專利名稱：：一種治療艾滋病無癥狀hiv感染期的中藥片的制作方法
技術領域：
：本發明涉及醫藥領域，特別是一種治療艾滋病無癥狀HIV感染期的中藥片(又稱扶正排毒1號)。二、
背景技術：
艾滋病全稱為獲得性免疫缺陷綜合征(AcquiredImmunodeficiencySyndrome,AIDS),由人類免疫缺陷病毒(HumanImmunodeficiencyVirus,HIV)感染引起，導致被感染者免疫功能的部分或完全喪失，CD4+T淋巴細胞數量的減少，功能降低，繼而發生多系統、多器官、多病原體的復合感染(機會性感染)和腫瘤等。人體從HIV感染到AIDS發病，需要經歷很長一段時間，大致經過三個時期潛伏期、無癥狀期、最后發展成AIDS。在全球研究艾滋病的熱潮中，許多領域取得了較大的進展，尤其在抗病毒治療方面表現突出，國際上通用的雞尾酒療法(HAART)，取得了令人振奮的效果，但并不能完全清除體內的艾滋病病毒，早期應用存在諸多潛在危險，如藥物毒性、病毒變異及耐藥性等，使相當數量的患者不適宜或不能使用抗病毒治療。WHO根據臨床癥狀、CD4+細胞計數以及血槳HIV-RNA進行臨床分期，制定并推薦抗病毒治療指征。大量的無癥狀HIV感染者不適宜抗病毒治療，任其發展至艾滋病期才給予抗病毒治療。據報道，中國約有70萬人感染艾滋病病毒，其中艾滋病病人約8.5萬例，而其余大部分皆處于無癥狀感染期。因此基于中醫"治未病"的學術思想，把此期作為中醫藥治療艾滋病的黃金切入點，實施對無癥狀HIV感染者早期干預的臨床研究，以期研制出針對無癥狀HIV感染者進行早期干預的中藥新藥，已成為中醫藥治療艾滋病的熱點和重點。三、
發明內容針對上述情況，本發明之目的就是提供一種治療艾滋病無癥狀HIV感染期的中藥片，以解決不適合抗病毒治療的艾滋病無癥狀HIV感染期的治療問題，其解決的技術方案是，本發明藥物采用西洋參50g80g、黃芪130g170g、白術130g170g、防風100g130g、女貞子130g170g、山茱萸100g130g、南沙參100g150g、紫草100g130g、連翹100g130g、白花蛇舌草130g170g、甘草40g80g作中藥原料制成，其中西洋參粉碎成細粉備用；白術、防風、連翹碎斷，用多功能提取罐(水蒸汽蒸餾)提取白術、防風、連翹三藥的芳香水256ml，再進行油水分離，得揮發油，提取揮發油后的水液與藥渣備用；提揮發油后的藥渣與其余七味藥加中藥原料總重量6-8倍的水煎煮三次，每次煎1-2小時，合并三次煎液及提油后的水液，靜置48小時，濾過，濾液、減壓濃縮至稠膏，干燥，粉碎，加入上述備用的西洋參細粉、揮發油及適量的糊精，混勻，制粒，壓片，包衣，即得，可制成片或膠囊還可加蜂蜜制成蜜丸，本發明產品有效用于艾滋病無癥狀HIV感染期的治療，其生產方法新穎、獨特、科學，具有重要的臨床意義。四附圖為本發明的工藝流程圖。五具體實施方式以下結合附圖對本發明的具體實施方式作詳細說明。由附圖給出，本發明在具體實施時是由西洋參50g80g、黃芪130g170g、白術130g170g、防風100g130g、女貞子130g170g、山茱萸100g130g、南沙參100g150g、紫草100g130g、連翹100g130g、白花蛇舌草130g170g、甘草40g80g作中藥原料制成，其中西洋參粉碎成細粉備用；白術、防風、連翹碎斷，用多功能提取罐(水蒸汽蒸餾)提取白術、防風、連翹三藥的芳香水256ml，再進行油水分離，得揮發油，提取揮發油后的水液與藥渣備用；提揮發油的藥渣其余七味加水煎煮三次，第一次加中藥原料總重量的8倍量水，煎煮2小時，第二、三次各加中藥原料總重量的6倍量水，煎煮各1小時，合并三次煎液及提油后的水液，靜置48小時，濾過，濾液、減壓濃縮至相對密度為1.20的稠膏，采用熱風循環烘干箱，溫度不超過65。C-8(TC干燥，粉碎，加入上述備用的西洋參細粉、揮發油及適量的糊精，混勻，制粒，壓片，包衣，即得。