養皿，在用接種器接種各種細菌的種菌液，觀察各平皿的菌落生長情況，確定本發明制劑的最小抑菌濃度。對金黃色葡萄球菌感染小鼠的保護作用取昆明小鼠隨機分5組，即本發明制劑高、中、低劑量組，雙黃連組、生理鹽水對照組，各組均尾靜脈注射給藥，每F1l次，連續5天。末次給藥后30Min，腹腔注射金黃色葡萄球菌培養液，觀察48h內小鼠的死亡數。結果顯示本發明制劑對甲型溶血性鏈球菌，乙型溶血性鏈球菌，卡他奈瑟氏菌、金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌有不同程度的體外抑制作用，其中對乙型溶血性鏈球菌有較強的抑制作用，最小抑菌濃度15.62。感染金黃色葡萄球菌小鼠在給予本發明制劑高劑量后，其死亡率明顯低于生理鹽水組(p<0.01)，與雙黃連組相差不大。③抗炎作用通過對小鼠足跖腫脹模型的影響，對醋酸所致小鼠毛細血管通透性升高的影響，對二甲苯致小鼠耳殼腫脹的影響的研究，明確本發明制劑的抗炎作用。對小鼠足跖腫脹的影響取小鼠隨機分成5組，本發明制劑低、中、高劑量、阿司匹林，生理鹽水對照組。致炎前10ndn尾靜脈注射給藥l次，以1%瓊脂為致炎劑，測量致炎后0.5、1、2、4、6h足跖容積變化，以致炎前后的差值作為腫脹度，并按下式計算足腫脹百分率，進行組間比較。對小鼠毛細血管通透性的影響取小鼠隨機分成5組，即本發明制劑低、中、高劑量，阿司匹林組，生理鹽水對照組。各組均尾靜脈注射給藥，每天1次，連續3天。最后1次給藥后lOmin尾靜脈注射伊文思藍，并立即腹腔注射醋酸，30分鐘后脫頸椎處死小鼠，剪開腹腔，用生理鹽水洗滌，吸出洗滌液，合并后加入生理鹽水至10ml，離心取上清液，在590nm處測定吸收度，進行組間比較。對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響取小鼠隨機分組，即本發明制劑低、中、高劑量，阿司匹林組，生理鹽水對照組。各組均尾靜脈注射給藥，每天1次，連續3天。最后1次給藥后10min，以二甲苯棉球接觸小鼠右耳正反兩面5秒，15分鐘后處死，用打孔器將小鼠雙耳同部位等面積切下，稱重，計算右耳炎癥腫脹度，進行組間比較。結果顯示小鼠足跖致炎后半小時開始，本發明制劑中、高劑量可顯著降低足跖腫脹率，與對照組相比具有顯著性差異，且具有良好的良效關系。本發明制劑低劑量有降低腫脹率的趨勢。本發明制劑中、高劑量能顯著降低伊文思藍吸光度，與對照組相比具有顯著性差異本發明制劑中、高劑量均能使致炎后耳增重百分率下降，與對照組相比具有顯著性差異，且呈量效依賴性。其中本發明制劑低劑量有降低致炎耳增重百分率的趨勢。④解熱作用通過觀察對傷寒、副傷寒、甲乙三聯菌致家兔發熱模型體溫的影響，對酵母致大鼠發熱模型體溫的影響，明確其解熱作用。對家兔解熱作用家兔隨機分組，試驗前測定基礎體溫，耳靜脈注射傷寒、副傷寒、甲乙三聯菌苗，同時靜脈注射給藥，分別于致熱后l、2、3、4小時各測肛溫1次，以不同時間肛溫與基礎肛溫之差值為體溫變化指標，迸行組間比較。對大鼠解熱作用取大鼠測基礎體溫，每組皮下注射酵母菌懸液，注射4小時后測量大鼠的肛溫，按體溫增高值將大鼠隨機均分成5組，致熱10分鐘后，分別尾靜脈注射給藥，給藥后0、0.5、1、2、4、小時測量肛溫。以每只大鼠個不同時間點的體溫與基礎體溫的差值作為體溫變化的指標，進行組間比較。結果顯示本發明制劑對體溫升高的家兔，在給藥后l、2、3、4小時有明顯的抑制作用，與對照組相比具有顯著差異，且本發明制劑抑制體溫升高的作用呈一定的量效關系，阿司匹林亦有顯著解熱降溫作用。本發明制劑中、高劑量對酵母致熱的大鼠均有明顯的解熱降溫的作用，在致熱后0.5小時到4小時內與對照組的差異具有性意義。同阿司匹林比較，本發明制劑降溫作用比較緩和平穩，且呈一定的量效關系。對小鼠的祛痰作用通過觀察對小鼠氣管段酚紅排泌量的影響，明確其所具有的祛痰作用。