番荔枝內酯高效部位藥-愛諾寧及其制備方法和用途的制作方法

專利名稱：：番荔枝內酯高效部位藥-愛諾寧及其制備方法和用途的制作方法
技術領域：
：本發明涉及一種由熱帶植物番蕩枝(AnnonasquamosaL.)種子制備的番荔枝內酉旨(Annonaceousacetogenins)高效咅卩位藥-愛諾寧(An顏ins)，本發明還涉及一種番荔枝內酯高效部位藥-愛諾寧的制備方法及其醫藥用途。技術背景番荔枝內酯(Annonaceousacetogenins)是一類具有a、卩-不飽和y-內酯環和1-3個四氫呋喃環結構的類似長鏈脂肪酸的天然化合物，目前僅在番荔枝科中幾個屬植物中被發現。自80年代中期以來，發現了約400個此類化合物，由于他們有抗腫瘤、殺蟲、抑制HIV、SIV等多種強烈的生物活性而日益為人們所關注。由于結構、性質相似，且數目眾多的番荔枝內酯類化合物往往共存于一植物中，其生物活性的高低、植物中的含量、分離純化的難度都有很大差異，以及大多數植物的資源并不豐富等原因，真正可被利用的只有布拉他辛(bullatacin)、史可莫辛(squamocin)。國內曾有人提出用總內酯(CN1224016A)、部位藥(CN1370530)、番荔辛(即史可莫辛，CN1544423),布拉他辛(CN1460473)及提取物(CN1739586)制備抗腫瘤藥、殺蟲劑及抗HIV感染/艾滋病藥物，但都存在或是成分太復雜、包含大量低活性成份，難以控制藥物的質量和藥效；或是選用史可莫辛/布拉他辛中之一，浪費了高含量高生物活性的另一成份；或者是分離方法復雜繁瑣；或使用如氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、正己烷等有損人體健康、污染環境、損害臭氧層、價格高昂致使成本顯著增加的有機溶劑；或使用大比例硅膠作載體，層析分離的周期較長，難以實現規模化生產等缺點。此外，由于生物活性極其強烈，藥物的制劑、用藥安全性等問題更是目前國內外的研究難點。
發明內容本發明的一個目的是提供一種番荔枝內酯高效部位藥-愛諾寧，其主要成分是由布拉他辛和史可莫辛所組成，這類成分占其總質量數90%或以上。本發明的另一個目的提供一種方法簡單、對環境污染小、可以實現規模化生產的番荔枝內酯高效部位藥-愛諾寧的制備方法。本發明還有一個目的是提供番蒸枝內酯高效部位藥-愛諾寧的用途，具體地說，在制備用于治療惡性腫瘤、HIV感染/艾滋病及風濕、類風濕、銀屑病、紅斑狼瘡疾病的藥物中的用途。本發明提供的一種番荔枝內酯高效部位藥-愛諾寧，其主要成分是由一類具有oc、P-不飽和Y-內酯結構的雙四氫呋喃環型番蕩枝內酯化合物-布拉他辛和史可莫辛所組成，這類成分占其總質量數90%或以上，其通過以下制備方法制備獲得番荔枝種子粉碎后的粗粉用有機溶劑或有機溶劑與水的混合物滲濾，滲濾液回收除去有機溶劑，殘余水液用石油醚萃取得到番荔枝種子的粗內酯，再用酒精浸泡，除去上層油脂，酒精蒸干得到番荔枝種子的總內酯，番茶枝種子總內酯經硅膠柱層析分離，薄層層析指導合并所需餾份得到番荔枝內酯有效部位，番荔枝內酯有效部位再經反相填料柱層析，收集所需餾分，濃縮、干燥，得到番荔枝內酯高效部位藥-愛諾寧。本發明提供的荔枝內酯高效部位藥-愛諾寧的制備方法是首先將番荔枝種子粉碎后的粗粉用有機溶劑或有機溶劑與水的混合物滲濾，滲濾液回收除去有機溶劑，殘余水液用石油醚萃取得到番荔枝種子的粗內酯，再用酒精浸泡，除去上層油脂，酒精蒸干得到番荔枝種子的總內酯；然后將番荔枝種子總內酯經硅膠柱層析分離，薄層層析指導合并所需餾份得到番荔枝內酯有效部位；最后將番荔枝內酯有效部位再經反相填料柱層析，收集所需餾分，濃縮、干燥，得到番荔枝內酯高效部位藥-愛諾寧。