專利名稱：：修飾的促進血細胞生成的分子的制作方法修飾的促進血細胞生成的分子本發明涉及作為紅細胞生成素受體的結合分子的肽類、其制備方法、包含這些肽的藥物和它們在選擇的適應癥中的用途(優選用于治療各種類型的貧血癥和中風)。激素紅細胞生成素(EPO)是由165個氨基酸組成并具有四個糖基化位點的糖蛋白。四個復雜的糖側鏈占約35KD的整個分子量的40%。EP0在腎中形成，并從那里遷移到刺激紅血球產生的脾和骨髄中。在慢性腎病中，EP0產生的減少導致紅細胞減少型貧血癥。使用通過基因工程制備的重組EP0，可有效地治療貧血癥。EPO可改善透析患者的生活質量。使用重組EP0不僅可改善腎貧血癥，而且可改善早產新生兒中的貧血癥、炎癥和腫痛相關的貧血癥。利用EP0，在肺瘤患者中可以更成功地進行高劑量的化學療法。類似地，如果在放射療法的范圍內進行給藥，EPO可促進癌癥患者的康復。在使用EP0的治療中，問題在于所需的劑量方案是以頻繁的或連續的靜脈內或皮下應用為基礎，因為蛋白在體內被較快地分解。因此，重組EPO衍生分子的發展趨向于選擇性修飾該糖蛋白，例如，通過額外的糖基化或聚乙二醇化，以便增加穩定性并因此增加生物學半衰期。與使用重組EP0治療有關的另一個重要問題是在治療期間患者對重組BP0產生抗體的危險。這是由于重組EP0與內源性EP0不完全相同。一旦誘導抗體生成，它可導致產生抗體，所述抗體還損害內源性EP0的活性。這常常增加治療所需的重組EP0的劑量。特別是如果該抗體損害內源性EPO的活性，這種作用可被解釋為治療誘導的自身免疫性疾病。在經歷腎移植的透析患者在EP0治療數月或數年的情況下，這是特別不期望的。然后抗體可損害由移植物產生的內源性EP0的活性，并因此損害移植物器官的紅細胞生成活性。目前，為了增加生物學半衰期而在重組EPO中引入的修飾將是否惡化或改善這個難題，還是未解決的問題。通常，人們預計大量的修飾和更長的半衰期將惡化這個難題的性質。一個可替代的策略是由與紅細胞生成素不共有序列同源性或結構關系的氨基酸制備合成肽。據顯示，顯著小于紅細胞生成素的與EP0序列不相關的肽可起激動劑的作用(Wrighton等人，1996)。相同的作者報道，可將這類肽截短成具有10個氨基酸長度的仍然有活性的最小肽。模擬EP0活性的合成肽是國際公開W096/40749的主題。它公開了明顯共有序列的10至40個氨基酸的模擬肽，該共有序列優選在通常被稱為IO和17位的位置上包含兩個脯氨酸，其中之一被認為是必需的。WO01/38342公開了這些脯氨酸.可能與萘基丙氨酸結合。因此迄今為止，EPO受體的所有基于小肽的激動劑都具有一個結構，該結構包含至少一個脯氨酸，經常是在所定義位置上的兩個脯氨酸殘基，參照它們在非常有活性的紅細胞生成素模擬肽EMP1中的位置，其通常被編號為10和17位(國際公開WO96/40749;Wrighton等人，1996，Johnson等人，1997和1998):GGTYSC跳PLTWVCKPQGG這些脯氨酸對肽的有效性來說被認為是不可缺少的。對于17位上的脯氨酸，已經通過與受體的相互作用證實了這一點，而10位上的脯氨酸被認為是分子的正確折疊所必需的(同樣參見Wrighton等人，1996，1997)。由脯氨酸的特殊立體化學性質支持的正確折疊，通常是生物學活性的必要前提。通常，脯氨酸是形成結構的氨基酸，其經常參與(例如在這種情況下)發夾結構和P轉角的形成。由于尤其是這種性質，其是分解含脯氨酸的肽/蛋白的脯氨酸后特異性內肽酶的常見攻擊點。通過所述的"單擊"脯氨酸后切割，許多內源性肽激素(血管緊張肽I和血管緊張肽II、硬骨魚緊張肽、促甲狀腺素釋放素(thyreoliberin)、其它的釋放素，等等)被滅活。因此，通過這些常見的和有活性的酶的活性，縮短了含脯氨酸的EPO模擬肽的半衰期。可化學制備這類短肽，并且不需要重組生產，重組生產在控制和產生具有規定質量和同一性的產品方面更困難得多。該小尺寸的肽的化學生產在生產成本方面是有竟爭力的。而且，化學生產允許分子變異，例如糖基化、PEG化或任何其它規定修飾的規定引入，它們可具有增加生物學半衰期的已知效力。但是，迄今為止一直沒有批準使用現有的EPO模擬肽的任何療法。此外，需要增強EP0模擬肽的EP0模擬功效，以便為治療提供足夠有效的分子。在現有技術中描述的EP0模擬肽可以視作識別紅細胞生成素受體的結合位點的單體結合域。但是，正如Wrighton等人(Wrighton1997)所指出的，為了同型二聚化EPO受體和誘導信號轉導，通常需要2個這樣的結合域。因而，2個這樣的EP0模擬肽的組合和因此在一個二聚體分子中的EPO受體結合域會顯著增強活性。這會產生下述結果，即具有一個單個結合域的肽表現出相同的定性的活性曲線，而結合在一起的2個結合域表現出低得多的ED50(50%效應劑量，活性的一種度量)。二聚化可以使單體EPO模擬肽的效力提高最高達1000-倍。二聚化甚至可以將有些無活性的單體肽轉化成激動劑。攜帶2個結合域的肽被描述為二價的或二聚的肽。已知幾種二聚化單體的技術。例如通過共價結合接頭，可以使單體二聚化。接頭是在本發明的多肽單元之間創建共價鍵的連接分子。多肽單元可以通過接頭以改善與EP0受體的結合的方式組合(Johnson等人I997;Wrighton等人1997)。此外提及單體生物素化的肽通過與Wrighton等人(Wrighton,1997)所述的蛋白栽體分子的非共價相互作用而多聚化。也可以使用生物素/抗生蛋白鏈菌素系統，即生物素化肽的C-末端，隨后用抗生蛋白鏈菌素溫育生物素化的肽。或者，已知通過形成二酮哌喚結構來實現二聚化。技術人員已知此方法，詳細描述在例如Cavelier等人(Peptides:ThewaveoftheFuture;MichalLebl和RichardA.Houghten(編)；AmericanPeptideSociety,2001)。從現有技術得知的得到肽二聚體的另一種可選方案是，使用雙功能的活化的二羧酸衍生物作為以后的接頭部分的反應前體，其與N-末端氨基反應，從而形成最終的二聚體肽(Johnson等人，1997)。單體也可以通過與接頭共價結合來二聚化。優選地，所述接頭包含NH-R-NH，其中R是被官能團取代的低級亞烷基，所述官能團例如能結合另一個分子部分的羧基或氨基。接頭可能含有賴氨酸殘基或賴氨酸酰胺。PEG也可以用作接頭。所述接頭可以是含有2個羧酸的分子，且任選地在一個或多個原子處被官能團取代，所述官能團例如能結合一個或多個PEG分子的胺。在W02004/101606中，也給出了用連接部分來寡聚化和二聚化肽的可能步驟的詳細描述。認識到EPO模擬肽的替代性二聚化策略。此外，應當指出，EPO和EPO模擬肽(單體或二聚體)不僅對于人治療目的是令人感興趣的。除了人用途以外，在動物保健市場上非常需要EPO替代物。在這方面，為了防止濫用，希望提供在人和動物中表現出區分活性模式P0模擬肽。但是，這是一項挑戰性的任務，因為不同的動物EP0受體(例如小鼠，大鼠，豬和狗)的序列與人EP0受體非常類似。當比對不同物種的EP0受體時，可以看出不同物種的差別僅在于幾個氨基酸。這暗示著高結構同源性。此外，僅小百分比的這些氨基酸殘基與結合EPO模擬肽有關。這增加了對人和動物EP0受體表現出不同活性水平的EP0模擬肽的開發難度本發明的一個目的是，提供表現出天然EP0的至少基本部分的生物學活性的可替代性合成肽，并因此提供用于有效治療策略的可替代性方法。本發明的另一個目的是，提供具有提高的功效的EP0模擬肽。本發明的另一個目的是，通過替代性二聚化策略提供EP0模擬肽的二聚體。此外，本發明的一個目的是，提供在人和動物中表現出不同活性模式的EP0模擬肽。下面將詳述這些目的的解決方案。根據本發明的第一個實施方案，提供了一種肽，尤其是能結合EP0受體的肽，其包含下述的共有氨基酸序列XsXiXgXgXioXiiUi3X14X15其中每個氨基酸選自天然或非天然氨基酸，且X6是具有能形成共價鍵的側鏈官能度的氨基酸或A或oc-氨基-Y-溴代丁酸；X，是R，H，L，W，Y或S;Xs是M，F，I，高絲氨酸甲基醚或正異亮氨酸；l是G或G的保守交換；1。是脯氨酸的非保守交換；或X,和Xi。被單個氨基酸置換；Xn選自任意氨基酸；Xu是不帶電荷的極性氨基酸或A;X13W，l-nal，2-nal，A或F;Xm是D，E，I，L或V;Xu是具有能形成共價鍵的側鏈官能度的氨基酸或A。該實施方案也包含選自下述的肽上述肽共有序列的功能等同片段、衍生物和變體，其具有EPO模擬活性，且在位置X!。處具有構成脯氨酸的非保守交換的氨基酸，或其中X9和X,。被單個氨基酸置換。所述肽共有序列可以視作EPO受體的單體結合域。作為EPO模擬肽，它們能結合EPO受體。肽的長度優選地是10至40或50或60個氨基酸。在優選的實施方案中，肽共有序列的長度是至少10，15，18，20或25個氨基酸。當然，共有序列可以分別嵌入更長的序列中。通過二聚化上述共有序列的2個單體肽單元，也可以創建更長的長度(參見下文)。非常令人驚奇的是，盡管根據Wrighton和Johnson的已知EPO模擬肽的1個或(根據有些實施方案)甚至2個脯氨酸被替換為其它天然的或非天然的氨基酸，根據本發明的肽確實表現出EPO模擬活性。實際上，根據本發明的肽具有與已知的含有脯氨酸的肽相當或甚至更好的活性。但是，值得注意的是，置換脯氨酸殘基的氨基酸不代表脯氨酸的保守交換，而是代表非保守交換。脯氨酸的這種非保守交換的合適實例是在位置io的帶正電荷的或帶負電荷的氨基酸。優選地，帶正電荷的氨基酸(例如堿性氨基酸，例如蛋白原性的氨基酸K，R和H且尤其是)可以用于置換。用于置換位置10脯氨酸的非保守氨基酸也可以是非蛋白原性的天然的或非天然的氨基酸，優選地是具有帶正電荷側鏈的氨基酸。也包含所述氨基酸的各個類似物。^是特;有活性的。這樣的伸長的氨基酸的合i實例是高精i酸。:據一個實施方案，所述肽在位置IO攜帶除了天然氨基酸精氨酸之外的帶正電荷的氨基酸。根據該實施方案，脯氨酸10被選自下迷的帶正電荷的氨基酸置換蛋白原性的氨基酸K或H，和帶正電荷的非蛋白原性的天然的和非天然的帶正電荷的氨基酸例如高精氨酸。根據第一個實施方案的共有序列，A和X15描述具有能形成共價鍵的側鏈官能度的氨基酸。這些氨基酸因而能形成橋單元。根據一個實施方案，選擇在位置X6和Xu的氨基酸，使得它們能通過在彼此之間形成共價鍵而在肽內形成分子內橋。分子內橋的形成可以導致肽的環化。合適的橋單元的實例是二硫橋和二硒橋。表現出它們的側鏈的這種鍵形成功能性的氨基酸的合適實例是例如半胱氨酸和半胱氨酸衍生物例如高半胱氨酸或硒代半胱氨酸以及疏代賴氨酸。諸如2個硒代半胱氨酸殘基之間的二硒橋的形成甚至具有勝過半胱氨酸橋的優點。這是因為硒橋在還原環境中更穩定。因而甚至在困難條件下會保留肽的構象。但是，顯然的是，氨基酸在位置X6和X^也是合適的，描繪具有能在具有帶正電荷側鏈的氨基酸(例如蛋白原性的氨基酸K，H，R或鳥氨酸，DAP或DAB)和具有帶負電荷側鏈的氨基酸(例如蛋白原性的氨基酸D或E)之間形成不同共價鍵(例如酰胺鍵)的功能性的側鏈。其它實例是酰胺和硫醚橋。在申請人的早期申請PCT/EP2005/012075(WO2006/050959)中公開了歸入本發明的第一個實施方案的共有序列的肽，該申請在本申請的優先權日之后公開。在有些國家，根據各自的專利法，PCT/EP2005/012075的公開內容可能構成現有技術。僅在可適用且可能置疑專利性的國家，上述共有序列為了法律原.;列。這可以應用于下述共有序列或肽序列*一種肽，尤其是能結合BPO受體的肽，其包含下述氨基酸序列X6X7X8X9X1。X11XuX13X14X15其中每個氨基酸選自天然或非天然氨基酸，且X6是C，A，B，oc-氨基-y-溴代丁酸或高半胱氨酸(hoc);X7是R，H，L，W，Y或S;Xs是M，F，I，高絲氨酸甲基醚或正異亮氨酸；X9是G或G的保守交換；Xu是脯氨酸的非保守交換；或X,和Xn被單個氨基酸置換；Xn選自任意氛基酸；Xu是T或A;X13W，l-nal，2-nal，A或F;Xn是D，E，I，L或V;Xu是C，A，K，ct-氨基-Y-溴代丁酸或高半胱氨酸(hoc)條件是，l或X^是C或hoc;*一種肽，其特征在于下述氨基酸序列X6X7X8X9X10X11X12X13X14X15其中每個氨基酸用標準的字母縮寫來指示，且X6是C;X7是R，H，L或W;Xs是M，F或I;Xs是G或G的保守交換；X!。是脯氨酸的非保守交換；Xu獨立地選自任意氨基酸；Xu是T;X"是W;Xn是D，E，I，L或V;X"是C;或其中x,和t。被單個氨基酸置換*一種肽，其特征在于下述氨基酸序列X6X7X8X9X1。X11X12X13X14X15其中每個氨基酸用標準的字母縮寫來指示，且X7是R，H，L或W;X8是M，F，I，或hsm(高絲氨酸曱基醚);L是G或G的保守交換；X,。是脯氨酸的非保守交換；X獨立地選自任意氨基酸；Xu是T;X13是W;X"是D，E，I，L或V，l-nal(l-萘基丙氨酸)或2-nal(2-萘基丙氨酸)；X"是C;*滿足第一個實施方案的上述共有序列的在PCT/EP2005/012075中>^開的肽(參見圖21)。當PCT/EP2005/012075的更早的公布后的公開內容不會導致專利性問題時，上面列出的共有序列和肽序列不需要從第一個實施方案的寬共有序列中放棄，因而包含在上面定義的共有序列中。此外，這些肽通常支持EPO模擬共有序列的精確性，因為它們表現出有效性。根據本發明的第二個實施方案，提供了一種肽，它也表現出良好的EP0模擬性質。該肽包含至少IO個氨基酸，能結合EP0受體，且具有激動劑活性、因而具有EPO模擬活性。所述肽包含下述核心氨基酸序列X9X10U12X13其中每個氨基酸選自天然的或非天然的氨基酸，且其中X9是G或G的保守交換；Xi。是脯氨酸的非保守交換或X,和t。被單個氨基酸置換；Xu選自任意氨基酸；X^是不帶電荷的極性氨基酸或A;Xu是萘基丙氨酸。該實施方案也包含選自下述的肽上述肽共有序列的功能等同片段、衍生物和變體，其具有EPO模擬活性，且在位置Xn處具有構成脯氨酸的非保守交換的氨基酸，或其中X9和X,。被單個氨基酸置換，且在位置X^處具有萘基丙氨酸。這第二個實施方案的肽與第一個實施方案共有下述獨特特征，即X!。是脯氨酸的非保守交換，或l和X,。被單個氨基酸置換。但是，根據本發明的第二個實施方案的EP0模擬肽的另一個特征是在位置13處的萘基丙氨酸(例如l-Nal或2-Nal)。在位置13處的萘基丙氨酸和在位置10處的脯氨酸的非保守氨基酸交換的組合會產生具有提高的結合性質的EP0模擬肽。EPO模擬肽以二聚體形式結合EPO受體。我們假設，在位置13的摻入Nal會導致肽單體之間更強的疏水相互作用。這會潛在地增強單體肽鏈的二聚化，可能穩定化肽二聚體的構象。與脯氨酸的非保守氨基酸相組合，創建了具有提高的EP0模擬性質的EP0模擬分子，可能是由于參與受體結合的氨基酸的有利放置。在申請人的早期申請PCT/EP2005/012075中也公開了描述在位置13處的萘基丙氨酸的序列。在有些國家，根據專利法，該公開內容可能構成現有技術。在可適用且可能置疑專利性的國家，第二個實施方案的第一個可選方案的共有序列為了法律原因可以不包含滿足在PCT/EP2005/012075中公開的共有序列的序列。這可以應用于下述共有序列和選自在PCT/EP2005/012075中公開的下述組的肽序列*一種肽，尤其是能結合EPO受體的肽，其包含下述氨基酸序列XeXyXgXgXi0X11X12X13X14X15其中每個氨基酸選自天然或非天然氨基酸，且X6是C，A，E，ot-氨基-v-溴代丁酸或高半胱氨酸(hoc);X7是R，H，L，W或Y或R，H，L，W，Y或S;Xs是M，F，I，高絲氨酸甲基醚或正異亮氨酸；X9是G或G的保守交換；X,。是脯氨酸的非保守交換；或X,和Xw被單個氨基酸置換；Xn選自任意氨基酸；Xu是T或A;X"是l-nal，2-nal;Xn是D，E，I，L《VjXu是C，A，K，a-氨基-Y-溴代丁酸或高半胱氨酸(hoc)條件是，l或Xu是C或hoc;*下述組的肽GGTYSCHFGKITUVCKKQGGGGTYSCHFGKLT-lnal-VCKKQRGGGTYSCHFGKLT-lnal-VCKKQRG-GGTYSCHFGKLT-lnal-VCKKQRGC-GGTYSCHFGKLT-lnal-VCKKQRG-GGTYSCHFGKLT-lnal-VCKKQRGAc-C-GGTYSCHFGKLT-lnal-VCKKQRG-GGTYSCHFGKLT-lnal-VCKKQRG-AmAc-GGTYSCHFGKLT-lna卜VCKKQRG-AmGGTYSCHFGKLT-lnal-VCKKQRGGGTYSC鵬KLT-lnal-VCKKQRG-GGTYSCHFGKLT-lnal-VCKKQRGCGGTYSCHFGKLT-lna卜VCKKQRG-GGTYSCHFGKLT-lna卜VCKKQRGGGTYSCHMGKLTXVCKKQGGGGTYTCHFGKLTXVCKKLGGGGLYSCHFGKITXVCKKQGGGGLYSCHFGKLTXVCQKQGGGGTYSCHFGKLTXVCKKQRGGGTYTCHFGKLTUVCKKQGGGGTYSCHFGKLTUVCKKLGGGGTYSCHFGKITXVCKKQGGGGLYSCHFGKLTUVCKKLGGGGLYACHFGKLTUVCKKQGGGGTYTCHFGKITUVCKKQGGGGLYSCHFGKLTXVCKKQGGGGLYACHFGKLTULCKKQGGGGTYTCHFGKITXVCKKQGGGGLYSCHFGKLTXVCKKQRGGGTYTCHFGKLTXVCKKQGGGGLYSCHFGKITUVCKKQGGGGLYSCHFGKLTXVCRKQGGGGTYACHFGKLTXVCKKLGGGGLYACHFGKLTXVCRKQGGGGTYACHFGKLTXVCKKQGGGGLYSCHMGKLTXVCRKQGGGGLYSCHFGKLTUVCKKQRGGGLYSCHMGKLTXVCKKQGGGGTYTC薩KLTXVCKKQGGGGLYSCHFGKLTXVCRKQRGGGTYSCHFGKLTXVCKKQGGGGTYTCHFGKLTXVCKKQRGGGTYTCHFGKLTXVCKKQRGGGTYACHFGKLT跳KKQGGGGLYACHFGKLTUVCRKQGGGGLYACHFGKLTXICKKQGGGGLYSCHFGKITXECKKQGG頁GGLYACHFGKLTXVCKKQGGGGTYSCHFGKLTXVCQKQGGGGLYSC隱KLTXDCKKQGGGGLYSCHFGKLTXVCKKLGGGGLYSCHFGKLTUVCQKQGGGGLYSCHFGKLTUVCRKQRGGGmCHFGKLTUVCKLGGGGTYSC薩KLTUVCKKQGGGGLYAC薩KITXVCQKLRGGGTYSCHFGKLTXVCKKQRGGGLYSCHFGKLT跳RKQGGGGTYSCHFGKLTXVCKKLGGGGLYSCHFGKITUICKKQGGGGTYTCHFGKLTXVCQKQGGGGLYAC腦KITXVCQKLGGGGTYSCHFGKLTUVCKKQRGGGLYSCHFGKLTUVCRKLGGGGLYSCHFGKLTXVCRKLGGGGLYSC訓KITUVCRKQGGGGLYSCHMGKLTUECKKQGGGGTYSCHFGKLTUVCKKQGGGGLYSCHFGKLTUVCKKQGGGGLYSCHFGKITXVCRKQGGGGTYTCHFGKLTUVCQKQGGGGTYSCHFGKLTUVCQKQGGGGTYTCHFGKLTUVCKKQRG其中X是l-萘基丙氨酸，且U是2-萘基丙氨酸。