一種注射用胸腺肽α₁緩釋微球制劑及其制備方法

專利名稱：一種注射用胸腺肽α₁緩釋微球制劑及其制備方法
技術領域：
本發明涉及一種注射用胸腺肽a Jl釋微球制劑，屬藥物領域。
技術背景胸腺肽a t (thymosin a"簡稱T a》是一種具有免疫功能的多肽臨床上多用于治療病毒性肝炎，其氨基酸序列為A C-Ser- A sp- A 1 a - A 1 a -V a 1- A sp-Thr-Ser-SerH^lu-lie-Thr-Thr-Lys- A sp-Leu-lys^Glu-Lys-Lys~Glu-V a 1-V a l""Glu~Glu- A1 a ~Glu- A sn—-OH分子式C129H215N33055—分子量3108.37現有T ci,制劑由于半衰期短治療時間長需要頻繁給藥，病人順應性較差 而且生物利用度低等缺點。目前關于胸腺肽a,微球的報道較多，如何熠等，胸腺肽聚乳酸微球的 制備和釋藥性能研究，中國醫藥工業雜志，2006， 37 (3)，公開了用乳化溶劑 揮發法制備胸腺肽聚乳酸微球，其中以聚乙交酯-丙交酯(PLGA)為載體， 以乳化揮發法制備的微球。鄒良等，胸腺肽明膠微球的制備和體外釋藥的特征， 中國醫院藥學雜志2004年第24巻第9期，公開了一種胸腺肽的明膠微球。用 乳化交聯法制備的胸腺肽明膠微球，以藥物A型明膠為囊材。張海松、陳陽 述，胡軍高，等，口服胸腺微球的研究，中國藥房，1999、 10 (2); 58;專利 申請號200310119386.X公開了一種利用PLGA (聚乙丙交酯)提取、合成胸 腺肽微囊緩釋針的方法。它是以PLGA為有機相，將胸腺肽溶解于水量水中， 制成內層水相，再將束殼材料PLGA溶解在有機溶液中，制成有機相；在高 速攪拌下使內層水相分散在有機相中，形成油包水型乳液，再加入含有分散劑 的外層水相中，攪拌下形成雙層乳液，制成水/油/水復乳液；最后在攪拌下使 有機溶劑揮發并使聚合物層固化，形成固體的微球，胸腺肽包裹在微球中。朱 艷等，微球制劑條件下胸腺肽CM的穩定性評價，第二軍醫大學學報，2005年， 26 (5)，報道了囊球制劑工藝條件下胸腺肽(M的穩定性。采用HPLC，研究 胸腺肽a i在不同溫度(-2(TC，6-8'C,60。C)，不同的超聲時間(10-60s)及不同的 pH值(4.0、 7.0、 IO.O)條件下的穩定性。朱艷等，胸腺肽(M微球的制備及其 評價，藥學服務與研究，2005， 5 (3)，公開了胸腺肽(M微球的制備及評價方法。其中以聚乳酸-乙醇酸嵌段共聚物(PLGA)為載體材料，采用復乳法 (Wo/w)制備胸腺肽a ,長效注射微球，考察其粒徑大小，外觀、包封率等理 化性質；采用RP-HPLC法測定微球中胸腺肽a ,的含量。胸腺肽a,原料藥較昂貴，lg的售價約為8000元人民幣。在胸腺肽a,微球 包封率較低的情況下，大量胸腺肽ar溶解在水中，造成巨大的浪費和成本的 提高；所以此時，微球包裹技術的一個重要指標是高的包封率。胸腺肽a,的半衰期短，需要頻繁的給藥，上述技術公開了各種完全釋放 時間為1 3個月的長效緩釋制劑，可以滿足部分患者的需要，使治療更加方便。 但是由于臨床上疾病的復雜和多樣化常常會出現各種不同的需求。如ICU(重 癥監護室)內的病人，常常需要使用胸腺肽a,等免疫增強劑的治療；但是由 于抗生素等藥物的大量使用，部分患者極有可能會出現過敏、皮疹等變態反應， 此時再使用胸腺肽a ,等免疫增強劑將不利于患者疾病的進一步治療；尤其是 當這些變態反應是難以耐受時，除了使用抗過敏藥物以外，需要停止免疫增強 劑胸腺肽a ,的免疫上調作用。又如正在使用胸腺肽a ,等免疫增強劑的患者， 不可預知的出現了強烈炎癥反應時，為防止器官和組織受到嚴重的損傷，保護 器官和組織的功能，需要抑制免疫細胞的增殖和分化；若患者之前接受了持續 釋放3個月的長效胸腺肽a i微球制劑的治療，此時將難以控制炎癥反應的進程，患者的組織器官有可能受到不可逆轉的損傷。再如感染病毒性皰疹的患 者，有時只需使用一個月以內的免疫增強調節時間。因此， 一種釋放時間適當， 如持續釋放10 15天，或者10 25天的胸腺肽d i微球緩釋制劑在臨床上具有 巨大的需求空間。通常經PLGA制備的胸腺肽a ,微球，其釋放時間為1 3個月(見上述文獻)， 此時的PLGA粘度較大。