實施例1:西洋參65g、黃芪150g、白術150g、防風115g、女貞子150g、山茱萸115g、南沙參125g、紫草115g、連翹115g、白花蛇舌草150g、甘草60g作中藥原料制成，其中西洋參粉碎成細粉備用；白術、防風、連翹碎斷，用多功能提取罐(水蒸汽蒸餾)提取白術、防風、連翹三藥的芳香水256ml，再進行油水分離，得揮發油，提取揮發油后的水液與藥渣備用；提揮發油后的藥渣與其余七味加水煎煮三次，第一次加中藥原料總重量的8倍量水，煎煮2小時，第二、三次各加中藥原料總重量6倍量水，煎煮各1小時，合并三次煎液及提油后的水液，靜置48小時，濾過，濾液、減壓濃縮至相對密度為1.20的稠膏，采用熱風循環烘干箱，溫度不超過7(TC干燥，粉碎，加入上述備用的西洋參細粉、揮發油及適量的糊精，混勻，制粒，壓片，包衣。所說的糊精加入量是表示視最后中藥原料制取物的多少而定，作為附加劑的糊精作用一則起粘合劑(賦型劑)作用，二則，如中藥原料制取的藥物量不足，即作填充料(輔料)以補足所需藥物量，如按組方計劃制0.37g的1000片口服本發明藥片，但最后藥物得量只夠制950片，只得再加0.37gX50片重量的糊精作填料，以補其不足，糊精同中藥原料制得物混合均勻后，再制成0.37g重的1000片藥片(其它類同，略)。在上述藥物，其中，西洋參取根，洗凈泥土，切片，曬干，補氣養陰，清熱生津，用于氣虛陰虧，內熱，咳喘痰血，虛熱煩倦，消渴，口燥咽干。黃芪洗凈泥土，切片、曬干，補氣生血，固表排膿，用于氣虛諸證，衛虛自汗，血虛證，久敗瘡。白術洗凈，切片，曬干，補脾益氣，燥濕利水，固表止汗，用于脾虛濕勝，食少泄瀉，痰飲脹滿，水腫浮腫，風濕身痛，表虛自汗。防風洗凈去雜質泥土，切片、曬干，解表散寒，祛風解痙，用于風寒感冒，頭痛寒熱，風寒濕痹，關節疼痛，破傷風之牙關緊急，四肢痙攣。女貞子洗凈泥土，蒸熟，曬干，滋補肝腎，烏發明目，用于肝腎精血不足，須發早白，頭暈目昏。山茱萸取果實以沸水稍煮，去核取皮肉曬干，滋補肝腎，澀精止汗，用于腰膝痠軟，頭暈目眩，陽痿遺精，小便頻數，月經過多，大汗不止。南沙參洗凈經沸水燙后去皮，切片，曬干，潤肺止咳，養胃生津，用于肺陰不足，咳嗽咽干，發熱，胃津不足，口渴欲嘔，食少。紫草洗凈去泥土雜質，切片，曬干，活血涼血，解毒透疹，滑腸，用于預防麻疹，血熱毒盛，痘疹欲出不暢，斑疹紫黑，干燥不潤，外科癰腫。連翹洗凈，蒸熟，曬干，清熱解毒，消癰散結，用于上焦諸熱，風熱表證，外科熱毒，癰腫瘡癤，疔毒瘰疬，惡瘡發背，斑疹諸毒。白花蛇舌草洗凈泥土，切碎，曬干，解毒抗癌，活血利尿，用于各種癌癥，急性闌尾炎。甘草洗凈去泥土，切片，曬干，補脾益氣，調和諸藥，清熱解毒，用于調和諸藥，使之不爭，緩和其峻。由上述情況可知，本發明中藥片具有益氣滋陰，清熱解毒之功效，適用于氣陰兩虛、內蘊熱毒型無癥狀HIV感染者，而臨床實踐和動物實驗也完全證明了此藥的有效作用，具體資料如下-一、臨床資料1、選擇病例標準①符合西醫無癥狀HIV感染期的診斷標準；②年齡1865歲；③200/mm3《CD4+T淋巴細胞計數〈600/mm3;④未使用抗病毒藥物及其它中藥治療者；⑤簽署知情同意書。2、無癥狀HIV感染期診斷標準依照中華人民共和國國家HIV/AIDS的診斷標準(GB16000-1995，2001年修訂版)執行。2.1.1流行病史不安全性生活史；靜脈注射毒品史；輸入未經抗HIV抗體檢測的血液和血制品史；HIV抗體陽性所生的子女；其它(如職業暴露或醫源性感染史)。2.1.2臨床表現常無任何表現，可有全身淋巴結腫大。既往可有發熱、頭痛、乏力、咽痛、全身不適等癥狀；傳染性單核細胞增多癥者；頸、腋及枕部淋巴結腫大；腦膜腦炎或急性多發性神經炎；皮疹；肝脾腫大。2.1.3實驗室檢查HIV抗體陽性，并經過確認試驗確認；患者血漿中HIV-RNA陽性。2.1.4確診標準患者近期內有流行病學史和臨床表現中的現象，再結合實驗室檢查即可確診，或僅實驗室檢查中的第一項就可以確診。3、治療方案每曰口服本發明中藥片，每次5片，每片0.37g，每日3次，溫開水沖服。每3個月為1療程，共觀察4個療程。