當PCT/EP2005/012075的公布后的公開內容不會導致專利性問題時，上面列出的共有序列和肽序列不需要從第二個實施方案的第一個可選方案的寬共有序列中放棄，因而包含在上面定義的寬共有序列中。在從屬權利要求中提供了本發明的第一個和第二個實施方案的其它有益方面。由于本發明的第一個和第二個實施方案共有下述相同特征，即存在在位置10處的脯氨酸的非保守交換，或X,和L。被單個氨基酸置換，它們實際上彼此緊密相連。在從屬權利要求中定義了、也在下面描述了第一個和第二個實施方案的擴展的共有序列，其中為在上述核心序列周圍的位置定義了合適的氨基酸。應當注意，在本申請中使用的編號(XJJ6…等)僅用于筒化本發明的肽和現有技術已知的EP0模擬肽之間的對比(關于基于EMP1肽的編號，請參考例如Johnson等人，1997和1998)。但是，該編號不涉及肽的總長度，因此也不暗示所有位置總是必須被占據。例如位置Xi不是必須被占據。例如，從l開始的肽也是有EP0模擬活性的，只要提供10個氨基酸的最小長度。結果，在本申請中使用的氨基酸位置的編號將僅僅簡化肽的表征和與現有技術的對比。本發明的第一個和第二個實施方案的共有序列也可以包含下述額外的氨基酸位置X14X15X16X17X18X19其中每個氨基酸選自天然或非天然氨基酸，且X"選自D，E，I，L或V;Xis是具有能形成共價鍵的側鏈官能度的氨基酸或A;X"獨立地選自任意氨基酸，優選G，K，L，Q，R，S，Har或T;Xn選自任意氨基酸，優選A，G，P，Y或帶正電荷的或帶負電荷的天然的、非天然的或衍生的氨基酸，在帶正電荷的氨基酸的情況下，優選K，R，H,鳥氨酸或高精氨酸；X^獨立地選自任意氨基酸，優選L或Q;Xw獨立地選自任意氨基酸，優選帶正電荷的或帶負電荷的氨基酸，在帶正電荷的氨基酸的情況下，例如K，R，H，鳥氨酸或高精氨酸或小柔性氨基酸例如甘氨酸或P-丙氨酸。根據進一步的改進，所述肽共有序列包含下述額外的氨基酸位置其中每個氨基酸選自天然的或非天然的氨基酸，且其中X6是具有能形成共價鍵的側鏈官能度的氨基酸或A或cx-氨基-Y-溴代丁酸；X7是R，H，L，W或Y或S;Xs是M，F，I，Y，H，高絲氨酸甲基醚或正異亮氨酸。根據本發明的第一個和第二個實施方案的進一步的改進，所述肽在位置X1Q、Xn和/或X19處具有帶電荷的氨基酸，如果這些氨基酸位置在肽中存在(取決于肽共有序列的長度)。在位置X1Q、Xn和/或X19處的氨基酸是帶正電荷的或帶負電荷的，且選自天然氨基酸，非天然氨基酸，和衍生的氨基酸。應當注意，衍生的氨基酸在本申請的上下文中被視作非天然氨基酸的一個特殊實施方案。術語非天然氨基酸實際上是總稱。衍生的氨基酸在表述上分開地提及，因為它們構成本發明的一個特殊實施方案，正如將在下面詳細描述的。在XmXu和/或X19處的氨基酸是帶負電荷的氨基酸的情況下，所述帶負電荷的氨基酸優選地選自參天然的帶負電荷的氨基酸，尤其是D或E;參非天然的帶負電荷的氨基酸，，最初帶正電荷的氨基酸，但是它們被合適的化學基團衍生以給它們提供帶負電荷的基團。非天然的帶負電荷的側鏈可以描述伸長的側鏈。這樣的氨基酸的實例是a-氨基已二酸(Aad)，2-氨基庚二酸(2-氨基庚二酸)或a-氨基辛二酸(Asu)。一個原因可能是，伸長的帶負電荷的人工氨基酸能與EP0受體的帶正電荷的氨基酸更好地接觸，從而提高結合能力。已經發現，在位置13處也攜帶萘基丙氨酸的各個肽表現出非常良好的結合性質。如指出的，通過將帶正電荷的氨基酸轉化成帶負電荷的氨基酸，也可能提供帶負電荷的氨基酸。由此也可能伸長側鏈，從而潛在地增強結合性質。根據該新穎策略，用合適的試劑衍生化賴氨酸(或同源的更短的氨基酸，如Dap，Dab或鳥氨酸)，提供帶負電荷的基團。合適的試劑是例如二酸例如二羧酸或二磺酸。戊二酸，已二酸，琥珀酸，庚二酸和辛二酸可以作為實例提及。根據另一個方面，根據本發明的肽在位置X^、Xn和/或Xw處攜帶帶正電荷的氨基酸。所述帶正電荷的氨基酸選自參天然帶正電荷的氨基酸，例如賴氨酸，精氨酸，組氨酸或鳥氨酸；*非天然的帶正電荷的氨基酸，*最初帶負電荷的氨基酸，但是它們被合適的化學基團衍生以給它們提供帶正電荷的基團。已經表明，當在肽的位置t。和/或Xn處存在具有與賴氨酸相比伸長的側鏈的氨基酸時，可以創建非常有效的EP0模擬肽。該氨基酸可以是非蛋白原性的。根據一個實施方案，通過將延伸單元摻入待伸長的氨基酸(它不一定是賴氨酸)的側鏈，伸長帶正電荷的氨基酸。也可以將更短的氨基酸用作原料，然后通過適當的常規化學反應來伸長。通常，延伸單元是脂族(例如CH2單元)或芳族(例如苯基或萘基單元)基團。適當的伸長的氨基酸的實例是例如高精氨酸，氨基苯丙氨酸和氨基萘基丙氨酸。根據本發明的第一個和第二個實施方案的另一個實施方案，Xs是D-氨基酸，優選D-苯丙氨酸。在第一個和第二個實施方案的共有序列也包含在位置X5處的氨基酸的情況下，Xs可以選自任意氨基酸，但是，它優選是A，H，K,L，M，S，T或I。在肽中存在X4的情況下，它可以選自任意氨基酸，但是，它優選是F、Y、或F或Y的衍生物，其中所述F或Y的衍生物攜帶至少一個吸電子取代基。所述吸電子取代基優選地選自氨基，硝基和卣素。實例是4-氨基-苯丙氨酸，3-氨基-酪氨酸，3-碘-酪氨酸，3-硝基-酪，5-二硝基-酪氨酸，3，5-二碘-酪氨酸。在共有序列中存在X3的情況下，X3獨立地選自任意氨基酸，優選D，E，L，N，S，T或V。此外，特別在單體單元(結合域)形成二聚體的情況下，優選地在單體的N-末端區域(例如位置Xi和XJ和單體的C-末端區域(例如X19和X2。)中的氨基酸描述小柔性氨基酸例如甘氨酸或P-丙氨酸，以便提供柔性構象。根據本發明的第三個實施方案，提供了不同結構的肽，它也表現出良好的EP0模擬性質。該肽也包含至少10個氨基酸，能結合EP0受體，且具有激動劑活性。至少一個下述核心共有氨基酸序列描述了該EP0模擬肽的特征X9X10XuX"X13;或X9X10X11X12X13X14X15X15X17X18X19這些共有序列的每個氨基酸選自天然的或非天然的氨基酸。根據本發明第二個方面的基本特征，位置X1D、Xn或Xw中的至少一個具有帶負電荷的氨基酸。也包含選自下述的肽上述肽共有序列的功能等同片段、衍生物和變體，其具有EP0模擬活性，且在位置X;。、Xn或Xw中的至少一個具有帶負電荷的氨基酸。非常令人驚奇的是，在這些位置中的帶負電荷的氨基酸描述了這些優良的EP0模擬性質。其它氨基酸位置(如果在共有序列中存在)定義如下X,是G或G的保守交換；Xn選自任意氨基酸；Xu是不帶電荷的極性氨基酸或A;優選蘇氨酸，絲氨酸，天冬酰胺或谷氨酰胺；Xu是W,l-nal,2-nal，A或F;X"是D，E，I，L或V;X15是具有能形成共價鍵的側鏈官能度的氨基酸或A或oc-氨基-Y-溴代丁酸，X"獨立地選自任意氨基酸，優選G，K，L，Q，R，S，Har或T;Xu獨立地選自任意氨基酸，優選L或Q。在位置X1Q、Xu和/或X19(如果存在)中的至少一個位置處攜帶帶負電荷的氨基酸的根據本發明第三個實施方案的肽，是描述在人和動物系統中有差別的EPO模擬性質的肽的合適候選物。如上面指出的，不同物種的EPO受體的蛋白序列在物種之間僅存在少數差異，因而EPO受體被分級為"以可忽略的物種差異高度保守的"。但是，令人驚奇地發現，在至少一個所述位置處具有帶負電荷的氨基酸的EPO模擬肽可能能區分人和動物EPO-受體的肽結合位點。對動物受體具有更高的結合能力的肽優選地用于獸醫用途。在位置X1Q、Xn和/或X19中的至少一個位置處攜帶帶負電荷的氨基酸的肽可以在共有序列中包含下述額外的氨基酸XsXX8其中每個氨基酸選自天然的或非天然的氨基酸，且其中X6是具有能形成共價鍵的側鏈官能度的氨基酸或A或ct-氨基-Y-溴代丁酸；X7是R，H，L，W或Y或S;Xs是M，F，I，Y,H，高絲氨酸曱基醚或正異亮氨酸。此外，下述氨基酸也可以描述擴展的共有序列X9X1。X11X12X13X14X15X16X17X13X19其中每個氨基酸選自天然的或非天然的氨基酸，且其中X9是G或G的保守交換；在Xi。不是帶負電荷的氨基酸的情況下，Xi。是脯氨酸，脯氨酸的保守交換或脯氨酸的非保守交換，或X,和t。被單個氨基酸置換；Xn選自任意氨基酸；Xu是不帶電荷的極性氨基酸或A;優選蘇氨酸，絲氨酸，天冬酰胺或谷氨酰胺；X3是W，l-nal，2-nal，A或F;Xm是D，E，I,L或V;X,5是具有能形成共價鍵的側鏈官能度的氛基酸或A或oc-氨基-Y-溴代丁酸；Xw獨立地選自任意氨基酸，優選G，K，L，Q，R，S，Har或T;在X不是帶負電荷的氨基酸的情況下，Xn選自任意氨基酸，優選A,G，P，Y或帶正電荷的天然的、非天然的或衍生的氨基酸，優選K，R，H，鳥氨酸或高精氨酸；Xu獨立地選自任意氨基酸，優選L或Q;在Xn不是帶負電荷的氨基酸的情況下，Xw獨立地選自任意氨基酸，優選帶正電荷的氨基酸例如K，R，H，鳥氨酸或高精氨酸或小柔性氨基酸例如甘氨酸或P-丙氨酸；條件是，Xi。、Xn或Xn中的至少一個是帶負電荷的氨基酸。當然，本發明的該實施方案也包含選自下述的肽上述肽共有序列的功能等同片段、衍生物和變體，其具有EPO模擬活性，且在位置X10、Xn或X^中的至少一個處具有帶負電荷的氨基酸。優選地，選擇在位置l和Xu處具有允許形成共價鍵并從而在肽內創建連接橋的側鏈官能度的氨基酸，使得它們能彼此形成共價鍵(請參考上面本發明第一個實施方案的描述)。合適的氨基酸因而是攜帶用于形成二硫鍵的SH-基團的氨基酸(例如半胱氨酸和半胱氨酸衍生物例如高半胱氨酸)或硫代賴氨酸，從而僅提及少數合適候選物。形成硒橋的氨基酸例如硒代半胱氨酸也是合適的。但是，如上所述，能形成諸如酰胺鍵或疏醚鍵的共價鍵的其它氨基酸也是合適的。因此，在位置X6和X"處的優選氨基酸的選擇包含C，K，E，ct-氨基-Y-溴代丁酸，高半胱氨酸(hoc)，和半胱氨酸衍生物例如硒代半胱氨酸，硫代賴氨酸。這適用于本發明的所有實施方案。存在于根據本發明的第三個實施方案的肽中的帶負電荷的氨基酸可以選自*天然的帶負電荷的氨基酸，尤其是D或E;*非天然的帶負電荷的氨基酸，*最初帶正電荷的氨基酸，但是它們被合適的化學基團衍生以給它們提供帶負電荷的基團。非天然的帶負電荷的側鏈可以描述伸長的側鏈。伸長的側鏈可能能更有效地接觸EP0受體的帶正電荷的氨基酸，從而增加結合能力。這樣的氨基酸的實例是ot-氨基已二酸(Aad)，2-氨基庚二酸(2-氨基庚二酸)或oc-氨基辛二酸(Asu)。如指出的，通過將帶正電荷的氨基酸轉化成帶負電荷的氨基酸，也可能提供帶負電荷的氨基酸。由此也可能伸長側鏈。這可以提高對EP0受體的結合性質。根據該新穎策略，用合適的試劑衍生化帶正電荷的氨基酸例如賴氨酸(或同源的更短的氨基酸，如Dap，Dab或鳥氨酸)，提供帶負電荷的基團。合適的試劑是例如二酸例如二羧酸或二磺酸。戊二酸，已二酸，琥珀酸，庚二酸和辛二酸可以作為實例提及。下面提供了用戊二酸伸長且帶上負電荷的賴氨酸的一個合適的實例對于提高本發明的EP0模擬肽的結合性質非常有利的這種延伸策略也可以用于提高不同分子的特征。因而它是一種完全獨立的技術構思。因而，也提供了修飾的氨基酸，其中用合適的化學基團衍生化帶正電荷的氨基酸，以便為帶正電荷的氨基酸提供帶負電荷的基團。從而將最初帶正電荷的氨基酸轉化成帶負電荷的氨基酸。如果化學修飾延伸修飾的另一個可選方案是賴氨酸與已二酸的化合:也會導致側鏈的伸長(這經常提高結合能力)，這是特別有利的。上面描述了修飾的合適試劑。如上所述，根據本發明的第二方面，僅僅必需的是，氨基酸位置X,。、Xn和/或Xn中的一個被帶負電荷的氨基酸占據，盡管2個或所有位置也可以具有各自的氨基酸。但是，在這些位置中的一個或多個未被帶負電荷的氨基酸占據的情況下，優選地帶正電荷的氨基酸存在于X10、L和/或X^中的其它位置。該帶正電荷的氨基酸優選地選自*天然帶正電荷的氨基酸，例如賴氨酸，精氨酸，組氨酸和鳥氨酸；非天然的帶正電荷的氨基酸，例如高精氨酸或二氨基丁酸；*最初帶負電荷的氨基酸，但是它們被合適的化學基團衍生以給它們提供帶正電荷的基團。已經表明，當在位置X,。和/或Xn處存在帶正電荷的氨基酸(它具有比賴氨酸伸長的側鏈)時，可以創建非常有效的EP0模擬肽。根據一個實施方案，通過將延伸單元摻入氨基酸(它不一定是賴氨酸)的側鏈，伸長帶正電荷的氨基酸。也可以將更短的氨基酸用作原料，然后通過適當的常規化學反應來伸長。通常，延伸單元是脂族(例如CH2單元)或芳族(例如苯基或萘基單元)基團。適當氨基酸的實例是例如高精氨酸，氨基苯丙氨酸和氨基萘基丙氨酸。由于其更大的多樣性，非蛋白原性的氨基酸是優選的。與在至少一個其它氨基酸位置X^X17和/或x19處的帶負電荷的氨基酸相組合的該實施方案會產生有效的EPO模擬肽，它們是在人和動物模型中具有差異活性模式的合適候選物。對于用于獸醫用途的EP0模擬肽，優選地帶負電荷的氨基酸位于位置19。實驗表明，具有各個特征的肽經常具有對動物EPO受體的更好的結合能力。對于獸醫用途，特別優選地，在位置19的帶負電荷的氨基酸選自E，D或Aad。有益的是將該特征與在位置13的萘基丙氨酸(優選Nal-l)相組合。此外，優選地帶正電荷的氨基酸是在位置17，優選K或Har。也優選地，帶正電荷的氨基酸是在位置10，優選賴氨酸。在圖7c中顯示了該實施方案的EPO模擬肽的特別優選的實例。更具體地，用于獸醫用途的EP0模擬肽序列包含選自下述的氨基酸序列Ac-GGTYSCHFGKLT-Nal-VCK-Har-QDG-AmAc-GGTYSCHFGKLT-Nal-VCK-Har-Q-Aad-G-AmGGGTYSCHFGKLT-Nal-VCKKQ-Aad-G-Am本發明的該第三實施方案也可以與下述特征相組合，其中Xs是D-氨基酸，優選D-苯丙氨酸。該實施方案的擴展的共有序列包含下述額外的氨基酸X4可以是F、Y、或F或Y的衍生物，其中所述F或Y的衍生物攜帶至少一個吸電子取代基。如上面結合第二個實施方案已經描述的，所述吸電子取代基優選地選自氨基，硝基和卣素。合適實例是4-氨基-苯丙氨酸，3-氨基-酪氨酸，3-碘-酪氨酸，3-硝基-酪氨酸，3，5-二溴-酪氨酸，3，5-二硝基-酪氨酸，3，5-二碘-酪氨酸。Xs可以選自任意氨基酸，但是，它優選是A，H，K，L，M，S，T或I。X3也可以存在，且可以獨立地選自任意氨基酸，優選D,E，L，N，S，T或V。此外，特別在單體單元形成二聚體的情況下，優選地在單體起始(例如位置L和X2)和單體結尾(例如L和XJ處的氨基酸描述小柔性氨基酸例如甘氨酸或P-丙氨酸，以便提供柔性構象。如結合本發明的第二個實施方案已經描述的，在位置Xu提供萘基丙氨酸(nal-l或nal-2)是有利的。Nal在位置13的摻入導致如上所述的肽單體之間更強的疏水相互作用，從而潛在地增強單體肽鏈的二聚化，并可能穩定化肽二聚體的構象，從而提高EP0模擬活性。2個實施方案(第二個和第三個)的組合是非常有利的。在圖7a中提供了包含萘基丙氨酸的合適肽序列的實例。根據本發明的第四個實施方案，提供了長度為至少IO個氨基酸的肽，其能結合EPO受體，且具有激動劑活性，其包含下述核心氨基酸序列XgXgXi0X11X12X13X14X15其中每個氨基酸選自天然的或非天然的氨基酸，且其中Xs是D-氨基酸；X,是G或G的保守交換；A。是脯氨酸，脯氨酸的保守交換或脯氨酸的非保守交換；或X,和Xw被單個氨基酸置換；Xu選自任意氨基酸；Xu是不帶電荷的極性氨基酸或A;優選蘇氨酸，絲氨酸，天冬酰胺或谷氨酰胺；X"是D，E，I，L或V;X^是具有能形成共價鍵的側鏈官能度的氨基酸或A或ot-氨基-Y-溴代丁酸。也包含選自下述的肽根據第四個實施方案的肽共有序列的功能等同片段、衍生物和變體，其具有EPO模擬活性，且在位置8具有D-氨基酸。本發明的第四個實施方案的突出特征是，在位置Xs存在D-氨基酸。D-苯丙氨酸是優選的。該實施方案似乎是區分動物和人EPO-受體的良好候選物。在位置8的oc-C-原子的反轉，導致苯基的不同幾何學位置，它可以更好地適合動物受體，尤其犬EP0R。本發明的該第四個方面也可以與隨后所述的其它有利實施方案相組合。根據本發明的第四個實施方案的肽也可以用下述擴展的核心氨基酸序列來描述X6X7X8X9X10X11X12X13X"X15其中每個氨基酸選自天然的或非天然的氨基酸，且其中X6是具有能形成共價鍵的側鏈官能度的氨基酸或A或ct-氨基-Y-溴代丁酸；頁X7是R，H，L，W或Y或S;Xs是D-M，D-F，D-I，D-Y，D-H，D-高絲氨酸甲基醚或D-正異亮氨酸；X,是G或G的保守交換；L是脯氨酸，脯氨酸的保守交換或脯氨酸的非保守交換；或X,和Xt。被單個氨基酸置換；Xn選自任意氨基酸；Xu是不帶電荷的極性氨基酸或A;優選蘇氨酸，絲氨酸，天冬酰胺或谷氨酰胺；Xn是D，E，I，L或V;X^是具有能形成共價鍵的側鏈官能度的氨基酸或A或oc-氨基-Y-溴代丁酸。本發明的第四個實施方案的另一個實施方案可以用下述氨基酸序列來描述X6X7X8X9X10X11X12X13X14X15X15X17X13X19其中X6-X15具有上面結合本發明的第四個實施方案所述的含義，且其中Xu獨立地選自任意氨基酸，優選G，K，L，Q，R,S，Har或T;X!7獨立地選自任意氨基酸，例如A，G，P，Y或帶電荷的天然的、非天然的或衍生的氨基酸，在帶正電荷的氨基酸的情況下，優選K，R，H，鳥氨酸或高精氨酸；Xis獨立地選自任意氨基酸，優選L或Q;X19獨立地選自任意氨基酸。也與本發明的第四個實施方案相結合，優選地帶電荷的氨基酸是在位置Xn、Xn和/或X^。實驗表明，用帶電荷的氨基酸會實現非常好的EPO模擬活性程度。