專利名稱：局部皮膚用組合物及其制備和用途的制作方法
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背景技術：
因為衰老涉及人體，特別是人體皮膚，所以隨著人口老齡化，對于衰老的研究增多了。例如，對表現為細紋、皺紋等的皮膚衰老的治療已引起了大量關注。人們已經通過多種策略例如手術、激光治療和化妝品來解決皮膚衰老跡象例如細紋、皺紋、松弛和色素沉著過度。化妝處理包括使用多種霜劑和化妝水來改變皮膚衰老的影響。現有技術中的許多文獻集中于使用單一的基本組分來防止數種有害衰老影響當中的一種。例如，一種策略是使用一種或多種羥基自由基酸或視黃酸來刺激皮膚細胞的再生長，而沒有使用其它組分。該方法有缺點，因為其沒有認識到衰老是多種因子相互對皮膚產生有害作用引起的，這些因子有多種來源，經由多種同時發生的損害途徑引起對皮膚的損害。
更廣泛的研究已發現，環境因素例如壓力、日照、和食物、水以及空氣中的雜質也對皮膚表皮層和真皮層的組分產生不利影響，繼而影響和改變皮膚的外觀并引起早衰的出現。例如，因子例如自由基、活性氮類(＂RNS＂)、活性氧類(＂ROS＂)、和可能具有或可能不具有自由基、RNS和ROS之一特征的其它氧化類(＂OOS＂)，可對包括皮膚在內的人體有不利影響。在上述群體中，已被發現影響和不利影響皮膚外觀的特別因素包括氧化氮、超氧化物自由基、過氧化氫、和氫氧自由基。這些因子已不同地涉及多種皮膚狀態，包括光損害、一般的皮膚老化、接觸性皮炎、皺紋、脂質過氧化、酶降解、膠原蛋白和/或彈性蛋白的減少和分解、DNA的降解和抑制再生、炎癥、以及對皮膚組織的一般損害。
ROS類包括超氧化物(O2--)、過氧化氫(H2O2)、過氧基(HO2和RO2)、烷基超氧化物(R2O2)、羥基自由基(OH)、烷氧基自由基(OR)、和單線態氧。OOS類包括次鹵酸(HOX)(其中X是氯、溴、碘)、Z-胺(其中Z是含有氯化胺或氨化胺的化合物)、活性氮類(＂RNS＂)氧化氮(NO)、氨、環加氧酶、磷脂酶A2、磷脂酶C和過渡金屬。
據認為各種ROS直接或者作為中間體作用于細胞膜和/或包括細胞器及其內容物在內的其它細胞組分，給皮膚帶來不利影響。因此，需要提供抗上述各種ROS、RNS和OOS的局部皮膚處理組合物和方法。此外，期望這樣的組合物能修復由上述ROS、RNS和OOS引起的損害。
發明概述
本發明涉及包含經選擇的組分的組合物，所述組分提供防御對抗上述對包括皮膚在內的人體有不利影響的各種途徑機制的自由基、活性氧類、活性氮類、和其它氧化類。因此，本發明還包括將本發明組合物施用至皮膚，以抑制對皮膚有不利影響的誘發因素，從而處理和改善皮膚品質的方法。一般來說，本發明的組合物和方法涉及預防上述自由基、活性氧類、活性氮類、和其它氧化類對包括皮膚在內的人體的不利或有害影響。因此，本發明包括含有至少一種抗自由基組分和/或抗超氧化物組分和/或抗過氧化氫組分和/或抗羥基自由基組分和/或鏈斷裂組分的不同組合物。
本發明的實施方案包括含以下組分的組合物輔助細胞能量產物(energy product)的組分、和/或輔助膠原蛋白合成和/或彈性蛋白合成和/或抑制它們降解的組分、和/或輔助或提供細胞活性的組分。例如，已發現對前述因子有積極影響的本發明組合物包括柑桔組分，例如葡萄柚組分如葡萄柚提取物、超氧化物歧化酶組分、谷胱甘肽組分、四氫姜黃素組分和/或姜黃組分，例如姜黃提取物、生物類黃酮組分，例如柑桔生物類黃酮組分、葡萄組分，例如葡萄籽提取物、綠茶組分，例如綠茶提取物、生育酚、和/或生育酚衍生物如生育酚乙酸酯。
同樣已發現對改善皮膚健康的因素有積極影響的本發明另一實施方案為包含以下組分的組合物大豆組分如大豆蛋白組分、大米組分如大米蛋白尤其水解大米蛋白、向日葵籽組分如向日葵籽提取物。
本發明的又一組合物包括積雪草(centella asiatica)組分如積雪草(centella asiatica)提取物、玉米粒組分如玉米粒提取物、海藻組分如海藻提取物、和泛醌(輔酶Q)。
本發明的另一組合物包括迷迭香組分如迷迭香提取物、卵磷脂組分、神經酰胺組分如神經酰胺3組分、谷甾醇組分如β谷甾醇、甘油組分、泛醇組分、脯氨酸組分如L-脯氨酸、和透明質酸鹽組分如透明質酸鈉。
如下文所述，本發明另外包括含有以下組分的組合物在上文中提到的每一前述組合物組分中的一種或多種的組合，更詳細地講為其中所含活化劑。
因此，還提供出于上述任何原因而將該組合物施用至皮膚，以維持和/或改善個人皮膚狀態的方法。因此，例如可通過以例如有效量的量施用一種或多種不同本發明組合物，來將該組合物施用至皮膚。
本文提供本發明的組合物的制備方法。
附圖簡述
圖1顯示施用過制劑的人皮膚暴露于UV 30分鐘后紅斑增多的情況。
圖2顯示施用過制劑的人皮膚暴露于UV 10小時后紅斑增多的情況。
圖3顯示樣品對前膠原分泌的影響。數據表示為膠原蛋白/生存力比值，通過經暴露之后在組織培養上清液中檢測到的前膠原量除以作為細胞生存力指示劑的WST-1還原情況(WST-1 reduction)來計算。
圖4顯示樣品對彈性蛋白分泌的影響。數據表示為彈性蛋白/生存力比值，通過經暴露之后在組織培養上清液中檢測到的彈性蛋白量除以作為細胞生存力指示劑的WST-1還原情況來計算。
圖5顯示樣品對MMP-1活性的影響。數據表示為％對照MMP-1活性。水平線表示100％活性。
圖6顯示樣品對MMP-9活性的影響。數據表示為％對照MMP-9活性。水平線表示100％活性。
圖7顯示樣品對彈性蛋白酶活性的影響。數據表示為％對照MMP彈性蛋白酶活性。水平線表示100％活性。
圖8顯示樣品對RAW 264.7細胞產生NO的影響。數據表示為與LPS刺激的陽性對照相比產生的NO％。L6＝Lipochroman-6，NT＝Nutriene生育三烯酚類，TQS＝γ-生育醌S，VC＝Viapure Citrus，SZ＝Soybean Zymbiosome，NPR＝NAB Pikea robusta。
圖9顯示在HEK001角質形成細胞中樣品對脂質染色的影響。數據表示為％得自未處理細胞的對照脂質。
發明詳述
如上面的概要所述，本發明提供組合物，該組合物提供防御機制對抗各種自由基、活性氧類、活性氮類和其它氧化類對人體包括皮膚的影響。這些組合物通過例如增加皮膚細胞中的能量、和/或抑制有害的酶、和/或維持和/或改善皮膚中的彈性蛋白、膠原蛋白和糖胺聚糖的品質和數量，來輔助維持和/或改善皮膚狀態。
