專利名稱：：口腔內用殺菌劑和含有該殺菌劑的食品添加劑的制作方法
技術領域：
：本發明涉及含有乳過氧化物酶、葡萄糖氧化酶、葡萄糖和pH調節成分的用于殺滅口腔內細菌的口腔內用殺菌劑、以及含有該殺菌劑的食品添加劑。本發明的口腔內用殺菌劑和含有該殺菌劑的食品添加劑對由于口腔內細菌而引起的疾病的預防和/或治療有歲丈。
背景技術：
：牙周病作為口腔內的煩惱，是僅次于齲齒的第二多的疾病。牙周病是破壞牙齦、牙周組織、牙骨質、牙槽骨等牙周組織并影響其功能的疾病。僅次于牙周病的較多的口腔內煩惱是口臭。口臭癥被分為由牙周病等原發疾病引起的病理性口臭和由于其他原因造成的生理性口臭，已知作為這種口臭的成因物質的揮發性含硫化合物的產生與以牙周病菌為代表的各種口腔內細菌相關(例如，非專利文獻1)。近年來，一直擔心高齡者和需要護理的人士中，由于唾液和食物等的吸入(咽下液體或固體時誤入氣管)而導致的吸入性肺炎，而且現已指出口腔內細菌可能與這種吸入性肺炎的發病相關。也就是說，確保口腔內的衛生狀態對高齡者和需要護理的人士來說，是關乎生命的重要事情，因此人們逐步認識到口腔護理的重要性(例如，非專利文獻2)。影響口腔內衛生狀態的重要的口腔內細菌中，作為牙周病成因的牙周病菌，已知有屬于革蘭氏陰性菌的伴放線放線桿菌(Actinobacillusactinomycetemcomitans)和核粒梭形桿菌(Fusobacteriumnucleat謹)等。尤其是，伴放線放線桿菌是快速發展成重度牙周炎的急進性牙周炎的病因菌。口腔內，除了這些代表性的牙周病菌等病原菌外，還存在多種口腔內細菌，形成了口腔內菌群。乳過氧化物酶作為乳蛋白質中的一種，是以哺乳類的乳汁為主、且唾液、淚液、呼吸道粘液等分泌液中也含有的氧化還原酶，工業上可以從牛乳中大規才莫純化(例如，專利文獻1、專利文獻2)。已知該乳過氧化物酶在過氧化氫和;琉氰酸的存在下催化次硫氰酸(Hypothiocyanicacid)的生成，呈現出強抗菌活性。一般來說，該抗菌系統(乳過氧化物酶在過氧化氫和硫氰酸的存在下，催化次硫氰酸的生成，呈現出強抗菌活性的系統)被稱為乳過氧化物酶系統。該乳過氧4匕物酶系統的抗菌活性方面，已知一4殳對齲齒菌等革蘭氏陽性菌不呈現抗菌活性或殺菌活性，而且對牙周病菌中的許多革蘭氏陰性菌的一部分菌種呈現抗菌活性(例如，專利文獻3)。另一方面，據報道，即使是革蘭氏陰性菌中，如上所述已知也存在與牙周病相關的伴放線放線桿菌和核粒梭形桿菌等對乳過氧化物酶系統的感受性低，也就是說乳過氧化物酶系統對伴放線放線桿菌等的殺菌活性不充分(例如，非專利文獻3)。對此，為了維持對伴放線放線桿菌和核粒梭形桿菌的充分的殺菌活性，提出了在乳過氧化物酶系統中組合碘離子以代替硫氰酸的乳過氧化物酶系統(例如，非專利文獻4)。上述乳過氧化物酶系統中使用的硫氰酸及其鹽一般不允許作為食品添加劑，將來也不可能被允許。而且，作為硫氰酸的替代品而提出的碘離子和碘化合物也不允許作為食品添加劑，而且將來也沒有這種可能性。專利文獻1:日本特開平5-41981號7>才艮專利文獻2:國際公開WO2005/078078號小冊子專利文獻3:日本特公平4-25924號公報非專利文獻1:"ClinicalGuidelineForHalitosis",K.Yaegakied.,QuintessencePub.，Tokyo,2000，pp.13-26非專利文獻2:Gerodontology、英國、第23巻、2006年、p.55~59非專利文獻3:JournalofPeriodontalResearch、丹麥、第33巻、1998年、p.421~427非專利文獻4:InternationalJournalofAntimicrobialAgents'荷蘭、第21巻、2003年、p.434~440
