專利名稱：pH敏感長循環脂質體組合物及其制備方法
技術領域：
本發明涉及藥物制劑領域，具體涉及pH敏感長循環脂質體組合物及其制備方法。
技術背景腫瘤嚴重威脅了人類的健康與生命，藥物治療是目前腫瘤治療的主要手段之一。抗腫 瘤藥物毒性大，目前臨床治療大多采用傳統的藥物劑型及其給藥技術，藥物生物利用率 低，易產生嚴重的毒副作用，藥物難于發揮應有的治療作用與效果。脂質體是一種定向藥物載體，可以將藥物粉末或溶液包埋在具有類細胞結構的微粒 中，改變藥物的體內分布，減少藥物的治療劑量和降低藥物的毒性。脂質體注入體內后， 會被網狀內皮系統攝取而從血流中快速清除，通常需要通過改變其表面親水性亞結構，形 成表面包裹有高分子材料的長循環脂質體。中國專利CN1883455A公開了一種聚乙二醇修飾的羥基喜樹堿隱形脂質納米球及其制 備方法；中國專利CN1846692A公開了一種多烯紫杉醇長循環脂質體劑型及其制備方法； 中國專利CN101062094A公開了丹參總酚酸長循環脂質體及其制備方法。長循環脂質體可以減少網狀內皮系統的吞噬、吸收，延長藥物在體內的循環時間，但 不能實現藥物的智能控制釋放。腫瘤組織在局部缺血時，腫瘤間質液出現異常酸化現象，利用腫瘤組織pH5.0 6.5比 正常組織低的特性，設計和研究在生理范圍內穩定的pH敏感型脂質體，不但可以進一步 提高脂質體的靶向性，而且可以實現藥物的智能控制釋放。 發明內容羧甲基殼聚糖(CMCT)是殼聚糖經羧甲基化反應后的一類甲殼素衍生物，它既含有 弱堿陽離子(一NHS+)基團，又含有弱酸陰離子(一COO—)基團，是一種兩親性聚電解質，具 有特殊的pH敏感性。本發明利用羧甲基殼聚糖兩性聚電解質高分子材料的親水性和pH敏感性，將羧甲基 殼聚糖既作為脂質體的pH敏感劑，又作為脂質體的立體穩定劑，通過脂質體與其修飾劑 羧甲基殼聚糖的相互作用，獲得pH敏感長循環脂質體。羧甲基殼聚糖的親水鏈包裹在脂質體周圍而對血中的蛋白有排斥作用，可以延緩調理 作用，達到體內長循環隱形的目的。羧甲基殼聚糖結合于脂質體表面，由于環境pH變化 引起羧甲基殼聚糖構象的改變，會迫使磷脂雙分子層發生重排，破壞脂質體膜的屏障性 質，從而使內容物迅速且定量地釋放出來，實現pH敏感控釋。本發明公開了pH敏感長循環脂質體組合物，由治療藥物、磷脂、膽固醇、維生素 E、表面活性劑、脂質體修飾劑質組成。所述的治療藥物為治療各種腫瘤性疾病的治療藥物，選自選自阿霉素、柔紅霉素、表 阿霉素、長春堿、紫杉類、抗葉酸制劑、氮芥、環磷酰胺、5-氟尿嘧啶、順鉑、拓撲異構 酶抑制劑、他莫昔芬、單克隆抗體藥物和基因治療藥物。所述的治療藥物包括鹽酸阿霉素、鹽酸柔紅霉素、鹽酸表阿霉素和紫杉醇中的一種或 幾種。優選鹽酸阿霉素。所述的磷脂選自卵磷脂，包括蛋黃卵磷脂、大豆卵磷脂、氫化大豆卵磷脂、氫化蛋黃 卵磷脂、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰膽堿。優選大豆卵磷脂。所述的表面活性劑包括PEG-2000、 Span-60、 Span-80、 Tween-80的一種或幾種。優選 Tween-80。所述的脂質體修飾劑為羧甲基殼聚糖，羧甲基殼聚糖的取代度為0.5 1.8，羧甲基殼 聚糖的分子量為lxio4 lxl06。所述的pH敏感長循環脂質體組合物，其特征在于含有以下重量比的組分治療藥物 1份磷脂 10 100份 膽固醇 2 20份 維生素E 1 20份 表面活性劑 1 10份 脂質體修飾劑0.1 10份。所述的pH敏感長循環脂質體組合物的制備方法包括主動載藥制備方法、被動載藥制 備方法。優選主動載藥制備方法。