但是，如果與其它位置的正確氨基酸相組合，在這些位置的不帶電荷的、但是極性的氨基酸(例如絲氨酸，蘇氨酸，天冬酰胺或谷氨酰胺)通常也會提供良好結果。在位置Xn、Xn和/或X^處的帶電荷的氨基酸是帶正電荷的或帶負電荷的，且選自天然氨基酸，非天然氨基酸，和衍生的氨基酸。根據一個方面，X1Q、Xn和/或Xw是帶負電荷的氨基酸。所迷帶負電荷的氨基酸優選地選自爭天然的帶負電荷的氨基酸，尤其是D或E;*非天然的帶負電荷的氨基酸，參最初帶正電荷的氨基酸，但是它們被合適的化學基團衍生以給它們提供帶負電荷的基團。非天然的帶負電荷的側鏈可以描述伸長的側鏈，這樣的氨基酸的實例是ct-氨基已二酸(Aad)，2-氨基庚二酸(2-氨基庚二酸)或oc-氨基辛二酸(參見上面)。如指出的，通過將帶正電荷的氨基酸轉化成帶負電荷的氨基酸，也可能提供帶負電荷的氨基酸。由此也可能伸長側鏈，從而潛在地增強結合性質。根據該新穎策略(細節參見上面)，用合適的試劑衍生化賴氨酸(或同源的更短的氨基酸，如Dap，Dab或鳥氨酸)，提供帶負電荷的基團。合適的試劑是例如二酸例如二羧酸或二磺酸。戊二酸，已二酸，琥珀酸，庚二酸和辛二酸可以作為實例提及。根據另一個方面，所述肽攜帶在位置X,。、Xn和/或Xw處的帶正電荷的氨基酸。所述帶正電荷的氨基酸選自*天然帶正電荷的氨基酸，例如賴氨酸，精氨酸，組氨酸或鳥氨酸；*非天然的帶正電荷的氨基酸，*最初帶負電荷的氨基酸，但是它們被合適的化學基團衍生以給它們提供帶正電荷的基團。已經表明，當在肽的位置t。和/或Xu處存在具有與賴氨酸相比伸長的側鏈的氨基酸時，可以創建非常有效的EP0模擬肽。根據一個實施方案，通過將延伸單元摻入氨基酸(它不一定是賴氨酸)的側鏈，伸長帶正電荷的氨基酸。也可以將更短的氨基酸用作原料，然后通過適當的常規化學反應來伸長(參見上面)。通常，延伸單元是脂族(例如CH2單元)或芳族(例如苯基或萘基單元)基團。適當的氨基酸的實例是例如高精氨酸，氨基苯丙氨酸和氨基萘基丙氨酸。由于它們的更大的多樣性，非蛋白原性的氨基酸是優選的。一個替代途徑是，用帶正電荷的基團衍生化氨基酸，所述帶正電荷的基團不僅允許電荷反轉(成正電荷)，而且會提供延伸分子的容易途徑。根據該實施方案的進一步發展，所述肽用下述擴展的核心氨基酸序列來定義X4X5X6X7X8X9X10X11X12X13X14X15X16X17X18X19其中Xe至Xw具有上面結合本發明的第四個方面所述的含義，且其中X4-是F、Y、或F或Y的衍生物，其中所述F或Y的衍生物攜帶至少一個吸電子取代基；X5-選自任意氨基酸，優選A，H，K，L，M，S，T或I。所述吸電子取代基優選地選自氨基，硝基和卣素。l也可以選自4-氨基-苯丙氨酸，3-氨基-酪氨酸，3-碘-酪氨酸，3-硝基-酪氨酸，3，5-二溴-酪氨酸，3，5-二硝基-酪氨酸，3，5-二碘-酪氨酸。X3也可以存在，且可以獨立地選自任意氨基酸，優選D，E，L，N，S，T或V。此外，在單體單元形成二聚體的情況下，優選地在單體起始(例如位置Xi和X2)和單體結尾(例如Xw和X2。)的氨基酸位置描述小柔性氨基酸例如甘氨酸或p-丙氨酸，以便提供構象柔性。如結合本發明的第二個實施方案已經描述的，有利地提供在位置X,3的萘基丙氨酸。Nal在位置13的摻入導致如上所述的肽單體之間更強的疏水相互作用，從而潛在地增強單體肽鏈的二聚化，并可能穩定化肽二聚體的構象，從而提高EPO模擬活性。根據本發明的第五個實施方案，提供了一種肽，它也是具有物種區分活性的EPO模擬肽的良好候選物。該肽包含至少IO個氨基酸，能結合EP0受體，且具有激動劑活性。該EPO模擬肽包含下述核心氨基酸序列X4X5X6X7X8X9X10X11X12X13X14X15其中每個氛基酸選自天然的或非天然的氨基酸，且其中L-是F、或F或Y衍生物，其中所述F或Y的衍生物攜帶至少一個吸電子取代基；Xs-選自任意氨基酸，優選A，H，K，L，M，S，T或I。X6是具有能形成共價鍵的側鏈官能度的氨基酸或A或oc-氨基-Y-溴代丁酸；X7是R，H，L，W或Y或S;Xs是M，F，I，Y，H，高絲氨酸甲基醚或正異亮氨酸；X,是G或G的保守交換；X:。是脯氨酸的非保守交換或X,和Xn被單個氨基酸置換；Xu選自任意氨基酸；Xu是不帶電荷的極性氨基酸或A;優選蘇氨酸，絲氨酸，天冬酰胺或谷氨酰胺；X"是D，E，I，L或V;Xu是具有能形成共價鍵的側鏈官能度的氨基酸或A或a-氨基-y-溴代丁酸。也包含選自下述的肽上述肽共有序列的功能等同片段、衍生物和變體，其具有EPO模擬活性，且在位置X,具有選自F、或F或Y衍生物的氨基酸，其中所述F或Y的衍生物攜帶至少一個吸電子取代基。所述吸電子取代基可以選自氨基，硝基和卣素。X,優選地選自4-氨基-苯丙氨酸，3-氨基-酪氨酸，3-碘-酪氨酸，3-硝基-酪氨酸，3，5-二溴-酪氨酸，3，5-二硝基-酪氨酸，3，5-二碘-酪氨酸。在從屬權利要求中描述了本發明的該第五個實施方案與其它實施方案的其它有利的組合。關于各個特征的細節，也參見上面的描述，結合各個實施方案詳細解釋了所述特征。X,突變和D-苯丙氨酸突變的組合是特別合適的。根據本發明的另一個實施方案，提供了幾種替代性的肽，用于提供改良的EPO模擬肽。根據本發明的該第六個實施方案，提供了長度為至少10個氨基酸的肽，其能結合EPO受體，且具有激動劑活性。該第六個實施方案的可選方案(a)包含至少一個下述的核心氨基酸序列X9X1。X11X12X13;X9X1。X11X12X13X14X15X16乂i7或X9X1oXi1X12Xl3X14X15X^X17X18乂1其中每個氨基酸選自天然的或非天然的氨基酸，且其中X,是G或G的保守交換；Xu選自任意氨基酸；Xu是不帶電荷的極性氨基酸或A;優選蘇氨酸，絲氨酸，天冬酰胺或谷氨酰胺；X,3是W，萘基丙氨酸，A或F;Xm是D，E，I，L或V;x^是具有能形成共價鍵的側鏈官能度的氨基酸或a或oc-氨基-y-溴代丁酸；其中位置X^、X16、Xn或X19中的至少一個具有帶正電荷的非蛋白原性的氨基酸，其具有與賴氨酸相比伸長的側鏈。也包含選自下述的肽上述肽共有序列的功能等同片段、衍生物和變體，其具有EPO模擬活性，且在位置Xi。、X16、Xn或Xw中至少一個處具有氨基酸，該氨基酸描述帶正電荷的非蛋白原性的氨基酸，其具有與賴氨酸相比伸長的側鏈。本發明的該第六個實施方案描述了一個替代策略，該替代策略通過在位置X,。、X16、Xn和/或X19中至少一個處延伸EPO模擬肽的帶正電荷側鏈，也開辟了潛在地區分人和動物受體的選擇。該實施方案提供了區分肽的合適候選物，因為在鼠和犬EP0受體中存在更少的帶負電荷的對接點，更短的帶正電荷的側鏈(例如賴氨酸)更難達到這些對接點。因而，具有更長側鏈的帶正電荷殘基的摻入，具有增加肽對EP0受體的親和力的高潛力。在申請人的早期申請PCT/EP2005/012075中已經公開了在位置X^和/或Xn處具有高精氨酸的序列。根據有些國家的專利法，該公開內容可能構成現有技術。在可適用且可能置疑上述共有序列的專利性的國家，本發明第六個實施方案的第一個可選方案的共有序列為了法律原因可以不包含在PCT/EP2005/012075中公開的序列。這可以應用于選自下述的共有序列*一種肽，尤其是能結合EPO受體的肽，其包含下述氨基酸序列XsXyXgXsXi0X11X12X13X14X15其中每個氨基酸選自天然或非天然氨基酸，且X6是C，A，E，oc-氨基-Y-溴代丁酸或高半胱氨酸(hoc);X,是R，H，L，W或Y或S;Xs是M，F，I，高絲氨酸甲基醚或正異亮氨酸；X,是G或G的保守交換；X:。是HarXn選自任意氨基酸；Xu是T或A;X"是W，l-nal,2-nal，A或F;X4是D，E，I，L或V;X^是C，A，K，a-氨基-Y-溴代丁酸或高半胱氨酸(hoc)條件是，X6或Xu是C或hoc或*一種肽，其包含下述氨基酸序列X3X4X5X6X7X3X9X10X11X12X13X14X15X16X17X18其中X6至Xu具有上述含義，且其中X3獨立地選自任意氨基酸，優選D，E，L，N，S,T或V;Xs獨立地選自任意氨基酸，優選A，H，K，L，M，S，T或I。Xw獨立地選自任意氨基酸，優選G，K，L，Q，R，S或T;Xn是高精氨酸；x18獨立地選自任意氨基酸。或GGTYSCSFGKLTWVCK-Har-QGGGGTYSCHFG-Har-LTWVCK-Har-QGG這些序列已經描迷在申請人的早期PCT申請PCT/EP2005/012075中。在PCT/EP2005/012075的公布后的公開內容不會導致專利性問題的國家，上面列出的共有序列和肽序列不需要從第六個實施方案的第一個可選方案的寬共有序列中放棄。根據本發明的第六個實施方案的進一步發展，所述肽包含下述擴展的核心氨基酸序列XsXyXsXgX!0X11X12X13X14X15X1eX!7X19其中每個氨基酸選自天然的或非天然的氨基酸，且其中X6是具有能形成共價鍵的側鏈官能度的氨基酸或A或ot-氨基-y-溴代丁酸；X7是R，H，L,W或Y或S;X8是M，F，I，Y，H，高絲氨酸曱基醚或正異亮氨酸；X9是G或G的保守交換；在Xi。不是帶正電荷的非蛋白原性的氨基酸(其具有與賴氨酸相比伸長的側鏈)的情況下，X:。是脯氨酸，脯氨酸的保守交換或脯氨酸的非保守交換，或X9和Xn被單個氨基酸置換；Xu選自任意氨基酸；Xu是不帶電荷的極性氨基酸或A;優選蘇氨酸，絲氨酸，天冬酰胺或谷氨酰胺；Xu是W，l-nal,2-nal，A或F;Xw是D，E，I，L或V;x15是具有能形成共價鍵的側鏈官能度的氨基酸或a或oc-氨基-y-溴代丁酸；'在x^不是帶正電荷的非蛋白原性的氨基酸(其具有與賴氨酸相比伸長的側鏈)的情況下，Xw獨立地選自任意氨基酸，優選G，K，L，Q，R，S或T;在Xn不是帶正電荷的非蛋白原性的氨基酸(其具有與賴氨酸相比伸長的側鏈)的情況下，Xu選自任意氨基酸，優選A，G，P，Y或帶正電荷的天然的、非天然的或衍生的氨基酸，優選K，R，H或鳥氨酸；Xu獨立地選自任意氨基酸，優選L或Q;在Xw不是帶正電荷的非蛋白原性的氨基酸(其具有與賴氨酸相比伸長的側鏈)的情況下，Xw獨立地選自任意氨基酸，優選帶電荷的氨基酸例如帶正電荷的氨基酸例如K，R，H或鳥氨酸或帶負電荷的氨基酸例如D，E或Aad;條件是，XmX16、Xn或X19中的至少一個是帶正電荷的非蛋白原性的氨基酸，其具有與賴氨酸相比伸長的側鏈。根據另一個實施方案，Xi。、X16、Xn或X19中的至少一個是帶正電荷的氨基酸，且其中所述帶正電荷的氨基酸優選地選自參天然帶正電荷的氨基酸，例如賴氨酸，精氨酸，組氨酸和鳥氨酸；非天然的帶正電荷的氨基酸，參最初帶負電荷的氨基酸，但是它們被合適的化學基團衍生以給它們提供帶正電荷的基團；條件是，Xlfl、X16、&7或X19中的至少一個是帶正電荷的非蛋白原性的氨基酸，其具有與賴氨酸相比伸長的側鏈。如上所述，通過側鏈的延伸單元，可以延伸帶正電荷的氨基酸，其中所述延伸單元脂族或芳族基團。所述延伸可以通過例如CH2單元來提供，其中CH2單元的數目優選地是1至6。或者，所述延伸也可以用芳族基團例如苯基或萘基單元來實現。帶正電荷的非蛋白原性的與賴氨酸相比伸長的氨基酸優選地是非天然氨基酸。非天然氨基酸會提供更多選擇，從而減小發現完全匹配的伸長的氨基酸的可能性。合適的非天然的伸長的氨基酸的實例是例如高精氨酸，氨基苯丙氨酸和氨基萘基丙氨酸。在位置Xn處的伸長的帶正電荷側鏈似乎與鼠/犬EP0受體更好地相互作用。尤其證實了高精氨酸(它是人工伸長的同源精氨酸)是合適的。該氨基酸勝過賴氨酸，且能與鼠/犬EP0受體中更遠的帶負電荷的氨基酸相互作用(動物EPO受體中的Glu60和Glu62)。在位置X!。處的伸長的帶正電荷側鏈具有與上述在位置Xn處的突變類似的作用。也在該情況下，通過延伸可以達到更遠的帶負電荷的氨基酸(鼠/犬EPO受體中的Glu34)。希望組合在位置X,。和Xn的突變/特征。在這2個位置均攜帶伸長的帶正電荷的氨基酸(例如高精氨酸)的肽的幾何學，指示著與EPO受體的強相互作用。所述的氨基酸優選是非蛋白原性的。來自每個高精氨酸殘基的多個氫鍵，強化了提供的靜電相互作用的強度。根據本發明的第六個實施方案，X1Q、X16、Xn和/或Xn中的至少一個具有非蛋白原性的伸長的帶正電荷的氨基酸。Xi。、X^Xn和/或X19中的其它位置也可以具有帶電荷的氨基酸，它是帶正電荷的或帶負電荷的，且選自天然氨基酸，非天然氨基酸，和衍生化的氨基酸。根據一個可選方案，Xi。、Xn和/或Xi,中的至少一個是帶負電荷的氨基酸。在X!。、X!7和/或Xu是帶負電荷的氨基酸的情況下，所述帶負電荷的氨基酸優選地選自參天然的帶負電荷的氨基酸，尤其是D或E;*非天然的帶負電荷的氨基酸，*最初帶正電荷的氨基酸，但是它們被合適的化學基團衍生以給它們提供帶負電荷的基團。非天然的帶負電荷的側鏈可以具有伸長的側鏈。這樣的氨基酸的實例是oc-氨基已二酸(Aad)，2-氨基庚二酸(2-氨基庚二酸)或oc-氨基辛二酸。如指出的，通過將帶正電荷的氨基酸轉化成帶負電荷的氨基酸，也可能提供帶負電荷的氨基酸。由此也可能伸長側鏈，從而增強結合性質。根據該新穎策略，用合適的試劑衍生化賴氨酸(或同源的更短的氨基酸，如Dap，Dab或鳥氨酸)，提供帶負電荷的基團。合適的試劑是例如二酸例如二羧酸或二磺酸。戊二酸，已二酸，琥珀酸，庚二酸和辛二酸可以作為實例提及。也請參考我們在上面對該實施方案的詳細討論。在位置X1Q、X16、Xn和/或Xw中的至少一個具有伸長的帶正電荷的非蛋白原性的氨基酸的條件下，該肽也可以在位置X1Q、X16、Xn和/或Xw處攜帶"正常的，，帶正電荷的氨基酸。所述帶正電荷的氨基酸選自參天然帶正電荷的氨基酸，例如賴氨酸，精氨酸，組氨酸或鳥氨酸；非天然的帶正電荷的氛基酸，*最初帶負電荷的氨基酸，但是它們被合適的化學基團衍生以給它們提供帶正電荷的基團。本發明的第六個實施方案的進一步發展提供了在X8的D-氨基酸，優選D-苯丙氨酸。根據第六個實施方案的進一步發展，所述肽包含下述擴展的核心氨基酸序列X4X5X6X7X8X9X10X11X12X13X14X15X15X17X18X19其中X6至Xw具有上述含義，且其中X,-是F、Y、或F或Y的衍生物，其中所述F或Y的衍生物攜帶至少一個吸電子取代基；Xs-選自任意氨基酸，優選A，H，K,L，M，S，T或I。如上所述，所述吸電子取代基可以選自氨基，硝基和卣素。實例是4-氨基-苯丙氨酸，3-氨基-酪氨酸，3-碘-酪氨酸，3-硝基-酪氨酸，3，5-二溴-酪氨酸，3，5-二硝基-酪氨酸，3，5-二碘-酪氨酸。X3也可以存在，且可以獨立地選自任意氨基酸，優選D，E，L，N，S，T或V。此外，在單體單元通過連續的肽接頭形成二聚體的情況下，優選地在單體的N-末端區域(例如位置Xi和X2)和單體的C-末端區域(例如X"和X2。)的氨基酸描述小柔性氨基酸例如甘氨酸或p-丙氨酸，以便提供柔性構象。為了提高EP0模擬活性和/或為了實現人和動物EP0-R的區分，除了總體的EP0模擬肽以外，本申請描述了不同的方式和策略。所述的本發明的不同策略和方面可以彼此組合，以便獲得具有需要的性質的"定制的"EP0模擬肽。因而重要的是認為，所述策略可以理解為設計單元，它們可以獨立地彼此組合，以便獲得具有需要的性質的EP0模擬肽。例如，第二個實施方案的特征(在位置Xu處的萘基丙氨酸)可以與第三個實施方案的特征(Xi。、Xn和X^中的至少一個是帶負電荷的)相組合。根據上述實施方案1-6的肽的長度優選地是10至40或50或60個氨基酸。在優選的實施方案中，肽共有序列的長度是至少10，15，18，20或25個氨基酸。當然，所述共有序列可以分別嵌入更長的序列中。所述肽共有序列可以視作形成EPO受體的結合域。如上面和下面所述的，也可能將單體肽單元(結合域)組合成肽二聚體或甚至多聚體。在肽接頭用于制備二聚體或多聚體的情況下，由于二聚化和/或多聚化，也會制備更長的肽。作為EPO模擬肽，它們能結合EPO受體。根據本發明的EPO模擬肽序列可以具有N-末端和/或C-末端乙酰化和酰胺化。有些氨基酸也可以被砩酸化。根據本發明的肽，除了L-氨基酸或立體異構D-氨基酸之外，還可包含非天然/非常規的氨基酸，例如a，oc-二置換的氨基酸、N-烷基氨基酸或乳酸，例如l-萘丙氨酸、2-萘丙氨酸、高絲氨酸-曱基醚、P-丙氨酸、3-吡啶丙氨酸、4-羥脯氨酸、O-磷酸絲氨酸、N-甲基甘氨酸(肌氨酸)、高精氨酸、N-乙酰絲氨酸、N-乙酰甘氨酸、N-甲酰甲硫氨酸、3-甲基組氨酸、5-羥基賴氨酸、正-賴氨酸、5-氨基乙酰丙酸或氨基戊酸。特別優選使用N-甲基甘氨酸(MeG)和N-乙酰甘氨酸(AcG)，特別是在末端位置。同樣在本發明范圍內的是，作為所定義肽的逆肽(retropeptide)、反向肽(inversopeptide)和逆/反向肽的肽，以及全部由D-氨基酸組成的那些肽。本發明還涉及肽的衍生物，如甲硫氨酸的氧化產物、或脫酰胺基的谷氨酰胺、精氨酸以及c末端酰胺。根據本發明的實施方案的一個發展，所述肽確實具有置換氨基酸殘基X9和X!。的單個氨基酸。在這個實施方案中，同樣兩個殘基都可以'根據進二步發i，第一個^第六個實:方^中所述的肽在1和/或x15包含作為具有成橋官能度的氨基酸c，半胱氨酸衍生物例如硒代半胱氨酸，E，K或hoc，和/或X,作為R，H或Y或S,和/或Xs作為F或M，和/或X9作為G或A，優選G，和/或X!。作為K或Har，和/或Xu作為V，L，I，M，E，A，T或正異亮氨酸，和/或Xu作為T，和/或X13作為W或萘基丙氨酸，和/或X"作為D或V，和/或Xn作為P，Y或A或堿性的天然的或非天然的氨基酸。但是，也優選地，如上所述，X17是K或具有帶正電荷側鏈的非天然氨基酸例如高精氨酸。根據本發明的片段、衍生物和變體多肽基本上保留了與根據本文所述單個實施方案的肽相同的生物學功能或活性。為了將它們適當地與現有技術區分開，片段、衍生物和變體具有與各個實施方案相同的特征-關于實施方案1，它們在位置X!。處具有構成脯氨酸的非保守交換的氨基酸，或其中X,和Xi。被單個氨基酸置換；-關于實施方案2，它們在位置X^處具有構成脯氨酸的非保守交換的氨基酸，或其中X,和L。被單個氨基酸置換，且具有在位置X13處的萘基丙氨酸；-關于實施方案3，位置L。、Xn或Xw中的至少一個是帶負電荷的氨基酸；-關于實施方案4，它們在位置X8處攜帶D-氨基酸；-關于實施方案5，它們在位置Xi。處具有構成脯氨酸的非保守交換的氨基酸，或其中X9和Xi。被單個氨基酸置換，且在位置^處具有F、或F或Y衍生物，其中所述F或Y的衍生物攜帶至少一個吸電子取代基；-關于實施方案6，位置Xu、X16、Xn或Xw中的至少一個具有帶正電荷的非蛋白原性的氨基酸，其具有與賴氨酸相比伸長的側鏈。"片段"小于全長肽(或多肽，本文使用的術語肽不包含任何大小限制)，它基本上保留了類似的功能活性。"