含有維生素K₂的藥品和類藥劑營養品的制作方法

專利名稱：：含有維生素K₂的藥品和類藥劑營養品的制作方法
技術領域：
：本發明涉及含有維生素K2或維生素K2類化合物范圍內的化合物的藥品和類藥劑營養品(neutraceuticalproduct)，特別是與一種或多種多不飽和脂肪酸、魚油和磷奸油組合，以及它們在治療和預防與骨骼、軟骨和心血管系統有關的疾病中的應用。具體來說，本發明還涉及這些產品在治療和/或預防骨質疏松癥、動脈粥樣硬化和骨關節炎中的應用。
背景技術：
：維生素K2維生素K2是一類被稱為甲基萘醌("MK")的化合物，它們都是2-甲基-3-全反式聚異戊烯化的-l,4-萘醌，具有下面的結構式不同的MKs之間在化學上的區別與側鏈中異戊二烯單位的數量有關。各種不同的MKs通常被稱為MK-2、MK-3、MK-4、MK-6等。數字是指異戊二烯單位的數量(n=2，n=3，n=4，n=6，……)。術語維生素K2是指不同MK物質天然存在的混合物。MK-2到MK-13天然存在于動物和人類組織中。維生素K2的飲食來源通常為發酵的食品，尤其是奶酪和干酪。某些比目魚和鰻魚也可含有一些維生素K2。從發酵的大豆生產的"納豆"，在日本作為"健康產品"，是一種大眾化的維生素K2來源。維生素K2的日攝取量在很廣的范圍內變化，通常從幾微克到幾毫克，一般低于50昭。維生素K2據稱對人類健康有幾種有益的作用，主要涉及心血管系統和骨代謝。骨質疏松癥骨質疏松癥是一種醫學病癥，其特征為骨質量降低以及骨的微結構改變。據估計，全世界有超過2億的女性患有骨質疏松癥。在全世界范圍內骨質疏松癥和骨質疏松性骨折不斷增加，這主要是由于老齡人口的快速增長。今天，骨質疏松癥的治療包括典型的激素療法、攝取鈣和維生素D、以及使用二磷酸鹽的藥物治療。動脈粥樣硬化動脈粥樣硬化是心血管疾病，可以影響幾種重要器官包括腦、心和腎的動脈以及臂和腿的動脈。在大多數西方國家，動脈粥樣硬化是死亡的主因。死于動脈粥樣硬化的人數是死于所有癌癥疾病人數總和的大約兩倍。動脈粥樣硬化是一種緩慢的、進行性的疾病，可以早在兒童時期就開始。在動脈粥樣硬化中，動脈失去其彈性和硬度。有幾種狀況與疾病的發生和發展相關，包括風險因素如肥胖、糖尿病、高血壓和吸煙。然而嚴格地從醫學上來說，動脈粥樣硬化一般被定義為動脈內膜的炎性疾病，動脈硬化的定義更為廣泛，還包含其它形式的血管疾病，例如門克伯格(m6nckeberg's)動脈中層硬化。關節病和關節炎關節病、炎性關節炎、風濕性關節炎和骨關節炎是軟骨疾病，它們的特征為關節變性。病理上，在軟骨結構中有改變。這些疾病影響關節，疾病通常容易通過X-射線診斷。目前有幾種類型的藥物用于治療這些疾病。它們包括單純的鎮痛藥、NSAID、COX2抑制劑、皮質類固醇和葡萄糖胺。維生素K^對骨質疏松癥、動脈粥樣硬化、關節病和關節炎的作用在過去幾年中，幾份出版物描述了維生素K2的攝入對骨質疏松癥的正面影響；參見，例如，W.Sakamoto等，OsteoporosisInternational16,1604-1610(2005);M.Kaneki，ClinicalCalcium15,605-610(2005);J.Iwamoto等，CurrentPharmaceuticalDesign10,2557-2576(2004);K.Nakayama，HommontoRinsho52,339-349(2004);S.Shiomi等，AmericanJournalofGastroenterology97,978-981(2002)禾口T.Hosoi，Bone(Osaka)14，95-97(2000)。有幾份出版物涉及使用維生素K2或納豆治療動脈粥樣硬化或類似的病癥；參見，例如，Y.Ozawa，GifuDaigakulgakubu50，20-26(2002);L.J.Schurgers等，ZeitschriftfiirKardiologie90(Suppl.3),iii57-iii63(2001);Y.Seyama，ClinicalCalcium9,873-878(1999);H.Kawashima等，Jap.JournalofPharmacology75,135-143(1997)禾口J.M.Geleijnse等，JournalofNutrition134，3100-3105(2004)。在最近的文章中，T.Neoqi等(Arthritis&Rheumatism54,1255-1261(2006))報道了低水平的血清維生素K與骨關節炎發病率的增加有關。魚油、磷蝦油和n-3PUFA多不飽和脂肪酸，或PUFAs，是含有兩個以上雙鍵的長鏈脂肪酸。對它們的興趣是源自它們在治療性應用以及食品和營養應用中的潛力。它們的存在遍布于動物、植物、藻類、真菌和細菌中，并廣泛發現于許多脂類化合物中，例如膜、貯存油、糖脂、磷脂、鞘脂和脂蛋白。它們可以從選定的種子植物和某些海產來源商業化生產。根據末端雙鍵的位置是從脂肪酸鏈末端碳原子起的3C還是6C，將PUFAs分組成兩個系列。一些實例是3-系列的PUFA，也稱為ra-3或(n-3)PUFA，包括富含co-3脂肪酸的膳食油，例如魚油、磷蝦油、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA)、亞麻酸(LA)和a-亞麻酸(ALA)。6-系列的PUFA包括？亞麻酸(GLA)和花生四烯酸(AA)。磷蝦是一類生活在北極和南極地區的類似蝦的海洋動物。磷蝦的大小通常在5到50mm之間。磷蝦有幾種種類。北極物種包括T.inermis、T.rushii、T.longicauda禾卩M.norvegia，而南極物禾中包括南極磷蟲下(E.superba)和E.crystallorphias。磷蝦以及與磷蟲下相關的產品己經被建議作為魚類飼料的成分；參見，例如，KR2005031319、KR2004087618、JP2003070426、US6153251、EP729708、SU1784152、JP05030923、JP0465454和JP61274653。