專利名稱：：軟骨障礙的治療的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及軟骨障礙的治療，特別是骨關(guān)節(jié)炎的治療。更具體地涉及FGF-18在治療方案中的應(yīng)用及在制備治療罹患軟骨障礙如骨關(guān)節(jié)炎(例如膝關(guān)節(jié)炎或繼發(fā)性髖關(guān)節(jié)炎)患者的藥物上的應(yīng)用，具體提供的是包括在每個(gè)治療周期中每周一次給予FGF-18的優(yōu)選治療方案。
背景技術(shù)：
：FGF-18被鑒定為FGF家族的一員，它與FGF8和FGF17最為接近。與FGF18相關(guān)的活性包括刺激間質(zhì)細(xì)胞系，特別是心肌細(xì)胞、成骨細(xì)胞和軟骨細(xì)胞(美國(guó)專利No.6,352,971)。FGF18結(jié)合并激活FGFR4及FGFR3和FGFR2的lllc剪接變體。骨的再建是組織群和骨骼結(jié)構(gòu)賴以維持的動(dòng)態(tài)過(guò)程。該過(guò)程是骨吸收和骨形成之間的平衡過(guò)程，有兩類細(xì)胞被認(rèn)為在其中起作用。這些細(xì)胞是成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞。成骨細(xì)胞合成和沉積基質(zhì)形成新骨。成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞的活性受很多因子(全身的和局部的)包括生長(zhǎng)因子的調(diào)節(jié)。'軟骨是一類致密結(jié)締組織，由稱作軟骨細(xì)胞的細(xì)胞組成，分散在堅(jiān)固的凝膠樣基底組織(基質(zhì))中。軟骨是無(wú)血管的(不含有血管)，營(yíng)養(yǎng)素分散在整個(gè)基質(zhì)中。軟骨見于關(guān)節(jié)、肋架、耳朵、鼻子、咽喉中和椎間盤之間。有三種主要類型的軟骨透明軟骨、彈性軟骨和纖維軟骨。軟骨的主要效用是提供骨沉積開始的骨架。軟骨的另一個(gè)重要效用是為有關(guān)節(jié)的骨的活動(dòng)提供光滑面和機(jī)械保護(hù)。損傷或疾病引起的受損軟骨(特別是關(guān)節(jié)軟骨)的置換對(duì)醫(yī)師是一個(gè)主要的挑戰(zhàn)，有效的治療被認(rèn)為不可預(yù)言，并且僅僅在有限的時(shí)間內(nèi)有效。實(shí)際上當(dāng)前對(duì)軟骨損傷有效的治療集中在緩解疼痛上，對(duì)受損組織的再生無(wú)效或幾乎無(wú)效。因此，大多數(shù)年輕患者不尋求治療或被建議盡可能延遲治療。當(dāng)必須治療時(shí)，標(biāo)準(zhǔn)程序是全關(guān)節(jié)置換或微裂縫(涉及軟骨下骨穿刺刺激軟骨細(xì)胞產(chǎn)生纖維軟骨沉積的一種程序)。對(duì)于骨關(guān)節(jié)炎患者來(lái)說(shuō)，非手術(shù)治療包括物理治療、生活方式改變(如減少活動(dòng))、支具療法、支持裝置、口服或注射藥物(如非類固醇抗炎藥)和醫(yī)學(xué)管理。外科手術(shù)對(duì)骨關(guān)節(jié)炎的嚴(yán)重程度有特效，可使癥狀減輕，這些癥狀一般僅短期活動(dòng)。脛骨或股骨切開術(shù)(切開骨骼使磨損關(guān)節(jié)重建平衡)可減輕癥狀，有助于維持積極的生活方式，延緩對(duì)全關(guān)節(jié)置換的需求。全關(guān)節(jié)置換可改善骨關(guān)節(jié)炎后期癥狀，但一般需改變患者的生活方式和/或活動(dòng)水平。因此，需要有一種方法用以治療、預(yù)防或改善軟骨障礙的癥狀，使受損組織再生，而且這種方法還需安全和盡可能有效。此外，由于軟骨障礙可以是慢性疾病，因此這種方法需要能對(duì)患者進(jìn)行重復(fù)治療。發(fā)明概述本發(fā)明提供一種治療軟骨障礙患者的方法，包括給予FGF-18化合物，其中FGF-18化合物至少給藥兩次，所述給藥間隔約4天，較佳為5、6、7、8、9或10天。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，所治療的軟骨障礙是骨關(guān)節(jié)炎，F(xiàn)GF-18化合物是本說(shuō)明書中指定為FGF-18(170AA)的FGF-18片段，劑量學(xué)周期是每周關(guān)節(jié)內(nèi)注射10-30mcg，持續(xù)3周(一個(gè)治療周期)。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，這樣的治療周期可在4個(gè)月或6個(gè)月后重復(fù)進(jìn)行。例如，采用6個(gè)月后重復(fù)的治療周期時(shí)，如果第一個(gè)治療周期開始于例如某年1月，則第二個(gè)治療周期可開始于該年7月。本發(fā)明還提供FGF-18化合物在制備治療軟骨障礙患者的藥物上的應(yīng)用，其中FGF-18化合物至少給藥兩次，所述給藥間隔約4天，較佳為5、6、7、8、9或10天。本發(fā)明還提供一種FGF-18化合物治療軟骨障礙患者的應(yīng)用，其中FGF-18化合物至少給藥兩次，所述給藥間隔約4天，較佳為5、6、7、8、9或10天。本發(fā)明還提供FGF-18化合物在制備治療軟骨障礙患者的藥物上的應(yīng)用，所述藥物適合于至少給藥兩次，所述給藥間隔為約4天，較佳為5、6、7、8、9或10天。發(fā)明詳述本發(fā)明提供合適的治療模式，包括用FGF-18化合物例如FGF-18(170AA)蛋白片段治療各種軟骨障礙的合適的給藥方案。在本發(fā)明上下文中，令人驚異地發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)GF-18化合物在按照本發(fā)明揭示的方法和應(yīng)用給藥時(shí)，對(duì)軟骨障礙具有最佳的改善疾病或癥狀的效應(yīng)。業(yè)已發(fā)現(xiàn)，當(dāng)使用與本發(fā)明預(yù)定劑量相同或相當(dāng)?shù)膭┝繒r(shí)，比本發(fā)明預(yù)定頻率較低的給藥方案可能并非完全有效，而比本發(fā)明預(yù)定頻率較高的給藥方案可能對(duì)軟骨或關(guān)節(jié)周圍引起炎癥和/或其它相反的結(jié)果。因此，本發(fā)明的一個(gè)方面提供一種治療軟骨障礙患者的方法，包括給予FGF-18化合物，其中FGF-18化合物至少給藥兩次，所述給藥間隔約4天，較佳為5、6、7、8、9或10天。例如，當(dāng)給藥間隔約4天時(shí)，第二次給藥可在第一次給藥后約96小時(shí)進(jìn)行，如給藥是在例如第一天早上時(shí)，患者將有三天不接受給藥(第2天、第3天、第4天)，而在第5天早上再接受給藥。在-一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述給藥間隔約6、7或8天。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，它們間隔約7天。在本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了一種FGF-18化合物在制備治療軟骨障礙患者的藥物上的應(yīng)用，其中FGF-18化合物至少給藥兩次，所述給藥間隔約4天，較佳為5、6、7、8、9或10天。在一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述給藥間隔約6、7或8天。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，它們間隔約7天。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述給藥每次間隔約7天。較佳的是，F(xiàn)GF-18化合物以有規(guī)則的間隔每周給藥一次。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，還提供FGF-18化合物在制備治療軟骨障礙患者的藥物上的應(yīng)用，所述藥物適合于至少給藥兩次，所述給藥間隔為約4天，較佳為5、6、7、8、9或10天。在一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述給藥間隔約6、7或8天。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，它們間隔約7天。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述給藥每次間隔約7天。較佳的是，F(xiàn)GF-18化合物以有規(guī)則的間隔每周給藥一次。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，每個(gè)治療周期給予FGF-18化合物至少連續(xù)2周、至少連續(xù)3周或至少連續(xù)4周。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，治療周期是FGF-18化合物每周給藥的連續(xù)周數(shù)。在還有一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，每個(gè)治療周期給予FGF-18化合物連續(xù)2周、連續(xù)3周或連續(xù)4周，這樣的治療可包括每年1、2、3、4、5或6個(gè)治療周期。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，每個(gè)治療周期給予FGF-18化合物連續(xù)3周。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，這樣的治療包括每年2個(gè)治療周期。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，治療包括關(guān)節(jié)內(nèi)給予FGF-18化合物。或者，治療包括靜脈內(nèi)給予FGF-18化合物。在進(jìn)一步的優(yōu)選實(shí)施方案中，治療包括每個(gè)關(guān)節(jié)內(nèi)給予FGF-18化合物，劑量為1-100mcg，或優(yōu)選1-60微克(mcg)，或優(yōu)選3-50mcg，或優(yōu)選5-40mcg,或優(yōu)選10-30mcg。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，治療包括每次關(guān)節(jié)內(nèi)給予FGF-18化合物，劑量為約3、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60mcg。優(yōu)選的劑量包括每次關(guān)節(jié)內(nèi)給予FGF-18化合物5、10、15、20、25禾口30mcg。在迸一步的優(yōu)選實(shí)施方案中，治療包括每次靜脈內(nèi)給予FGF-18化合物，劑量為50-200mcg/kg，優(yōu)選80-120mcg/kg。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，治療包括每次靜脈內(nèi)給予FGF-18化合物，劑量為80、90、100、110或120mcg/kg。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，用本發(fā)明的任一方法治療的軟骨障礙是骨關(guān)節(jié)炎，例如按OARSI分類為II級(jí)或III級(jí)的骨關(guān)節(jié)炎。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，骨關(guān)節(jié)炎可以是膝關(guān)節(jié)炎或髖關(guān)節(jié)炎，如繼發(fā)性髖關(guān)節(jié)炎。