發明內容發明要解決的問題如上述所述，口腔內衛生狀態的確保對于預防牙周病和口臭癥很重要。尤其是，在高齡者和需要護理的人士中，為了避免吸入性肺炎，口腔護理也極為重要。然而，在高齡者和需要護理的人士中，為了口腔護理而進行刷牙、刷牙后再漱口吐出牙膏的操作，許多情形下對于本人和護理者來說都是極為困難且伴隨痛苦的工作。尤其是，如果吐出失敗而因此引起吸入事故，則由此S艮有可能發生吸入性肺炎。也就是說，刷牙等口腔護理，根據高齡者和需要護理的人士的狀態而言，作為口腔內衛生狀態的確保手段，是風險極大的手段。因此，作為口腔內衛生狀態的確保手段，尋求不需要刷牙、漱口、吐出等的口腔護理方法。另一方面，給予只允許作為藥品的強力合成殺菌劑等的手段雖對于暫時提高口腔內衛生狀態是有用的，但作為數年以上長期日常性使用的衛生狀態確保手段，從安全性方面來說還存在不安全性。鑒于這些方面，本發明人等獲得了如下構想，即，如果使用安全且副作用少，能添加在飲食品中與飲食品一起食用，同時在口腔內發揮殺菌效果，而且即使長期日常攝取也不會不安全的殺菌劑，則成為完全解決上述問題的口腔護理手段。因此，本發明的目的在于提供安全且副作用少，通過在飲食品中添加能夠與飲食品一起食用，同時在口腔內發揮殺菌效果，而且即使長期日常攝取也不會不安全的殺菌劑、和含有該殺菌劑的食品添加劑。用于解決問題的方案為了實現上述目的，本發明人等對能夠在飲食品中添加的殺菌劑進行了積極的探索研究。而且，著眼于含有乳蛋白質中的乳過氧化物酶的乳過氧化物酶系統。但是，該乳過氧化物酶系統以不允許作為食品添加劑的硫氰酸等作為必需的成分。可是，在探索研究的過程中，不在乳過氧化物酶系統中添加硫氰酸而只測定其它成分在人唾液中的殺菌活性，結果發現通過不添加碌u氰酸和其替代物質而添加pH調整成分，可發揮強殺菌活性。也就是說，本發明人等發現，通過使用組合了乳蛋白質中的乳過氧化物酶和葡萄糖氧化酶、葡萄糖和pH調節成分的系統(體系)來作為口腔內用殺菌劑，可以實現上述目的，,人而完成了本發明。而且令人驚奇的是，本發明的口腔內用殺菌劑對于以往認為對乳過氧化物酶系統感受性低的口腔內細菌伴放線放線桿菌(Actinobacillusactinomycetemcomitans)有抗菌活性。因此，本發明在于如下的(1)~(8)。(1)一種用于殺滅口腔內細菌的口腔內用殺菌劑，其含有乳過氧化物酶、葡萄糖氧化酶、葡萄糖和pH調節成分作為有效成分。(2)根據(1)所述的口腔內用殺菌劑，其中，pH調節成分為有才幾酸和/或有酸的鹽類。(3)根據(2)所述的口腔內用殺菌劑，其中，有機酸為選自于檸檬酸、乳酸、蘋果酸、琥珀酸、酒石酸和谷氨酸所組成的組中的至少1種以上的酸。(4)根據(1)~(3)任一項所述的口腔內用殺菌劑，其通過pH調節成分調節pH條件至pH5.9~pH4.4的范圍。(5)根據(1)~(4)任一項所述的口腔內用殺菌劑，其中口腔內纟田菌是伴》文線》文線4干菌(Actinobacillusactinomycetemcomitans)。(6)—種食品添加劑，其含有(1)~(5)任一項所述的口腔內用殺菌劑的。(7)—種牙周病、口臭癥或吸入性肺炎的預防和/或治療用的食品添加劑，其含有(l)~(5)任一項所述的口腔內用殺菌劑。(8)—種牙周病、口臭癥或吸入性肺炎的預防和/或治療用的藥物組合物，其含有(1)~(5)任一項所述的口腔內用殺菌劑。進而，本發明還在于如下的(9)~(14)。(9)一種飲食品，其含有(1)~(5)任一項所述的口腔內用殺菌劑或(6)~(7)任一項所述的食品添加劑。(10)—種牙周病、口臭癥或吸入性肺炎的預防和/或治療用的飲食品，其含有(1)~(5)任一項所述的口腔內用殺菌劑或(6)~(7)任一項所述的食品添加劑。(11)乳過氧化物酶、葡萄糖氧化酶、葡萄糖和pH調節7成分在制造用于殺滅口腔內細菌的口腔內用殺菌劑中的用途(用途)。(12)乳過氧化物酶、葡萄糖氧化酶、葡萄糖和pH調節成分在制造食品添加劑中的用途(用途)。(13)乳過氧化物酶、葡萄糖氧化酶、葡萄糖和pH調節成分在制造飲食品中的用途(用途)。(14)通過在口腔內給予有效量的(1)~(5)任一項所述的口腔內用殺菌劑、(6)~(7)任一項所述的食品添加劑、(8)所述的藥物組合物、或(9)~(10)所述的々欠食品來預防和/或治療牙周病、口臭癥、或吸入性肺炎的方法(方法)。發明的效果本發明的口腔內殺菌劑和食品添加劑不僅作為口腔內衛生狀態的確保手段是有效的，而且安全、副作用少，通過在飲食品中添加可以與飲食品一起食用，同時在口腔內發揮殺菌效果，而且即使長期日常攝取也不會不安全。而且，通過本發明的口腔內用殺菌劑和食品添加劑進行的口腔護理，不再迫使高齡者和需要護理的人士進行刷牙、刷牙后再漱口、然后吐出牙粉這種對本人和護理者而言才及為困難且伴隨痛苦的、對于高齡者和需要護理的人士的狀態而言風險大的操作。