4、療效評定標準(1)癥狀與體征顯效臨床癥狀體征改善明顯，總積分下降>3/4;有效臨床癥狀體征改善較明顯，總積分下降》l/3;穩定臨床癥狀體征改善不明顯，總積分下降<1/3;無效臨床癥狀體征無改善或加重，總積分不下降，或有所增加。注凡治療前癥狀體征積分為0者，不適合用尼莫地平法計算改善比；若治療后積分不變視為有效，若治療后積分增加，視為無效。(2)免疫指標有效療后CD4+升高》50/mm、穩定療后CD4+升高或下降〈50/mmV無效療后CD4+下降》50/mm3。5、統計處理臨床統計共69例無癥狀HIV感染者均為有償獻血感染的農村患者。男39例，女30例，男女病例之比為1:0.77;年齡在30歲到61歲之間(平均43.22±8.09歲)；感染時間在1985年至2004年之間，大部分在1990年至1994年之間，均于2002年至2005年在某區防疫站確診，平均病程12.97±3.08年。扶正排毒1號治療3個月、6個月、9個月和12個月后，對癥狀體征的有效率分別為75.36%、84.06%、78.26%和95.59%，對CD4+計數的有效率分別為56.25%、73.91%、59.70%和69.12%。分層統計結果提示，扶正排毒1號對CD4+在200400/mm3之間的無癥狀HIV感染者干預作用較好，提示扶正排毒1號對無癥狀HIV感染者的癥狀體征和免疫功能的改善有著較好的效果。臨床研究提示，該藥未發現不良反應，安全有效。6、結論由上述情況表明，本發明中藥片對治療艾滋病無癥狀HIV感染者效果明顯，可有效減輕或控制無癥狀HIV感染者相關癥狀體征的出現，穩定或提高感染者的免疫功能，尤其對CD4+在200400/mm3之間的無癥狀HIV感染者干預作用較好，有重要的臨床應用價值(意義)。二、動物模型實驗情況為確保本發明中藥片積極作用，申請人還作了大量的動物模型實驗，有關情況如下(一)對環磷酰胺(CY)致免疫抑制小鼠免疫功能的影響1、實驗動物小鼠，昆明種，由河南省醫學實驗動物中心提供，動物合格證號豫醫動字410115。2、實驗方法與統計學處理(1)對環磷酰胺(CY)致免疫抑制小鼠腹腔巨噬細胞吞噬功能的影響取小鼠60只，體重1821g，雌雄各半，隨機均勻分為6組，其中5組造CY致小鼠免疫抑制模型，于給藥的第l、2、3天，分別腹腔注射80mg/kg的環磷酰胺(40mg/ml，0.2ml/10g)，于第1天，造模5組分別灌服大、中、小劑量的扶正排毒1號混懸液(0.15g/ml，0.10g/ml、0.05g/ml，0.2ml/10g)，香菇多糖片混懸液(5mg/ml，0.2ml/10g)及同體積的生理鹽水(0.2ml/10g)。另有1組為空白對照組，僅灌同體積的生理鹽水(0.2ml/10g)。每天給藥1次，連續給藥7天。于第7天早上每鼠均腹腔注射5%雞紅細胞生理鹽水液0.5ml，于第7天灌胃給藥后2h，給雞紅細胞后4h，脫頸椎處死小鼠。腹腔注入漢氏液2.5ml，輕揉小鼠腹部，然后剪開小鼠腹部皮膚，在腹膜上剪一小孔，用吸管吸取腹腔液2ml置于試管中，混勻，吸取少許腹腔液滴于載玻片上，液點大小約1.5cmX2cm。將載玻片放在輔有濕紗布的搪瓷盤中，37°C孵育30min，生理鹽水沖去附著的細胞，瑞氏染液染色，自來水沖洗晾干，顯微鏡下觀察小鼠腹腔巨噬細胞的吞噬情況，并計算吞噬百分率和吞噬指數，如表1所示。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>表1扶正排毒1號對CY致免疫抑制小鼠腹腔巨噬細胞吞噬功能的影響(±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>林表示與模型組比P<0.01從上表可看出，與空白對照組比，模型組小鼠腹腔巨噬細胞對雞紅細胞的吞噬百分率和吞噬指數均顯著降低(P<0.01)，說明造免疫抑制模型成功。與模型組比，大、中、小劑量扶正排毒1號組和香菇多糖片組均可顯著提高免疫抑制小鼠腹腔巨噬細胞對雞紅細胞的吞噬百分率和吞噬指數(P〈0.01)。以大、中劑量扶正排毒1號組作用為強。