專利名稱：：含有北玄參提取物的皮膚外用組合物以及該組合物用作皮膚保濕化妝品的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及用于緩解皮膚干燥癥狀的皮膚外用組合物，以及該外用組合物用作皮膚保濕化妝品的應(yīng)用，所述外用組合物含有北玄參提取物(5"crap/2w/anb^wgen'awaM^)作為主要成分并且還含有茯苳提取物(尸on'acocos『o/y)。更確切地說，本發(fā)明涉及一種含有北玄參提取物和茯苓提取物作為有效成分的皮膚外用組合物，以及該外用組合物用作皮膚保濕化妝品的應(yīng)用，當(dāng)在皮膚上使用所述外用組合物時，該外用組合物能夠正常地恢復(fù)和維持皮膚角質(zhì)化細(xì)胞的分化，因此能夠預(yù)防或緩解由不完全的表皮分化所導(dǎo)致的皮膚干燥癥狀、過敏癥狀以及接觸性皮炎。
背景技術(shù)：
：皮膚最外層的表皮最重要的功能是保護(hù)機(jī)體免受各種外部刺激(物理和化學(xué)刺激，包括化學(xué)物質(zhì)、污染物、干燥的環(huán)境和紫外線)的功能以及防止機(jī)體內(nèi)的水份通過皮膚過度蒸發(fā)的功能。只有在正常形成由角質(zhì)化細(xì)胞組成的角質(zhì)層(角質(zhì)化層)時，才能夠維持這樣的保護(hù)性功能。作為表皮最外層的角質(zhì)層是由角質(zhì)化細(xì)胞形成的并由分化的角質(zhì)化細(xì)胞和環(huán)繞在角質(zhì)化細(xì)胞周圍的脂質(zhì)所組成(J.Invest.Dermatol.1983;80:44-49)。角質(zhì)化細(xì)胞是通過以下過程形成的特定細(xì)胞在表皮的最底層連續(xù)增殖的基底層細(xì)胞經(jīng)歷逐步的形狀及功能的改變，并升至皮膚的表層。在給定時間的傳代之后，死亡的角質(zhì)化細(xì)胞從皮膚上去除掉并由新生的角質(zhì)化細(xì)胞代替，這個重復(fù)的過程稱作"表皮細(xì)胞的分化或角質(zhì)化"。在角質(zhì)化過程中，在形成角質(zhì)層的過程中角質(zhì)化細(xì)胞產(chǎn)生具有天然保濕因子(NMF)的細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)(神經(jīng)酰胺、膽固醇和脂肪酸)，從而使角質(zhì)層具有作為皮膚屏障的硬度和彈性。然而，由于生活習(xí)慣的原因(例如，過度的洗滌或沐浴)、環(huán)境因素(例如，干燥的環(huán)境或污染物)以及內(nèi)在疾病(過敏性皮膚或老化皮膚)，角質(zhì)層易于喪失其自身的功能。事實上，患有由多種因素引發(fā)的干燥皮膚綜合癥和由干燥皮膚綜合癥引發(fā)的多種紊亂的患者近年來逐漸地增多。因此，為了將皮膚的水含量維持在合適的水平，進(jìn)行了很多的研究，這些研究的焦點都在于提供外源水源或者防止機(jī)體內(nèi)水份的流失，實際上，已經(jīng)開發(fā)出了多種具有持水能力的保濕劑并主要在化妝品領(lǐng)域內(nèi)進(jìn)行了應(yīng)用。然而，由于對人體有害的環(huán)境因素的不斷增加以及老齡化人口的迅速增長，出現(xiàn)以下皮膚狀況的人數(shù)逐漸地增多角質(zhì)層周轉(zhuǎn)率降低，角質(zhì)化細(xì)胞合成脂質(zhì)的能力下降，或者表皮中的細(xì)胞的正常分裂、生長和分化不穩(wěn)定，從而導(dǎo)致角質(zhì)層中保濕因子和脂質(zhì)的量減少，因此，無法維持角質(zhì)層的正常功能，即，皮膚屏障功能受到損害。表皮細(xì)胞的這種不正常的分裂和分化能夠?qū)е露喾N皮膚疾病，包括干燥皮膚(干燥癥)、過敏癥以及牛皮癬。當(dāng)在皮膚上使用具有持水功能的保濕劑時，可以顯著地減少這些皮膚疾病，但很難對這些皮膚疾病進(jìn)行徹底的治療。