若要實現10 15天或10 25的較短釋放效果，需降低 PLGA的粘度，但粘度的降低必然伴隨包封率的降低，大量昂貴的胸腺肽cn將 流失在水中，造成巨大的浪費和成本的升高。如何將經PLGA包封的胸腺肽(M 微球釋放時間控制在10 25天的相對較短范圍內，同時又保持高的包封率，節 省制造成本，并為臨床提供多樣化、急需的緩釋胸腺肽ci,制劑，滿足中等緩 釋時間的需求，是廣大藥劑工作者一直希望解決的難題。發明內容本發明的技術方案是提供了一種能夠均勻、穩定的在10 20內釋放完全 的胸腺肽a i緩釋微球制劑，本發明的另一技術方案是提供了胸腺肽(i ^夷釋微 球制劑的制備方法。本發明提供了一種注射用胸腺肽a ,緩釋微球制劑，它是由微球重量的 0. 5% 10%的胸腺肽0 ,和微球重量的70。/。 99. 5%的可降解的分子量為5，000 500， 000道爾頓的藥用高分子輔料以及占微球重量的0% 10%的其它藥學上可 接受的輔料制備而成的制劑。其中，藥用高分子輔料選自聚乙交酯-丙交酯、明膠、聚乳酸、聚乳酸-乙醇酸、聚乙醇酸、聚乙烯醇、聚乙二醇、羥基乙酸、聚乳酸-聚乙二醇、聚 羥基丁酸酯-羥基戊酸共聚物中的一種或兩種以上的混合物。其中，藥用高分子輔料選自聚乙交酯-丙交酯、聚乳酸、聚乙烯醇、聚乙 二醇、羥基乙酸、聚羥基丁酸酯-羥基戊酸共聚物、聚乳酸-聚乙二醇中的一種 或兩種以上的混合物。進一步優選地，所述的藥用高分子輔料的分子量為10， 000 400， 000 道爾頓，重量百分含量為78% 99.5%。更進一步優選地，所述的藥用高分子輔料的分子量為10， 000 300， 000 道爾頓。其中，藥用高分子輔料選自聚乙交酯-丙交酯，所述的聚乙交酯-丙交酯分 子量為5， 000 500， 000道爾頓，乙交酯和丙交酯比例為50 : 50,特性粘度 范圍為0. 15dl/g 0. 90dl/g。聚乙交酯-丙交酯由于無毒、安全及良好的物理化學性質廣泛用于藥物微 球的制備；經它包裹制備的微球，大量文獻報道的釋放時間為1 3個月，屬 于長效釋放制劑。PLGA為高分子物質，其特定粘度對應特定的分子量；本領 域技術人員可以很方便的查詢粘度與分子量的對照表。其中，所述的藥用高分子輔料聚乙交酯-丙交酯分子量為10， 000 400， 000道爾頓，乙交酯和丙交酯比例為50: 50，特性粘度范圍為0. 30dl/g 0.90dl/g。所述的聚乙交酯-丙交酯是由兩種不同粘度的聚乙交酯-丙交酯進行混合 后使用，低、高粘度的聚乙交酯-丙交酯的重量比為1:0.5 3。其中，所述 低粘度為"0.3 0.65dl/g，高粘度為0.5 0.9dl/g"。每次使用時，均選用 兩種不同粘度的PLGA，當次粘度高的稱為高粘度PLGA，當次粘度低的稱為低粘度聚乙交酯-丙交酯。進一步優選地，低、高粘度的聚乙交酯-丙交酯重量比為1 : 1 2。所述 特性粘度范圍為0. 30dl/g 0. 90dl/g。所述低高粘度聚乙交酯-丙交酯重量比 為1 : 1、 1 : 1. 5、 1:2、 1 : 1. 8、 1:1. 7.本發明緩釋微球是由總投料量的1.5%的胸腺肽(11、占總投料量2.4%的 PEG-6000和占總投料95. 9%的聚乙交酯-丙交酯(0. 65dl/g:0. 89dl/g:l :1.7) 分別投料制備w/o微球，再在PVA的濃度為2%， NaCl的濃度為2%的水溶液中 制備完成w/o/w的微球.其中，所述的緩釋微球的粒徑為1 200um平均粒徑20 150ura。優選粒徑為1 150um平均粒徑32. 5 86. 3um。 所述的制劑為皮下注射或肌肉注射制劑。 其中，所述的制劑為皮下注射制劑。本發明還提供了一種制備注射用胸腺肽a ,緩釋微球制劑的方法，包括如 下步驟.-第一步，首先用有機溶劑將可降解的輔料溶解成油相，然后將另外溶有胸 腺肽a !的內水相加入其中，將油相和水相置與攪拌器內，以每分鐘2000 3000 轉高速攪拌5 8分鐘，形成w/o乳液，之后將w/o乳液滴加入到0-8"C的冰 浴1%--5%的PVA的外水相中形成W/0/W復乳攪拌3-5分鐘；第二步，將上述所得W/0/W復乳中再加入含1-5%的PVA、含l 5%NaCl 水溶液，在每分鐘400-700轉的低速攪拌下揮發有機溶劑；微球固化后，過濾， 濾掉大顆粒，抽濾、洗滌、干燥即得微球。其中形成有機相的有機溶劑為具有足夠揮發性、低沸點的有機溶劑，例如 可以選自二氯甲垸、三氯甲垸、乙酸乙酯、乙醚、丙酮、乙醇中的一種或其中 的兩種或兩種以上的混合物。