本發明提供的制備方法工序簡單，采用最常用且廉價的、對環境污染小以及對人體健康較為安全的有機溶劑作柱層析洗脫劑；層析柱使用載體硅膠與樣品比例與現有技術相比更小，使得整個制備方法簡單易實施，可以實現規模化生產。具體的方案包括1)番荔枝種子的粗粉用9098%酒精滲濾提取，濃縮回收除去其中的溶劑，得到粘稠狀浸膏；粘稠狀浸膏冷卻后加入石油醚，放置，除去棕黑色塊狀沉淀物，加入水以除去其中的皂甙類成分，回收石油醚，得到番荔枝種子的粗內酯；番荔枝種子粗內酯用3085%酒精浸泡，除去上層油脂，酒精層蒸干即得到番荔枝種子的總內酯。或，番荔枝種子的粗粉用丙酮和水的混合液滲濾提取，其中丙酮和水的體積比為50:5090:10，濃縮回收除去其中的溶劑，放置，除去析出的棕黑色的塊狀沉淀物，加入石油醚，回收石油醚層，得到番荔枝種子粗內酯；番荔枝種子粗內酯用30-85%的酒精浸泡，除去上層油脂，酒精層蒸干即得到番荔枝種子的總內酯。2)番荔枝種子的總內酯經100300目硅膠柱層析，其中番荔枝種子總內酯與硅膠的質量比為1:41:5，用石油醚-丙酮為洗脫劑進行洗脫，其中石油醚與丙酮的體積比為95:570:30，薄層層析檢査、指導收集所需餾分，回收溶劑，干燥即得到番荔枝內酯有效部位。3)番荔枝內酯有效部位用粒徑為1080um的d8反相填料柱或Q反相填料柱加壓層析分離，用甲醇-水為洗脫劑進行洗脫或梯度洗脫，用TLC、UV或HPLC指導收集所需餾份，其中所用的加壓設備的加壓范圍為050bar，甲醇與水的體積比為80:2093:7，洗脫劑流速為1~250ml/min，UV檢測的波長為210280nm，最終得到番荔枝內酯高效部位藥--愛諾寧。本發明提出了番荔枝內酯高效部位藥-愛諾寧在制備用于治療惡性腫瘤、HIV感染/艾滋病及風濕、類風濕、銀屑病、紅斑狼瘡自身免疫性疾病的藥物中的用途。愛諾寧與藥學上可接受的載體制成片劑、膠囊劑、噴霧劑、軟膏劑、凝膠劑、注射劑、含藥脂肪乳劑、微囊劑、栓劑或透皮控釋貼劑。本發明提出的番荔枝內酯高效部位藥-愛諾寧的藥用組合物可以以下面的任意方式施用口服，噴霧，直腸用藥，陰道用藥，局部用藥，靜脈點滴，肌肉注射，腹膜內注射，透皮給藥，其中優選透皮給藥、腹膜內注射、口服或靜脈點滴用藥。本發明提出的番荔枝內酯高效部位藥-愛諾寧的透皮控釋貼劑，藥物愛諾寧有較高的脂溶性，透皮吸收后經皮下毛細血管、淋巴管進入體液循環，無需口服或靜脈點滴注射，避免了口服給藥可能發生的肝臟首過效應和藥物在胃腸道降解或肌肉注射、點滴給藥的繁瑣，具有無創傷性給藥、使用方便、緩釋藥物、維持血藥濃度持續時間長等優點。所述貼劑由以下三部分組成1、背襯層；2、含藥的膠粘骨架層；3、防粘層。背襯層包括但不限于無紡布、彈力布、普通布、纟氏、聚氯乙烯膜、聚乙烯膜、聚丙烯膜、多層復合鋁箔。防粘層可以包括但不限于硅化紙、聚乙烯膜、聚四氟乙烯膜、聚丙烯膜、聚苯乙烯膜、聚碳酸酯膜，也可以使用表面用石蠟或甲基硅油處理過的光滑厚紙。含藥的膠粘層的聚合物骨架可以是聚異丁烯橡膠、硅橡膠、丙烯酸酯、聚丙烯酸樹脂，骨架層中可加入增塑劑，增塑劑包括但不限于礦物油、葵二酸二乙酯、鄰苯二甲酸乙二醇酯，琥珀酸或是他們的混合物。骨架層可以加入增粘劑，增粘劑包括但不限于多元有機酸、萜烯樹脂、改性松香，或他們的混合物。骨架層還可以加入藥物透皮吸收促進劑，藥物透皮吸收促進劑包括但不限于油酸、月桂氮卓酮、桉葉油、a-松油醇、薄荷油，乙醇、丙二醇，或他們的混合物。聚合物骨架層藥物的含量范圍為0.1%-20%。當口服用藥時，本發明藥物愛諾寧可制成任意口服可接受的制劑形式，包括但不限于片劑、膠囊。其中，片劑一般使用的載體包括乳糖和玉米淀粉，也可加入潤滑劑如硬脂酸鎂。膠囊劑一般使用的稀釋劑包括乳糖和干燥玉米淀粉。