專(zhuān)利名稱(chēng)：：山豆根非生物堿部分的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種中藥
技術(shù)領(lǐng)域：
的制備方法，特別是涉及一種山豆根非生物堿部分的制備方法。技術(shù)背景山豆根是豆科植物越南槐(S叩horatonkinensisGapn印.)的干燥根和根莖。其藥性寒，味苦，歸肺、胃經(jīng)。中國(guó)藥典2005年版記載山豆根具有清熱解毒、消腫利咽的功效。山豆根中主要含有生物堿，黃酮，皂苷和多糖類(lèi)化合物。藥理實(shí)驗(yàn)表明，山豆根具有抗腫瘤、抗病毒、抗肝損傷、抗心律失常等多方面藥理活性，且據(jù)研究報(bào)道其中所含的生物堿成分多為這些藥理活性的物質(zhì)基礎(chǔ)?，F(xiàn)代研究表明山豆根對(duì)肝炎治療效果顯著，如含山豆根總生物堿的制劑肝炎靈注射液經(jīng)長(zhǎng)期臨床應(yīng)用顯示，能夠降低轉(zhuǎn)氨酶，提高機(jī)體免疫力，對(duì)慢性活動(dòng)性肝炎具有較好療效。比如中國(guó)專(zhuān)利CN85100392A公開(kāi)了一種從植物山豆根中提取治療肝炎用藥的方法；中國(guó)專(zhuān)利CN1457778A公開(kāi)了山豆根的口服制劑、制備方法及應(yīng)用。這些專(zhuān)利中所涉及到的均為山豆根中的主要次生代謝產(chǎn)物-生物堿類(lèi)成分。但目前臨床上也發(fā)現(xiàn)，以山豆根主要生物堿成份苦參堿或氧化苦參堿單體制成的苦參堿注射液或苦參素注射液，其效果并沒(méi)有用水直接提取制備而成的"肝炎靈注射液"明顯，這說(shuō)明山豆根中可能還含有更高效的保肝降酶的非生物堿成分存在。經(jīng)對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的文獻(xiàn)檢索發(fā)現(xiàn)，中國(guó)專(zhuān)利CN1306854A是一種山豆根的提取物，其提取方法及用途，該專(zhuān)利所指山豆根的提取物"是向山豆根水提液中加入乙醇所得的醇沉部分；或?qū)⑸蕉垢继岷蟮臍堅(jiān)儆盟崛∷玫乃岵糠?。該山豆根的提取物的提取方法為"取山豆根，用水浸泡后加熱提取，再經(jīng)0-3次熱水提取后，過(guò)濾，合并水提液，濃縮，加乙醇，去醇沉部分即得。"該山豆根提取物可以用于制備護(hù)肝藥。該專(zhuān)利提示了山豆根中的水提醇沉物(也是非生物堿成分，以多糖等大分子物質(zhì)為主)能夠顯著降低急性肝損傷大鼠死亡率以及血清轉(zhuǎn)氨酶水平，具較好的護(hù)肝作用。結(jié)合目前臨床應(yīng)用肝炎靈注射液的實(shí)際效果來(lái)看，因?yàn)橹苯铀崛∫褐苽涞母窝嘴`事實(shí)上除了包含山豆根中的主要生物堿成分外，同時(shí)也涵蓋了很多非生物堿類(lèi)的化學(xué)成分，其臨床效果要優(yōu)于僅含有生物堿成分的制劑效果。也就說(shuō)臨床效果提示非生物堿的活性成分很可能在整個(gè)功效中發(fā)揮了主導(dǎo)作用或至少對(duì)生物堿具有協(xié)同增效的作用。為了進(jìn)一步研究更高療效的保肝、降酶活性的藥物，對(duì)其非生物堿成分深入研究具有十分重要的理論和應(yīng)用價(jià)值。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種山豆根非生物堿部分的制備方法，具有簡(jiǎn)單、快速、成本低廉的特點(diǎn)，為從山豆根中提取非生物堿部分提供了一種新方法，非生物堿部分可作為降酶保肝方面的應(yīng)用，同時(shí)可供進(jìn)一步研究高效低毒的非生物堿活性成分提供物質(zhì)基礎(chǔ)。本發(fā)明通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的，本發(fā)明所述的山豆根非生物堿部分的制備方法，具體為在山豆根的水回流提液中加入乙醇，沉淀不溶性物質(zhì)，過(guò)濾，濾液濃縮，經(jīng)交聯(lián)聚苯乙烯系的強(qiáng)酸型陽(yáng)離子樹(shù)脂進(jìn)行柱色譜分離，用水洗脫，收集水洗脫部分，濃縮至浸膏狀，減壓干燥即得到非生物堿部分。