專利名稱：：8-乙酰氧基山梔苷甲酯的醫藥新用途的制作方法
技術領域：
：本發明涉及8-乙酰氧基山梔苷甲酯在制備治療或預防心腦血管疾病的藥物中的應用。
背景技術：
：獨一味為唇形科植物獨一味Lamiophlomisrotata(Benth)Kudo的全稱，為我國藏族、蒙古族、納西族等民間常用草藥。1992年張承忠等從獨一味地上部分分得8—乙酰氧基山梔苷甲酯劉阿麗，李麗，仝武軍，獨一味的研究進展及臨床應用，中國療養醫學2007年4月第16巻第4期。但目前8-乙酰氧基山梔苷甲酯對心腦血管疾病的作用還未見報道，基于此，本發明人通過大量的實驗研究，提供了8-乙酰氧基山梔苷甲酯在制備治療或預防心腦血管疾病的藥物中的應用。
發明內容本發明提供了8-乙酰氧基山梔苷甲酯在制備治療或預防心腦血管疾病的藥物中的應用。本發明提供了8-乙酰氧基山梔苷甲酯在制備治療或預防冠心病、心絞痛、心肌缺血或心肌梗塞等藥物中的應用。本發明提供了8-乙酰氧基山梔苷甲酯在制備治療或預防腦損傷、腦缺血等藥物中的應用。本發明提供的8—乙酰氧基山梔苷甲酯可以與各種常規輔料制成各種藥物劑型，可以是注射劑、粉針劑、片劑、膠囊劑、顆粒劑、口服液、微粒劑，優選凍干粉針劑。本發明提供的8—乙酰氧基山梔苷甲酯在用于心腦血管疾病時，其注射使用劑量范圍是30mg5000mg，優選為30mg2500mg;其口服使用劑量范圍是200mg10000rag，優選為200mg5000mg。本發明人進行了下列試驗來證實8-乙酰氧基山梔苷甲酯在制備治療或預防心腦血管疾病的藥物中的作用，但不僅限于此。具體實施例方式制備例l:制備8-乙酰氧基山梔苷甲酯取獨一味藥材20kg，將其粉碎，過10目篩，加8倍量(V/W)70%乙醇浸泡過夜，回流提取兩次,每次2小時，提取液回收乙醇至無醇味，過濾,濾液上處理好聚酰胺柱，水洗6倍柱體積，收集洗脫液，上處理好的AB-8大孔樹脂柱，水洗至流出液無色,再用10%乙醇洗脫10倍柱體積，最后用25%乙醇洗脫4倍柱體積，收集25%乙醇洗脫液,上氧化鋁柱,95%丙酮洗脫，收集洗脫液，蒸干，得含量為98%的8-乙酰氧基山梔苷甲酯白色粉末。制備例2:制備8-乙酰氧基山梔苷甲酯取獨一味藥材20kg，將其粉碎，過10目篩，加10倍量(V/W)30。/6乙醇浸泡2小時，回流提取兩次，每次1.5小時，提取液回收乙醇至無醇味，過濾,濾液上處理好聚酰胺柱,水洗6倍柱體積，收集洗脫液,上處理好的D101大孔樹脂柱，水洗至流出液無色，再用15%乙醇洗脫8倍柱體積，最后用50%乙醇洗脫4倍柱體積，收集50%乙醇洗脫液，上氧化鋁柱，95%丙酮洗脫，收集洗脫液，蒸干,得含量為95%的8-乙酰氧基山梔苷甲酯白色粉末。制備例3:8-乙酰氧基山梔苷甲酯注射液處方8-乙酰氧基山梔苷甲酯3.0g氯化鈉89g注射用水10000ml制成10000ml按處方量取8-乙酰氧基山梔苷甲酯3.0g，氯化鈉89g，用注射用水10000ml溶解，攪拌；加入活性炭50g，攪拌20分鐘，溶液經過微孔濾膜過濾澄明，分裝于125ml輸液瓶中，每瓶100mL,滅菌，檢査合格后包裝即可。其它檢查項應該符合中華人民共和國藥典2005年版注射液項目要求。制備例4:8-乙酰氧基山梔苷甲酯凍干粉針取30g，混合后加注射用水2000ml，加甘露醇8g，攪拌溶解，超濾，得到無熱源的澄清液，灌入10ml西林瓶中，2ml/只，按凍干粉針工藝凍干，制成每支含30mg的凍干粉針。制備例5:8-乙酰氧基山梔苷甲酯片劑處方8-乙酰氧基山梔苷甲酯200g淀粉150g羧甲基淀粉鈉50g微晶纖維素.100g硬脂酸鎂5g50%乙醇適i制成1000粒4按處方量取8-乙酰氧基山梔苷甲酯200g，淀粉150g，羧甲基淀粉鈉50g，微晶纖維素100g，硬脂酸鎂5g，混和，加入50%乙醇適量制粒，干燥，整粒，壓片，檢査合格后，包裝。試驗例l:8-乙酰氧基山梔苷甲酯對大鼠心肌缺血損傷的影響Cl)材料8-乙酰氧基山梔苷甲酯，按制備例l方法制備。氯化硝基四氮唑藍(N-BT)，由軍事醫學科學院藥材供應站提供。實驗動物普通級SD大鼠，雄性，體重280g—350g，雌雄各半，山東綠葉制藥股份有限公司實驗動物中心提供，合格證號SYXK(魯)20030020。(2)方法與結果動物隨機分為模型對照組(生理鹽水)、硝苯地平組(6mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注射劑量組l(3mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注射劑量組2(7.5mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注射劑量組3(20mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注射劑量組4(50mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注射劑量組5(250mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注射劑量組6(500mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯灌胃劑量組l(20mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯灌胃劑量組2(100mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯灌胃劑量組3(500mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯灌胃劑量組4(1000mg/kg)。每組10只。禁食12小時后，ip.烏拉坦(1.2g/kg)麻醉，測肢體n導聯心電圖。剪去左胸前皮毛，碘酒及酒精消毒，沿胸骨左緣lcm處，剪開胸壁肌肉及二條肋骨，迅速打開胸腔，暴露心臟，在動脈圓錐與左心耳之間結扎左冠狀動脈，立即將心臟放回，排擠出胸腔空氣，用止血鉗閉合胸腔，造成大鼠急性心肌缺血模型。硝苯地平組在麻醉前灌胃給藥，灌胃給藥組連續給藥3天，于第2天給藥后禁食16小時后，第3天給藥30分鐘后手術，其余各組術后隨既靜脈注射相應藥物。