當直腸用藥時，本發明藥物愛諾寧一般可制成栓劑，其通過藥物與一種適宜的非刺激性賦形劑混合而制得。該賦形劑室溫下呈固態，在直腸中熔化釋放出藥物。賦形劑包括可可脂、蜂蠟、聚乙二醇和他們與羊毛脂的混合物。當皮膚局部用藥時，本發明藥物愛諾寧可制成適當的軟膏或霜劑的形式，藥物溶解于一種或多種載體中。軟膏劑可使用的載體包括但不限于礦物油，凡士林，丙二醇，聚氧化乙烯、聚氧化丙烯乳化蠟；霜劑可使用的載體包括但不限于礦物油，脫水山梨糖醇單硬脂酸酯，吐溫-60，吐溫-80，十六垸酯蠟和水。本發明藥物愛諾寧還可以注射劑形式用藥，包括含藥脂肪乳劑。脂肪乳劑的載體可以是含10%或20%大豆油、卵磷脂、甘油和水乳化制得的脂肪乳。本發明藥物愛諾寧使用劑量和使用方法取決于諸多因素，包括患者的年齡、性別、體重、健康狀況、病種及嚴重程度。j，W婉齊lJft/l^a2-200ug/kg/天。具體實施方式以下列舉具體實施例對本發明進行說明。需要指出的是，實施例只用于對本發明作進一步說明，不代表本發明的保護范圍，其他人根據本發明的提示做出的非本質的修改和調整，仍屬于本發明的保護范圍。實施例1番荔枝種子總內酯的制備取事先洗凈、晾干的番荔枝種子4kg，粉碎成粗粉，置于預先加入95%-98%酒精6000ml的滲濾器中，浸泡，時間可根據外界氣溫變化調整。通常為48小時后開始放出滲濾液，收集、合并滲濾液約12000ml。減壓回收溶劑至殘余物中無酒精，稍冷，加入石油醚1000ml溶解、放置，除去析出的棕黑色塊狀沉淀物；加入水500ml以除去其中少量的皂甙。石油醚層濃縮、回收，得到番荔枝種子的粗內酯，粗內酯中含有大量無內酯環和四氫呋喃環結構，生物活性很低的番荔枝內酯的生源前體化合物。粗內酯加入85%酒精1000ml溶解、提取，放出酒精層后，上層油脂層繼續用85%酒精lOOOml提取，共三次。合并酒精層，回收至無酒精為止，放置、干燥，得到番荔枝種子的總內酯150g。實施例2番荔枝種子總內酯的制備洗凈、晾干的番荔枝種子4kg，粉碎成粗粉，置于預先加入丙酮-水(V/V，90:10)混合液6000ml的滲濾器中，浸泡，時間可根據氣溫變化調整。通常48小時后開始放出滲濾液，收集、合并滲濾液約12000ml，減壓回收溶劑至無丙酮，放置，除去析出的黑色塊狀物，加入石油醚1000ml，除去水層后，減壓回收至無石油醚蒸出為止，得到番荔枝種子的粗內酯。粗內酯用85%酒精1000ml溶解、提取，共三次，合并酒精層，回收至無酒精為止，放置、干燥，得到番荔枝種子的總內酯148g。實施例3番荔枝內酯有效部位的制備番荔枝種子的總內酯中，仍然含有大量活性低的單四氫呋喃型的番荔枝內酯及番荔枝內酯在植物體內的次生降解產物，必需除去。由實施例1的4kg原料所得到的總內酯150g，與200-300目硅膠225g充分拌和、晾干；另取200-300目硅膠375g干法裝柱，拌樣硅膠置于柱頂。順次用丙酮-石油醚V/V(ml數)的混合液5:95(5000ml)，7:93(10000ml)，10:90(10000ml)'12:88(10000ml)，15:85(10000ml)，20:80(5000ml)，30:70(5000ml)洗脫，每份接收1000ml。用TCL指導合并含有布拉他辛、史可莫辛的餾份(第20-37份)，得到番荔枝內酯有效部位40.5g。實施例4番荔枝內酯有效部位的制備由實施例2的4kg原料所得到的總內酯148g，與200-300目硅膠222g拌和、晾干；另取200-300目硅膠370g干法裝柱，拌樣硅膠置于柱頂。順次用丙酮-石油醚V/V(ml數)混合液5:95(5000ml)，7:93(10000ml)，10:90(10000ml),12:88(10000ml),15:85(10000ml)，20:80(5000ml),30:70(5000ml)洗脫，每份接收1000ml。