(2)對CY致免疫抑制小鼠溶血素形成的影響取小鼠60只，體重1821g，雌雄各半，隨機均勻分為6組，其中5組造CY免疫抑制模型。于給藥第l、2、3天，分別腹腔注射80mg/kg環磷酰胺生理鹽水液(4mg/ml，0.2ml/10g)，于造模型第1天，造模5組分別灌服大、中、小劑量的扶正排毒1號混懸液(0.15g/ml、0.10g/ml、0.05g/ml，0.2ml/10g)香菇多糖片混懸液(5mg/ml，0.2ml/10g)及同體積的生理鹽水(0.2ml/10g)。另有一組為空白對照組，每鼠僅灌同體積的生理鹽水(0.2ml/10g)。每天給藥1次，連續給藥7天。于給藥第1天各組小鼠均腹腔注射5%雞紅細胞生理鹽水混懸液(0.2ml/只)進行免疫，于最后1次給藥后2h，小鼠眼眶取血，離心，分離血清。用生理鹽水1:100稀釋后，取lml稀釋液與5%雞紅細胞混懸液0.5ml、10%補體0.5ml(豚鼠血清，用雞紅細胞預先飽和6h)混勻，37。C孵育30min,冰水中終止反應。另設不加補體的空白管作對照，吸取各管上清液于UV-2000型分光光度計540nm處比色，測定各組溶血素形成情況，結果見表2。(3)對CY致免疫抑制小鼠溶血空斑形成的影響取小鼠60只，體重1821g，雌雄各半，隨機均勻分為6組，其中5組造免疫抑制模型，于給藥第l、2、3天分別腹腔注射80mg/kg的環磷酰胺生理鹽水溶液(4mg/ml，0.2ml/10g)。于造模第1天，造模5組分別灌服大、中、小劑量的扶正排毒1號混懸液(0.15g/ml、0.10g/ml、0.05g/ml,0.2ml/10g)，香菇多糖片混懸液(5mg/ml，0.2ml/10g)及同體積的生理鹽水(0.2ml/10g)，另有1組為空白對照組，每鼠僅灌同體積生理鹽水(0.2ml/10g)。每天給藥1次，連續給藥7天。于給藥第l天各組小鼠均腹腔注射5%雞紅細胞生理鹽水混懸液(0.2ml/只)進行免疫。于最后1次給藥后2h，脫頸椎處死小鼠，解剖小鼠，取出脾臟，將兩個小鼠脾臟放在一起，用勻漿器勻漿，并調整脾細胞混懸液中脾細胞數為5X106個/ml。取脾細胞混懸液0.5ml，與0.2%雞紅細胞混懸液和1:10的豚鼠血清0.5ml混勻。另設不加補體的空白管，37。C孵育lh，離心，取上清液于UV-2000型分光光度計413nm處比色，測各組溶血空斑形成情況，如表2所示。表2扶正排毒1號對CY致免疫抑制小鼠溶血素、溶血空斑形成的影響(i±;y)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>**表示與模型組比P<0.01從上表可看出，與空白對照組比，模型組溶血素和溶血空斑形成(OD值)均顯著減少(P<0.01)，說明造免疫抑制模型成功。與模型組比，大、中、小劑量扶正排毒1號組和香菇多糖組均可顯著促進免疫抑制小鼠溶血素和溶血空白斑的形成，OD值顯著升高(P<0.01)，以大、中劑量扶正排毒l號組作用為優。(4)對CY致免疫抑制小鼠淋巴細胞細胞轉化的影響取小鼠60只，體重1812g，雌雄各半，隨機均勻分為6組，其中5組造免疫抑制模型，于給藥第l、2、3天，分別腹腔注射80mg/kg環磷酰胺生理鹽水液(4mg/ml，0.2ml/10g)造免疫抑制模型。于給藥第1、2、3天每鼠肌注PHA80mg/kg(8mg/ml，0.lml/10g)。于造模第1天，造模5組分別灌服大、中、小劑量的扶正排毒1號混懸液(0.15g/ml，0.10g/ml、0.05g/ml，0.2ml/10g)，香菇多糖片混懸液(5mg/ml，0.2ml/10g)及同體積的生理鹽水(0.2ml/10g)，另有l組為空白對照組，僅給同體積生理鹽水(0.2ml/10g)。每天給藥1次，連續給藥7天。于最后1次給藥后2h，小鼠剪尾取血，推片，瑞氏染液染色，油鏡觀察，計算外周淋巴細胞轉化百分率，如表3所示。表3扶正排毒1號對CY致免疫抑制小鼠外周血淋巴細胞轉化的影響(3f±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>林表示與模型組比p〈0.01從上表可看出，與空白對照組比，模型組淋巴細胞轉化百分率顯著降低(p<0.01)，說明造免疫抑制模型成功。