發(fā)明內(nèi)容因此，本發(fā)明人開發(fā)了調(diào)控表皮細(xì)胞分化的物質(zhì)并嘗試著在皮膚上使用開發(fā)的物質(zhì)，以誘導(dǎo)角質(zhì)層的正常生成的去除并增強(qiáng)天然保濕因子在角質(zhì)層中的生成和維持，從而徹底地預(yù)防或治療干燥皮膚疾病，包括干燥皮膚(干燥癥)及由此引發(fā)的過敏癥。本發(fā)明進(jìn)行了與表皮細(xì)胞分化有關(guān)的研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)北玄參(5bra//w/a〃'"Zwe^e〃'"w"A/ir々)提取物和茯苳(戶or/"『o//)提取物具有促進(jìn)角質(zhì)化細(xì)胞分化的功能；另外，還具有能夠促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)神經(jīng)酰胺合成的功能；以及激活由過氧化物酶增殖子激活的受體-a(PPAR-cO(—種核激素受體)的功能，該受體-a能夠促進(jìn)角質(zhì)化細(xì)胞的分化和抑制角質(zhì)化細(xì)胞的增殖，并且所述受體-a能夠增加細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)的合成，通過這些發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的發(fā)明人更加確認(rèn)了北玄參(&rap/zw/aWa6wwgen'a加M々)提取物和茯苓(尸onVzcocas提取物的作用。另外，本發(fā)明的發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)，當(dāng)將這些提取物以皮膚外用制劑的形式施用于動物皮膚上時，它們增強(qiáng)了皮膚的屏障功能，從而完成了本發(fā)明。因此，本發(fā)明的一個目的是促進(jìn)角質(zhì)化細(xì)胞在表皮內(nèi)的正常分化以誘導(dǎo)以下作用(1)正常誘導(dǎo)作為形成角質(zhì)層和皮膚屏障的主要骨架成分的角質(zhì)化細(xì)胞的作用，從而使皮膚免受外部的物理刺激；(2)促進(jìn)環(huán)繞著角質(zhì)化細(xì)胞以形成皮膚屏障的脂質(zhì)的生物合成的作用，從而加強(qiáng)了皮膚屏障。本發(fā)明的另一個目的在于提供一種用于皮膚保濕的外用組合物，該組合物通過提取物的作用增強(qiáng)了皮膚的彈性和硬度從而能夠提高皮膚的持水能力，因此，使皮膚能夠順暢地行使其原始的保護(hù)功能，此外，該組合物還能夠減少由皮膚干燥引起的細(xì)微鈹紋的形成，從而預(yù)防和治療了皮膚干燥疾病，例如，干燥皮膚或過敏癥。為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種皮膚保濕外用組合物，其中，該外用組合物含有北玄參提取物作為活性成分。除了含有北玄參提取物以外，根據(jù)本發(fā)明的組合物還可以含有茯苓提取物。所述皮膚保濕外用組合物優(yōu)選含有0.0001-30重量％的北玄參提取物。同樣，所述皮膚保濕外用組合物優(yōu)選用于增強(qiáng)皮膚的屏障功能、促進(jìn)角質(zhì)化細(xì)胞的分化、促進(jìn)神經(jīng)酰胺的產(chǎn)生或激活PPAR-a。此外，本發(fā)明還提供了含有北玄參提取物作為活性成分的外用組合物用作皮膚保濕化妝品的應(yīng)用。下文中，將對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)的描述。本發(fā)明中所用的北玄參(5"crop/w/an'aZ^wgen'a""M^)是一種屬于玄參科的多年生植物，分布在韓國、中國、日本等國家，其根部在中醫(yī)中被用作藥材。北玄參含有作為主要成分的玄參素(Scrophularine)、植物甾醇(phytosterol)、植物固醇(Phytosterine),此外，北玄參還含有糖類、精油(essentialoils)、脂肪酸等。北玄參具有退燒和改善心肌功能的作用，因此，被用于治療咽喉痛、扁桃體炎、結(jié)膜炎、淋巴腺炎等，并且能夠有效地抵抗具有發(fā)熱癥狀的各種疾病。本發(fā)明中所用的茯苓(Pon'acocos『o/"是多孔菌科(Po/y;oraceae)家族中的一員，生活在松樹的根部。茯苓是直徑為約30-50cm的菌塊，其外部與松樹皮一樣粗糙，其內(nèi)部的顏色為白色或粉紅色。生活在松樹的根部的茯苓的內(nèi)部為白色，生活在日本松樹的根部的茯苓的內(nèi)部為粉紅色。茯苓的三蔽烯組分被報道具有抗嘔吐和抗炎癥等的作用，茯苓的菌核含有相當(dāng)于茯苓干重的93%的卩-茯苓聚糖。茯苓還含有三萜系化合物、茯苓酸(pachymicacid)、塊苳酸(tumulosicacid)、松苳新酸(3卩-羥基羊毛甾-7,9，24-三烯-2-酸，3卩-hydroxylanosta-7,9and24-triene-2-acid)，此外，還含有角素、固醇、卵磷脂、腺嘌呤、組氨酸、膽堿、脂肪酶、蛋白酶等。