衍生物"包括已經被化學修飾以提供額外的結構和/或功能的肽。衍生物可以通過天然過程或通過化學修飾技術來修飾，這二者是本領域眾所周知的。修飾可以發生在多肽的任意位置，包括肽主鏈、氨基酸側鏈和氨基或羧基末端。其它化學修飾包括例如乙酰化，酰化，酰胺化，不同化學部分的共價結合，交聯，環化，二疏鍵或其它橋形成，羥基化，甲基化，氧化，PEG化，硒化。根據本發明的肽的"變體"包括相對于在共有序列中定義的氨基酸具有一個或多個氨基酸序列交換的多肽。當然，它們也可以含有除了天然氨基酸以外的氨基酸。例如，在根據本發明的多肽的氨基酸序列中，可以進行一個或多個保守性氨基酸置換，以便獲得如上所述的本發明不同實施方案的功能變體。所述置換發生在例如具有非極性側鏈的氨基酸、具有極性側鏈的天然的或非天然的不帶電D-或L-氨基酸、具有芳族側鏈的氨基酸、天然的或非天然的帶正電荷的D-或L-氨基酸、天然的或非天然的帶負電荷的D-或L-氨基酸以及相似大小和分子量的任何氨基酸中，其中原始氨基酸的分子量不應與原始氨基酸的分子量偏差超過大約+/-25%，并保持對激素紅細胞生成素受體的結合能力，具有激動效應。優選地，置換不超過l、2或3個氨基酸。優選在10和17位上未引入脯氨酸的序列變體。本文中所述的肽序列可被用作適宜的單體肽單元，其構成EP0受體的結合結構域。它們可以以其單體形式被使用，因為它們結合EP0受體。如本文中所述的，它們優選被用作二聚體，因為已顯示通過單體結合單元的二聚化增強了誘導EP0受體二聚化的能力并因此增強了生物學活性。因此，顯然許多不同的肽都在本發明的范圍之內。但是，已經發現序列Ac-VLPLYRCRMGRETWECMRAAGVTK-NH2具有一定的缺點，并因此根據本發明不是優選的。在所述單個肽序列的起點(N未端)和終點(C未端)，可除去和/或加入至多五個氨基酸。不言而喻，只要保存了肽功能，大小并不相關。此外，請注意，可能太短以致作為單體不能表現其活性的單獨肽序列通常在二聚化后起激動劑的作用。因此，優選以它們的二聚體形式使用這類肽。因此，本發明的精神也包括各自截短和或延長的實施方案。在本發明中，大寫字母形式的單字母代碼的縮寫是標準多肽命名法的那些縮寫，其通過添加非天然氨基酸而被擴展。<table>tableseeoriginaldocumentpage57</column></row><table>pL-脯氨酸G甘氨酸Ava，5-Ava5-氦基戊酸Als，5-Als5-氨基乙酰丙酸MeGN-甲基甘氨酸AcGN-乙酰甘氨酸Hsm高絲氨酸曱基醚Har高精氨酸lnall-萘丙氨酸2nal2-萘丙氨酸fiAlaP-丙氨酸hoc/hcy高半胱氨酸Ac乙酰化的Am酰胺化的Dap二氨基丙酸Dab二氨基丁酸Aada-氨基已二酸Asucc-氨基辛二酸Adi已二酸，Glr戊二酸Sec硒代半胱氨酸如上所述，本發明還包括通過單個氨基酸的保守交換而進行的所述肽和所定義的肽共有序列的修飾。這類交換改變結合分子的結構和功能，但在大多數情況下只是輕微地改變。在保守交換中，一個氨基酸被具有相似性質的一組中的另一個氨基酸置換。相應組的實例是-具有非極性側鏈的氨基酸A、G、V、L、I、P、F、W、M-具有極性側鏈的不帶電荷的氨基酸S、T、G、C、Y、N、Q-具有芳族側鏈的氨基酸F、Y、W-帶正電荷的氨基酸K、R、H-帶負電荷的氨基酸D、E-相似大小或分子量的氨基酸，其中置換氨基酸的分子量與原始氨基酸的分子量偏差最大為+/-25%(或+/-20%、+/-15%、+/-10%)。不言而喻，在具有帶正電荷的側鏈的組的情況下，該組還包括具有各自側鏈特性的非蛋白原性的、天然的或非天然的氨基酸，例如高精氨酸。如果不能明確將置換脯氨酸10的分子例如非天然氛基酸分配到以它們的側鏈性質為特征的上述組中，通常應將其看成是根據本發明的脯氨酸的非保守性置換。關于對這些稀有氨基酸分類，根據分子量的分類輔助可能是有幫助的。更具體地說，Wrighton等人(美國專利5，773，569，以及相關專利)使用噬菌體展示技術進行了詳細考查，其氨基酸可被置換，同時保持活性。他們還研究和公開了關于可能截短型，即給定EPO模擬肽的最小長度的數據。但是，靠近中心甘氨酸殘基的脯氨酸似乎是獲得活性肽的唯一可能性。優選地，所述肽在N末端被修飾成AcG，和在C末端修飾成MeG。如上所述，優選地所述肽包含2個EP0模擬共有序列，且因而包含2個單體結合單元，從而形成二聚體(或在氨基酸接頭用于二聚化的情況下，連續的二價肽)。為了形成二聚體，可以從所有上述實施方案選擇單體EPO模擬肽單元。根據本發明的單體結合單元也可以與本領域已知的EPO模擬肽的單體結合單元相組合。根據本發明的EPO模擬肽單體或二聚體還可包含至少一個間隔子部分。優選所述的間隔子將單體或二聚體的接頭連接至水溶性聚合物部分或保護基上，其例如可以是PEG。PEG優選的分子量為至少3KD，優選在20和60KD之間。間隔子可以是末端具有-NH-鍵或COOH-基團的C1-12部分，并任選在一個或多個可利用的碳原子上被低級烷基取代基取代。在WO2004/100997中公開了特別優選的間隔子。所有文件-WO2004/100997和WO2004/101606-通過參考引用并入本文。在W02004/101600中公開了PEG修飾的肽，其同樣通過參考引用并入本文。2條肽鏈之間的共價接頭的設計存在幾種可能的選擇，以便得到二聚體或多聚體。所述肽可以通過氨基酸側鏈或通過主鏈延伸來連接。隨后描述了4種不同的主要的共價連接2個EP0模擬肽部分的二聚化策略作為合適策略的實例。1.從C-末端至C-末端的末端二聚化NCNC借助于在每個肽的c-末端的二酮哌溱結構，可以實現二聚化。通過活化c-末端氨基酸、優選甘氨酸，可以得到二酮哌漆接頭。下圖顯示了合適的實例實例a:i-1GGTYSCHFGKLTWVCKKQGGG-GGGTYSCHFGKLTWVCKKQGGG-G」GGTYSCHFGKLTWVCKKQGGGI0GGTYSCHFGKLTWVCKKQGGG二O實例b:GGTYSCHFGKLTWVCKKQGG-G+GGTYSCHFGKLTWVCKKQGG-GI1GGTYSCHFGKLTWVCKKQGG0、乂GGTYSCHFGKLTWVCKKQGG實例c:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage61</formula>應當注意，根據本發明的第二個實施方案，在位置13處應當存在萘基丙氨酸，而不是色氨酸。上述序列僅僅用于描述二聚化原理/概念，但是，對于本申請所述的其它肽也適用。2.從N-末端至N-末端的末端二聚化<formula>formulaseeoriginaldocumentpage61</formula>下述實例代表二聚肽，其中所述單體肽之一的N-末端共價結合到另一個肽的N-末端，由此間隔子單元優選含有二羧酸構件塊。實例a:含有己二酰(C6)單元作為接頭/間隔子的二聚體的實例GGGTYSCHFGKLTWVCKKQGGCO-(CH2)4_COGGGTYSCHFGKLTWVCKKQGG通過分子建模定制該二聚體結構中的連接橋，以避免生物活性構象的扭曲變形。實例b:含有辛二酰(C8)單元作為接頭/間隔子的特制二聚體的實例GGGTYSCHFGECLTWVCKKQGGCO-(CH2>6-COGGGTYSCHE"GKLTWVCKKQGG3.通過側鏈二聚化此外，通過假定形成二聚體的單體肽的側鏈之間形成的共價鍵，可以發生二聚化。NCNC、)(7存在幾個選擇根據一個實施方案，EPO模擬肽-EPOR復合物中在位置Xw處的氨基酸(例如Gln)的側鏈彼此鄰近。這些Glnl8側鏈可以被替換為共價橋。下式顯示了通過位置18的氨基酸的側鏈連接的肽二聚體的實例GGTYSCHFGKLTWVCKKXGGIOc^/(CH2)kHN,/(CH2)nHNO^^CH2)nGGTYSCHFGKLTWVCKKXGGi-1GGTYSCHFGKIiTWVCKKXGGIS/(CH2、fCH2)nGGTYSCHFGKIjTWVCKKXGG在設計適當的接頭時，必須考慮正確的距離和幾何學。當優化具有下式的肽的幾何學時，結構與天然肽二聚體相比^f皮收縮和變形GGTYSCHFGKIjTWVCKKXGGI。/(CH2):GGTYSCHFGKIiTWVCKKXGG與以前的結果不同，通過位置18的硫代賴氨酸的二聚化不會實質性地扭曲二聚體。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage64</formula>根據一個不同的策略，使肽單體彼此相連從而形成二聚體的共價橋，是在第一個單體肽單元的C-末端氨基酸和第二個肽單體的N-末端氨基酸的側鏈之間形成。因此，優選地，根據該二聚化策略，要二聚化的EPO模擬肽在N-或C-末端攜帶具有成橋官能度的氨基酸，從而在第一個肽的最后一個氨基酸和第二個肽的第一個氨基酸之間形成共價鍵。產生二聚體的鍵優選是共價的。各個橋的合適實例是例如二硫橋和二硒橋。但是，例如在帶正電荷和帶負電荷的氨基酸之間的酰胺鍵或諸如硫醚鍵的其它共價連接鍵也適合用作連接部分(參見上面關于實施方案1)。結合本發明的第一個實施方案，描繪了適合用于形成各個連接橋的優選氨基酸。它們是例如半胱氨酸，半胱氨酸衍生物例如高半胱氨酸或硒代半胱氨酸或硫代賴氨酸。它們形成二硫橋，或在含硒氨基酸的情況下，形成二硒橋，下面給出了分別創建的二聚體的合適實例<formula>formulaseeoriginaldocumentpage64</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage65</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage66</formula>_..............i根據進一步發展，肽二聚體(和由此位于二聚體的起始或結尾的相應單體肽單元)在N-或C-末端包含一個額外氨基酸，其允許諸如HES的載體的偶聯。結果，引入的氨基酸攜帶各個偶聯官能度例如SH-基團。這樣的氨基酸的一個普通實例是半胱氨酸。但是，具有允許形成基酸)也是合適的。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage66</formula>在肽單體上方的線條代表分子內共價橋；在此情況下是二硫橋。根據進一步發展，在C和/或N末端參與形成共價橋(其將單體單元連接成二聚體)的氨基酸，描述了帶電荷的基團例如C0(T或冊3+基團。該特征導致分子間橋的結構的有利的穩定化Ac-C(tBu)-(3(3TYSCSF(3KIiT-Nal-VCK-Har-QG-Cys-C00(-),一',...."'S(+)H3W-Cys-OTYSCSFGKLT-Nal-VCK-Har-QG(3-Am4.連續的二價肽NCNCl_/\_/這種策略的核心概念避免在二聚化或多聚化前的單獨反應中合成單體肽單元，但可在一個步驟中合成作為單個連續肽的最終的二價或多價肽，如在一個單固相反應中。因此不再需要單獨的二聚化或多聚化步驟。這個方面提供了很大的優點，即對最終的肽單元中的各個序列位點的全面和獨立控制。由于對各個序列位置的獨立控制，該方法容許在一個連續肽單元中容易地包含至少兩個不同的受體特異結合結構域。根據該實施方案，在結合結構域(即"接頭區")之間的最終肽序列僅僅由氨基酸組成，因此產生一個單一的、連續的二價-或多價EPO模擬肽。在本發明的優選實施方案中，所述肽接頭由符合高度構象柔性要求的天然或非天然的氨基酸組成。在這方面，有利的是使用已知其在扭轉方面高度柔性的甘氨酸殘基作為連接氨基酸。但是，也可使用其它的氨基酸(例如丙氨酸或P-丙氨酸、或其混合物)來創建肽接頭。所用氨基酸的數量和選擇取決于各自的空間情況。本發明的這個實施方案容許通過分子建模定制設計適宜的接頭，以避免生物活性構象的扭曲。特別優選由3至5個氨基酸組成的接頭。值得注意的是在最終的二價或多價肽的功能域(或單體單元)之間的接頭可以是肽的獨特部分，或是完全或部分地由屬于單體功能域一部分的氨基酸組成。例如，在肽單體的開始(例如位置Xi和Xj和肽單體的結尾(例如位置Xw和Xj處的小柔性氨基酸是優選的，以便形成柔性接頭，在連續的二價肽的情況下，這些位置的優選氨基酸是例如甘氨酸或P-丙氨酸殘基。實例參見Seq.11至14。因此，術語"接頭"更應在功能上進行定義而不是在結構上進行定義，因為氨基酸可形成接頭單元以及單體亞單元的一部分。如上所述，由于在合成二價/多價肽的期間，最終肽之中的各個序列位置是受控制的并因此可被精確確定，有可能定做或定制包含接頭的肽或其特異區域或結構域。這具有特殊的優點，因為它可避免由于不利的分子內相互作用而扭曲最終二價肽的生物活性構象。在合成前，通過分子建模可評價扭曲的風險。這特別適用于設計在單體結構域之間的接頭。具有用于二聚化的肽接頭的連續二價/多價肽，顯示出比相應單體肽高得多的活性，并因而證實了從其它二聚體肽已知的觀測結果，即功效的增加與二價肽概念有關。連續的二價/多價肽可以通過例如乙酰化或酰胺化來修飾，或者可在C末端或N末端位置延長。用于上述單體肽(單體)的現有技術修飾，包括連接可溶性部分(例如PEG、淀粉或葡聚糖)，也可應用于根據本發明的多價肽或二價肽。所有可能的修飾也都可用來修飾接頭。尤其是，將可溶性聚合物部分連接于接頭例如PEG、淀粉或葡聚糖可能是有利的。根據本發明的最終多價或二價肽的合成，有利地還可包括在每個結合結構域中兩次連續的和獨立的形成二硫鍵或其它分子內的鍵。從而還可使肽環化。在本文中所^t艮道的肽單體基礎上，可有利地形成根據本發明的二價結構。肽的反應性側鏈可用作例如用于另外修飾的連接帶。此外，二聚肽任選包含在第一個和第二個和/或第三個和第四個氨基酸之間的分子內橋，所述氨基酸具有成橋側鏈官能度(X6和L)，例如半胱氨酸。所述肽可以通過如乙酰化或酰胺化進行修飾，或者在C末端或N末端位置延長。使用一個或多個氨基酸在兩個末端(N或C)中的一個末端進行延伸反應，如制備聚合物的連接位點，經常產生可最好被制成連續肽的異二聚體二價肽單元。為了將載體偶聯至蛋白和肽上，幾種反應性氨基酸是本領域已知的。一種優選的偶聯氦基酸是半胱氨酸，其可以偶聯至N或C末端。但是，偶聯方向可以產生顯著差異，因而應當為每個肽小心地選擇。這將在下述實施例的基礎上予以證實使用下述2種二聚體AGEM400C6C412344100001Ac-3TYSCH'FGf《LT:l—，S;[，VC^K"2R彈gGTYSCHJr(3^lT兮HSfa;i，.VCKKQ]RG-Cys(tBu)—NH2AGEM40C6C412344100001Ac—Cys(tBu)—瞎G.TY9CHFGKLT;'i"^4蓬'rV^iKKQRGGGTYgPWC(^IVJl^"Na1—VCKK.QRf—NH21-Nal:1-萘基丙氨酸Cys(tBu):S4丁基4果護的L—半胱氨酸41聚體AGEM400C6C4和AGEM40C6C4具有相同的核心序列。AGEM40C6C4的氨基酸1-40與AGEM40C6C4的氨基酸2-41相同。唯一差別是tBu-保護的半胱氨酸的位置。該氨基酸不參與受體藥物相互作用，但是會起將基團連接到最終的綴合物中的聚合栽體上的作用。在AGEM400C6C4的情況下，tBu-保護的半胱氨酸連接于C末端，在AGEM40C6C4的情況下，連接于N末端。連接的線條代表半胱氨酸橋。AGEM400C6C4有2個勝過AGEM40C6C4的優點。第一個優點是，它易于合成。AGEM400C6C4可以以比AGEM40C6C4更高的總產率分離。在合成AGEM40C6C4的線性序列的情況下，觀察到副產物C1Z-22聚體(C1Z-RGGGTYSCHFGKLT-1-Nal-VCKKQRG-NH2，C1Z:2-氯千氧基羰基)。在用反相高壓液相色鐠(RP-HPLC)純化該線性序列期間，它表現出與AGEM40C6C4的線性前體類似的色譜行為，因此難以與它分離，導致目標產物的總產率的損失。在AGEM400C6C4的情況下，沒有發現類似化合物。AGEM400C6C4勝過AGEM40C6C4的第2個優點是，用聚合栽體可以更容易地實現去保護的肽的最終綴合物的分析。分析肽綴合物的一個策略是，通過內切蛋白酶的切割，選擇性地降解綴合物。理想的是，在酶水解過程中，從聚合載體釋放出全肽。通過標準的分析技術，如具有UV或MS檢測的HPLC等，可以鑒別和定量這些肽片段。在AGEM400C6C4的情況下，可以用胰蛋白酶實現切割，所述胰蛋白酶是一種已知會高選擇性地切割位于帶電荷的氨基酸精氨酸和賴氨酸的C末端的肽鍵的內切蛋白酶(F.Lottspeich，H.Zorbas(Hrsg.)，"Bioanalytik，，,SpectrumAkademischerVerlag，Heidelberg,Berlin,1998)。應用于AGEM400C6C4的綴合物，這會釋放覆蓋了結合到載體分子上的原始肽的41個氨基酸中的38個的片段。在AGEM40C6C4的情況下，胰蛋白酶消化會釋放出41個氨基酸中的僅21個的片段AGEM400C6C4的級合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage70</formula>AGEM40C6C4的綴合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage70</formula>釋放出且通過隨訪分析可以檢測出的片段被標記為灰色.由于活性藥物成分的分析是一個關鍵問題，在開發過程中，AGEM400C6C4具有明顯勝過AGEM40C6C4的優點。因而，在帶正電荷的氨基酸位于各個位置的情況下，非常優選地摻入在C-末端的連接氨基酸(這里的半胱氨酸)，因為可能產生幾乎完整的肽片段，其原因是，切割位點是由于在聚合物之前很遠的在單體的位置x19的精氨酸。本發明的化合物可有利地用于制備人和/或獸用的藥物組合物。它們因而適用于人和獸醫治療。作為EPO模擬物，它們顯出與紅細胞生成素基本上相同的定性活性模式。因此，它們通常適于與紅細胞生成素適合的相同的適應癥。紅細胞生成素是細胞因子超家族中的成員。除了在引言中所述的刺激效應之外，還發現紅細胞生成素可刺激干細胞。因此，本文中所述的EPO模擬物適合于由干細胞相關作用所引起的所有適應癥。非限制性實例是預防和/或治療與神經系統相關的疾病。實例是神經損傷、疾病或紊亂，例如帕金森氏病、阿爾茨海默氏病、亨廷頓舞蹈病、多發性硬化、肌萎縮性側索硬化、戈謝病、泰-薩克斯病、神經病、周圍神經損傷、腦腫瘤、腦損傷、脊髄損傷或中風損傷。根據本發明的EPO模擬肽還適合于遭受心臟衰竭或處于遭受心臟衰竭危險中的患者的預防和/或治愈性治療。