本領(lǐng)域技術(shù)人員完全知道本領(lǐng)域中所使用的關(guān)節(jié)炎的分類。OARSI分類尤為本領(lǐng)域所知。本領(lǐng)域技術(shù)人員可參考"Guidelinesforthemedicalmanagementofosteoarthritis"(MarcC.Hochberg,RoyD.Altman，KennethD.Brandt,BruceM.Clark,PaulA.Dieppe,MarieR.Griffin,RolandW.Moskowitz，Thomas丄Schnitzer，Arthritis&Rheumatism,第38巻，Issue11，1995.第1535-1546頁(yè))。本發(fā)明的優(yōu)選FGF-18化合物選自野生型FGF-18或FGF-18(170AA)。本發(fā)明的化合物天然或野生型FGF-18是關(guān)節(jié)軟骨的軟骨細(xì)胞表達(dá)的蛋白質(zhì)。本發(fā)明總的涉及成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子18(FGF-18)化合物在治療骨關(guān)節(jié)炎上的應(yīng)用。本發(fā)明的FGF-18化合物包括例如天然或野生型FGF-18，特別是人FGF-18、其生物活性變體，如生物活性等位基因變體，及FGF-18的生物活性截短形式。本發(fā)明還涉及保留如本說(shuō)明書所述生物活性的FGF-18的任何變體或修飾形式。FGF-18的生物活性特別包括下面實(shí)施例中所描述的活性，特別如本說(shuō)明書所描述的體內(nèi)疾病模型上的活性。人FGF-18cDNA的核苷酸序列見SEQIDNO.1，其推論的氨基酸序列見SEQIDNO.2。FGF-18原來(lái)指定為zFGF-5，在美國(guó)專利US6，352，971、US5,989，866和美國(guó)專利公開公報(bào)US2005/0043234中有完全的描述，所有內(nèi)容均引入本說(shuō)明書作為參考。編碼人FGF-18多肽的cDNA(SEQIDNO.1)的分析顯示了一個(gè)編碼包括180個(gè)氨基酸成熟多肽(SEQIDNO.2的第28個(gè)殘基至第207個(gè)殘基)的207個(gè)氨基酸(SEQIDNO.2)的開放閱讀框架。SEQIDNO.3所示小鼠FGF-18多核苷酸序列及SEQIDNO.4所示相應(yīng)的氨基酸序列被發(fā)現(xiàn)具有與人種間同源體的高度同源性。在氨基酸水平，小鼠和人多核苷酸約98%相同，有三種氨基酸變化。本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)識(shí)別SEQIDNO.1或SEQIDNO,3及SEQIDNO.2或SEQIDNO.4分別代表人和小鼠FGF-18基因的單個(gè)等位基因和多肽，并預(yù)期存在等位基因變異和交替拼接。正如已提及的，本發(fā)明的FGF-18化合物包括例如天然或野生型FGF-18,特別是人FGF-18、其生物活性變體(如活性等位基因變體)和FGF-18的生物活性截短形式。本發(fā)明可涉及保持本說(shuō)明書描述的FGF-18所需生物活性(特別如軟骨沉積增加)的FGF-18的任何變體或修飾形式。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，F(xiàn)GF-18化合物是人FGF-18的截短形式。在一個(gè)特定實(shí)施方式中，所述FGF-18的截短形式包括或由SEQIDNO:2的28-175個(gè)殘基或功能衍生物或變體或突變蛋白(如本說(shuō)明書所定義的)組成。在另一個(gè)實(shí)施方式中，所述FGF-18的截短形式包括或由SEQIDNO:2的28-176、28-177、28-178、28-179、28-180、28-181、28-182、28-183、28-184、28-185、28-186、28-187、28-188、28-189、28-190、28-191、28-192、28-193、28-194或28-195、28-196、28-197、28-198、28-199、28-200、28-201、28-202、28-203、28-204、28-205、28-206或28-207個(gè)殘基或功能衍生物8或變體或突變蛋白(如本說(shuō)明書所定義的)組成。這些多核苷酸、功能衍生物、或變體或突變蛋白可包括外加的N-末端氨基酸殘基，優(yōu)選甲硫氨酸。確實(shí)，依賴于表達(dá)系統(tǒng)和條件，本發(fā)明的多核苷酸可在重組宿主細(xì)胞中以甲硫氨酸為起始進(jìn)行表達(dá)。本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案是FGF-18的截短形式，包含170個(gè)氨基酸(AA)，下文也稱作"FGF-18(170AA)"。野生型或天然存在的形式是207個(gè)氨基酸長(zhǎng)度，其中最初27個(gè)氨基酸是信號(hào)序列，F(xiàn)GF-18(170AA)中最后11個(gè)氨基酸是被刪除的(也可在體內(nèi)天然存在的FGF-18中得到證實(shí))。FGF-18(170AA)可在大腸桿菌中表達(dá)，由于沒(méi)有信號(hào)序列，AA序列以甲硫氨酸起始，接著是AA28，結(jié)束是AA196。FGF-18(170AA)的分子量是19.83kDa,pl~10。FGF-18(170AA)在下文中描述為SEQIDNO.5。FGF-18(170AA)增加軟骨細(xì)胞增殖/分化和軟骨沉積，導(dǎo)致各種軟骨組織的修復(fù)和重建。FGF家族成員的特征是肝素結(jié)合域。在SEQIDNO:2和SEQIDNO:4的氨基酸殘基148(Gly)至氨基酸殘基169(Gin)區(qū)域已鑒定出一個(gè)推定的FGF-18肝素結(jié)合域。據(jù)推測(cè)，受體介導(dǎo)的信號(hào)傳遞始于復(fù)合于細(xì)胞表面硫肝蛋白糖的FGF配體的結(jié)合。很多FGF家族成員可根據(jù)其結(jié)構(gòu)和功能放入一個(gè)或兩個(gè)相關(guān)家族中。aFGF和bFGF包括由兩個(gè)可變長(zhǎng)度內(nèi)含子分隔的三個(gè)外顯子。FGF-18包括5個(gè)外顯子，前三個(gè)對(duì)應(yīng)于aFGF和bFGF的第一個(gè)外顯子。所有已知的FGF家族成員接合形成單一的多肽。FGF-18配體-受體復(fù)合物分析證明了FGF-18對(duì)FGFR4及FGFR3和FGFR2的"lllc"剪接變體具有特異性。軟骨組織的軟骨細(xì)胞表達(dá)FGFR3-lllc和FGFR2-lllc，這兩種受體特別見于人關(guān)節(jié)軟骨內(nèi)。FGFR3禾PFGFR2見于哺乳動(dòng)物的生長(zhǎng)板，在軟骨內(nèi)和膜內(nèi)骨的形成上起著重要的作用。FGFR2在壓縮的間充質(zhì)中最先表達(dá)，F(xiàn)GFR3表達(dá)以軟骨細(xì)胞分化和增殖為開始。在顱骨發(fā)育中，F(xiàn)GFR3見于硬腦膜和骨膜中，而FGFR2在成骨性冠狀縫的骨原細(xì)胞中表達(dá)。FGFR2也在小梁骨中表達(dá)。以前已證明，根據(jù)這些細(xì)胞的分化狀態(tài)和給藥方式，F(xiàn)GF-18是軟骨細(xì)胞和成骨細(xì)胞的增殖劑(見美國(guó)專利6,352，971禾口5,989，866;Ellsworthetal.OsteoarthritisandCartilage,10:308-320,2002;Shimoakaetal.,丄Bio.Chem.277(9)7493-500,2002)。較好的是，本發(fā)明的FGF-18化合物增加軟骨沉積。這種增加在體內(nèi)和體外試驗(yàn)中均可測(cè)定。透明軟骨、彈性軟骨和纖維軟骨的增殖作為生物基質(zhì)的治療劑或組分均有價(jià)值。FGF-18化合物，例如FGF-18(170AA)，及含F(xiàn)GF-18化合物的組合物("FGF-18組合物")可用于治療因年齡相關(guān)性表面原纖維形成而造成的滑膜關(guān)節(jié)中的關(guān)節(jié)軟骨缺損、因骨關(guān)節(jié)炎造成的軟骨變性和因損傷或疾病造成的骨軟骨缺損。FGF-18化合物和組合物還可用于治療剝脫性骨軟骨炎引起的關(guān)節(jié)疾病和退行性關(guān)節(jié)疾病。在重建和整形外科領(lǐng)域，F(xiàn)GF-18組合物也可用于廣泛的組織缺損重建中自身性或異源性軟骨擴(kuò)展和轉(zhuǎn)移。FGF-18化合物和組合物還可用于擴(kuò)展細(xì)胞和誘導(dǎo)彈性軟骨生成。細(xì)胞擴(kuò)展和彈性軟骨生成的誘導(dǎo)對(duì)耳和鼻組織的再生和修復(fù)將會(huì)是有用的。FGF-18化合物和組合物還可用來(lái)擴(kuò)展培養(yǎng)物中的軟骨細(xì)胞種群，用于自身性或異源性軟骨細(xì)胞移植，然后施以或不施以共存的治療，包括給予FGF-18組合物。在這些操作中，例如，可在關(guān)節(jié)鏡下從受損關(guān)節(jié)的未受傷害的負(fù)荷較小區(qū)域采集軟骨細(xì)胞，將軟骨細(xì)胞在FGF-18組合物存在下進(jìn)行培養(yǎng)以增加移植前的細(xì)胞數(shù)。然后將擴(kuò)展的培養(yǎng)物與FGF-18組合物混合，置于關(guān)節(jié)腔內(nèi)或直接置入缺損處。FGF-18組合物可與骨膜或軟骨膜移植物聯(lián)合使用，這些移植物含有可形成軟骨和/或幫助植入的軟骨細(xì)胞或其前體細(xì)胞固定在位的細(xì)胞。FGF-18組合物可與關(guān)節(jié)灌洗、骨髓刺激、磨削性關(guān)節(jié)成形術(shù)、軟骨下鉆孔或軟骨下骨微裂縫聯(lián)合用于修復(fù)軟骨損傷。另外，在給予FGF-18組合物使軟骨生長(zhǎng)后，可能需要再施行外科手術(shù)治療使新生成的軟骨表面形成適當(dāng)?shù)妮喞０幢景l(fā)明所述的FGF-18化合物還可以是野生型FGF-18蛋白的功能衍生物、變體或突變蛋白。此處所用的"功能衍生物"涵蓋FGF-18的衍生物、其變體或突變蛋白和融合蛋白，它們可用本領(lǐng)域已知的方法從存在于殘基側(cè)鏈或N或C端基團(tuán)的功能基團(tuán)進(jìn)行制備。這些功能基團(tuán)只要它們?nèi)匀皇撬帉W(xué)上可接受的，即它們不破壞蛋白質(zhì)的活性，基本上類似于或優(yōu)于FGF-18的活性，并且不給含F(xiàn)GF-18的組合物帶來(lái)毒性，即包括在本發(fā)明中。這些衍生物可以包括例如聚乙二醇側(cè)鏈，該側(cè)鏈可改善蛋白質(zhì)的其它活性，例如穩(wěn)定性、半衰期、生物利用度、人體耐受性，或降低免疫原性。為達(dá)此目的，可將FGF-18連接于聚乙二醇(PEG)，聚乙二醇化可用已知的方法進(jìn)行，例如WO92/13095中所描述的，特別可以按照WO99/55377的教導(dǎo)制備PEG-IFN。因此，在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，F(xiàn)GF-18的功能衍生物包括至少一個(gè)附加在一個(gè)或幾個(gè)功能基團(tuán)上的基團(tuán)，這些功能基團(tuán)以氨基酸殘基上的一個(gè)或幾個(gè)側(cè)鏈的形式存在。高度優(yōu)選的實(shí)施方式是該基團(tuán)為聚乙二醇(PEG)。按照本發(fā)明，還可有幾個(gè)PEG基團(tuán)附加在FGF-18上。其它衍生物包括經(jīng)修飾的FGF-18蛋白，例如FGF-18的長(zhǎng)效形式。長(zhǎng)效FGF-18特別可選自聚乙二醇化的FGF-18、FGF-18-HAS融合蛋白和FGF-18-Fc-融合蛋白。