上述可降解輔料在有機溶劑中的濃度優選為 10 1000mg/tnl。內水相，用明膠、甘露醇、聚乙二醇等水溶液溶解制成胸腺肽c^的水溶 液，使胸腺肽a ,在水相的濃度達到10 500mg/ml。外水相采用聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚甲基丙烯酸鈉、氯化鈉水溶液 中的一種或兩種，濃度為0.5% 15% (w/v)。本發明還提供了一種檢測注射用胸腺肽a ^緩釋微球的降解產物及含量的 方法，采用高效液相色譜法，其色譜條件為色譜柱C18 (300A， 4.6X250mm) 流動相是PH7.0磷酸鹽緩沖溶液-異丙醇(體積比95 : 5)，檢測波長215nm進 樣體積20pl。本發明處方工藝制備的注射用胸腺肽a i微球均為流動性良好的白色粉 末，平均粒徑在20 100um左右，跨距在0. 1 2.0之間藥物，包封率〉85°/0 以上，突釋程度〈20°/0。為了將本發明的胸腺肽a ,的注射用緩釋微球制成成品注射劑，在制成微 球后還應予以滅菌，本發明的胸腺肽a i的緩釋微球可以采用無菌操作的滅菌 方法和6°Co Y射線放射源進行輻射滅菌方法，優選無菌操作的滅菌方法。本發明注射用胸腺肽a >的緩釋微球是將制備好的微球無菌粉末在無菌的 0. 1 1.0%羧甲基纖維素鈉，1.0 5.0的甘露醇，0.01 0.05聚山梨酯-80溶 液中混懸，均勻后經皮下或肌注給藥，每10天給藥一次，每15天給藥一次， 每30天給藥一次。本發明胸腺肽a i緩釋微球制劑優選用聚乙交酯-丙交酯包封，為滿足臨床需求提供了一種重要的選擇；按照本發明技術內容制備的胸腺肽a,微球，具 有包封率高、釋放穩定、均勻的特點。可降低胸腺肽ai的毒副作用，提高生 物利用度，同時減少給藥次數，方便患者用藥。通過大量的試驗證明，按照特 定的比例綜合利用兩種或幾種粘度的聚乙交酯-丙交酯的特性，達到了一種突 釋率低，包封率90%以上，胸腺肽a 1在10 — 25天內平穩釋放完全的微球制劑， 為胸腺肽a ,的臨床應用提供了一種新的選擇。顯然，根據本發明的上述內容，按照本領域的普通技術和慣用手段，在不 脫離本發明上述基本技術思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換 或變更。以下通過實施例形式的具體實施方式
，對本發明的上述內容再作進一步的 詳細說明。但不應將此理解為本發明上述主題的范圍僅限于以下的實例，凡基 于本發明上述內容所實現的技術均屬于本發明的范圍。說明書附1:實施例1所制注射用緩釋微球樣品掃描電鏡圖 圖2:實施例1所制注射用緩釋微球樣品體外釋放度曲線圖 圖3:實施例2所制注射用緩釋微球樣品體外釋放度曲線圖 圖4:實施例3所制注射用緩釋微球樣品體外釋放度曲線圖 圖5:實施例4所制注射用緩釋微球樣品體外釋放度曲線圖 圖6:實施例5所制注射用緩釋微球樣品體外釋放度曲線圖 圖7:實施例6所制注射用緩釋微球樣品體外釋放度曲線圖 圖8:實施例7所制注射用緩釋微球樣品體外釋放度曲線圖 圖9:實施例8所制注射用緩釋微球樣品體外釋放度曲線圖

圖10:采用單一 (0.30dl/g)粘度的聚乙交酯-丙交酯微球樣品的體外釋 放曲線圖具體實施方式
通過以下實施例和實驗例來進一步說明本發明所述注射用胸腺肽a ,緩釋 微球的制備方法、粒徑控制、突釋情況、緩釋效果、及微球載藥量和包封率的 測定(包封率9^實際測定Ta,量+ T(^投料量X10(m)。其中，聚乙交酯-丙交 酯特性粘度如"0.45dl/g:0.89dl/g=2:3"中，2:3表示重量比。實施例中均 按此寫法描述。實施例中的微球載藥量和包封率的測定試驗方法精密稱取制備的微球12mg到10ml的具塞離心試管中，加入二 氯甲垸0.5ml，渦旋溶解，再加入2.5ml的PH7. 4的緩沖液渦旋萃取3分鐘2000r/m離心10min收集全部上清液，再向離心試管加入2. 5ml緩沖液同法操 作，合并兩次的上清液，進樣HPLC 20ul.計算藥物含量和包封率。高效液相色譜法其色譜條件為色譜柱C18 (300A， 4. 6X250mm)流動相 是PH7.0磷酸鹽緩沖溶液-異丙醇(體積比95 : 5)，檢測波長215nm進樣體積 20yl。其余按常規進行。