專利名稱：一種從植物滇丁香中提取熊果酸的方法
技術領域：
本發明涉及一種從植物中提取熊果酸的方法，尤其涉及一種從茜草科植 物滇丁香中提取分離熊果酸的方法。
背景技術：
熊果酸(ursolic acid, UA)，別名烏索酸，在自然界分布很廣，存在于杜 鵲花科植物熊果的葉、果實，選森參植物毛泡桐的葉，茜草科植物梔子的果 實，龍膽科植物濕生蕾、木樨科植物女貞的葉等植物中。熊果酸具有廣泛的 生物學效應，1990年被日本列為最有希望的腫瘤預防藥物之一。它對中樞神 經系統有明顯的安定與降溫作用；體外對6+和G -菌及酵母菌均有抗菌活 性；有抗糖尿病、抗潰瘍及降低血脂的作用；對多種致癌、促癌物有抵抗作 用；對多種惡性腫瘤細胞有抑制生長作用；熊果酸及其衍生物對病毒具有抑 制活性；另外，可誘導F9畸胎瘤細胞成為內胚層細胞及抗血管生成。由于熊 果酸在自然界分布廣泛，存在于很多植物中，且有良好的生物活性。通常情 況下，熊果酸是通過化學方法合成的，采用化學方法合成存在有"三廢"處 理量大且處理困難，易對環境產生污染，并且成本較高。到目前為止，有關 從其他植物中提取分離熊果酸的報道有很多，但大多都是從木樨科植物及杜 鶻藥科植物中提取，從茜草科植物滇丁香中得到熊果酸尚未有報道。
發明內容
本發明的目的在于提供一種從茜草科植物滇丁香中提取分離熊果酸的方 法，其提取方法簡單、成本低、產率高。
為了實現上述目的，本發明的技術方案采用了一種從植物滇丁香中提取 熊果酸的方法，包括以下步驟(1)取干燥滇丁香，粉碎，用濃度為95%的 乙醇10L重復冷浸3次，每次7天，過濾，減壓回收乙醇得濃縮液；(2) 將得到的乙醇濃縮液進行試驗；
(3) 將步驟(2)得到的濃縮物進行SephadexLH-20凝膠柱層析，以 甲醇為洗脫劑，標準品對照，分離得到純品。
所述的步驟(2)對乙醇濃縮液進行試驗的步驟為將乙醇浸膏用10%乙 醇水(體積比)分散，按照浸膏與D101大孔樹脂重量比為1: 30;將分 散了浸膏的10%乙醇水溶液加入樹脂柱，水-乙醇溶劑梯度洗脫，60%乙 醇水部分進行濃縮得濃縮物。
所述的步驟(2)對乙醇濃縮液進行試驗的步驟為將濃縮的提取物分
散在2L水中，用乙酸乙酯萃取三次；乙酸乙酯提取物進行200—300目硅膠
中壓柱層析，用石油醚一丙酮溶劑(體積比為30: l)洗脫，以薄層層析參照
標準品檢測，合并該化合物的部位，減壓蒸發得濃縮物。
本發明所采用的滇丁香awcw/^;^"Vm" Hook.)為茜草科滇丁香屬植物， 分布于喜馬拉雅山至我國云南和廣西，具有較高的園林、藥用價值。由于滇 丁香株型優美，枝葉繁茂，翠綠光亮，花期長，花絮密集而繁茂，花色艷麗 而芳香，目前主要作為觀賞花木。但其在民間作為中藥材也具有悠久的歷史。 據記載丁香葉，即家中盆內栽者是也，其味苦、辛，性微溫；芳香入肺， 止肺寒咳嗽、或咳血、或痰上帶血。關于滇丁香屬植物的藥用價值，吳征鎰 主編的《新華本草綱要》有詳細記載根有活血調經、消炎止痛、降壓功能。
可用于月經不調、風濕疼痛、跌打損傷、偏頭痛、心慌等，外用可治毒蛇咬
傷；花果有止咳化痰功能，可用于百日咳、慢性支氣管炎、肺結核；葉有消
腫功能，可敷外傷腫痛。滇丁香原料來源豐富，提取熊果酸的成本低。本發 明的提取方法中使用到的分離材料有大孔吸附樹脂和凝膠，它們不僅理化性 質穩定，不溶于酸，堿及有機溶媒，對有機物選擇性較好，不受無機鹽類及
強離子低分子化合物存在的影響；并且易于洗脫再生，有益于多次循環利用。
具體實施方式
實施例1
取干燥滇丁香20kg，粉碎，用95。/。工業乙醇10L冷浸3次，每次7天， 過濾，減壓回收乙醇得濃縮液，將濃縮的提取物分散在2L水中，依次用乙酸乙酯，正丁醇各萃取三次，乙酸乙酯提取物進行200—300目硅膠中壓柱層析， 用石油醚一丙酮溶劑(體積比為30: 1)洗脫，以薄層層析參照標準品檢測， 合并該化合物的部位，進行SephadexLH-20凝膠柱層析以甲醇洗脫，得到該 化合物純品。 實施例2
大孔樹脂的預處理D101樹脂裝柱，用5% NaOH浸泡2 h后，以每小 時4個柱體積的流速洗脫2個柱體積，再用蒸餾水洗至PH值中性；加乙醇 浸泡lh，以每小時2個柱體積的流速洗脫3.5個柱體積，最后用蒸餾水洗至 無醇味。樣品溶液的制備取干燥滇丁香20kg，粉碎后，用95%工業乙醇冷 浸3次，每次7天，過濾，減壓回收乙醇得濃縮液，加水至適宜濃度按照h 30 (浸膏與大孔樹脂重量比)；將樣品溶液加入樹脂柱，水一乙醇溶劑梯度洗 脫，60%乙醇水部分濃縮成浸膏，進行Sephadex LH-20凝膠柱層析，以甲醇
為洗脫劑，標準品對照，分離得到純品。
采用本發明的方法提取到的熊果酸，其性狀為白色粉末。分子式:(:30仏803, 分子量456。
儀器材料熔點用四川科學儀器廠生產的XRC-1型顯微熔點儀測定，溫