與模型組比，大、中、小劑量扶正排毒1號組和香菇多糖組均可使淋巴細胞轉化率顯著提高(P<0.01)，以大、中劑量扶正排毒l號組作用為優。(二)扶正排毒1號對氫化可的松致免疫抑制小鼠免疫功能的影響1、實驗動物小鼠，昆明種，河南省醫學實驗動物中心提供，動物合格證號豫醫動字410115。2、實驗方法與統計學處理(1)對氫化可的松致免疫抑制小鼠腹腔巨噬細胞吞噬功能的影響取小鼠60只，體重1821g，雌雄各半，隨機均勻分為6組，其中5組造氫化可的松免疫抑制小鼠模型，于給藥的前6天，每天分別皮下注射50mg/kg的氫化可的松注射液(2.5mg/ml，0.lml/10g，分上午、下午兩次皮下注射給藥，每天總用量為50mg/kg)。于造模第1天，造模5組分別灌服大、中、小劑量的扶正排毒1號混懸液(0.15g/ml、0.10g/ml、0.05g/ml，0.2ml/10g)、香菇多糖片混懸液(5mg/ml,0.2ml/10g)及同體積的生理鹽水(0.2ml/10g)。另有一組為空白對照組，每鼠僅灌同體積的生理鹽水(0.2ml/10g)。每天給藥1次，連續給藥7天。于7天早上各組小鼠均腹腔注射5%雞紅細胞生理鹽水混懸液0.5ml，于第7天灌胃給藥后2h，給雞紅細胞后4h,脫頸椎處死小鼠。腹腔注入漢氏液2.5ml,輕揉小鼠腹部，然后剪開小鼠腹部皮膚，在腹膜上剪一小孔，用吸管吸取腹腔液2ml置于試管中，混勻，吸取少許腹腔液滴于載玻片上，液點大小約為1.5cmX2cm。將載玻片放在輔有濕紗布的搪瓷盤中，37'C孵育30min，生理鹽水沖去附著的細胞，瑞氏染液染色，自來水沖洗涼干，顯微鏡下觀察小鼠腹腔巨噬細胞的吞噬情況，并計算吞噬百分率和吞噬指數，如表4所示。IOO個巨噬細胞吞噬雞紅細胞的巨噬細胞數infw存哩白分傘=-xl(JU%100工俯+匕^ioo個巨噬細胞中吞噬的雞紅細胞總數表4扶正排毒1號對氫化可的松致免疫抑制小鼠腹腔巨噬細胞吞噬功能的影響(±s)組別動物數(只)劑量(g/kg)吞噬百分率(％)吞噬指數空白對照組1048.5±5.7*"0.65±0.10'模型組1035.3±7.10.55±0.10香菇多糖片組100.148.7±8.3**0.67±0.11*大劑量扶正排毒1號組10352.8±7.6"0.82±0.08**中劑量扶正排毒1號組10255.6±7.2**0.84士0.07"小劑量扶正排毒1號組10145.9±7.1**0.66±0.10*林表示與模型組比P<0.01，*表示與模型組比P<0.05從上表可看出，與空白對照組比，模型組小鼠腹腔巨噬細胞吞噬百分率顯著降低(P<0.01)，吞噬指數明顯降低(P<0.05)，說明造免疫抑制模型成功。與模型組比，大、中、小劑量扶正排毒1號組和香菇多糖片組均可顯著提高免疫抑制小鼠腹腔巨噬細胞對雞紅細胞的吞噬百分率(P<0.01)，大、中劑量扶正排毒1號組可顯著提高腹腔巨噬細胞吞噬指數(P<0.01)，小劑量扶正排毒1號組和香菇多糖片組可明顯提高腹腔巨噬細胞吞噬指數(P<0.05)。以大、中劑量扶正排毒1號組作用為強。(2)對氫化可的松致免疫抑制小鼠溶血素形成的影響取小鼠60只，體重1821g，雌雄各半，隨機均勻分為6組，其中5組造氫化可的松免疫抑制模型。于給藥前6天，每天分別皮下注射50mg/kg氫化可的松注射液(2.5mg/ml,0.lml/10g，分上午、下午兩次皮下注射給藥，每天總用量為50mg/kg)，于造模第1天，造模5組分別灌服大、中、小劑量的扶正排毒l號混懸液(0.15g/ml、0.10g/ml、0.05g/ml，0.2ml/10g)，香菇多糖片混懸液(5mg/ml，0.2ml/10g)及同體積的生理鹽水(0.2ml/10g)。另有一組為空白對照組，每鼠僅灌同體積的生理鹽水(0.2ml/10g)。每天給藥1次，連續給藥7天。