專利名稱：：抗生素的注射劑及其給予液的制作方法
技術領域：
：本發明涉及對耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)具有優異的抗菌作用的酯肽類抗生素即WAP-8294A2的臨用時制備型注射用制劑及其給予液、以及它們的制備方法。
背景技術：
：MRSA是甲氧西林等多種抗生素不起作用的耐藥性金黃色葡萄球菌。最早于1961年在英國報道了MRSA的出現，之后迅速在世界范圍蔓延。如今，據說在醫療設施中分離的金黃色葡萄球菌的57成為MRSA，認為其在醫院內廣泛蔓延。MRSA在醫療設施內主要通過接觸感染來感染醫療從業人員和患者，MRSA本身是金黃色葡萄球菌的變異株，病原性弱，因此即使健康人感染了MRSA也大多只成為其帶菌者。另一方面，當抵抗力弱的高齡患者、免疫缺陷患者、術后患者、氣管"血管內插有導管的患者等感染時，MRSA會在體內增殖，引發肺炎、腸炎、壞血癥、心內膜炎、腦膜炎等MASR感染癥。MRSA感染癥在醫療水平高度發達的歐美和日本，被列為最主要的感染癥之一，在醫院等醫療場所推進各種感染癥防止對策。MRSA感染癥與其他的細菌感染癥之間在癥狀、過程上無明顯差異，因此很難根據普通的臨床觀察和檢查值結果進行識別。確診則通過利用細菌檢查來鑒定MRSA而進行。關于MRSA感染癥的治療，除對癥治療法以外，給予抗菌劑也是有效的，但MRSA由于對于普通的抗菌藥具有耐性，因此必須使用萬古霉素及替考拉寧等對MRSA有效的特殊抗菌劑。在其使用之際，為了防止出現新的耐性菌，給予受到所需最低量和期間的限制。現在，對MRSA有效的上述抗菌藥在給予后需要一定程度的時間才顯現出一定的效果，因此無法期待速效性。針對這樣的MRSA感染癥治療的現狀，作為次世代的抗菌藥候補，公開了酯肽類抗生素即WAP-8294A2(參照專利文獻1)。WAP-8294A2的抗菌譜雖然較窄，但對MRSA的抗菌作用很強，能利用殺菌作用在短時間內殺滅MRSA。因此，認為WAP-8294A2因其強抗菌作用而對MRSA感染癥的急性惡化期特別有效，期待作為能使感染癥發病后處于危險狀況的患者迅速康復的治療劑。專利文獻l:專利第3339235號如上所述，作為針對醫療場所的重大問題即MRSA感染癥的治療藥而被人們期待的酯肽類抗生素WAP-8294A2雖然具有強的抗菌作用，但很難制造適合實際應用的高濃度且穩定的注射液和給予液，因而存在無法實用的問題。
發明內容本發明的目的在于提供高濃度且穩定的WAP-8294A2的臨用時制備型注射液和給予液。若能將該抗生素制成制劑，則對于有效治療方法有限的MRSA感染癥非常有用。WAP-8294A2是具有下式(1)所示結構式的酯肽類抗生素，對MRSA具有優異的抗菌作用。WAP-8294A2作為鹽酸鹽而得到，其溶液顯示強酸性。WAP-8294A2的水溶液的穩定性取決于pH和濃度。在pH低的酸性側區域穩定，在中性附近則粘性提高而易凝膠化，而濃度越低越穩定。另外，當在水溶液中存在鈉等離子時，在低pH下也易凝膠化，在中性附近則易產生沉淀。為了得到具有上述物理和化學特性的WAP-8294A2的注射液，一直在制劑學上下功夫，但仍然難以制備穩定且含有高濃度WAP-8294A2的注射液。若用目前的方法來制備WAP-8294A2的注射液，則為低濃度水溶液，雖然其在穩定性上優異，但制備成制劑后給予患者的給予液的容量變大，作為注射劑而言，對患者的負擔大。另外，pH的變化也不穩定，在給予前調節pH后的穩定性差，必須在23小時以內盡快使用。此外在中性附近的pH下還存在如下缺點容易產生微小的沉淀物，為了防止該沉淀物進入血液中而必須使用過濾器。另外，在注射給藥后，由于與血液中存在的鈉離子以及血清蛋白的相互錯用，會引起分子間凝集，有可能引起血液學異常。為此，本發明者對WAP-8294A2的溶液穩定性進行了反復研究，結果發現能在注射用制劑中使用的溶液劑中的2-羥基丙基-6-環糊精及3-環糊精溶液在WAP-8294A2的穩定性上特別優異。進一步潛心研究后發現:通過使用這些溶解劑或穩定劑，并且釆用與目前的制劑方法不同的不調節pH的方法來制備臨用時制備型注射用制劑，能得到穩定的高濃度的WAP-8294A2溶液。