一般來說，本發明的組合物包括以下組分中的一種或多種柑桔組分，例如葡萄柚組分，如葡萄柚提取物組分，優選葡萄柚果皮提取物，和優選芹菜苷配基組分； 超氧化物歧化酶組分； 谷胱甘肽組分； 四氫姜黃素組分； 酚組分，例如多酚組分； 精油組分； 抗壞血酸組分； 姜黃組分，例如姜黃提取物； 類黃酮組分，例如生物類黃酮組分，如柑桔生物類黃酮； 葡萄組分，例如葡萄籽提取物； 綠茶組分，例如綠茶提取物； 生育酚和/或其衍生物，例如生育酚乙酸酯； 大豆組分，例如大豆蛋白組分； 大米組分，例如大米蛋白，尤其是水解大米蛋白； 向日葵籽組分，例如向日葵籽提取物； 甲氧肉桂酸辛酯(octinoxate)組分； 丁基甲氧二苯酰甲烷組分； 積雪草(centella asiatica)組分，例如積雪草(centella asiatica)提取物； 玉米粒組分，例如玉米粒提取物； 海藻組分，例如海藻提取物，優選掌狀海帶(laminaria digitata)提取物； 抗壞血酸四異棕櫚酸酯組分； 輔酶組分，例如泛醌(輔酶Q)； 迷迭香組分，例如迷迭香提取物，優選熊果酸組分； 卵磷脂組分； 神經酰胺組分，例如神經酰胺3； β谷甾醇組分； 甘油組分； 泛醇組分，例如d-泛醇； 腺苷組分； 脯氨酸組分，例如L-脯氨酸； 透明質酸鹽組分，例如透明質酸鈉； 碳水化合物組分； B族維生素組分；和 植酸(phylate)組分。
本文所用術語＂復合物＂指圍繞關于哺乳動物皮膚的健康和保養的共同主題而選擇的不同成分的混合物。一種這樣的成分復合物可集中于調節活性氧類和活性氮類的影響。
這樣的組合物的一個具體實施方案包括柑桔組分、優選含有芹菜苷配基的柑桔組分的組合，該組合物因其防止自由基損害皮膚從而防止自由基損害帶來的衰老效應的抗氧化性質而被廣泛使用。所述柑桔組分可來源于檸檬、橙子、橘子、葡萄柚、胡椒、蕎麥、黑茶藨子、杏、櫻桃、葡萄和洋李。優選的柑桔組分為葡萄葡萄柚組分，更具體的說是包括芹菜苷配基的葡萄柚提取物或只是芹菜苷配基。已發現柑桔組分、尤其是含有芹菜苷配基的柑桔組分例如水果提取物、更詳細地講為葡萄柚提取物抑制由活性氮類，具體而言為氧化氮(NO)產物引起的損害。還發現柑桔組分抑制脂質過氧化，以及由自由基引起的炎癥。因此，已發現含有柑桔組分、尤其是葡萄柚提取物組分、優選含有芹菜苷配基的本發明組合物抑制由氧化氮的產生、和/或脂質過氧化、和/或炎癥因子(例如自由基引起的炎癥)所引起的對皮膚的損害。
所述組合物一般還包括超氧化物歧化酶組分，該組分抑制由侵襲例如酶的超氧化物引起的對蛋白質、彈性蛋白、膠原蛋白和DNA的損害；和谷胱甘肽組分，該組分抑制由過氧化氫引起的損害。所述組合物的其它組分可包括酚組分和/或一種或多種所謂的＂精油＂和/或抗壞血酸(＂維生素C＂)和/或可在例如姜黃組分如姜黃提取物中發現的四氫姜黃素。另外的組分可包括類黃酮組分，例如生物類黃酮組分，例如得自例如葡萄柚、檸檬或橙子的柑桔生物類黃酮組分；和多酚組分，該組分可在以下中發現例如葡萄組分例如葡萄籽提取物并優選低聚原花青素，綠茶組分、優選包括多酚、尤其是表沒食子兒茶素沒食子酸脂(EGCG)；生育酚和/或生育酚乙酸酯，每一組分均抑制由侵襲脂質的羥基自由基引起的損害。
因此，在一個具體實施方案中，所述組合物包括約0.01％-約1％的葡萄柚提取物、約0.0001％-約0.01％的超氧化物歧化酶、約0.01％-約1％的谷胱甘肽、約0.001％-約1％的四氫姜黃素(tetrahydrodiferuloy methane)或姜黃提取物、約0.001％-約1％的柑桔生物類黃酮、約0.001％-約1％的葡萄籽提取物、約0.01％-約1％的綠茶提取物、約0.01％-約2％的生育酚、約0.01％-約5％的生育酚乙酸酯。
因此，如將被理解的，一般如上所述的組合物可通過減少炎癥、脂質過氧化、以及膠原蛋白、彈性蛋白和DNA降解中的一種或多種的有害影響來維持和/或改善皮膚品質，從而保持年輕的外貌。
在本發明的另一具體實施方案中，組合物一般包括大豆組分，例如大豆蛋白組分，和優選包括異黃酮，例如金雀異黃素和黃豆配基。已發現大豆組分為彈性蛋白酶的抑制劑，彈性蛋白酶一般響應如暴露于UV射線、干燥和環境壓力這樣的因素而被釋放到皮膚。因此，大豆組分幫助維持和/或增加皮膚的堅實性和彈性，特別是來源于日照UV射線的那些皮膚。所述組合物的實施方案一般還包括對膠原酶有抑制效果的大米組分，例如大米蛋白，更詳細地講是水解大米蛋白。膠原酶的抑制有助于保護皮膚中的膠原蛋白，從而在彈性、堅實性、皺紋、干燥和老年斑方面維持和/或改善皮膚狀態。該實施方案也可包括向日葵籽組分，例如向日葵籽提取物。已發現向日葵籽組分充當抗糖化因子，通過抑制由年齡和上述其它有害因素引起的膠原蛋白僵化來維持和/或改善皮膚狀態。所述組合物還可包括甲氧肉桂酸辛酯組分和/或丁基甲氧二苯酰甲烷組分。
因此，在一個具體的實施方案中，所述組合物包含約0.01％-約3％的大豆蛋白(Glycine Soja)、約0.01％-約3％的水解大米蛋白、約0.01％-約3％的向日葵籽提取物。
本發明的又一具體實施方案是包含積雪草(centella asiatica)組分例如積雪草(centella asiatica)提取物的組合物。已發現積雪草(centellaasiatica)組分促進膠原蛋白和彈性蛋白合成，從而維持或改善皮膚的堅實性、彈性和一般強度。主要活性成分為皂角(三萜類化合物)，包括積雪草皂苷、羥基積雪草苷和馬達積雪草酸。該實施方案可包括玉米粒組分，例如玉米粒提取物，更詳細地地講是肌醇，它提供幾個好處，包括輔助細胞產生和貯存能量、抑制脂質過氧化，它一般是有效的抗氧化劑。玉米粒提取物組分可單獨地或組合地包含在組合物中，該組分包括含氮元素、碳水化合物、維生素B、微量元素、和/或植酸(phylate)形式的肌醇。該實施方案還可包括海藻組分，例如海藻提取物(例如，掌狀海帶(laminaria digitata)提取物)，當被包括在內時，它輔助增加胞間ATP比率和增加細胞和組織的氧合作用，從而廣泛地增強皮膚的結構。最后，可包括泛醌(輔酶Q)組分，其作為輔酶任選地與抗壞血酸四異棕櫚酸酯一起用于各種重要酶途徑尤其是在細胞的能量生成。
