專利名稱：：氯硝柳胺或其藥學(xué)上可接受的鹽的新應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及化合物氯硝柳胺或其藥學(xué)上可接受的鹽的新應(yīng)用。技術(shù)背景腫瘤是目前人類健康和生命的頭號殺手，其發(fā)病率僅次于心血管類疾病。并且隨著環(huán)境污染或其它因素的影響，惡性腫瘤的發(fā)病率呈快速上升趨勢。根據(jù)世界衛(wèi)生組織2003年公布的數(shù)據(jù)，2000年全球共有惡性腫瘤患者1000萬，因惡性腫瘤死亡者高達(dá)620萬，占總死亡人教的12%25%。預(yù)期到2020年，全球每年新發(fā)病例將達(dá)1500萬。近年來，雖有一些新型的酪氨酸蛋白抑制劑等#￡向新藥的開發(fā)上市，但仍遠(yuǎn)遠(yuǎn)無法滿足日益增長的臨床癌癥病人的需要?？狗瘟鏊幬镅邪l(fā)也仍是目前藥物研發(fā)界的重要研究方向。近年來，隨著新藥開發(fā)成本的快速上升，而藥物開發(fā)成功率的逐步下滑，大部分藥物專利到期，后備新藥難以跟進(jìn)的情況下，制藥公司紛紛在現(xiàn)有藥物基礎(chǔ)上開發(fā)新的專利保護(hù)藥物。"老藥新用"已成為國際藥物研發(fā)的一個(gè)熱點(diǎn)。針對現(xiàn)有藥物進(jìn)行新藥開發(fā)，最為直接的方法是通過觀察老藥在使用過程或臨床研究過程中出現(xiàn)新的治療效果(或有利副作用的進(jìn)一步利用)，進(jìn)而增加或改進(jìn)藥物的治療范圍，這種策略稱為"重新定位法(Reposition)"。如具有一百多年歷史的藥物阿司匹林，作為消炎止痛的藥物進(jìn)入市場，在使用的過程中發(fā)現(xiàn)，該藥能夠降低體內(nèi)前列腺素水平，阻止血小板聚合，從而具有預(yù)防中風(fēng)和心臟病的功用；小劑量的阿司匹林被用來預(yù)防老年人腦血栓；阿司匹林能促進(jìn)胰島素分泌，并增加組織對葡萄糖的利用，從而使血糖下降。他汀類降血脂藥物不僅能夠抑制膽固醇的合成，而且可以增加骨密度，預(yù)防骨質(zhì)疏松；補(bǔ)充維生素A和鋅能夠增強(qiáng)抗結(jié)核藥物療效；維生素B12能增強(qiáng)抗癌藥效果。一藥多用的情況十分普遍，據(jù)估計(jì)每種藥物可以用于3種以上的臨床適應(yīng)癥，阿司匹林等多種用途的發(fā)現(xiàn)是"老藥新用"的冰山一角，老藥新用具有較大的研發(fā)空間。與傳統(tǒng)意義上的新藥開發(fā)相比，通過"老藥新用"開發(fā)新藥具有以下的優(yōu)勢1-藥物的安全性可靠已經(jīng)上市的近l萬種藥物大部分進(jìn)行過IV期臨床實(shí)驗(yàn)，上市后經(jīng)幾百萬人使用，它們的安全性或出現(xiàn)毒副作用的機(jī)制比較清楚，現(xiàn)有的藥物制劑和釋放系統(tǒng)也可直接應(yīng)用于后續(xù)發(fā)現(xiàn)的新藥物用途。2.節(jié)約研究經(jīng)費(fèi)一旦發(fā)現(xiàn)老藥的新藥理作用，由于其藥代、毒性和生物利用度等性質(zhì)比較明確，可以直接進(jìn)入n-m期臨床實(shí)驗(yàn)，大部分藥物不用做W期臨床實(shí)驗(yàn)。因此，研發(fā)經(jīng)費(fèi)大大降低。3.知識產(chǎn)權(quán)空間廣闊在上市的藥物中絕大多數(shù)藥物的專利已經(jīng)過期。因此，一旦發(fā)現(xiàn)老藥的新用途，可以獲得自主知識產(chǎn)權(quán)的藥物進(jìn)入市場，產(chǎn)生廣泛的經(jīng)濟(jì)效益。氯硝柳胺(Niclosamide)，又名滅絳靈、育末生，最早于1959年由德國施勞夫斯特等人合成成功，由德國拜耳公司進(jìn)行工業(yè)化生產(chǎn)。