其它衍生物包括羧基的脂肪族酯、羧基與氨或伯胺或仲胺反應(yīng)所生成的酰胺、氨基酸殘基的游離氨基與酰基基團(tuán)(如垸酰基或碳環(huán)芳?；?形成的N-?；苌铩⒒蛴坞x羥基(如絲氨?；蛱K氨?；鶜埢牧u基)與?；鶊F(tuán)形成的O-酰基衍生物。本發(fā)明框架中所用的"變體"或"突變蛋白"指FGF-18的類似物，其中天然FGF-18的一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基被不同的氨基酸殘基置換、或刪除、或一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基被加到天然FGF-18序列中，所得產(chǎn)物的活性與野生型FGF-18相比并無(wú)明顯減小。這些突變蛋白通過(guò)已知的合成和/或定向誘變技術(shù)或任何其它適合使用的已知技術(shù)進(jìn)行制備。按照本發(fā)明的"變體"或"突變蛋白"包括如US5,989,866揭示的在嚴(yán)格條件下由雜交于編碼FGF-化的DNA或RNA的核酸(如DNA或RNA)編碼的蛋白質(zhì)。術(shù)語(yǔ)"嚴(yán)格條件"指雜交和其后的洗滌條件是本領(lǐng)域技術(shù)人員通常所指白勺"嚴(yán)格"。見Ausubeletal"CurrentProtocolsinMolecularBiology,lnterscience，N.丫.，§§6.3禾B6.4(1987,1992)。嚴(yán)格條件的例子(非限制性的)包括洗滌條件在低于研究中的預(yù)計(jì)雜交溫度12-2CTC，在例如2xSSC和0.5%SDS中洗滌5分鐘，2xSSC和0.1%SDS中洗滌15分鐘；0.1xSSC和0.5%SDS中于37°C下洗滌30-60分鐘，然后在0.1xSSC和0.5%SDS中于68°C洗滌30-60分鐘。本領(lǐng)域技術(shù)人員理解，嚴(yán)格條件也取決于DNA序列、寡核苷酸探針(例如10-40個(gè)堿基)或混合寡核苷酸探針的長(zhǎng)度。如果使用混合探針，較佳為以氯化四甲銨(TMAC)代替SSC，見Ausbel,同上。同一性反映由序列比較而確定的兩個(gè)或幾個(gè)多肽序列或兩個(gè)或幾個(gè)多核苷酸序列之間的關(guān)系。一般來(lái)說(shuō)，同一性指兩個(gè)多核苷酸或兩個(gè)多肽分別作序列全長(zhǎng)比對(duì)時(shí)確切的核苷酸對(duì)核苷酸或氨基酸對(duì)氨基酸相一致。當(dāng)序列不是確切的一致時(shí)，可測(cè)定"％同一性"。一般來(lái)說(shuō)，兩個(gè)作比對(duì)的序列是對(duì)齊的，在這兩個(gè)序列之間得到最大的相關(guān)性。這可包括在任一序列或在兩個(gè)序列中插入"缺口"以增加校正度?？蓪?duì)每個(gè)作比對(duì)的序列的全長(zhǎng)測(cè)定％同一性(所謂總體比對(duì))，這特別適合于長(zhǎng)度相同或相似的序列，或?qū)^短的、確定的長(zhǎng)度進(jìn)行測(cè)定(所謂局部對(duì)比)，這更適合于不同長(zhǎng)度的序列。比較兩個(gè)或幾個(gè)序列的同一性和同源性和/或近似性的方法是本領(lǐng)域熟知的。因此，例如在WisconsinSequenceAnalysisPackage,version9.1(DevereuxJetal.，1984)中得到的程序，例如BESTFIT禾口GAP程序，可用于測(cè)定兩個(gè)多核苷酸之間的％同一性和兩個(gè)多核苷酸序列之間的％同源性。BESTFIT使用Smith和Waterman的"局部同源性"算法(1981)，發(fā)現(xiàn)兩個(gè)序列之間近似性的單個(gè)最佳區(qū)域。測(cè)定序列之間同一性和/或近似性的其它程序也是本領(lǐng)域已知的，例如BLAST族程序(AltschulSFetal,1990，AltschulSFetal,1997，在www.ncbi.nlm.nih.gov網(wǎng)站上可從NCBI的首頁(yè)查找)禾nFASTA(PearsonWR，1990)。按照本發(fā)明所述的"變體"或"突變蛋白"，包括具有FGF-18序列的充分復(fù)制氨基酸序列的蛋白質(zhì)，例如具有與FGF-18基本相似活性的蛋白質(zhì)。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，任何這樣的變體或突變蛋白具有與FGF-18序列至少40%同一性或同源性，更佳為至少50%、至少60%、至少70%、至少80%，或最佳為至少90%同一性或同源性。可用于本發(fā)明的FGF-18的突變蛋白或其編碼核苷酸包括基本相符的有窮集合序列作為替代肽或多核苷酸，它們可由本領(lǐng)域技術(shù)人員按本說(shuō)明書的教導(dǎo)和指引，無(wú)需過(guò)多實(shí)驗(yàn)而常規(guī)地獲得。按照本發(fā)明所述的突變蛋白的優(yōu)先變化是稱作"保守"置換的變化。FGF-18多肽的氨基酸保守置換可包括組內(nèi)的同義氨基酸，它們具有足夠相似的理化性質(zhì)，該組成員之間的置換將保留分子的生物功能(Grantham,1974)。顯然，上面定義的序列中也可進(jìn)行插入和刪除，特別是如果插入或刪除僅涉及少量氨基酸，例如30個(gè)以下，更佳為10個(gè)以下，而不除去或替換掉對(duì)功能構(gòu)象關(guān)鍵的氨基酸如半胱氨酸殘基。這樣的刪除和/或插入產(chǎn)生的蛋白質(zhì)和突變蛋白落入本發(fā)明的范圍。優(yōu)選的是，同義氨基酸組是表A所限定的。更優(yōu)選的是，同義氨基酸組是表B所限定的。最優(yōu)選的是，同義氨基酸組是表C所限定的。表A優(yōu)選的同義氨基酸組氨基酸同義組SerSer'Thr'Gly，AsnArgArg,Gin,Lys，Glu,HisLeulie,Phe，Tyr，Met,Val,LeuProGly,Ala,Thr，ProThrPro,Ser，Ala,Gly，His,Gin,ThrAlaGly，Thr，Pro,AlaValMet,Tyr，Phe,lie,l_eu，ValGlyAla'Thr，Pro'Ser，GlylieMet,Tyr，Phe，Val,Leu，liePheTrp，Met,Tyr,lie'Val,Leu,PheTyrTrp,Met,Phe，lie,Val,Leu，TyrCysSer,Thr,CysHisGlu，Lys，Gln，Thr，Arg，HisGinGlu，Lys，Asn,His,Thr'Arg，GinAsnGin,Asp，Ser，AsnLysGlu，Gin,His,Arg，LysAspGlu，Asn，AspGluAsp，l_ys,Asn,Gin,His,Arg,GluMetPhe,lie,Val,Leu，MetTipTrp表B更優(yōu)選的同義氨基酸組氨基酸同義組SerSerArgHis,Lys，ArgLeul_eu,lie,Phe，MetProAla，ProThrThrAlaPro,AlaValVal'Met,IleGlyGlyIlelle，Met,Phe,Val,LeuPheMet,Tyr，lie,l_eu,PheTyrPhe，TyrCysCys,SerHisHis,Gln，ArgGinGlu,Gln，HisAsnAsp,AsnLysLys,ArgAspAsp,AsnGluGlu,GlnMetMet,Phe，lie,Val，LeuTrpTrp表C最優(yōu)選的同義氨基酸組氨基酸同義組SerSerArgArgl_eul_eu,lie,MetProProThrThrAlaAlaValValGlyGlylielie,Met,l_euPhePheTyrTyrCysCys，SsrHisHisGinGinAsnAsnLysLysAspAspGluGluMetMet,lie,l_euTrpMet可用于獲得本發(fā)明所用FGF-18突變蛋白的蛋白質(zhì)中產(chǎn)生氨基酸置換的例子包括任何已知的方法步驟，例如以下美國(guó)專利所提出的授予Mark等的No.4,959,314、4，588，585和4,737,462;授予Koths等的No.5,116,943;授予Namen等的No.4,965,195;授予Chong等的No.4，879,111;和授予Lee等的No.5,017,691;以及美國(guó)專利No.4，904，584(Shaw等)中的賴氨酸取代蛋白。FGF-18化合物的制劑和給藥FGF-18化合物可配制成藥物組合物，即與藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑等一起配制。"藥學(xué)上可接受的"定義為包括如何載體，它們不干擾活性成分生物活性的有效性，并且對(duì)接受給藥的宿主無(wú)毒性。例如，對(duì)于胃腸外給藥，活性蛋白可在鹽水、葡萄糖溶液、血清白蛋白和Ringer's液中配制成單位劑型。這樣的FGF-18化合物的制劑還包括至少一種藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑等，在本說(shuō)明書中稱作"FGF-18組合物"。FGF-18化合物和組合物可直接注射到關(guān)節(jié)的滑膜液中，或直接注射到缺損處，可單獨(dú)使用或與用于延長(zhǎng)蛋白質(zhì)釋放的合適載體(例如合適的緩釋制劑用賦形劑，如環(huán)糊精)或局部限制性釋放的載體(例如通過(guò)生物相容性海綿、類似的生物基質(zhì)、包被細(xì)胞等遞送藥物)混合后使用。靜脈(IA)施用的制劑應(yīng)符合也適用于其它注射制劑的大多數(shù)要求，即它們需滅菌和適合于注射部位(如膝關(guān)節(jié)，SF)的生理?xiàng)l件。溶液劑的滅菌可用高壓滅菌法(如果制劑的所有成分足以耐受熱應(yīng)力)或過(guò)濾除菌法達(dá)到，而對(duì)于其它制劑，為確保得到無(wú)菌產(chǎn)品所需用的制備方法可以是更復(fù)合型的。例如，對(duì)于含顆粒的制劑(混懸劑)、半固體或固體制劑不能實(shí)行過(guò)濾除菌。為了使制劑適合于注射部位的生理?xiàng)l件，必須考慮SF的特征。為此，合適的本發(fā)明制劑是等滲的。制劑的pH接近SF的pH(即pH7.4)或略低，但較適宜的是不低于pH5.5，以使化學(xué)成分達(dá)到最適穩(wěn)定性，而非生理pH值可能產(chǎn)生的副作用如激活蛋白水解酶(如組織蛋白酶)則降到最小。用于IA注射的賦形劑也可存在于其它注射制劑(如肌肉或皮下用制劑)中。1本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，此處描述的FGF-18的給藥方式選自如下組耳內(nèi)給藥、耳廓周給藥、鼻內(nèi)給藥、鼻周給藥、鼻竇內(nèi)給藥、肋內(nèi)給藥、肋周給藥、胸廓內(nèi)給藥、胸廓周給藥、硬膜外給藥、椎骨周給藥、滑膜周給藥、滑膜腔內(nèi)給藥、鼻竇內(nèi)給藥、關(guān)節(jié)周圍給藥和關(guān)節(jié)內(nèi)給藥。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，此處描述的FGF-18化合物采用關(guān)節(jié)周圍(環(huán)繞關(guān)節(jié)給藥)或關(guān)節(jié)內(nèi)(在關(guān)節(jié)內(nèi)給藥)給藥。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)節(jié)周圍和關(guān)節(jié)內(nèi)給藥是在選自髖關(guān)節(jié)、膝關(guān)節(jié)、肘關(guān)節(jié)、腕關(guān)節(jié)、踝關(guān)節(jié)、脊柱、足關(guān)節(jié)、指關(guān)節(jié)、趾關(guān)節(jié)、手關(guān)節(jié)、肩關(guān)節(jié)、肋關(guān)節(jié)、肩胛骨、股、脛骨、足跟和沿脊柱的棘突處的關(guān)節(jié)中進(jìn)行。