于給藥第1天各組小鼠均腹腔注射5%雞紅細胞生理鹽水混懸液0.2ml/只，進行免疫，于最后l次給藥后2h，小鼠眼眶取血，離心，分離血清。用生理鹽水1:IOO稀釋后，取lml稀釋液與5%雞紅細胞混懸液0.5ml、10X補體0.5ml(豚鼠血清，用雞紅細胞預先飽和6h)混勻，37。C孵育30min，冰水中終止反應。另設不加補體的空白管作對照，吸取各管上清液于UV-2000型分光光度計540nm處比色，測定各組溶血素形成情況，結果見表5。(3)對氫化可的松致免疫抑制小鼠溶血空斑形成的影響取小鼠60只，體重1821g，雌雄各半，隨機均勻分為6組，其中5組造免疫抑制模型，于給藥前6天，每天分別皮下注射50mg/kg的氫化可的松注射液(2.5mg/ml，0.lml/10g，分上午、下午兩次皮下注射給藥，每天總用量為50mg/kg)。于造模第1天，造模5組分別灌服大、中、小劑量的扶正排毒1號混懸液(0.15g/ml、0.10g/ml、0.05g/ml,0.2ml/10g)，香菇多糖片混懸液(5mg/ml，0.2ml/10g)及同體積的生理鹽水(0.2ml/10g)。另有1組為空白對照組，每鼠僅灌同體積生理鹽水(0.2ml/10g)。每天給藥1次，連續給藥7天，于給藥第1天各組小鼠均腹腔注射5%雞紅細胞生理鹽水混懸液0.2ml/只進行免疫。于最后l次給藥后2h，脫頸椎處死小鼠，解剖小鼠，取出脾臟，將兩個小鼠脾臟放在一起，用勻漿器勻漿，并調整脾細胞混懸液中脾細胞數為5Xl()6個/ml。取脾細胞混懸液0.5ml，與0.2%雞紅細胞混懸液和l:10的豚鼠血清0.5ml混勻。另設不加補體的空白管，37。C孵育lh，離心，取上清液于UV-2000型分光光度計413nm處比色，測各組溶血空斑形成情況，如表5所示。表5扶正排毒1號對氫化可的松致免疫抑制小鼠溶血素、溶血空斑形成的影響(i±S)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>從上表可看出，與空白對照組比，模型組溶血素和溶血空斑OD值均顯著降低(P<0.01)，說明造免疫抑制模型成功。與模型組比，大、中、小劑量扶正排毒1號組和香菇多糖組均可顯著促進小鼠溶血素和溶血空斑的形成，其OD值顯著升高(P<0.01)，以大、中劑量扶正排毒1號組作用為最優。(4)對氫化可的松致免疫抑制小鼠外周血淋巴細胞細胞轉化的影響取小鼠60只，體重1821g，雌雄各半，隨機均勻分為6組，其中5組造氫化可的松免疫抑制模型，于給藥前6天每天皮下注射50mg/kg的氫化可的松注射液(2.5mg/ml，0.lml/10g，分上午、下午兩次皮下注射給藥，每天總用量為50mg/kg),于給藥第l、2、3天每鼠加肌注PHA80mg/kg(8mg/ml，0.lml/10g)。造模5組于第1天開始分別灌服大、中、小劑量的扶正排毒1號混懸液(0.15g/ml、0.10g/ml、0.05g/ml，0.2ml/10g)，香菇多糖片混懸液(5mg/ml，0.2ml/10g)及同體積的生理鹽水(0.2ml/10g)，每天給藥1次，連續給藥7天，另有一組為空白對照組，僅給同體積生理鹽水(0.2ml/10g)。于最后l次給藥后2h，小鼠剪尾取血，推片，瑞氏染液染色，油鏡觀察，計算外周血淋巴細胞轉化百分率，如表6所示。表6扶正排毒1號對氫化可的松致免疫抑制小鼠外周學淋巴細胞轉化的影響(f±s)ii動物數(只)劑量(g/kg)淋巴細胞轉化率(％)空白對照組==肌3±4.4"模型組100.132.5±4.5香菇多糖片組100.151,9±10.4"大劑量扶正排毒l號組10360.9士5.0"中劑量扶正排毒l號組10254.8土6.7"小劑量扶正排毒l號組10149.3±5.9"W表示與模型組比P〈0.01從上表可看出，與空白對照組比，模型組外周血淋巴細胞轉化率顯著降低(P<0.01),說明造免疫抑制模型成功。與模型組比，大、中、小劑量扶正排毒1號組和香菇多糖片組均可使外周血淋巴細胞轉化率顯著升高(P<0.01)。以大劑量扶正排毒1號組作用為強。