用TCL指導合并含有布拉他辛、史可莫辛的餾份(第21-39份)，得到番荔枝內酯有效部位41.7g。實施例5番荔枝內酯高效部位藥-愛諾寧的制備所得到的番荔枝內酯有效部位仍然含有一些單四氫呋喃環型及一些由不飽和內酯環異構化為飽和內酯環的雙四氫呋喃環型番荔枝內酯。他們的生物活性相對較低。由實施例3得到的番荔枝內酯有效部位40.5g，取15g用甲醇-水(83:17)300ml溶解，用U填料柱加壓分離，Cw填料柱內徑X長度為70X920咖，C,s填料的粒徑為40-63um，用甲醇-水(83:17)洗脫，UV檢測(波長220nm)指導收集所需餾分，減壓蒸除溶劑，干燥，得到番荔枝內酯高效部位藥-愛諾寧8.2g，高生物活性成分布拉他辛和史可莫辛的含量92.33%。實施例6番荔枝內酯高效部位藥-愛諾寧的制備由實施例4得到的番荔枝內酯有效部位41.7g，取15g用甲醇-水(83:17)300ml溶解，ds填料柱加壓分離，C1S填料柱內徑X長度為70X920mm，C,s填料的粒徑為40-63um，用甲醇-水(83:17)洗脫，UV檢測(波長220nm)指導收集所需餾份，減壓蒸除溶劑，干燥，得到番荔枝內酯高效部位藥-愛諾寧8.25g,布拉他辛和史可莫辛的含量90.52%。實施例7本發明番荔枝內酯高效部位藥-愛諾寧抗腫瘤藥理試驗(1)愛諾寧對人癌細胞株的體外抑制作用愛諾寧體外對人肺癌細胞株(A549)、結腸癌細胞株(HT-29)、乳腺癌細胞株(MCF-7)、肝癌細胞株(Bel)進行了抑制作用試驗，結果如下表一對4種人癌細胞株的體外抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>結果表明，本發明的番荔枝內酯高效部位藥-愛諾寧對人癌細胞株的體外抑制作用比陽性對照藥阿霉素強。(2)小鼠急性毒性試驗小鼠急性毒性試驗，KM品系小鼠，以Bliss法計算LD5Q和95%可信限為肌肉注射LD50=0.5832(0.5134-0.6753)mg/kg腹腔注射LD50=0,295(0.253-0.368)mg/kg(3)愛諾寧對小鼠移植性腫瘤的抑制作用愛諾寧(乳劑)采用腹腔注射(ip)給藥，以小鼠肝癌(H印S)和小鼠肉瘤(S-180)兩種移植性腫瘤進行體內抑制腫瘤試驗。愛諾寧設3個劑量組，對照為脂肪乳，陽性藥物對照為環磷酰胺(CTX)，給藥時間10天，結果見表2和3。各劑量組未見死亡，也未見消瘦、腹瀉、松毛等毒性表現。表二愛諾寧腹腔注射對小鼠移植性肝癌H印S的抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>表三愛諾寧腹腔注射對移植性小鼠肉瘤S-180的抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>愛諾寧抗SIV細胞培養試驗愛諾寧用無水乙醇配制成lug/ml的原藥液，用注射用水稀釋成10Aig/ml藥液，再用培養液作系列稀釋，CEMxl74細胞共同培養3-5天，選取對細胞基本無毒的濃度進行試驗。正式試驗藥物系列稀釋，與SIVmac和CEMxl74細胞共同培養3天換同等稀釋度藥物培養液1次，6天記錄細胞病變(CPE)，培養上清作系列病毒滴定，細胞涂片作熒光抗原細胞計數。同樣作AZT陽性對照藥(2uM)和SIVmac病毒對照。結果判定標準以熒光陽性細胞抑制率、病毒產量下降1og2的倍數(均與SIVmac比較)和細胞病變程度互相參考判定。病毒對照空熒光細胞數一加藥孔熒光細胞數抗原細胞抑制率(％)=------------------------........