此外，茯苓還長期地被用作補(bǔ)藥。藥理學(xué)結(jié)果揭示了茯苓具有利尿作用、降血糖作用以及鎮(zhèn)靜作用，并且還具有免疫激活作用。此外，對婦科疾病也具有效果。在本發(fā)明的皮膚保濕外用組合物中，以所述組合物的總重量為基準(zhǔn)，所述北玄參提取物的量或所述北玄參提取物與茯苓提取物的組合的量為0.0001-30重量％。如果所述提取物的含量小于0.0001重量％，則所述提取物不能夠提供皮膚保濕的作用、增強(qiáng)皮膚的屏障功能的作用、以及誘導(dǎo)皮膚角質(zhì)化細(xì)胞分化的作用；如果所述提取物的含量大于30重量％，則含量的增加并不能夠顯著地增強(qiáng)所述提取物的作用。根據(jù)本發(fā)明的皮膚保濕外用組合物可以作為化妝品組合物或藥物組合物，本發(fā)明組合物的組成將在下文中進(jìn)行更加詳細(xì)的描述。除了上文中描述的北玄參提取物和茯苓提取物以外，根據(jù)本發(fā)明的化妝品組合物可以含有其它組分，這些其它組分能夠增強(qiáng)本發(fā)明組合物的主要作用，只要不對本發(fā)明組合物的主要作用產(chǎn)生不利影響即可。雖然，上文描述的本發(fā)明北玄參提取物和茯苓提取物優(yōu)選被制成化妝品產(chǎn)品并被施用在皮膚上，但它們也可以被制成常規(guī)的外用制劑形式。包括含有上述北玄參提取物和茯苓提取物的本發(fā)明組合物的化妝品組合物可以為溶液、乳劑或粘性混合物的形式。為了提供使皮膚保濕的作用、增強(qiáng)皮膚的屏障功能的作用、或誘導(dǎo)皮膚角質(zhì)化細(xì)胞分化的作用，本發(fā)明的化妝品組合物可以在多種化妝品中使用。本發(fā)明的組合物的產(chǎn)品的例子包括化妝品，例如，乳劑(creams)、洗劑禾口皮膚洗齊U(lotionsandskinlotions)、清潔泡沫(cleansingfoams)、洗面奶(facecleansers)、香阜(soaps)、美容液(beautysolutions)等等。特別地，對本發(fā)明的化妝品組合物的劑型沒有特別的限制，所述化妝品組合物的劑型的例子可以包括皮膚洗液(skinlotion)、收斂洗液(astringentlotion)、乳液(milklotion)、營養(yǎng)霜(nourishingcream)、按摩霜(massagecream)、香精(essence)、目艮霜(eyecream)、目艮部香精(eyeessence)、填充劑(pack)、凝膠(gel)、粉劑(powder)、粉底(makeupbase)、打底劑(foundation)、軟膏(ointment)、貼劑(patch)、美容液(beautysolution)、清潔泡沫(cleansingfoam)、清潔霜(cleansingcream)、清潔水(cleansingwater)、身體洗液(bodylotion)、身體用霜劑(bodycream)、身體用油(bodyoil)、身體用香精(bodyessence)、洗發(fā)劑(shampoo)、清洗劑(rinse)、身體清潔劑(bodycleanser)、香皂(soap)、染發(fā)劑(hairdye)、以及噴8霧劑(spmy)等等。在各種劑型的化妝品組合物中，除了上述北玄參提取物和茯苓提取物以外，本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)所述化妝品組合物的劑型或使用目的還可以容易地選擇其它適合的組分。本發(fā)明的藥物組合物還可以含有在藥物組合物的制備中常用的合適的載體、賦形劑或稀釋劑。根據(jù)常規(guī)的方法，含有上述北玄參提取物和茯苓提取物的本發(fā)明藥物組合物可以被制成各種適于藥物應(yīng)用的制劑，包括外用制劑，例如，軟膏(ointments)、凝膠(gels)、霜劑(creams)、貼劑(patches)或噴霧劑(sprays)。每種制劑均可以含有對于該種制劑需要的且合適的各種基底材料和添加劑，本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以容易地對這些組分的種類和用量進(jìn)行選擇。根據(jù)患者的年齡、性別、體重和疾病狀況以及給藥方式，可以對所述制劑的劑量進(jìn)行調(diào)整，但優(yōu)選情況下，每種所述制劑的給藥量為1.0-3.0毫升/天，每天l-5次，持續(xù)至少一個月。