而且，本發明的口腔內用殺菌劑和食品添加劑起到以下所示的效果。(1)可以有效殺滅口腔內細菌。(2)對由口腔內細菌引起的疾病的預防和/或治療有效。(3)對人的安全性高，可以日常攝取。(4)通過添加在飲食品中，可以提供對預防牙周病等有效的飲食品。圖l是表示本發明的口腔內殺菌劑的給予帶來的人呼出氣體中的硫化氫量的變化的圖。圖2是表示本發明的口腔內殺菌劑的給予帶來的人呼出氣體中的揮發性含硫化合物的變化的圖。具體實施例方式接下來，對本發明的優選實施方式進行詳細的說明。但是，本發明并不限于以下優選的實施方式，可以在本發明的范圍內自由地進行變化。而且，本說明書中的百分率如沒有特別說明，都表示質量百分率。本發明中使用的乳過氧化物酶可以從哺乳類的乳汁等中獲得，例如，可以從人、牛、馬、綿羊、山羊等的乳汁等中獲得。例如，優選像日本特開平5-41981公報(發明名稱含有活菌的液狀組合物)中公開的方法那樣，從乳汁等未加熱的乳清或脫脂乳中按照常規方法(例如，離子交換層析等)進行工業化制造，而且，還可以使用市售的天然物來源的乳過氧化物酶(例如Biopole7>司制等)、或重組型乳過氧化物酶〔例如，通過、>;x等人的方法(BiochemicalandBiophysicalResearchCommunications,第271巻、2000年、p.831-836)表達和純化的重組型乳過氧化物酶或市售的重組型乳過氧化物酶〕。本發明中使用的乳過氧化物酶可優選使用來源于哺乳類的乳汁的乳過氧化物酶。在口腔內用殺菌劑、食品添加劑、藥物組合物中使用時，優選傳統上可用于飲食的牛、羊、山羊等的乳汁來源的乳過氧化物酶，尤為優選牛奶來源的乳過氧化物酶。這是因為，由于它們長期在人的飲食中使用，因此能夠以極高水準確保對人的安全性。而且，由于牛乳來源的未加熱的乳清可以作為乳制品制造的副產物穩定且大量地獲得，因此作為本發明中使用的乳過氧化物酶的原料是特別優選的。本發明中使用的葡萄糖氧化酶可以<吏用例如黑曲霉(Aspergillusniger)、產黃青霉菌(Penicilli腦chrysogenum)等微生物生產的酶中的、市售的葡萄糖氧化酶(例如，新日本化學工業公司制等)。本發明中4吏用的葡萄糖可以使用例如市售品的食品添加劑用的葡萄糖(例如，日本食品化工公司制等)。作為本發明中使用的pH調節成分，只要具有將口腔內用殺菌劑懸浮于唾液等溶劑時的pH穩定在4.4~5.9的弱酸性的緩沖能力，則可以是任意一種，例如可以使用有機酸和/或有機酸的鹽類，例如可以使用選自于市售的食品添加劑中的檸檬酸、乳酸、蘋果酸、琥珀酸、酒石酸、谷氨酸等所組成的組中的至少1種以上的酸和選自于檸檬酸鹽(例如，4寧檬酸三鈉、檸檬酸三鉀等)、乳酸鹽(例如，乳酸鈉等)、蘋果酸鹽(例如，蘋果酸鈉等)、琥珀酸鹽(例如，琥珀酸一鈉、琥珀酸二鈉等)、酒石酸鹽(例如，酒石酸鈉、酒石酸氫鉀等)、谷氨酸鹽(例如，谷氨酸鈉、谷氨酸鉀等)等所組成的組中的至少l種以上鹽類的組合。這些葡萄糖氧化酶、葡萄糖、有機酸和鹽類均作為食品添加劑被廣泛利用，而且也有售賣，可以容易獲得。乳過氧化物酶、葡萄糖氧化酶、葡萄糖、有機酸和鹽類通過與唾液混合而具有殺滅口腔內細菌的作用，因此可以作為口腔內用殺菌劑(以下，有時也稱為"本發明的殺菌劑"、"本發明的殺菌劑組合物"或"本發明的組合物"。)的有效成分來使用。這里，"有效成分"是指對殺滅口腔內細菌的作用有貢獻的成分。而且，本發明的殺菌劑中，除了與乳過氧化物酶系統相關的成分以外，還可以含有具有殺滅口腔內細菌作用的成分。例如，本發明的殺菌劑中還可含有屬于乳汁中其它有用的蛋白質的乳鐵蛋白、溶菌酶、免疫球蛋白、酪蛋白、(X-乳清蛋白、(3-乳球蛋白等、起益生菌作用的乳酸菌等。本發明的口腔內用殺菌劑具有殺滅口腔內細菌的作用。因此，本發明的殺菌劑可以用作例如對由口月空內細菌引起的牙周病、口臭癥或吸入性肺炎等各種疾病具有預防和治療效果的殺菌劑。但是，本發明的口腔內用殺菌劑不限定于預防和/或治療由口月空內細菌引起的疾病這一用途。本發明的口腔內用殺菌劑，由于作為其有效成分的乳蛋白質、酶、糖類、酸、和鹽類等作為食品原料和食品添加劑使用，因此對人的安全性高，而且具有如下特征，即，通過日常經口攝取而對由口腔內細菌引起的疾病發揮預防和/或治療的效果。