------------------------------X100%病毒對照孔熒光細胞數表四愛諾寧抗siv細胞培養試驗結果<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>愛諾寧在藥物濃度只有10—5ug/ml時對抗原細胞的抑制率與AZT2uM時相當。顯示其抑制作用遠遠超過AZT。實施例9愛諾寧抗急性SIV感染猴體內試驗藥物含愛諾寧脂肪乳(5ug/ml)。空白對照10%脂肪乳。陽性對照AZT。恒河猴12只，5-6kg/只，4-8歲外觀健康，體檢無淺表淋巴結腫大，血清學檢測S1V、SRV和STLV病毒抗體陰性，結核菌陰性、痢疾菌陰性。設愛諾寧低、高劑量組、AZT組和病毒對照組，每組各3只。用SlVmac251病毒液5MID100(5個100%猴感染劑量)靜脈注射感染。治療試驗猴感染l小時后給藥，低劑量組3ug/只/次，高劑量組9ug/只/次，腹腔注射，日2次，連用8周。AZT組200mg/只/天，口服，連用4周。停藥后各組觀察至105天。試驗猴的血漿病毒和全血病毒滴度檢查結果見表五和六。表五各組猴感染(治療)后血漿病毒滴度(TCID/ml)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>表六各組猴感染治療后全血病毒滴度(TCID/ml)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>由表五、六可以看出愛諾寧治療SIV感染猴，無論是血漿病毒滴度還是全血病毒滴度的下降都優于陽性對照藥AZT，表明愛諾寧在猴體內有確切治療作用。實施例10愛諾寧的含藥脂肪乳劑的制備(1)供體外藥效學及小鼠急性毒性試驗的含藥脂肪乳的制備配方A.愛諾寧500mgB.注射用大豆油100gC.卵磷酯25gD.甘油20gE.注射用純凈水加至1000ml上述配方中A加入B、C中熱溶解，再加入D和E制備初乳后用乳勻機多級乳化，得到含愛諾寧的脂肪乳劑，每ml含愛諾寧0.5mg。(2)供猴體內試驗及人治療用的含藥脂肪乳劑的制備配方A.愛諾寧5mgB.大豆油100gC.卵磷酯25gD.甘油20gE.注射用純凈水加至1000ml上述配方中A加入B、C中熱溶解，再加入D和E制備初乳后用乳勻機多級乳化，得到含愛諾寧的脂肪乳，每ml含愛諾寧5ug.實施例11愛諾寧緩釋透皮貼劑的制備(1)以聚丙烯酸樹酯壓敏膠為骨架的愛諾寧貼劑的制法取聚丙烯酸樹脂II1000重量份，溶于2000重量份的乙醇中，加入檸檬酸三乙酯200重量份，癸二酸二乙(丁)酯120重量份，丙二醇60重量份，愛諾寧8重量份，使溶解分散均勻，涂布，60"C下20分鐘揮發除去溶劑，復合背襯層、防粘層，根據治療病種所需劑量要求切割成合適大小的貼劑。(2)以丙烯酸酯壓敏膠為骨架的愛諾寧貼劑的制法取取固體含量為30%的丙烯酸酯壓敏膠(乙酸乙酯為溶劑)1000重量份，加入愛諾寧2重量份，癸二酸二乙(丁)酯重量30份，改性松香20重量份，丙二醇14重量份，桉葉油IO重量份，使溶解分散均勻，涂布，60UC下2()分鐘揮發除去溶劑，復合背襯層、防粘層，根據劑量要求切割成合適大小的貼劑。根據實施例IO制備的愛諾寧的含藥脂肪乳，進行了抗HIV/艾滋病的初步臨床試驗觀察，患者均經兩次血清HIV初篩陽性，最終經WB確認試驗證實為HIV陽性感染者，病例數3人，均為經血液傳播感染。用藥觀察90天，劑量2.5支/人/次，10ug/2ml/支，日2次靜脈點滴。治療期連續用藥6天，休息1天。治療前2人有反復發熱，l人有二月反復腹瀉，膿血便，另l人也有腹瀉。實際上己有相關艾滋病綜合征出現。治療10多天后發熱、腹瀉、膿血便均消失。治療90天一例病毒載量有顯著下降，另一例CD4T細胞數顯著上升(比治療前升140個/ul,升幅達70。