微球粒徑的測定試驗樣品實施例中制備的微球試驗儀器Ma stersizer2000試驗方法將制備的干燥的微球粉末用1000ml的蒸餾水分散，用 Ma stersizer2000測定，得粒徑分布。本發明緩釋微球輔料中聚乙交酯-丙交酯的乙交酯和丙交酯比例選擇試驗市售的聚乙交酯-丙交酯PLGA有PLGA (50 : 50)、 PLGA (65 : 35)、 PLGA (75 : 25)、 PLGA (85 : 15)，降解時間PLGA比例505065 : 3575:2585:15降解時間(天)30 6090 120120 150150 180本發明優選的PLGA為PLGA (50 : 50)。以下通過具體實施例說明在上述選擇范圍內，均能達到本發明的有益效果。實施例1:復乳-液中干燥法制備的注射用胸腺肽a i緩釋微球 將100mg的胸腺月太a l 0. 7g的PEG-6000溶于6 ml的PH7. 4的磷酸鹽緩沖 液中，6g的聚乙交酯-丙交酯(乙交酯丙交酯=50 : 50)(特性粘度 0.45dl/g:0. 55dl/g=2:3)和溶于130ml 二氯甲烷中，在高剪切乳勻機轉速 2000r/m作用下將水相倒入到油相中，2500r/m轉速下乳化5-8min得w/o乳液， 將w/o乳液倒入到1000ml的冰浴的含2%PVA、 l%NaCl外水相溶液中攪拌速度 700r/m，時間2-3分鐘，再加入1500ml的外水相溶液，攪拌速度550r/m，攪拌4 小時，揮干有機溶劑，抽濾，用蒸餾水洗滌3次，冷凍干燥4天，得流動性較 好的白色粉末，包封率92. 1%，微球粒徑1 120iim微球平均粒徑36.4iim， 外觀圓整。實施例2:復乳-液中干燥法制備注射用胸腺肽ct t的緩釋微球 將lOOmg的胸腺肽a丄5g的甘露醇溶于6ml的PH7. 4的磷酸鹽緩沖液中， 6 g的聚乙交酯-丙交酯(乙交酯丙交酯=50 : 50 ，特性粘度 0,35dl/g:0.89dl/g=l:3)溶于130ml 二氯甲垸中，在高剪切乳勻機轉速 2000r/m作用下將水相倒入到油相中，2500r/m轉速下乳化5-8min得w/o乳液， 將w/o乳液倒入到1000ml的冰浴的含2%PVA、 P/。NaCl外水相溶液中攪拌速度700r/m，時間2-3分鐘，再加入1500ml的外水相溶液，攪拌速度550r/m攪拌時 間4小時，揮干有機溶劑，抽濾，用蒸餾水洗滌3次，冷凍干燥，得流動性較 好的白色粉末，包封率90. 2%，微球粒徑l 104pm，微球平均粒徑32. 5lim， 外觀圓整。實施例3:復乳-液中干燥法制備注射用胸腺肽a t的緩釋微球 將500 mg的胸腺肽a ,溶于20ml的PH7. 4的磷酸鹽緩沖液中，33g的聚 乙交酯-丙交酯(乙交酯:丙交酯二50 : 50，特性粘度0. 65dl/g:0. 80dl/g=l: 1) 和PEG-6000 3g溶于600ml 二氯甲垸中，在高剪切乳勻機轉速2000r/m作用下 將水相倒入到油相中，2500r/m轉速下乳化5-8min得w/o乳液，將w/o乳液 倒入到4000ml的冰浴的含2%PVA、 l%NaCl外水相溶液中攪拌速度700r/m,時 間2-3分鐘，再加入1000ml的外水相溶液，攪拌速度550r/m攪拌時間5小時， 揮干有機溶劑，抽濾，用蒸餾水洗滌3次，冷凍干燥，得流動性較好的白色粉 末，包封率92.6%，微球粒徑l 120um，微球平均粒徑86.3，外觀圓整。 實施例4:復乳-液中干燥法制備注射用胸腺肽a (的緩釋微球 將500mg的胸腺肽a t、5g的甘露醇溶于21ml的PH7. 4的磷酸鹽緩沖液中， 32. 5g的聚乙交酯-丙交酯(乙交酯丙交酯=50 : 50 ，特性粘度 0.65dl/g:0.80dl/g=l:2)溶于300ml 二氯甲垸中，在高剪切乳勻機轉速 2000r/m作用下將水相倒入到油相中，2500r/m轉速下乳化5min得w/o乳液， 將w/o乳液倒入到2500ml的冰浴的含2%PVA、 l%NaCl外水相溶液中攪拌速度 700r/m，時間2-3分鐘，再加入2000ml的外水相溶液，攪拌速度550r/m攪拌時 間4小時，揮干有機溶劑，抽濾，用蒸餾水洗滌3次，冷凍干燥，得流動性較 好的白色粉末，包封率93.2%，微球粒徑1-126um，微球平均粒徑67. 8 " m， 外觀圓整。