因此，在一個具體的實施方案中，所述組合物包括約0.01％-約3％的積雪草(centella asiatica)提取物、約0.01％-約3％的玉米粒提取物、約0.01％-約3％的海藻提取物、約0.001％-約1％的輔酶Q-10。
本發明的又一具體實施方案是給皮膚廣泛提供水合脂類基質(hydrolipid matrix)的組合物。所述組合物一般包括迷迭香組分，例如迷迭香提取物，并優選迷迭香酸、酚二萜類、鼠尾草酚、鼠尾草酸、和/或熊果酸、或只有熊果酸。迷迭香提取物優選為得自迷迭香葉的提取物。優選將迷迭香組分包入脂質體以增強遞送。另外組分一般包括卵磷脂組分、神經酰胺3組分、磷脂例如β谷甾醇組分、甘油組分、泛醇組分、脯氨酸組分例如L-脯氨酸、和透明質酸鹽組分例如透明質酸鈉中的一種或多種。上述組合物的組分的亞組合優選地包括迷迭香組分例如迷迭香提取物優選迷迭香葉提取物，和卵磷脂組分。該亞組合輔助皮膚中和皮膚上的脂質保持和形成濕潤層屏障。上述組合物的又一亞組合優選包含卵磷脂組分、神經酰胺3組分、和β谷甾醇組分、或優選包括神經酰胺3組分和β谷甾醇組分。上述組分的亞組合還輔助皮膚中和皮膚上的脂質保持和形成濕潤層屏障。
因此，在一個具體的實施方案中，所述組合物包含約0.0001％-約1％的迷迭香提取物、含約0.001％-約0.1％的神經酰胺3和約0.0001％-約0.1％的β-谷甾醇的脂質復合物、約0.1％-約10％的甘油、約0.01％-約1％的泛醇、約0.001％-約1％的脯氨酸、和約0.001％-約5％的透明質酸鈉。
如將被理解，每一前述組合物和亞組合均可單獨使用，或可與另外組分聯合使用以形成另外新的制劑。因此本發明還包括含有每一前述組合物組分中的一種或多種的組合再聯合下文論述的其它組分的組合物。
本發明的組合物還可包括化妝品上或藥學上可接受的載體。可將所述組合物的組分包封入例如脂質體膠囊。當存在載體時，以組合物的總重量計，該復合物占約0.01％-約10％，優選約1％-約7％。
一般而言，抗超氧化物組分可包括具有抗超氧化物活性的那些物質，特別是具有超氧化物歧化酶活性的那些物質。換句話說，它包括可催化歧化反應的組分。例如，它包括超氧化物歧化酶(SOD)、通過接枝聚環氧烷烴、聚乙二醇、多糖或酰化基團修飾的SOD、SOD的鹽、含有這樣的SOD產物的物質、porphorin和具有超氧化物歧化酶類似活性的物質。在這方面，它包括在EP 223 257中提及的那些產物，其相關內容通過引用結合到本文中。
上述所有超氧化劑物歧化酶以及本領域技術人員可從文獻中推出的變體和同等物均可適于作為SOD用于本發明。另外，它們可具有不同來源。例如，它們可以是動物(牛、豬等)、人(血液)、或植物(真菌、藻類、菠菜等)。它們還可以由細菌或酵母獲得，或備選地通過生物技術途徑獲得。可用于本發明的SOD的實例在美國專利第5,526,507號中描述，其內容通過引用結合到本文中。SOD可占復合物重量的約0.0001％-約5％、0.01％-約5％。更優選，SOD可以約0.1％-約2％重量的量可為包含在復合物中。
一般而言，抗過氧化氫組分可為硫醇或硫醇衍生物。在本發明上下文中，術語硫醇應理解為特征為--SH基團的有機化合物。硫醇衍生物是這樣的有機化合物，保留--SH基團的衍生物，或者是其中--SH基團轉化為--SR基團的硫醚或硫酯。
被理解為與本發明硫醇或硫醇衍生物等同的化合物是通過經由氫鍵鍵合、水合或其它自發重排的互變異構、二聚反應或低聚反應由硫醇或硫醇衍生物形成的那些化合物。如果衍生物通過不同類型的重排例如烷基遷移而與異構體處于平衡中，那么該異構體視為包括在本發明的硫醇和硫醇衍生物中。
合適的硫醇和硫醇衍生物可包括卡托普利、半胱胺、麥角硫因、巰基丙酰甘氨酸、青霉胺、N-乙酰基半胱氨酸、S-乙酰基半胱氨酸、N，S-二乙酰基半胱氨酸、N，S-二乙酰基半胱氨酸酰胺、半胱氨酸乙酯、N-乙酰基半胱氨酸乙酯、S-乙酰基半胱氨酸乙酯、N，S-二乙酰基半胱氨酸乙酯、巰基乙酸、半胱氨酸、高半胱氨酸、谷胱甘肽、硫代甘油、硫羥蘋果酸、2-巰基丙酸、3-巰基丙酸、硫二甘醇、2-巰基乙醇、二硫蘇糖醇、噻噸、硫代水楊酸、硫羥乳酸、硫代丙酸、亞硫基二乙酸、硫辛酸、及其化妝品上可接受的鹽。
本文所用化妝品上可接受的鹽包括但不限于堿金屬鹽，例如鈉鹽、鋰鹽、鉀鹽、和銣鹽；堿土金屬鹽，例如鎂鹽、鈣鹽、和鍶鹽；無毒重金屬鹽，例如鋁鹽和鋅鹽；硼鹽；硅鹽；銨鹽；三烷基銨鹽，例如三甲基銨鹽和三乙基銨鹽，和四烷基鎓鹽。
一般而言，所述抗過氧化氫組分可以復合物重量的約0.001％-約5％重量、優選約0.01％-約2.5％、更優選約0.1％-約1％的量摻入復合物中。
一般而言，抗羥基自由基組分可包括一種或多種下列成分生育酚、生育酚衍生物、四氫姜黃素、葡萄籽提取物(例如，葡萄(vitisvinifera)籽提取物)、葡萄柚提取物(例如，柚(citrus grandis)(葡萄柚)果提取物)、綠茶提取物(例如，茶(camellia sinensis)(葉)提取物)、姜黃酸、類姜黃素、四氫類姜黃素、兒茶素、表沒食子兒茶素3-0-沒食子酸酯和多酚、低聚原花色素、生物類黃酮、類黃酮、及其混合物。
生育酚(維生素E)及其衍生物例如生育酚的酯可用于本發明組合物中。合適的生育酚包括母生育酚的一甲基、二甲基、或三乙基衍生物，包括但不限于α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚、Δ-生育酚、ε-生育酚、ξ-生育酚、和η-生育酚。合適的生育酚的酯包括但不限于生育酚乙酸酯、生育酚琥珀酸酯、生育酚苯甲酸酯、生育酚丙酸酯、生育酚山梨酸酯、生育酚油酸酯、生育酚乳清酸酯、生育酚亞油酸酯、生育酚煙酸酯、和2-乙基己酸酯。
當生育酚和/或其衍生物包含在本發明復合物中時，其以約0.01％-約98％，優選約0.01％-約5％，和0.01％-約2％的水平使用。
四氫姜黃素和/或姜黃提取物還可以以復合物重量的約0.1％-約20％，優選約1％-約10％的水平摻入復合物中。
上文所述葡萄籽提取物和葡萄籽提取物與磷脂的復合物也可有益地用于本發明。葡萄籽提取物包括多酚例如表兒茶素、原花色素、和兒茶素的混合物。合適的葡萄籽提取物和磷脂的復合物在美國專利第4,963,527號中描述，其內容通過引用結合到本文中。