/。)。治療期間無任何不適，三人的血、尿常規等檢查均正常，食欲、精神狀態良好，有2人的體重有明顯增加。此外，2人多年的風濕病、腰腿痛，在用藥10多天后消失。根據實施例11制備的愛諾寧貼劑，進行了抗HIV感染/艾滋病的初步臨床試驗觀察，病例數30人，均為經確認試驗證實的HIV感染者，全部為經靜脈血液感染的特殊人群，患者中有無癥狀期、進展期及艾滋病相關綜合征(ARC)期。對這類特殊人群的治療，患者的依從性是最大的難題，但在用愛諾寧治療中，除1例違法被拘，2例違反規定除名外，其余27人都能夠始終配合治療至試驗終止。試驗治療150天，每日用藥2次，每次4-6貼，治療期間無一人因不良反應中斷治療，用藥劑量相當安全的。治療前有發熱一個月以上的12人，用藥l-2周后恢復正常；水樣腹瀉6人，治療10余天后停止；盜汗9人，用藥10余天后減少或消失；多年肌肉疼痛、全身性疼痛9人，用藥1-3周內癥狀減輕或消失；皮疹3人，用藥半月后消退；頸、腹股溝淋巴結腫大2人，30-50天消失；風濕關節痛5人，用藥一月內疼痛消失，活動自如。此外，記憶力下降，頭痛，出現早期認知障礙4人，用藥后有所改善；進行期尋常型銀屑病l人，全身皮損嚴重，需每日注射藥物否則全身癢痛難熬，用藥后癢止，10天后皮損開始逐漸消退。患者中原有的乏力、厭食、眠差、全身不適感也都有顯著好轉。治療60天患者體重增加2kg以上者17人，其中增加4kg2人，5kg2人，8kgl人，11.5kgl人。部分患者CD4T細胞數顯著上升，其中升幅達20%以上的6人，最高達249%(升831個/ul)。HIV感染/艾滋病是免疫功能進行性受損害的疾病，隨著病情發展，CD4T細胞數呈下降趨勢，如果疾病沒用得到控制、HIV的復制沒有被抑制，患者的CD4T細胞數是不可能出現大幅度增加的。根據實施例11制備的愛諾寧貼劑，進行了抗惡性腫瘤的初歩臨床試驗觀察，患者為經細胞學確診的惡性腫瘤患者，其中非小細胞肺癌(NSCLC)25例，小細胞肺癌1例，鼻咽癌4例，腦膠質細胞瘤l例，惡性淋巴瘤l例，皮膚癌1例，共33例。這些患者大多數都是經三級醫院正規放、化療治療無效后，抱著試一試的心理參與試驗的，其中相當多例有遠處(腦、淋巴、胸膜、脊椎、肋骨、肝等)甚至全身性廣泛轉移，有的還出現胸、腹水，已到了終末期。治療一療程為40天，日用藥1-2次，每次4貼。治療過程中未見不良反應。NSCLC25例中，閂用藥2次，每次4貼的有16例，治療后因未留聯系方法而無法追蹤的6例，CT或X-光片檢查肺原發病灶腫瘤及淋巴轉移完全消失的5例，用藥10天死亡1例(其轉移淋巴結有所縮小)，其余4例都有不同程度的好轉，如腫瘤縮小50%以上，放射性肺炎、放射性纖維化得到控制和減輕，胸水減少，縱隔淋巴結腫大消失，胸痛減輕或消失，呼吸改善等。日用藥1次，每次4貼的患者9例，治療前原肺葉或段不張(因此影像學無法確切給出腫瘤大小)2例，治療后肺葉或段部分復張，表明病灶腫瘤有顯著縮小；1例腫瘤縮小30%，原有中等量胸水完全被吸收；l例原腫瘤4X5cm并有肺段不張，治療后腫瘤破碎不成形，肺段復張；1例肺癌術后發現縱隔淋巴結轉移及顱內多發轉移，治療后淋巴結縮小為原1/4(未作腦CT檢查)；l例咳嗽、納差、痰血，左下肺不張，纖維化，治療后，咳減少，痰血消失，肺復張，纖維化減輕；l例被認為已屬時日無多、全身轉移、疼痛不已臥床不起的患者，在增加劑量后也顯著好轉，可以活動，疼痛基本無礙生活。其余2例也有好轉。此外，還結合用愛諾寧的片劑治療食管癌8例，賁門癌1例，治愈(腫瘤消失)4例，好轉(腫瘤縮小，阻塞食道開通)2例，無效3例(食道阻塞太長，患者無法進食時間太久)。其余病種的病例太少，不作介紹。