作為前述由口腔內細菌引起的疾病，可以列舉牙周病、口臭癥、吸入性肺炎等。本發明的口腔內用殺菌劑可以是乳過氧化物酶、葡萄糖氧化酶、葡萄糖、酸和鹽類的混合物本身，還可以含有這些之外的成分。乳過氧化物酶、葡萄糖氧化酶、葡萄糖、酸和鹽類以外的成分可以根據攝取的形態進行適當選沖奪。例如，可以通過經口等給予方法而適當^f吏用，還可以通過乂>知的方法加工成片劑、膠嚢劑、含片劑(troche)、糖漿劑、顆粒劑、散劑等。本發明的口腔內用殺菌劑可如下制造，例如可以通過使用藥學上容許的賦形劑等任意的添加劑將作為有效成分的乳過氧化物酶、葡萄糖氧化酶、葡萄糖和pH調節成分制劑化來制造。可以以同樣方式將本發明的食品添加劑制劑化。制劑化時，制劑中的有效成分的含量通常為0.005~20質量％,優選為0.05~12.5質量％。制劑化時，可以使用賦形劑、結合劑、崩解劑、潤滑劑、穩定劑、矯味矯臭劑、稀釋劑、注射劑用溶劑等添加劑。作為賦形劑，可以列舉例如乳糖、白糖、葡萄糖、甘露糖醇、山梨糖醇等糖4汙生物，玉米淀4分、馬鈴薯淀粉、a-淀4分、糊精、羥曱基淀粉等淀粉衍生物，結晶纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基曱基纖維素、羧曱基纖維素、羧甲基纖維素鈣等纖維素衍生物，阿拉伯樹膠，葡聚糖(dextran),普魯蘭多糖(pullulan)，輕質無水娃酸、合成硅酸鋁、偏硅酸鋁酸鎂(magnesiumaluminometasilicate)等硅酸鹽衍生物，磷酸4丐等磷酸鹽衍生物，碳酸4丐等碳酸鹽衍生物，硫酸鈣等硫酸鹽衍生物等；作為結合劑，例如，除上述賦形劑之外，還可以列舉明膠，聚乙烯吡咯烷酮，聚乙二醇(macrogol)等；作為崩解劑，例如，除上述賦形劑之外，還可以列舉交聯羧曱基纖維素鈉、羧甲基淀粉鈉、交聯聚乙烯吡咯烷酮等經化學修飾的淀粉或纖維素衍生物等；作為潤滑劑，可以列舉例如滑石，硬脂酸，石更脂酸鈣、硬脂酸鎂等硬脂酸金屬鹽，硅溶膠；蜂膠、鯨蠟等蠟類，硼酸，二元醇，富馬酸、己二酸等羧酸類，苯曱酸鈉等羧酸鈉鹽，硫酸鈉等硫酸類鹽，亮氨酸，月桂基硫酸鈉、月桂基硫酸鎂等月桂基硫酸鹽，無水硅酸、硅酸水合物等硅酸類，淀粉衍生物等；作為穩定劑，可以列舉例如對羥基苯甲酸曱酯、對羥基苯甲酸丙酯等對羥基苯曱酸酯類，氯丁醇、千醇、苯乙醇等醇類，苯扎氯銨，醋酸酐，山梨酸等；作為矯味矯臭劑，可以列舉例如甜味劑、酸味劑、香料等，作為注射劑用溶劑，可以列舉例如水、乙醇、甘油等。而且，本發明的口腔內用殺菌劑和食品添加劑還可以配合在飲食品中進行給予。給予量和給予次數根據目標作用效果、給予方法、治療時間、年齡、體重等而不同，但給予量通常可以在成人每1天10mg~10g的范圍內進行適當選才奪，給予次凄丈可以在1天1次至1天數次的范圍內適當選擇。而且，作為給予時間，優選在7天以上。作為本發明的配合了含有乳過氧化物酶、葡萄糖氧化酶、葡萄糖、酸和鹽類的口腔內用殺菌劑或食品添加劑的飲食品的形態，可以列舉例如清涼飲料、乳飲料等或這些飲料的濃縮原液和調整用粉末；加工乳、發酵乳等乳制品；經腸營養食品及其調整用粉末、粘稠調整食品；功能性食品等，而且還可以列舉碳酸飲料、營養飲料、果實飲料等飲料(包括這些飲料的濃縮原液和調整用粉末)；冰淇淋、冰凍果子露、刨冰等冷飲；蕎麥面、烏冬面、粉絲、餃子皮、燒麥皮、中國面、方便面等面類；飴糖、口香糖(chewinggum)、糖塊、口香糖(gum)、巧克力、片狀點心、小吃、餅干、果凍、果醬、奶油、烤制點心等點心類；魚糕、火腿、香腸等水產和畜產加工食品；色拉油、天麩羅油、人造黃油、蛋黃醬、起酥油、生奶油、調味汁等油脂和油脂加工食品；沙司、佐料等調味料；湯、燉菜、色拉、家常菜、腌制菜、面包等。這種飲食品例如可以通過在本發明的口腔內用殺菌劑或食品添加劑(包括4分末或其水溶液(糖漿等)等形態)中配合糊精、淀粉等糖類，明膠、大豆蛋白、玉米蛋白等蛋白質，丙氨酸、谷氨酸、異亮氨酸等氨基酸類，纖維素、阿拉伯膠等多糖類，大豆油、中鏈脂肪酸甘油三酯等油脂類等來制造。作為飲食品的合適的形狀，可以例示藥片狀的補充劑。由此，可以準確把握有效成分的攝取量和與有效成分同時被攝取的熱量。此外，作為飲食品的優選的形狀，可以列舉液體，尤其是粘稠的液體。