當摻入到復合物中時，葡萄籽提取物或其與磷脂的復合物以復合物重量的約0.001％-約5％，優選約0.01％-約2.5％的量存在。與葡萄籽提取物相同量的綠茶提取物可被包括在其中。
類黃酮和生物類黃酮也可用于本發明。已在以下文獻中報道Bravo，多酚類化學、膳食來源、代謝、和營養的重要性(PolyphenolsChemistry，Dietary Sources，Metabolism，and Nutritional Significance)，Nutrition Reviews，第56卷，第11期，317-33(1998年11月)，其內容通過引用結合到本文中，類黃酮可再分成如下13種 查耳酮
雙氫查耳酮
噢哢
黃酮
黃酮醇
二氫黃酮醇
黃烷酮
黃烷醇
黃烷二醇或 花白素
花色素
異類黃酮
雙類黃酮
原花色素或 縮合鞣質
類黃酮一般具有二苯基丙烷(C6-C3-C6)的共同結構，并由兩個經由3個碳原子連接的芳環構成，所述3個碳原子通常形成含氧雜環。基本結構顯示如下
類黃酮有時候作為糖苷配基存在于植物中，雖然它們大多數情況下作為糖苷衍生物而被發現。
適用于本發明的特定類黃酮包括但不限于蘆丁、檸檬素、槲皮素(quercitin)、橙皮苷、柚皮苷(naringen)、紫杉葉素、兒茶素、表兒茶素、圣草酚、柚皮素、三羥乙基蘆丁、白楊黃素、紅橘素、木犀草素、表沒食子兒茶素、表沒食子兒茶素沒食子酸酯、非瑟酮、山柰酚、高良姜黃素、沒食子兒茶素、表兒茶素沒食子酸酯、芹菜苷配基、香葉木素、楊梅黃酮、金雀異黃素、黃苷元、或其衍生物。類黃酮可得自任何合適的來源。優選的來源為柑橘。
當類黃酮摻入到復合物中時，它們占復合物重量的約0.001％-約20％，優選約0.01％-約10％重量。
還可包括其它特定組分例如棕櫚酰羥丙基三甲銨支鏈淀粉。在一個實施方案中，棕櫚酰羥丙基三甲銨支鏈淀粉可與茶(camelliasinensis)提取物混合。以復合物的重量計，它們可以占0.001％-約2％。
鏈斷裂劑可包括與上述抗羥基自由基組分相同的組分。因此，一種或多種上述抗羥基自由基組分還可用作鏈斷裂劑組分。鏈斷裂抗氧化劑是一旦開始脂質過氧化作用就可以馬上中斷鏈反應的組分。
如上所述，該復合組合物還可包括選作修復由ROS引起的損害的組分。在一個實施方案中，本發明組合物包括至少一種提供細胞產能組分、至少一種輔助膠原合成的組分、和/或至少一種輔助或提供細胞活性的組分。這些組分可單獨使用或，按照需要聯合使用。
期需的細胞產能組分包括泛醌。泛醌廣泛地存在于細菌、真菌、酵母、植物、和動物中。已知不同的物種產生具有不同數目異戊二烯單元(n)的同種型(Q-n)。例如，在一些微生物中，異戊二烯單元的數目是6(Q6)，在植物中，異戊二烯單元的數目是9(Q9)，在人中，異戊二烯單元的數目是10(Q10)。輔酶Q10或2，3，-二甲氧基-5-甲基-6-十異戊烯基-苯醌的功能是恢復和維持呼吸作用以及在細胞活性的能量供給方面促進ATP生成。也可能使用泛醌的衍生物例如泛醇。
細胞產能組分，例如輔酶Q10，按復合物重量的約0.001％-約10％、優選約0.01％-約5％的量摻入復合物中。
為了修復由ROS引起的損傷，期需包括促進膠原合成的組分。已有人提出包括α羥基酸和β羥基酸在內的羥基自由基酸可用于促進膠原合成。因此，本發明考慮包括一種或多種α羥基酸或β羥基酸。合適的實例包括乳酸、蘋果酸、羥乙酸、檸檬酸、和水楊酸。
另外，已發現抗壞血酸(維生素C)及其衍生物促進膠原合成。可用于本發明的抗壞血酸衍生物包括單獨或組合的所有對映體。優選地，抗壞血酸以左旋體提供。另外，抗壞血酸或其衍生物可為水溶或油溶形式。
維生素C(抗壞血酸)衍生物的非排他實例為，例如，L-抗壞血酸的烷基酯，其中所述烷基部分具有8-20個碳原子。對于這些酯來說，它們可選自抗壞血酸的脂肪酸單酯、二酯、三酯或四酯。例如，這樣的酯包括，但不限于抗壞血酸棕櫚酸酯、抗壞血酸月桂酸酯、抗壞血酸肉豆蔻酸酯、抗壞血酸硬脂酸酯、抗壞血酸二棕櫚酸酯、抗壞血酸二月桂酸酯、抗壞血酸二肉豆蔻酸酯、抗壞血酸二硬脂酸酯、抗壞血酸三棕櫚酸酯、抗壞血酸基三月桂酸酯、抗壞血酸三肉豆蔻酸酯、抗壞血酸三硬酯酸酯、抗壞血酸四棕櫚酸酯(四己基癸醇抗壞血酸酯)、抗壞血酸四月桂酸酯、抗壞血酸四肉豆蔻酸酯、抗壞血酸四硬酯酸酯、L-抗壞血酸棕櫚酸酯、L-抗壞血酸異棕櫚酸酯、L-抗壞血酸二棕櫚酸酯、L-抗壞血酸異硬酯酸酯、L-抗壞血酸二硬脂酸酯、L-抗壞血酸二異硬脂酸酯、L-抗壞血酸肉豆蔻酸酯、L-抗壞血酸異肉豆蔻酸酯、L-抗壞血酸2-乙基己酸酯、L-抗壞血酸二-2-乙基己酸酯、L-抗壞血酸油酸酯和L-抗壞血酸二油酸酯、四己基癸醇抗壞血酸酯；L-抗壞血酸的磷酸酯例如L-抗壞血酸-2-磷酸酯和L-抗壞血酸-3-磷酸酯；L-抗壞血酸的硫酸酯例如L-抗壞血酸-2-硫酸酯和L-抗壞血酸-3-硫酸酯；它們與堿土金屬例如鈣和鎂的鹽。
對于這些鹽來說，它們可選自磷酸酯鹽和硫酸酯鹽，優選磷酸酯鹽。所述抗壞血酸磷酸酯鹽一般選自L-抗壞血酸3-磷酸酯鹽、L-抗壞血酸2-磷酸酯鹽、L-抗壞血酸3-焦磷酸酯鹽和二(L-抗壞血酸3，3-)磷酸雙酯鹽。優選地，抗壞血酸磷酸酯鹽為抗壞血酸磷酸酯鎂或抗壞血酸磷酸酯鈉；更優選為抗壞血酸磷酸酯鎂。同樣地，抗壞血酸硫酸酯鹽一般選自L-抗壞血酸3-硫酸酯鹽、L-抗壞血酸2-硫酸酯鹽、L-抗壞血酸3-焦硫酸酯鹽和二(L-抗壞血酸3，3-)硫酸雙酯鹽。
膠原合成組分，例如抗壞血酸及其衍生物，按復合物重量的約0.001％-約10％，優選約0.01％-約5％的量摻入復合物中。
據認為類視黃醇可影響細胞活性，因此期需將類視黃醇摻入本發明的復合物中。類視黃醇包括視黃醇、視黃醛(維生素A醛)、和視黃酯例如乙酸視黃酯、丁酸視黃酯、丙酸視黃酯、辛酸視黃酯、月桂酸視黃酯、棕櫚酸視黃酯、油酸視黃酯、和亞油酸視黃酯。
類視黃醇會刺激皮膚，因此需要將其以使這種可能的刺激作用減至最低的水平摻入到復合物中。或者，可將刺激緩和劑摻入組合物中以輔助防止給使用者帶來過度的不適，同時潛在地允許增加類視黃醇的劑量水平。這樣的刺激緩和劑包括但不限于神經酰胺、假神經酰胺、脂肪酸、膽固醇、磷脂、泛醇、燕麥提取物、尿囊素、銀杏(ginkgobiloba)、甘草提取物、金盞花、人參、假葉樹(butchers broom)等。