本發(fā)明所述山豆根非生物堿部分的制備方法，包括如下步驟第一步，取山豆根藥材粉末，加入615倍的水，回流提取，合并提取液，過(guò)濾，除去藥渣；所述山豆根藥材粉末是指40目~200目的山豆根藥材粉末。所述回流提取13次，每次1小時(shí)2小時(shí)。第二步，取濾液，減壓濃縮至原藥材體積的1/21/4;第三步，于4。C30。C溫度范圍內(nèi)，在濃縮液中加入95%(v/v)乙醇溶液，攪拌，調(diào)節(jié)溶液醇濃度為50%90%(v/v)，進(jìn)行沉淀；靜置610h，離心或過(guò)濾，除去殘?jiān)蝗芪?，濾液濃縮至原藥材的量的1/4，備用。第四步，將第三步中濃縮液通過(guò)交聯(lián)聚苯乙烯系的強(qiáng)酸型樹(shù)脂，用去離子水洗脫，收集洗脫液，至洗脫液為中性無(wú)色。第五步，將第四步中水洗脫液減壓濃縮，至浸膏狀，經(jīng)真空干燥或冷凍干燥成干粉，即得山豆根非生物堿部分。所述交聯(lián)聚苯乙烯系的強(qiáng)酸型陽(yáng)離子樹(shù)脂，是指型號(hào)為001X1.1或001X4或001X7或001X14.5，或美國(guó)Rohm&Hass公司生產(chǎn)的AmberliteIR120,或Dow化學(xué)公司生產(chǎn)的Dowex50，或英國(guó)BDHChemicalLtd生產(chǎn)的Zerolit225。本發(fā)明所得的的山豆根非生物堿部分，含有糖類(lèi)、有機(jī)酸、酚類(lèi)和皂苷類(lèi)等。采用試管試驗(yàn)，碘化鉍鉀和碘化汞生物堿顯色試劑檢驗(yàn)，均呈陰性；同時(shí)根據(jù)中國(guó)藥典2005版中山豆根薄層檢査生物堿項(xiàng)下，于硅膠G板上點(diǎn)樣，三氯甲烷甲醇濃氨水(4:1:0.1)(V:v:v)展開(kāi)，取出晾干，噴以碘化鉍鉀顯色劑，也無(wú)生物堿顯色斑點(diǎn)出現(xiàn)。對(duì)非生物堿部分進(jìn)行定量測(cè)定，以重量百分比表示其含量如下采用苯酚一硫酸法，用分光光度法測(cè)定，以葡萄糖計(jì)，含糖量在52%58%;酸堿滴定法測(cè)得總有機(jī)酸含量在8%10%;采用Folin法，分光光度法測(cè)定，以沒(méi)食子酸計(jì)總酚含量在4%6%;香草醛—濃硫酸法，分光光度法測(cè)定，以齊墩果酸計(jì)總皂苷含量在4%5%。本發(fā)明的制備工藝簡(jiǎn)單、快捷、成本低廉，所得產(chǎn)品含有的各類(lèi)物質(zhì)含量穩(wěn)定可控。所得非生物堿部分作為降酶保肝方面的應(yīng)用，同時(shí)為進(jìn)一步在山豆根中尋找具有高效低毒的非生物堿活性成分提供物質(zhì)基礎(chǔ)。具體實(shí)施方式下面對(duì)本發(fā)明的實(shí)施例作詳細(xì)說(shuō)明本實(shí)施例在以本發(fā)明技術(shù)方案為前提下進(jìn)行實(shí)施，給出了詳細(xì)的實(shí)施方式和具體的操作過(guò)程，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于下述的實(shí)施例。實(shí)施例1取40目~200目山豆根藥材粉末1000g，第一次加入6倍藥材量的水，回流提取lh，過(guò)濾。藥渣再用4倍藥材量的水回流提取lh，過(guò)濾。合并濾液減壓濃縮至250mL。于4'C下，在濃縮液中加入95%乙醇，攪拌，調(diào)節(jié)溶液醇濃度為50%，靜置6h;過(guò)濾，除去不溶物。濾液濃縮至250mL,上交聯(lián)聚苯乙烯系的強(qiáng)酸型樹(shù)脂進(jìn)行分離，其型號(hào)為001X7，用去離子水洗脫；收集水洗脫液至洗脫液中性無(wú)色，減壓濃縮洗脫液至浸膏狀，經(jīng)真空干燥或冷凍干燥成干粉，即得山豆根非生物堿部分。