在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，關(guān)節(jié)周圍和關(guān)節(jié)內(nèi)給藥是在髖關(guān)節(jié)或膝關(guān)節(jié)周圍或關(guān)節(jié)內(nèi)進(jìn)行。軟骨障礙本發(fā)明涉及治療、預(yù)防或改善哺乳動(dòng)物軟骨障礙的方法。較佳的是，這樣的軟骨障礙來(lái)源于跌打損傷或軟骨病的損傷。可以理解，人以按本發(fā)明進(jìn)行治療的患者為宜。然而，可以理解，其它哺乳動(dòng)物(包括但不限于狗、馬等)可用本發(fā)明的方法進(jìn)行治療?？捎帽菊f(shuō)明書所述方法治療、預(yù)防或改善的軟骨障礙包括但不限于關(guān)節(jié)炎、骨軟骨炎、肋軟骨炎(如痛性非化膿性肋軟骨腫脹(Tietze's綜合征))、骨髓炎、多軟骨炎、復(fù)發(fā)性多軟骨炎和剝脫性骨軟骨炎。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所治療、預(yù)防或改善的軟骨障礙是關(guān)節(jié)炎。較佳為，所述疾病選自強(qiáng)直性脊柱炎、彌漫性特發(fā)性骨肥厚(DISH)、痛風(fēng)、假痛風(fēng)、感染性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、牛皮癬性關(guān)節(jié)炎、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎、硬皮病、Sj6gren's綜合征和Still's病。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所治療、預(yù)防或改善的軟骨障礙是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎或骨關(guān)節(jié)炎。在一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，所治療、預(yù)防或改善的軟骨障礙是骨關(guān)節(jié)炎。關(guān)節(jié)炎涉及身體的關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)(關(guān)節(jié))的損傷和相應(yīng)的炎癥過(guò)程。關(guān)節(jié)炎包括骨關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、作為損傷結(jié)果的關(guān)節(jié)炎性關(guān)節(jié)，等等，是常見的炎癥，它們受益于本發(fā)明的FGF-18的治療用途。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所治療、預(yù)防或改善的軟骨障礙是強(qiáng)直性脊柱炎。強(qiáng)直性脊柱炎(AS)是累及脊柱的關(guān)節(jié)炎。它引起背部疼痛和僵直及彎曲，這是脊柱關(guān)節(jié)(椎骨)進(jìn)行性腫脹和刺激的結(jié)果。在重癥患者，椎骨的炎癥最終可導(dǎo)致融合，引起嚴(yán)重的活動(dòng)受限。連接關(guān)節(jié)并對(duì)關(guān)節(jié)提供支撐的腱和韌帶發(fā)生的炎癥，可導(dǎo)致肋骨、肩胛骨、髖骨、股骨、脛骨、足跟和沿脊柱的棘突的疼痛和壓痛。強(qiáng)直性脊柱炎是一種慢性炎癥性關(guān)節(jié)炎，它影響脊柱關(guān)節(jié)。AS的標(biāo)志特征是累及脊柱底部(脊柱在該處連接骨盆)的關(guān)節(jié)一骶髂(Sl)關(guān)節(jié)。病程是有極大變化的，有些個(gè)體僅偶發(fā)短暫的背部疼痛，其它個(gè)體可有較慢性的嚴(yán)重背部疼痛，隨著時(shí)間的推移導(dǎo)致不同程度的脊柱僵直。在幾乎所有病例上，該病的特征是急性疼痛發(fā)作和緩解(問(wèn)題解決的周期)。歷年來(lái)，AS被用很多名稱稱呼，包括變形性脊柱炎、類風(fēng)濕性脊椎炎和馬一施二氏脊椎炎。自從70年代初以來(lái)，隨著關(guān)于此病知識(shí)的增多，有了一個(gè)幾乎普遍應(yīng)用的術(shù)語(yǔ)一強(qiáng)直性脊柱炎。AS是攻擊脊柱的一族疾病中的一員。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所治療、預(yù)防或改善的軟骨障礙是彌漫性特發(fā)性骨肥厚。彌漫性特發(fā)性骨肥厚(DISH)的特征是沿脊柱的椎骨側(cè)面有過(guò)度的骨生長(zhǎng)。它還涉及腱和韌帶連接骨的地方(例如肘部、膝部和腳后跟)發(fā)生炎癥和骨生長(zhǎng)。罹患DISH的人中常有骨刺。DISH(有時(shí)稱作Forestier's病)被認(rèn)為是一種退行性關(guān)節(jié)炎，其特征為沿脊柱的椎骨側(cè)面有過(guò)度的骨生長(zhǎng)。它還涉及在腱和韌帶連接骨的身體的其它區(qū)域(例如肘部、膝部和腳后跟)發(fā)生炎癥和鈣化(骨生長(zhǎng))。這些炎癥和骨生長(zhǎng)可引起骨刺，例如腳后跟馬刺在DISH人群中是常見的。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所治療、預(yù)防或改善的軟骨障礙是痛風(fēng)。痛風(fēng)是一類關(guān)節(jié)炎，該病中尿酸(一種天然存在于體內(nèi)的廢物)升高超過(guò)正常水平。它不像通常那樣通過(guò)尿液從腎臟清除，而是形成結(jié)晶沉積在關(guān)節(jié)中。這些沉積物引起關(guān)節(jié)炎癥，產(chǎn)生疼痛、腫脹、發(fā)紅和觸痛。最典型的受累關(guān)節(jié)為大趾，但是痛風(fēng)還可影響踝、膝、足、手、腕和肘。尿酸結(jié)晶還可在其它區(qū)域如皮膚下或其它軟組織以及腎臟或尿路中形成沉積。痛風(fēng)典型地影響大趾根部的關(guān)節(jié)。在超過(guò)半數(shù)的最初發(fā)作中，這是第一個(gè)受累的關(guān)節(jié)。幾乎任何其它關(guān)節(jié)均可累及，但更常見下肢的關(guān)節(jié)比上肢關(guān)節(jié)受累。大多數(shù)痛風(fēng)的最初發(fā)作僅涉及一個(gè)關(guān)節(jié)，在治療過(guò)程中三至十天內(nèi)消退。過(guò)半數(shù)痛風(fēng)急性發(fā)作的人年內(nèi)會(huì)復(fù)發(fā)。隨著時(shí)間的推移，發(fā)作可能變得更頻繁，持續(xù)時(shí)間更長(zhǎng)，經(jīng)常累及多個(gè)關(guān)節(jié)。對(duì)于一些發(fā)作拖延的人來(lái)說(shuō)，疾病變成慢性的。沉積在關(guān)節(jié)內(nèi)和周圍軟組織的尿酸結(jié)晶導(dǎo)致關(guān)節(jié)內(nèi)破壞性改變，產(chǎn)生持續(xù)的炎癥。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所治療、預(yù)防或改善的軟骨障礙是假痛風(fēng)。假痛風(fēng)是體內(nèi)鈣積累引起的一類關(guān)節(jié)炎。假痛風(fēng)起因于關(guān)節(jié)內(nèi)鈣結(jié)晶(焦磷酸鈣二水合物)的積累。鈣形成結(jié)晶沉積在骨間的關(guān)節(jié)內(nèi)，產(chǎn)生該區(qū)域的疼痛。鈣沉積和慢性炎癥可引起部分關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)變?nèi)鹾蛽p壞。假痛風(fēng)軟骨中可能開始破裂和產(chǎn)生空穴，在關(guān)節(jié)中產(chǎn)生更多的疼痛和腫脹。隨著時(shí)間的推移，軟骨可能完全磨損，骨頭發(fā)生摩擦。作為軟骨損傷的結(jié)果，假痛風(fēng)的很多疼痛是幫助關(guān)節(jié)活動(dòng)的肌肉和其它組織(如腱和韌帶)被迫以非計(jì)劃的方式作功造成的結(jié)果。軟骨本身沒(méi)有神經(jīng)細(xì)胞，因此不能感覺(jué)疼痛，但是肌肉、腱、韌帶和骨會(huì)感覺(jué)疼痛。軟骨侵蝕多年后，骨頭實(shí)際上在一起摩擦。骨對(duì)骨的這種摩擦進(jìn)一步加劇疼痛。骨還可增厚和形成腫塊，稱作馬刺或骨贅，它們?cè)谝黄鹉Σ?。象痛風(fēng)病一樣，假痛風(fēng)可在一個(gè)關(guān)節(jié)內(nèi)突然發(fā)生、反復(fù)發(fā)作疼痛和腫脹。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所治療、預(yù)防或改善的軟骨障礙是感染性關(guān)節(jié)炎。感染性關(guān)節(jié)炎引起關(guān)節(jié)疼痛和腫脹。炎癥由微生物引起，微生物可以是細(xì)菌、病毒或真菌。通常只有一個(gè)關(guān)節(jié)受累，但有時(shí)可有兩個(gè)或三個(gè)關(guān)節(jié)受累。如果早期治療，通常并不長(zhǎng)時(shí)間持續(xù)下去。感染性關(guān)節(jié)炎最多感染大關(guān)節(jié)(肩、髖、膝)，但較小的關(guān)節(jié)(手指、踝關(guān)節(jié))也可累及。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所治療、預(yù)防或改善的軟骨障礙是骨關(guān)節(jié)炎。骨關(guān)節(jié)炎是關(guān)節(jié)炎的最常見形式，可由軟骨毀壞引起。軟骨受打擊可折斷，引起骨頭之間的關(guān)節(jié)疼痛和腫脹。隨著時(shí)間的推移，軟骨會(huì)完全磨損，骨頭會(huì)相互摩擦。骨關(guān)節(jié)炎可影響任何關(guān)節(jié)，但通常涉及手和承重關(guān)節(jié)如髖關(guān)節(jié)、膝關(guān)節(jié)、足和脊柱。骨關(guān)節(jié)炎(OA)的病狀是復(fù)雜的、多因子的進(jìn)行性疾病，它本質(zhì)上是非炎性的，以全身性關(guān)節(jié)內(nèi)與年齡相關(guān)的關(guān)節(jié)軟骨退化為特征。OA還有的特征是軟骨細(xì)胞激活導(dǎo)致細(xì)胞增殖和細(xì)胞凋亡、蛋白酶表達(dá)和異常基質(zhì)生成，衰退的軟骨修復(fù)導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)的缺失、基質(zhì)鈣化和軟骨細(xì)胞生成。軟骨和細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)構(gòu)的退化導(dǎo)致骨頭和受累關(guān)節(jié)的神經(jīng)之間的摩擦增加。OA使受此病折磨的人們產(chǎn)生各種程度的疼痛和進(jìn)行性無(wú)力。目前對(duì)于OA的治療是姑息治療或外科治療。在健康關(guān)節(jié)，當(dāng)重力加到該關(guān)節(jié)上時(shí)軟骨起減震器作用。軟骨的光滑面使骨骼平滑地運(yùn)動(dòng)。當(dāng)關(guān)節(jié)形成骨關(guān)節(jié)炎時(shí)，軟骨逐漸變粗糙變薄，下面的骨骼變厚。雖然疾病的早期通常沒(méi)有腫脹，但隨著關(guān)節(jié)炎的進(jìn)展，可能會(huì)有炎癥。少量軟骨可能折斷，漂浮在關(guān)節(jié)內(nèi)，這擾亂了關(guān)節(jié)內(nèi)其它軟組織，可引起骨骼間疼痛和腫脹。隨著時(shí)間的推移，軟骨磨損，骨骼可在其端部形成腫塊。這些腫塊稱作馬刺。或者，軟骨可完全磨損，骨骼可直接相互接觸。