這是因為液體遍布到口腔內各處，尤其是容易滲透到牙周病中出現問題的牙的石更組織和牙齦組織之間，粘稠的液體滯留在口腔內的時間變長，由此可以更有效地發揮殺菌效果。因此，上述制劑和々大食品中，液體、尤其是粘稠液體的形態是本發明的優選形態。而且，本發明的口腔內用殺菌劑或食品添加劑可配合到標識出以下所示疾病的預防用或治療用的功效的飲食品中。也就是說，這種飲食品和本發明的飲食品可標識出由口腔內細菌引起的疾病、例如牙周病、口臭癥、吸入性肺炎等的預防用或治療用。這里，所謂的"標識"是指告知需要前述功效的人的行為，例如，在配合了本發明的口腔內用殺菌劑或食品添加劑的飲食品或本發明的飲食品的商品或者商品的包裝/廣告等中附加前述功效的行為，轉讓、提供、展示附加了上述功效的產品的行為等，特別優選標識為特定保健用食品〔參照健康增進法施行規則(平成15年4月30日、日本厚生勞動省令第86號)的第12條第1項第5號〕的方式。[實施例]下面，通過列舉實施例對本發明進行詳細的說明。本發明并不限于以下實施例。如上所述，本發明在探索研究的過程中，并非在乳過氧化物酶系統中添加石克氰酸，而只測定其它成分在人唾液中的殺菌活性，結果發現不添加硫氰酸及其代替物質，而通過添加pH調整成分，可發揮強殺菌活性，從而完成本發明。關于本發明的口腔內用殺菌劑發揮殺菌活性的機制，本發明人等設想是由于唾液中存在微量的硫氰酸，因為這種作用而14導致抗菌活性發揮，于是進行了以下實驗，并確認了本發明的口腔內殺菌劑的效果可靠地再現。本發明中，為了評價口腔內用殺菌劑產生的對口腔內細菌的殺菌作用，對迄今為止有報道的對乳過氧化物酶、過氧化氫、疏氰酸的組合所形成的乳過氧化物酶系統的感受性低(InternationalJournalofAntimicrobialAgents、荷蘭、第21巻、2003年、p.434~440)的人口腔內纟田菌中的4半放線i文線桿菌，研究了口腔內用殺菌劑的殺菌活性。予以說明，作為溶劑，使用人唾液試沖羊或者添加了與唾液同水平的0.5mM碌^氰酸的石粦酸緩沖生理鹽水來代替唾液。詳細內容按照后述的試驗例的方法。以下通過示出試驗例，詳細說明本發明的口腔內用殺菌劑的作用。本試驗是為了研究口腔內用殺菌劑對口腔內細菌的效果而進行的。(1)試樣的制備添加赤蘚醇(日研化學公司制)15g、還原麥芽^唐糖稀(東和化成公司制)52.5g、山梨糖醇(東和化成公司制)30g、玉米淀粉(OjiCornstarchCo.,Ltd.)15g、金虎尾香料(高砂香料工業/>司制)0.75g、蔗4唐月旨肪酉臾酉旨(Mitsubishi-KagakuFoodsCorporation制)6g、檸檬酸一水合物(國產化學公司制)2.58g、檸檬酸三鈉二水合物(國產化學公司制)5.21g、木糖醇(和光純藥公司制)18g、葡萄糖(和光純藥公司制)4.5g、乳過氧化物酶(Biopole公司制)0.05g、葡萄糖氧化酶(新日本化學工業公司制)0.4g的各粉末，然后在研缽中混合均勻，制成混合物，作為試驗試樣。而且，制作只是不添加乳過氧化物酶的混20合物作為對照試樣。(2)菌液的制備使用腦心浸液液體培養基(BD公司制)過夜培養伴放線ii線桿菌JCM8578(由理化學研究所分售)，制備菌液。(3)i式-驗方法在容量50ml的滅菌一次性管中添加0.5g試驗試樣或對照試樣。然后，添力卩3.3ml含有與人的唾液相同水平的0.5mM錄u氰酸鈉的磷酸緩沖生理鹽水，懸浮后，添加33.3(il的上述菌液，攪拌后，于37。C下在填充了10%二氧化碳的培養箱中保持15分鐘。用磷酸緩沖生理鹽水將該混合液以每次IO倍階梯稀釋，涂布在通過添加10%馬血清、0.1%酵母提取物、75[ig/ml桿菌肽、5ng/ml萬古霉素而使伴放線放線桿菌選^^性生長的胰酪胨大豆(TryputicaseSoy)瓊月旨培養基(JournalofClinicalMicrobiology,美國、第15巻、1982年、p.606~609)上，于37°C，在填充了10%二氧化碳氣體的培養箱中培養3天后，測定在瓊脂培養基上形成的菌落數。根據檢測出的伴放線放線桿菌的菌落數，求出每1ml上述懸浮液中的活菌數的對數值(log10cfu/ml)。(3)試驗結果本試驗的結果示于表1。