原為殺釘螺藥物，在血吸蟲病治療領(lǐng)域具有卓越的療效，氯硝柳胺還能制成涂教劑以預(yù)防急性血吸蟲感染'殺滅釘螺以及血吸蟲尾蚴、毛蚴，具有滅螺效果好、毒副作用小、對人及畜的毒性低等特點(diǎn)，是治療血吸蟲病的生力軍。此外，氯硝柳胺也是一種廣譜、高效、低毒的人及牲畜驅(qū)絳蟲藥物。已被收入中國藥典、英國藥典、歐洲藥典等。該藥對于人類其其它溫血性動物及植物安全性極高，基本無毒害作用，人口服安全劑量高達(dá)2克/天以上，惟對魚類有害。臨床毒副作用為輕微頭暈、胸悶、腹部不適或腹痛、發(fā)熱、騷癢等。目前，尚未有該藥用于癌癥臨床治療的文獻(xiàn)"f艮導(dǎo)。Cl氯硝柳胺的化學(xué)結(jié)構(gòu)
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明需要解決的技術(shù)問題之一是提供一種化合物氯硝柳胺或其藥學(xué)上可接受的鹽的新應(yīng)用。具體技術(shù)方案如下氯硝柳胺或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。本專利涉及化合物氯硝柳胺或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，其藥學(xué)上可接受的鹽包括氯硝柳胺與無機(jī)堿或有機(jī)堿類化合物反應(yīng)而得到的鹽。得自無機(jī)堿的鹽包括但不局限于鋁鹽、銨鹽、鈣鹽、銅鹽、鐵鹽、亞鐵鹽、鋰鹽、鎂鹽、錳鹽、亞錳鹽、鉀鹽、鈉鹽、鋅鹽等。特別優(yōu)選銨鹽、鈣鹽、鎂鹽、鉀鹽和鈉鹽。得自藥學(xué)上可接受的有機(jī)無毒堿的鹽，所述堿包括但不局限于伯胺、仲胺和叔胺的鹽，取代的胺包括天然存在的取代胺、環(huán)狀胺及堿性離子交換樹脂例如精氨酸、甜菜堿、咖啡因、膽堿、N,N'—二芐基乙二胺、二乙胺、2—二乙基氨基乙醇、2—二甲基氨基乙醇、氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N—乙基嗎啉、N—乙基哌啶、葡萄糖胺、氨基葡萄糖、組氨酸、羥鈷胺、異丙基胺、賴氨酸、甲基葡萄糖胺、嗎啉、哌嗪,哌啶、呱咤、多胺樹脂、普魯卡因、嘌呤、可可堿、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨基丁三醇等。所述化合物氯硝柳胺或其藥學(xué)上可接受的鹽的有效濃度是1X10-8~1X10-5M。本專利涉及化合物氯硝柳胺或其藥學(xué)上可接受的鹽可以有效地抑制多種腫瘤細(xì)胞的增殖，并對胂瘤細(xì)胞生長周期抑制并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。這些胂瘤細(xì)胞包括但不局限于腦瘤、生殖泌尿系統(tǒng)種瘤、淋巴系統(tǒng)腫瘤、胃癌、喉癌、鼻咽癌、皮膚癌、骨癌、血癌、白血病、乳腺癌及組織細(xì)胞性淋巴癌、非小細(xì)胞肺癌、小細(xì)胞肺癌、肺腺癌、肺鱗癌、胰腺癌、前列腺癌、肝癌、皮膚癌、上皮細(xì)胞癌、等的腫瘤細(xì)胞?；衔锫认趿坊蚱渌帉W(xué)上可接受的鹽對這些腫瘤細(xì)胞生長的50%抑制濃度為1X10—81X105M。本發(fā)明的另一需要解決的技術(shù)問題是提供一種抗腫瘤藥用組合物。具體技術(shù)方案如下一種抗腫瘤藥用組合物，包括有氯確柳胺或其藥學(xué)上可接受的鹽與藥學(xué)上可接受的栽體。