同時，本發(fā)明的北玄參提取物和茯苓提取物具有很小或根本不具有毒副作用，因此，可以安全地用于長期的保護(hù)目的。本發(fā)明的皮膚保濕外用組合物的特征在于，除了含有北玄參提取物以外，它還含有茯苓提取物。本發(fā)明的皮膚外用組合物可以常規(guī)地誘導(dǎo)作為形成角質(zhì)層和皮膚屏障的骨架組分的角質(zhì)化細(xì)胞，從而使皮膚能夠免受外部的物理刺激。此外，本發(fā)明的外用組合物能夠促進(jìn)環(huán)繞于角質(zhì)化細(xì)胞來形成皮膚屏障的脂質(zhì)的生物合成，從而增強(qiáng)皮膚的屏障作用。由于這些作用的優(yōu)點，含有所述北玄參提取物和茯苳提取物的本發(fā)明皮膚外用組合物能夠有益地用作皮膚保濕的化妝品或藥物組合物，以防止或緩解由表皮的不完全分化導(dǎo)致的干燥皮膚、過敏性皮炎、接觸性皮炎或牛皮癬，并增強(qiáng)皮膚的屏障功能以及誘導(dǎo)皮膚角質(zhì)化細(xì)胞的分化。具體實施例方式下面，參考實施例和測試實施例對本發(fā)明進(jìn)行更加詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的范圍并不限制于這些實施例。如本發(fā)明參考實施例l-6中所描述的，通過使用提取溶劑分別從冷凍干燥的北玄參和茯苳中提取有效成分并對提取物進(jìn)行濃縮和干燥，制備得到北玄參提取物和茯苓提取物。在北玄參中加入北玄參重量的l-15倍的水、低碳醇(如甲醇或乙醇)、乙酸乙酯或正己烷。然后，將北玄參于50-10(TC加熱3-24小時或于所述溶劑中在4-25t:浸漬3-4天，來提取北玄參的有效成分。此外，將無水的或含水的甲醇和乙醇提取物溶解于合適量的水與乙酸乙酯、丁醇或己烷的混合溶劑中并放置以使其分層，然后分離出上層。使用真空蒸發(fā)器對由此得到的提取物進(jìn)行濃縮并進(jìn)行干燥，并將干燥的提取物溶解在溶劑(例如，水、乙醇或l,3-丁二醇)中。通過與上述描述的提取北玄參的方法相同的方法對干燥粉末狀的茯苳進(jìn)行提取。特別地，在干燥粉末狀的茯苓中加入茯苓重量的1-15倍的水、低碳醇(例如甲醇或乙醇)、乙酸乙酯或正己烷，然后將加入后的茯苓在50-10(TC下加熱提取3-24小時或者浸漬在所述溶劑中于4-25"C下提取3-4天，以提取出茯苳的有效成分。此外，將無水的或含水的甲醇和乙醇提取物溶解于合適量的水與乙酸乙酯、丁醇或己烷的混合溶劑中并放置以使其分層，然后分離出上層。使用真空蒸發(fā)器對由此得到的提取物進(jìn)行濃縮并進(jìn)行干燥，并將干燥的提取物溶解在溶劑(例如，水、乙醇或l，3-丁二醇)中。因為在以下參考實施例中通過參考實施例1的提取方法得到的提取物具有最高的效力，所以在以下測試實施例中僅對參考實施例1的提取物進(jìn)行論述，以證明本發(fā)明的北玄參提取物和茯苓提取物的作用。此外，參考實施例2-6中提取物的效力通常比參考實施例1中提取物的效力低約10-50%，本發(fā)明的范圍包括所有的參考實施例1-6中的提取物。參考實施例l:草藥藥材水提取物的制備分別將200g的冷凍干燥的北玄參和茯苓(購自Kimwha制藥有限公司，韓國)碾碎，并在其中加入10倍重量的水。然后，在充分振蕩的條件下于8(TC對所述草藥藥材提取18小時。將提取物冷卻至室溫并用濾紙過濾，分別在各濾液中加入4kg的乙醇并放置48小時。然后，過濾該溶液，并分別將形成的各沉淀物溶解在2kg的蒸餾水中并再次進(jìn)行過濾。在真空蒸發(fā)器中對最終的濾液進(jìn)行濃縮，由此獲得北玄參和茯苓的水提取物。參考實施例2:草藥藥材乙醇提取物的制備分別將200g的冷凍干燥的北玄參和茯苓加入到10倍重量的70%的乙醇中并在8(TC加熱2小時以提取其有效成分。將提取物在室溫下放置2天以沉淀雜質(zhì)，然后將提取物用濾紙過濾兩次。在真空蒸發(fā)器中對濾液進(jìn)行濃縮，由此獲得北玄參和茯苳的乙醇提取物。參考實施例3:草藥藥材甲醇提取物的制備分別將200g的冷凍干燥的北玄參和茯苓加入到10倍重量的甲醇中并在70。C加熱2小時以提取其有效成分。將提取物在室溫下放置2天以沉淀雜質(zhì)，然后將提取物用濾紙過濾兩次。在真空蒸發(fā)器中對濾液進(jìn)行濃縮，由此獲得北玄參和茯苓的甲醇提取物。參考實施例4:草藥藥材的己烷和乙酸乙酯提取物部分(fraction)ii分別將在參考實施例3中制備的北玄參提取物和茯苓提取物加入并完全懸浮在20倍重量的水和己烷(1:1)的混合溶劑中。