專利名稱：：收獲夾竹桃科植物的方法
技術領域：
：本發明大體上涉及甾族糖苷領域。更特別地，其涉及收獲夾竹桃科，也稱為蘿摩科植物的方法，該植物含有具有食欲抑制活性的甾族糖苷并可用在例如體重控制產品中。本發明尤其涉及收獲來自火地亞(Hoodia)屬(曾用名火地亞和亞羅漢屬(Trichocaulon))的植物。
背景技術：
：可獲自夾竹桃科，也稱為蘿摩科，特別是火地亞屬(曾用名火地亞屬和亞羅漢屬)的植物的提取物已經表明具有食欲抑制活性并可能可用在體重控制產品中。US6,376,657(CSIR)公開了這些提取物含有具有式1的甾族糖苷其中11=烷基；R1=H、烷基、巴豆酰基(tiglyol)、苯曱酰基或任何其它有機酯基團；一R2=H或一種或多種6-脫氧碳水化合物，或一種或多種2,6-二脫氧碳水化合物、或葡萄糖分子、或其組合；且其中虛線表明在碳原子C4與C5之間或在碳原子C5與C6之間任選存在其它鍵。具有良好的食欲抑制活性的提純部分之一中的活性分子之一據發現是具有式2的化合物:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>US6,376,657也公開了從蘿摩科植物中提取具有式1的甾族糖苷的取溶液與剩余植物材料分離，從提取溶液中除去溶劑并回收提取物。該專利還公開了合成各種甾族糖苷的方法。WO2005/116049(Unilever)公開了甾族糖苷可以借助液態或超臨界二氧化碳提取自蘿摩(火地亞)科植物材料或與蘿摩(火地亞)科植物材料中存在的不合意組分分離。將來自麗杯閣(Hoodiagordonii)的干燥植物材料研磨成細粉并隨后提取。US2005/0202103公開了水牛掌屬提取物，其中將水牛掌屬植物的氣生部分在蔭涼處干燥(在水泥平臺上)。US7,008,648公開了從豹皮花屬和Orbea屬植物中獲得植物材料的方法，其中適用于干燥和研磨原始生物質的方法包括曬干然后熱風干燥或冷凍干燥，例如，凍干法，或者將該生物質切成例如2-10厘米的小片，然后熱風干燥或冷凍干燥。從夾竹桃科植物提純和分離食欲抑制性甾族糖苷，尤其是式2的那些，是昂貴和麻煩的。因此合意的是提高甾族糖苷，尤其是具有式2的甾族糖苷的收率。本發明人現在已經令人驚訝地發現，可以通過本發明的收獲方法提高來自夾竹桃科植物的某些甾族糖苷，特別是具有式(2)的甾族糖苷的收率，該方法的特征在于在將植物從土壤中移出后，將它們擱置風干至水分含量低于90重量％,將風干的植物切碎并進一步干燥以獲得包含具有式(2)的甾族糖苷的干燥植物材料<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>發明定義通過本發明實現上述和其它目的，其在笫一方面包括收獲夾竹桃科植物的方法，包括下列步驟(a)將植物從土壤中移出，(b)將完整的植物擱置風干至水分含量低于90重量％,(c)將風干的植物切碎，(d)進一步干燥切碎的植物以獲得包含具有式(2)的甾族糖香的干燥植物材料<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>在第二方面，本發明涉及可根據上述方法獲得并包含至少0.095重量％的量的式2的甾族糖苷的干燥植物材料。在第三方面，本發明涉及包含具有式2的甾族糖苷的提取物和食品。發明詳述除了在實施例和對比例中，或另行明確指明之處外，本說明書中描述材料量或反應條件、材料物理性質和/或用途的所有數值都要理解成用詞語"大約"修飾。應該指出，在指明濃度或量的任何范圍時，任何特定的較高濃度可以與任何特定的較低濃度或量相結合。為避免4是問，詞語"包含"是指"包括"，但不一定是"由…構成"或"由...組成"。換言之，所列步驟或選項不需要是窮舉的。本文所用的"切碎"是指植物尺寸降低，并包括研碎、粉碎等。本文所用的"平均"是指至少10顆不同的隨機選擇的植物的平均甾族糖苷含量。本文所用的"風干"是指由此簡單擱置收獲的完整植物直到它們達到低于90重量％的水分含量的過程。本發明的第一方面是收獲夾竹桃科，更優選火地亞科植物的方法。該植物尤其優選選自Trichocaulonpiliferum、Trichocaulonofficinale、Hoodiacurrorii、麗杯閣、Hoodialugardii及其混合物。麗杯閣尤其優選。在該收獲方法的第一步驟中，將夾竹桃科植物從其生長的土壤中完全移出，優選包括根部。這可以用手通過將植物拔出地面(可能借助例如伊子)進行或使用合適的收割機或工具以自動化方式進行。在第二步驟中，將完整的植物風干，即，將植物簡單擱置，直到它們達到低于90重量％,優選低于88重量％,更優選低于83重量％或甚至低于80重量％的水分含量。