所述的組合物，還包括有包舍選自以下化合物中的一種或多種雌激素受體調(diào)節(jié)劑、雄激素受體調(diào)節(jié)劑、視網(wǎng)膜樣受體調(diào)節(jié)劑、細(xì)胞毒素/細(xì)胞抑制劑、抗增殖劑、蛋白轉(zhuǎn)移酶抑制劑、HMG-CoA還原酶抑制劑、HIV蛋白激酶抑制劑、逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑、血管生成抑制劑、細(xì)胞增殖及生存信號抑制劑、干擾細(xì)胞周期關(guān)卡的藥物和細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)劑。本專利涉及化合物氯硝柳胺或其藥學(xué)上可接受的鹽在治療或預(yù)防癌癥時(shí)可以與選自以下的化合物聯(lián)用細(xì)胞毒類藥物、酪氨酸蛋白抑制劑、EGFR抑制劑、VEGFR抑制劑、絲氨酸/蘇氨酸蛋白抑制劑、Bcr-Abl抑制劑，c-Kit抑制劑，Met抑制劑，Raf抑制劑，MEK抑制劑，MMP抑制劑，拓樸異構(gòu)酶抑制劑、組氨酸去乙?；敢种苿?、蛋白酶體抑制劑、CDK抑制劑，Bcl-2家族蛋白抑制劑，MDM2家族蛋白抑制劑、IAP家族蛋白抑制劑、STAT家族蛋白抑制劑、PI3K抑制劑、AKT抑制劑、整聯(lián)蛋白阻滯劑、干擾素-oc、白介素-12、COX-2抑制劑、雌激素受體調(diào)節(jié)劑、雄激素受體調(diào)節(jié)劑、視網(wǎng)膜樣受體調(diào)節(jié)劑、細(xì)胞毒素/細(xì)胞抑制劑、抗增殖劑、蛋白轉(zhuǎn)移酶抑制劑、HMG-CoA還原酶抑制劑、HIV蛋白激酶抑制劑、逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑、血管生成抑制劑、細(xì)胞增殖及生存信號抑制劑、千擾細(xì)胞周期關(guān)卡的藥物和細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)劑，p53、p53激活劑、VEGF抗體、EGF抗體等。本專利涉及化合物氯硝柳胺或其藥學(xué)上可接受的鹽制備的藥物在治療或預(yù)防癌癥時(shí)可以與放射治療聯(lián)用。本發(fā)明提供了化合物氯硝柳胺或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備抗腫瘤藥物的新用途，為腫瘤患者提供了新的治療候選藥物，有可能進(jìn)一步提高對患者的療效，改善其預(yù)后。氯硝柳胺或其藥學(xué)上可接受的鹽制備的藥物對多種腫瘤細(xì)胞有效，預(yù)示該化合物有可用于包括腦瘤、生殖泌尿系統(tǒng)腫瘤、淋巴系統(tǒng)腫瘤、胃癌、喉癌、鼻咽癌、皮膚癌、骨癌、血癌、白血病、乳腺癌及組織細(xì)胞性淋巴癌、非小細(xì)胞肺癌、小細(xì)胞肺癌、肺腺癌、肺鱗癌、胰腺癌、前列腺癌、肝癌、皮膚癌、上皮細(xì)胞癌、等多種癌癥的治療。圖1是氯硝柳胺對肺癌細(xì)胞(肺腺癌A549、肺鱗癌L-78)的生長抑制曲線；圖2是氯硝柳胺對腎癌細(xì)胞OS-RC-2的生長抑制曲線；圖3是氯硝柳胺對口腔上皮癌細(xì)胞KB的生長抑制曲線；圖4是氯硝柳胺對前列腺癌細(xì)胞Du145的生長抑制曲線；圖5是氯硝柳胺對結(jié)腸癌細(xì)胞HT-29的生長抑制曲線；圖6是Dul45細(xì)胞的細(xì)胞周期圖，其中6a為未加藥組，6b為藥物低濃度組，6c為藥物較高濃度組；圖7是Dul45細(xì)胞在氯硝柳胺處理后的AnnexinV表達(dá)情況圖，其中7a低濃度藥物處理后細(xì)胞的AnnexinV的表達(dá)情況，7b為高濃度藥物處理后細(xì)胞的AnnexinV的表達(dá)情況；圖8a為氯硝柳胺與紫杉醇固定劑量聯(lián)合給藥后對Dul45細(xì)胞的生長抑制曲線；圖8b為氯硝柳胺與紫杉醇固定劑量聯(lián)合給藥后對Dul45細(xì)胞的生長抑制曲線；具體實(shí)施實(shí)例實(shí)施例1:用不同濃度的化合物氯硝柳胺(1X1(T81X10—「'M)分別處理A549(肺^_癌)、L-78(肺鱗癌)、Dul45(前列腺癌)、KB(口腔上皮細(xì)胞癌)、OS-RC-2(腎癌)、結(jié)腸癌(HT-29)六種細(xì)胞，72小時(shí)后MTT，再孵育4小時(shí)，然后用酶標(biāo)儀測定其在570nm的吸光值。