然后，分別將各懸浮液在室溫下放置1天以使其分層。僅分離出上部的己烷層并在真空蒸發(fā)器內(nèi)進(jìn)行濃縮，由此分別獲得北玄參和茯苓的己垸提取物部分。將下部的水層加入到2倍重量的乙酸乙酯溶劑中并進(jìn)行振蕩，然后在室溫下放置1天以使其分層。將上部的乙酸乙酯層分離出并在真空蒸發(fā)器中濃縮，由此分別獲得北玄參和茯苓的乙酸乙酯提取物部分。參考實施例5:草藥藥材的丁醇提取物部分將在參考實施例4中獲得乙酸乙酯提取物部分的過程中得到的下部水層加入至2倍重量的丁醇中，并用與參考實施例4中的方法相同的方法進(jìn)行處理，由此分別獲得北玄參和茯苓的丁醇提取物部分。參考實施例6:草藥藥材的水提取物部分將在參考實施例5中得到的各水層在真空蒸發(fā)器中進(jìn)行濃縮，由此分別獲得北玄參和茯苓的水提取物部分。分別將北玄參提取物和茯苓提取物或者濃縮的北玄參提取物和茯苓提取物以30%(重量/重量)的濃度溶解于水中、以5%(重量/重量)的濃度溶解于1,3-丁二醇中、或者以10%(重量/重量)的濃度溶解于乙醇中。將各溶液加入到化妝品制劑中，例如皮膚洗液、牛奶狀洗液、香精或填充劑中。為了證明本法發(fā)明參考實施例1中得到的北玄參提取物和茯苓提取物的效力，進(jìn)行以下試驗。在下述實施例3中，將北玄參提取物和茯苓提取物彼此以l:l的比例混合。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>測試實施例l:對人角質(zhì)化細(xì)胞分化的誘導(dǎo)為了檢測北玄參提取物和茯苓提取物促進(jìn)細(xì)胞分化的效力，通過以下方法進(jìn)行測試(1)通過吸光度來檢測在角質(zhì)化細(xì)胞分化過程中形成的角質(zhì)化外膜(comifiedenvelops,CE)的量的方法；(2)使用同位素來檢測在角質(zhì)化細(xì)胞分化過程中形成的角質(zhì)化外膜(cornifiedenvelops,CE)的量的方法。在第一種檢測吸光度的測試中，將原代培養(yǎng)的人角質(zhì)化細(xì)胞放置在培養(yǎng)瓶中，并允許附著在培養(yǎng)瓶的底部。然后將如下表2所示的試驗材料以表2所示的濃度加入到培養(yǎng)基中，并培養(yǎng)細(xì)胞5天直至細(xì)胞的匯合度(confluence)達(dá)到70-80%。收集細(xì)胞并使用磷酸鹽緩沖液(PBS)進(jìn)行清洗。然后，將含有2%的十二烷基磺酸鈉(SDS)的ImMTris-HCl(pH7.4)和20mM的二硫蘇糖醇(DTT)加入到細(xì)胞中，然后對細(xì)胞進(jìn)行超聲處理、煮沸處理和離心處理。將離心的沉淀物再次懸浮在1ml的PBS中并檢測340nm處的吸光度。同時，取超聲處理后的溶液部分，檢測其中的蛋白質(zhì)含量并將取樣的樣品作為評價細(xì)胞分化的參照。分別使用低鈣處理的組(0.03mM)和高鈣處理的組(1.2mM)作為陰性對照組和陽性對照組，向低濃度鈣中添加試驗材料而進(jìn)行的測試結(jié)果如表2和圖1所示。在第二種使用同位素來檢測角質(zhì)化外膜的量的測試中，將原代培養(yǎng)的人皮膚細(xì)胞系放置在24孔培養(yǎng)盒中，并允許附著在培養(yǎng)盒的底部。然后將1uCi/ml的[35S]-甲硫氨酸與如下表2所示的試驗材料以表2所示的濃度加入到培養(yǎng)基中，并培養(yǎng)細(xì)胞2天直至細(xì)胞的匯合度(confluence)達(dá)到70-80%。收集細(xì)胞并使用磷酸鹽緩沖液(PBS)進(jìn)行清洗。然后，將含有2%的十二垸基磺酸鈉(SDS)的500|il的PBS和20mM的二硫蘇糖醇(DTT)加入到細(xì)胞中，吸取細(xì)胞溶液。然后，將100nl的細(xì)胞溶液分裝在各個閃爍管(scintillationvial)中，并在管中加入2.5ml的雞尾酒溶液(cocktailsolution)，通過液體閃爍計數(shù)法(LSC)來檢測細(xì)胞溶液的放射性，以確定總蛋白量。根據(jù)確定的總蛋白量，將相應(yīng)量的各試驗材料用25-mm的過濾器過濾。只將殘留在過濾器上的不溶性蛋白質(zhì)取下，過濾器本體置于閃爍管上。在管中加入2.5ml的雞尾酒溶液，對過濾器進(jìn)行完全的溶解，使用液體閃爍計數(shù)法來檢測溶液的放射性。檢測到的值除以上述制備的總的蛋白量，得到在分化過程中形成的CE的量。檢測結(jié)果如表2和圖2所示。