細胞活性組分，例如類視黃醇，按復合物重量的約0.001％-約10％、優選約0.01％-約5％的水平摻入復合物中。
本發明的復合組合物一般與藥學上或化妝品上可接受的賦形劑或載體混合。本發明的復合組合物可配制成溶液、凝膠、洗劑、霜劑、軟膏劑、水包油乳劑、油包水乳劑、或其它藥學上或化妝品上可接受的形式。本發明的復合組合物還可包含各種已知的和常規的化妝品組分，只要它們不有害地影響所需的效果。
為了當把復合組合物施用至皮膚時促進其分布，將藥學上可接受的或化妝品上可接受的賦形劑用作存在于復合組合物中的稀釋劑、分散劑、或其它物質的載體。
除水以外的賦形劑可以包括液體或固體潤滑劑、溶劑、濕潤劑、增稠劑、和粉劑。例如，可以單獨使用以下賦形劑，或者使用一種或多種賦形劑的組合。
賦形劑也可包括推進劑例如丙烷、異丁烷、二甲醚、二氧化碳、氧化氮；和溶劑例如乙醇、異丙醇、丙酮、乙二醇單甲醚、二甘醇單丁醚、二甘醇單乙醚，或粉末例如白堊、滑石粉、漂白土、高嶺土、淀粉、樹膠、膠態硅石、聚丙烯酸鈉、四烷基和/或三烷基芳基銨蒙皂石、化學改性的硅酸鎂鋁、有機改性的蒙脫土、水合硅酸鋁、熱解硅石、羧基乙烯基聚合物、羧甲基纖維素鈉、乙二醇單硬脂酸酯。
潤滑劑，例如硬脂醇、單蓖麻油酸甘油酯、貂油、十六醇、異硬脂酸異丙酯、硬脂酸、棕櫚酸異丁酯、硬脂酸異鯨蠟酯、油醇、月桂酸異丙酯、月桂酸己酯、油酸癸酯、十八烷-2-醇、異十六醇、二十烷醇、二十二醇、棕櫚酸十六醇酯、硅油例如二甲基聚硅氧烷、癸二酸二正丁酯、肉豆蔻酸異丙酯、棕櫚酸異丙酯、硬脂酸異丙酯、硬脂酸丁酯、聚乙二醇、三甘醇、羊毛脂、可可脂、玉米油、棉籽油、橄欖油、棕櫚仁油、油菜籽油、紅花籽油、月見草油、豆油、向日葵籽油、鱷梨油、芝麻籽油、椰子油、花生油、蓖麻油、乙酰化羊毛脂醇、凡士林、礦物油、肉豆蔻酸丁酯、異硬脂酸、棕櫚酸、亞油酸異丙酯、乳酸月桂酯、乳酸肉豆蔻酯、油酸癸酯、肉豆蔻酸肉豆蔻酯。
本文所用“潤滑劑”是指用于防止或減輕干燥、以及保護皮膚的物質。很多種合適的潤滑劑是已知的，并可用于本文中。Sagarin，Cosmetics，Science and Technology，第二版，第1卷，第32-43頁(1972)包含合適物質的多個實例，其通過引用結合到本文中。
本發明組合物可任選包含防曬劑例如無機或有機防曬劑，以在使用本發明復合組合物期間防止過度暴露于陽光的有害作用。合適的防曬劑的實例包括在U.S.OTC Sunscreen Monograph中描述的那些防曬劑，例如甲氧肉桂酸辛酯、和丁基甲氧二苯酰甲烷，其內容通過引用結合到本文中。
因此，本發明的組合物可以包含0.1-10％、優選1-5％重量的有機防曬物質。
本發明組合物還可任選包含平均粒徑為1-300nm的二氧化鈦或氧化鋅、平均粒徑為1-300nm的氧化鐵、平均粒徑為1-100nm的硅石例如熱解硅石作為防曬劑。應當注意，當在本發明的乳劑中用作組分時，硅石可以提供防護紅外線輻射。
可使用兩種形式的特細二氧化鈦粉，即水分散二氧化鈦和油分散二氧化鈦。水分散二氧化鈦是特細二氧化鈦粉，所述粉粒未涂覆或者涂有材料以賦予粉粒親水表面特性。這樣的材料的實例包括氧化鋁和硅酸鋁。油分散二氧化鈦是特細二氧化鈦粉，所述粉粒表現出疏水表面特性，并且對于該目的，可用金屬皂例如硬脂酸鋁、月桂酸鋁、硬脂酸鋅、或有機硅氧烷化合物對其進行涂覆。
“特細二氧化鈦粉”是指二氧化鈦顆粒的平均粒徑小于100nm、優選10-40nm、最優選15-25nm。以組合物的重量計，可任選摻入本發明的組合物中的二氧化鈦的總量為1-25％、優選2-10％、理想地為3-7％。
組合物的特別方便的形式是乳劑，其中油或油性材料(潤滑劑)通常與乳化劑一起存在以提供油包水乳劑或水包油乳劑。
組合物還可以包含水，水的含量通常最高達95％重量、優選為5-95％重量。
為了代替已述的任選的乳化劑，或除了已述的任選的乳化劑以外，組合物還可以任選包含也可以用作乳化劑的高分子量有機硅表面活性劑。
有機硅表面活性劑可以是分子量為10,000-50,000的具有聚氧乙烯和/或聚氧丙烯側鏈的二甲基聚硅氧烷高分子量聚合物。當使用時，為了方便起見，二甲基聚硅氧烷聚合物作為在揮發性硅氧烷中的分散體提供，所述分散體包含例如1-20％體積的聚合物和80-99％體積的揮發性硅氧烷。理想地，分散體由10％體積的分散在揮發性硅氧烷中的聚合物構成。
聚硅氧烷聚合物可以在其中分散的揮發性硅氧烷的實例包括聚二甲基硅氧烷(五聚物和/或六聚物)。
優選的有機硅表面活性劑為環狀聚二甲基硅氧烷和含聚氧乙烯或聚氧丙烯側鏈的聚二甲基硅氧烷，例如得自DOW CORNING的DC 3225C Formulation Aid。另一種有機硅表面活性劑為月桂基聚甲基硅氧烷共聚醇(laurylmethicone copolyol)，例如也可得自Dow Corning的DC Q2-52000。
當存在于組合物中時，以乳劑的重量計，有機硅表面活性劑的量一般至多25％，優選0.5％-15％。
可任選使用的常規助劑的實例包括防腐劑，例如對羥基苯甲酸酯；抗氧化劑，例如丁基羥基甲苯；濕潤劑，例如甘油、乙氧基化甘油例如甘油聚氧乙烯(26)醚、山梨醇、2-吡咯烷酮-5-甲酸酯、鄰苯二甲酸二丁酯、明膠、聚乙二醇例如PEG 200-600；連同堿例如三乙醇胺或氫氧化鈉的緩沖劑；蠟，例如蜂蠟、地蠟、石蠟；植物提取物例如蘆薈(Aloe Vera)、矢車菊、金縷梅(witch hazel)、接骨木花(elderflower)、黃瓜；以及阿西羅拉櫻桃發酵物(acerola cherryfermentate)、增稠劑；活性增強劑；著色劑；且芳香劑，例如香料，均可包含于依照本發明制備的組合物中。化妝品助劑可以形成組合物的平衡。
也可期需摻入抗炎劑和/或抗刺激劑。優選天然抗炎劑和/或抗刺激劑。例如，可使用甘草及其提取物、甘草酸二鉀、燕麥和燕麥提取物、小燭樹蠟、α沒藥醇、蘆薈、Manjistha(從茜草(Rubia)屬植物、特別是茜草(Rubia cordifolial)中提取)、和Guggal(從沒藥(Commiphora)屬植物、特別是印度穆庫爾沒藥(Commiphora Mukul)中提取)。