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，氯硝柳胺處理可明顯降低各種細(xì)胞對MTT的吸收，說明氯硝柳胺可顯著抑制這五種細(xì)胞的增殖，抑制率與藥物濃度成正相關(guān)。根據(jù)氯確柳胺對這五種細(xì)胞的生長抑制作用，我們計(jì)算出氯硝柳胺對這五種細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度(IC50)為1X10-8~1X10-5M。參見圖l一圖5.實(shí)施例2:用不同濃度的氯硝柳胺(1X10—8~1X1CT5M)處理Dul45(前列&，癌)細(xì)胞，分別在處理后12、24、36、48小時(shí)取細(xì)胞用PI(橫化丙啶)處理，然后用流式細(xì)胞儀檢測，發(fā)現(xiàn)氯賄柳胺能明顯的延長Du145細(xì)胞的Gl期，并且G1期隨著藥物濃度的增大而變長。參見圖6.表1<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>實(shí)施例3:用不同濃度的氯硝柳胺(IXI(T81X10-5M)處理Dul45(前列l(wèi)^癌)細(xì)胞，分別在處理后2、24、36、48小時(shí)取細(xì)胞用AnnexinV(膜聯(lián)蛋白V)/7AAD(7-氨基-放線菌素D)處理，然后用流式細(xì)胞4義檢測AnnexinV陽性細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)氯硝柳胺處理可^吏Dul45細(xì)胞陽性率明顯增高，說明氯硝柳胺可誘導(dǎo)Du145細(xì)胞凋亡，發(fā)生凋亡的細(xì)胞隨著氯硝疏胺濃度的增大、處理時(shí)間的延長而增多。圖7a為低濃度藥物處理后細(xì)胞的AnnexinV的表達(dá)情況，圖7b為高濃度藥物處理后細(xì)胞的AnnexinV的表達(dá)情況。參見圖7.實(shí)施例4:用Dul45細(xì)胞，選用6個(gè)不同濃度的化合物氯硝柳胺(1X10-8~1X10-5M)與Taxol固定濃度聯(lián)合用藥以及6個(gè)不同濃度的taxol與固定濃度的氯硝柳胺聯(lián)合用藥，作用72小時(shí)后用MTT法測定，并根據(jù)氯硝柳胺對這五種細(xì)胞的生長抑制作用計(jì)算出聯(lián)合用藥的半數(shù)抑制濃度，結(jié)果表明聯(lián)合用藥后能顯著的降低藥物的有效濃度。參見圖8.權(quán)利要求1.氯硝柳胺或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。2.根據(jù)權(quán)利要求1所迷的應(yīng)用，其特征是所述氯硝柳胺或其藥學(xué)上可接受的鹽的有效濃度是1X10-8~1X10-5M。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征是所述腫瘤為組織細(xì)胞性淋巴癌、非小細(xì)胞肺癌、小細(xì)胞肺癌、肺腺癌、肺鱗癌、胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌、肝癌、皮膚癌、上皮細(xì)胞癌、前列腺癌、鼻咽癌、白血病中的任一種。