所述的pH敏感長循環脂質體組合物的制備方法包含下述步驟 (1)脂類膜制備按配方量稱取磷脂、膽固醇、維生素E、表面活性劑溶于有機溶劑 中，形成均勻混合溶液，減壓蒸干混合溶液形成脂類薄膜；(2) 水合往脂類薄膜中加入酸性水合介質進行水合，采用超聲、高壓乳勻或攪拌制 得空白脂質體懸液；(3) 藥物加載用堿性水合介質調節空白脂質體外水相pH至6.8 7.3，再加入治療藥 物，所得懸液在55 65'C繼續水合2 6小時，即得含治療藥物脂質體懸液；(4) 脂質體修飾向步驟(3)制得的脂質體懸液中加入脂質體修飾劑，繼續水合0.5h 即得pH敏感長循環脂質體。所述的pH敏感長循環脂質體組合物的制備方法，有機溶劑為氯仿和甲醇的混合物。水合介質選自磷酸鹽緩沖溶液、檸檬酸鹽緩沖溶液、乳酸緩沖溶液。 本發明所制得的pH敏感長循環脂質體組合物粒徑為0.02 50um。 本發明所述的pH敏感長循環脂質體組合物制成注射液、凍干粉針劑和/或噴霧劑。 本發明制備工藝簡單，脂質體藥物包封率較高、性能穩定；羧甲基殼聚糖修飾制備的pH敏感長循環脂質體組合物具有多重靶向、智能控釋等顯著特征，而且具有儲存穩定性和體內循環穩定性好，藥物的治療指數高、毒副作用低等特點，可用于治療各種腫瘤性疾病。
圖1為pH敏感長循環脂質體組合物電鏡照片。 圖2為pH敏感長循環脂質體組合物粒徑分布。圖3為pH敏感長循環脂質體組合物在不同pH的PBS緩沖液中阿霉素的滲漏百分率具體實施方式
下面通過實驗實施例對本發明進行具體描述，有必要指出的是本實施例只用于對本發 明做進一步說明，不能理解為對本發明保護范圍的限制，該領域的技術熟練人員可以根據 上述本發明的內容做出一些非本質的改進和調整。實施例l稱取150mg大豆卵磷脂、30mg膽固醇、20mg維生素E、 10mg Tween-80溶于10ml混 合溶劑(VM:V =2:1)中，減壓蒸干混合溶液至形成一層均勻的脂質薄膜。加適量 pH=4.0的PBS溶解后超聲形成均勻懸液，用pH7.4的PBS調節pH至6.8，加入1.75mg/ml 阿霉素水溶液lml后進行超聲，6(TC水浴條件下水合3h后即得阿霉素脂質體。向制得的阿霉素脂質體中加入0.08% (wAv)取代度為1.2的羧甲基殼聚糖水溶液lml，繼續水合0.5h即得羧甲基殼聚糖修飾的阿霉素脂質體。羧甲基殼聚糖修飾的阿霉素脂質體平均粒徑 為75nm，透射電鏡照片如附圖1所示，粒徑分布如附圖2所示。實施例2稱取100mg大豆卵磷脂、25mg膽固醇、10mg維生素E、 5mgTween-80溶于10ml混 合溶劑(VM:VW=2:1)中，減壓蒸干混合溶液至形成一層均勻的脂質薄膜。加適量 pH=4.0的PBS溶解后超聲形成均勻懸液，用pH7.4的PBS調節pH至7.1 ，加入4mg/ml阿 霉素水溶液lml后進行高壓乳勻，55'C水浴條件下水合3h后即得阿霉素脂質體。向制得 的阿霉素脂質體中加入0.4% (w/w)取代度為0.9的羧甲基殼聚糖水溶液lml，繼續水合 0.5h即得羧甲基殼聚糖修飾的阿霉素脂質體。測得羧甲基殼聚糖修飾的阿霉素脂質體包封 率為80.5%，平均粒徑為38nm。實施例3按實施例1相同方法分別制備取代度為0.6、 0.9、 1.2的羧甲基殼聚糖修飾的阿霉素脂 質體，并測定pH敏感長循環脂質體分別在pH5.0、 pH5.5、 pH6.0、 pH6.1、 pH6.3、 pH6.5、 pH7.0的PBS外液中的藥物滲漏百分率，以阿霉素的滲漏百分率對pH值作圖，即 得脂質體藥物滲漏的pH敏感性曲線，如附圖3所示。
權利要求
1. pH敏感長循環脂質體組合物，其特征在于由治療藥物、磷脂、膽固醇、維生素E、表面活性劑、脂質體修飾劑組成。
2、 根據權利要求l所述的pH敏感長循環脂質體組合物，其特征在于所述的治療藥物為治療各種腫瘤性疾病的治療藥物。
3、 根據權利要求2所述的pH敏感長循環脂質體組合物，其特征在于，所述的治療藥物選 自阿霉素、柔紅霉素、表阿霉素、長春堿、紫杉類、抗葉酸制劑、氮芥、環磷酰胺、5-氟尿嘧啶、順鉑、拓撲異構酶抑制劑、他莫昔芬、單克隆抗體藥物和基因治療藥物。
