專利名稱：：一種竹節參多糖及其制備方法和用途的制作方法
技術領域：
：本發明涉及一種竹節參多糖及其制備方法和用途，屬于高分子化學與物理領域，也屬于生物學、藥學、食品和保健品領域。技術背景竹節參(RhizomaPanacisJaponici),或稱竹節人參、白三七、珠子參等，為五加科屬植物竹節參(PanaxjaponicusC.A.Mey)呈竹鞭狀的根莖，主要產于我國中南部，是我國傳統中藥。目前國內外文獻中對竹節參根莖所含的化學成分研究僅限于竹節參皂苷(chikusetsu-saponin)、人參皂苷(ginsenoside)、三七皂苷R2(notoginsenosideR2)禾口偽人參阜苷Fn(pseudo-ginsenosideFn)，對竹節參多糖還未進行研究。竹節參是我國的特產資源，用其入藥，具有活血、止血、鎮痛、抗炎、延緩衰老且兼有人參之補益功效，是民間常用中藥之一。但將竹節參直接用做中藥，療效受到制約，因為竹節參中含有多種成分，各種成分的作用亦不同，其中多糖就包括(3-葡聚糖、p-甘露聚糖，a-甘露聚糖以及雜多糖，而且隨提取條件而變化。
發明內容本發明的目的是提供一種竹節參多糖及其制備方法和用途，不僅所需原料價格低廉，制備方法簡便、無污染，而且制備的竹節參多糖純度高、生物活性好。一種竹節參多糖，主鏈結構為(3-1—4-D葡聚糖，含甘露聚糖、半乳聚糖、木聚糖支鏈的雜多糖，其重均分子量為0.520萬，25'C的特性粘數為l50mL/g，C:H:0三元素摩爾比為1:2:1。制備上述竹節參多糖是先將干燥并粉碎的竹節參用有機溶劑脫去脂肪和小分子雜質，真空干燥，取干燥后固體用中性鹽的水溶液或純水常溫下浸泡并攪拌萃取，經過分離、脫水、脫色、脫蛋白、脫鹽和脫皂苷，最后干燥即制得竹節參多糖。其中將萃取的混合漿液用高速離心法或/和真空抽濾法分離沉淀。溶液用旋轉蒸發器濃縮，用旋轉蒸發器真空脫水時用消泡劑消泡。用Sevag法脫蛋白。用HA脫色，且用氨水調節溶液pH值為710。用自來水和蒸餾水透析，用醇回流法脫皂苷。將本發明竹節參多糖由Sarcoma180腫瘤和淋巴細胞體外活性實驗結果表明，本發明竹節參多糖對腫瘤細胞有明顯的抑制作用，甚至超過化學藥物5-氟脲噴啶(5-Fu)的效果(50%);對淋巴細胞有明顯促進增殖作用，超過脂多糖(LPS)和刀豆蛋白-A(Con-A)作用。該竹節參多糖具有較高的抗腫瘤活性，并具有較高的促進機體免疫功能，可用于制備提高免疫機能和抗腫瘤的藥物或保健品。通過氣相色譜-質譜(GC-MS)、H'3C和二維核磁共振譜(函R)、紅外光譜(IR)、元素分析等研究表明，該竹節參多糖結構為(3-1—4-D葡聚糖主鏈，含甘露聚糖、半乳聚糖和木聚糖支鏈的雜多糖。應用高分子溶液理論，采用激光光散射-尺寸排除色譜(LLS-SEC)、毛細管粘度法技術研究結果及透射電鏡圖顯示表明，該竹節參多糖分子鏈在水中呈球形。本發明利用生物技術，從竹節參中提取分離出具有明顯抗腫瘤活性和免疫機能的竹節參多糖，所用方法簡單易行、成本較低廉。本發明利用高分子物理理論和方法研究竹節參多糖在溶液中的鏈構象；所制得的竹節參多糖具有較高的抗腫瘤活性，并具有較高的促進機體免疫功能，可用于制備提高免疫機能和抗腫瘤的藥物或保健品。圖1為竹節參多糖的。C核磁共振譜圖。圖2為竹節參多糖的紅外光譜圖。圖3為竹節參多糖的激光散射-尺寸排斥色譜圖。圖4為竹節參多糖的透射電鏡照片。圖5為竹節參多糖對Sarcomal80腫瘤細胞增殖抑制作用示意圖。圖6為不同濃度竹節參多糖對淋巴細胞促進作用的示意圖。具體實施方式以下結合具體的實例對本發明的技術方案作進一步說明。將干燥并粉碎的湖北恩施產竹節參用乙酸乙酯和丙酮分別回流48小時，脫去脂肪和部分小分子雜質，真空干燥后，取干燥后固體1001000g，用O.l2MNaCl水溶液110L在1030。