此外，磷蝦和基于磷蝦的產品被用作魚餌(參見，例如CN1820626)，與結合的亞油酸組合，用于疾病的治療和預防(US2006078625)，作為添加劑抑制脂類的氧化(WO2005075613)，作為肥料(CN1502589)，用于食品(JP2004065152和WO2003/003857)，用于治療心血管疾病、關節炎、皮膚癌、糖尿病和經期前綜合征(WO2002/102394)，作為酶的來源治療痤拖和其它疾病(US5958406、US5945102、US6030612、WO96/24371和WO93/24142)，以及作為多功能酶的來源(US6030612)。磷蝦酶類還被建議用于治療血栓癥(WO95/33471)，以及用于制造牙科用的組合物(WO95/33470)。磷蝦或基于磷蝦的產品還被建議作為殺真菌劑(JP07033619)，作為抗糖尿病藥劑(JP04042369)，來自磷蝦的蛋白被建議用于制造健康食品(JP01137952)。涉及磷蝦和磷蝦成分的其它專利文件是含有磷蝦脂肪酸的牙粉(JP2568833)，含有從磷蝦提取的蛋白酶的潔膚化妝品(JP63218610)，來自磷蝦的抗炎蛋白酶(JP61068419)，溶血栓劑(EP170115)，作為消化促進劑的酶組合物(WO85/04809)，幾丁質制品(PL114387)，類胡蘿卜素制品(PL113328)，仿蟹肉食品(JP57125677、JP57079863和JP67050848)，抗高血壓劑(JP54119011)和基于磷蟲下的食品(JP60046947，JP61023987和JP55040218)。磷蝦的總脂類含量在物種與物種之間變化。在一年當中總脂類含量也是變化的。對于每個物種來說在一年當中磷蝦的脂類組成也是變化的。磷蝦中的總脂通常在5%到60%之間。磷蝦的總脂中總甘油三酯和蠟酯的百分比可以在廣泛的范圍內變化；各從幾乎為0到70%。除了甘油三酯和蠟酯之外，磷蝦脂類、在后文中稱為磷蝦油，還包含磷脂、固醇、游離脂肪酸和脂肪醇。典型的磷脂包括化合物例如磷脂酰膽堿和磷脂酰乙醇胺。磷蝦油可以是從磷蝦獲得的原油的形式，或是純化的或改性的油的形式。不飽和化合物和多不飽和化合物構成的磷蝦油中的大部分脂肪化合物。磷蝦油中的主要脂肪酸成分是下列脂肪酸14:0、16:0、16:1(n-7)、18:0、18:1、18:1(n-9)、18:1(n-7)、18:215(n-6)、18:3(n-3)、18:4(n-3)、20:1(n-9)、20:5(n-3)、22:1(n-ll)、22:6(n-3)。對于磷蝦油組成的參考文獻，參見，例如S.Falk-Perdersen等，Can.J.FishAquat.Sci.57(Suppl.3)178-191(2000);F.Alonzo等，MarineEcology:ProgressSeries296，65-79(2005);N.Kusumoto等，J.OleoScience53,45-51(2004)以及本文中的參考文獻。盡管市場上有幾種治療骨質疏松癥和心血管疾病的藥品，但對于可替代的方法仍存在著迫切的需要。發明概述現在，令人吃驚地發現維生素K2和多不飽和脂肪酸(PUFAs)可以配制在一起，成為具有長儲存期限的穩定制劑。因此，在第一個方面，本發明提供了藥品或類藥劑營養品，其中含有維生素K2或維生素K2類(MK)化合物之內的至少一種化合物，與至少一種純化的或魚油或磷蝦油形式的PUFA相組合。還發現維生素K2、特別是MK-7，不抵消海產油或n-3PUFA的抗凝效應。進一步還發現，較高級的甲基萘醌、特別是MK-7以上，抵消了海產油潛在的動脈鈣化誘導效應。進一步還發現，較高級的甲基萘醌、特別是MK-7以上，抵消了海產油(marineoil)對骨骼健康的潛在的負性方面。進一步還發現，較高級的甲基萘醌、特別是MK-7以上，抵消了海產油對軟骨健康的潛在的負性方面。在細胞培養研究中還發現，MK-7的攝取比其它K族維生素好。MK-8和MK-9的攝取稍低，但仍在相當的水平，而MK-4和維生素K,的攝取程度低得多。在細胞培養研究中還發現，長鏈甲基萘醌、特別是MK-8和MK-9，與其它形式的維生素K相比，干擾口服抗凝治療的可能性較低。因此，在第二個方面，本發明提供了含有MK-7、MK-8、MK-9和MK-10中至少一種的藥品或類藥劑營養品，優選與至少一種純化的或者魚油或磷蝦油形式的PUFA組合，用于在人類和動物中促進心血管健康、骨健康和軟骨健康的至少一種。在第三個方面，本發明提供了MK-7、MK-8、MK-9和MK-10中至少一種的應用，優選與至少一種純化的或者魚油或磷蝦油形式的PUFA組合，用于在人類和動物中促進心血管健康、骨健康和軟骨健康的至少一種。所述應用的典型和優選的例子是用于制備預防或治療與心血管、骨和軟骨相關的疾病或病癥中至少一種的藥物。藥物可以提供成單一藥物或試劑盒。在第四個方面，本發明提供了預防或治療動脈粥樣硬化、動脈硬化、骨質疏松癥、骨關節病或軟骨的炎性或變性疾病中至少一種的方法，包括給人類或動物施用上文定義的藥品或類藥劑營養品或藥物。在第五個方面，本發明涉及抵消魚油、磷蝦油以及含有PUFA的食物和食品添加劑的某些負面作用，從而增強所述海產油和PUFA對公共健康的有益方面。在第六個方面，本發明提供了試劑盒，其含有維生素K2或維生素K2類化合物(MK)之內的化合物，以及至少一種純化的或者魚油或磷蝦油形式的PUFA。在本發明的優選實施方案中，本文中使用的PUFA是《-3PUFA，例如二十碳五烯酸(EPA)或二十二碳六烯酸(DHA)。本發明的這些以及其它的方面將在下面的詳細描述和實施例中更詳細討論。附圖簡述圖1顯示了反映凝血過程中總凝血酶活性的內源凝血酶能力(ETP)。使用基于構象特異性抗體的夾心ELISA監測羧化的和未羧化的基質Gla-蛋白(MGP)種類，以正常的合并血清作為參比。