4、 根據權利要求3所述的pH敏感長循環脂質體組合物，其特征在于，所述的治療藥物選 自鹽酸阿霉素、鹽酸柔紅霉素、鹽酸表阿霉素和紫杉醇中的一種或幾種。
5、 根據權利要求4所述的pH敏感長循環脂質體組合物，其特征在于，所述的治療藥物優 選鹽酸阿霉素。
6、 根據權利要求l所述的pH敏感長循環脂質體組合物，其特征在于所述磷脂選自卵磷 月旨，包括蛋黃卵磷脂、大豆卵磷脂、氫化大豆卵磷脂、氫化蛋黃卵磷脂、磷脂酰乙醇 胺、磷脂酰膽堿。
7、 根據權利要求6所述的pH敏感長循環脂質體組合物，其特征在于所述磷脂優選大豆 卵磷脂。
8、 根據權利要求l所述的pH敏感長循環脂質體組合物，其特征在于，所述的表面活性劑 包括PEG-2000、 Span-60、 Span-80、 Tween-80的一種或幾種。
9、 根據權利要求8所述的pH敏感長循環脂質體組合物，其特征在于，所述的表面活性劑 優選Tween-80。
10、 根據權利要求1所述的pH敏感長循環脂質體組合物，其特征在于所述脂質體修 飾劑為羧甲基殼聚糖。
11、 根據權利要求IO所述的pH敏感長循環脂質體組合物，其特征在于所述的羧甲基 殼聚糖的取代度為0.5 1.8。
12、 根據權利要求11所述的pH敏感長循環脂質體組合物，其特征在于所述的羧甲基 殼聚糖的分子量為Ixl04 lxl06。
13、 根據權利要求1所述的pH敏感長循環脂質體組合物，其特征在于含有以下重量 比的組分治療藥物 1份 磷脂 10 100份 膽固醇 2 20份 維生素E 1 20份 表面活性劑 1 10份 脂質體修飾劑(U 10份。
14、 根據權利要求1所述的pH敏感長循環脂質體組合物，其特征在于其制備方法包 括主動載藥制備方法、被動載藥制備方法。
15、 根據權利要求14所述的pH敏感長循環脂質體組合物，其特征在于其制備方法優 選主動載藥制備方法。
16、 根據權利要求15所述的pH敏感長循環脂質體組合物，其特征在于其制備方法包含下述步驟(1) 脂類膜制備按配方量稱取磷脂、膽固醇、維生素E、表面活性劑溶于有機溶劑 中，形成均勻混合溶液，減壓蒸干混合溶液形成脂類薄膜；(2) 水合往脂類薄膜中加入酸性水合介質進行水合，采用超聲、高壓乳勻或攪拌制 得空白脂質體懸液；(3) 藥物加載用堿性水合介質調節空白脂質體外水相pH至6.8 7.3，再加入治療藥 物，所得懸液在55 65'C繼續水合2 6小時，即得含治療藥物脂質體懸液；(4) 脂質體修飾向步驟(3)制得的脂質體懸液中加入脂質體修飾劑，繼續水合0.5h 即得pH敏感長循環脂質體。
17、 根據權利要求16所述的方法，其特征在于，所述的有機溶劑為氯仿和甲醇的混合 物。
18、 根據權利要求16所述的pH敏感長循環脂質體組合物，其特征在于所述的水合介 質選自磷酸鹽緩沖溶液、檸檬酸鹽緩沖溶液、乳酸緩沖溶液。
19、 根據權利要求16所述的pH敏感長循環脂質體組合物，其特征在于制得的pH敏 感長循環脂質體粒徑為0.02 50um。
20、 根據權利要求1所述的pH敏感長循環脂質體組合物，其特征在于所述的pH敏感 長循環脂質體組合物制成注射液、凍干粉針劑和/或噴霧劑。
全文摘要
本發明涉及pH敏感長循環脂質體組合物及其制備方法。本發明的脂質體組合物由治療藥物、磷脂、膽固醇、維生素E、表面活性劑、脂質體修飾劑組成。所述的pH敏感長循環脂質體組合物不僅具有普通脂質體的優點，而且兼具pH敏感智能控釋和長循環主動靶向給藥功能，可用于治療各種腫瘤性疾病。
文檔編號A61K31/337GK101264057SQ20081003679
公開日2008年9月17日 申請日期2008年4月29日 優先權日2008年4月29日
發明者姜厚友, 徐云龍, 趙崇軍, 錢秀珍, 馬新勝 申請人:上海微納科技有限公司