OA可引起其它問(wèn)題，例如固定關(guān)節(jié)的肌肉廢用性減弱，隨著時(shí)間的推移，關(guān)節(jié)形狀松弛，一點(diǎn)也不能工作。OA通常影響承重關(guān)節(jié)，如髖、膝、足和脊柱。但也可累及如指關(guān)節(jié)和拇指根部關(guān)節(jié)等非承重關(guān)節(jié)。它通常不影響其它關(guān)節(jié)，除非當(dāng)它們受傷或處于異常應(yīng)力下。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所治療、預(yù)防或改善的軟骨障礙是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)是一種慢性自身免疫性炎癥疾病，主要累及多關(guān)節(jié)滑液膜，結(jié)果是關(guān)節(jié)軟骨損傷。發(fā)病機(jī)理是T淋巴細(xì)胞依賴，伴有類風(fēng)濕因子、針對(duì)自身IgG的自身抗體的產(chǎn)生，其結(jié)果是關(guān)節(jié)液和血液中免疫復(fù)合物的形成達(dá)到高水平。關(guān)節(jié)中的這些復(fù)合物可引起淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞顯著地浸潤(rùn)到滑膜中，然后發(fā)生顯著的滑液變化；加入各種中性白細(xì)胞使關(guān)節(jié)腔/關(guān)節(jié)液被類似的細(xì)胞浸潤(rùn)。受累組織主要是關(guān)節(jié)，并常常呈對(duì)稱型。炎癥細(xì)胞釋放的酶可消化骨骼和軟骨。作為類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的結(jié)果，發(fā)炎的關(guān)節(jié)村里(滑膜)可侵襲和損害骨骼和軟骨，導(dǎo)致關(guān)節(jié)損壞、嚴(yán)重疼痛及其它生理效應(yīng)。受侵襲的關(guān)節(jié)可失去其形狀和排列，引起疼痛和運(yùn)動(dòng)能力喪失。因此，ra可導(dǎo)致嚴(yán)重殘疾和提高死亡率。關(guān)節(jié)損傷甚至可出現(xiàn)于疼痛不嚴(yán)重的情況，甚至在疾病早期即可發(fā)生。很多罹患ra的人發(fā)病2年內(nèi)在手、足x-線片上可見損傷。但是在x-線片發(fā)現(xiàn)問(wèn)題時(shí)才治療可能已經(jīng)為時(shí)太遲。嚴(yán)重的損傷可導(dǎo)致永久性關(guān)節(jié)變形和殘疾。疼痛和腫脹可引起行走困難。類風(fēng)濕癥的關(guān)節(jié)中局部產(chǎn)生各種細(xì)胞因子。很多研究證明，兩種原型致炎細(xì)胞因子il-1和tnf-a在與滑膜炎癥和進(jìn)行性關(guān)節(jié)損壞有關(guān)的機(jī)理中起著主要的作用。確實(shí)，給ra患者投用tnf-a和il-1抑制劑可產(chǎn)生引人注目的炎癥臨床和生理學(xué)體征的改善及骨骼侵蝕和軟骨損毀的放射學(xué)體征縮減。但是，盡管有這些令人鼓舞的結(jié)果，還有相當(dāng)百分比的患者對(duì)這兩種物質(zhì)不起反應(yīng)，提示關(guān)節(jié)炎的病理生理學(xué)中還涉及其它介質(zhì)。區(qū)別ra和其它類型關(guān)節(jié)炎的一個(gè)重要方法是根據(jù)受累關(guān)節(jié)的型式。例如，ra影響腕和很多手關(guān)節(jié)，但通常不影響最遠(yuǎn)端的關(guān)節(jié)。ra中，關(guān)節(jié)有對(duì)稱型受累的傾向，即如果右手的指關(guān)節(jié)發(fā)炎，左手的指關(guān)節(jié)也可能發(fā)炎。ra累及的其它關(guān)節(jié)通常是肘、肩、頸、顎、足、踝、膝和髖關(guān)節(jié)。除了頸部外，脊柱通常不直接受累于ra。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所治療、預(yù)防或改善的軟骨障礙是牛皮癬關(guān)節(jié)炎。牛皮癬關(guān)節(jié)炎是在關(guān)節(jié)內(nèi)和關(guān)節(jié)周圍產(chǎn)生腫脹和疼痛的一種病狀。它也在皮膚上引起鱗狀皮疹。它可影響很多關(guān)節(jié)，包括指、腕、膝、踝、肘和肩關(guān)節(jié)、脊柱和下背關(guān)節(jié)(稱作骶髂關(guān)節(jié))。牛皮癬關(guān)節(jié)炎也影響關(guān)節(jié)周圍組織，包括腱和韌帶。它可引起整個(gè)指頭腫脹，稱作"臘腸"指或趾。還有皮膚炎癥，特別是在肘部、膝部和頭皮上。牛皮癬關(guān)節(jié)炎與牛皮癬相關(guān)聯(lián)，牛皮癬是引起皮膚發(fā)炎和覆蓋銀色或灰色鱗屑的一種疾病。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所治療、預(yù)防或改善的軟骨障礙是反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎。反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎涉及由以前的感染引起的關(guān)節(jié)疼痛、強(qiáng)直或腫脹。它最常見于下肢關(guān)節(jié)(膝、踝、趾)，但也可出現(xiàn)在上肢。問(wèn)題可能僅僅在關(guān)節(jié)或涉及其它的身體系統(tǒng)，如眼睛、皮膚、肌肉或腱。當(dāng)它侵襲關(guān)節(jié)外的區(qū)域時(shí)，反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎稱作Reiter's綜合征。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所治療、預(yù)防或改善的軟骨障礙是硬皮病。硬皮病是一種皮膚增厚和變硬的病癥。硬皮病有兩種類型。一種是局限性硬皮病，主要侵襲皮膚，也可累及肌肉和關(guān)節(jié)。另一種是全身性硬皮病，侵襲皮膚和內(nèi)臟器官，如心臟、肺和腎臟。硬皮病的最大特征是皮膚中積累硬疤痕樣纖維組織。較不明顯的變化包括小血管壁細(xì)胞系的損傷，進(jìn)而可損傷主要臟器。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所治療、預(yù)防或改善的軟骨障礙是Sj6gren's綜合征。Sj6gren's綜合征是對(duì)唾液腺產(chǎn)生損傷引起口干、對(duì)淚腺產(chǎn)生損傷引起干眼癥的一種慢性疾病。它還可侵襲身體其它部位，包括關(guān)節(jié)、肌肉和神經(jīng)、諸如肺、腎、肝、胰、胃和腦等器官、諸如甲狀腺等腺體。Sj6gren's綜合征可引起這些區(qū)域的任何一個(gè)完全破壞。因?yàn)镾jogren's綜合征可影響肝臟和胰臟，所以有較大機(jī)會(huì)發(fā)生淋巴組織癌癥。但是，這是非尋常的罕見結(jié)果。Sj6gren's綜合征可以兩種方式存在。當(dāng)它出現(xiàn)于患風(fēng)濕癥或結(jié)締組織疾病如狼瘡、硬皮病或多發(fā)性肌炎的人中時(shí)，是"繼發(fā)性"Sj6gren's綜合征。當(dāng)干眼癥和口干不伴有風(fēng)濕癥時(shí)，它稱作"原發(fā)性"Sj6gren's綜合征。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所治療、預(yù)防或改善的軟骨障礙是Still's病。Still's病是一種以高峰形熱、鮭魚色皮疹和關(guān)節(jié)炎癥為特征的關(guān)節(jié)炎。該病最常見于兒童，常涉及全身特發(fā)性幼稚型關(guān)節(jié)炎。Still's病也可見于成人，雖然不及兒童那樣常見。這種情況稱作成年發(fā)病的Still's病或AOSD。正如上面所討論的，此處描述的所治療、預(yù)防或改善的軟骨障礙包括剝脫性軟骨炎、肋軟骨炎(如痛性非化膿性肋軟骨腫脹)、骨髓炎和復(fù)發(fā)性多軟骨炎。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所治療、預(yù)防或改善的軟骨障礙是剝脫性骨軟骨炎。剝脫性骨軟骨炎(OCD)是關(guān)于骨軟骨骨折的一個(gè)術(shù)語(yǔ)。骨軟骨碎片可存在于原處、不完全分離或完全分離。OCD是限于關(guān)節(jié)骺的一種骨軟骨病。關(guān)節(jié)衝因壓縮而衰退，其病理學(xué)可能涉及創(chuàng)傷和局部缺血。創(chuàng)傷最可能是原發(fā)性損傷，而局部缺血?jiǎng)t為繼發(fā)性損傷。創(chuàng)傷可由直接創(chuàng)傷如嵌入骨折或反復(fù)微創(chuàng)傷如超常壓應(yīng)力引起。膝關(guān)節(jié)是最常受累的部位，而肘關(guān)節(jié)、踝關(guān)節(jié)、跗舟骨、髖關(guān)節(jié)、肩關(guān)節(jié)、關(guān)節(jié)盂、腕關(guān)節(jié)也可受累。OCD傾向于影響年輕患者。肘關(guān)節(jié)OCD中，患者年齡平均23歲(4一47歲)。踝關(guān)節(jié)OCD中，患者年齡平均20歲(8—50歲)。髖關(guān)節(jié)OCD中，患者年齡平均24歲(14—39歲)?；颊叱ＴV在運(yùn)動(dòng)范圍極端有疼痛。通常有關(guān)節(jié)周圍水腫及觸診時(shí)發(fā)熱感。當(dāng)下肢受累時(shí)，患者常有跛行。關(guān)節(jié)保護(hù)性制動(dòng)通?？筛纳瓢Y狀。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所治療、預(yù)防或改善的軟骨障礙是肋軟骨炎。肋軟骨炎是上肋與將其固定于胸骨(breastbone或sternum)的軟骨之間的結(jié)點(diǎn)的炎癥，原因未明。當(dāng)肋軟骨炎的疼痛伴有腫脹時(shí)，稱作Tietze's綜合征。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所治療、預(yù)防或改善的軟骨障礙是骨髓炎。骨髓炎是一種繼發(fā)于化膿菌感染的骨及其結(jié)構(gòu)的急性或慢性炎癥性過(guò)程。骨髓炎伴有的感染可局限化或可播散到整個(gè)骨膜、皮質(zhì)、髓質(zhì)和網(wǎng)狀骨質(zhì)組織。細(xì)菌性病原體因患者年齡和感染機(jī)理而異。血源性骨髓炎是由細(xì)菌從血液播散所致的感染。急性血源性骨髓炎以細(xì)菌從遠(yuǎn)距離起源在骨內(nèi)播散所致的骨骼急性感染為特征。此病主要發(fā)生于兒童。最常見部位為快速生長(zhǎng)和血管高度變態(tài)的成長(zhǎng)中的骨骼。當(dāng)血管在遠(yuǎn)側(cè)干骺端形成銳角時(shí)，血流明顯緩慢或沉積，使血管易形成血栓，骨骼本身局部壞死和細(xì)菌播散。急性血源性骨髓炎(盡管名稱如此)可有慢性臨床發(fā)展和起病隱襲。直接或鄰接接種的骨髓炎由創(chuàng)傷或外科手術(shù)時(shí)組織與細(xì)菌直接接觸所引起。直接接種(鄰接病灶)骨髓炎繼發(fā)于生物體從直接創(chuàng)傷處的接種、從鄰接感染灶的播散、或外科手術(shù)后的敗血癥。直接接種骨髓炎的臨床表現(xiàn)比血源性骨髓炎較為局限化，易涉及多種生物體。另外的種類包括慢性骨髓炎和繼發(fā)于外周血管疾病的骨髓炎。不管慢性骨髓炎的起始病因和/或機(jī)理，不管有無(wú)強(qiáng)力干預(yù)，它都是持續(xù)和復(fù)發(fā)性的。外周血管疾病雖然列為起始原因，但它實(shí)際上是一種易感因子而不是感染的真正原因。