l個月后，MGP羧化的變化是顯著的，但是在第3個月和第4個月期間，顯著性失去。參見下面的實驗2。圖2顯示了與圖1相同的實驗中，使用構象特異性骨鈣蛋白試劑盒監測的血清中羧化的和未羧化的骨鈣蛋白種類。在1個月后，骨鈣蛋白羧化的變化是顯著的，但是在第3和4個月期間，顯著性失去。參見下面的實驗3。圖3顯示了溶解在魚油和磷蝦油中的MK-7的超常穩定性。在密封的玻璃瓶中制備樣品，并保存在暗處的分別為室溫、40°C和100°C下。定期取樣并分析它們的MK-7含量。沒有觀察到MK-7的損失，即使是在100°C下2周后。參見下面的實驗4。圖4顯示了維生素K卜MK-4、MK-7、MK-8和MK-9在不存在細胞的三種細胞培養基(分別用于生長下面描述的三種不同細胞類型)中的穩定性。參見下面的實驗5。圖5A-C顯示了在三種不同細胞類型中，維生素K的細胞攝取的劑量-反應曲線；細胞生長至80%滿底，然后加入不同濃度的維生素K(即K"MK-4、MK-7、MK-8和MK-9)。圖5D以同樣的標度顯示了在三種細胞類型中MK-7攝取的圖。參見下面的實驗6。圖6A-C顯示了在三種不同細胞類型中維生素K!、MK-4、MK-7、MK-8和MK-9的細胞攝取作為時間的函數；細胞在實驗5中描述的培養基中生長。在所有情況下，在細胞生長至80%滿底后，將這些K族維生素的混合物加入到其中。參見下面的實驗7。圖7A-C顯示了不同形式的維生素K繞開華法令效應的程度(通過K環氧化物的形成來測量)。形成的KO越多，通過酶DT心肌黃酶繞開的程度就越高。參見實驗8。圖8A-C顯示了在缺乏華法令但是在細胞饑餓的條件下，各種不同形式的維生素K被利用的程度。形成的KO越多，維生素K物種被再循環得就越少。參見下面的實驗9。定義本文使用的術語"多不飽和脂肪酸"是指任何多不飽和脂肪酸，不論是甘油三酯、生理可接受的酯、游離脂肪酸形式或多不飽和脂肪酸的生理可接受鹽的形式。更具體來說，該術語被用于指示o-3脂肪酸以及富含co-3脂肪酸的膳食油例如魚油和磷蝦油。在文獻中，co-3脂肪酸也被稱為(n-3)多不飽和脂肪酸或n-3PUFA。本文使用的術語"磷蝦油"是指磷蝦中所有的親脂性成分，可以是磷蝦原油、純化的磷蝦油、來自磷蝦油的化合物和來自磷蝦油成分的衍生物。本文中使用的魚油和磷蝦油被合稱為"海產油"。本文中使用的術語"維生素K2"是指天然存在的甲基萘醌類(MKS)或其混合物。本文使用的術語"維生素K2類化合物內的化合物"是指單個甲基萘醌(MK)化合物。本文使用的術語"主要是MK-7"是指根據HPLC分析，組合物中所有維生素K2化合物的至少90%是MK-7的組成。發明詳述本發明主要是基于在對維生素K2、特別是較高級甲基萘醌(MK-7、MK-8、MK-9和MK10)的藥理性質，以及這些化合物與純形式或者魚油或磷蟲下油形式的PUFAs組合的藥理性質的深入研究中的某些意料之外的發現。這些發現為在藥物和營養藥物領域中與預防和治療某些心血管相關的、骨相關的和軟骨相關的疾病有關、以及更通常來說對人類和動物的健康產生有益效應的改進產品，提供了新的可能性和挑戰。下面將對這些發現進行更詳細的討論。魚油、磷蟲下油和n-3PUFA的健康效應已經報道了n-3PUFA的幾種健康的方面，包括對心血管疾病的顯著有益效應。正如VanSchoonbeek等所綜述(JournalofNutrition133，657-660(2003))，n-3PUFA和海產油的有益效應是基于多種機制的，包括降低血小板活性，更有利的血脂分布情況，以及降低血液凝固性。海產油和n-3PUFA的低凝血效應主要歸因于降低肝臟的維生素K狀態，并伴隨著降低維生素K依賴性凝血因子II、VII、IX和X，導致凝血酶形成潛力降低。C.M.A.Nieuwenhuys等得出結論，"延長施用n-3而不是n-6PUFAs可以通過降低維生素K依賴性凝血酶產生的能力同時不改變抗凝血酶m對凝血酶的失活而導致血漿的低凝結狀態"。C.Leray等也報道了特異性抑制維生素K依賴性凝血因子的合成(Arteriosclerosis,Thrombosis,andVascularBiology22，459-463(2001))。這與L丄Schurgers等的觀察相一致(JournalofLipidResearch43，878-884(2002))，即某些膳食油可能干擾人類志愿者中維生素K的吸收和代謝。干擾維生素K代謝的直接證據由C.M.A.Nieuwenhuys等給出(ThrombosisResearch104，137-147(2001))，顯示魚油和n-3PUFAs降低了肝臟中(即合成凝結因子的部位)的維生素K水平。此夕卜，M.Andriamampandry等(MedicalSciences321,415-421(1998))證明了魚油的溫和抗凝作用被輕微增加維生素的攝入而完全逆轉。現在，意外地發現，維生素K2、尤其是MK-7，不逆轉魚油的有益效應。在通常1到10嗎/天的劑量下，MK-7不影響外來凝血酶能力(ETP)，外來凝血酶能力是血栓癥風險最靈敏的度量。因此，維生素K2與n-3PUFA或海產油的混合物將這兩種化合物的有益效應組合起來，甚至在動物模型中和人類志愿者中協同工作。在每天100嗎MK-7以上的劑量下，海產油的ETP降低效應被完全逆轉。應該注意到，這些MK-7劑量相對于每天攝取5克海產油。耗用的魚或磷蝦油越多，干擾ETP所需的劑量就越高。心血管健康盡管貧維生素K狀態可能具有輕度抗凝(即抗血栓)效應，但從血管健康的另一方面來說維生素K是需要的。基質Gla-蛋白(MGP)是在動脈血管壁中合成的維生素K依賴性蛋白。它由維生素K依賴性羧化所激活，在其羧化形式下，它擔當血管鈣化的有力抑制劑。