而且，在臨用時將該注射用制劑進行pH調節并稀釋而得到的注射給予液，與目前的制備方法相比，能實現高濃度化、小容量化，穩定性好，(1)H7N冊，且如后述的使用動物模型的藥理試驗所示，在注射給藥后也不會引起血液學異常，對MRSA感染能發揮優異的防御效果。因此，本發明涉及一種以下述結構式(1)表示的抗生素WAP-8294A2為有效成分的注射用制劑，其特征在于，所述制劑含有2-羥基丙基-P-環糊精或P-環糊精作為溶解劑，pH未被調節。該注射用制劑在使用時與輸液或稀釋液及pH調節劑混合而使用，pH優選為24。注射用制劑中的抗生素WAP-8294A2的濃度優選為520mg/ml。另外，該制劑中的2-羥基丙基-P-環糊精的濃度優選為2%50%。P-環糊精的濃度優選為0.5%2.5%。本發明還涉及一種以下述結構式(1)表示的抗生素WAP-8294A2為有效成分的臨用時制備型注射用制劑的制造方法，其特征在于，使用2-羥基丙基-e-環糊精或e-環糊精作為溶解劑，并且在未調節pH的情況下進行制劑化。本發明還涉及在上述臨用時制備型注射用制劑中混合輸液或稀釋劑及pH調節劑而得到的抗生素WAP-8294A2的注射用給予液。該給予液中使用的pH調節劑優選包含磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉以及氫氧化鈉溶液，輸液或稀釋液優選右旋糖。此外，本發明還涉及一種抗生素WAP-8294A2的注射用給予液的制造方法，其包括在上述臨用時制備型注射用制劑中混合輸液或稀釋劑及pH調節劑的工序。本發明的臨用時制備型注射用制劑通過含有2-羥基丙基-P-環糊精或P-環糊精作為溶解劑或穩定劑，并且在不調節pH的情況下進行制劑化，能克服WAP-8294A2水溶液易凝膠化而穩定性差的缺點，能含有高濃度的WAP-8294A2，且具有長期穩定這一優異效果。此外，臨用時在上述注射用制劑中混合輸液或稀釋液及pH調節劑而制得的本發明的注射用給予液，在高濃度下也很穩定，且給藥時不會引起血液學異常，能對MRSA發揮優異的抗菌作用。另外，由于本發明的WAP-8294A2的注射用制劑液能含有高濃度的WAP-8294A2，因而能將向患者給予時給予液的容量控制得較低，能減輕對患者的負擔。具體實施例方式本發明的注射用制劑通過如下的方式來制造，將具有上述結構式(1)的抗生素WAP-8294A2溶于作為溶解劑或穩定劑的2-羥基丙基-e-環糊精或e-環糊精溶液中，并且不調節pH。作為有效成分的抗生素WAP-8294A2具有上述式(1)所示的結構，作為鹽酸鹽被分離。關于其制造方法，可以舉出例如專利第3339235號說明書所述的方法培養溶桿菌屬(Lysobactersp.)WAP-8294株(FERMBP-4990)等屬于溶桿菌屬的抗生素WAP-8294A生產菌，從其培養物分離采集抗生素WAP-8294A，然后進行分離精制，得到抗生素WAP-8294A2。由于WAP-8294A2作為鹽酸鹽被分離，因此將其溶于2-羥基丙基-P-環糊精或6-環糊精溶液中，不經過調節pH而得到pH24的注射液。如下述表1所示，作為溶解劑或穩定劑的2-羥基丙基-e-環糊精或P-環糊精在WAP-8294A2穩定化上優異。[表1]WAP-8294A2的溶液穩定性(室溫保存)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>*將WAP-8294A2100mg溶于各溶解液lOml。〇澄清、有流動性、澄清、有粘性、X:白色渾濁、沉淀或凝集本發明的注射用制劑液中含有的2-羥基丙基-e-環糊精優選在1%到50%、特別優選在5%20%的范圍內使用。P-環糊精的使用濃度優選從0.5%到2.5%，特別優選從1%2%。另外，在本發明注射用制劑中，WAP-8294A2能以5mg/mL到20mg/mL的范圍的濃度溶解。特別優選以5mg/mL到15mg/mL的濃度含有。因此，與使用2-羥基丙基-P-環糊精、P-環糊精以外的溶解劑的情況以及添加pH調節劑進行pH調節的目前的制劑化方法相比，能得到高濃度且穩定的WAP-8294A2注射用制劑。