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>如上表2所示，本發(fā)明的北玄參提取物和茯苓提取物促進(jìn)了角質(zhì)化細(xì)胞和人皮膚細(xì)胞系的分化。此外，還可以看出，使用北玄參提取物和茯苓提取物的混合物比單獨使用北玄參提取物更加有效。測試實施例2:人皮膚細(xì)胞系中轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶的表達(dá)將人皮膚細(xì)胞系以5xl04個細(xì)胞/孔的濃度置于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板的各個孔中，并允許附著在底部24小時。使用試驗材料的乙酰膽堿(Ach)對附著的細(xì)胞系進(jìn)行處理，兩天后移出培養(yǎng)基，將細(xì)胞于-2(TC下保存。通過重復(fù)的凍融兩次使細(xì)胞破裂，然后使用丙酮乙醇的混合物(h1，V/V)進(jìn)行處理，在4"C下放置30分鐘固定細(xì)胞。放置細(xì)胞以蒸發(fā)有機(jī)溶劑并使用1%的胎牛白蛋白進(jìn)行阻斷，加入轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶(第一抗體)和HRP(辣根過氧化物酶)抗鼠第二抗體和鄰苯二胺(OPD)以使細(xì)胞顯色。通過檢測490nm處的吸光度來確定細(xì)胞中轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶的表達(dá)，通過檢測630nm處的背景對檢測進(jìn)行校正。分別使用低鈣處理的組(0,03mM)和高鈣處理的組(1.2mM)作為陰性對照組和陽性對照組，向低濃度鈣中添加試驗材料而進(jìn)行的測試結(jié)果如表3和圖3所示。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>從上表3和圖3可以看出，本發(fā)明的北玄參提取物和茯苓提取物使轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶的表達(dá)水平比陰性對照組高兩倍以上，與陰性對照相比顯示出對轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶的表達(dá)水平具有顯著的提高，因此，可以看出，本發(fā)明的北玄參提取物和茯苓提取物能夠提高轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶的表達(dá)。此外還可以看出，使用北玄參提取物和茯苓提取物的混合物比單獨使用北玄參提取物更加有效。測試實施例3:皮膚屏障恢復(fù)以及裸鼠皮膚保濕能力的測試為了評價北玄參提取物和茯苓提取物在由于長期皮膚損傷引起的皮膚屏障功能受損的恢復(fù)中的效力，進(jìn)行以下試驗。使用丙酮在8-10周鼠齡的裸鼠的背部上進(jìn)行涂抹，每天兩次共5天，以破壞皮膚的屏障功能。然后，使用蒸發(fā)計檢測小鼠皮膚的經(jīng)表皮水損失(TEWL)，當(dāng)在給定的時間間隔內(nèi)檢測鼠皮膚的經(jīng)表皮水損失(TEWL)時，分別使用賦形劑(丙二醇乙醇二7:3)和含有5重量％的北玄參提取物/茯苳提取物的混合物的試驗材料僅在具有經(jīng)表皮水損失高于40g/m2/hr的皮膚的試驗動物上施用，施用劑量為每5平方厘米皮膚200nl，每天兩次共3天。在給定的時間間隔測量小鼠皮膚的TEWL。檢測結(jié)果如圖4所示。如圖4所示，在使用北玄參提取物/茯苓提取物的混合物處理的組中，受損的皮膚屏障功能恢復(fù)的比賦形劑組更快。此外，在檢測經(jīng)表皮水損失(TEWL)的過程中，使用水份測試儀Comeometer(CourageKhazaka公司，德國)檢測皮膚的含水量，結(jié)果顯示，使用北玄參提取物/茯苓提取物處理的組中的皮膚含水量高于用賦形劑處理的組中的皮膚含水量。因此可以看出，在使用北玄參提取物/茯苓提取物的混合物處理的組的情況下，皮膚含水量增加并恢復(fù)了受損的皮膚屏障功能。檢測結(jié)果如圖5所示。測試實施例4:發(fā)明的提取物在增加人類皮膚的表皮脂質(zhì)(總神經(jīng)酰胺)的生成中的效力的試驗為了評價北玄參提取物和茯苓提取物在增加人類皮膚的脂質(zhì)的合成中的效力，進(jìn)行以下試驗。