使用構象特異性抗體，Schurgers等(Arteriosclerosis,ThrombosisandVascularBiology25，1629-1633(2005))證明動脈粥樣硬化和血管鈣化與血管壁的貧維生素K狀態密切相關，在前瞻性臨床試驗中，L.A丄L.M.Braam等(Thrombosis&Ha畫stasis91,373-380(2004))發現補充高劑量維生素K(1mg/天)對于血管彈性有很大益處。我們已經發現，海產油和n-3PUFA不僅有利地降低肝臟中維生素K依賴性蛋白(凝血因子)的產生，而且降低肝外組織的維生素K狀態，從而降低肝臟外維生素K依賴性蛋白包括骨鈣蛋白和基質Gla-蛋白(MGP)的活化(通過谷氨酸羧化)。這是海產油和n-3PUFA有害的副作用，它對于心血管健康、骨健康和軟骨疾病的發生具有潛在的有害結果。例如，血管鈣化抑制劑MGP的羧化減少，是血管鈣化、高血壓、心肌梗塞和心血管死亡的主要風險因子。現在，令人吃驚地發現，較高的甲基萘醌、尤其是MK-7，在1到10ng/天的劑量下，不抵消海產油的輕度抗凝效應(通過ETP測量)，而同時它們有效刺激MGP羧化，水平達到類似于甚或超過未使用海產油的對象中的水平。這描述在下面的實驗2中。因此，MK-7是將為了心血管健康而直接應用的含有海產油和n-3PUFA的食品和食品增補劑的益處最大化的必要成分。骨健康已經發現海產油和n-3PUFA對于骨健康具有有益的效應。在實驗動物模型中，這些油顯著降低了去卵巢小鼠和限食大鼠的骨丟失(D.Sun等，JournalofBoneandMineralResearch18,1206-1216(2003);Sim等，Bioscience,BiotechnologyandBiochemistry68，2613-2615(2004))。許多作者已經報道，維生素K的攝入低、貧維生素K狀態和骨鈣蛋白羧化受損是骨質疏松癥發生和發展的風險因子。參見，例如S.L.Booth等，AmericanJournalofClinicalNutrition77,512-516(2003);P.Szulc等，JournalofClinicalInvestigation91,1769-1774(1993);C.V函eer等，EuropeanJournalofNutrition43，325-325(2004)。已經證實，增加維生素K的攝取在絕經后女性中導致骨丟失率降低(L.A丄L.M.Braam等，CalcifiedTissueInternational73,21-26(2003);M.Shiraki等，JournalofBoneandMineralResearch15,515-521(2000))。在這些研究中使用的劑量范圍在Kilmg/天到K245mg/天之間。這樣說來，海產油誘導的骨鈣蛋白羧化降低必須被當作有害的副作用，可能部分掩蓋海產油對骨健康的益處。已報道高劑量維生素K治療可以抵消這種副作用，但是也會消除據報道對心血管疾病預防有益的輕度抗凝效應。現在，意外地發現，較高的甲基萘醌、尤其是MK-7，在1到10嗎/天的劑量下，不抵消海產油的輕度抗凝效應(通過ETP測量)，而同時有效刺激骨鈣蛋白羧化，其水平達到類似于甚或超過未使用海產油的對象中的水平。這描述在下面的實驗3中。因此，MK-7是將為了骨健康而直接應用的含有海產油和n-3PUFA的食品和食品增補劑的益處最大化的必要成分。軟骨健康也已經發現，海產油和n-3PUFA抵制例如在骨關節炎、風濕性關節炎和強硬性脊椎炎中觀察到的變性和炎性關節疾病。在細胞培養研究中，證實了補充n-3PUFA而不是n-6PUFA，導致軟骨細胞代謝的變性和炎性方面均減少，同時對正常組織穩態沒有影響(CL.Curtis等，Proc.Nutr.Soc.61,381-389(2002))。此外，基于群體的研究表明，魚油和n-3PUFA對骨關節炎、風濕性關節炎和其它軟骨疾病的治療具有正面作用(參見，例如L.G.Cleland等，Drugs63,845-853(2003)和M丄James等，Prostaglandins,LeukotriensandEssentialFattyAcids68，399-405(2003))。如上所述，海產油和n-3PUFA不僅降低肝臟中維生素K依賴性蛋白(凝血因子)的產生，而且降低肝外組織的維生素K狀態，從而降低了肝臟外維生素K依賴性蛋白包括骨鈣蛋白和基質Gla-蛋白(MGP)的活化(通過谷氨酸羧化)。MGP是軟骨合成的最豐富的蛋白之一，它被谷氨酸羧化激活需要維生素K。MGP羧化差與骨關節炎、風濕性關節炎和強硬性脊椎炎有關。顯然，需要一種方法來抵消海產油在軟骨中誘導的維生素K狀態的降低。現在，意外發現，營養相關劑量的MK-7抵消了海產油對軟骨健康的潛在負性方面。較高的甲基萘醌、尤其是MK-7，在1到10叫/天的劑量范圍下，不抵消海產油的輕度抗凝效應(通過ETP測量)，而同時有效刺激骨鈣蛋白羧化和MGP羧化水平，水平達到類似于甚或超過未使用海產油的對象中的水平，這一事實證明了在補充海產油過程中，MK-7能夠在骨、包括關節軟骨中提供最適的維生素K狀態。因此，MK-7是將為了軟骨健康而直接應用的含有海產油和n-3PUFA的食品和食品增補劑的益處最大化的必要成分。細胞培養研究在一系列細胞培養實驗中，研究了在各種不同條件下維生素K的攝取和代謝。對下面形式的維生素K進行了比較K^、MK-4、MK-7、MK-8和MK-9。在三種不同細胞類型中對它j門進行了測試血管平滑肌細胞，成骨細胞樣MG-63細胞系和肝細胞樣HepG2細胞系。在所有實驗中，使用的維生素為含有每種維生素1pmol/L的混合物。發現在所有細胞中，MK-7的攝取比其它K族維生素好。MK-8和MK-9的攝取略少，IQ和MK-4少得多。還發現，在抗凝劑華法令的存在下，膜結合的酶VKOR被阻斷，從而使維生素K不能再循環。在利用后，它保持在氧化形式(K-環氧化物)；環氧化物的量代表了利用的程度。發現長鏈甲基萘醌、特別是MK-9不能被還原，因此在這些條件下不被用作羧化酶的輔酶。