此外，本發明的注射用給予液可以通過在臨用時在上述注射用制劑液中混合輸液或稀釋液并添加pH調節劑來制備。該給予液的pH優選調至68。關于添加的輸液或稀釋液的量，可以根據注射用制劑中的WAP-8294A2濃度、作為給予液的合適的量、WAP-8294A2的給予量等來適當決定。給予液能制備成7.5mg/mL左右的相當高的濃度，優選制成0Jmg/mL5mg/mL、特別優選為0.1mg/mL3mg/mL的濃度。對于目前的制備方法，容易產生沉淀，即使在0.1mg/mL左右，穩定性也很差。而且，給藥后有時會產生血液學異常。作為輸液或稀釋液，只要是常用的輸液或稀釋液即可無特殊限制地使用，從穩定性的觀點出發，優選右旋糖。另外，pH調節劑優選使用磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉以及氫氧化鈉溶液。在本發明給予液中還可以含有保存劑等制劑中常用的添加劑。本發明的給予液可以作為點滴用注射劑給予，能用作細菌感染癥、特別是耐甲氧西林金黃色葡萄球菌感染癥的治療劑。本發明制劑的給予量根據對象疾病、給藥途徑、給藥次數、患者癥狀的程度等而各異，作為抗生素WAP-8294A2的量，例如優選對成人每天給予0.530mg/kg的量。以下示出實施例、藥理試驗例，更詳細地說明本發明。但本發明不限于這些實施例。實施例1在16%的2-羥基丙基-13-環糊精溶液中制備的WAP-8294A2的注射用制劑將WAP-8294A2原藥l.Og溶解于使用注射用蒸餾水制備的16%的2-羥基丙基-P-環糊精溶液200ml中，不調節pH，得到注射用WAP-8294A2制劑液。將得到的制劑液在室溫下穩定6個月。實施例2在5%的2-羥基丙基-P-環糊精溶液中制備的WAP-8294A2的注射用制劑將WAP-8294A2原藥l.Og溶解在使用注射用蒸餾水而制備的5%的2-羥基丙基-P-環糊精溶液100ml中，不調節pH，得到注射用WAP-8294A2制劑液。將得到的制劑液在室溫下穩定6個月。實施例3在2%的P-環糊精溶液中制備的WAP-8294A2的注射用制劑將WAP-8294A2原藥l.Og溶解在使用注射用蒸餾水而制備的2%P-環糊精溶液100ml中，不調節pH，得到注射用WAP-8294A2制劑液。將得到的制劑液在室溫下穩定6個月。實施例4WAP-8294A2給予液的制備向含有5mg/ml按照實施例1得到的、在16%的2-羥基丙基-P-環糊精液中制備的WAP-8294A2的注射用制劑液20ml中，添加通過在由100mM磷酸氫二鈉39容積和100mM磷酸二氫鈉61容積形成的磷酸緩沖液中添加最終為0.02N的0.1N氫氧化鈉溶液而得到的pH調節液2ml進行中和，然后加入5%注射用液78ml，制成總量100ml。制得的給予液的pH為6.9，滲透壓為2300sm/kg。另外，得到的給予液在室溫下24小時穩定。[藥理試驗例l]小鼠的4天反復給藥毒性試驗針對用實施例4所示的方法制備的本發明的WAP-8294A2注射用給予液(含有2-羥基丙基-e-環糊精)和舊制劑(在5%右旋糖和0.45%氯化鈉液中制備的WAP-8294A2溶液)，以50mg/kg/日、10mg/kg/日、2mg/kg/日的3個劑量對小鼠進行4天反復給藥，比較觀察到的毒性。這些劑量按WAP-8294八2濃度計分別為7.5mg/mL、1.5mg/mL、0.3mg/mL。其結果如表2所示，若是舊制劑，則在50mg/kg/日(WAP-8294A2濃度為7.5mg/mL)給藥組，在給藥第1天的給藥后所有小鼠均立刻呈現陣攣性痙攣，并死亡，與此相對，若是本發明給予液，則在50mg/kg/日給藥組未見死亡以及一般狀態的異常。關于血液學異常，若是舊制劑，則在10mg/kg/日(1.5mg/mL)給藥組可見紅細胞數、血紅蛋白量、紅細胞壓積趨向低值，血小板數為低值。與此相對，若是本發明給予液，則在2mg/kg/日(0.3mg/mL)以及10mg/kg/日(1.5mg/mL)給藥組未見異常，與舊制劑在致死和血液學異常方面存在明顯差異。由此證實本發明WAP-8294A2注射用給予液在致死劑量的上升以及血液毒性的降低等毒性學方面得到顯著改善。