(三)扶正排毒1號對環磷酰胺致免疫抑制小鼠CD4、CD8水平的影響扶正排毒l號以3g/kg、2g/kg、lg/kg的劑量給環磷酰胺所致免疫低下小鼠連續7天灌服用，可顯著提高免疫抑制小鼠CD4、CD4/CD8水平。1實驗目的扶正排毒1號主要有西洋參、黃芪、連翹、白花蛇舌草、甘草等藥組成，具有扶正固本，祛邪排毒之功，適用于無癥狀mv感染者的臨床治療。為驗證其作用特點，觀察了其對CY致免疫功能低下小鼠CD4、CD8水平的影響。2實驗方法結果2.1實驗藥品扶正排毒1號，由河南中醫學院第三附屬醫院提供，批號050601，香菇多糖片，由浙江國家藥業有限公司生產，批號040902;注射用環磷酰胺(CY)，由上海華聯制藥有限公司生產，批號050201;快速瑞氏染液，邁克科技有限公司生產，批號040602;KH2P04鄭州化學試劑一廠生產，批號031218;Na2HP04，天津市福晨化學試劑廠生產，批號030925;MgS04，西安化學試劑廠生產，批號030927;KC1，北京化工廠生產，批號030201;CaCl2天津市科密歐化學試劑開發中心生產，批號030325;胎牛血清，天津市正江高科技有限公司生產，批號050210;肝素鈉，上海第一生化藥業有限公司生產，批號041001;McAB血球試劑，WuT4，武漢生物制品研究所生產，批號041101;McAB血球試劑，WuT8，武漢生物制品研究所生產，批號041101;淋巴細胞分離液，上海恒信化學試劑有限公司生產，批號050106。2.2試劑配制Hank，s原液甲液氯化鉀4g、氯化鈉80g、硫酸鎂(含7H20)20g、雙蒸水40mL;乙液氯化鈣1.4g、雙蒸水100mL;丙液甲和乙混合溶液；丁液磷酸氫二鈉0.6g、磷酸二氫鉀0.6g、葡萄糖10.0g、雙蒸水400mL、酚紅(10g/L)16mL;將丙液和乙液充分混合，最后加雙蒸水至lOOOmL，置4"C冰箱備用。Hank，s應用液的配制取Hank，s原液1份加雙蒸水9份混合分裝，69.75kPa(10P/cm2)20min高壓滅菌，4。C冰箱備用，PH6.8-7.2。反應液的配制即用Hank，s應用液配制成20X的胎牛血清。單抗配制每只單抗加0.5ml反應液，搖勻。2.3實驗動物小鼠，昆明種，II級，河南省醫學實驗動物中心，動物合格證號豫醫動字710115。2.4實驗儀器主要儀器名稱DL-5低速大容量離心機，北京醫療器械修理廠生產；JA1103N電子天平，上海民橋精密科學儀器有限公司生產。3實驗方法與結果取小鼠36只，雌雄各半，體重18-21g，隨機均勻分為6組，其中5組造CY致免疫低下模型，于給藥的第l、2、3天，分別腹腔注射80mg/kg的環磷酰胺(40mg/ml，0.2ml/10g)，于第1天造模型5組分別灌服大、中、小劑量的扶正排毒1號混懸液(0.18g/ml、0.12g/ml、0.06g/ml，0.2ml/10g)，香菇多糖片混懸液(5mg/ml，0.2ml/10g)及同體積的生理鹽水(0.2ml/10g)。另有一組為空白對照組，僅灌同體積的生理鹽水(0.2ml/10g)。每天給藥1次，連續給藥7天。第7給藥后lh，摘眼球取血，肝素抗凝，花環法檢測小鼠CD4、CD8水平。花環法檢測T亞步驟抗凝血置37°C恒溫水浴30min，每管血加生理鹽水稀釋(1:3)，取一干凈玻璃試管加淋巴細胞分離液3ml，用毛細吸管將稀釋血液混勻，沿管壁將稀釋血液加在淋巴細胞分離液上面，3000轉/分，離心20min。離心后用毛細吸管吸出淋巴細胞層置于試管中，用生理鹽水清洗2次，2000轉/分，離心10min。再根據試管底部細胞數加適量生理鹽水稀釋，20°C傾斜，室溫靜置45min。CD4、CD8單抗(McAB血球試劑)分別加入試管內，每管25ul，再將分離的淋巴細胞分別加入各試管中，每管25ul，500轉/分，離心5min,取出室溫靜置45min，放4°C冰箱靜置1小時。取出涂片，瑞氏染色lmin，沖洗，鏡檢200個淋巴細胞，計算花環形成細胞的百分率。