但是，更具水溶性的維生素&和MK-4，可以使用胞質酶DT-心肌黃酶進行還原，并干擾口服抗凝劑治療。因此，長鏈甲基萘醌干擾口服抗凝劑治療的可能性比其它形式的維生素K低。這是重要的安全性方面，并與以前已經發表的動物實驗一致(Craciun，A.M.,Groenen-vanDooren,M.M.C.L.,Thijssen,H.H.W.,Vermeer,C.(1998),在維生素K缺陷和在溴鼠靈處理的大鼠中比較K族維生素誘導的凝血酶原合成(InductionofprothrombinsynthesisbyK-vitaminscomparedinvitaminK-deficientandinbrodifacoum-treatedrats.)Biochim.Biophys.Acta1380,75-81.)。在不存在華法令并在豐富培養基下，完全沒有環氧化物形成。如果培養基中胎牛血清的濃度降低，細胞的營養狀態將變得不夠最優。此外，在這些條件下主要發現的是MK-4和K^環氧化物。但是，目前的結論與華法令實驗的結論不同長鏈甲基萘醌被優先利用，并在被VKOR還原的水平下與Ki和MK-4成功地競爭。因此，可以得出結論，長鏈甲基萘醌被優先用于各種不同蛋白的？羧化。這與以前發表的無細胞酶動力學研究相一致，該研究顯示，維生素K的米氏常數(Km)隨著其側鏈長度的增加而降低(Buitenhuis，H.C,Soute,B.A.M.,Vermeer,C.(1990)，維生素K,、K2和K3作為肝臟維生素K依賴性羧化酶的輔因子的比較(ComparisonofthevitaminsK4,K2andK3ascofactorsforthehepaticvitaminK-dependentcarboxylase.)，Biochim.Biophys.Acta1034，170-175)。產品制劑和劑量現在已經發現，可以將維生素K2和多不飽和脂肪酸在配制在一起，成為儲存期限長的穩定制劑。例如，MK-7與濃度范圍很廣的魚油或磷蝦油混合，這些組合物在這些條件下保持的穩定在100°C為至少2周，在40。C為6個月，在室溫為3年。這些研究的詳細情況顯示在下面的實驗4中。如上所定義的，術語"多不飽和脂肪酸"(PUFA)是指任何以甘油三酯、生理可接受的酯、游離脂肪酸或其生理可接受的鹽的形式的PUFA。本發明的PUFAs和甲基萘醌的優選組合物是PUFAs與主要是MK-7的組合。本發明的PUFA和MK物質的更優選的組合物是根據HPLC分析，其中組合物中所有維生素K2化合物的至少95。/。是MK-7，并且MK-6作為主要的維生素&雜質。本發明的組合物中MK-7和MK-6之間的典型比率在90比10到95比5的范圍內。本發明的維生素K2或維生素K2類化合物內的化合物與PUFA的優選組合物是含有選自n-3PUFAs的PUFA的組合物。更優選本發明的n-3PUFAs是20:5酸的二十碳五烯酸(EPA)和22:6酸的二十二碳六烯酸(DHA)。在本發明的產品中更加優選的n-3PUFA組分是EPA和DHA的組合。EPA:DHA的最優選比例在2:1到1:2的范圍內。在本發明的最優選組合物中，EPA和DHA是甘油三酯或乙基酯的形式。本發明的產品制劑和試劑盒優選全身性施用(例如口服或腸胃外)。本發明的最優選劑型是口服劑型；特別是膠囊和片劑。給藥劑量和途徑所取決的因素例如個體的年齡和性別、疾病或病癥的嚴重性和性質，等等，可以由本
技術領域：
的專業人員、通常是醫生容易地確定，或者按照通常附于產品的制造商的說明書。片劑和膠囊可以通過本
技術領域：
已知的任何常規方法來制備。膠囊可以是例如軟或硬的明膠膠囊，除了維生素K2或維生素K2化合物和多不飽和脂肪酸之外，還含有無活性的可藥用成分，例如淀粉。本發明的片劑可以，例如，通過直接壓制或通過使用常規壓片機壓制膠囊來制備。本發明的片劑除了維生素K2或維生素K2化合物和不飽和脂肪酸之外，還含有本
技術領域：
眾所周知的可藥用無活性成分。這樣的藥劑可以是例如纖維素衍生物和硬脂酸鎂。本發明的片劑可以用耐胃包衣例如乙酸鄰苯二甲酸纖維素進行包被。本發明的口服劑型，膠囊和片劑，每個的重量在100mg到2g之間。每個片劑或膠囊中維生素K2或維生素K2化合物的量可以大范圍變化，尤其依賴于例如疾病或病癥的嚴重性和性質、以及患者的狀態、性別和年齡的因素。在一個片劑或膠囊中維生素K2或屬于維生素K2類化合物內的維生素K2化合物的量，通常在1到500昭之間，盡管更高的量也是可能的。維生素K2、尤其是MK-7的優選劑量在2到300pg之間，更優選為5-50叫，最優選在每天10-20昭之間。每個片劑或膠囊中的不飽和脂肪酸的量，也可以根據不飽和脂肪酸的性質、疾病的嚴重性和性質、患者的年齡和片劑或膠囊的用藥頻率而變化。在每個片劑或膠囊中不飽和脂肪酸的量通常在300到1200mg之間，優選在400到1000mg之間，最優選在500到900mg之間。呈現的數據顯示，高達每天l(Hig海產油(一劑大約5g)的劑量和MK-7可以組合，而不干擾海產油的輕度抗凝效應。因此，在給藥于人類或動物時，大約1到至少10嗎之間的MK-7劑量(顯然，在所述范圍內越高越好)被證明是有益的。高達每天IOO嗎的劑量不適用于這里描述的目的，因為發現這些劑量抵消了華法令的效應，而華法令是比n-3PUFAs更強的凝血因子羧化的抑制劑。參見Schurgers,L丄，Teunissen,K丄F.,Hamuly能,K.,Knapen,M.H.J.,Vik,H.,Vermeer,C.，含有維生素K的食品增補劑合成維生素K1與納豆來源的甲基萘醌-7的比較，(VitaminK國containingdietarysupplements:comparisonofsyntheticvitaminKlandnatto-derivedmenaquinone-7.)，Blood109(2007)3279-3283.)。應該理解，維生素K和海產油的劑量也可以根據海產油的品種和質量而變化。因此推薦使用海產油的混合物以維持組合物中的恒定比率。還應該理解，維生素K2或維生素K2類化合物內的化合物也可以與一種或多種多不飽和脂肪酸(包括魚油和磷蝦油)分開并獨立地配制在例如藥物組合物或營養藥物組合物(食品增補劑)中。適合的藥物組合物以及典型的劑量與上述的類似，并且已為本