試樣伴放線放線桿菌的菌數(log1Qcfu/ml)試驗試樣N.D.對照試樣6.82N.D.:檢測限以下(<1.70)4刀i臺菌凄t:7.0log10cfu/ml該結果表明，含有乳過氧化物酶、葡萄糖氧化酶、葡萄糖、酸和鹽類的試驗試樣使伴放線放線桿菌的活菌數減少到檢測限以下，顯示出非常強的殺菌效果。另一方面，在只是不含乳過氧化物酶的對照試樣中活菌數基本沒有變化。而且，在相同條件下，使用經過濾滅菌的采自健康成人的唾液來代替添加了硫氰酸鈉的磷酸緩沖生理鹽水，確認了試驗試樣的強殺菌活性。[試驗例2〗本試驗是為了研究口腔內用殺菌劑對口腔內細菌的效果中PH調整劑和葡萄糖的影響而進行的。(1)試樣的制備添加赤蘚醇(日研化學公司制)15g、還原麥芽糖糖稀(東和化成公司制)52.5g、山梨糖醇(東和化成公司制)30g、玉米淀粉(OjiCornstarchCo.，Ltd.)15g、金虎尾香料(高砂香料工業/>司制)0.75g、濕4唐月旨肪酉菱酉旨(Mitsubishi-KagakuFoodsCorporation制)6g、木糖醇(和光純藥公司制)18g、乳過氧化物酶(Biopole公司制)0.05g、葡萄糖氧化酶(新日本化學工業公司制)0.4g的各粉末，在研缽中混合均勻，制成不含葡萄糖、酸和鹽類的混合物。(2)菌液的制備用與試驗例1同樣的方法制備伴放線放線桿菌的菌液。(3)試-驗方法在容量50ml的滅菌一次性管中添加0.459g不含上述pH調整劑和葡萄糖的混合物。然后，添加3倍濃度的磷酸緩沖水溶液l.llml、lOOmM檸檬酸緩沖液(pH4.6、5.0、5.4、5.8、或6.2)或lOOmM磷酸緩沖液(pH6.6、7.0、或7.4)l.Oml、50mM硫氰酸鈉33.3|il,再添力。15mg/ml葡萄糖水溶液和純化水，使得葡萄糖終濃度為0、0.045、0.15、0.45、1.5或4.5mg/ml并且總計添加液量達到3.3ml,懸浮后，再添力口33.3jil的上述菌液，進行攪拌，然后于37。C下在填充了10%二氧化碳氣體的培養箱中保持15分鐘。用與試驗例1同樣的方法測定該混合液中的伴放線放線桿菌的活菌數。本試驗的殺菌活性的評價基準是在活菌數降低到接種菌數的十分之一以下時，判斷為有效。(3)試驗結果本試驗的結果示于表2。伴放線放線桿菌的菌數(log1()cfu/ml)<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>N.D.:檢測限以下(<1.70)^刀i合菌lt:6.06logiocfu/ml表2中，各行表示添加了各pH的緩沖液時的懸浮液的pH實測值，各列表示不同葡萄糖濃度下的結果。其結果為，pH實測值在5.9以下的弱酸性條件下，在添加葡萄糖時，所有的葡萄糖濃度下均具有有效的殺菌活性。也就是說，可知本發明的口腔內用殺菌劑通過添加具有緩沖能力的酸和鹽類，使懸浮在溶劑時的pH達到5.9以下，從而獲得了強殺菌活性。該殺菌活性優選在pH5.9以下有效發揮，當葡萄糖濃度在0.15mg/ml以上時，通過使pH值達到5.5以下，可有效發揮使菌數達到檢測限以下的程度的效果，當葡萄糖濃度在0.45mg/ml以上時，只要通過使pH值達到5.9以下，可有效發揮使菌數達到檢測限以下的程度的效果，當葡萄糖濃度在1.5mg/ml以上時，只要使pH值達到6.8以下，可有效發揮使菌數達到;險測限以下的程度的效果，當葡萄糖濃度在4.5mg/ml以上時，通過使pH值達到7.1以下，可有效發揮使菌數達到檢測限以下的程度的效果。而且，在葡萄糖濃度為0.15mg/ml以上的條件下，在pH4.4~pH7.1的范圍內的任一pH時，均具有有效的殺菌活性。根據該結果進行計算，可知口腔內用殺菌劑中的葡萄糖配合量方面，當使用上述任意一種緩沖液作為酸和鹽類時只要組合物中的葡萄糖含量(葡萄糖重量在混合物、葡萄糖、酸、和鹽類的總計重量中所占的百分率)在0.1%以上，則可以獲得強殺菌效果。根據以上結果可知，本發明的口腔內用殺菌劑利用存在于唾液中的微量的硫氰酸而發揮其殺菌活性。而且，還可知對以往被認為乳過氧化物酶系統的殺菌效果無法殺滅的伴放線放線斥干菌(Actinobacillusactinomycetemcomitans)也可發4軍殺菌5舌性。