實例是心肌梗塞、冠狀動脈病、心肌炎、化學療法治療、酒精中毒、心肌病、高血壓、瓣膜心臟病包括二尖瓣關閉不全或主動脈瓣狹窄和甲狀腺紊亂、慢性和/或急性冠脈綜合征。此外，EPO模擬物可用于刺激內皮前體細胞的生理動員、增殖和分化，用于刺激血管發生，用于治療與內皮前體細胞的功能障礙相關的疾病，并用于生產治療所述疾病的藥物組合物和包含所述肽和其它適合于刺激內皮前體細胞的藥劑的藥物組合物。所迷疾病的實例是高膽固醇血癥、糖尿病、內皮介導的慢性炎性疾病、內皮增生包括網狀內皮增生、動脈粥樣硬化癥、冠心病、心肌缺血、心絞痛、年齡相關的心血管疾病、雷諾病、妊娠誘導的張力亢進、慢性或急性腎衰竭、心力衰竭、創傷愈合以及繼發性疾病。此外，根據本發明的肽是用于輸送藥劑穿過血腦屏障的合適載體，并可用于相應的目的和/或生產能通過血腦屏障的相應的治療綴合劑。本文中所述的肽特別適合于治療以紅細胞生成素缺乏或紅細胞數目低或有缺陷為特征的障礙，并特別適合于治療任何類型的貧血癥或中風。該肽還適合于提高和/或維持哺乳動物中的血細胞比容。所述的藥物組合物可任選包含藥學上可接受的栽體，以便采取用于預定給藥過程的組合物。例如在W02004/101611和W02004/100997中描述了合適的輸送方法和載體以及添加劑。如上所述，與相應的單體肽相比，單體肽二聚化成二聚體或甚至多聚體通常提高EPO模擬物激動劑的活性。但是，期望進一步提高活性。例如，關于細胞機理活化，甚至二聚體EPO模擬肽的作用不如EPO強。現有技術中建立了幾種方法以便提高肽的活性，例如通過變異氨基酸序列以便鑒定更有效的候選物。但是，迄今為止仍然期望進一步提高肽的活性，特別是EPO模擬肽的活性，以便改進生物學活性。本發明的另一個實施方案提供該問題的解決方法。其中提供了結合靶分子的化合物，并且該化合物包含i)至少兩個肽單元，其中每個肽單元包含至少兩個具有靶結合能力的結構域；ii)至少一個聚合載體單元；其中所述的肽單元結合所述的聚合載體單元。令人意外地是，已經發現根據本發明的兩個或更多二價肽或多價肽在聚合物支持體上的組合，正在大大地增加二價(或甚至多價體)肽對其結合受體的效力，這不僅僅是加和的，而且是超過加和的。因此，觀測到協同效應。將用于本發明目的的術語"二價"定義為包含兩個具有結合把能力的結構域的肽，其中所述的乾特別是EPO受體。它與術語"二聚"交換使用。因此，"多價，，或"多聚"EPO模擬肽具有若干個相應的EP0受體結合結構域。不言而喻，術語"肽"和"肽單元"不包含與大小有關的任何限制，并包含寡肽和多肽以及蛋白。包含兩個或更多個連接于聚合栽體單元的二價或多價肽單元的化合物，在該實施方案的上下文中被稱為"超價物(supravalent)"。這些超價分子非常不同于現有技術中已知的二聚體或多聚體分子。現有技術僅僅組合成單體EPO模擬肽，以便產生二聚體。相反，通過將已經(起碼)二價的肽單元連接至聚合栽體單元從而產生超價分子(附圖給出了實例)，來生成超價物分子。因此，大大地提高肽的總體活性和效力，并因此減少EC50劑量。迄今為止，還沒有完全了解與現有技術中已知的分子相比超價分子具有大效力的原因。可能是由于現有技術中已知的二聚體分子每個二聚體分別僅僅提供一個把受體結合單元。因此，在二聚體化合物的結合時，僅僅生成一個受體復合物，從而僅僅誘導一個信號轉導過程。例如，通過PEG連接兩個單體EPO模擬肽來形成肽二聚體，從而促進為信號轉導所需的受體單體的二聚化(Johnson等人，1997)。與此相反；根據本發明的超價化合物包含一些已是二價或多聚的相應的受體結合單元。這可使得每個化合物分子在細胞表面上生成多個受體復合物，從而誘導多個信號轉導并因此超加和性地加強肽單元的活性。超價化合物的結合可引起受體復合物在細胞表面上的成簇群集。這個實施方案中所用的EPO模擬肽單元可以是同質或異質的，這意謂著使用相同的或不同的肽單元。這同樣適用于也可以是同質或異質的肽單元的結合結構域(如上所述的單體肽)。結合于載體單元的二價或多價肽單元結合相同的受體靶。但是，當然它們仍然能夠在其氨基酸序列上有差異。二價或多價肽單元的單體結合結構域可以是線狀的或環狀的。例如，通過形成分子內半胱氨酸橋(參見上文)，可產生環狀分子。聚合載體單元包含至少一個天然的或合成的分支的、線狀的或樹枝狀的聚合物。聚合栽體單元優選可溶于水和體液，并優選是藥學上可接受的聚合物。水溶性聚合物部分包括但不限于，如聚亞烷基二醇及其衍生物，包括PEG、PEG均聚物、mPEG、聚丙二醇均聚物、乙二醇和丙二醇的共聚物，其中所述的均聚物和共聚物是未被取代的，或在一端被下列所取代酰基；甘油聚合物或聚唾液酸；纖維素和纖維素衍生物，包括甲纖維素和羧甲基纖維素；淀粉(如幾烷基淀粉(HAS))，特別是羥乙基淀粉(HES)和糊精，及其衍生物；葡聚糖和葡聚糖衍生物，包括硫酸葡聚糖，交聯糊精和羧甲基糊精；殼聚糖(一種線性多糖)肝素及肝素片段；聚乙烯醇和聚乙烯基乙基醚；聚乙烯吡咯烷酮；oc，p-聚[(2-羥乙基)-DL-天冬酰胺；和聚氧乙基化的多元醇。栽體單元的實例是同質雙功能聚合物，例如聚乙二醇(二-馬來酰亞胺，二-羧基，二-氨基等)。由于適合與本發明結合的不同聚合物的不同性質，偶聯到至少2個二聚的EP0模擬肽(其包含根據本發明的單體共有序列)上的聚合栽體單元可以具有寬范圍的分子量。因此沒有大小限制。但是，優選分子量為至少3KD，優選至少IOKD和約20至500KD，更優選約30至150或約60或80KD。載體單元的大小取決于所選擇的聚合物，并因此可發生變化。例如，特別當使用淀粉(例如羥乙基淀粉)時，分子量可相當地高。然后平均分子量可位于約100至4，OOOKD或甚至更高。但是，優選地，HES分子的分子量是約50至500kD，或100至300kD和優選約200kD。優選選擇載體單元的大小，使得各個肽單元最適于結合它們各自的受體分子。為了有利于這一點，本發明的一個實施方案使用包含分支單元的載體單元。根據該實施方案，將聚合物(例如PEG)連接于分支單元，因此得到允許摻入許多肽單元的大載體分子。合適分支單元的實例是甘油或聚甘油。根據Haag(2000，在本文中被引入作為參考)的教導，例如還可使用樹枝狀分支單元。HES載體也可以以分支形式使用。例如如果它從支鏈淀粉獲取至高比例。優選地，通過使單體結合單元與肽單元化合(頭連接頭、頭連接尾或尾連接尾)而產生肽單元后，所述聚合物載體單元與所述肽單元連接。通過共價的或非共價的(如配位)鍵，將聚合載體單元連接/偶聯到肽單元。但是，優選使用共價鍵。例如可通過肽單元的下列反應性氨基酸進行連接如賴氨酸、半胱氨酸、組氨酸、精氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸或N末端氨基以及C末端羧酸。在肽不攜帶各個氨基酸的情況下，可以將這樣的氨基酸引入氨基酸序列。應當選擇偶聯，使得與靶物的結合不受阻礙或至少盡可能少地受到阻礙。依賴于肽單元的構象，反應性氨基酸是在肽序列的開頭、結尾或內部。如果聚合栽體單元不具有合適偶聯基團，可使用一些偶聯物/接頭，以便適當地修飾聚合物，使它能與肽單元上的至少一個反應性基團起反應，形成超價化合物。例如如下是可用于修飾聚合物的適宜化學基團與蛋白的氨基起反應的酰化基，例如酸酐基、N-酰咪唑基、疊氮化物基、N-羧基酐基、雙乙烯酮基、二烷基焦碳酸酯基、亞氨酸酯基以及碳二亞胺活化的羧基。已知所有上述基團都與蛋白/肽上的氨基起反應，形成共價鍵，包括酰基鍵或相似的鍵；與肽單元氨基上的巰基(氫硫基)、硫代曱基、咪唑并基或氨基起反應的烷基化基團，例如囟-羧基、馬來酰亞胺基、活化的乙烯基、乙撐亞胺基、芳鹵基、2-羥基5-硝基-節基溴基團；以及連同還原劑一起與肽的氨基反應的脂族醛基和酮基；與肽的羧基起反應的酯和酰胺形成基，例如重氮羧酸酯基，以及碳二亞胺基和胺基一起；與蛋白上的巰基起反應的二硫化物形成基，例如5，5'-二硫代雙(2-硝基苯曱酸酯)基，鄰吡啶基二硫化物和烷基硫醇基(在氧化劑例如碘的存在下，其與蛋白的巰基起反應)；與肽的胍部分起反應的二羰基，例如環己二酮基，和其它1，2-二酮基；與肽上的酚基起反應的重氮基；與肽上的氨基起反應的反應基，其來自溴化氰與多糖的反應。因此，總的來說，通過(任選的)首先化學修飾聚合栽體來生成其上具有至少一個化學基團的聚合載體(其中所述的化學基團能夠與肽單元上可利用的或被引入的化學基團起反應)，然后(任選的)將修飾的聚合物與肽單元一起反應，來形成可利用修飾聚合物的化學基團(如果必要)的共價結合的復合物，從而制備根據本發明的化合物。如果通過肽的游離SH基(如半胱氨酸基團的游離SH基)發生偶聯，優選使用聚合物中的馬來酰亞胺基。為了生成所限定的分子，優選使用將肽單元連接于聚合載體單元的靼向方法。在期望的連接位點不存在合適的氨基酸時，可將合適的氨基酸摻入二聚的EP0模擬肽單元。對于位點特異的聚合物連接，優選獨特反應基，如在肽單元末端的特異氨基酸，以便避免會導致產生反應o主要使用本領域技術人員已知的反應，進行肽單元偶聯到聚合栽體單元例如PEG或HES上。例如，已有許多本領域技術人員可利用的PEG和HES連接方法(參見例如給出其它參考文獻的WO2004/100997，Roberts等人，2002;US4,064,118;EP1398322;EP1398327;EP1398328;WO2004/024761;它們全部通過參考引用并入本文)。重要的是應當理解本文中所述的"超價性(supravalency)"的概念不同于已知的PEG化或HES化的概念。在現有技術中，例如僅僅使用PEG化，通過使一個或多個PEG單元結合到肽上，以便生產肽二聚體或以便改進藥物動力學參數。但是如上所述，將兩個或更多個至少二價的肽單元連接到例如作為聚合載體單元的PEG或HES上，也可大大提高效力(因此減少了EC50劑量)。因此，本發明的該概念不僅如現有技術中已知的PEG化或HES化那樣，對藥物動力學參數有影響，而且對藥效學參數具有強烈影響。但是，例如作為聚合載體單元的PEG或HES的摻入，當然也具有與藥物動力學有關的已知的優點。通常進行PEG化來改善肽的生物藥物性質。在PEG綴合后，蛋白分子的最相關的變化是尺寸擴大、蛋白表面和糖基化功能屏蔽、電荷改變以及表位遮蔽。具體地說，通過被動式增強滲透和滯留機理，尺寸擴大使得腎超濾變慢，并促進蓄積到滲透性組織中。蛋白遮蔽降低屬于重要的清除途徑的蛋白水解和免疫系統識別。通過蛋白和聚合物性質以及通過采用的PEG化策略，嚴格測定PEG化對蛋白的物理化學及生物學性質的特異性作用。但是，使用PEG或其它的非生物降解的聚合物可能導致新的問題。在體內應用期間，藥物作用的喪失引發在臨床環境中的劑量間隔。修改常規的劑量和劑量間隔，使得在劑量間隔期間不會失去作用。由于連接于非生物可降解的大聚合物單元(如PEG部分)的肽的降解比機體可能消除支持分子更快，因此可產生載體單元蓄積的風險。所述的蓄積風險總是發生，因為藥物的效應-半衰期短于藥物本身或其組分/代謝物之一的消除半衰期。因此，應避免栽體分子的蓄積，尤其在長期治療中，因為肽通常用非常大的PEG部分(~20-40KD)進行PEG化，其因此顯示緩慢的腎消除。肽部分本身經歷了酶促降解，甚至部分裂解足以使肽失活。為了尋找該潛在問題的解決方法，本發明的一個實施方案教導了使用由至少兩個亞單元組成的聚合栽體單元。通過生物可降解的共價接頭結構來連接聚合亞基。根據該實施方案，由通過生物可降解的接頭連接的多個小亞單元或中等大小的亞單元(例如每個亞單元具有5至10KD的分子量)，產生大栽體分子的分子量(例如40KD)。把模塊亞單元的分子量加起來，從而生成載體分子的期望分子量。但是，可在體內裂解生物可降解的接頭結構，從而釋放更小的栽體亞單元(如5至10KD)。與具有總分子量(如40KD)的聚合物分子相比，小載體亞單元顯示更好的腎臟清除。在圖16中提供了一個解釋性實例。根據已知的在體液中的降解性和降解時間尺度，選擇接頭結構。例如，易碎的結構包含可裂解的基團如羧酸衍生物，如可被水解的酰胺/肽鍵或酯(參見如Roberts,2002，被本文引入以作為參考)。使用PEG主鏈中各種酯鍵，還可合成PEG琥珀酰亞胺酯，來調控在生理性pH中的降解速率(Zhao，1997，被本文引入以作為參考)。在溫和還原環境下可裂解苯甲基尿烷二疏化物等易碎結構，例如在細胞的內體區室中(Zalipsky，1999)，因此這些結構也是適宜的。用于選擇合適接頭的其它標準，是快(通常是酶催化的)降解或慢(通常是非酶催化裂解)降解的選擇。在體液中這兩種機理的組合也是可行的。顯然這種高度有利的概念并不限于所述的或本文中所涉及的特殊肽單元，而且可應用于其中出現了相同蓄積問題的其它連接于大聚合物單元(例如PEG分子)的藥物分子。根據一個實施方案，羥烷基淀粉和優選HES可用作聚合載體單元。HES具有幾個重要的優點。首先，HES是生物可降解的。而且，通過羥乙基的比例可調控并因此影響HES的生物可降解性。0.4-0.8的摩爾置換度(平均40-80%的葡萄糖單元含有羥乙基)充分適合于本發明目的。由于生物可降解性，通常不會出現與PEG相關的上述的蓄積問題。而且，HES已經長期用于醫療中，如以血漿容量擴張劑的形式。因此它的無害性得到承認。此外，通過氣相色鐠法可檢測HES水解產物的衍生物。在肽單元仍然穩定的條件下可水解HES-肽綴合物。這可允許量化和監測降解產物，并可允許評價和標準化活性肽。根據另一個實施方案，使用第一種類型的聚合栽體單元，并與肽單元一起裝填。優選該第一載體是容易生物降解的，例如是HES。但是，并不是第一栽體的所有連接點都被肽單元占據，例如僅僅約20至50%。根據所用聚合物的大小，幾百個肽單元可被偶聯到栽體分子上。但是，通常使用更少的肽單元，例如2至50或2至20。2至15，2至10，2至8和3至6個肽是EPO模擬肽優選的。第一載體的其余(或至少有些)剩余連接點被不同的栽體占據，如具有比第一栽體的分子量更低的分子量的小PEG單元。這個實施方案的優點在于，由于第一栽體而產生了超價組分，但是由于優選由3至5或10KD的PEG單元而組成的第二載體的存在，第一載體是非常耐久的。但是，整個實體都是非常易降解的，因為第一栽體(如HES)和肽單元是可生物降解的，第二載體(如PEG)小到足以容易從身體中清除。組成肽單元的結合結構域的單體可識別同源二聚體紅細胞生成素受體。同源二聚體受體的后一性質使EPO受體不同于許多其它細胞因子受體。包含至少上述兩個EPO模擬單體結合結構域的肽單元可結合EPO受體，并優選能夠分別二聚化多聚化它們的把和/或穩定它，因此從而產生了信號轉導誘導復合物。本發明還包括相應的將肽單元連接到各自載體單元上的化合物生產方法。本發明進一步包括相應的將肽單元連接到各自聚合栽體單元上的化合物生產方法。本發明的化合物可有利地用于制備人和/或獸用的藥物組合物。它們特別適合于治療以紅細胞生成素缺乏或紅細胞數目低或有缺陷為特征的障礙，并特別適合于治療任何類型的貧血癥或中風。它們還可用于上述的所有適應征。所述的藥物組合物可任選包含藥學上可接受的載體，以便采取用于預定給藥過程的組合物，例如在W02004/100997和W02004/101611中(被本文引入以作為參考)描述了合適的遞送方法和栽體以及添加劑。實施例超價分子的概念應通過實施例進行解釋。圖l顯示根據本發明的簡單超價分子的實例。通過具有馬來酰亞胺基的雙功能PEG部分，將兩個連續的二價肽進行N末端連接。選擇半胱氨酸作為PEG栽體單元的反應連接位點。但是，超價分子可包含超過兩個的連續二價或多價肽單元。圖2顯示的實例是以具有作為分支單元的中心甘油單元的栽體單元為基礎，并包括三個連續的二價肽。將半胱氨酸再次用于連接。圖3顯示使用HES作為聚合載體單元的實例。修飾HES,使得它具有與肽單元的SH基起反應的馬來酰亞胺基。根據該實例，將所有的連接位點結合于肽單元(在這里是4個)。但是，小的PEG單元(如3至10KD)也可占據一些連接位點。如上解釋的，超價概念還可以擴展到多價的樹枝狀聚合物，其中樹枝狀的和/或聚合載體單元連接于大量連續的二價肽。例如，樹枝狀分支單元可以聚甘油為基礎(請參見Haag2000,通過參考引用并入本文)。在圖4中顯示的實例是基于具有樹枝狀分支單元的載體單元的超價分子，其中所述的分支單元含有六個連續的二價肽。超價分子的其它實例包含具有淀粉或葡聚糖的栽體單元，其中使用如高碘酸來氧化載體單元，以包含大量醛官能團。在第二步驟中，許多二價肽連接于載體單元，并一起形式最終分子。請注意可將甚至幾百個(如50至1000個、優選150至800個、更優選250至700個)肽單元偶聯至載體分子，如HES。但是，小得多的肽單元也可以結合HES分子，如附圖所示，尤其在偶聯EP0模擬肽時。待偶聯的肽單元的平均數可以選自約2至1000，2至500，2至100，2至50，優選2至20，最優選2至10，這取決于肽和待結合的受體。圖5證實了簡單的生物可降解的超價分子的概念。通過兩個雙功能的PEG部分，將兩個連續的二價肽進行N末端連接，其中所述的PEG部分通過具有中間裂解位點的生物可降解的接頭進行連接。接頭允許大PEG單元在亞單元中被裂解，從而促進腎臟清除。與超價效應有關的優點是非常令人驚奇的和意外的。最初擔心與大分子綴合可能降低效力。該預期是基于結合速率的假設缺點，這是由于較大分子的降低的擴散速率。另一個預期是，在與栽體結合的幾種肽API中，不是所有的都能結合受體，可能是由于同時結合的空間問題，或因為受體的數目(這可以通過延伸大分子載體來達到)有限和可能低于肽API的數目。因而，沒有預見到對本發明的超價概念觀察到的肽API(活性藥物成分)效價的增加。另一方面，由于大分子栽體能導入的顯著的藥物代謝動力學變化，由于整個肽/載體復合物更長的半衰期，體內效力可能提高。該現象也具有下述效應，即難以在體內測定超價效應，因為它是藥效學實體，必須分開測定。體外測定因而不僅是足夠的，而且可能是清楚地證實超價效應的唯一有用途徑。通過對比肽API(綴合到載體上的相對于未綴合)的摩爾量，可以證實本發明所述的超價效應。在如歐洲藥典推薦用于測定體外EP0樣活性的標準TF-1細胞測定中進行實驗(也參見下文)。基本上，在有多種不同濃度的EPO或EPO-模擬物質存在下，培養TF-1細胞(它們的增殖依賴于EPO-樣活性的存在)。使用比色法MTT-測定和光度計測量，定量所得到的細胞數。基于這些數據，可以確定每種給定物質的標準化的劑量-反應關系。在該測定中，使用EPO和肽AGEM40(見下文)，后者是具有EPO-模擬活性的連續二價肽。使用AGEM40作為未綴合的肽和作為綴合到大分子載體(在該情況下是平均分子量130kD的羥乙基淀粉)上的肽。該綴合物的構件塊大小約是40kD,這意味著平均的HES-分子攜帶約2-5個、優選2"個肽部分。