實施例5:復乳-液中干燥法制備注射用胸腺肽a i的緩釋微球 將100mg的胸腺肽a!溶于6ml的水中，10g的聚乙交酯-丙交酯(乙交酯 :丙交酯二50 : 50，特性粘度0.65dl/g:0. 89dl/g二l:1.8)和PEG-6000 3g溶 于120ml 二氯甲烷中，在高剪切乳勻機轉速2000r/m作用下將水相倒入到油相 中，2500r/m轉速下乳化5min得w/o乳液，將w/o乳液倒入到3500ml的冰浴 的含2%PVA、 2%NaCl外水相溶液中攪拌速度700r/m,時間2-3分鐘，再加入 1000ml的外水相溶液，攪拌速度550r/m撹拌時間4小時，揮干有機溶劑，抽 濾，用蒸餾水洗滌3次，冷凍干燥，得流動性較好的白色粉末，包封率94.7%， 微球粒徑1-150um，微球平均粒徑55.4ym，外觀圓整。實施例6:復乳-液中干燥法制備注射用胸腺肽a ,的緩釋微球 將100mg的胸腺肽a ,溶于6ml的PH7. 4的磷酸鹽緩沖液中，10. 5g的聚 乙交酯-丙交酯(乙交酯丙交酯二50 : 50 ，特性粘度0. 65dl/g:0. 89dl/g=l:0. 5)和PEG-6000 3. 2g溶于120ml 二氯甲烷中，在高 剪切乳勻機轉速2000r/m作用下將水相倒入到油相中，2500r/m轉速下乳化 5min得w/o乳液，將w/o乳液倒入到3500ml的冰浴的含2%PVA、 1. 5%Na cl 外水相溶液中攪拌速度700r/m，時間2-3分鐘，再加入1000ml的外水相溶液， 攪拌速度550r/m攪拌時間4小時，揮干有機溶劑，抽濾，用蒸餾水洗滌3次， 冷凍干燥，得流動性較好的白色粉末，包封率91.2%，微球粒徑1-150um，微 球平均粒徑62. 3 u m，外觀圓整。實施例7:復乳-液中干燥法制備注射用胸腺肽a ,的緩釋微球 將1. 55g的胸腺肽a i溶于57ml的PH7. 4的磷酸鹽緩沖液中，90g的聚乙 交酯-丙交酯(乙交酯:丙交酯二50 : 50，特性粘度0. 65dl/g:0. 89dl/g二l: 1. 7) 和PEG-6000 2.25g溶于700ml 二氯甲烷中，在高剪切乳勻機轉速3500r/m作 用下將水相倒入到油相中，3500r/m轉速下乳化8min得w/o乳液，將w/o乳 液倒入到101的冰浴的含2%PVA、 2%NaCl外水相溶液中攪拌速度700r/m，時間 2-3分鐘，再加入1000ml的外水相溶液，攪拌速度700r/m攪拌時間4小時， 揮干有機溶劑，抽濾，用蒸餾水洗滌3次，冷凍干燥，得流動性較好的白色粉 末，包封率98.6%，微球粒徑1-150 um，微球平均粒徑76. 3 u m，外觀圓整。 實施例8:復乳-液中干燥法制備注射用胸腺肽a ,的緩釋微球 將200mg的胸腺肽a ,溶于12ml的PH7. 4的磷酸鹽緩沖液中，12g的聚乙 交酯-丙交酯(乙交酯:丙交酯二50 : 50，特性粘度0. 65dl/g:0. 90dl/g=2:3) 和PEG-6000 0. 3g溶于102ml 二氯甲烷中，在高剪切乳勻機轉速2500r/m作用 下將水相倒入到油相中，2500r/m轉速下乳化5min得w/o乳液，將w/o乳液 倒入到3500ml的冰浴的含2%PVA、 2%NaCl外水相溶液中攪拌速度700r/m，時 間2-3分鐘，再加入1000ml的外水相溶液，攪拌速度550r/m攪拌時間4小時， 揮干有機溶劑，抽濾，用蒸餾水洗滌3次，冷凍干燥，得流動性較好的白色粉 末，包封率96.2%，微球粒徑1-150um，微球平均粒徑48. 3 u m，外觀圓整。本發明人經過大量的篩選試驗及對平均粒徑、包封率、突釋影響的極差分 析發現內水相胸腺肽a 1的濃度、PLGA的濃度、攪拌速度、乳化強度、NaCl 濃度及其內外水相的比例對包封率、微球圓整度、微球粒徑大小和釋放度有決 定性影響。當采用本發明所述優選的輔料及工藝流程制備微球時可以實現10 25天 的持續釋放效果。以下通過體外釋放度試驗證明本發明的有益效果。 試驗例1:注射用胸腺肽a ,的緩釋微球體外釋放度試驗。 試驗樣品根據本發明實施例1所述的方法制備的樣品。 試驗試劑含0.2%吐溫80 PH7.4的磷酸鹽緩沖液試驗儀器水浴恒溫振蕩器、離心機。 試驗條件溫度37°C±0. 5°C試驗方法:精密稱取實驗樣品約12mg置于10ml的具塞離心試管中，加 5ml釋放介質(含0. 2%吐溫80 PH7. 