[表2]小鼠4天反復給藥毒性試驗的結果(一般狀態和血液學異常)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>體內抗MRSA感染試驗針對用實施例4所示的方法制備的本發明的WAP-8294A2給予液和注射用萬古霉素(5%右旋糖溶液)，使用MRSA小鼠全身感染模型，比較有效性。使小鼠靜脈內感染MRSA(ATCC33591株)后，在1小時后向靜脈內給予l次試驗液，觀察1周，觀察小鼠的生死。從各給予量下的存活率求出50%有效給予量(mg/kg)。由表3證實本發明的WAP-8294A2給予液的50%有效給予量為萬古霉素的52分之一，本發明WAP-8294A2給予液對MRSA感染小鼠顯示出優異的有效性。[表3]MRSA小鼠全身感染模型的WAP-8294A2給予液和注射用萬古霉素的有效性比較給予物質各給予量(mg/kg)下的存活率(％)50%有效給予量103.01.00.30.10.030.01WAP-8294A2-1001001006030100,06mg/kg萬古霉素100300----3.12mg/kg工業上利用的可能性本發明提供酯肽類抗生素即WAP-8294A2的穩定且高濃度的臨用時制備型注射用制劑。該注射用制劑在使用時將輸液或稀釋液及PH調節劑混合制成注射用給予液，與用目前的方法制備的給予液相比，濃度高且穩定，而且致死毒性降低，紅細胞減少、血小板數減少等血液毒性學變化減少。因此，能使充分發揮抗生素WAP-8294A2的優異抗菌作用的制劑得到實際應用，特別是能提供針對MRSA感染癥的安全性高且非常有效的治療方法。權利要求1.一種以下述結構式(1)表示的抗生素WAP-8294A2為有效成分的臨用時制備型注射用制劑，其特征在于，所述注射用制劑含有2-羥基丙基-β-環糊精或β-環糊精作為溶解劑，并且pH未被調節，2.根據權利要求1所述的注射用制劑，用于在使用時與輸液或稀釋液及pH調節劑混合而使用。3.根據權利要求1或2所述的注射用制劑，其中，pH為24。4.根據權利要求13中任一項所述的注射用制劑，其含有5mg/ml20mg/ml的抗生素WAP-8294A2。5.根據權利要求1所述的注射用制劑，其中，2-羥基丙基-P-環糊精的濃度為2%50%。6.根據權利要求1所述的注射用制劑，其中，P-環糊精的濃度為0.5%2.5%。7.—種以下述結構式(1)表示的抗生素WAP-8294A2為有效成分的臨用時制備型注射用制劑的制造方法，其特征在于，使用2-羥基丙基-3-(1)8.—種抗生素WAP-8294A2的注射用給予液，其通過在權利要求l6中任一項所述的注射用制劑中混合輸液或稀釋液及pH調節劑而得到。9.根據權利要求8所述的注射用給予液，其中，pH調節劑包含磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉以及氫氧化鈉溶液。10.根據權利要求9所述的注射用給予液，其中，輸液或稀釋液是右旋糖。11.一種抗生素WAP-8294A2的注射用給予液的制造方法，其包括在權利要求16中任一項所述的注射用制劑中混合輸液或稀釋液及pH調節劑的工序。環糊精或P-環糊精作為溶解劑，并且在未調節pH的情況下進行制劑化，全文摘要本發明提供以酯肽類抗生素WAP-8294A<sub>2</sub>為有效成分的、穩定且含有高濃度WAP-8294A<sub>2</sub>的注射用醫藥組合物。該注射用醫藥組合物以具有式(1)所示結構式的WAP-8294A<sub>2</sub>為有效成分，含有2-羥基丙基-β-環糊精或β-環糊精作為穩定劑或溶解劑，并且未調節pH。在該醫藥組合物中，在臨用時混合由磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉以及氫氧化鈉溶液構成的pH調節劑和右旋糖等輸液或稀釋液，制備WAP-8294A<sub>2</sub>注射用給予液。文檔編號A61K38/00GK101578103SQ20078003226公開日2009年11月11日申請日期2007年6月28日優先權日2006年6月29日發明者中島寬文,町田治彥申請人:阿利健制藥有限公司