取小鼠隨機分組，試驗前除灌胃給于氯化銨外，其余各組均尾靜脈注射相應藥液，每天1次，連續2天，于末次給藥后10min，腹腔注射苯酚紅，30分鐘處死動物，剝離氣管周圍組織，剪下自甲狀軟骨下至氣管分支處的一段氣管，用濾液吸取表面血液，插入7號針頭，以5%碳酸鈉沖洗3次，沖洗液合并，以苯酚紅標準管比色，在546皿處測OD值，進行比較結果顯示本發明制劑各劑量組及氯化鈸組均能顯著升高氣管段排泌酚紅0D值，提示酚紅排出率明顯增高，且各劑量組間呈明顯的量效關系，本發明制劑中、高劑量組增強小鼠氣管排泌苯酚紅的作用優于氯化銨組，表明此制劑具有明顯的祛痰作用。對小鼠的鎮痛作用通過觀察對醋酸致小鼠扭體的影響，明確其所具有的鎮痛作用。取小鼠隨機分組，試驗前各組小鼠分別尾靜脈注射相應藥液，對照組給予等體積的生理鹽水，每天l次，連續3天，于最后1次給藥后腹腔注射醋酸，觀察30分鐘內各組動物由醋酸誘發的扭體數，進行組間比較。結果顯示本發明制劑高、中、低劑量能使醋酸致扭體次數明顯下降，與對照組比較有顯著性差異，其中尤以本發明制劑高劑量作用顯著，表明具有明顯的鎮痛作用。本發明的積極效果在于組方為純中藥制劑，具有明顯的抗病毒、抗菌、解熱鎮痛、抗炎和祛痰的作用，臨床癥狀消失迅速，治療由外感風熱或上呼吸道感染、肺炎、扁桃體炎等引起的感冒、發熱、咳嗽、咽喉腫痛等病癥，還可適用于細菌或病毒引起的高熱等危急重癥患者的治療。具體實施例方式通過以下實施例進一步舉例描述本發明，并不以任何方式限制本發明，在不背離本發明的技術解決方案的前提下，對本發明所作的本領域普通技術人員容易實現的任何改動或改變都將落入本發明的權利要求范圍之內。實施例1稱取金銀花藥材25kg，加12倍量水煎煮提取二次，每次1.0小時，提取液濾過，合并。水提取液減壓濃縮至1g生藥/ml(相對密度1.150，25°C)，濃縮液加95%乙醇92.5L(攪拌)，使藥液含醇量至75%，靜置24小時。醇溶液回收乙醇至流浸膏狀，加水25.0L溶解，離心甩濾(2000轉)，濾液(lg生藥/ml，相對密度1.060，25°C)通過經處理的SP-700大孔吸附樹脂(50L)，用4倍量樹脂柱體積的水洗脫，棄去。再用5倍量樹脂體積的18%乙醇洗脫，減壓回收18%乙醇洗脫液至濃縮液(相對密度1.080)，冷凍干燥，粉碎，即得金銀花原料藥。2.金銀花提取物的生產和測試結果按照上述條件和方法，在中試基地進行中試生產。結果見下表。金銀花提取物生產和測試結X<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>由上表可知，中試產品的產it和質量穩定。工藝流程簡單，操作簡便，僅使用水和乙醇，且乙醇可以回收再利用；在中試實驗過程中，采用HPLC跟蹤檢識，由檢識結果發現第一批中試試驗中樹脂用18%的乙醇洗脫，得到的化學成分與實驗室用20%乙醇洗脫的有效部位中化學成分相同，因此將中試試驗第2~4批改用18%乙醇洗脫，富集有效部位。采用樹脂法可富集有效成分，除雜質效果好，樹脂再生簡便，可反復使用。完全適合于工業生產。實施例21)將實施例1制備的金銀花提取物45g溶于200ml注射用水，溶解后，加入IO%NaOH(0.25M)溶液，邊加邊攪拌調pH值在6.507.00之間；2)甘草提取物20g加入200ml注射用水中，加入10%NaOH(0,25M)溶液，邊加邊攪拌，溶解后，調pH值在6.50-7.00之間;3)黃芩提取物35g加入400mH主射用水中，邊加邊攪拌，充分混懸后，加10%NaOH(0.25M)溶液調pH值至完全溶解為止，溶液呈黃綠色溶液，調pH值在6.50~7.00之間；4)將上述三種提取物的水溶液充分混合，pH值控制在6.507.00之間；5)用0.45pm微孔濾膜過濾后，加注射用水至1000ml，在無菌潔凈室內，采用截留相對分子質量1萬的超濾膜過濾后，灌裝，每瓶lml藥液。