在將植物擱置風干足夠的時間時，自動實現水分含量的降〗氐。據發現，風干時間應為至少一天，但優選至少三天。最長時間通常為150天。優選的時間量為3至100天，更優選5天至50天，最佳為7至30天。通過簡單地將完整植物留在將它們移出的土地上，方便地進行風干。無需額外手段獲得水分含量的降低和伴隨著的具有式2的甾族糖苷量的令人驚訝的相對提高。風干也可以在用例如遮陽網覆蓋的區域上進行，或在不受任何氣候影響的建筑中進行。在風干步驟后，隨后將風干的植物切碎。該植物可以切成任何形狀，如立方體、薄片、julliene等，只要維度之一小于30毫米，優選小于20毫米，更優選小于15毫米。因此對于薄片或julliene形狀，厚度應小于這些尺寸，對于立方體，所有維度都應小于這些尺寸，等等。可以使用傳統切割設備，如碎木機、轉盤切碎機或標準食物切割設備，例如Urschell提供的機器，從而形成切碎的植物粒子。尺寸越小，隨后的干燥時間越快，從而降低微生物生長的可能性。對切割步驟和隨后的干燥步驟而言，可以使用整抹，但優選使用不帶根的植物以使微生物污染的可能性最小化。隨后，將切碎的植物進一步干燥至低得多的水分含量，優選在盡量減少直接暴露在紫外線下的條件下。根據本發明合適的干燥設備包括直接和間接空氣干燥器，其中用任何類型的能源(例如電、氣體、石蠟、能量等)加熱空氣。太陽能用太陽加熱空氣；隨后可以將熱空氣鼓入干燥該材料用的爐中。本文所用的"干燥"可以包括冷凍干燥。通常，在35至120。C,為具有最佳干燥時間優選50至IO(TC,最優選60至100。C下進行進一步干燥。典型干燥期通常為至少1小時，最高可至兩周，優選為1至72小時，最優選3至48小時。在第二干燥步驟中，通常將切碎的植物干燥至低于15重量％,優選低于10重量％,更優選低于5重量％的殘余水分含量。可以用標準重量分析技術或卡爾費歇爾滴定法測量(殘余)水分含量。優選為小片或薄片形式的所得干燥植物材料具有至少1.3重量％,優選至少1.6重量％的甾族糖苷平均總含量。可根據本發明獲得的干燥植物材料包含至少0.095重量％(按平均值計)，優選至少0.1重量％或甚至超過0.15重量％的量的式2的甾族糖苷。可以在提取或溶解后使用具有UV檢測的高效液相色譜法(HPLC)測定干燥植物材料中式2的甾族糖苷的量。將大約5克材料用大約80毫升沸騰曱醇回流l小時。過濾所得提取物并用甲醇洗滌固體材料。將合并的濾液和洗液轉移到100毫升燒瓶中并用曱醇補足體積。將1毫升濾液蒸發至干并在1毫升乙腈/水(50/50v/v)中重構。通過LC-UV在220納米下測量甾族糖苷。為此，將20微升提取物注射到裝有5微米粒子并配有裝有相同固定相的12.6x4.6亳米ZorbaxRX-C8保護柱的250x4.6毫米ZorbaxRX-C8分析柱上。使該柱系統保持在40°C。以41,2%乙腈/曱醇(85/15v/v)和58.8%水/甲醇(85/15v/v).開始，在1毫升/分鐘流速下進行梯度洗脫。初始條件保持10分鐘，然后經30分鐘線性升至88.2%乙腈/甲醇(85/15v/v)和11.8%水/曱醇(85/15v/v)。在最后保持5分鐘后，將該系統再平衡至初始條件。使用任何已知純度的式2的化合物(在這種情況下使用95%)進行校準。化合物2可以使用制備液相色譜法從干燥麗杯閣提取物中分離，或可以合成(參見例如美國專利6,376,657,其經此引用并入本文)。在乙腈/水(l/lv/v)中制備100微克/毫升的儲液并在75、50、20、10和5微克/毫升下制備進一步稀釋液以產生附加校準標樣。使用在220納米下的UV響應對照化合物2校準線進行量化。在本發明的方法的進一步實施方案中，從干燥植物材料中提取一種或多種甾族糖苷。可以使用任何提取法。例如，可以如經此引用并入本文的US6,376,657中所述進行提取。具體提到的用于進行提取的溶劑是甲叉二氯(二氯甲烷)、水、曱醇、己烷、乙酸乙酯或其混合物中的一種或多種。或者，可以使用如WO2005/116049(Unilever)中所述的液態或超臨界二氧化碳提取甾族糖苷。該干燥植物材料或其提取物可用在食欲抑制性食品中，這構成本發明的第三方面。這類食品的實例是飲料、小吃、食品棒(bar)、涂抹料、調味品、湯等，或代餐，它們可用于體重管理或肥胖癥的飲食控制。除非另行指明，本文所用的所有量、份數、比率和百分比都按重量計。盡管上文概述了本發明，但本領域技術人員顯而易見的是，可以在不背離如本文所述和要求保護的本發明的范圍和精神的情況下作出修改、改變和變動。現在在下列非限制性實施例中進一步例證本發明。實施例1收獲28棵平均重量0.5公斤的小型麗杯閣植物。收獲138棵平均重量1.4千克的中型麗杯閣植物。