度計未校正；旋光用SPEA-300儀測定；紅外在Bio-Rad FTS-135紅外光譜測 定；紫外在UV-210A紫外光譜測定儀上測定；1H， 13C醒R圖譜由Bruker am-400 MHz核磁共振儀測定。TMS為內標；二維核磁共振圖譜由DRX-500 M Hz核磁共振儀測定；質譜由VG.AUTOSpec-3000型質譜儀測定。
測定條件及結果Mp: 305-308°C; Optical Rotat-ion: [a]2;| -8.8(c
0. 25， CHCU。 EIMS仿/z (%): 456 (M+, 20) ， 410(8)， 248(100)， 233(30)， 213 (75), 175(33)， 131(30)， 119(40)， 105(45)，91 (35)。 'H麗R (400MHz， C5D5N) 《3. 38 GH，dd，,ll,3，3.4Hz，H-3) ，5. 57(1H，brs， H-12) ， 2. 42 (1H， d，力l
1. 32 Hz, H-18) ， 0. 67 (3H， s， H-23) ， 0. 63 (3H， s， H-24), 0. 84 (3H， s， H-25) ， 0. 81 (3H, s，H-26)，1.03(3H，d， /=5. 9 Hz， H—29)， 1. 01 (3H， d， ,6.1 Hz，H-30).13C NMR(125MHz， "n ppm， pyridine-4) 5:39. 2(C-l)， 29. 1 (C-2)， 77. 9(C-3)， 3
9. 8 (C-4) ， 55. 6 (C-5) ， 18. 6 (C-6， 32. 6 (C-7) ， 37. 0 (C-8) ， 53. 3 (C-9) ， 37. 0 (C-l 0) ， 23. 1 (C-11) ， 125. 4 (C-12) ， 139. 04 (C-13) ，41.6 (C-14) ， 27. 9 (C-15) ， 42. 3 ( C-16)，47. 8 (C-17) ，39.3 (C-18) ，39.2 (C-19) ，33.4 (C-20) ，30.9 (C-21) ，33.0 (C-22) ,24.7 (C-23) ，16.3 (C-24) ，15.5 (C-25) ，17.2 (C-26 )，23.7 (C-27) ，179.7 (C-28) ，28.5 (C-29) ，24.7 (C-30)。
最后所應說明的是以上實施例僅用以說明而非限制本發明的技術方案 ，盡管參照上述實施例對本發明進行了詳細說明，本領域的普通技術人員應 當理解依然可以對本發明進行修改或者等同替換，而不脫離本發明的精神 和范圍的任何修改或局部替換，其均應涵蓋在本發明的權利要求范圍當中。
權利要求
1、一種從植物滇丁香中提取熊果酸的方法，其特征在于包括以下步驟(1)取干燥滇丁香，粉碎，用濃度為95％的乙醇10L重復冷浸3次，每次7天，過濾，減壓回收乙醇得濃縮浸膏；(2)將得到的乙醇浸膏進行試驗；(3)將步驟(2)得到的濃縮物進行Sephadex LH-20凝膠柱層析，以甲醇為洗脫劑，標準品對照，分離得到純品。
2、 根據權利要求1所述的從植物滇丁香中提取熊果酸的方法，其特征在于所述的步驟(2)對乙醇浸膏進行試驗的步驟為將乙醇浸膏用10%乙醇 水(體積比)分散，按照浸膏與D101大孔樹脂重量比為1: 30;將分散 了浸膏的10%乙醇水溶液加入樹脂柱，水-乙醇溶劑梯度洗脫，60%乙醇水部分進行濃縮得濃縮物。
3、 根據權利要求1所述的從植物滇丁香中提取熊果酸的方法，其特征在于所述的步驟(2)對乙醇濃縮液進行試驗的步驟為將濃縮的提取物 分散在2L水中，用乙酸乙酯萃取三次；乙酸乙酯提取物進行200—300目硅膠中壓柱層析，用石油醚一丙酮溶劑(體積比為30: l)洗脫，以薄層層析參照標準品檢測，合并該化合物的部位，減壓蒸發得濃縮物。
全文摘要
本發明涉及一種從植物滇丁香中提取熊果酸的方法，包括以下步驟(1)取干燥滇丁香，粉碎，用濃度為95％的乙醇10L重復冷浸3次，每次7天，過濾，減壓回收乙醇得濃縮浸膏；(2)將得到的乙醇浸膏進行試驗；(3)將步驟(2)得到的濃縮物進行Sephadex LH-20凝膠柱層析，以甲醇為洗脫劑，標準品對照，分離得到純品。本發明的提取方法中使用到的分離材料有大孔吸附樹脂和凝膠，它們不僅理化性質穩定，不溶于酸、堿及有機溶媒，對有機物選擇性較好，不受無機鹽類及強離子低分子化合物存在的影響；并且易于洗脫再生，有益于多次循環利用。
文檔編號A61K36/185GK101544679SQ20081004940
公開日2009年9月30日 申請日期2008年3月25日 優先權日2008年3月25日
發明者姬志強, 宋艷麗, 康文藝, 王金梅 申請人:河南大學