也可以使用HES200/0.5。修飾130kDHES后，綴合約4個肽。當使用分子量為200kD的HES時，總計約5個肽單元綴合到HES上。在圖6中所示的對比是基于肽濃度的摩爾對比，無論肽是否綴合。與預期相反，效力在增加(EC50在降低，劑量反應曲線位于未綴合的肽的左邊)，從而證實了與大分子栽體的寡價綴合的積極藥效學影響。因而，獨立于預期的藥物代謝動力學改進，根據本發明的綴合構思清楚地提高了總活性藥物成分的效價。這是一個新的機理，可以確定地用于針對EPO-受體的肽，但是潛在地也適用于其它膜結合的藥理學靶物，尤其是其它細胞因子受體，例如血小板生成素、G-CSF、白介素及其它的受體。I.單體的肽合成手工合成通過使用Discover微波系統(CEM)和使用PL-Rink-Amide-Resin(置換率0.4mmol/g)或者通過預裝填0.4mmo1量的Wang-Resins，進行合成。通過添加30ml哌啶/DMF(l:3)，并用100W照射3x30秒，完成芴曱氧羰基(Fmoc-group)的去除。通過添加5倍過量的氨基酸(在DMF中)，PyBOP/HOBT/DIPEA作為偶聯添加劑，并用50W照射5x30秒，完成氨基酸的偶聯。在所有照射周期之間，借助于冰浴來手工冷卻溶液。在脫保護和偶聯后，用30mlDMF將樹脂洗涂6次。在最后的氨基酸脫保護后，通過用1.268ml加帽溶液(100mlDMSO中，4.73ml乙酸肝和8.73mlDIEA)溫育5分鐘，將一些肽乙酰化。在裂解之前，將樹脂用30mlDMF洗滌6次，并用30mlDCM洗滌6次。通過用5ml的TFA/TIS/EDT/H20(94/l/2.5/2.5)在惰性氣體中處理120分鐘，完成粗肽的裂解。將該溶液過濾到"ml冷乙醚中。沉淀物溶解于乙腈/水(1/1),并通過RP-HPLC(Kromasil100C1810"，250x4.6mm)純化肽。白動合成通過4吏用Odyssey微波系統(CEM)和使用PL-Rink-Amide-Resin(置換率0.4mmol/g)或者通過預裝填0.25mmol量的Wang-Resins,進行合成。通過添加10ml哌啶/DMF(l:3)，并用IOOW照射10x10秒，完成芴甲氧羰基的除去。通過添加5倍過量的氨基酸(在DMF中)，PyBOP/HOBT/DIPEA作為偶聯添加劑，并用50W照射5x30秒，完成氨基酸的偶聯。在所有照射周期之間，通過將氮氣吹泡通過反應混合液，冷卻溶液。在脫保護和偶聯后，將樹脂用10mlDMF洗滌6次。在最后的氨基酸脫保護后，通過用0.793ml加帽溶液(100mlDMSO中，4.73ml乙酸酐和8.73mlDIEA)溫育5分鐘，將一些肽乙酰化。在裂解之前，用10mlDMF將樹脂洗滌6次，并用10mlDCM洗滌6次。通過用5ml的TFA/TIS/EDT/H20(94/1/2.5/2.5)在惰性氣體中處理120分鐘，完成粗肽的裂解。將該溶液過濾到40ml冷乙醚中，并將沉淀物溶解于乙腈/水(1/1)，并通過RP-HPLC(Kromasil100C1810jam，250x4.6邁m)純化肽。純化使用Nebula-LCMS系統(Gilson)，純化所有肽。將所有肽的粗料溶解于乙腈/水(1/1)，并通過RP-HPLC(Kromasil100C18lOpm,250x4.6mm)純化肽。流速是20ml/min，并且LCMS分流比是1/1000。II.分子內二硫橋的形成用Kj(FeCN6)的環化溶液1:將10mg肽溶于0.1%的TFA/乙腈，并用水稀釋直至達到0.5mg/ml的濃度。加入固態碳酸氫銨，直至達到約pH8。溶液2:在第二個小管中，用10ml水稀釋10ml的0.1°/。TFA/乙腈。加入固態碳酸氫銨，直至達到pH8，并加入1滴0.1M的K3[(FeCN6)〗溶液。將溶液1和溶液2經3小時逐滴地加入乙腈/水(l/l;pH-8)的混合液中。在室溫下過夜溫育混合液，并濃縮混合物和通過LCMS純化。用CLEAR-OXTM-樹脂的環化將固態碳酸氫銨加入100ml乙腈/水(l/l;0.1%TFA)中，直至達到pH8。通過氬氣吹泡30分鐘，來除去該溶液的氣體。立刻加入100mg的CLEAR-OXtm-材脂。IO分鐘后，加入10mg固態的肽。溫育2小時后，過濾溶液、濃縮以及通過LCMS純化。環肽的純化使用Nebula-LCMS系統(Gilson),純化所有肽。將所有肽的粗原料溶解于乙腈/水(l/l)或DMS0中，并通過RP-HPLC(Kromasil100C18或C8lOpm,250x4.6mm)純化肽。流速是20ml/min，并且LCMS分流比是1/1000。其它非常適用于形成分子內二硫橋的技術公開在PCT/EP2006/012526,其通過參考并入本文。111.使用單體進行體外測定使用TF-1細胞，通過BrdU摻入進行增殖測定將處于對數生長期的TF-1細胞(~2x1051x106細胞/1111;RPMI培養基；20%胎牛血清；補充了青霉素、鏈霉素、L-谷氨酰胺；0.5ng/ml白細胞介素3)進行洗滌(以1500rpm離心5分鐘，并以500,000細胞/ml的濃度重懸浮于無IL3的RPMI完全培養基中)，并在測定開始之前不使用IL-3進行預培養24小時。第二天，將細胞接種在24孔或96孔平板中，其中所述的平板通常每個待測試劑使用至少6個濃度和每個濃度4個孔，含至少10，000細胞。實驗包含對照，其中包括作為陽性對照試劑的重組EPO和作為陰性對照試劑的無添加細胞因子的孔。將肽和EPO對照在培養基中預稀釋至期望的濃度，并加入細胞中，在標準培養條件(37"C、5%二氧化碳的氣相、水飽和的環境)下開始3天的培養期。在這3天的培養期中，濃度一直指的是培養孔中試劑的終濃度。在該培養期的結束時，加入FdU直至終濃度8ng/ml培養基，并繼續培養6小時。然后，加入BrdU(溴脫氧尿香)和dCd(2-脫氧胞苷)直至它們的終濃度(在培養基中，BrdU的終濃度為10ng/ml，dCd的終濃度為8ng/ml)，并繼續另外培養2小時。在該溫育和培養期的結束時，在含1.5°/。BSA的磷酸鹽緩沖鹽水中洗滌細胞一次，并以最低液體量進行重懸浮。從該懸浮液中，將細胞逐滴地加入-201C的70%乙醇中。或將細胞在冰上培養10分鐘并然后直接進行分析，或在分析之前將其保存于4x:。在分析之前，通過離心沉淀細胞，棄去上清液，并將細胞重懸浮在最小量的剩余液體中。然后懸浮細胞，并將其在0.5ml的2MHC1/0.5%tritonX-100中溫育IO分鐘。然后，再次沉淀它們，并重懸浮在最小量的剩余液體中，其中在立即重沉淀細胞之前，用0.5ml的0.1NNa2B407(pH8.5)稀釋細胞。最后，將細胞重懸浮在40p1磷酸鹽緩沖鹽水(1.5%BSA)中，并分裝入兩個各含20jj1細胞懸浮液的反應管中。將2jLi1抗-BrdU-FITC(DAKO，克隆Bu20a)加入一個管中，并將2ja1對照mlgGl-FITC(Sigma)加入第二管中，室溫下開始30分鐘的溫育期。然后，加入0.4ml磷酸鹽緩沖鹽水和10pg/ml碘化丙錠(終濃度)。在流式細胞儀中的分析，涉及4C細胞或具有高倍數性的細胞的部分，和涉及BrdU-陽性細胞的部分，因此測定在細胞周期的相關階段的細胞的部分。使用TF-1細胞，通過MTT進行增殖測定將處于對數生長期的TF-1細胞(~2xl05lxl(T細胞/ml;RPMI培養基；20%胎牛血清；補充了青霹素、鏈霉素、L-谷氨酰胺；Q.5ng/ml白細胞介素3)進行洗滌(以1500rpm離心5分鐘，并以500，000細胞/ml的濃度重懸浮于無IL3的RPMI完全培養基中)，并在分析開始之前不使用IL-3進行預培養24小時。第二天，將細胞接種在24孔或96孔平板中，其中所迷的平板每個待測試劑通常使用至少6個濃度和每個濃度4個孔，含至少10，000細胞/孔。每個實驗包括對照，其中包含作為陽性對照試劑的重組EPO和作為陰性對照試劑的無添加細胞因子的培養孔。將肽和EPO對照在培養基中預稀釋至期望的濃度，并加入細胞中，在標準培養條件(37X:、5%二氧化碳的氣相、水飽和的環境)下開始3天的培養期。在4天的培養期中，濃度一直指的是培養孔中試劑的終濃度。在第4天，在分析開始之前，在多個孔中制備已知數目TF-1細胞的稀釋系列(在100nl培養基中0/2500/5000/10000/20000/50000的細胞/孔)。這些孔以與測試孔相同的方式進行處理，隨后提供校正曲線，由此可測定細胞數。在設定這些參照孔后，將來自MTT增殖試劑盒(Promega，CellTUer96含水非放射性細胞增殖測定)的MTS和PMS在37n的水浴中解凍，并將100julPMS溶液加入21111MTS溶液。將20ja1該混合液加入分析板的各個孔中，并在37t:下溫育3-4小時。在酶聯免疫檢測儀中進行測量E492之前，將25p1的10%的十二烷基磺酸鈉水溶液加入各個孔中。IV.二價EPO模擬肽單元的合成通過使用Liberty微波系統(CEM)和使用Rink-Amide-Resin(置換率0.19mmol/g)，以0.25mmol量進行合成。通過用10ml哌咬/DMF(1:3)、并用50W照射10x10秒，進行雙重處理，完成芴甲氧羰基的除去。通過用4倍過量的氨基酸(在DMF中)PyBOP/HOBT/DIPEA作為偶聯添加劑，并用50W照射5x30秒，進行雙重處理，完成氨基酸的偶聯。在所有照射周期之間，通過將氮氣吹泡通過反應混合液，冷卻溶液。在脫保護和偶聯后，用10mlDMF將樹脂洗滌6次。在加倍偶聯周期后，通過用10倍過量的N-(2-氯節基氧基羰基氧基)琥珀酰亞胺(在DMF中的0.^溶液)處理并用50W照射3x30秒，來封閉所有未反應的氨基。在最后的氨基酸脫保護后，通過用0.793ml加帽溶液(100mlDMS0中，4.73ml乙酸酐和8.73mlDIEA)溫育5分鐘，將肽進行乙酰化。在裂解之前，將樹脂用10mlDMF洗涂6次，并用10ml固洗滌6次。通過用5ml的TFA/TIS/EDT/H20(94/1/2.5/2.5)在惰性氣體中處理120分鐘，完成粗肽的裂解。將該溶液過濾到40ml冷乙醚中，并將沉淀物溶解于乙腈/水(1/1)，并通過RP-HPLC(Kromasil100C1810pm,250x4.6mm)純化肽。環化反應將30mg線性肽溶于60ml溶液A中。將該溶液和60mlDMS0逐滴地加入601111溶液A(加入總時間3小時)中。48小時后，蒸發除去溶劑，并將殘余物溶于30mlDMSO/水(1/1)。加入30ml乙酸和17mg碘(溶于DMS0/水(1/1))，并在室溫下將溶液混合90分鐘。然后加入20mg抗壞血酸，并蒸發除去溶劑。將粗的混合液溶于乙腈/水(2/1)，并通過RP-HPLC(Kromasil100C1810pm，250x4.6mm)純化肽。溶液A:含0.1°/。TFA的乙腈/水(1/1)。通過加入碳酸氫銨，調節pH至8.0。純化方案環肽的純化，Kromasil100C18lO^im,250x4.6mm，梯度為50分鐘內5%至35%乙腈(0.1°/。TFA)。V.用于測定EPO活性的體外增殖測定對處于對數生長期的TF1細胞(在具有20。/。胎牛血清(FCS)和0.5ng/mlIL-3的RPMI培養基中生長的~2xl05-lx106細胞/ml)進行計數，并對進行分析所需數量的細胞進行離心(5分鐘，1500rpm)，然后以300000細胞/ml的濃度重懸浮于具有5。/。FCS無IL-3的RPMI中。將細胞在沒有IL-3的這種(饑餓)培養基中預培養48小時。在開始分析之前，再次統計細胞數量。在開始分析之前，立即制備肽和EPO的儲液。將肽稱重，并溶于具有5%FCS的RPMI直至濃度為lmM、467jiM或200jiM的。EPO儲液是10nM或20nM。將這些儲液的292n1吸移至96孔培養平板的一個孔中，每種待測的物質釆用一塊板。吸取200ju1具有5%FCS的RPMI到各個平板的十七個其它孔中。吸取92|u1儲液到含200p1培養基的孔中。混合內含物，并將來自該孔的92jla1轉入下一個孔中，等等。這種方式制備每種物質的稀釋系列(18個稀釋濃度)，使得各個連續孔中的濃度是其前一孔中的濃度的1/10。將來自各個孔的3x50jul轉入三個空孔中。以此方式一式四份地測量每種濃度的物質，舍去各個平板的最上行孔和最下行孔。離心預處理的(饑餓的)細胞(5分鐘，1500rpm)，并以200，000細胞/ml的濃度重懸浮于具有5%FCS的RPMI中。將50p1細胞懸浮液(含10，000細胞)加入各孔中。注意的是由于加入細胞，孔中物質的終濃度是起始稀釋濃度的一半。將平板在37X:、5°/。0)2下溫育72小時。開始評價之前，制備孔中已知量的TF-1細胞的稀釋范圍一式四份吸取0/2500/5000/10000/20000/50000細胞/孔(在100"1的RPMI+5%FCS中)。為了測量每孔的活細胞的數目，將現成可用的MTT試劑(Promega，CellTiter96AqueousOneSolutionCellProliferationAssay)在37C水浴中解凍。每孔加入20jul的MTT試劑，并將平板在37T、5%0)2中另外溫育1-2小時。加入25jal的1(^SDS溶液，并在酶聯免疫讀數儀(Genios，Tecan)中測量平板。在電子數據表(Excel)中加工處理數據，并在Graphpad軟件中制圖。VI.擴展的肽測定在擴展試驗中，對幾個肽序列測試了它們的EP0模擬活性。在LIPS-Vario合成儀系統上，合成作為肽酰胺的肽。在專門的MTP合成平板中進行合成，規模是每種肽2jumo1。合成使用作為活化劑試劑的HOBT，遵循標準的Fmoc方案。偶聯步驟分4次偶聯進行。每個偶聯步驟耗時25分鐘，并且每個步驟的過量氨基酸是2.8。用含90%TFA、5%TIPS、2.5°/。H20以及2.5%DDT的裂解液進行肽的裂解和脫保護。將含有連接于樹脂的成品肽的合成平板保存在96深孔板的頂部。每孔加入50ja1裂解液并進行裂解10分鐘，重復該過程三次。用200"1裂解液通過重力流入深孔平板中，來洗脫裂解肽。在深孔平板中，對側鏈官能團進行另外2.5小時的脫保護。然后，用冰冷的乙醚/己烷來沉淀肽，并進行離心。肽溶于中性水溶液中，并在4r下過夜溫育環化物。冷凍干燥肽。圖7顯示了對有些合成的和測試的肽單體的概述。在體外增殖測定中，測試了肽的EPO模擬活性。如下列步驟V所示實施該測定。在每個測定日，制備用于平行測量38條待測肽和、1個參照實例和EP0的體外活性的40塊微量滴定板。EPO儲液是20nM。VII.肽HES-綴合物的合成在圖8中顯示了反應原理示意圖。將二聚肽偶聯到載體上的替代策略Z/^開在W02006/136450，其通過參考并入本文。所述方法的目的是生產淀粉的衍生物(根據該實施例是HES)，其中所述的HES可在溫和的水性反應條件下與硫醇基選擇性反應。通過馬來酰亞胺基來實現這種選擇性。首先用氨基對HES進行官能化，然后將其轉變成相應的馬來酰亞胺衍生物。各反應批次通過超濾膜除去低分子反應物。產物、中間產物以及離析物全部是多分散性的。氨基-HES(AHES)的合成通過滲濾及隨后凍干獲得羥乙基淀粉(即HES130/0.4或HES200/0.5)。平均摩爾重量分別是約130KDa和200kD，摩爾置換度分別是0.4和0.5。根據在JacobPiehler的論文"ModifizierungvonOberf13chenfiirdiethermodynamischeundkinetischeCharakterisierungbiomolekularerErkennungmitoptischenTransducern"1997(通過參考引用并入本文)中所述的用于氨基葡聚糖的合成法，進行合成。通過使用如Floor等人(1989)所述的高碘酸鈉，將二酚(diolic)羥基部分地、選擇性氧化成醛基，來活化HES。在氨的存在下，通過使用氰基硼氫化鈉(Na[B(CN)iy)的還原性氨化，將醛基轉變成氨基(Yalpani和Brooks,1995)。糾凝財矛通過高碘酸鈉水溶液對糖中1，2-二醇的溫和氧化，導入醛基。通過使用不同摩爾濃度的氧化劑，可以控制可利用的錨基的數目和因此載體上肽藥物的數量。為了優化方案，使用試劑Purpald監視氧化，所述試劑Purpald只與醛形成紫色加合物。反應時間可以縮短至8-18h。使用的高碘酸鹽的量代表著葡萄糖構件塊數目的20%(應用180g/mol的葡萄糖構件塊質量，DS=0.4)。通過超濾技術和冷凍干燥進行后處理。使用不同分子量截止值的PES膜，通過超濾技術進行每種聚合產物的純化，隨后冷凍干燥。從優化的HES衍生物中，僅僅使用大于100kD的摩爾質量范圍。醛分析定性/半定量可利用醛基的Purpald反應^戚^^遽^f還^^麼必在下面的步驟中，通過用氛基硼氫化鈉在微酸性pH值的氯化銨飽和溶液中的還原性胺化，將導入的醛基轉化成胺。為了優化方案，原料的醛基用Purpald試劑追蹤，形成的胺用TNBS追蹤。這些實驗已經證實，起始階段后亞胺中間體的形成處于平衡，加入的還原劑偏好亞胺勝過醛。也可以發現，通過幾次加入還原劑，總反應時間24小時，進行最佳反應。通過產物的沉淀和滲濾或超濾，進行后處理。胺分析定性茚三酮反應(Kaiser-試驗)半定量使用2，4，6-三硝基苯磺酸(TNBS)，與氨基葡聚糖相比。達到的取代度約2.8%。這產生攜帶一個氨基的一個構件塊約6400g/mol的摩爾質量。馬來酰亞胺基丙酰-氨基-幾乙基淀粉("MalPA-HES，，)的合成導入氨基后，用co-馬來酰亞胺烷基(或芳基)酸-N-羥基琥珀酰亞胺酯導入錨基馬來酰亞胺。合成用3-馬來酰亞胺基丙酸-N-羥基琥珀酰亞胺酯(MalPA-0Su)，將馬來酰亞胺基最終導入HES。當在微酸性緩沖液中使用過量(5-IO倍)時，轉化是定量的(50mM磷酸鹽緩沖液，pH7，20%DMF，過夜)。超濾和凍干的產品保藏在-i8x:。分析使用茚三酮和TNBS來驗證氨基的反應。通過谷胱甘肽(GSH)的反應，和用Ellmans試劑6，6'-二硝基-3，3'-二硫代二苯甲酸(DTNB)以及通過700MHz」H-NMR-光謙檢測過量的硫醇基，來證明所引入的馬來酰亞胺基數目。達到的取代度大約是2%，相當于每個馬來酰亞胺構件塊8500g/mol(180g/mol葡萄糖構件塊質量，MS-O.4)。圖9顯示了馬來酰亞胺修飾的HES的屮-NMR光鐠(D20，700MHz)。馬來酰亞胺質子(6.8ppm)與異頭C-H(4.8-5.6ppm)的比例，給出約6，900g/mol的構件塊大小(相比較GSH/DTNB試驗給出7，300g/mol)。通過用GSH飽和以及與DTNB反應，可以測量馬來酰亞胺基的數量和因此構件塊大小。