使病人易罹患骨髓炎的疾病狀態(tài)包括糖尿病、鐮狀紅細(xì)胞病、獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)、靜脈內(nèi)藥物濫用、酒精中毒、長(zhǎng)期使用類固醇、免疫抑制、慢性關(guān)節(jié)疾病。此外，修復(fù)術(shù)矯形外科裝置是一種獨(dú)立的危險(xiǎn)因子，近期的矯形外科手術(shù)或開放性骨折也是如此。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所治療、預(yù)防或改善的軟骨障礙是復(fù)發(fā)性多發(fā)軟骨炎。復(fù)發(fā)性多發(fā)軟骨炎(RP)是累及軟骨結(jié)構(gòu)的罕見和嚴(yán)重的發(fā)作性炎癥，主要累及耳、鼻和喉氣管支氣管樹狀結(jié)構(gòu)。其它受累結(jié)構(gòu)可包括眼睛、心血管系統(tǒng)、末梢關(guān)節(jié)、中耳和內(nèi)耳。該病的病因?qū)W未知，但發(fā)病機(jī)理性質(zhì)上很象是自身免疫問(wèn)題。自身免疫病因?qū)W的證據(jù)包括其臨床表現(xiàn)與其它自身免疫性疾病相關(guān)、其與HLA-DR4單倍體的關(guān)聯(lián)、受累軟骨中侵潤(rùn)C(jī)D4T細(xì)胞和抗原抗體復(fù)合物的病理學(xué)發(fā)現(xiàn)、對(duì)膠原II型和其它膠原抗原的細(xì)胞和體液應(yīng)答、以及觀察到免疫抑制治療方案通常最佳抑制該病。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所治療、預(yù)防或改善的軟骨障礙是創(chuàng)傷所致的軟骨損傷。軟骨損傷可作為創(chuàng)傷性機(jī)械破壞的結(jié)果而出現(xiàn)。直接打擊或其它創(chuàng)傷可損傷軟骨。軟骨無(wú)直接的血液供應(yīng)，因此幾乎不能自身修復(fù)。本發(fā)明的方法增進(jìn)軟骨修復(fù)，在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，創(chuàng)傷引起的軟骨損傷起因于意外事件或手術(shù)。在本發(fā)明的一個(gè)特別實(shí)施方案中，創(chuàng)傷引起的軟骨損傷起因于手術(shù)，特別是矯形外科或整形外科手術(shù)。本發(fā)明還考慮到與運(yùn)動(dòng)相關(guān)的損傷或與運(yùn)動(dòng)相關(guān)的關(guān)節(jié)組織磨損的治療。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所治療、預(yù)防或改善的軟骨障礙是非美容性外表疾病。在這樣的實(shí)施方案中，可使用與整形外科相關(guān)聯(lián)的本發(fā)明的方法和用途。在完全描述本發(fā)明后，本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)理解，本發(fā)明方法可在很寬的等效參數(shù)、濃度和條件的范圍內(nèi)進(jìn)行而不背離本發(fā)明的精神和范圍，而且無(wú)需進(jìn)行過(guò)多的實(shí)驗(yàn)。已結(jié)合具體實(shí)施方案對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了描述，可以理解可對(duì)其作更多的修改。本申請(qǐng)旨在覆蓋大體上按照本發(fā)明的原則及包括偏離本發(fā)明所披露內(nèi)容而如本發(fā)明所屬領(lǐng)域內(nèi)已知或常規(guī)實(shí)踐及可適合如下所附權(quán)利要求范圍所闡述的上文所述必要特征，對(duì)本發(fā)明所作的任何變更、使用或適應(yīng)作用。本說(shuō)明書所引用的所有文獻(xiàn)，包括期刊文章或摘要、公開或未公開的美國(guó)或外國(guó)專利申請(qǐng)、已公告的美國(guó)或外國(guó)專利或任何其它文獻(xiàn)，均完整地引入本說(shuō)明書作為參考，包括引用文獻(xiàn)中提供的所有數(shù)據(jù)、表格、附圖和正文。而且，本說(shuō)明書所引用文獻(xiàn)中引用的文獻(xiàn)其全部?jī)?nèi)容也完整地引為參考。總之，參考已知方法步驟、常規(guī)方法步驟、已知或常規(guī)的方法，并不是承認(rèn)本發(fā)明的任何方面、任何描述或?qū)嵤┓桨冈谙嚓P(guān)領(lǐng)域中已被披露、教導(dǎo)或提示。具體實(shí)施方案的上述描述將完全揭示本發(fā)明的一般性質(zhì)，他人可應(yīng)用本領(lǐng)域知識(shí)(包括本說(shuō)明書所引用文獻(xiàn)的內(nèi)容)無(wú)需更多的實(shí)驗(yàn)便容易地變更和/或使這些具體實(shí)施方案適用于各種應(yīng)用，而不會(huì)背離本發(fā)明的總概念。因此，這些適用和變更意味著落在基于本說(shuō)明書教導(dǎo)和指引的所揭示實(shí)施方案的等同意義和范圍中。應(yīng)理解的是，本說(shuō)明書的措辭和術(shù)語(yǔ)是為了描述而非限制的目的，以致于本說(shuō)明書的術(shù)語(yǔ)或措辭是根據(jù)本發(fā)明的教導(dǎo)和指引結(jié)合本領(lǐng)域技術(shù)人員的知識(shí)由本領(lǐng)域技術(shù)人員進(jìn)行解釋的。實(shí)施例1:動(dòng)物的疾病模型和長(zhǎng)期藥理學(xué)在不同的OA和受損軟骨疾病模型上，測(cè)試了FGF-18(170AA)使用關(guān)節(jié)內(nèi)(i.a.)給藥的顯著體內(nèi)治療效應(yīng)。在不同種類(大鼠、狗)上可證實(shí)治療總有效劑量為3—40pg勵(lì)物/周(i.a.)。從上述動(dòng)物疾病模型(OA和軟骨缺損)上得到的結(jié)果總結(jié)如下表1:FGF-18(170AA)的藥理學(xué)研究摘要信息<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>表2:FGF-18(170AA)的藥理學(xué)研究摘要信息(續(xù))<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>(i)單次劑量，(ii)每周一次(每次注射為總劑量的1/3)共3周，或(iii)每周3次，注射3周(每次注射為總劑量的1/9)，改善組織病理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)*增加總體形態(tài)學(xué)修復(fù)得分，由于所用動(dòng)物數(shù)少，未得到明顯的劑量反應(yīng)關(guān)系，在所有使用的劑量均表明有效應(yīng)，在10和30悶/狗(i.a.)有更顯著的效應(yīng)<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>下面詳細(xì)討論實(shí)施例1.1:大鼠半月板撕裂OA模型方法雄性Lewis大鼠(5—10只溜)經(jīng)手術(shù)引起右膝關(guān)節(jié)半月板撕裂。手術(shù)后19—21天開始經(jīng)i.a.途徑給予0.3、1、3或1(Vg劑量(以鹽水配制)，測(cè)定與給藥方案相關(guān)的藥效學(xué)效應(yīng)。這些總劑量作為(i)單次劑量、(ii)每周一次(每次注射為總劑量的1/3)共3周，或(iii)每周3次，注射3周(每次注射為總劑量的1/9)。在治療結(jié)束時(shí)或治療后3周后，收集右膝作潛在效應(yīng)的組織病理學(xué)評(píng)估。損傷評(píng)估在3個(gè)不同的區(qū)帶進(jìn)行每個(gè)剖面分3個(gè)區(qū)帶(1-外側(cè)、2-中部、3-內(nèi)側(cè))，計(jì)及跨脛骨內(nèi)側(cè)坪的區(qū)域差異。在OA手術(shù)模型中，外側(cè)(z1)和中部(z2)兩個(gè)三分之一通常受累最嚴(yán)重，內(nèi)側(cè)三分之一(z3)存在輕度變化。治療程序表概要手術(shù)治療開始后治療或終止終止丄疾病誘導(dǎo)期1治療期i后治療期(任意)丄3周3周3周'治療選項(xiàng)-1次治療僅第1周-3次治療每周一次-9次治療每周3次(每周劑量保持恒定)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)動(dòng)物(5—10只/組)，2—3只/籠，用異氟垸麻醉，準(zhǔn)備右膝手術(shù)區(qū)域。在膝內(nèi)側(cè)切開皮膚，鈍性剝離暴露內(nèi)側(cè)副韌帶，然后橫斷。切斷內(nèi)側(cè)半月板整個(gè)厚度以模擬完全撕裂。以4-0Vicryl縫線用表皮下縫合方式閉合皮膚和皮下組織。手術(shù)后19-21天經(jīng)關(guān)節(jié)內(nèi)途徑給藥，單次劑量后停止給藥，或持續(xù)3周關(guān)節(jié)內(nèi)注射，每周一次或每周3次。然后將大鼠處死(第1-16組)或使其恢復(fù)，再過(guò)3周后處死(第17-32組)。在尸檢前4小時(shí)，所有大鼠給以50mg/kgBRDU以標(biāo)記增殖活潑的細(xì)胞。在即將尸檢前采血制成血清，并進(jìn)行右膝滑液灌洗。尸檢時(shí)，將右(手術(shù)的)膝關(guān)節(jié)修剪去肌肉和結(jié)締組織，收集到10%中性緩沖福爾馬林中。除去髕骨使關(guān)節(jié)完全固定。將氣管、胸骨和耳朵樣本也置于福爾馬林中。手術(shù)后6周時(shí)評(píng)估的結(jié)果未治療的對(duì)照組(手術(shù)后6周時(shí)評(píng)估)有半月板撕裂的未治療動(dòng)物在手術(shù)后6周時(shí)處死，發(fā)現(xiàn)脛骨軟骨退化，在脛骨評(píng)外側(cè)2/3處最嚴(yán)重，內(nèi)側(cè)1/3較不嚴(yán)重。骨贅大(平均468nm)。股軟骨退化較輕，比脛骨退化變數(shù)更大。用鹽水每周處理一次的動(dòng)物與未處理動(dòng)物相比，3區(qū)脛骨軟骨退化總分明顯較低(16%)，深度比明顯較低(16%)，脛28骨外側(cè)存活軟骨的區(qū)域明顯較大(13%)。用鹽水每周處理3次的動(dòng)物脛骨2區(qū)軟骨退化評(píng)分明顯較低(24%),深度比明顯較低(13%)，在中間和外側(cè)脛骨中能存活的軟骨區(qū)域明顯較大(15%和14%)。對(duì)照組中的這些差異可能是反復(fù)麻醉影響動(dòng)物總體活性的結(jié)果，但是不能排除反復(fù)注射鹽水通過(guò)促進(jìn)介質(zhì)和碎屑去除而影響損傷嚴(yán)重程度的可能性。單次劑量治療(在手術(shù)后6周時(shí)評(píng)估)給予10兇FGF-18(170AA)的動(dòng)物由于3區(qū)粘蛋白缺失的增加而總的軟骨退化寬度明顯較大(16%)。給予10|agFGF-18(170AA)的動(dòng)物骨贅評(píng)分和測(cè)量值明顯增加(分別為19%和25%)。用10jig治療的動(dòng)物內(nèi)側(cè)脛骨中能存活軟骨基質(zhì)的區(qū)域明顯增加27%。免疫染色揭示了溴脫氧尿甘(BRDU)在軟骨損傷下的纖維變性骨髓中及骨髓細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和骨贅軟骨中的免疫活動(dòng)性，在鹽水和FGF-18(170AA)處理的關(guān)節(jié)中染色模式相似。這些結(jié)果表明單次注射10兇FGF-18(170AA)具有明確的合成作用，正如由骨贅體積增大和內(nèi)側(cè)脛骨軟骨區(qū)域增大所證明的。但是，這些變化不足以改善所有軟骨退化的評(píng)分。內(nèi)側(cè)脛骨軟骨區(qū)域增大看來(lái)是靠近骨贅的承重表面上軟骨厚度增加的結(jié)果。