將它們隨機分成2組，S組含有50棵植物，0組含有78棵植物。將來自O組的10棵小型、大型和中型植物切成小片并烘干。將來自S組的IO棵中型植物切成小片并曬干。所有其它植物首先"曬干"不同天數，最多60天。風干后，測定所有植物的鮮重％。然后將來自O組的小型、大型和中型植物切成小片并烘干。將來自S組的中型植物切成小片并曬干。測定所有植物中化合物(2)的含量。表1顯示了所有植物的初始重量、風干后的重量和化合物(2)含量。我們令人驚訝地發現，在風干造成的重量損耗分數(下文定義為"Fraction")與活性含量之間存在關聯，表明風干對化合物(2)含量的有益影響。Fraction=(初始重量-最終重量)/初始重量最終重量在本文中是風干后的重量。由下列等式給出該關聯化合物(2)=exp(A+B*(1-Fraction))初始水分含量通常為90%。在此情況下，可以將上述關聯式(其中Fraction改為風干后的％水分)修改為化合物(2)=exp(A+B*(10/(100國%水分))表2顯示了對于小型、中型組O、中型組S和大型植物，A和B的值，包括它們的標準誤差和該關聯式的P值。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>中型，o組0,69+型，0組1.57中型，0組1.70+型，0組1.29+型，0組1.38+型，0組0.78+型，0組1.42+型，0組0.93中型，o組1.04+型，0組0.86中型，o組1.59+型，0組1.49+型，0組1.24+型，0組1.56中型，o組1.79+型，0組1.03中型，o組1.02+型，0組1.23中型，0組1.02+型，0組0.95+型，0組0.89+型，0組1.74中型，o組2.09+型，0組2.65+型，0組1.95+型，0組1.34中型，o組1.50+型，0組1.89+型，0組1.52+型，0組2.07中型，0組1.27+型，0組1.49中型，o組1.35+型，0組1.53中型，0組1.61+型，0組1.47+型，0組1.64+型，0組0.92中型，o組1.06+型，0組1.23中型，o組1.49+型，0組1.72中型，o組1.53+型，0組1.21+型，0組1.37+型，0組1.17中型，o組1.28+型，0組1.32+型，0組1*14中型，o組1.80+型，0組1.690.69O，OOO0,1821.570.0000,0961.310.2290.0790.920.2850，0371.060.2310.0430.600,2270.0481.090.2320*0980.720,2260，0710.780，2490，0980.660.2310.0761.210，2390.1151.150.2270.0960.74O.術0.1190.64(K5900.1430.700，6100*0680.540，4720.0920.610.4060.0500.640.4810.1190.500.5070.1920.400，5790.1400,460.4830，0820.900.4830.1280.880.5790.1051,050.6030.1980.880-5490.1280.540，5960，1840.24O.謂0.0990.780.5870,1690.580.6180.1621.000，5160.1380.640.4940.1960.860.4230.1730丄470.6.51Q.2320.310.7980.1280.860.4670.1130.550，6250.0970.770.5310.3220.250,7270.1450.420.6050.1880.110.9140.1160.5606240.3021，030，4030.2321.180*2290.0590.930.2330*1181.040*2430，0800.900*2290.1060，990.2280.1061.010,2340，1270.870.2340.0751.370，2390,1321.250*2580.132中型，0組0.94+型>0組1.11中型，0組1.03+型，0組1,38+型，0組1.59+型，0組1*67中型，o組1.50+型，0組1.52中型，0組1.24+型，0組1.35中型，o組0.88+型，0組1.74中型，o組1.63+型，0組1.35中型，o組1.68+型，0組0，98中型，o組1.79+型，0組1.30中型，0組1.40+型，0組1.15+型，0組2.05+型，0組0.50中型，o組0.40+型，0組0.26中型，o組0.29+型，0組0.49中型，0組0.60+型，0組0.64+型，0組0