技術領域：
的專業人員所知。適合的營養藥物組合物以及典型的劑量被描述在例如EP1153548中，其公開內容在此引為參考。本發明的組合物可以可任選包含其它的藥物或營養藥物活性成分，例如維生素像維生素D或維生素D衍生物；活性藥物化合物例如二磷酸鹽，典型為阿侖膦酸鹽(alendronate);或心血管藥物，例如ACE抑制劑如依那普利，血管緊張素II受體拮抗劑如氯沙坦，P-阻斷劑如普奈洛爾，降血脂成分例如沙汀類、典型為辛伐他汀，以及其它的藥物。在較高級甲基萘醌MK-7、MK-8、MK-9和MK-10中，使用MK-7一般是最優選的，這從本文的公開內容就可以理解。還優選MK-9，這即因為其有益的和有希望的性質，又因為其實用性，因為它容易合成制造。,現在，將參考下面的實施例和實驗工作對本發明進行進一步描述，但它們的任何方面均不應被解釋為對本發明的限制。實施例1、含有EPA乙基酯、DHA乙基酯和MK-7的膠囊將含有97%MK-7和3%MK-6的油與EPA乙基酯和DHA乙基酯混合。加入a-生育酚，并將得到的油裝入硬明膠5膠囊中。每個膠囊含有MK-797嗎MK-63|igEPA乙基酯463mgDHA乙基酯375mgot-生育酚4mg實施例2、含有維生素K2的鱈魚肝油將維生素K2溶解在鱈魚肝油(來自EPAX，挪威)中，并裝入帶有金屬封口的綠色玻璃瓶(250ml)中。瓶子被標上"VitaminK2tran"，用于在挪威市場上銷售。該產品的每日劑量(5ml)含有維生素A:250pg維生素D:lOpg維生素K2(MK-7):10|ig魚油1.2g，其中DHA為0.4g，EPA為0.6ga-生育酚4mg實施例3、含有磷蝦油和MK-7的膠囊將含有甘油三酯形式的多不飽和脂肪酸、磷脂和其它天然成分的磷蝦油(得自Enzymotec,以色列)與MK-7和a-生育酚混合。將得到的油組合物裝入軟凝膠或硬明膠膠囊中，或制備成含有油的顆粒或溶劑。每個膠囊含有MK-797jigMK陽63嗎磷蟲下油700mga-生育酚4mg實施例4、含有維生素K2的磷蝦油將維生素K2溶解在磷蝦油中，裝入帶有金屬封口的玻璃瓶中(250ml)。瓶子被標注上"KrilloljetranmedVitaminK"，用于在挪威市場上銷售，或標注上"含有維生素K的磷蝦油(KrilloilincludingvitaminK)"在美國和英國市場上銷售。每日劑量(5ml磷蝦油)含有5到500嗎維生素K2。實施例5、含有磷蝦油和維生素K2的魚飼料將維生素K2(100mg)溶解在磷蝦油(1kg)中。將魚詞料(來自SkrettingAS,Stavanger,挪威)碾碎。使用混合器將碾碎的魚飼料(20kg)與含有維生素K2的磷蝦油(1kg)混合。加入水，將半濕的材料過篩(3mm)，在40。C干燥(tried)24小時，以獲得魚飼料顆粒。魚飼料顆粒含有大約5%磷蝦油和2-100ppm維生素K2。實施例6、MK-8膠囊將含有MK-8的油(HPLC分析顯示MK-8高于總維生素K2的70%)裝入軟明膠膠囊。每個膠囊含有5昭的MK-8。實施例7、含有EPA乙基酯、DHA乙基酯和MK-8、MK-9和MK-10摻合物的膠囊將含有MK-8、MK-9、MK-10摻合物的油與EPA乙基酯和DHA乙基酯混合。加入ot-生育酚，然后將得到的油裝入硬明膠膠囊中。每個膠囊含有MK-8、MK-9、MK-1050嗎EPA乙基酯463mgDHA乙基酯375mga-生育酚4mg實施例8、含有MK-8的鱈魚肝油將MK8(按照HPLC分析高于65。/。)溶解在鱈魚肝油中，裝入帶有金屬封口的綠色玻璃瓶(250ml)中。瓶子標注上"VitaminK2tran"，用于在挪威市場銷售。該產品的每日劑量(5ml)含有維生素A:250嗎維生素D:'10|IgMK-8:IO嗎co-3脂肪酸1.2g，其中DHA為0.6g，EPA為0.4gdl-a-乙酸生育酚酯6mg實驗l:骨關節炎、骨病和風濕性關節炎中骨鈣蛋白的羧化程度召集三組患者，并與年齡和性別相匹配的健康對象進行比較。通過測量羧化和未羧化的骨鈣蛋白之間的比率(cOC/ucOC比率)記錄每個對象的維生素K狀態，該比率是肝外維生素K狀態的最靈敏的生物標志物(B.Panis等，Bone2006;39:1123-1129)。罹患骨關節炎和軟骨病的患者相對年輕，與年輕參照組(A)進行比較，患有風濕性關節炎的患者年紀較大，因此與老年參照組(B)進行比較。骨鈣蛋白的構象特異性分析從Takara(日本)獲得。參見下面的表l。本實驗證明了在患有骨關節炎、軟骨病和風濕性關節炎的對象中，與正常人群相比，維生素K狀態(由循環系統骨鈣蛋白的羧化程度表示)明顯降低。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>實驗2:長期攝入魚油期間MGP羧化和MK-7攝入10pg/天的作用在研究中招募了20個健康男性(年齡為43i8歲)。平均體重指數為25.1±3.5kg/m2。所有對象每天接受5克魚油(含有35%EPA、25%DHA和10。/。其它n-3PUFA)，為期4個月。在研究的最后3個月期間，所有志愿者每天還接受一顆提供IO昭MK-7的軟凝膠膠囊。每個月收集血液樣品在檸檬酸中，以制備富血小板的血漿。反映凝血過程中總凝血酶活性的內源凝血酶能力(ETP)，按照H.C.Hemker等的方法進行監測■(PathophysiologyofHaemostasisandThrombosis2003;33:4-15)。