每周一次治療3周(在手術(shù)后6周時(shí)評(píng)估)每周一次給予3ngFGF-18(170AA)治療的動(dòng)物與每周一次給予鹽水的對(duì)照組相比內(nèi)側(cè)脛骨2區(qū)中軟骨退化的打分明顯較低。給予10pgFGF-18(170AA)治療的動(dòng)物退化寬度的明顯降低有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(37%),給予3(ig或1兇的動(dòng)物也有一些抑制(分別為28%和15%)。骨贅打分和測(cè)量呈劑量反應(yīng)性，分別為10兇FGF-18(170AA)治療(32和53%)或3的FGF-18(170AA)治療(21和32%)。用1CVgFGF-18(170AA)治療在內(nèi)側(cè)脛骨中有活力的軟骨基質(zhì)區(qū)域明顯增大(27%)。注入10或3^g的關(guān)節(jié)內(nèi)明顯地有輕度至明顯的慢性活性滑液伴有纖維化，注入1pg的關(guān)節(jié)內(nèi)滑液極少。用3或1C^gFGF-18(170AA)治療的動(dòng)物在纖維化的骨髓、滑液和軟骨形成和骨贅區(qū)域中已RDU標(biāo)記比鹽水對(duì)照組增加。這些結(jié)果證明了用每周一次方式治療對(duì)顯著的軟骨退化寬度有劑量反應(yīng)性效應(yīng)。這一參數(shù)是缺損區(qū)域及內(nèi)側(cè)脛骨的軟骨區(qū)域存在某些類型有活力基質(zhì)的最好指示，證明有合成代謝反應(yīng)。BRDU標(biāo)記結(jié)果顯示停藥后有持續(xù)的增殖反應(yīng)。每周三次治療3周(在手術(shù)后6周時(shí)評(píng)估)每周三次注射1、3或10^gFGF-18(170AA)進(jìn)行治療，與每周三次注射鹽水相比，在1區(qū)(用10ng治療的動(dòng)物)、2區(qū)(1或3ng)和3區(qū)總量(1或3pg)脛骨軟骨退化的打分明顯降低。用10Mg治療明顯降低脛骨軟骨退化總寬度24%，用1或3兇治療分別降低脛骨軟骨退化總寬度24%和21%但統(tǒng)計(jì)學(xué)上不顯著，表明有某些有益效應(yīng)。用1或3pgFGF-18(170AA)治療的動(dòng)物比鹽水對(duì)照組也有明顯的深度比降低(分別為17%和18%)。用0.3、1、3或10昭FGF-18(170AA)治療后，內(nèi)側(cè)脛骨骨贅打分增加(分別為13%、7%、13%和15%)，而所有4個(gè)劑量(0.3、1、3或10|ugFGF-18(170AA))均明顯增加骨贅測(cè)量值(分別為12、18、60和62%)。用1C^g治療明顯增加股骨軟骨退化打分約114%。用3(60%)或10(88%)^tgFGF-18(170AA)治療，骨打分明顯增加。用3pgFGF-18(170AA)治療，除股骨之外的關(guān)節(jié)總分明顯地降低(13%)，但股骨加到關(guān)節(jié)總分中則消除了此變化。用1、3或10兇FGF-18(170AA)治療，明顯增加內(nèi)側(cè)脛骨中有活力軟骨區(qū)域(13%、29%和29%)，用3或10(^治療明顯增加外側(cè)脛骨中的有活力軟骨區(qū)域(22%和13%)。注入3或10ng的關(guān)節(jié)可見嚴(yán)重的滑膜炎，而軟骨下骨吸收增加，關(guān)節(jié)中注入1可見輕度或中度的類似變化。用1、3或10pgFGF-18(170AA)治療的動(dòng)物，在很多區(qū)域(包括骨髓、骨贅、關(guān)節(jié)盤、滑膜和軟骨形成區(qū)域)均有BRDU標(biāo)記。這些結(jié)果證明了任何治療方式均有最明顯的合成作用，但伴有嚴(yán)重的滑液炎癥和軟骨下骨吸收增加。手術(shù)后9周時(shí)評(píng)估的結(jié)果未治療對(duì)照組(在手術(shù)后9周時(shí)評(píng)估)內(nèi)側(cè)半月板撕裂的未治療動(dòng)物在9周時(shí)處死，可見脛骨軟骨退化，在脛骨坪的外側(cè)2/3最嚴(yán)重，在內(nèi)側(cè)1/3較不嚴(yán)重。股骨軟骨退化較不嚴(yán)重，較有活力。評(píng)分一般高于6周時(shí)處死的未治療動(dòng)物。單劑量鹽水對(duì)照組脛骨2區(qū)軟骨退化打分(12%)低于每周一次鹽水對(duì)照組(18%)。單劑量鹽水對(duì)照組中度軟骨退化的寬度也明顯較大(92%)。每周一次給予鹽水的動(dòng)物嚴(yán)重、明顯、中度和輕度軟骨退化的總和明顯較低(15%)，而每周三次的鹽水對(duì)照動(dòng)物為22%。因?yàn)槊拷M僅有5只大鼠，這些差異相對(duì)較小，這是個(gè)體疾病進(jìn)展差異的結(jié)果。單劑量(在手術(shù)后9周時(shí)評(píng)估，包括治療后三周)給予單劑量FGF-18(170AA)并在手術(shù)后9周處死的任何動(dòng)物均無(wú)顯著治療效應(yīng)，盡管少量注入10叩的關(guān)節(jié)在脛骨外側(cè)有合成代謝反應(yīng)。每周一次治療三周(在手術(shù)后9周時(shí)評(píng)估，包括治療后三周)10兇FGF-18(170AA)每周一次治療后觀察到內(nèi)側(cè)脛骨的1區(qū)和3區(qū)總的軟骨退化評(píng)分明顯降低38和31%。0.3FGF-18(170AA)治療與每周--次鹽水對(duì)照相比2區(qū)的評(píng)分明顯降低。用10pgFGF-18(170AA)治療的動(dòng)物軟骨退化寬度明顯降低(38%)。用10(igFGF-18(170AA)治療深度比明顯降低(22%)。用3或10問(wèn)FGF-18(170AA)治療明顯地同等程度地增加骨贅評(píng)分(25%)，但只有給予10)Lig的動(dòng)物骨贅測(cè)量值明顯增加(53%)。給予10FGF-18(170AA)的動(dòng)物股骨關(guān)節(jié)總分明顯降低23%。給予10FGF-18(170AA)的動(dòng)物無(wú)論在內(nèi)側(cè)還是外側(cè)脛骨有活力軟骨的面積均明顯增大(分別為40%和81%)。用10pgFGF-18(170AA)治療明顯減小嚴(yán)重和最小膠原變性的寬度，以及嚴(yán)重、明顯和中度變性結(jié)合的寬度和嚴(yán)重和明顯結(jié)合的寬度。注入3或10pg的關(guān)節(jié)內(nèi)滑液炎癥極小，較低的劑量時(shí)沒(méi)有滑液炎癥。在注入任何劑量的一些或全部關(guān)節(jié)中明顯地出現(xiàn)合成反應(yīng)。BRDU標(biāo)記主要見于鹽水對(duì)照組的骨髓和成纖維細(xì)胞，在注入10pg的關(guān)節(jié)內(nèi)可見標(biāo)記增加(軟骨和骨贅)。這些結(jié)果表明，軟骨修復(fù)/合成反應(yīng)的持續(xù)超過(guò)治療期間，盡管在此劑量治療的關(guān)節(jié)中6或9周時(shí)有相當(dāng)?shù)墓琴槣y(cè)量值。如用膠原變性所測(cè)得的那樣，用明顯的軟骨退化參數(shù)和嚴(yán)重的基質(zhì)缺失可見劑量反應(yīng)性效應(yīng)改善。每周三次治療三周(在手術(shù)后9周時(shí)評(píng)估，包括治療后三周)10pgFGF-18(170AA)每周注射三次的動(dòng)物與鹽水對(duì)照每周三次的比較，3區(qū)脛骨退化總分明顯降低38%。用10兇FGF-18(170AA)治療也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義地明顯降低軟骨退化寬度(48%)。用10兇FGF-18(170AA)治療的動(dòng)物深度比也明顯減小(27%)。用3或10)agFGF-18(170AA)治療的動(dòng)物骨贅的測(cè)量值明顯增加(分別為57%和103%)。用1、3或10(igFGF-18(170AA)治療明顯增加內(nèi)側(cè)脛骨有活力軟骨的區(qū)域(分別為34%、37%和71%)，而用0.3或10(igFGF-18(170AA)治療明顯增加外側(cè)脛骨有活力軟骨的區(qū)域(分別為46%和67%)。用3或10iugFGF-18(170AA)治療的動(dòng)物中輕度膠原變性寬度明顯增加，在給予10ng的動(dòng)物中輕度和最小變性的寬度合起來(lái)也是如此。注入10pg(分次)的關(guān)節(jié)內(nèi)存在輕度滑膜炎，而注入1或3pg的關(guān)節(jié)內(nèi)存在最小至輕度的滑膜炎。從1向上有明顯的合成反應(yīng)。BRDU標(biāo)記主要見于鹽水對(duì)照組的骨髓和成纖維細(xì)胞，在注入10jug的關(guān)節(jié)內(nèi)可見標(biāo)記增加(軟骨和骨贅)。這些結(jié)果表明，軟骨修復(fù)/合成反應(yīng)的持續(xù)超過(guò)治療期間，與6周時(shí)間點(diǎn)相比滑膜炎消退。對(duì)膠原缺失的有益效應(yīng)不明顯，盡管有明確的傾向表明明顯至嚴(yán)重缺失區(qū)域的測(cè)量值較小。實(shí)施例1.2:狗半月板切開術(shù)OA模型雌性小獵犬(3只/組)，在開始治療前一個(gè)月于左膝蓋上行單側(cè)中間部分半月板切開術(shù)，然后用鹽水或3、10或30i^gFGF-18(170AA)進(jìn)行一次、每周一次或每周三次(分開的1/3劑量)共三周的治療，測(cè)定對(duì)己建立的OA的有益效應(yīng)。治療三周后，評(píng)估左膝蓋肉眼觀察(3只/組)和顯微鏡觀察(3只/組)半月板切開術(shù)引起的變化和合成反應(yīng)的跡象。在整個(gè)研究過(guò)程中，除了一只狗外，所有狗食欲和活動(dòng)均正常。由于為了關(guān)節(jié)注射而反復(fù)麻醉引起的吸入性肺炎，第12組的一只狗(YLI-8)在研究結(jié)束前(第17天)死亡。所有組中所有接受手術(shù)的狗在內(nèi)側(cè)脛骨上均出現(xiàn)以灶性局限性軟骨退化損傷為特征的典型退化性變化。股骨損傷偶見。所有狗均有關(guān)節(jié)囊內(nèi)側(cè)增厚。所有組中均有類似的半月板損傷(尸檢時(shí)約1/2缺失，通常無(wú)一修復(fù)或適度修復(fù))。顯微鏡評(píng)估揭示，未治療和賦形劑治療的膝蓋通常有軟骨肥大，在1區(qū)有水平1和2的克隆化。用30)iig(10兇每周三次)FGF-18(170AA)治療的關(guān)節(jié)觀察到確定的合成反應(yīng)(損傷區(qū)域增加克隆化、細(xì)胞構(gòu)成和蛋白多糖染色)，這些變化在股骨踝最易識(shí)別。用較低劑量FGF-18(170AA)治療每周三次或30或10兇每周一次的一些關(guān)節(jié)上觀察到較小但仍然令人信服的合成效應(yīng)。FGF-18(170AA)引起的這些變化(若存在時(shí))通常在軟骨的上1/3—1/2或鄰近較深裂縫的基質(zhì)中。本研究的結(jié)果證明了用10jigFGF-18(170AA)i.a.治療每周三次(30總量/周)在所有膝蓋中有確定的合成效應(yīng)，在用較低劑量治療每周三次或用30或10jag每周一次治療的一些膝蓋中合成效應(yīng)較小。這些變化包括在軟骨的上1/3—1/2或鄰近較深裂縫的基質(zhì)中的克隆化和蛋白多糖合成增加。在某些關(guān)節(jié)中觀察到邊緣區(qū)輕度增殖變化，但沒(méi)有類似于大鼠上出現(xiàn)的過(guò)度變化。關(guān)節(jié)軟骨中的合成代謝變化大于所有案例邊緣區(qū)的合成代謝變化。膠原損傷測(cè)量值也提示基質(zhì)完整性的某些保護(hù)作用。實(shí)施例1.3:狗前十字韌帶(ACL)模型對(duì)于嚴(yán)重進(jìn)行性骨關(guān)節(jié)炎的研究，狗前十字韌帶(ACL)模型用于臨床前藥理學(xué)的研究，包括治療末和隨訪中MRI評(píng)估。