實施例31)將實施例1制備的金銀花提取物40g溶于200ml注射用水，溶解后，加入IO%NaOH(0.25M)溶液，邊加邊攪拌調pH值在6.50~7.00之間；2)甘草提取物18g加入200ml注射用水中，加入10XNaOH(0.25M)溶液，邊加邊攪拌，溶解后，調pH值在6.507.00之間；3)黃芩提取物25g加入400ml注射用水中，邊加邊攪拌，充分混懸后，加10%NaOH(0.25M)溶液調pH值至完全溶解為止，溶液呈黃綠色溶液，調pH值在6.507.00之間；4)將上述三種提取物的水溶液充分混合，pH值控制在6.507.00之間；5)用0.45pm微孔濾膜過濾后，加注射用水至1000ml，在無菌潔凈室內，采用截留相對分子質量l萬的超濾膜過濾后，灌裝，每瓶lml藥液。實施例41)將實施例1制備的金銀花提取物55g溶于200ml注射用水，溶解后，加入IO%NaOH(0.25M)溶液，邊加邊攪拌調pH值在6.50~7.00之間；2)甘草提取物25g加入200ml注射用水中，加入10%NaOH(0.25M)溶液，邊加邊攪拌，溶解后，調pH值在6.50-7.00之間；3)黃芩提取物35g加入400ml注射用水中，邊加邊攪拌，充分混懸后，加10%NaOH(0.25M)溶液調pH值至完全溶解為止，溶液呈黃綠色溶液，調pH值在6.50~7.00之間；4)將上述三種提取物的水溶液充分混合，pH值控制在6.507.00之間；5)用0.45pm微孔濾膜過濾后，加注射用水至1000ml，在無菌潔凈室內，采用截留相對分子質量1萬的超濾膜過濾后，灌裝，每瓶lml藥液。權利要求1、一種抗病毒金銀花中藥復方制劑，是由以下原料按重量份數比制成的金銀花提取物40～55、甘草提取物18～25、黃芩提取物25～35。2、權利要求1所述的中藥復方制劑的制備工藝，包括以下步驟1)金銀花提取物制備金銀花加814倍量水煎煮提取二次，每次0.51.5小時，提取液濾過，合并；水提取液減壓濃縮至1g生藥/ml提取液，相對密度1.150-1.170(25。C);在攪拌下，向濃縮液中加入95%乙醇，使藥液含醇量至75%，靜置24小時；取上清醇溶液，過濾，濾液回收乙醇至流浸膏狀，加水攪拌溶解，過濾，得到每ml相當于1g生藥的濾液，相對密度1.060-1.080(25。C);濾液通過SP-700大孔吸附樹脂柱，水洗脫，水洗脫液棄去；再用6倍量樹脂體積的20%乙醇洗脫，減壓回收20%乙醇洗脫液至濃縮液(相對密度1.080)，冷凍干燥，粉碎，即得金銀花提取物；2)將步驟l)提取物4055g溶于200ml注射用水，溶解后，加入10%NaOH(0.25M)溶液，邊加邊攪拌調pH值在6.507.00之間；3)甘草提取物18~25g加入200ml注射用水中，加入10%NaOH(0.25M)溶液，邊加邊攪拌，溶解后，調pH值在6.507.00之間；4)黃芩提取物2535g加入400ml注射用水中，邊加邊攪拌，充分混懸后，加10%NaOH(0.25M)溶液調pH值至完全溶解為止，溶液呈黃綠色溶液，調pH值在6.507.00之間；5)將上述三種提取物的水溶液充分混合，pH值控制在6.50~7.00之間；6)用0.45pm微孔濾膜過濾后，加注射用水至1000ml，在無菌潔凈室內，采用截留相對分子質量1萬的超濾膜過濾后，灌裝，每瓶lml藥全文摘要本發明公開了一種抗病毒金銀花中藥復方制劑，是由金銀花提取物、甘草提取物、黃芩提取物制成，組方為純中藥制劑，具有明顯的抗病毒、抗菌、解熱鎮痛、抗炎和祛痰的作用，用于治療由外感風熱、熱毒內蘊所致的發熱、咳嗽喘促、咽喉腫痛、口干等癥狀。也用于治療臨床上呼吸道感染，急慢性扁桃體炎、肺炎、咽喉炎見上述證候者，臨床癥狀消失迅速，療效顯著。文檔編號A61K36/185GK101293012SQ200810050849公開日2008年10月29日申請日期2008年6月20日優先權日2008年6月20日發明者王振國,王振賢申請人:吉林省通化振國藥業有限公司