使用基于構象特異性抗體的夾心ELISAs監測羧化和未羧化的基質Gla-蛋白(MGP)種類，所述抗體從VitaKBV(Maastricht,荷蘭)獲得，以正常的合并血漿作為參比。參見圖1。取羧化的和未羧化的MGP之間的比率作為血管維生素K狀態的度量。所有的值被表示成在合并的參比血漿中值的百分數。ETP的變化在1個月后是統計學顯著的(p<0.05)，并在隨后的幾個月中保持。MGP羧化的變化在1個月后也是明顯的，但是在第2、3和4個月，這種顯著性喪失了。本實驗證明了魚油誘導的低凝血性未被為了將MGP羧化維持在其原始水平所需的低劑量MK-7所抵消。實驗3:長期攝入魚油期間的骨鈣蛋白羧化和MK-7攝入10嗎/天的作用在與上述相同的實驗中，同樣收集血清，其中使用Takara(日本)的構象特異性骨鈣蛋白試劑盒來監測羧化和未羧化的骨鈣蛋白種類。骨鈣蛋白羧化的變化在l個月后是顯著的，但是在第3和4個月期間，顯著性喪失了。參見圖2。本實驗證明了魚油誘導的低凝血性未被為了將骨鈣蛋白羧化維持在其原始水平所需的低劑量MK-7所抵消。實驗4:MK-7在魚油和磷蝦油中的穩定性制備實施例2和4中所述的組合物(將MK-7分別溶解在魚油和磷蝦油中)，至終濃度為每克油2pgMK-7。在密封的玻璃瓶中制備樣品，放置在暗處，分別為室溫、40。C和100°C。定時取樣并分析它們的MK-7含量。參見圖3。沒有觀察到MK-7的損失，即使是在100°C2周后。本實驗證實了溶解在魚油和磷蝦油中的MK-7的超常穩定性。實驗5-9:細胞培養研究本系列細胞培養實驗描述了在各種不同條件下維生素K的攝入和代謝。比較了下面形式的維生素K:Kq、MK-4、MK-7、MK-8和MK-9。在三種不同細胞類型中對它們進行測試血管平滑肌細胞，成骨細胞樣MG-63細胞系和肝細胞樣HepG2細胞系。在所有實驗中，使用的維生素為含有每種維生素l^mol/L的混合物。所有的數據為三份重復實驗的平均值。各種不同培養基的組成(v/v)是:HepG2VSMCMG63EMEM(來自Sigma)87%78%87%胎牛血清10%20%10%青霉素/鏈霉素1%1%1%L-谷氨酰胺1%1%1%丙酮酸鈉--1%非必需氨基酸1%--實驗5這里，我們檢查了在不存在細胞的三種細胞培養基中，各種不同形式的維生素K(每種lpM)的穩定性。數據在圖4中給出。結論在所有三種生長培養基中，維生素K,、MK-7、MK-8和MK-9在48小時以上仍相當穩定，但MK-4顯示出在前24小時降低到基線的70%到80%之間的值，48小時后降低到基線的60%到70%之間的值。這種降低的原因還不清楚，但是必須對條件進行選擇，使得MK-4的消失不影細胞攝取響維生素K的數據。為了將MK-4的損失保持到最小，進行的所有實驗不超過24小時。實驗6使細胞生長到80%滿底，然后加入不同濃度的維生素K(參見圖5A-C)。加入的維生素K的濃度以nmol/L培養基表示，回收的維生素K以nmol/g細胞蛋白表示。要注意，對于每種維生素的標度不同。結論1.所有維生素的劑量-反應曲線在500和1000nmol/L之間是水平的；因此我們在飽和條件下工作，即使是MK4的降低(目前還不了解)也不影響進一步研究的結果。2.意外的是，不同細胞對維生素K的攝入有極大的差別，血管平滑肌細胞給出最高值，MG63給出最低值。這在圖5D中表明，在該圖中，我們將三種細胞類型中MK-7的攝入以同樣的標度作圖。3.在所有系統、但尤其是肝臟外細胞中，MK-7的攝取出人意料地比其它K族維生素好。這在下面的實驗中被進一步證明。實驗7隨時間追蹤K族維生素的細胞攝取。在所有情況下，在細胞生長至80%滿底后，加入各種K族維生素的混合物(在培養基中終濃度為1(imol/L)。數據在圖6中給出。意外的是，MK-7的攝取比其它任何K族維生素都好。細胞這種對MK-7偏好性的潛在機制還不十分清楚。結論1.4小時后攝入水平降低，8小時時達到平臺水平；2.對于每種維生素來說，攝取速率和平臺水平值不同；3.在所有三種細胞系統中，MK-7的攝取比任何其它的維生素好。實驗8在正常條件下，所有形式的維生素K以其醌形式被攝取，它們在被活化成酶Y-谷氨酰羧化酶的輔因子之前被還原成氫醌。在羧化過程中，它們被氧化成環氧化物，環氧化物可以被膜結合的酶VKOR還原。VKOR形成被稱為香豆素衍生物的藥物的靶，這種藥物使酶失活，從而阻斷K環氧化物的再循環。維生素K醌(而不是環氧化物)可以被第二個被稱為DT心肌黃酶的酶系統還原。因此，過量的維生素K拮抗香豆素衍生物例如華法令的作用。此外，在華法令的存在下使用的每種維生素K分子被轉化成相應的環氧化物，其不再能被進一步使用。因此，K環氧化物的濃度是華法令處理過程中使用的維生素K量的直接度量。香豆素衍生物被廣泛用作口服抗凝劑；它們的作用方式是基于抑制肝臟中凝血因子的羧化。因而，干擾香豆素衍生物是維生素K補充劑的潛在風險。因此，我們研究了各種不同的K族維生素是否干擾華法令以及干擾的程度。在所述研究中，在加入維生素K之前18小時，在培養基中加入10itmol/L華法令。在與K族維生素溫育過程中，該濃度的華法令也存在。結果顯示在圖7中。在MG63細胞系中我們僅鑒定到MK-4環氧化物(MK4-0)，在其它系統中檢測到了更多種其環氧化物形式的K族維生素。在所有情況下，顯然水溶性更好的維生素K形式(MK-4和K。能夠避開華法令的作用，而隨著疏水性增加，對華法令的干擾變弱。在該系列中最重要的細胞類型是HepG2細胞系，因為它代表了肝細胞，是凝血因子被合成的場所。從圖7明顯看出，在干擾華法令和維生素K種類的疏水性之間存在反相關。幾乎沒有形成MK-9環氧化物。這時MK-10和MK-ll不能商購到，但通過外推法可以預計這些長鏈甲基萘醌將完全沒有干擾，可以安全地作為補充劑給予即便是進行口服抗凝劑(香豆素)治療的患者。結論1.短鏈K族維生素K,和MK-4顯著干擾華法令，但是長鏈甲基萘醌的干擾較弱。2.在華法令的存在下K族維生素的利用與側鏈的長度反相關MK-7>MK-8>MK-9。3.