此模型提供了有效性數(shù)據(jù)(組織病理學(xué)和經(jīng)時(shí)性MRI和隨訪)及借助步態(tài)分析對(duì)功能的評(píng)估數(shù)據(jù)。在治療末用非侵襲性讀出MRI已可證明與健康基線相比的軟骨損傷降低(賦形劑、3)ag/關(guān)節(jié)、10jLig/關(guān)節(jié)和30jag/關(guān)節(jié)分別為-13.3、-7.5、-9.3和-8.8)。用治療末在測(cè)定板上的步態(tài)分析測(cè)定的功能改善也可證明。步態(tài)分析采用裝置于平臺(tái)的壓力/力測(cè)量?jī)x(MatscanSystem,Tekscanlnc,Boston,MA，USA)進(jìn)行測(cè)量。步態(tài)采集程序MatscanSystem包括4通道平板顯示器，每個(gè)顯示器有包括在432mmX368mm敏感區(qū)的2,288個(gè)敏感元件，產(chǎn)生1.4sensels/cm2的空間分辨率。該設(shè)備在開始研究前用預(yù)定的重量校正，整個(gè)研究中所有狗均用同樣的校正。33對(duì)于誘發(fā)骨關(guān)節(jié)炎的后肢，以1.9一2.2m/秒的小跑馬步態(tài)速率獲得垂直力和接觸面積峰值。用計(jì)時(shí)器確保速率。步態(tài)采集窗口為3秒，采樣率設(shè)于44hz，共產(chǎn)生132個(gè)框架。每只狗得到最初的5個(gè)有效試驗(yàn)。然后平均表示特定時(shí)間點(diǎn)該狗的特征。垂直力峰值表示為體重的百分?jǐn)?shù)(％BW)，接觸面積表示為平方厘米(cm2)。關(guān)于快步時(shí)獲得的誘發(fā)骨關(guān)節(jié)炎后肢的垂直力峰值，與手術(shù)前值(基線)相比，狗骨關(guān)節(jié)炎模型產(chǎn)生異常步態(tài)(第4周)。所有組均觀察到手術(shù)后4周和8周垂直力峰值和接觸面積減小，為負(fù)變化(表3和4)。但是，組IV的狗手術(shù)后8周時(shí)比其它組有較小嚴(yán)重度的降低。表3快步(動(dòng)態(tài)項(xiàng)目)時(shí)獲得的誘發(fā)骨關(guān)節(jié)炎后肢的垂直力峰值<table>tableseeoriginaldocumentpage34</column></row><table>a.數(shù)值表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤，數(shù)值是在基線上的改變。b.數(shù)值表示為體重的百分?jǐn)?shù)(％BW)。表4快步(動(dòng)態(tài)項(xiàng)目)時(shí)獲得的誘發(fā)骨關(guān)節(jié)炎后肢的接觸面積<table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table>a.數(shù)值表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤，數(shù)值是在基線上的改變。b.數(shù)值表示為體重的平方厘米(cm2)。體外藥理學(xué)試驗(yàn)結(jié)果證明，不同類型細(xì)胞暴露于FGF-18(170AA)后在軟骨細(xì)胞的特殊活性(增殖和軟骨退化/膠原合成)，并且沒(méi)有諸如白細(xì)胞增殖或細(xì)胞因子釋放的副作用。實(shí)施例1.4:用放射標(biāo)記FGF18[3H]-FGF18進(jìn)行的研究表5(總放射性的濃度表示為ng當(dāng)量/g)和表6(表示為給藥劑量的百分?jǐn)?shù))報(bào)告了關(guān)節(jié)內(nèi)給予[3H]-FGF18后膝關(guān)節(jié)中的放射性水平；這些表中均報(bào)告了用完整關(guān)節(jié)和收集滑液分析的受治療關(guān)節(jié)中測(cè)得的放射性。表7報(bào)告了膝關(guān)節(jié)(有或無(wú))中相應(yīng)的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)。表5以0.24mg/kg目標(biāo)劑量水平給雄性大鼠關(guān)節(jié)內(nèi)單次給予pH]-AS902330后膝關(guān)節(jié)中總放射性濃度。結(jié)果表示為ng當(dāng)量/g。<table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table>表6以0.24mg/kg目標(biāo)劑量水平給雄性大鼠關(guān)節(jié)內(nèi)單次給予[SH]-AS902330后膝關(guān)節(jié)中總放射性的回收。結(jié)果表示為給藥劑量的百分?jǐn)?shù)。<table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table>表7以0.24mg/kg目標(biāo)劑量水平給雄性大鼠關(guān)節(jié)內(nèi)單次給予[SH]-AS902330后膝關(guān)節(jié)中總放射性的系統(tǒng)暴露參數(shù)。<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>受治療關(guān)節(jié)中總放射性水平呈雙相降低(終末半衰期為20小時(shí)。計(jì)及沒(méi)有滑液的整個(gè)關(guān)節(jié)，得到可比的數(shù)值(16小時(shí))。總之，結(jié)果表明放射性分布在滑液外，進(jìn)入膝關(guān)節(jié)組織。受治療關(guān)節(jié)的放射自顯影分析所得結(jié)果顯示，大多數(shù)放射性位于緊鄰關(guān)節(jié)處。表8和表9分別報(bào)告了靜脈注射和關(guān)節(jié)內(nèi)注射fH]-FGF-18后的全身放射自顯影分析。組織和器官中的總放射性濃度表示為ng當(dāng)量/g(平均值土SD)。表8以0.24mg/kg目標(biāo)劑量水平給雄性大鼠單次靜脈注射[3H]-AS902330(第1組)后的總放射性濃度。結(jié)果表示為ng當(dāng)量/g(平均值土SD)。<table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table>*NQ:不可計(jì)量(低于定量的極限)表9以0.24mg/kg目標(biāo)劑量水平給雄性大鼠關(guān)節(jié)內(nèi)單次給予fH]-AS902330(第2組)后的總放射性濃度。結(jié)果表示為ng當(dāng)量/g(平均值±SD)。<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>*NQ:不可計(jì)量(低于定量的極限)靜脈注射后4小時(shí)和24小時(shí)，血液和血清中的總放射性分別達(dá)到最高值。所測(cè)得的半衰期約為55小時(shí)。關(guān)節(jié)內(nèi)注射后，血清和血液中總放射性平均值緩慢升高，分別于給藥后24和48小時(shí)達(dá)到最高濃度。靜脈注射后系統(tǒng)暴露約為所見值的20%。血清中的總放射性平均起來(lái)高于血液中的總放射性，提示母體化合物和/或其代謝產(chǎn)物對(duì)血細(xì)胞的親和力較低，循環(huán)中的放射性主要分布于血清。受治療的關(guān)節(jié)中總放射性水平呈雙相降低，終末半衰期為20小時(shí)。總之，結(jié)果表明放射性分布在進(jìn)入膝關(guān)節(jié)組織的滑液外?？傊?，基于大鼠和狗的非臨床藥理學(xué)模型，發(fā)現(xiàn)特別合適的給藥方案是每周一次共三周。觀察到的有效劑量在3-30ng/關(guān)節(jié)之間變動(dòng)。實(shí)施例2:本發(fā)明的FGF-18化合物的例子本發(fā)明的優(yōu)選FGF-18化合物的序列在如下序列表中給出。權(quán)利要求1.一種治療軟骨障礙患者的方法，包括給予FGF-18化合物，其中FGF-18化合物至少給藥兩次，所述給藥間隔至少約4天，較佳為5、6或7天。2.FGF-18化合物在制備治療軟骨障礙患者的藥物上的應(yīng)用，其中FGF-18化合物至少給藥兩次，所述給藥間隔至少約4天，較佳為5、6或7天。3.如權(quán)利要求1或2所述的方法或應(yīng)用，其中所述給藥間隔各為約7天。4.如前面的權(quán)利要求之一所述的方法或應(yīng)用，其中每個(gè)治療周期給予FGF-18化合物至少連續(xù)2周，至少連續(xù)3周或至少連續(xù)4周。5.如前面的權(quán)利要求之一所述的方法或應(yīng)用，其中每個(gè)治療周期給予FGF-18化合物連續(xù)2周，連續(xù)3周或連續(xù)4周。6.如前面的權(quán)利要求之一所述的方法或應(yīng)用，其中治療周期在2、4、6或8個(gè)月后重復(fù)進(jìn)行。7.如前面的權(quán)利要求之一所述的方法或應(yīng)用，其中每年包括1、2、3、4、5或6個(gè)治療周期。8.如前面的權(quán)利要求之一所述的方法或應(yīng)用，其中包括關(guān)節(jié)內(nèi)給予FGF-18化合物。9.如前面的權(quán)利要求之一所述的方法或應(yīng)用，其中包括靜脈內(nèi)給予FGF-18化合物。10.如前面的權(quán)利要求之一所述的方法或應(yīng)用，其中包括每次關(guān)節(jié)內(nèi)給予FGF-18化合物1—100mcg、較佳為5—40mcg、更佳為10—30mcg的劑量。11.如前面的權(quán)利要求之一所述的方法或應(yīng)用，其中包括每次關(guān)節(jié)內(nèi)給予FGF-18化合物5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60mcg的劑量。12.如前面的權(quán)利要求之一所述的方法或應(yīng)用，其中包括每次靜脈內(nèi)給予FGF-18化合物50-200mcg/kg、較佳為80-120mcg/kg的劑量。13.如前面的權(quán)利要求之一所述的方法或應(yīng)用，其中包括每次靜脈內(nèi)給予FGF-18化合物80、90、100、110或120mcg/kg的劑量。14.如前面的權(quán)利要求之一所述的方法或應(yīng)用，其中所述軟骨障礙為骨關(guān)節(jié)炎。15.如前面的權(quán)利要求之一所述的方法或應(yīng)用，其中所述骨關(guān)節(jié)炎分類為輕度至中度骨關(guān)節(jié)炎、II期或III期OARSI、嚴(yán)重進(jìn)行性骨關(guān)節(jié)炎和/或IV期OARSI。16.如前面的權(quán)利要求之一所述的方法或應(yīng)用，其中所述骨關(guān)節(jié)炎是膝關(guān)節(jié)炎或髖關(guān)節(jié)炎，如繼發(fā)性髖關(guān)節(jié)炎。17.如前面的權(quán)利要求之一所述的方法或應(yīng)用，其中FGF-18化合物選自人野生型FGF-18或FGF-18(170AA)。全文摘要本發(fā)明涉及軟骨障礙特別是骨關(guān)節(jié)炎的治療。更具體地涉及FGF-18在治療方案中的應(yīng)用及在制備治療罹患軟骨障礙如骨關(guān)節(jié)炎(例如膝關(guān)節(jié)炎或繼發(fā)性髖關(guān)節(jié)炎)患者的藥物上的應(yīng)用，具體提供的是包括在每個(gè)治療周期中每周一次給予FGF-18的優(yōu)選治療方案。文檔編號(hào)A61K38/18GK101505787SQ200780031201公開日2009年8月12日申請(qǐng)日期2007年8月24日優(yōu)先權(quán)日2006年8月25日發(fā)明者A·吉莫,C·H·雷德爾,E·馮鮑爾申請(qǐng)人:阿雷斯貿(mào)易股份有限公司