布拉他辛、史可莫辛等番荔枝內酯類化合物的作用機制是阻斷線粒體呼吸鏈的電子轉移，從而抑制細胞內的ATP的合成。根據這一機理，申請人在九十年代初提出番蒸枝內酯類化合物阻斷腫瘤細胞/被HIV感染的細胞內的ATP的合成，隨著ATP不斷被消耗，細胞內的H+不斷累積，細胞的Phi下降，使細胞內依賴于H+、C,濃度的核酸內切酶、蛋白酶被激活，從而誘導腫瘤細胞/被HIV感染的細胞走向凋亡。申請人的這一設想也被后來的試驗所證實(《癌癥》2000年19巻12期P1098-1100)。眾所周知，在細胞凋亡啟動后，細胞的核酸內切酶、蛋白酶被激活，并將細胞和病毒的DNA、RNA、蛋白質一一降解，產生比原有DNA、RNA數目多幾千倍的DNA、RNA、蛋白質的片斷，結果腫瘤不斷縮小、消失。細胞凋亡不同于細胞壞死死亡，不會產生毒素，患者不會出現腫瘤熱等反應。根據何大一教授等提出的HIV感染CD4T細胞數動力學，HIV進入靶細胞后復制子病毒，約需要1-1.5天的時間才會有新一代病毒出芽形成具有感染能力的子代病毒，而沒有經過獲取細胞的胞膜出芽的HIV-腦A、蛋白質和酶，對細胞沒有感染能力。由布拉他辛、史可莫辛誘導細胞凋亡試驗，藥物作用后的6小時在瓊脂凝膠電泳中就可以觀察到DNA降解形成的典型的梯形帶。HIV進入靶細胞后需要1-1.5天時間才開始釋放子代病毒，這個時間極為寶貴，他使藥物有充分的時間誘導被HIV感染的細胞凋亡和清除HIV-RNA。愛諾寧使HIV的DNA、RNA和蛋白質被切割成數目眾多的碎片，這些碎片都可以被目前檢測HIV的RNA和HIV的蛋白質(如P24)的方法檢測出來，即這些沒有感染能力的碎片都會被當成HIV粒子來對待。因此，沿用目前的檢測方法可能不適用于這類誘導被感染細胞凋亡、清除體內病毒的藥物。從前述愛諾寧的含藥脂肪乳及愛諾寧貼劑治療HIV感染/艾滋病的初步臨床試驗觀察可以看出，愛諾寧同時具有抗病毒療法的藥物可以降低HIV病毒載量，又具有中醫藥治療HIV感染/艾滋病的長處一改善患者的臨床癥狀和生存質量。此外，愛諾寧與目前中、西醫藥療法治療HIV感染/艾滋病相比較，還具有以下優勢1，愛諾寧不參與DNA、RNA、蛋白質的轉錄、合成，不會導致組織細胞DNA、RNA、蛋白質結構的變異或改變。2，藥物的靶點不是病毒粒子或其酶系，因此病毒無法通過變異來逃避藥物清除或對抗藥物的作用；藥物對HIV的不同亞型、變異毒株、抗藥性毒株都將有效。3，藥物進入體內的劑量是微克級，在猴體內、人體內的試驗未見任何不良反應，療效卓著。4，藥物具有高脂溶性，很容易通過淋巴循環進入淋巴結等淋巴器官，有利于清除隱匿在淋巴器官中的HIV。5，愛諾寧適用于早期、無癥狀HIV感染及已出現艾滋病相關綜合征的患者，可以讓大多數的患者得到及時治療。6，特別是愛腦寧的貼劑，無須口服、注射給藥，患者完全可以在家治療，可以節約大量的人力，物力。7，患者的依從性高，特別適合艾滋兒童治療。8、藥物誘導被HIV感染的細胞凋亡，在凋亡過程中，已整合到細胞染色體內的HIV-DNA及RNA都被核酸內切酶降解，清除，因此，愛諾寧有可能清除患者體內的HIV，治愈患者。1權利要求1.一種番荔枝內酯高效部位藥-愛諾寧，其特征是其主要成分是由一類具有α、β-不飽和γ-內酯結構的雙四氫呋喃環型番荔枝內酯化合物-布拉他辛和史可莫辛所組成，這類成分占其總質量數90％或以上，其通過以下制備方法制備獲得番荔枝種子粉碎后的粗粉用有機溶劑或有機溶劑與水的混合物滲濾，滲濾液回收除去有機溶劑，殘余水液用石油醚萃取得到番荔枝種子的粗內酯，再用酒精浸泡，除去上層油脂，酒精蒸干得到番荔枝種子的總內酯，番荔枝種子總內酯經硅膠柱層析分離，薄層層析指導合并所需餾份得到番荔枝內酯有效部位，番荔枝內酯有效部位再經反相填料柱層析，收集所需餾分，濃縮、干燥，得到番荔枝內酯高效部位藥-愛諾寧。