試驗材料的組合物含有0.5X的聚羧乙烯ETD2020、0.45%的TEA0.45%、5%的試驗材料以及余量的去離子水。在12個成年男性和女性的手臂上，標(biāo)記具有與50ml的聚丙烯錐管的大小相適應(yīng)的大小的區(qū)域，然后向受試者施用20^1的各對照組、北玄參提取物、以及北玄參提取物/茯苓提取物的混合物。此處，將受試者分為兩組，通過以下方式在施用的第3天和第11天從受試者體內(nèi)提取脂質(zhì)，并對提取的脂質(zhì)進(jìn)行分析。特別地，使用供應(yīng)的水清洗手臂，然后使用Scotch810魔術(shù)膠帶剝離一次。然后，使用作為容器的50ml的經(jīng)剪切的聚丙烯錐管將lml的環(huán)己烷/乙醇(4:1)的混合物加入到手臂上，振蕩約1分鐘，然后移至新的管中。然后，將lml的環(huán)己烷/乙醇(1:1)的混合物加入到管中并振蕩約1分鐘，然后再轉(zhuǎn)移至新管中。在5(TC下使用氮氣將管中的內(nèi)含物干燥，溶解并保存在50(^1的氯仿甲醇(2:1)中。使用自動薄層層析加樣器-4(CAMAG)將每個樣品加樣至硅膠薄層層析(薄層層析，TLC)板上，然后使用AMD(自動多重展開儀)在具有如下表4所示的組合物比例的展開溶劑中展開。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>在TLC板展開后，使用TLC掃描儀-II光密度計(CAMAG)在570nm波長處檢測各條帶的大小。相對于未處理組的神經(jīng)酰胺的產(chǎn)量(表示為100%)的各處理組中的神經(jīng)酰胺的產(chǎn)量如表5和圖6所示。表5<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>如表5和圖6所示，在處理后的3天和11天，分別用北玄參提取物、茯苓提取物、以及北玄參提取物/茯苓提取物的混合物處理的組中神經(jīng)酰胺的產(chǎn)生比使用陰性對照(未處理組/賦形劑)處理的組中以及陽性對照(丙三醇)處理的組中的神經(jīng)酰胺的產(chǎn)生有顯著的增加。這表明北玄參提取物和茯苓提取物能夠使神經(jīng)酰胺的產(chǎn)生增加。此外還可以看出，使用北玄參提取物和茯苓提取物的混合物比單獨使用北玄參提取物更加有效。測試實施例5:關(guān)于PPAR-a(過氧化物酶增殖子激活的受體-a)在促進(jìn)皮膚細(xì)胞分化、抑制皮膚細(xì)胞增殖、促進(jìn)脂質(zhì)的生物合成、以及抗炎癥中起到的激活作用的測試在含有碳/葡聚糖處理的10X的胎牛血清的DMEM(達(dá)爾伯克氏改良的伊格爾氏培養(yǎng)基)中次代培養(yǎng)猴腎上皮細(xì)胞系CV-1(ATCCCCL70)。使用不含酚紅的培養(yǎng)基以避免酚紅的雌激素作用。使用的質(zhì)粒為以PPRE(PPARs響應(yīng)元件)作為啟動子的質(zhì)粒，且以螢火蟲熒光素酶基因作為報告基因，被PPAR(含有PPAR-以及配體結(jié)合的PPAR-的基因)激活的PPRE與在普通培養(yǎng)條件下表達(dá)的通用啟動子相連；以及使用連接了花蟲熒光素酶基因的參比質(zhì)粒。以每孔5xl(^個細(xì)胞的濃度，將CV-I細(xì)胞置于24孔的微量滴定板上培養(yǎng)24小時。然后，將上述三種質(zhì)?；蜻M(jìn)行瞬時轉(zhuǎn)染。培養(yǎng)24小時后，使用1倍的PBS(磷酸鹽緩沖液)洗滌培養(yǎng)板并用多種濃度的候選配體進(jìn)行處理。再次培養(yǎng)24小時后，使用1倍的PBS洗滌培養(yǎng)板并用1倍的PLB(惰性裂解緩沖液)裂解細(xì)胞，并使用Dual-Luciferase11報告分析系統(tǒng)試劑盒檢測熒光素酶的活性。在這個實驗中，陽性對照為己知為最有效PPAR-a配體的Wy-14，643，陰性對照為用于溶解樣品的乙醇和未處理組。結(jié)果如圖7所示。如圖7所示，使用北玄參提取物和茯苓提取物的混合物比單獨使用北玄參提取物對于激活PPAR-a更加有效。從上述結(jié)果中可以看出，北玄參提取物和茯苓提取物在促進(jìn)皮膚細(xì)胞分化、抑制皮膚細(xì)胞的增殖、角質(zhì)化細(xì)胞的增殖、受損的皮膚屏障功能的恢復(fù)、以及提高皮膚的保濕能力中顯示出了顯著效力。下面，將對本發(fā)明組合物的制劑實施例進(jìn)行描述，但這些制劑實施例僅是說明的目的，并不限制本發(fā)明的范圍。