在這些實驗的基礎上，可以預計MK-9和MK-10將不以臨床相關的方式干擾口服抗凝劑治療。實驗9在證明了長鏈甲基萘醌被各種不同細胞良好地攝取、以及它們在華法令處理期間幾乎不被利用之后，仍然需要證明這些維生素K種類在非抑制(無華法令)條件下被積極利用。因為在標準細胞培養條件下沒有環氧化物形成，我們通過將培養基中的胎牛血清降低到1%(v/v)，使用了亞最適生長條件。這導致顯著的環氧化物形成。結果顯示在圖8中。同樣地，發現短鏈維生素K環氧化物的積累，尤其是在血管平滑肌MG63細胞中。我們將這些數據解釋為長鏈甲基萘醌在細胞饑餓條件下的優先再循環。或者，這些數據也可以解釋為沒有利用長鏈甲基萘醌。這被VSMC和MG63在含有1%FCS和僅存在單一形式的維生素K(lnmol/L)的情況下可以生長的實驗所否決。使用羧化骨鈣蛋白的構象特異性測試試劑盒(Takara,日本)和羧化Gla-蛋白(VitaK,荷蘭)，發現在血管平滑肌細胞中，MGP的羧化被維生素K,、MK-4和MK-7刺激，在溫育24小時后使培養基中的MGP達到下面的水平>羧化的基質Gla-蛋白，在K1存在下12.4ng/mL，MK-4存在下10.7ng/mL，MK-7存在下13.5ng/mL。>羧化的骨鈣蛋白，在K1存在下3.2ng/mL，MK-4存在下4.1ng/mL，MK-7存在下3.9ng/mL。這些數據證明，長鏈甲基萘醌以及Kl和MK-4是維生素K依賴性羧化酶的活性輔因子，缺乏環氧化物一定是優先再循環的結果。權利要求1.藥品或類藥劑營養品，含有維生素K2或至少一種維生素K2類化合物、與至少一種純化或海產油形式的多不飽和脂肪酸相組合。2.藥品或類藥劑營養品，含有至少一種維生素K2類化合物,選自MK-7、MK-8、MK-9和MK-10，用于促進人類和動物心血管健康、骨健康和軟骨健康的至少一種。3.權利要求2的藥品或類藥劑營養品，其還含有至少一種純化或海產油形式的多不飽和脂肪酸。4.維生素K2或至少一種維生素K2類化合物，與至少一種純化或海產油形式的多不飽和脂肪酸相組合，在促進人類和動物心血管健康、骨健康和軟骨健康的至少一種中的應用。5.選自MK-7、MK-8、MK-9和MK-10的至少一種維生素&類化合物，在促進人類和動物心血管健康、骨健康和軟骨健康的至少一種中的應用。6.選自MK-7、MK-8、MK-9和MK-10的至少一種維生素K2類化合物，在抵消含有魚油、磷蝦油和多不飽和脂肪酸的食品和食品增補劑的某些負性方面、從而增強所述海產油和多不飽和脂肪酸對公共健康的有益方面中的作用。7.權利要求5或6的應用，其中所述MK-7、MK-8、MK-9和MK-10的至少一種與至少一種純化或海產油形式的多不飽和脂肪酸相組合。8.前述權利要求任一項的應用，其中所述應用被用于制備預防或治療與心血管、骨和軟骨相關的疾病或病癥的至少一種的藥物。9.預防或治療動脈粥樣硬化、動脈硬化、骨質疏松癥、骨關節炎或軟骨的炎性或變性疾病中至少一種的方法，其包括給人類或動物施用有效量的維生素K2或至少一種維生素K2類化合物，任選與有效量的至少一種純化或海產油形式的多不飽和脂肪酸相組合。10.權利要求9的方法，其包括給人類或動物施用有效量的選自MK-7、MK-8、MK-9和MK-10的至少一種維生素K2類化合物。11.權利要求10的方法，其中維生素K2類化合物是MK-7或MK-9。12.權利要求9-11任一項的方法，其中待施用的有效量的至少一種多不飽和脂肪酸是魚油或磷蝦油的形式。13.試劑盒，包含維生素K2或維生素K2類化合物和至少一種純化或海產油形式的多不飽和脂肪酸。14.權利要求1的產品或權利要求4的應用，其中所述至少一種維生素K2類化合物選自MK-7、MK-8、MK-9和MK-IO。15.權利要求1到3任一項的產品或權利要求4到8任一項的應用，其中所述多不飽和脂肪酸是魚油或磷蝦油的形式。16.權利要求1到3任一項的產品或權利要求4到8任一項的應用，其中所述多不飽和脂肪酸是n-3多不飽和脂肪酸。17.權利要求16的產品，其中所述多不飽和脂肪酸是EPA或DHA或其混合物。18.權利要求l的產品，其中所述維生素K2或至少一種維生素K2類化合物和所述脂肪酸提供在相同的藥物組合物中。19.前述權利要求任一項的產品，其中所述產品用于口服給藥。20.權利要求19的產品，其中所述產品是片劑或膠囊制劑。21.權利要求17的產品，其中所述脂肪酸是EPA和DHA以其甘油三酯或乙基酯形式的組合。22.維生素K2或至少一種維生素K2類化合物以及至少一種n-3多不飽和脂肪酸在制備預防或治療動脈粥樣硬化、動脈硬化、骨質疏松癥、骨關節炎或軟骨的其它炎性或變性疾病的藥物中的應用。23.前述權利要求任一項的維生素K2或至少一種維生素K2類化合物的應用或者包括施用維生素K2或至少一種維生素K2類化合物的治療或預防方法，其中維生素K2或至少一種維生素K2類化合物、優選為MK-7或MK-9的劑量，在每天1到500pg之間、優選在2到300ng之間、更優選在5到50ng之間、并最優選在10到20pg之間。全文摘要本發明提供了含有維生素K₂或維生素K₂類化合物內的化合物、任選并優選與一種或多種純化形式或作為海產油(即魚油和/或磷蝦油)的多不飽和脂肪酸相組合的藥品和類藥劑營養品。還提供了維生素K₂或維生素K₂類化合物內的化合物，優選與一種或多種純化形式或作為海產油的多不飽和脂肪酸組合，在治療和預防與骨、軟骨和心血管系統有關的疾病中的應用。優選的維生素K₂類化合物內的化合物是MK-7、MK-8、MK-9和MK-10，特別是MK-7或MK-9。海產油優選為磷蝦油或魚油。文檔編號A61K31/122GK101534807SQ200780032693公開日2009年9月16日申請日期2007年7月13日優先權日2006年7月14日發明者塞斯·弗美爾,安娜·比約內比埃·維克,斯泰因·韋斯特比埃,約·克拉韋內斯,萊昂·J·許爾格斯,霍格內·維克申請人:納多制藥股份公司