形成的黃色是顯著的，且可以容易地定量。這些值會給出5，000至100，000g/mol的可靠的構件塊大小，這分別取決于使用的原料、氧化步驟中高碘酸鹽的量。通過產物的卞-NMR光傳，已經驗證了該方法。在NMR中，從所有異頭C-H信號和馬來酰亞胺環質子的比例，可以定量馬來酰亞胺基的含量。下述范圍是優選的:_高碘酸鹽的量(第l步)(當量)構件塊大小馬來酰亞胺(g/邁o1)_0.01-0.03>55，0000.02-0.04約35，000-50，0000.04-0.1約15，000-35，0000.1-0.3_約6,000-7,000_表1:通過高碘酸鹽氧化，在HES主鏈中錨基的可達到的實際構件塊大小的實例肽-羥乙基淀粉-綴合物(Pep-AHES)合成使用含半胱氨酸的肽，該肽具有游離的N末端(肽-IA)或生物素化N-末端(肽-IB)。整夜過量轉化4:1肽-IA/B混合物(約6當量，MalPA-HES在磷酸鹽緩沖液，50mM，pH6.5/DMF80:20中)；通過超濾和凍干進行后處理。分析在280nm測定UV吸光度，并用GSH/DTNB測定馬來酰亞胺基的剩余含量。肽產率幾乎是定量的。幾乎檢測不到游離的馬來酰亞胺基。對于肽藥物的綴合，通過導入游離巰基(例如通過在N-末端導入半胱氨酸殘基)，使用肽結構域Ac-GGTYSCHFGKLT-Nal-VCKKQRG-Am(BB68)來創建肽單元，如在Ac-C(tBu)-GGTYSCHFGKLT-Nal-VCKKQRG-GGTYSCHFGKLT-Nal-VCKKQRG-Am(AGEM40)中。在微酸性緩沖液中綴合10-50%過量的去保護的肽l-2h。已經優化條件，一方面確保HES主鏈、馬來酰亞胺基和二硫橋是穩定的，另一方面為了觀察到定量轉化。通過使用不同的馬來酰亞胺官能化的HES化合物，可以合成多種超價的EPO-模擬肽，其已經在體外表現出超價效應。下面給出了一些實例表2:具有不同肽含量的AGEM40的超價EPO-模擬肽綴合物HES上的超價EPO-模構件塊大小擬肽馬來酰亞胺基理論舦含量實驗肽含量(g/mo1)(%)(%)AGEM40-HESA27,3003937AGEM40-HESA316，0002322AGEM40-HESA444，0001010在2個步驟中，實現了超價的EPO-模擬肽綴合物的容易的化學分析。首先，在溫和水解HES主鏈后，通過HPLC定量肽含量，其次，在用硫酸完全水解后，通過苯酚的比色試驗，測量多糖的量。圖10顯示了超價EP0-模擬肽綴合物AGEM40-AHESA2的TFA/水水解的HPLC色鐠圖(ShimadzuHPLC)。一段時間后，所有含肽的物質的紫外吸光度恒定在最大值，通過與游離肽對比，可以計算出37%的肽含量(理論值39%)。VIII.其它體外實驗已經在上面描述了下述的許多實驗。但是，下面的細節對所述實驗和結果進行了總結。主要討論了人細胞培養和骨髄測定。一方面，快速的基于細胞系的測定用于檢查在優化的早期階段中優化的肽序列的效力。這些細胞培養測定，仍然象新肽或新批次的快速效力測試一樣有效。細胞系TF-1(人細胞)使用的2個端點是增殖(在這里通常測定為在限定時間點的活細胞的數目)，和分化(作為在TF-1細胞中顯著的血紅蛋白生產)。另外，原代細胞(人骨髄干細胞)用于CFU-測定，它們非常接近體內情形。在使用EPO模擬肽作為肽單元的情況下，它們以更體內樣方式給出紅細胞生成活性的答案。但是，對它們的操作更復雜，每個測定需要比細胞培養測定更多的時間。使用人TF-1細胞的測定TF-1是僅僅響應于某些細胞因子(例如IL3或EP0)而增殖的人紅白血病細胞系。另外，TF-1細胞可以響應于EPO而向紅細胞系統表型分化。從DSMZ(Braunschweig,Germany)得到TF-1細胞。可以在DSMZ網站dsmz.de得到產品說明書。TF-1是歐洲藥典推薦的EP0-活性評估用細胞系。我們的用于維持培養的內部培養方案培養基RPMI+P/S+AmphoB+L-Glut.+20%FCS+h-IL-31.-500mlRPMI+5mlP/S+5mlAmphoB2.-200mlRPMI+PS/AmphoB+2.5mlL-谷氨酰胺+50mlFCS=完全培養基(l個月，4"C)3.-45ml完全培養基+22.5ulh-IL-3(1周，4X:)培養維持在200，000-1，000，000細胞/ml,3天，2x105/ml*2天，3x107ml*1天，5x107mlTF-1增殖測定的i殳計在TF-1增殖測定中，在多孔平板中，接種TF-1細胞，在不同濃度的EPO或EPO模擬肽中培養幾天。為了得到最佳結果，在開始測定前，應在沒有任何細胞因子(饑餓)的情況下，培養TF-1細胞2天。開始測定后3天，通過測定存活細胞的數目，間接測量細胞增殖。加入稱作MTS的四唑鹽試劑，它被還原成有顏色的曱牖。該反應依賴于NADH和NADPH。換而言之，依賴于線粒體活性。分光光度法測量甲牖的量。使用一系列已知細胞數用于校正，可以確定在每種條件下存在的活細胞的絕對數量。在圖11中也解釋了設計原理。通過下述方法，可以測定某些試劑在該試驗中的活性1.評估該試劑是否在特定濃度會造成活細胞數目的增加，和2.在何種濃度，該試劑會發揮半數最大效應(EC50的測定)。TF-1增殖測定的結果作為總的評述，必須提到，所有EP0-模擬肽(EMP1和上述修飾的肽)以它們的單體形式在該測定中表現為部分激動劑，即最大響應比用EPO觀察到的響應弱。然而，該測定可以用于測定標準化的圖中的右/左移，從而確定優化的結果。這尤其是已知在二聚化后激動劑活性會顯著增加。第一個圖描述了沒有標準化的絕對響應中的該效應。所有其它圖顯示了標準化的圖，這允許從曲線確定EC50值。在測定中使用了2種參照物質1)i￥W，公開的具有已知EPO-模擬性質的肽序列(Johnson等，1997).2)在藥房購買的重逸入ir^應^^;^^7V入作為0rthoBiotech產品阿法依伯汀(德國商品名ErypoR)用黑線繪制這些物質的圖，f/V的線是連續的，iM^的線是虛線。在接下去的圖中顯示了脯氨酸-修飾的EP0模擬肽，作為有顏色的連續線。這些修飾的肽描繪了下述序列1)朋WAc-GGTYSCHFGKLTWVCKKQGG顯示出與EMP1相同范圍的功效和效價；2)朋MAc-GGTYSCHFGKLT-Nal-VCKKQRG-Am甚至比EMP1和BB49更有效；3)淑扁，Ac-C(tBu)-GGTYSCHFGKLT-Nal-VCKKQRG-GGTYSCHFGKLT-Nal-VCKKQRG-Am是二價連續肽，它基于描述改進的特征的BB68序列而設計；4)J(丑，/^-A0^，它是先進的、高效的和強有力的肽(AGEM40)，根據本發明的超價原理HES化。這些序列用作特別的實例，以便解釋超價原理的益處。圖12描述了與EPO相比單體EPO模擬肽的結果。圖12包括的實際吸光度數據圖證實了在該測定中一般肽和EPO之間的絕對差異。圖13給出了從擬合的標準化圖計算出的EC50值。圖14顯示了BB68比BB49改善的作用。使用優化的BB68作為創建根據本發明的肽單元的構件塊，會使作用改善2個額外的數量級。這在圖14和圖15中顯示的對應的表中證實。然后，以優化的密度，將二聚體肽單元偶聯到大分子載體HES上。得到的API在摩爾對比上至少與EPO等效，且在質量對比上非常接近于EPO(見下面的圖16和圖17)。圖16和前面的圖和表清楚地證實了超價概念的極大效力。鑒于可以用細胞培養測定達到的精確度，所獲得的API在體外至少與EPO等效。因而優于不釆用超價概念的任何已知的EPO-模擬肽API。骨髓測定骨髓含有具有自我更新和發育成所有類型血細胞的潛力的造血干細胞。另外，骨髄含有能發育成一種或幾種血細胞系的定向祖細胞。在這些祖細胞中，幾種會發育成紅細胞(紅系祖細胞)。通過將骨髓細胞平板接種在基于甲基纖維素的半固體培養基中，可以證實祖細胞。在有適當細胞因子混合液存在下，祖細胞會增殖和分化，產生特定譜系細胞的集落。髄系祖細胞會發育成粒細胞集落(源自CFU-G)，單核細胞集落(源自CFU-M)，或混合的粒細胞-單核細胞集落(源自CFU-GM)。紅系祖細胞會發育成紅細胞的集落。根據紅細胞集落的大小，祖細胞稱作BFU-E(產生200個細胞或更多細胞的集落)或CFU-E(產生小于200個細胞的集落)。在定向的較早階段祖細胞可以發育成混合的粒細胞-紅細胞-單核細胞-巨核細胞集落。這些早期的祖細胞稱作CFU-GE麗。如果也存在某些不同的細胞因子，EP0會刺激從BFU-E或CFU-E發育紅細胞集落。如果沒有EPO，紅細胞集落不能發育。因此，在曱基纖維素中從同源批次骨髄細胞長出紅細胞集落，是EPO活性的衡量。由于上述過程與體內骨髄中發生的過程非常類似(如果不完全相同的話)，它們是EPO-樣活性的優異預測。骨髓測定的設計從冷凍管融化人骨髄細胞(商業上從Cryosystems得到，經過血清學檢查)，并以固定的細胞密度平板接種在具有給定細胞因子(但是沒有EPO)背景的甲基纖維素培養基中。加入不同濃度的EPO或EP0-模擬肽。在37匸溫育培養物12-14天。然后，通過顯微鏡檢查，計數髄系和紅系集落的數目。骨髓測定的終點1.前提沒有EPO的培養物應當僅僅產生髓系(白色)而非紅系(紅色)集落。含有EP0的培養物應當產生紅細胞集落的濃度依賴性的增加，和紅細胞集落大小的濃度依賴性的增加。2.如果會造成紅細胞集落的濃度依賴性的增加和紅細胞集落大小的濃度依賴性的增加，則該肽顯示出EP0-模擬活性。但是，肽不應當干擾所得到的髓系集落的數目。骨髓測定的結果上述脯氨酸修飾的EPO模擬肽不會刺激髄系集落的形成，但是表現出對紅色集落形成的顯著活性。定性地，以培養平板的照片顯示在圖18中，集落的計數記錄在圖19中。IX.抗體交叉反應性測定如本申請的引言中所述，病人有時會產生抗rhuEP0的抗體。這導致如引言中所述的嚴重后果。為了進一步研究根據本發明的肽性質，分析該肽實際上是否與抗EP0抗體交叉反應。使用含抗EPO抗體的兔血清和人血清來用于測試。用EP0或下列EP0模擬肽來預處理這些血清Ac-C-GGTYSCHFGKLT-lnal-VCKKQRG-GGTYSCHFGKLT-lnal-VCKKQRG-Am(實驗肽1)Ac-GGTYSCHFGKLT-lnal-VCKKQRG-Am(實驗肽2)Ac-乙酰化的N末端Am-酰胺化的C末端lnal-l-萘丙氨酸在分析中使用不同濃度的紅細胞生成素和EP0模擬肽。為了吸附存在于血清中的抗EPO抗體而用測試物質預處理血清后，用放射性標記的紅細胞生成素處理血清。預吸附步驟后血清中剩余的抗體通過紅細胞生成素來結合并再次免疫沉淀。Tacey等人(2003)描述了用于這種測試的方案，通過參考引用并入本文。在圖20中公開了使用EPO或根據本發明的EPO模擬肽，以含抗EPO抗體的血清進行的預吸附的結果。用EPO模擬肽預處理血清時，后來在與放射性標記的紅細胞生成素接觸時，測試血清為陽性。因此，雖然進行了預處理，但還是在血清中檢測出抗EPO抗體。這意味著在預處理期間，EPO模擬肽不能結合抗EPO抗體。在缺少結合活性時，不能從具有EPO模擬肽的血清中消除抗EPO抗體，因此血清中留有抗EPO抗體。因此，抗EPO抗體不能識別和因此結合EPO模擬肽。重組人EPO(rhuEPO)用作為對照。當用紅細胞生成素預處理血清時，在隨后摻入放射性標記的紅細胞生成素的測定中幾乎檢測不出抗體，因為抗體已被結合并通過用紅細胞生成素預處理而被除去。圖20中顯示的數值表示在IP中所用的總計數的Wcpm。當。/icpm值大于0.9時，判定血清是陽性。10(Wcpm表示所用的所有計數的量(放射性示蹤劑)，在此是放射性標記的EPO。該測定表明根據本發明的EPO模擬肽有利地顯示對抗EPO抗體無交叉反應性。因此，本文所述的EPO模擬肽即使在產生抗rhuEPO抗體患者中也應具有治療效果。此外，預計抗EPO模擬肽的抗體應不會結合紅細胞生成素。因此，根據本發明的EPO模擬肽優選特征還在于它們顯示與抗EP0抗體沒有明顯的交叉反應。X.在靈長類動物中的功效也在動物試驗中證實了根據本發明的EP0模擬肽的功效，其中7只非首次接受試驗的猴(成束猴(macacafascicularis))用于試驗。實驗肽是AGEM400HES(參見上面)，它作為凍干粉末使用，溶于林格液中。測試了0，Olmg/kg至50mg/kg的劑量(靜脈內給藥)。動物試驗表明，EPO模擬肽表現出良好的EPO模擬功效(甚至在低劑量時)，且具有持久的作用。另外，沒有觀察到毒性征象。參考文獻WrightonNC，BalasubramanianP,BarboneFP,KashyapAK,FarrellFX,JolliffeL,BarrettRW,DowerWJ(1997)Increasedpotencyofanerythropoietinpeptidemimeticthroughcovalentdimerization.NatureBiotechnology15:1261-1265WrightonNC,FarrellFX,ChangR，KashyapAK,BarboneFP，MulcahyLS，JohnsonDL，BarrettRW，JolliffeLK，DowerWJ(1996)SmallPeptidesasPotentMimeticsoftheProteinHormoneErythropoietin.Science273:458-463Johnson,D.L.,F.X.Farrell,etal.(1997)."Amino-terminaldimerizationofanerythropoietinmimeticpeptideresultsinincreasederythropoieticactivity."ChemistryandBiology4:939-950.Johnson,D.，F.X.Farrell,etal.(1998)."Identificationofa13AminoAcidPeptideMimeticofErythropoietinandDescripUonofAminoAcidsCriticalfortheMimeticActivityofEMP1".Biochemistry37，3699-3710.HaagR，SunderA,Stumb6JF,J.Am.Chem.Soc.(2000),122，2954.Roberts,M.J.，M.D.Bentley,etal.(2002)."ChemistryforpeptideandproteinPEGylation."AdvancedDrugDeliveryReview54(4):459-476.RichardTacey,AnthonyGreway，JaniceSmiel1，DavidPower,ArnoKromminga，MohamedDaha，NicoleCasadevallandMarianKelley:Thedetectionofanti-erythropoietinantibodiesinhumanserumandplasma-PartI.Validationoftheprotocolforaradioimmunoprecipitationassay;JImmunolMethods.2003Dec;283(1-2):317-29.ZalipskyS，Qazen，S，WalkerIIJA，MullahN，QuinnYP,(1999)"Newdetachablepoly(ethyleneglycol)conjugates:Cysteine-cleavablelipopoly邁ersregeneratingnaturalphospholipid,diacylphosphatidylethanoUmine,Bioconjug.Chem.10:703-707.Zhao,X.etal(1997)，"NovelDegradablePoly(ethyleneglycol)estersfordrugdelivery."In"Poly(ethyleneglycol)chemistryandbiologicalapplications;HarrisJM，Zalipsky,S.Eds.;ACSSymposiumSeries680;AmericanChemicalSociety:WashingtonDC,1997;458—472.權利要求1.選自下述的能結合EPO受體的肽●包含下述的共有氨基酸序列的肽X6X7X8X9X10X11X12X13X14X15其中每個氨基酸選自天然或非天然氨基酸，且X6是具有能形成共價鍵的側鏈官能度的氨基酸或A或α-氨基-γ-溴代丁酸；X7是R，H，L，W，Y或S；X8是M，F，I，高絲氨酸甲基醚或正異亮氨酸；X9是G或G的保守交換；X10是脯氨酸的非保守交換；或X9和X10被單個氨基酸置換；X11選自任意氨基酸；X12是不帶電荷的極性氨基酸或A；X13是W，1-nal，2-nal，A或F；X14是D，E，I，L或V；X15是具有能形成共價鍵的側鏈官能度的氨基酸或A或α-氨基-γ-溴代丁酸，和●上述共有序列定義的肽的功能等同片段、衍生物和變體，其具有EPO模擬活性，且在位置X10處具有構成脯氨酸的非保守交換的氨基酸，或其中X9和X10被單個氨基酸置換。2.根據權利要求1的肽，其中選擇在位置l和X15的氨基酸，橋。3.根據權利要求2的肽，其中所述橋是二硫橋或二硒橋。4.根據權利要求1-3中任一項的肽，其中在1和/或乂15的氨基酸選自半胱氨酸，半胱氨酸衍生物例如高半胱氨酸和硒代半胱氨酸，硫代賴氨酸，K或E。5.根據權利要求1-4中任一項的肽，其中Xu是萘基丙氨酸。6.長度為至少IO個氨基酸的肽，它能結合EPO受體，且具有激動劑活性，它選自下述2個可選方案(a)包含下述核心氨基酸序列的肽X9X10XuX12X13其中每個氨基酸選自天然的或非天然的氨基酸，且其中X9是G或G的保守交換；X!。是脯氨酸的非保守交換或X,和X,。被單個氨基酸置換；Xn選自任意氨基酸；Xu是不帶電荷的極性氨基酸或A;Xu是萘基丙氛酸；(b)肽，尤其是能結合EPO受體的肽，其包含下述氨基酸序列XgXvXgXgXi0XuXi2X13X14X15其中每個氨基酸選自天然或非天然氨基酸，且X6是C，A，E，oc-氨基-y-溴代丁酸或高半胱氨酸(hoc);X是R，H，L，W或Y或R，H，L，W，Y或S;Xs是M，F，I，高絲氨酸甲基醚或正異亮氨酸；X,是G或G的保守交換；Xn是脯氨酸的非保守交換；或X,和X^被單個氨基酸置換；Xu選自任意氨基酸；Xu是T或A;Xu是l-nal，2-nalXm是D，E，I，L或V;Xn是C，A，K，ct-氨基-Y-溴代丁酸或高半胱氨酸(hoc)條件是，X6或X^是C或hoc;(c)上述共有序列定義的肽的功能等同片段、衍生物和變體，其具有EP0模擬活性，且在位置Xi。