C浸泡并攪拌萃取524小時，重復萃取25次。混合漿液用高速離心法分離沉淀，上層溶液合并后用旋轉蒸發器濃縮，濃縮時加入微量正辛醇除氣泡。濃縮溶液用Sevag法脫蛋白，脫蛋白后加入氨水調節溶液pH值為710,再加入&02脫色14天。然后依次用自來水和蒸餾水透析25天，冷凍干燥后再用醇回流28小時除去皂苷，得到竹節參多糖樣品RPS1。所得竹節參多糖元素分析結果見表l。該竹節參多糖重均分子量(Mw)、分子量分布(Mw/MJ、分子均方旋轉半徑(<32、w)和特性粘數([d)等理化性質見表2。所得竹節參多糖。CNMR譜見圖1，IR譜圖見圖2，LLS-SEC分離譜圖見圖3。該竹節參多糖分子在水溶液中的鏈形態見圖4，對S-180腫瘤細胞抑制效果和淋巴細胞促進作用等體外生物活性分別見圖5和圖6。通過氣相色譜-質譜(GC-MS)、'H,'3C和二維核磁共振(NMR)、紅外光譜(IR)、元素分析表明，該竹節參多糖結構為P-1—4-D葡聚糖(glu)主鏈，含甘露聚糖、半乳聚糖和木聚糖支鏈的雜多糖。應用高分子溶液理論，采用激光光散射-尺寸排除色譜(LLS-SEC)、毛細管粘度法技術研究結果及透射電鏡圖顯示表明，該竹節參多糖分子鏈在水中呈球形。由Sarcoma180腫瘤細胞和淋巴細胞體外活性實驗結果表明，本發明竹節參多糖對腫瘤細胞有明顯的抑制作用，甚至超過化學藥物5-氟脲嘧啶(5-Fu)的效果(50%);對淋巴細胞有明顯促進增殖作用，超過脂多糖(LPS)和刀豆蛋白-A(Con-A)作用。該竹節參多糖具有較高的抗腫瘤活性，并具有較高的促進機體免疫功能，可用于制備提高免疫機能和抗腫瘤的藥物或保健品。表l竹節參多糖元素分析結果<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>權利要求1.一種竹節參多糖，主鏈結構為β-1→4-D葡聚糖，含甘露聚糖、半乳聚糖和木聚糖支鏈的雜多糖，其重均分子量為0.5～20萬，25℃的特性粘數為1～50mL/g，C∶H∶O三元素摩爾比為1∶2∶1。2.—種權利要求1所述竹節參多糖的制備方法，其特征在于將竹節參干燥粉碎脫脂后，用中性鹽的水溶液或純水萃取，經過分離、脫水、脫色、脫蛋白、脫鹽和脫皂苷，干燥即制得竹節參多糖。3.根據權利要求2所述竹節參多糖的制備方法，其特征在于采用高速離心法或/和真空抽濾法分離沉淀，用旋轉蒸發器濃縮脫水，用H20J兌色，用Sevag法脫蛋白，用透析法脫鹽，用醇回流法脫皂苷。4.根據權利要求3所述制備竹節參多糖的方法，其特征在于用旋轉蒸發器真空脫水時用消泡劑消泡。5.根據權利要求3所述制備竹節參多糖的方法，其特征在于用^02脫色時，用氨水調節溶液pH值為710。6.權利要求1所述的竹節參多糖在制備免疫治療或腫瘤治療的藥物，或者提高機體免疫功能的保健品中的應用。全文摘要本發明公開了一種竹節參多糖，其主鏈結構為β-1→4-D葡聚糖，含甘露聚糖、半乳聚糖、木聚糖支鏈的雜多糖，其重均分子量為0.5～20萬，25℃的特性粘數為1～50ml/g，C∶H∶O三元素摩爾比為1∶2∶1。該竹節參多糖的制備方法是將竹節參干燥粉碎脫脂后，用中性鹽的水溶液或純水萃取，經過分離，脫皂苷，脫水，脫色，脫蛋白，脫鹽和干燥，得到的一種易溶解于水，可溶解于DMSO，不溶解于甲醇、乙醇和丙酮的白色竹節參多糖。本發明制得的竹節參多糖具有較高的抗腫瘤活性和促進免疫活性，可用于制備提高免疫機能和抗腫瘤的藥物或保健品。該產品的制備方法簡單，便于操作，且所需原料來源廣泛。文檔編號A61P37/00GK101265302SQ20081004750公開日2008年9月17日申請日期2008年4月29日優先權日2008年4月29日發明者張俐娜,黃志萍申請人:武漢大學