如上所述，可包括的皮膚調理劑為透明質酸、其衍生物和鹽其中包括透明質酸鈉、植物提取物例如可樂果、瓜拉那巴拉圭茶(guarana mate)，藻類提取物，脯氨酸，L-脯氨酸，和皮膚有益劑(skinbenefit agent)例如神經酰胺、糖神經酰胺(glycoceramide)、假神經酰胺、鞘脂類例如鞘磷脂、腦苷脂、硫脂(sulphatide)、和神經節苷脂、鞘氨醇、二氫鞘氨醇、植物鞘氨醇、磷脂，它們可單獨使用或者在混合物中使用。也可以將脂肪酸與這些皮膚有益劑聯合使用。例如，神經酰胺和糖神經酰胺(glycoceramide)包括在美國專利第5,589,178、5,661,118和5,688,752號中描述的那些，該專利的相關部分通過引用結合到本文中。例如，假神經酰胺包括在美國專利第5,198,210、5,206,020和5,415,855號中描述的那些假神經酰胺，該專利的相關公開通過引用結合到本文中。
一般而言，可依照本領域已知的常規方法制備本發明的組合物。例如，可通過有或沒有優先順序地依次添加組合本發明的組分，然后混合以形成混合物。例如，一般使水溶性組分組合以形成水相，一般使脂溶性組分組合以形成油相。其后，可把兩相乳化，然后與載體等組合。備選地，可通過例如在一部反應系統(one pot system)中混合來制備組合物。
如上所述，本發明組合物可給予個人，優選局部施用至個人的皮膚。可以有效量施用所述組合物以抑制自由基、活性氧類、和其它氧化類。顯然，個人可施用如他們需要或認為必需的那樣多或少的組合物，但是，例如，可以約1mg/cm2-約3mg/cm2皮膚的量將本發明組合物施用至皮膚。優選地，以約2mg/cm2每平方英寸皮膚的量施用本發明組合物。一般而言，每天兩次施用所述組合物，例如在早晨和晚上。
所述組合物優選包括用于增強活性組分運輸進入皮膚表皮層和真皮層的組分。這樣的組分包括二甲基亞砜(DMSO)或正癸基甲基亞砜(NDMS)。
實施例
下列實施例意圖舉例說明、但不是限制本發明。下列實施例舉例說明本發明組合物的組分的效果。它們還闡述與可備選地摻入上述任何組合物中的另外任選組分組合的本發明組合物。
實施例1 進行研究以探索樣品對膠原和彈性蛋白合成的影響。這些研究使用兩個試驗系統。人真皮成纖維細胞，因為這些細胞合成前膠原活躍，和彈性蛋白。
在介質中稀釋樣品。將RON SBD 101、積雪草(centella asiatica)、和維生素C配制成0.001、0.01、和0.1％濃度。將剩余樣品制備成0.1、1、和10％濃度。在50:30:20的DMSO:乙醇:水中制備積雪草(centellaasiatica)提取物。在24孔板中接種人真皮成纖維細胞(Hs-27)，培育過夜次日用前述濃度的樣品處理細胞。收集上清液，使用市售ELISA試劑盒檢驗前膠原的存在情況，使用Fastin Elastin試劑盒檢驗彈性蛋白的存在情況。
細胞產生的膠原的水平顯示于圖3。膠原合成情況表示為檢測到的前膠原的量除以在允許樣品的任何毒性作用下的生存力的比值。數據表明積雪草(centella asiatica)樣品在0.1％的濃度時最有效地誘導新膠原合成。Biopeptide CL和Biopeptide EL樣品也在10％的濃度時誘導膠原合成的可檢測的增加。其它樣品對前膠原合成沒有可檢測的影響。
圖4中的數據顯示樣品對彈性蛋白分泌的影響。該數據也表示為所分泌的彈性蛋白量除以收集上清液時細胞生存力的比值。如對于膠原分泌一樣，積雪草(centella asiatica)樣品是彈性蛋白的最有效誘導劑。Biopeptide CL和Biopeptide EL也誘導彈性蛋白分泌可檢測地增加。最后，當使用最高濃度(10％)時，Odraline和Biodynes EMPP樣品誘導彈性蛋白輕微增加。
結果顯示積雪草(centella asiatica)是膠原和彈性蛋白的有效誘導劑。另外，該結果表明Biopeptide CL和EL樣品均誘導膠原和彈性蛋白，雖然需要高濃度的這些物質以誘導觀察到的生物效應。
實施例2 試驗十六種樣品對涉及降解胞外基質蛋白質的三種不同的酶(基質金屬蛋白酶即MMP)的影響。Elhibin是唯一抑制MMP-1的樣品。MMP-1的最有效活化劑是CoQ10、BVOSC抗壞血酸酯(BVOSCAscorbyl ester)、野靛堿、檸檬生物類黃酮、ACTIMP 1.3.9、檸檬和混合的柑桔提取物、和Kelpadelpie。大部分樣品對MMP-9無效，只有BVOSC抗壞血酸酯是強抑制劑。彈性蛋白酶的最強抑制劑是Collalift、山姜葉、Elhibin、野靛堿、檸檬生物類黃酮、ACTIMP 1.3.9、檸檬和混合的柑桔提取物、Kelpadelpie、Extracellium、和Colhibin。因此，基于MMP-1和彈性蛋白酶抑制的所需概況，同時對MMP-9無效，elhibin將為選擇的原料。
基質金屬蛋白酶(MMP)是一組鋅依賴酶，其在正常和患病組織中都降解胞外基質的各種組分。據認為MMP-1(間質膠原酶)引發纖維狀膠原的分裂，而MMP-9(明膠酶)消化MMP-1產生的變性的膠原碎片。然后MMP-9消化產物能自由摻入到新的膠原纖維中。彈性蛋白酶分解彈性蛋白。這些酶的表達受到嚴格控制并隨個人年齡或暴露于UV照射而改變。因為MMP-1與膠原分解的啟動有關，所以抑制MMP-1活性對于護膚護膚品而言是有利的。相反，這樣的護膚護膚品不應抑制MMP-9，因為這樣會通過阻斷膠原組成部件的可用性而潛在地抑制新膠原合成。最后，應抑制彈性蛋白酶以便防止彈性蛋白被消化，產生皮膚彈性。
下面表I中的數據給出關于每一受試樣品的來源和溶解性的信息。圖5中的數據說明樣品對MMP-1活性的影響。Elhibin是抑制MMP-1的唯一樣品。圖6中的數據表明大部分樣品不抑制MMP-9。對MMP-9具有強抑制活性的唯一樣品是BVOSC酯。最后，圖7中的數據說明許多樣品抑制彈性蛋白酶。這些樣品是Collalift、山姜葉、Elhibin、野靛堿、檸檬生物類黃酮、ACTIMP 1.3.9、檸檬和混合的柑桔提取物、Kelpadelpie、Extracellium、和Colhibin。
表I 樣品名稱、供應商、批號、和用于每一樣品的溶劑 使用市售試劑盒測試樣品對目標MMP的活性的影響。對于MMP-1，依照廠商說明使用來自Amersham的試劑盒。對于MMP-9和彈性蛋白酶，使用來自Molecular Probes的試劑盒。在表I列出的溶劑中以100mg/ml的儲液濃度制備樣品。使用PBS把樣品稀釋成100mg/ml。