制劑實施例中的草藥提取物為實施例1-3中的任意一種提取物。制劑實施例l:肥皂制劑草藥提取物1.00(%)油和脂肪適量氫氧化鈉適量氯化鈉適量香料少量使用純化水制成總量為100%。根據(jù)上述的組合比例制備肥皂。制劑實施例2:洗液制劑草藥提取物3.00(%)L-抗壞血酸-2-磷酸酯鎂1.00水溶性膠原(1%的水溶液)1.00檸檬酸鈉0.10檸檬酸0.05甘草根提取物0.201，3-丁二醇:3.00使用純化水制成總量為100%。根據(jù)上述的組合比例制備洗液。制劑實施例3:霜劑制劑草藥提取物1.00(%)單硬脂酸聚乙二醇酯2.00自乳化的單硬脂酸甘油酯5.00十六醇4.00角鯊烯6.00三-2-甘油基己酸乙酯6.00鞘糖脂1.001,3-丁二醇:7.00使用純化水制成總量為100%。根據(jù)上述的組合比例(％)制備霜劑。制劑實施例4:填充劑制劑草藥提取物5.00(%)聚乙烯醇13.00L-抗壞血酸-2-磷酸酯鎂1.00月桂酰羥脯氨酸1.00水溶性膠原質(zhì)(1%的水溶液)2.001,3-丁二醇:3,00乙醇5.00使用純化水制成總量為100%。根據(jù)上述的組合比例(％)制備填充劑。制劑實施例5:美容液制劑草藥提取物2.00(%)羥乙基纖維素(2%的水溶液)12.00黃原膠(2%的水溶液)2.001,3-丁二醇:6.00濃縮甘油4.00透明質(zhì)酸鈉(1%的水溶液)5.00使用純化水制成總量為100%。根據(jù)上述的組合比例(％)制備美容液。工業(yè)實用性如上所述，本發(fā)明的組合物能夠正常地修復(fù)及維持皮膚角質(zhì)化細(xì)胞的分化，因此，能夠預(yù)防或緩解由不完全的表皮分化所導(dǎo)致的干燥皮膚癥狀、過敏癥狀以及接觸性皮炎。權(quán)利要求1、一種用于皮膚保濕的外用組合物，其中，該外用組合物含有北玄參提取物作為活性成分。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的外用組合物，其中，該外用組合物還含有茯苳提取物。3、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的外用組合物，其中，該外用組合物具有增強(qiáng)皮膚屏障功能的作用。4、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的外用組合物，其中，該外用組合物具有促進(jìn)角質(zhì)化細(xì)胞分化的作用。5、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的外用組合物，其中，該外用組合物具有促進(jìn)神經(jīng)酰胺生成的作用。6、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的外用組合物，其中，該外用組合物具有激活PPAR-a的作用。7、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的外用組合物，其中，以該外用組合物的總重量為基準(zhǔn)，所述北玄參提取物的含量為0.0001-30重量％。8、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的外用組合物，其中，所述北玄參提取物是通過使用選自由水、乙醇、甲醇、己烷、乙酸乙酯和丁醇所組成的組中的溶劑對北玄參進(jìn)行提取或精餾而制備的。9、含有北玄參提取物作為活性成分的外用組合物用作皮膚保濕化妝品的應(yīng)用。10、根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其中，所述外用組合物還包括茯苓提取物。全文摘要在此公開了一種用于緩解皮膚干燥癥狀的皮膚外用組合物，以及該外用組合物用作皮膚保濕化妝品的應(yīng)用，所述外用組合物含有北玄參提取物(ScrophulariabuergerianaMiq)作為主要成分并且還含有茯苓提取物(PoriacocosWolf)。所述外用組合物含有北玄參提取物和茯苓提取物作為活性成分，其中，所述北玄參提取物和茯苓提取物是通過使用水、乙醇、甲醇、己烷、乙酸乙酯或丁醇分別對北玄參和茯苓進(jìn)行提取而得到的。文檔編號A61K8/97GK101621986SQ200780051804公開日2010年1月6日申請日期2007年9月19日優(yōu)先權(quán)日2007年2月28日發(fā)明者張利燮,李燦雨,金延埈,金德姬,金漢星,金芝銀申請人:株式會社太平洋