本發明的口腔內用殺菌劑其自身不含硫氰酸成分，不需要添加外部的硫氰酸，通過存在于唾液中的微量濃度的硫氰酸可充分發揮殺菌活性，因此本發明的口腔內用殺菌劑在作為藥品時，對于常常弄錯服藥量的高齡者和需要護理的人士來說是一種可以極為放心使用的殺菌劑，作為食品添加劑也是極為放心的。而且，由于本發明的口腔內用殺菌劑對伴放線放線桿菌(Actinobacillusactinomycetemcomitans)可發揮殺菌活性,因此本發明提供了一種新的伴放線放線桿菌(Actinobacillusactinomycetemcomitans)用口月空內用殺菌劑。下面，通過列出制造例(實施例1)對本發明進行更為詳細的說明，但本發明并不限于以下制造例。實施例1添加赤蘚醇(日研化學公司制)150g、還原麥芽糖糖稀(東和化成公司制)525g、山梨糖醇(東和化成7>司制)300g、玉19米淀粉(OjiCornstarchCo.,Ltd.)150g、金虎尾香料(高砂香泮十工業乂>司制)7.5g、蔗4唐脂肪酸酯(Mitsubishi-KagakuFoodsCorporation制)60g、4寧碎蒙酉臾(San-EiGenF.F.I乂^司制)25.8g、檸檬酸三鈉(San-EiGenF.F丄公司制)52.lg、木糖醇(東和化成公司制)180.1g、葡萄糖(日本食品化工公司制)45g、乳過氧化物酶(Biopole公司制)0.5g、葡萄糖氧化酶(新日本化學工業公司制)4g的各粉末，并均勻混合，使用壓片機(HataIronWorksCo.,Ltd制)，制成每片0.5g的片劑，以12片/分鐘的壓片速度、9.8KPa的壓力將前述混合粉末連續壓片，制成1800片(約900g)口腔內用殺菌劑的藥片。[試驗例3]本試驗是為了研究本發明的口腔內用殺菌劑產生的對人口臭的效果而進行的。(1)試樣的制備(試驗試樣)實施例1的方法中，除了片劑以每片0.6g的質量壓片之外，其余用與實施例1同樣方法制造藥片(本發明的口腔內用殺菌劑)，將其作為試驗試樣。(對照試樣)而且，在前述試驗試樣中，除了用還原麥芽糖糖稀代替乳過氧化物酶和葡萄糖氧化酶以外，其它成分按同樣的組成，用與實施例1同樣的方法制造藥片，將其作為對照試樣。(2)試驗方法(試驗組)對在試驗日起床后禁止進行刷牙和漱口等牙齒的清潔、飲水以及飲食的3名正常人受試者，在試驗日的上午，每次將一片試驗試樣(藥片)在口腔內溶解，連續服用3片(試驗組)。在藥片攝取前以及攝取1小時后和2小時后的各個時間點采集口腔內的呼出氣體，用口臭測定器(Abilit公司制、OralChroma)測定已知是口臭成因物質的硫化氫的變化量和揮發性含硫化合物的變化量(硫化氫、甲硫醇、二曱基硫的總變化量)，用每10ml呼出氣體的ng數表示3名受試者的平均值。(對照組)而且，作為對照試驗，在與前述試驗日的其它日子，對在試驗日起床后禁止進行刷牙和漱口等牙齒的清潔、飲水以及飲食的3名正常人受試者，用與前述試驗組同樣的方法使受試者服用3片對照試樣(藥片不含乳過氧化物酶、葡萄糖氧化酶)，用口臭測定器測定口腔內的呼出氣體(對照組)。(無攝取組)進而，在與試^r組、對照組不同的試-瞼日的其它日子，與試驗組和對照組一樣，對在試驗日起床后禁止進行刷牙和漱口等牙齒的清潔、飲水以及飲食的3名正常人受試者，不攝取任何藥片，用口臭測定器測定口腔內的呼出氣體中的硫化氫的變化量和揮發性含硫化合物的變化量(無攝取組)。(3)試驗結果本試驗的結果示于表3和表4。表3示出了各組中呼出氣體中的硫化氫的變化量。而且，表4示出了各組中呼出氣體中的揮發性含硫化合物的變化量。此外，圖1和圖2是將表3和表4圖像化的圖。時間(h)-卩琉化氫的變化量(ng/10ml)試驗組對照組無攝取組00.000.000.001-2,54-1.020.502-2.370.133.14時間(h)揮發性含硫化合物的變化量Ug/10ml)_試驗組對照組無攝取組—51-3.93-1.480.37_g_-1.94__L2^_a)硫化氫的變化量由表3和圖l可知，受試者在什么都不攝取的狀態(無攝取組圖l中用n表示)下，1小時后呼出氣體中的硫化氫量稍微上升0.50ng/10ml，而且，2小時后呼出氣體中石危化氫的變化量達到3.14ng/10ml,但通過攝取本發明的藥片(試驗組圖1中用*表示)，1小時后比攝取前減少2.54ng/10ml，2小時后雖比1小時后增加0.17ng/10ml，但是依然維持在比攝取前低2.37ng/10ml的狀態。