4的磷酸鹽緩沖液)，置于水浴恒溫振蕩器 中保持一定的溫度按時取樣。取樣方法離心、棄取上清液、干燥48h，按含量測定方法測定剩余固體 的含量。(0.5h直接測定水溶液中T h含量)取樣時間0. 5h、 ld、 3d 、 5d 、 7d 、 10d試驗結果本發明所制備的微球體外釋放度0.5h釋放度為8.9。/。， 10天累 積釋放94.5%，體外釋放度圖見圖2。另附實施例1制備的注射用緩釋微球 樣品掃描電鏡圖，見圖1。試驗例2:胸腺肽a !的注射用緩釋微球體外釋放度試驗。試驗樣品根據本發明實施例2所述的方法制備的樣品。試驗試劑含0. 2%吐溫80 PH7. 4的磷酸鹽緩沖液試驗儀器水浴恒溫振蕩器、離心機。試驗條件溫度37°C±0. 5°C試驗方法精密稱取實驗樣品約12mg置于10ml的具塞離心試管中，加 5ml釋放介質(含0. 2%吐溫80 ffl7. 4的磷酸鹽緩沖液)，置于水浴恒溫振蕩器 中保持一定的溫度按時取樣。取樣方法離心、棄取上清液、干燥48h，按含量測定方法測定剩余固體 的含量。(0.5h直接測定水溶液中T c^含量)取樣時間0.5h、 ld、3d 、5d 、 7d 、 10d。試驗結果本發明所制備的微球體外釋放度0.5h釋放度為12.6%, 10天 累積釋放96. 3%，體外釋放度圖見圖3。試驗例3:胸腺肽a ,的注射用緩釋微球體外釋放度試驗。 試驗樣品根據本發明實施例3所述的方法制備的樣品。 試驗試劑含0. 2%吐溫80 PH7. 4的磷酸鹽緩沖液試驗儀器水浴恒溫振蕩器、離心機。 試驗條件溫度37°C±0.5°C試驗方法精密稱取實驗樣品約12mg置于10ml的具塞離心試管中，加 5ml釋放介質(含0. 2°/。吐溫80 PH7. 4的磷酸鹽緩沖液)，置于水浴恒溫振蕩器 中保持一定的溫度按時取樣。取樣方法離心、棄取上清液、干燥48h，按含量測定方法測定剩余固體 的含量。(0.5h直接測定水溶液中T a,含量)取樣時間0. 5h、 ld、 3d 、 5d 、 7d 、 10d試驗結果本發明所制備的微球體外釋放度0. 5h釋放度為6， 8%， 10天累積釋放97.9%，體外釋放度圖見圖4。試驗例4:胸腺肽a ,的注射用緩釋微球體外釋放度試驗。 試驗樣品根據本發明實施例4所述的方法制備的樣品。試驗試劑含0. 2%吐溫80 PH7. 4的磷酸鹽緩沖液試驗儀器水浴恒溫振蕩器、離心機。試驗條件溫度** 37°C±0. 5°C試驗方法精密稱取實驗樣品約12mg置于10ml的具塞離心試管中，加 5ml釋放介質(含0. 2%吐溫80 PH7. 4的磷酸鹽緩沖液)，置于水浴恒溫振蕩器 中保持一定的溫度按時取樣。取樣方法離心、棄取上清液、干燥48h，按含量測定方法測定剩余固體 的含量。(0.5h直接測定水溶液中T a,含量)取樣時間0. 5h、 ld、 3d 、 5d 、 7d 、 10d試驗結果本發明所制備的微球體外釋放度0. 5h釋放度為5. 6%， 10天累 積釋放95. 8%，體外釋放度圖見圖5。試驗例5:胸腺肽a ,的注射用緩釋微球體外釋放度試驗。 試驗樣品根據本發明實施例5所述的方法制備的樣品。 試驗試劑含0. 2%吐溫80 PH7. 4的磷酸鹽緩沖液試驗儀器水浴恒溫振蕩器、離心機。 試驗條件溫度37°C±0. 5°C試驗方法精密稱取實驗樣品約12mg置于10ml的具塞離心試管中，加 5ml釋放介質(含0. 2%吐溫80 PH7. 4的磷酸鹽緩沖液)，置于水浴恒溫振蕩器 中保持一定的溫度按時取樣。取樣方法離心、棄取上清液、干燥48h，按含量測定方法測定剩余固體 的含量。(0.5h直接測定水溶液中T q含量)取樣時間0. 5h、 ld、 5d 、 7d 、 10d、 15d試驗結果本發明所制備的微球體外釋放度0. 5h釋放度為3. 2%， 15天累 積釋放95. 5%，體外釋放度圖見圖6。試驗例6:胸腺肽a ,的注射用緩釋微球體外釋放度試驗。 試驗樣品根據本發明實施例6所述的方法制備的樣品。 試驗試劑含0.2%吐溫80 PH7.4的磷酸鹽緩沖液試驗儀器水浴恒溫振蕩器、離心機。試驗條件溫度37°C±0.5°C試驗方法精密稱取實驗樣品約12mg置于10ml的具塞離心試管中，加 5ml釋放介質(含0. 2%吐溫80 PH7. 4的磷酸鹽緩沖液)，置于水浴恒溫振蕩器中保持一定的溫度按時取樣。取樣方法離心、棄取上清液、干燥48h，按含量測定方法測定剩余固體 的含量。