記錄給藥前及給藥后1.5h、3h心電圖，測量心電圖J點的升高值，6h后取出心臟，以冷生理鹽水洗凈后，-2(TC冰箱冷凍過夜。次日，將冷凍的心臟由結扎處至心尖部等厚切成5片，浸入新鮮配制的0.25MN-BT磷酸緩沖液(pH7.4)中。37。C水浴振搖1015min。用濾紙吸干切片表面的染色液，分離染色部分和未染色部分，稱重，記算梗死面積。梗死面積(％)=梗死部分重量/(非梗死部分重量+梗死部分重量)x100。/。。數據用X士s表示，以組間f檢驗進行統計學處理。結果如表1所示，心肌缺血6小時后，模型組大鼠心肌出現明顯的灶狀缺血區，達到26%左右。8-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注射劑量組1(3mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注射劑量組2(7.5mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注射劑量組3(20mg/kg)、8-乙酰氧基山5梔苷甲酯靜脈注射劑量組4(50mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注射劑量組5(250mg/kg)、S-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注射劑量組6(500mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯灌胃劑量組l(20mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯灌胃劑量組2(100mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯灌胃劑量組3(500mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯灌胃劑量組4(1000mg/kg)降低肢體導聯心電圖J點的升高、減少缺血面積(與模型組比較，p<0.05或p〈0.01);8-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注射高劑量組5(250mg/kg)與8-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注射劑量組6(500mg/kg)比較，對肢體導聯心電圖J點的升高及缺血面積無明顯差異(p〉0.05);8-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈灌胃組3(500mg/kg)與8-乙酰氧基山梔苷甲酯灌胃組4(1000mg/kg)比較，對肢體導聯心電圖J點的升高及缺血面積無明顯差異(p>0.05)。表18-乙酰氧基山梔苷甲酯對大鼠心肌缺血損傷的影響(11=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>胃劑量組4_與模型對照組比較，*P<0.05，P<0.01。試驗例2:8-乙酰氧基山梔苷甲酯對大鼠局部腦缺血損傷的影響(1)材料8-乙酰氧基山梔苷甲酯，按制備例l方法制備。紅四氮唑美國Sigma公司產品，臨用前用生理鹽水配成4%溶液。實驗動物普通級SD大鼠，雄性，體重280g—350g，雌雄各半，山東綠葉制藥股份有限公司實驗動物中心提供，合格證號SYXK(魯)20030020。(2)方法與結果動物隨機分為模型對照組(生理鹽水)、尼莫地平組(1.0mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注射劑量組l(3mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注射劑量組2(7.5mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注射劑量組3(20mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注射劑量組4(50mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注射劑量組5(250mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注射劑量組6(500mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯灌胃劑量組l(20mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯灌胃劑量組2(100mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯灌胃劑量組3(500mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯灌胃劑量組4(1000mg/kg)。每組10只。每組10只。禁食12小時后，水合氯醛(350mg/kg，i.p.)麻醉，分離右側頸總動脈，夾閉頸內、頸總動脈，頸外動脈近心端及遠心端結扎，中間剪斷。將頸外動脈游離端拉至與頸內動脈成一條直線，將栓線(選用直徑0.24111111尼龍線，長度5.0cm)由頸外動脈插入至顱內，遇輕微阻力時停止，插入深度約為2cm。結扎頸外動脈開口，并打開頸總動脈動脈夾，消毒縫合傷口，造成右側大腦中動脈缺血模型;假手術組僅進行右側頸總動脈、頸內動脈、頸外動脈的分離(以上實驗均在23'C25'C進行)。灌胃給藥組連續給藥3天，于第2天給藥后禁食16小時后，第3天給藥30分鐘后手術，其余各組術后靜脈注射相應藥物。24小時后按文獻劉小光，徐理納，一種能評價溶栓和抗溶栓的大鼠腦中動脈模型，藥學學報，1995，30:662所述方法及標準觀察并記錄大鼠的行為障礙(A)提鼠尾觀察前肢屈曲情況，如雙前肢對稱伸向地面，計為O分，如手術對側前肢出現腕屈曲計為1分，肘屈曲計為2分，肩內旋計為3分，既有腕屈曲和/或肘屈曲，又有肩內旋者，計為4分。