而且，在攝取了不含乳過氧化物酶、葡萄糖氧化酶的藥片的組(對照組圖1中用A表示)中，攝取1小時后比l聶耳又前暫時減少了1.02ng/10ml,而在2小時后，呼出氣體中的硫化氫量又恢復到攝取前的狀態，看不到使呼出氣體中的硫化氫量保持在較低狀態的效果。也就是說，在攝取1小時后，試驗組與對照組相比，顯示出約2.5倍的硫化氫的減少量。此外還可知，即使在對照組的硫化氫的變化轉變成增大的2小時后，試驗組中這種硫化氬的減少狀態也維持在與攝取1小時后相同的程度。b)揮發性含硫化合物的變化量(硫化氫、甲硫醇、二甲基硫的總變化量)由表4和圖2可知，受試者在什么都不攝取的狀態(無攝取組圖2中用口表示)下，1小時后呼出氣體中的揮發性含硫化合物的變化量稍微上升0.37ng/10ml，而且，2小時后呼出氣體中的揮發性含硫化合物的變化量達到5.30ng/10ml,但通過攝取本發明的藥片(試驗組圖2中用*表示)，l小時后比攝取前減少3.93ng/10ml,即使2小時后與1小時后相比增加1.99ng/10ml,但是依然維持在比攝取前低1.94ng/10ml的狀態。而且，在攝取不含乳過氧化物酶、葡萄糖氧化酶的藥片的組(對照組圖2中用A表示)中，攝取1小時后比攝取前暫時減少1.48ng/10ml,-f旦在2小時后，呼出氣體中的揮發性含碌u化合物的總量又恢復到攝取前的狀態，看不到使呼出氣體中的揮發性含硫化合物的總量保持在較低狀態的效果。也就是說，試驗組在攝取1小時后與對照組相比，顯示出約2.6倍的揮發性含硫化合物的減少量。此外還可知，即使在對照組的揮發性含硫化合物的變化轉變成增大的2小時后，試驗組中這種揮發性含橫u化合物的減少狀態也維持在攝取1小時后的約一半左右。以上內容表明，口腔內的呼出氣體中的硫化氫或揮發性含硫化合物的總量由于攝取含有乳過氧化物酶和葡萄糖氧化酶的本發明的口腔內用殺菌劑(試驗組)而減少，而且本發明的口腔內用殺菌劑具有使這種減少的狀態維持一段時間的效果。也就是說，可以得知本發明的口腔內用殺菌劑不僅在體外的實驗系統可發揮這種殺菌活性，而且在實際的人口腔內都可發揮這種殺菌活性，使人呼出氣體中的口臭成分減少，即實際上發揮人口臭的抑制效果，而且這些效果不伴隨任何副作用，只是給予在人的口腔內就可以發揮作用。工業上的可利用性本發明的口腔內用殺菌劑和食品添加劑作為口腔內的衛生狀態的確保手段是有效的，而且其安全且副作用少，通過在飲食品中添加而能與飲食品一起食用，同時在口腔內發揮殺菌效果，且長期日常攝取也不會不安全。權利要求1.一種用于殺滅口腔內細菌的口腔內用殺菌劑，其含有乳過氧化物酶、葡萄糖氧化酶、葡萄糖和pH調節成分作為有效成分。2.根據權利要求1所述的口腔內用殺菌劑，其中，pH調節成分為有機酸和/或有機酸的鹽類。3.根據權利要求2所述的口腔內用殺菌劑，其中，有機酸為選自于檸檬酸、乳酸、蘋果酸、琥珀酸、酒石酸和谷氨酸所組成的組中的至少1種以上的酸。4.根據權利要求1~3任一項所述的口腔內用殺菌劑，其通過pH調節成分調節pH條件至pH5.9~pH4.4的范圍。5.根據權利要求1~4任一項所述的口腔內用殺菌劑，其中，口腔內纟田菌是伴it線》文線桿菌(Actinobacillusactinomycetemcomitans)。6.—種食品添加劑，其含有權利要求15任一項所述的口腔內用殺菌劑。7.—種牙周病、口臭癥或吸入性肺炎的預防和/或治療用的食品添加劑，其含有權利要求1~5任一項所述的口腔內用殺菌劑。8.—種牙周病、口臭癥或p及入性力申炎的^"貞防和/或治療用的藥物組合物，其含有權利要求1~5任一項所述的口腔內用殺菌劑。全文摘要目的在于提供安全且副作用少，通過在飲食品中添加可以與飲食品一起食用，同時在口腔內發揮殺菌效果，而且即使長期日常攝取也不會不安全的殺菌劑，以及含有該殺菌劑的食品添加劑。提供含有乳過氧化物酶、葡萄糖氧化酶、葡萄糖和pH調節成分的用于殺滅口腔內細菌的口腔內用殺菌劑。文檔編號A61K38/44GK101626779SQ20078005175公開日2010年1月13日申請日期2007年6月28日優先權日2007年2月28日發明者堀米綾子,山內恒治,新光一郎申請人:森永乳業株式會社