(0.5h直接測定水溶液中T a,含量)取樣時間O. 5h、 ld、 5d 、 7d 、 10d、 15d試驗結果本發明所制備的微球體外釋放度0.5h釋放度為8.9。/。， 15天累 積釋放94. 5%，體外釋放度圖見圖7。試驗例7:胸腺肽a ,的注射用緩釋微球體外釋放度試驗。 試驗樣品根據本發明實施例7所述的方法制備的樣品。 試驗試劑含0. 2%吐溫80 PH7. 4的磷酸鹽緩沖液試驗儀器水浴恒溫振蕩器、離心機。 試驗條件溫度37°C±0. 5°C試驗方法精密稱取實驗樣品約12mg置于10ml的具塞離心試管中，加 5ml釋放介質(含0.2y。吐溫80PH7.4的磷酸鹽緩沖液)，置于水浴恒溫振蕩器 中保持一定的溫度按時取樣。取樣方法離心、棄取上清液、干燥48h，按含量測定方法測定剩余固體 的含量。(0.5h直接測定水溶液中T a,含量)取樣時間0. 5h、 ld、 5d 、 10d、 15d、 21d試驗結果本發明所制備的微球體外釋放度0. 5h釋放度為4. 5%， 21天累 積釋放97. 1%，體外釋放度圖見圖8。試驗例8:胸腺肽a ,的注射用緩釋微球體外釋放度試驗。 試驗樣品根據本發明實施例8所述的方法制備的樣品。 試驗試劑含0. 2%吐溫80 PH7. 4的磷酸鹽緩沖液試驗儀器水浴恒溫振蕩器、離心機。 試驗條件溫度37°C±0. 5°C試驗方法精密稱取實驗樣品約12mg置于10ml的具塞離心試管中，加 5ral釋放介質(含0. 2%吐溫80 PH7. 4的磷酸鹽緩沖液)，置于水浴恒溫振蕩器 中保持一定的溫度按時取樣。取樣方法離心、棄取上清液、干燥48h，按含量測定方法測定剩余固體 的含量。(0.5h直接測定水溶液中T CM含量)取樣時間O. 5h、 ld、 5d 、 10d、 15d、 21d試驗結果本發明所制備的微球體外釋放度0. 5h釋放度為6. 1%， 21天累 積釋放96.8%,體外釋放度圖見圖9。 試驗例9穩定性對比試驗 a、采用單一的低粘度的PLGA制備微球將100mg的胸腺肽a 1溶于6. 25ml的水中，8g的聚乙交酯-丙交酯(乙交酯丙交酯=50 : 50)(特性粘度0. 30dl/g)和0. 3g甘露醇溶于110ml 二氯 甲烷中，在高剪切乳勻機轉速2000r/m作用下將水相倒入到油相中，2500r/m 轉速下乳化5-8min得w/o乳液，將w/o乳液倒入到15ml的冰浴的2%PVA、 2%Na Cl外水相溶液中攪拌速度500r/m，時間2-3分鐘，再加入1500ml的外水 相溶液,攪拌速度550r/m攪拌4小時，揮干有機溶劑，抽濾，用蒸餾水洗滌3 次，冷凍干燥4天，得流動性較好的白色粉末。結果包封率59.8%，包封率不 高造成極大的浪費，1天釋放度達60%，完全釋放時間為10天。突釋現象嚴 重。見圖10。b、試驗例二采用單一的高粘度的PLGA制備微球將lOOmg的胸腺肽a 1溶于6. 25ml的水中，8g的聚乙交酯-丙交酯(乙 交酯丙交酯二50 : 50)(特性粘度0. 89dl/g)和0. 3g甘露醇溶于110ml 二氯 甲烷中，在高剪切乳勻機轉速2000r/m作用下將水相倒入到油相中，2500r/m 轉速下乳化5-8min得w/o乳液，將w/o乳液倒入到15ml的冰浴的2%PVA、 l%Na Cl外水相溶液中攪拌速度700r/m，時間2-3分鐘，再加入1500ml的外水 相溶液，攪拌速度550r/m攪拌4小時，揮干有機溶劑，抽濾，用蒸餾水洗滌3 次，冷凍干燥4天，得流動性較好的白色粉末。結果包封率67.3%，包封率 不高造成極大的浪費且釋放時間過長。按照本文中提供的實驗方法，同等條件下，采用單一粘度聚乙交酯-丙交 酯時釋放時間和包封率的實驗結果如下表所示.-PLGA粘度(dl/g)0.250.300.550.800.95包封率％5562658586釋放時間(天)1010123040上述試驗可知，單一采用較高粘度的聚乙交酯-丙交酯，可以實現提高微球包封率，載藥量，也沒有突釋問題的存在，但釋放的時間長；單一采用較低 粘度的聚乙交酯-丙交酯包封后，釋放完全的時間較短，但包封率不高、載藥 量低，突釋現象較嚴重。與混合不同濃度的普通小分子材料的溶液后，能得到一種穩定濃度的均一 體系不同；采用兩種或幾種粘度的聚乙交酯-丙交酯按照一定的比例混合，可 以形成具有特性粘度特征、特定物理化學性質的混合物；由于構成不同粘度的 聚乙交酯-丙交酯高分子物質的聚合物本身的分子構成是不同的，同時高分子 物質具有分子量大，分子空間結構復雜的因素，上述混合物與僅僅按照數學平 均計算得到的單一均值濃度的聚乙交酯-丙交酯溶液的物理化學特征是完全不 同的，并可導致包封效果的明顯差異和穩定效果的差異，通過試驗結果可知， 采用兩種不同粘度的聚乙交酯-丙交酯混合，包封率均在92%以上，且能在10 一25天內平穩、完全釋放藥物。