實施例3 當暴露于UV光時皮膚中的細胞會產生氧化氮(NO)，這樣產生的NO具有誘導與年齡相關的皮膚變化的潛在性。進行該研究以根據對RAW 264.7細胞產生NO的效果來對一組化妝品和護膚原料進行篩選。該研究中使用鼠巨噬細胞系RAW 264.7，因為據表明當用LPS刺激時它產生NO。
以1×105細胞/孔將鼠RAW 264.7細胞接種到96孔板中。將板培育過夜。次日用0.001、0.01、和0.1％的樣品處理細胞2小時。所述樣品列于下表II。在曝光期之后，將LPS以100ng/ml加入孔中。將板孵育過夜。在室溫下將相等體積的培養上清液和Griess試劑孵育15分鐘，讀取540nm的吸光度。從用亞硝酸鈉產生的標準曲線計算樣品中的亞硝酸鹽的量。
表II 樣品描述 樣品 PD-ID LIMS# 溶劑 外觀 Lipochroman-6E23D92 200300444-1 DMSO 淺棕色，晶狀粉末 Nutriene生育三烯酚 褐色，澄清1999354700 200300444-2 DMSO 類 粘稠液體 g-生育醌S00071319200300444-3 DMSO 褐色，澄清， 粘稠液體 Viapure Citrus A90/02B001 200300444-4 DMSO 淡黃色，細粉末 Soybean Zymbiosome JQ1-124 200300444-5 水 澄清，褐色液體 NAB Pikea46280200300444-6 水 澄清，黃色液體 Robusta 下表III和圖8中顯示的數據表明所有受試樣品對經LPS刺激的RAW細胞上清液中的亞硝酸鹽累積具有抑制效果。這些樣品全部具有抑制活性。
表III.用LPS刺激的RAW 264.7細胞產生的NO。數據顯示為ng亞硝酸鹽/ml上清液。 LIMS# 產生的亞硝酸鹽 樣品 PD-ID 劑量 ng/ml 陰性對照 NA NA NA 0 LPS對照NA NA 100ng/ml 901.7 Lipochroman-6(L6) E23D92 200300444-1 0.001，0.01，0.1％ 1006.5，750.7，336.7 營養素三烯酚類 1999354700 200300444-2 0.001，0.01，0.1％ 804.1，845.7，504 (NT) g-生育醌S(TQS) 00071319200300444-3 0.001，0.01，0.1％ 754.2，830.3，217.9 Viapure Citrus(VC) A90/02B001 200300444-4 0.001，0.01，0.1％ 425.4，391.7，294.9 Zymbiosome(SZ) JQ1-124 200300444-5 0.02，0.2，2.0％1053.6，834.1，554.8 NAB Pikea Robusta 46280 200300444-6 0.01，0.1，1.0％164，214.9，216.9 (NPR) 結果顯示所有的樣品都對培養上清液中的亞硝酸鹽累積具有抑制效果。最有效的樣品是lipochroman-6、Vitapure citrus、和g-生育醌S。當以高于前述實驗所用濃度使用含水樣品Pikea robusta和SoybeanZymbiosome時，它們都在該實驗中展現出抑制性。懷疑在Pikea處理的細胞中看到的高抑制活性是由于稀釋錯誤。最后，看來生育三烯酚(NT)和合成的生育酚(L6)比混合的生育酚具有更好的抑制活性。
實施例4 測試增強細胞能量的四個新樣品對響應積雪草(Centella)和Biodynes而增加胞外基質組分產生的能力。使用人真皮成纖維細胞，因為這些細胞合成胞外基質組分活躍。除了測定前膠原和彈性蛋白水平之外，還測定透明質酸水平。透明質酸是糖胺聚糖家族化合物的成員。糖胺聚糖構成結締組織的基質，與彈性蛋白一起幫助提供彈性給皮膚。它們也束縛水，從而提供粘性和保濕特性。
在介質中稀釋樣品。將積雪草(centella asiatica)和維生素C制備成0.001％。將Biodynes EMPP制備成0.1％。在50:30:20的DMSO:乙醇:水中制備積雪草(centella asiatica)提取物。在介質中將＂能量增強劑＂樣品，即Seanergilium海藻提取物、Thiotaine、Sepitonic、和Phytovityl玉米粒提取物，全部制備成0.01、0.1、和1.0％。在24孔板中接種人真皮成纖維細胞(Hs-27)，培育過夜。用上述濃度的樣品連續兩天處理細胞。收集上清液，使用市售ELISA試劑盒(分別得自Takara和Corgenix)檢驗前膠原和透明質酸的存在情況，使用Fastin Elastin試劑盒(得自Biocolor)檢驗彈性蛋白的存在情況。
細胞產生的前膠原的水平于表IV中顯示。該數據表明能量增強劑樣品無一對細胞的前膠原分泌具有積極效應。相反，能量增強劑樣品對未刺激和已刺激的細胞的前膠原分泌沒有效果或實際上抑制前膠原分泌。唯一的例外是用Seanergilium處理的細胞比未處理的陰性對照細胞產生更多的前膠原。
表IV.樣品對前膠原分泌的影響。數據表示為ng/ml前膠原/ml上清液，通過ELISA試劑盒提供的前膠原標準產生的標準曲線計算得到。
表V中的數據顯示所述樣品對彈性蛋白分泌的影響。當Sepitonic和Thiotaine共刺激時，可看到Biodynes EMPP刺激的彈性蛋白分泌增加。最后，分析上清液中透明質酸的存在情況。表VI中的數據顯示樣品對細胞的透明質酸分泌的影響。該數據表明，Sepitonic和Phytovityl都增加受積雪草(centella asiatica)和Biodynes EMPP刺激的細胞的透明質酸分泌。相反，Seanergilium和Thiotaine都抑制透明質酸分泌。
表V.樣品對彈性蛋白分泌的影響。數據表示為％介質對照彈性蛋白，通過用處理細胞的組織培養上清液中檢測到的彈性蛋白量除以未處理對照細胞分泌的彈性蛋白量計算得到。
上面表IV中的數據顯示樣品對透明質酸分泌的影響。數據表示為ng透明質酸/ml培養上清液。每一上清液中的透明質酸的量都是通過使用ELISA試劑盒提供的透明質酸標準產生的標準曲線計算得來的。