所得非生物堿部分用碘化鉍鉀和碘化汞試管反應(yīng)和薄層展開(kāi)檢査生物堿均為陰性，且該部分含糖量為52%，總有機(jī)酸含量為8%，總酚含量為5%，皂苷含量為4%。實(shí)施例2取40目~200目山豆根藥材粉末1000g，第一次加入10倍藥材量的水，回流提取2h，過(guò)濾。藥渣再用6倍藥材量的水回流提取1.5h，過(guò)濾。重復(fù)操作一次，合并濾液減壓濃縮至300mL。于20'C下，在濃縮液中加入95%乙醇，攪拌，調(diào)節(jié)溶液醇濃度為70%，靜置8h;過(guò)濾，除去不溶物。濾液濃縮至250mL,上交聯(lián)聚苯乙烯系的強(qiáng)酸型樹(shù)脂進(jìn)行分離，其型號(hào)為001X7，用去離子水洗脫；收集水洗脫液至洗脫液中性無(wú)色，減壓濃縮洗脫液至浸膏狀，經(jīng)真空干燥或冷凍干燥成干粉，即得山豆根非生物堿部分。所得非生物堿部分用碘化鉍鉀和碘化汞試管反應(yīng)和薄層展開(kāi)檢查生物堿均為陰性，且該部分含糖量為54%，總有機(jī)酸含量為9%，總酚含量為6%，皂苷含量為5%。實(shí)施例3取40目~200目山豆根藥材粉末1000g，第一次加入15倍藥材量的水，回流提取3h，過(guò)濾。藥渣再用8倍藥材量的水回流提取1.5h，過(guò)濾。重復(fù)操作2次，合并濾液減壓濃縮至500mL。于30'C下，在濃縮液中加入95%乙醇，攪拌，調(diào)節(jié)溶液醇濃度為90%，靜置10h;過(guò)濾，除去不溶物。濾液濃縮至250mL，上交聯(lián)聚苯乙烯系的強(qiáng)酸型樹(shù)脂進(jìn)行分離，其型號(hào)為001X7，用去離子水洗脫；收集水洗脫液至洗脫液中性無(wú)色，減壓濃縮洗脫液至浸膏狀，經(jīng)真空干燥或冷凍干燥成干粉，即得山豆根非生物堿部分。所得非生物堿部分用碘化鉍鉀和碘化汞試管反應(yīng)和薄層展開(kāi)檢查生物堿均為陰性，且該部分含糖量為55%，總有機(jī)酸含量為10%，總酚含量為6%，皂苷含量為4%。實(shí)施例4實(shí)施步驟同實(shí)施例3，其中的交聯(lián)聚苯乙烯系的強(qiáng)酸型樹(shù)脂柱為AmberliteIR120。所得非生物堿部分用碘化鉍鉀和碘化汞試管反應(yīng)和薄層展開(kāi)檢査生物堿均為陰性，且該部分含糖量為57%，總有機(jī)酸含量為9%，總酚含量為5%，皂苷含量為4%。實(shí)施例5實(shí)施步驟同實(shí)施例3，其中的交聯(lián)聚苯乙烯系的強(qiáng)酸型樹(shù)脂柱為Dowex50。所得非生物堿部分用碘化鉍鉀和碘化汞試管反應(yīng)和薄層展開(kāi)檢査生物堿均為陰性，且該部分含糖量為58%，總有機(jī)酸含量為10%，總酚含量為4%，皂苷含量為5%。實(shí)施例6實(shí)施步驟同實(shí)施例3，其中的交聯(lián)聚苯乙烯系的強(qiáng)酸型樹(shù)脂柱為Zerolit225。所得非生物堿部分用碘化鉍鉀和碘化汞試管反應(yīng)和薄層展開(kāi)檢查生物堿均為陰性，且該部分含糖量為58%，總有機(jī)酸含量為10%,總酚含量為4%，皂苷含量為5%。實(shí)施例7所得非生物堿部分，在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物大鼠上，分別灌胃給予50、25mg*kg—'高低兩個(gè)劑量的山豆根非生物堿部分，連續(xù)14天，每日一次；正常對(duì)照組和模型對(duì)照組動(dòng)物分別給予同等劑量純水。除正常對(duì)照組外，第13天給藥2小時(shí)后給予CCL1.5mLkg—'進(jìn)行腹腔注射染毒，造成急性肝損傷模型。于染毒24h后，眼眶取血，分離血清，測(cè)定谷丙轉(zhuǎn)氨酶ALT、谷草轉(zhuǎn)氨酶AST生化指標(biāo)水平；結(jié)果如表1所示。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可看出非生物堿部分的高低兩個(gè)劑量組與模型對(duì)照組相比ALT和AST均有顯著性降低，表現(xiàn)出較好的降酶保肝作用。表l.