<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>*表示與模型組比PO.05,**表示與模型組比PO.01從上表可看出，與空白對照組比，模型組小鼠CD4、CD8水平和CD4/CD8比值均顯著降低(P〈O.OD，說明造免疫抑制模型成功。與模型組比，大、中、小劑量扶正排毒1號組和香菇多糖片組均可顯著提高免疫抑制小鼠CD4水平(P〈0.01)，大、小劑量扶正排毒1號組和香菇多糖片組均可顯著提高CD4/CD8比值(P〈0.01)，中劑量扶正排毒1號組可明顯提高CD4/CD8比值(P〈0.05)。以大劑量扶正排毒1號組對CD4水平的提高作用為強。3小結扶正排毒1號可顯著提高對環磷酰胺(CY)致免疫抑制小鼠的免疫功能，使外周血CD4水平和CD4/CD8比值顯著提高，以大劑量扶正排毒1號組作用為好。上述情況表明，本發明藥物(中藥片)可有效達到顯著提高免疫抑制小鼠腹腔巨噬細胞吞噬功能，顯著促進溶血素和溶血空斑形成，顯著促進外周血淋巴細胞的轉化，從而實現穩定或提高無癥狀HIV感染者的免疫功能，具有重要的臨床價值。權利要求1.一種治療艾滋病無癥狀HIV感染期的中藥片，其特征在于，由西洋參50g～80g、黃芪130g～170g、白術130g～170g、防風100g～130g、女貞子130g～170g、山茱萸100g～130g、南沙參100g～150g、紫草100g～130g、連翹100g～130g、白花蛇舌草130g～170g、甘草40g～80g作中藥原料制成，其中西洋參粉碎成細粉備用；白術、防風、連翹碎斷，用多功能提取罐提取白術、防風、連翹三藥的芳香水256ml，再進行油水分離，得揮發油，提取揮發油后的水液與藥渣備用；提揮發油的藥渣其余七味加水煎煮三次，第一次加中藥原料總重量的8倍量水，煎煮2小時，第二、三次各加中藥原料總重量的6倍量水，煎煮各1小時，合并三次煎液及提油后的水液，靜置48小時，濾過，濾液、減壓濃縮至相對密度為1.20的稠膏，采用熱風循環烘干箱，溫度不超過65℃-80℃干燥，粉碎，加入上述備用的西洋參細粉、揮發油及適量的糊精，混勻，制粒，壓片，包衣。2、根據權利要求1所述的一種治療艾滋病無癥狀HIV感染期的中藥片，其特征在于，由西洋參65g、黃芪150g、白術150g、防風115g、女貞子150g、山茱萸115g、南沙參125g、紫草115g、連翹115g、白花蛇舌草150g、甘草60g作中藥原料制成，其中西洋參粉碎成細粉備用；白術、防風、連翹碎斷，用多功能提取罐提取白術、防風、連翹三藥的芳香水256ml，再進行油水分離，得揮發油，提取揮發油后的水液與藥渣備用；提揮發油后的藥渣與其余七味加水煎煮三次，第一次加中藥原料總重量的8倍量水，煎煮2小時，第二、三次各加中藥原料總重量6倍量水，煎煮各1小時，合并三次煎液及提油后的水液，靜置48小時，濾過，濾液、減壓濃縮至相對密度為1.20的稠膏，采用熱風循環烘干箱，溫度不超過70'C干燥，粉碎，加入上述備用的西洋參細粉、揮發油及適量的糊精，混勻，制粒，壓片，包衣。全文摘要本發明涉及一種治療艾滋病無癥狀HIV感染期的中藥片，以解決不適合抗病毒治療的艾滋病無癥狀HIV感染期的治療問題，該中藥片用西洋參50g～80g、黃芪130g～170g、白術130g～170g、防風100g～130g、女貞子130g～170g、山茱萸100g～130g、南沙參100g～150g、紫草100g～130g、連翹100g～130g、白花蛇舌草130g～170g、甘草40g～80g作中藥原料制成，其中西洋參粉碎；白術、防風、連翹提取芳香水，油水分離得揮發油，藥渣與其余七味藥加水煎煮三次，合并煎液及提油后的水液，靜置，濾過，減壓濃縮，干燥，粉碎，加入西洋參細粉、揮發油及適量的糊精，混勻，制粒，壓片，本發明有效用于艾滋病無癥狀HIV感染期的治療，有重要的臨床意義。文檔編號A61K36/74GK101278998SQ20081004982公開日2008年10月8日申請日期2008年5月22日優先權日2008年5月22日發明者劉學偉,劉景超,磊張,勃彭,苗明三,郭會軍申請人:河南中醫學院