該實驗中最顯著的結果是一些能量增強劑樣品對透明質酸分泌的影響。Sepitonic和Phytovityl都單獨地誘導透明質酸。當存在Sepitonic時積雪草(centella asiatica)和Biodynes EMPP增加分泌，而當存在Phytovityl時Biodynes EMPP增加分泌。Sepitonic還增強biodynes刺激的彈性蛋白分泌，但抑制膠原分泌。另一方面，Phytovityl同時抑制膠原和彈性蛋白分泌。Seanergilium對任一基質組分都影響很小，Thiotaine只增強由Biodynes刺激的彈性蛋白分泌。因此總而言之，由于透明質酸提供保濕作用、粘性、和彈性的性質，Sepitonic或Phytovityl物質可能在需要增加透明質酸隨后提高保濕作用的情況下對于皮膚施用而言有價值。
實施例5 用Urlisomes和Merospheres V過夜處理的角質形成細胞比未處理的對照細胞具有更高的胞內脂質水平。似乎是Urlisomes比Merospheres誘導更高水平的脂質結合，但這可能由于兩個產品的脂質濃度的差異所造成。在染色之后對細胞進行目測時似乎沒有任何非特異性染色，但在染色劑提取(stain extraction)之前，顯現多個胞內脂質小滴。
干燥可以是皮膚的刺激問題，它由皮膚的水份流失引起。保持水的能力與皮膚、特別是角質層的脂質含量有關。因此似乎合理的是，如果角質形成細胞(角質層中發現的主要細胞類型)的脂質含量得到提高，那么就可以防止水分流失，從而減輕干燥皮膚。為檢驗該可能性，測試兩個包含脂質的樣品增加培養的角質形成細胞脂質水平的能力。
從代表性實驗得出的數據示于圖9，該數據表明將細胞暴露于兩個樣品都引起了脂質染色的增加。Urlisomes對脂質水平的影響似乎比Merospheres V大。然而，這可能只是由于兩個樣品的脂質含量的差異。或者，該差異可能由于在Urlisome樣品中比在Merosphere V樣品中脂質攝取更好所造成。
以2×104/孔將人HEK001細胞接種到96孔板中，培育過夜。次日使細胞暴露于已經以0.005％、0.05％和0.5％稀釋到細胞培養基中的樣品。再次將細胞孵育過夜。次日將細胞固定在1％甲醛中。然后用Oil Red O染色劑(1)將細胞脂質染色。在染色之后，用異丙醇提取結合脂質的染色劑。在515nm處讀取提取的染色劑的OD值。
實施例6
下面是本發明的優選組合物的實例。
實施例6
下面是本發明的另一組合物的實例。
實施例7
下面也是可以依照本發明的又一實施方案制備的組合物。
實施例8
下面是可以依照本發明制備的又一組合物。
實施例9
下面是依照本發明的一個實施方案的局部皮膚用組合物。除非另有說明，否則對于以下各實施例，百分比均為以重量計。
實施例10
下面是依照本發明的一個實施方案的局部皮膚用組合物。在該實施方案中，所述組合物提供了對抗ROS的保護作用，并且也包含有助于修復ROS引起的損害的組分。
實施例11
下面是依照本發明的一個實施方案的局部皮膚用組合物。在該實施方案中，所述組合物提供了對抗ROS的保護作用，并且也包含有助于修復ROS引起的損害的組分。
實施例12
進行以下測試，以通過與安慰劑、維生素E和維生素C比較來確定提供本發明的復合組合物所得的效果。通過在人的背部劃出許多個2英寸區域來進行該測試。以隨機方式將下列制劑施用至這些區域。
在施用上述制劑之后，對背部進行UV輻射，并測定皮膚紅斑
圖1和2顯示該結果。
應理解的是，可對上述實施方案進行多種變更和修改。因此意欲前面的描述只是解說而不是限制本發明，且由以上權利要求，包括所有同等物在內，來限定本發明。
權利要求
1.一種組合物，所述組合物包含葡萄柚組分、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽、四氫姜黃素、類黃酮、葡萄籽組分、綠茶組分、生育酚、和生育酚乙酸酯。
2.權利要求1的組合物，其中所述葡萄柚組分為葡萄柚提取物。
3.權利要求1的組合物，其中所述類黃酮為生物類黃酮。
4.權利要求1的組合物，其中所述葡萄籽組分為葡萄籽提取物。
5.權利要求1的組合物，其中所述綠茶組分為綠茶提取物。
6.權利要求1的組合物，其中所述葡萄柚組分為葡萄柚提取物，所述類黃酮為生物類黃酮，所述葡萄籽組分為葡萄籽提取物，和所述綠茶組分為綠茶提取物。
7.一種組合物，所述組合物包含葡萄柚組分、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽、姜黃組分、類黃酮、葡萄籽組分、綠茶組分、生育酚、和生育酚乙酸酯。
8.權利要求7的組合物，其中所述葡萄柚組分為葡萄柚提取物。
9.權利要求7的組合物，其中所述類黃酮為生物類黃酮。
10.權利要求7的組合物，其中所述葡萄籽組分為葡萄籽提取物。
11.權利要求7的組合物，其中所述綠茶組分為綠茶提取物。
12.權利要求7的組合物，其中所述姜黃組分為姜黃提取物。
13.權利要求7的組合物，其中所述葡萄柚組分為葡萄柚提取物，所述姜黃組分為姜黃提取物，所述類黃酮為生物類黃酮，所述葡萄籽組分為葡萄籽提取物，和所述綠茶組分為綠茶提取物。
14.抑制自由基、活性氧類、或活性氮類的方法，所述方法包括局部施用有效量的包含以下組分的組合物葡萄柚組分、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽、四氫姜黃素、類黃酮、葡萄籽組分、綠茶組分、生育酚、和生育酚乙酸酯。
全文摘要
局部皮膚組合物包括復合物，該復合物包含提供預防對抗在包括皮膚在內的人體上的各種途徑機制的自由基、活性氧類、活性氮類、和其它氧化類物質的組分。該組合物可按抑制那些機制的量通過局部施用給藥。該組合物和方法涉及預防自由基、活性氧類、活性氮類、和其它氧化類物質對人體包括皮膚的不利或有害作用。因此，本發明的組合物改善屏障作用，抑制彈性蛋白酶和膠原酶，和/或促進膠原和彈性蛋白的合成。
文檔編號A61K38/44GK101522266SQ200780036718
公開日2009年9月2日 申請日期2007年7月27日 優先權日2006年7月31日
發明者J·R·梅內, D·A·奧圖爾, D·J·德帕, A·C·齊默曼 申請人:捷通國際有限公司