(B)將動物置于平地面上，分別推雙肩向對側移動，檢查阻力。如雙側阻力對等且有力，計為O分，如向手術對側推動時阻力下降者，根據下降程度不同分為輕、中、重三度，分別計為1，2禾[13分。(C)將動物雙前肢置一金屬網上，觀察雙前肢的肌張力。雙前肢肌張力對等且有力者計為0分。同樣根據手術對側肌張力下降程度不同計為l，2和3分。(D)動物有不停地向一側轉圈者，計為1分。根據標準評分，滿分為11分，分數越高，表示動物行為障礙越嚴重。行為評分后處死大鼠，取腦，去掉嗅球、小腦和低位腦干，冠狀切成5片，腦片用紅四氮唑(TTC)染色，正常組織經染色后呈紅色，梗塞組織呈白色，染色后照相，用中國航空航天大學病理圖像分析軟件求梗塞面積比。數據用亍士s表示，以組間f檢驗進行統計學處理。結果如表2所示，缺血24小時后，模型組大鼠表現出明顯的行為障礙，大鼠腦組織也出現明顯的灶狀缺血區，達到全腦24%左右。8-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注射劑量組1(3mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注射劑量組2(7.5mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注射劑量組3(20mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注射劑量組4(50mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注射劑量組5(250mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注射劑量組6(500mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯灌胃劑量組1(20mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯灌胃劑量組2(100mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯灌胃劑量組3(500mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯灌胃劑量組4(1000mg/kg)顯著改善大鼠行為障礙、減少缺血面積(與模型組比較，p〈0.05或p〈0.01)，8-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注射劑量組5(250mg/kg)與8-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注射劑量組6(500mg/kg)比較，對改善大鼠行為障礙、減少缺血面積無明顯差異(p〉0.05);8-乙酰氧基山梔苷甲酯灌胃組3(500mg/kg)與8-乙酰氧基山梔苷甲酯灌胃組4(1000mg/kg)比較，對改善大鼠行為障礙、減少缺血面積無明顯差異(p〉0.05)。表28-乙酰氧基山梔苷甲酯對大鼠腦缺血損傷的影響(n-10)組別劑量(mg/kg)行為障礙缺血面積(％)模型對照組生理鹽水9.70±0.9023.80±5.03Nim組1.06.20±2.61"14.61±3.51**8-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注38.80±1.03'19.65士3.61'射劑量組18-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注7.56.90±1.58'*17.1±2.80**射劑量組28-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注206.60±1.58**15.l土2.80"射劑量組38-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注506.20±1.45"14.6±2.50**射劑量組48-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注2505.65±1.60"13.2±2.95**射劑量組58-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注5005.50±1.48"13.1±2.89**射劑量組68-乙酰氧基山梔苷甲酯灌胃劑208.61±0.99*19.50±3.07*量組l8-乙酰氧基山梔苷甲酯灌胃劑507.50土1.48**16.9±2.8(T量組28-乙酰氧基山梔苷甲酯灌胃劑5006.50±1.55"15.4±2.70**量組38-乙酰氧基山梔苷甲酯灌胃劑畫6.45±1.80"15.2±2.75**_量組4_與模型對照組比較，*P<0.05,"P<0.01。8權利要求1.8-乙酰氧基山梔苷甲酯在制備治療或預防心腦血管疾病的藥物中的應用。2.8-乙酰氧基山梔苷甲酯在制備治療或預防冠心病、心絞痛、心肌缺血或心肌梗塞的藥物中的應用。3.8-乙酰氧基山梔苷甲酯在制備治療或預防腦損傷、腦缺血的藥物中的應用。4.根據權利要求1一3任一所述的應用，其中8—乙酰氧基山梔苷甲酯的制備方法為獨一味藥材粉碎、過篩、浸泡、回流提取后提取液回收乙醇至無醇味，過濾，濾液上處理好的聚酰胺柱，水洗，收集洗脫液上處理好的大孔樹脂柱，水洗至流出液無色，醇洗，收集洗脫液上氧化鋁柱，洗脫，收集洗脫液，蒸干既得。全文摘要本發明提供了8-乙酰氧基山梔苷甲酯的醫藥新用途，具體涉及其在制備治療或預防心腦血管疾病的藥物中的應用，以及8-乙酰氧基山梔苷甲酯的制備方法。文檔編號A61K31/7042GK101485671SQ20081001386公開日2009年7月22日申請日期2008年1月16日優先權日2008年1月16日發明者建侯,張達磊,彭湘林,徐本明,蔣王林,鄭勝國申請人:山東綠葉天然藥物研究開發有限公司