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征是所述氯硝柳胺或其藥學(xué)上可接受的鹽與雌激素受體調(diào)節(jié)劑、雄激素受體調(diào)節(jié)劑、視網(wǎng)膜樣受體調(diào)節(jié)劑、細(xì)胞毒素/細(xì)胞抑制劑、抗增殖劑、蛋白轉(zhuǎn)移酶抑制劑、HMG-CoA還原酶抑制劑、HIV蛋白激酶抑制劑、逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑、血管生成抑制劑、細(xì)胞增殖及生存信號抑制劑、干擾細(xì)胞周期關(guān)卡的藥物和細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)劑中的一種或多種聯(lián)用。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征是所述氯硝柳胺或其藥學(xué)上可接受的鹽與細(xì)胞毒類藥物、酪氨酸蛋白抑制劑、EGFR抑制劑、VEGFR抑制劑、絲氨酸/蘇氨酸蛋白抑制劑、Bcr-Abl抑制劑，c-Kit抑制劑，Met抑制劑，Raf抑制劑，MEK抑制劑，MMP抑制劑，拓樸異構(gòu)酶抑制劑、組氨酸去乙?；敢种苿?、蛋白酶體抑制劑、CDK抑制劑，Bcl-2家族蛋白抑制劑，MDM2家族蛋白抑制劑、IAP家族蛋白抑制劑、STAT家族蛋白抑制劑、PI3K抑制劑、AKT抑制劑、整聯(lián)蛋白阻滯劑、干擾素-oc、白介素-12、COX-2抑制劑、p53、p53激活劑、VEGF抗體、EGF抗體中的一種或多種聯(lián)用。6.—種抗腫瘤藥用組合物，其特征是包括有氯硝柳胺或其藥學(xué)上可接受的鹽與藥學(xué)上可接受的載體。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的抗腫瘤藥用組合物，其特征是還包含有選自以下化合物中的一種或多種雌激素受體調(diào)節(jié)劑、雄激素受體調(diào)節(jié)劑、視網(wǎng)膜樣受體調(diào)節(jié)劑、細(xì)胞毒素/細(xì)胞抑制劑、抗增殖劑、蛋白轉(zhuǎn)移酶抑制劑、HMG-CoA還原酶抑制劑、HIV蛋白激酶抑制劑、逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑、血管生成抑制劑、細(xì)胞增殖及生存信號抑制劑、干擾細(xì)胞周期關(guān)卡的藥物和細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)劑。全文摘要本發(fā)明公開了一種氯硝柳胺或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，該應(yīng)用為腫瘤患者提供了新的治療候選藥物，有可能進(jìn)一步提高對患者的療效，改善其預(yù)后。氯硝柳胺或其藥學(xué)上可接受的鹽對多種腫瘤細(xì)胞有效，預(yù)示該化合物有可能用于包括腦瘤、生殖泌尿系統(tǒng)腫瘤、淋巴系統(tǒng)腫瘤、胃癌、喉癌、鼻咽癌、皮膚癌、骨癌、血癌、白血病、乳腺癌及組織細(xì)胞性淋巴癌、非小細(xì)胞肺癌、小細(xì)胞肺癌、肺腺癌、肺鱗癌、胰腺癌、前列腺癌、肝癌、皮膚癌、上皮細(xì)胞癌、等多種癌癥的治療。文檔編號A61P35/00GK101254183SQ20081002687公開日2008年9月3日申請日期2008年3月19日優(yōu)先權(quán)日2008年3月19日發(fā)明者克丁,萬曉禎,任小梅,嬙何,滿呂,章張,磊段,裴端卿申請人:中國科學(xué)院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院