2.權利要求1所述的番荔枝內酯高效部位藥-愛諾寧的制備方法，其特征是首先將番荔枝種子粉碎后的粗粉用有機溶劑或有機溶劑與水的混合物滲濾，滲濾液回收除去有機溶劑，殘余水液用石油醚萃取得到番荔枝種子的粗內酯，再用酒精浸泡，除去上層油脂，酒精蒸干得到番荔枝種子的總內酯；然后將番荔枝種子總內酯經硅膠柱層析分離，薄層層析指導合并所需餾份得到番荔枝內酯有效部位；最后將番荔枝內酯有效部位再經反相填料柱層析，收集所需餾分，濃縮、干燥，得到番荔枝內酯高效部位藥-愛諾寧。3.根據權利要求2所述的番荔枝內酯高效部位藥-愛諾寧的制備方法，其特征是番荔枝種子的粗粉用卯~98%酒精滲濾提取，濃縮回收除去其中的溶劑，得到粘稠狀浸膏；粘稠狀浸膏冷卻后加入石油醚，放置，除去棕黑色塊狀沉淀物，加入水以除去其中的皂甙類成分，回收石油醚，得到番荔枝種子的粗內酯；番荔枝種子粗內酯用30~85%酒精浸泡，除去上層油脂，酒精層蒸干即得到番荔枝種子的總內酯。4.根據權利要求2所述的番荔枝內酯高效部位藥-愛諾寧的制備方法，其特征是番荔枝種子的粗粉用丙酮和水的混合液滲濾提取，其中丙酮和水的體積比為50:50-90:10，濃縮回收除去其中的溶劑，放置，除去析出的棕黑色的塊狀沉淀物，加入石油醚，回收石油醚層，得到番荔枝種子粗內酯；番荔枝種子粗內酯用30-85%的酒精浸泡，除去上層油脂，酒精層蒸干即得到番荔枝種子的總內酯。5.根據權利要求2所述的番荔枝內酯高效部位藥-愛諾寧的制備方法，其特征是番蒸枝種子的總內酯經100300目硅膠柱層析，其中番荔枝種子總內酯與硅膠的質量比為1:41:5，用石油醚-丙酮為洗脫劑進行洗脫，其中石油醚與丙酮的體積比為95:570:30，薄層層析檢查、指導收集所需餾分，回收溶劑，干燥即得到番荔枝內酯有效部位。6.根據權利要求2所述的番荔枝內酯高效部位藥-愛諾寧的制備方法，其特征是番荔枝內酯有效部位用ds反相填料柱或C8反相填料柱加壓層析分離，用甲醇-水為洗脫劑進行洗脫或梯度洗脫，采用TLC、UV或HPLC指導收集所需餾份，最終得到番荔枝內酯高效部位藥--愛諾寧。7.根據權利要求6所述的番荔枝內酯高效部位藥-愛諾寧的制備方法，其特征是d8反相填料柱或Q反相填料的粒徑為1080um，所用的加壓設備的加壓范圍為050bar，甲醇與水的體積比為80:2093:7，洗脫劑流速為1250ml/min，UV檢測的波長為210280nm。8.權利要求1所述的番荔枝內酯高效部位藥--愛諾寧在制備用于治療惡性腫瘤、HIV感染/艾滋病及風濕、類風濕、銀屑病、紅斑狼瘡自身免疫性疾病的藥物中的用途。9.根據權利要求8所述的番荔枝內酯高效部位藥一愛諾寧的用途，其特征是愛諾寧與藥學上可接受的載體制成片劑、膠囊劑、噴霧劑、軟膏劑、凝膠劑、注射劑、含藥脂肪乳劑、微囊劑、栓劑或透皮控釋貼劑，用于口服、注射或外用。全文摘要本發明公開了一種番荔枝內酯高效部位藥-愛諾寧及其制備方法和用途，其主要成分是由一類具有α、β-不飽和γ-內酯結構的雙四氫呋喃環型番荔枝內酯化合物-布拉他辛和史可莫辛所組成，這類成分占其總質量數90％或以上。本發明的制備方法對環境污染小，簡單易實施，可以實現規模化生產。本發明提出番荔枝內酯高效部位藥-愛諾寧可用于制備治療惡性腫瘤、HIV感染/艾滋病及風濕、類風濕、銀屑病、紅斑狼瘡自身免疫性疾病的藥物。在治療惡性腫瘤、HIV感染/艾滋病的初步臨床試驗中，愛諾寧顯示出許多目前中、西醫藥療法都難以與之比擬的優勢。文檔編號A61K31/365GK101317841SQ20081002912公開日2008年12月10日申請日期2008年6月30日優先權日2008年6月30日發明者李遠桂,楊仁洲申請人:楊芃;楊仁洲;李遠桂