非生物堿部分對(duì)CCl4急性肝損傷大鼠血清ALT、AST的影響(n=6)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>573.20±64.53'注與正常組比較*P<0.01;與造模組比較'P<0.05,''P<0.0權(quán)利要求1、一種山豆根非生物堿部分的制備方法，其特征在于，在山豆根的水回流提液中加入乙醇，沉淀不溶性物質(zhì)，過(guò)濾，濾液濃縮，經(jīng)交聯(lián)聚苯乙烯系的強(qiáng)酸型陽(yáng)離子樹(shù)脂進(jìn)行柱色譜分離，用水洗脫，收集水洗脫部分，濃縮至浸膏狀，減壓干燥即得到非生物堿部分。2、根據(jù)權(quán)利要求l所述的山豆根非生物堿部分的制備方法，其特征是，包括如下步驟第一步，取山豆根藥材粉末，加入615倍的水，回流提取，合并提取液，過(guò)濾，除去藥渣；第二步，取濾液，減壓濃縮至原藥材體積的1/21/4;第三步，于4'C30'C溫度范圍內(nèi)，在濃縮液中加入體積濃度為95%的乙醇溶液，攪拌，調(diào)節(jié)溶液醇體積濃度為50%90%，進(jìn)行沉淀，靜置6h10h，離心或過(guò)濾，除去殘?jiān)蝗芪铮瑸V液濃縮至原藥材的量的1/4，備用；第四步，將第三步中濃縮液通過(guò)交聯(lián)聚苯乙烯系的強(qiáng)酸型樹(shù)脂，用去離子水洗脫，收集洗脫液，至洗脫液為中性無(wú)色；第五步，將第四步中水洗脫液減壓濃縮，至浸膏狀，經(jīng)真空干燥或冷凍干燥成干粉，即得山豆根非生物堿部分。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的山豆根非生物堿部分的制備方法，其特征是，所述山豆根藥材粉末是指40目~200目的山豆根藥材粉末。4、根據(jù)權(quán)利要求2所述的山豆根非生物堿部分的制備方法，其特征是，所述回流提取13次，每次1小時(shí)2小時(shí)。5、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的山豆根非生物堿部分的制備方法，其特征是，所述非生物堿部分，其糖重量百分比含量在52%58%。6、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的山豆根非生物堿部分的制備方法，其特征是，所述非生物堿部分，其總有機(jī)酸重量百分比含量在8%10%。7、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的山豆根非生物堿部分的制備方法，其特征是，所述非生物堿部分，其總酚重量百分比含量在4%~6%。8、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的山豆根非生物堿部分的制備方法，其特征是，所述非生物堿部分，其總皂苷重量百分比含量在4%5%。全文摘要本發(fā)明公開(kāi)了一種中藥
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的山豆根非生物堿部分的制備方法，具體為在山豆根的水回流提液中加入乙醇，沉淀不溶性物質(zhì)，過(guò)濾，濾液濃縮，經(jīng)交聯(lián)聚苯乙烯系的強(qiáng)酸型陽(yáng)離子樹(shù)脂進(jìn)行柱色譜分離，用水洗脫，收集水洗脫部分，濃縮至浸膏狀，減壓干燥即得到非生物堿部分。該生物堿部分主要含有糖類(lèi)、有機(jī)酸、酚類(lèi)和皂苷類(lèi)等。本發(fā)明的制備工藝簡(jiǎn)單、快捷、成本低廉，所得產(chǎn)品含有的各類(lèi)物質(zhì)含量穩(wěn)定可控。所得非生物堿部分可做為降酶保肝方面的應(yīng)用，并為從中尋找更高效的非生物堿活性成分提供物質(zhì)基礎(chǔ)。文檔編號(hào)A61P1/00GK101278969SQ20081003741公開(kāi)日2008年10月8日申請(qǐng)日期2008年5月15日優(yōu)先權(quán)日2008年5月15日發(fā)明者張媛媛,偉賈,趙愛(ài)華,高月求申請(qǐng)人:上海交通大學(xué)