.16+型，0組0.56中型，0組0.48+型，0組0.72中型，o組0.19+型，0組0.66中型，0組0.55+型，0組0.40+型，0組.0.44中型，o組0.64中型，0組0*42+型，0組0,32中型，o組0.21+型，0組0.72中型，o組0.72+型，0組0.31+型，0組0.58+型，0組1.01中型，0組0.71+型，0組0.34+型，0組0*18中型，s組1.52+型，s組1.290.710.2450.1600.420.6250.1300.390，6220，0460,250.8210,1960.630-6040.1470.370，7770.0560.280*8140.2210.370.7580，2390.360.7130.0590,560*585O，IOO0.310.6460，1090.430.7520.1370.220.8640*1180.350，7420，0730.200.8830.0640.200.795o，cno0.2108810，2860.080.9350.1520.37CL7350,1750.290，7470，0970.140.9330，0740.50O，OOO0.1350.400.0000.0360.26O，OOO0.0390.29(KOOO0.0440.49O，OOO0.0520.600.0000.0820.640.0000.1460.160.0000，0480.560.0000，0700.480*0000.0590.340.5300，2560.100.4740.1030.300，5440,1130.120，7810.0780.180.5520.0690.220.5000，0390.33O.糊0,1120.210.5020,1250*170.4650，0970.100.5150,2430.100.8600.0900.240.6660.0700.080.7390.1560.110』100.1230.260，7430.0960.140，8040.0910.090.7340.1850.050，7250.1011.520*0000，0501.290*0000*037中型，s組0.850.85O，OOO0.058中型，s組1.251.250.0000.066中型，s組1.111.11O，OOO0，034+型,s組0.870,870.0000.034+型，s組1.631.63O，OOO0，028中型，s組0.910.910.0000，051中型，s組1.261.260.000O，CHl+型，s組2.162.16o，ooo0，077中型，s組1.270.950.2510.038中型，s組1.361.030.2450.171巾型，s組2.201,700.2280.135+型，s組1.481.150.2250.121中型，s組1，911.390.2740.082中型，s組1.411.040，2630.067+型，s組1.431.100，2310,088巾型，s組1.291.000，2300.037巾型，s組1.310.980，2500.062中型，s組0.960.730，2370.234中型，s組1.700.890，4770.038+型，s組1.080.400，6290.171巾型，s組1.050.540，4850.135+型，s組1.230.580.5280.121巾型,s組1.600.450.7170.082+型,s組1.140.460*5980，067中型，s組0.950.450，5240.088巾型，s組1.390.7104900，037+型，s組1.080.530.5110，062中型，s組0.900.65CK2780,234中型，s組1.290,770，4050.241+型，s組1.030.430.5830*160中型，s組0.830.350.5760.076中型，s組1.200.320,7310,290中型，s組1.360.510，6260.115巾型，s組1.580.94O，術0.218中型，s組2.390*970,5940.165中型，s組0.880.460*4800.142巾型，s組0.950.390，5890.094中型，s組1.810.830，5410*156中型，s組1，400.680，5150*126中型，s組0.830.230.7240.147中型，s組1.920.160，9170，196巾型，s組1.100.460*5830，279中型,s組1.550，140.9100*239中型，s組0，860.160，8140.310+型，s組2.560.220，915(K132中型，s組1.710.400.7660*159中型,s組2.010