權利要求
1、一種注射用胸腺肽α1緩釋微球制劑，其特征在于它是由微球重量的0.5％～10％的胸腺肽α1和微球重量的70％～99.5％的可降解的分子量為5，000～500,000道爾頓的藥用高分子輔料以及占微球重量的0％～10％的其它藥學上可接受的輔料制備而成的制劑；所述的藥用高分子輔料選自聚乙交酯-丙交酯、明膠、聚乳酸、聚乳酸-乙醇酸、聚乙醇酸、聚乙烯醇、聚乙二醇、羥基乙酸、聚乳酸-聚乙二醇、聚羥基丁酸酯-羥基戊酸共聚物中的一種或兩種以上的混合物。
2、 根據權利要求1所述的注射用胸腺肽a J愛釋微球制劑，其特征在于 所述的藥用高分子輔料的分子量為10， 000 400， 000道爾頓，重量百分含 量為78% 99. 5%。
3、 根據權利要求1或2所述的注射用胸腺肽a ,緩釋微球制劑，其特征 在于藥用高分子輔料選自聚乙交酯-丙交酯，其中，乙交酯和丙交酯比例為 50 : 50，特性粘度范圍為0. 15dl/g 0. 90dl/g。
4、 根據權利要求3所述的注射用胸腺肽cii緩釋微球制劑，其特征在于 所述聚乙交酯-丙交酯粘度范圍為0. 40dl/g 0. 90dl/g。
5、 根據權利要求3或4所述的注射用胸腺肽a i緩釋微球制劑，其特征 在于所述的聚乙交酯-丙交酯是由兩種不同粘度的聚乙交酯-丙交酯進行混 合后使用，其中，所述低粘度為0.3 0.65dl/g，高粘度為0. 5 0. 9dl/g; 低、高粘度的聚乙交酯-丙交酯的重量比為1 : 0.5 3。
6、 根據權利要求5所述的注射用胸腺肽c^緩釋微球制劑，其特征在于 所述低、高粘度的聚乙交酯-丙交酯的重量比為1 : 1 2。
7、 根據權利要求6所述的注射用胸腺肽a,緩釋微球制劑，其特征在于 所述的微球是由總投料量的1. 5%的胸腺肽a 1、占總投料量2. 4%的PEG-6000 和占總投料95.9%的聚乙交酯-丙交酯分別投料制備w/o微球，其中，兩種粘 度的聚乙交酯-丙交酯的重量配比為0.65dl/g:0.89dl/g=l : 1.7;再在PVA 的濃度為2%， NaCl的濃度為2%的水溶液中制備成w/o/w的微球。
8、 根據權利要求l-7任一項所述的注射用胸腺肽q緩釋微球制劑，其 特征在于所述的緩釋微球的粒徑為1 200um平均粒徑20 150iim。
9、 根據權利要求l-8任一項所述的注射用胸腺肽cn緩釋微球制劑，其 特征在于所述的制劑為皮下注射或肌肉注射制劑。
10、 一種制備權利要求1所述的注射用胸腺肽a ,緩釋微球制劑的方法， 包括如下步驟第一步，首先用有機溶劑將可降解的藥用高分子輔料溶解成油相，然后 將另外溶有胸腺肽h的內水相加入其中，將油相和水相置與攪拌器內，以每分鐘2000 3000轉高速攪拌5 8分鐘，形成w/o乳液，之后將w/o乳液滴 加入到0-8'C的冰浴1%—5%的PVA的外水相中形成W/0/W復乳攪拌3-5分鐘； 第二步，將上述所得W/0/W復乳中再加入含1-5%的PVA、含l 5%NaCl 水溶液，在每分鐘400-700轉的低速攪拌下揮發有機溶劑；微球固化后，過 濾，濾掉大顆粒，抽濾、洗滌、干燥即得微球。
全文摘要
本發明提供了一種注射用胸腺肽α₁緩釋微球制劑，它是由微球重量的0.5％～10％的胸腺肽α₁和微球重量的70％～99.5％的可降解的分子量為5,000～500,000道爾頓的藥用高分子輔料以及占微球重量的0％～10％的其它藥學上可接受的輔料制備而成的制劑。本發明還提供了該緩釋微球制劑的制備方法。本發明注射用胸腺肽α₁緩釋微球制劑可降低胸腺肽α₁的毒副作用，提高生物利用度，同時減少給藥次數，方便患者用藥。
文檔編號A61K47/36GK101244259SQ20081000825
公開日2008年8月20日 申請日期2008年2月14日 優先權日2007年2月14日
發明者劉忠榮, 劉金花, 及元喬, 兵 葉, 李伯剛 申請人:成都地奧九泓制藥廠