.120.9400,087巾型，s組1.030.270*7390*069小型0.500.5000000.135小型0.400.4000000.036小型0.260.26(K0000.039AB估計值誤差P估計值誤差P小型-2.71600.1457<0細10.73310.28000.0146中型,o-2.37510.16090.00150.47490.31980.0015中型,s-2.89830.1214<0細11.50950.2448<0細1大型-2.55880.0864<0細10.96720.1578<0扁10.290.29O，OOO0，0440.490,49O，OOO0.0520.600.600.0000.0820.640.640.0000.1460.160.16O，OOO0,0480.560.560*0000.0700.480.48o，ooo0.0590.720.340.5300.2560.190.100，4740.1030.660.300，5"0.1130.550.120，7810，0780.400.180.5520，0690.440.220.5000.0390,640.330錫0.1120.420.210.5020.1250.320.170.4650.0970.210.100.5150，2430.720.100.8600.0900.720.240*6660，0700.310.080.7390.1560.580.110，8100.1231.010.260.7430.0960.710.140，8040,0910.340.090.7340.1850.180,050，7250.101表2型權利要求1.收獲夾竹桃科植物的方法，包括下列步驟(a)將植物從土壤中移出，(b)將完整的植物擱置風干至水分含量低于90重量％，(c)將風干的植物切碎，(d)進一步干燥切碎的植物以獲得包含具有式(2)的甾族糖苷的干燥植物材料2.根據權利要求1所述的方法，由此將該植物擱置風干至少大約1天。3.根據前述權利要求任一項的方法，由此將該植物擱置風干大約1至大約150天。4.根據前述權利要求任一項的方法，由此將該植物擱置風干大約3至大約100天。5.根據前述權利要求任一項的方法，由此將該植物露天擱置風干大約7至大約30天。6.根據前述權利要求任一項的方法，其中，隨后將風干的植物干燥至低于大約15重量％的殘余水分含量。7.根據前述權利要求任一項的方法，其中在大約35。C至大約120r的溫度下進行隨后的干燥。8.根據前迷權利要求任一項的方法，其中該植物選自麗杯閣、//oocwr,o"7、T7ooW"/wg"Wz'及其混合物。9.根據權利要求8的方法，其中該植物是麗杯閣。10.根據前述權利要求任一項的方法，其中該干燥植物材料進一步包含一種或多種具有下式的其它甾族糖苷其中R=烷基；R1=H、烷基、巴豆酰基、苯甲酰基或任何其它有機酯基團；112=11或一種或多種6-脫氧碳水化合物、或一種或多種2,6-二脫氧碳水化合物、或葡萄糖分子、或其組合；且其中虛線表明在碳原子C4與C5之間或在碳原子C5與C6之間任選存在其它鍵，或其混合物。11.根據前述權利要求任一項的方法，其中該干燥植物材料具有基于無水干燥植物材料至少大約1.3重量％的平均甾族糖苷總含量。12.根據前述權利要求任一項的方法，其中單個干燥植物材料具有基于無水干燥植物材料至少大約1.6重量％的甾族糖苷總含量。13.根據前述權利要求任一項的方法，其中該干燥植物材料包含基于無水干燥植物材料至少大約0.095重量％的式2的甾族糖苷。14.可根據前述權利要求任一項所述的方法獲得的干燥植物材料，包含基于無水干燥植物材料至少大約0.095重量％的式2的甾族糖苷。15.包含可根據權利要求1-13任一項的方法獲得的干燥植物材料的食品。16.根據權利要求l-13任一項的方法，進一步包括由該干燥植物材料獲得提取物。17.可根據權利要求16的方法獲得的提取物。18.包含權利要求17的提取物的食品。19.根據權利要求18的食品，其為飲料、小吃、食品棒、涂抹料、調、味品、湯或代餐產品形式。20.根據前述權利要求任一項的方法，其中甾族糖苷用于體重管理或肥胖癥的飲食控制。全文摘要收獲夾竹桃科植物的方法，包括下列步驟(a)將植物從土壤中移出，(b)將完整的植物擱置風干至少1天，(c)將風干的植物切碎，(d)進一步干燥切碎的植物以獲得包含具有式(2)的甾族糖苷的干燥植物材料。文檔編號A61P3/00GK101563094SQ200780047275公開日2009年10月21日申請日期2007年12月7日優先權日2006年12月21日發明者F·M·米伊斯,K·J·波維申請人:荷蘭聯合利華有限公司