處具有構成脯氨酸的非保守交換的氨基酸，或其中X,和X,。被單個氨基酸置換，且在位置L處具有萘基丙氨酸。7.根據權利要求6的肽，其包含下述核心氨基酸序列X6X7X8X9X10X11X12X13X14X15其中每個氨基酸選自天然的或非天然的氨基酸，且其中X6是具有能形成共價鍵的側鏈官能度的氨基酸或a或oc-氨基-y-溴代丁酸；X,是R，H，L，W或Y或S;Xs是M，F，I，Y，H，高絲氨酸曱基醚或正異亮氨酸；Xs是G或G的保守交換；X^是脯氨酸的非保守交換或X,和X,。被單個氨基酸置換；Xu選自任意氨基酸；Xu是不帶電荷的極性氨基酸或A;優選蘇氨酸，絲氨酸，天冬酰胺或谷氨酰胺；Xu是萘基丙氨酸；X"是D，E，I，L或V;Xu是具有能形成共價鍵的側鏈官能度的氨基酸或A或cx-氨基-y-溴代丁酸。8.根據權利要求1-7中任一項的肽，其特征在于，它在位置X10處具有帶電荷的氨基酸。9.根據權利要求1-8中任一項的肽，其包含下述額外的氨基酸位置XisXi7XisXi9其中每個氨基酸選自天然或非天然氨基酸，且X^獨立地選自任意氨基酸，優選G，K，L，Q,R，S，Har或T;Xn獨立地選自任意氨基酸，優選A，G，P，R，K，Y，Har;Xu獨立地選自任意氨基酸，優選L或Q;Xw獨立地選自任意氨基酸。10.根據權利要求9的肽，其特征在于，Xn是帶電荷的氨基酸。11.根據權利要求9或10的肽，其特征在于，X^是帶電荷的氨基酸。12.根據權利要求8-11之一的肽，其中在位置Xi。、Xn和/或X19處的帶電荷的氨基酸是帶正電荷的或帶負電荷的，且選自天然氨基酸，非天然氨基酸，和衍生的氨基酸。13.根據前迷權利要求任一項的肽，其特征在于，L。、Xn和/或Xw是帶負電荷的氨基酸。14.根據權利要求13的肽，其特征在于，所述帶負電荷的氨基酸選自*天然的帶負電荷的氨基酸，尤其是D或E;*非天然的帶負電荷的氨基酸，其優選具有伸長的側鏈，例如Aad，2-氨基庚二酸，Asu;*最初帶正電荷的氨基酸，但是它們被合適的化學基團衍生以給它們提供帶負電荷的基團。15.根據權利要求14的肽，其特征在于，用于將帶正電荷的氨基酸轉化成帶負電荷的氨基酸的基團選自二酸，例如二羧酸或二磺酸。16.根據權利要求12的肽，其特征在于，所述帶正電荷的氨基酸選自天然帶正電荷的氨基酸，例如賴氨酸，精氨酸，組氨酸或鳥氨酸；非天然的帶正電荷的氨基酸，其在位置t。和/或Xn優選具有伸長的側鏈，例如在例如高精氨酸中；最初帶負電荷的氨基酸，但是它們被合適的化學基團衍生以給它們提供帶正電荷的基團。17.根據權利要求l-16之一的肽，其中Xs是D-氨基酸，優選D-苯丙氨酸。18.根據權利要求1-17之一的肽，其包含下述氨基酸序列X4X5X6X7X8X9X1。X11X12X13X14X15X16X17X18X19其中Xe至Xw具有上迷含義，且其中X4-是F、Y、或F或Y的衍生物，其中所述F或Y的衍生物攜帶至少一個吸電子取代基，其中所述吸電子取代基優選地選自氨基，硝基和卣素，且其中1優選地選自4-氨基-苯丙氨酸，3-氨基-酪氨酸，3-碘-酪氨酸，3-硝基-酪氨酸，3，5-二溴-酪氨酸，3，5-二硝基-酪氨酸，3，5-二碘-酪氨酸；Xs-選自任意氨基酸，優選A，H，K，L，M，S，T或I。19.長度為至少IO個氨基酸的肽，它能結合EPO受體，且具有激動劑活性，它選自*包含至少一個下述的核心氨基酸序列的肽X9X10X11X12X13;X9X10X11X12X13X14X15X15X17或X9X10X11X12X13X14X15Xi6X17Xl8X19其中每個氨基酸選自天然的或非天然的氨基酸，且其中在Xi。、X17或Xw中的至少一個位置是帶負電荷的氨基酸，且其中X9是G或G的保守交換；Xn選自任意氨基酸；Xu是不帶電荷的極性氨基酸或A;優選蘇氨酸，絲氨酸，天冬酰胺或谷氨酰胺；Xu是W，l-nal，2-nal，A或F;Xm是D，E，I，L或V;Xu是具有能形成共價鍵的側鏈官能度的氨基酸或A或ot-氨基-y-溴代丁酸；Xu獨立地選自任意氨基酸，優選G，K，L，Q，R，S，Har或T;Xu獨立地選自任意氨基酸，優選L或Q;*上述共有序列定義的肽的功能等同片段、衍生物和變體，其具有EPO模擬活性，且其中在t。、L或Xw中的至少一個位置是帶負電荷的氨基酸。20.根據權利要求19的肽，其包含下述擴展的共有序列XeX'XsXgXi0X11X12X13X14X15X15X17X13X19其中每個氨基酸選自天然的或非天然的氨基酸，且其中X6是具有能形成共價鍵的側鏈官能度的氨基酸或A或ot-氨基-y-溴代丁酸；X7是R，H，L，W或Y或S;Xs是M，F，I，Y，H，高絲氨酸甲基醚或正異亮氨酸；X,是G或G的保守交換；在乙不是帶負電荷的氨基酸的情況下，Xi。是脯氨酸，脯氨酸的保守交換或脯氨酸的非保守交換，或X,和X,。被單個氨基酸置換；Xn選自任意氨基酸；Xu是不帶電荷的極性氨基酸或A;優選蘇氨酸，絲氛酸，天冬酰胺或谷氨酰胺；X"是W，l-nal，2-nal，A或F;X"是D，E，I，L或V;X15是具有能形成共價鍵的側鏈官能度的氨基酸或A或a-氨基-y-溴代丁酸；Xw獨立地選自任意氨基酸，優選G，K，L，Q，R，S，Har或T;在Xn不是帶負電荷的氨基酸的情況下，Xn選自任意氨基酸，優選A，G，P，Y或帶正電荷的天然的、非天然的或衍生的氨基酸，優選K，R，H，鳥氨酸或高精氨酸；X^獨立地選自任意氨基酸，優選L或Q;在X"不是帶負電荷的氨基酸的情況下，X^獨立地選自任意氨基酸，優選帶正電荷的氨基酸，例如K，R，H，鳥氨酸或高精氨酸；條件是，X1Q、Xn或X19中的至少一個是帶負電荷的氨基酸，優選X19。21.根據權利要求19或20的肽，其特征在于，所述帶負電荷的氨基酸選自*天然的帶負電荷的氨基酸，尤其是D或E;非天然的帶負電荷的氨基酸，其優選具有伸長的側鏈，例如Aad2-氨基庚二酸，Asu，最初帶正電荷的氨基酸，但是它們被合適的化學基團衍生以給它們提供帶負電荷的基團。22.根據權利要求19-21之一的肽，其特征在于，在帶正電荷的氨基酸存在于X！。、Xn和/或Xw中的至少一個位置的情況下，它選自參天然帶正電荷的氨基酸，例如賴氨酸，精氨酸，組氨酸和鳥氨酸；非天然的帶正電荷的氨基酸，其在位置t。和/或L優選具有伸長的側鏈，例如在例如高精氨酸中；*最初帶負電荷的氨基酸，但是它們被合適的化學基團衍生以給它們提供帶正電荷的基團。23.根據權利要求19-22之一的肽，其包含下迷氨基酸序列X4X5X6X7X8X9X10X11X12X13X14X15Xi6X17Xl8X19其中X6至Xn具有上述含義，且其中X4二是F、Y、或F或Y的衍生物，其中所述F或Y的衍生物攜帶至少一個吸電子取代基；Xs-選自任意氨基酸，優選A，H，K，L，M，S，T或I。24.根據權利要求23的肽，其中所述吸電子取代基選自氨基，硝基和卣素，且其中X4優選地選自4-氨基-苯丙氨酸，3-氨基-酪氨酸，3-碘-酪氨酸，3-硝基-酪氨酸，3，5-二溴-酪氨酸，3，5-二硝基-酪氨酸，3，5-二碘-酪氨酸。25.根據權利要求19-24中的至少一項的肽，其特征在于，乂13是萘基丙氨酸。26.根據權利要求19-25中的至少一項的肽，它選自Ac-GGTYSCHFGKLT-Na1-VCKKQDG-AmAc-GGTYSCHFGKLT-Nal-VCKKQEG-AmAc-GGTYSCHFGKLT-Nal-VCKKQ-Aad-G-AmAc-GGTYSCHFGELT-Nal-VCKKQRG-AmAc-GGTYSCHFGDLT-Nal-VCKKQRG-AmAc-GGTYSCHFGKLT-Nal-VCKEQRG-AmAc-GGTYSCHFGKLT-Nal-VCKDQRG-AmAc-GGTYSCHFGKLT-Nal-VCK-K(Glr)-QRG-AmAc-GGTYSCHFGKLT-Nal-VCK-K(Adi)-QRG-AmAc-GATTSCHFGKLT-Nal-VCKKQ-Aad-G-AmAc-GGTYSCHFGKLT-Nal-VCK-Har-QDG-AmAc-GGTYSCHFGKLT-Nal-VCK-Har-Q-Aad-G-AmGGGTYSCHFGKLT-Nal-VCKKQEG-AmGGGTYSCHFGKLT-Nal-VCKKQ-Aad-G-Am。27.長度為至少IO個氨基酸的肽，它能結合EPO受體，且具有激動劑活性，它選自特征在于下述核心氨基酸序列的肽XgXgXi0X11X12X13X14X15其中每個氨基酸選自天然的或非天然的氨基酸，且其中Xs是D-氨基酸；l是G或G的保守交換；Xw是脯氨酸，脯氨酸的保守交換或脯氨酸的非保守交換；或X,和Xu被單個氨基酸置換；Xu選自任意氨基酸；X^是不帶電荷的極性氨基酸或A;優選蘇氨酸，絲氨酸，天冬酰胺或谷氨酰胺；X"是D，E，I，L或V;X^是具有能形成共價鍵的側鏈官能度的氨基酸或A或oc-氨基-y-溴代丁酸，和*上述共有序列定義的肽的功能等同片段、衍生物和變體，其具有EPO模擬活性，且在位置Xs具有D-氨基酸。28.根據權利要求27的肽，其包含下述核心氨基酸序列X6X7X8X9X10X11X12X13X14X15其中每個氨基酸選自天然的或非天然的氨基酸，且其中X6是具有能形成共價鍵的側鏈官能度的氛基酸或A或(x-氨基-Y-溴代丁酸；X7是R，H，L，W或Y或S;Xs是D-M，D-F，D-I，D-Y，D-H，D-高絲氨酸甲基醚或D-正異亮氨酸；X,是G或G的保守交換；Xw是脯氨酸，脯氨酸的保守交換或脯氨酸的非保守交換；或X,和Xi。被單個氨基酸置換；X選自任意氨基酸；Xu是不帶電荷的極性氨基酸或A;優選蘇氨酸，絲氨酸，天冬酰胺或谷氨酰胺；X"是D，E，I，L或V;X15是具有能形成共價鍵的側鏈官能度的氨基酸或A或cx-氨基-Y-溴代丁酸。29.根據權利要求27或28的肽，其特征在于，Xs是D-苯丙氨酸。30.根據權利要求27-29的肽，其特征在于，它在位置Xu處具有帶電荷的氨基酸。31.根據權利要求27-30的肽，其包含下述氨基酸序列XsX'XsXgXioXi1X12X13X14X15X15X17X18X19其中X6-Xu具有上述含義，且其中X"獨立地選自任意氨基酸，優選G，K，L，Q，R，S,Har或T;Xi7獨立地選自任意氨基酸，優選A，G，P，Y或帶正電荷的天然的、非天然的或衍生的氨基酸，優選K，R，H，鳥氨酸或高精氨酸；U蟲立地選自任意氨基酸，優選L或Q;X19獨立地選自任意氨基酸。32.根據權利要求31的肽，其特征在于，Xu是帶電荷的氨基酸。33.根據權利要求31或32的肽，其特征在于，Xn是帶電荷的氨基酸。34.根據權利要求30-33之一的肽，其中在位置Xm、Xn和/或Xw處的帶電荷的氨基酸是帶正電荷的或帶負電荷的，且選自天然氨基酸，非天然氨基酸，和衍生的氨基酸。35.根據前述權利要求之一的肽，其特征在于，X1D、L和/或Xw是帶負電荷的氨基酸，36.根據權利要求35的肽，其特征在于，所述帶負電荷的氨基酸選自參天然的帶負電荷的氨基酸，尤其是D或E;非天然的帶負電荷的氨基酸，其優選具有伸長的側鏈，例如在Aad，2-氨基庚二酸，Asu中；最初帶正電荷的氨基酸，但是它們被合適的化學基團衍生以給它們提供帶負電荷的基團。37.根據權利要求36的肽，其特征在于，用于將帶正電荷的氨基酸轉化成帶負電荷的氨基酸的基團選自二酸，例如二羧酸或二磺酸。38.根據權利要求34的肽，其特征在于，所述帶正電荷的氨基酸選自參天然帶正電荷的氨基酸，例如賴氨酸，精氨酸，組氨酸和鳥氨酸；*非天然的帶正電荷的氨基酸，其在位置X,。和/或Xn優選具有伸長的側鏈，例如在例如高精氨酸中；*最初帶負電荷的氨基酸，但是它們被合適的化學基團衍生以給它們提供帶正電荷的基團。39.根據權利要求27-38之一的肽，其包含下述氨基酸序列X4X5X6X7X8X9X10X11X12X13X14X15X16X17X18X19其中X6至Xw具有上述含義，且其中X4-是F、Y、或F或Y的衍生物，其中所述F或Y的衍生物攜帶至少一個吸電子取代基；乂5=選自任意氨基酸，優選A，H，K，L，M，S，T或I。40.根據權利要求39的肽，其中所述吸電子取代基選自氨基，硝基和鹵素。41.根據權利要求39的肽，其中l選自4-氨基-苯丙氨酸，3-氨基-酪氨酸，3-碘-酪氨酸，3-硝基-酪氨酸，3,5-二溴-酪氡酸，3，5-二硝基-酪氨酸，3，5-二碘-酪氨酸。42.長度為至少IO個氨基酸的肽，它能結合EPO受體，且具有激動劑活性，它選自*特征在于下述核心氨基酸序列的肽X4X5X6X7X8X9X10X11X12X13X14X15其中每個氨基酸選自天然的或非天然的氨基酸，且其中X,-是F、或F或Y衍生物，其中所述F或Y的衍生物攜帶至少一個吸電子取代基；Xs-選自任意氨基酸，優選A，H，K，L，M，S，T或I。X6是具有能形成共價鍵的側鏈官能度的氨基酸或A或oc-氨基-Y-溴代丁酸；X7是R，H，L，W或Y或S;Xs是M，F，I，Y，H，高絲氨酸曱基醚或正異亮氨酸；X,是G或G的保守交換；X^是脯氨酸的非保守交換或X,和X^被單個氨基酸置換；Xn選自任意氨基酸；Xu是不帶電荷的極性氨基酸或A;優選蘇氨酸，絲氨酸，天冬酰胺或谷氨酰胺；Xh是D，E，I，L或V;Xu是具有能形成共價鍵的側鏈官能度的氨基酸或A或ot-氨基-y-溴代丁酸；*上述共有序列定義的肽的功能等同片段、衍生物和變體，其具有EPO模擬活性，且在位置X!。處具有構成脯氨酸的非保守交換的氨基酸，或其中X,和Xi。被單個氨基酸置換，且在位置X,具有F、或F或Y衍生物，其中所述F或Y的衍生物攜帶至少一個吸電子取代基。43.根據權利要求42的肽，其中所述吸電子取代基選自氨基，硝基和卣素。44.根據權利要求42的肽，其中X,選自4-氨基-苯丙氨酸，3-氨基-酪氨酸，3-碘-酪氨酸，3-硝基-酪氨酸，3，5-二溴-酪氨酸，3，5-二硝基-酪氛酸，3，5-二碘-酪氨酸。45.根據權利要求42至44中的至少一項的肽，其特征在于，它在位置X^處具有帶電荷的氨基酸。46.根據權利要求42的肽，其包含下述氨基酸序列X6X7X8X9X10X11X12Xl3X14X15X16XnXlsXl9其中X6至Xi5具有上述含義，且其中Xw獨立地選自任意氨基酸，優選G，K，L，Q，R，S，Har或T;Xn獨立地選自任意氨基酸，優選A，G，P或Y;X^獨立地選自任意氨基酸，優選L或Q;X19獨立地選自任意氨基酸。47.根據權利要求43的肽，其特征在于，Xn是帶電荷的氨基酸。48.根據權利要求46或47的肽，其特征在于，X^是帶電荷的氨基酸。49.根據權利要求45-48之一的肽，其中在位置Xlfl、L和/或X19處的帶電荷的氨基酸是帶正電荷的或帶負電荷的，且選自天然氨基酸，非天然氨基酸，和衍生的氨基酸。50.根據前述權利要求45-49之一的肽，其特征在于，Xie、L和/或Xi9是帶負電荷的氨基酸。51.根據權利要求50的肽，其特征在于，所述帶負電荷的氨基酸選自*天然的帶負電荷的氨基酸，尤其是D或E;*非天然的帶負電荷的氨基酸，其優選具有伸長的側鏈，例如在Aad，2-氨基庚二酸，Asu中；參最初帶正電荷的氨基酸，但是它們被合適的化學基團衍生以給它們提供帶負電荷的基團。52.根據權利要求51的肽，其特征在于，用于將帶正電荷的氨基酸轉化成帶負電荷的氨基酸的基團選自二酸，例如二羧酸或二磺酸。53.根據權利要求49的肽，其特征在于，所述帶正電荷的氨基酸選自眷天然帶正電荷的氨基酸，例如賴氨酸，精氨酸，組氨酸和鳥氨酸；*非天然的帶正電荷的氨基酸，其在位置Xt。和/或Xu優選具有伸長的側鏈，例如在例如高精氨酸中；*最初帶負電荷的氨基酸，但是它們被合適的化學基團衍生以給它們提供帶正電荷的基團。54.根據權利要求42至53之一的肽，其中Xs是D-氨基酸，優選D-苯丙氨酸。55.長度為至少IO個氨基酸的肽，它能結合EPO受體，且具有激動劑活性，它選自下組的肽(a)包含下述核心氨基酸序列的肽X9X10XuXuX13;XgXioXi1X12X13X14X15U17或XgXi。Xi1X12X13X14X15X15X17X18X19其中每個氨基酸選自天然的或非天然的氨基酸，且其中X9是G或G的保守交換；Xu選自任意氨基酸；Xu是不帶電荷的極性氨基酸或A;優選蘇氨酸，絲氨酸，天冬酰胺或谷氨酰胺；L是W，萘基丙氨酸，A或F;X"是D,B，I，L或V;L是具有能形成共價鍵的側鏈官能度的氨基酸或A或oc-氨基-y-溴代丁酸，以及上迷共有序列定義的肽的功能等同片段、衍生物和變體，其具有EPO模擬活性，其中X1Q、X16、L或X19中的至少一個位置具有帶正電荷的非蛋白原性的氨基酸，其具有與賴氛酸相比伸長的側鏈；(b)肽，尤其是能結合EPO受體的肽，其包含下述氨基酸序列X6X7X8X9X10X11X12X13X14X15其中每個氨基酸選自天然或非天然氨基酸，且Xs是C，A，E,oc-氨基-Y-溴代丁酸或高半胱氨酸(hoc);X7是R，H，L，W或Y或S;Xs是M，F，I，高絲氨酸曱基醚或正異亮氨酸；X,是G或G的保守交換；X!。是HarXu選自任意氨基酸；Xu是T或A;Xu是W，l-nal，2-nal，A或F;X"是D，E，I，L或V;X^是C，A，K，cx-氨基-Y-溴代丁酸或高半胱氨酸(hoc)條件是，X6或Xu是C或hoc;(c)包含下述氨基酸序列的肽X3X4X5X5X7X8X9X10X11X12X13X14X15X15X17X18其中X6至Xu具有上述變體(b)的含義，且其中X3獨立地選自任意氨基酸，優選D，E,L，N，S，T或V;Xs獨立地選自任意氨基酸，優選A，H，K，L，M，S，T或I。X"獨立地選自任意氨基酸，優選G，K，L，Q，R，S或T;Xn是高精氨酸；X18獨立地選自任意氨基酸。56.根據權利要求55的肽，其包含下述核心氨基酸序列X6X7X8X9X1。X11X12X13X14X15X16X17X18X19其中每個氨基酸選自天然的或非天然的氨基酸，且其中X6是具有能形成共價鍵的側鏈官能度的氨基酸或A或oc-氨基-Y-溴代丁酸；X7是R，H，L，W或Y或S;Xs是M，F，I，Y，H，高絲氨酸甲基醚或正異亮氨酸；X,是G或G的保守交換；在X1Q不是帶正電荷的非蛋白原性的具有與賴氨酸相比伸長的側鏈的氨基酸的情況下，X,。是脯氨酸，脯氨酸的保守交換或脯氨酸的非保守交換，或X9和^。被單個氨基酸置換；Xu選自任意氨基酸；Xu是不帶電荷的極性氨基酸或A;優選蘇氨酸，絲氨酸，天冬酰胺或谷氨酰胺；X"是W，l-nal，2-nal，A或F;X"是D，E，I，L或V;X"是具有能形成共價鍵的側鏈官能度的氨基酸或A或ot-氨基-y-溴代丁酸；在X16不是帶正電荷的非蛋白原性的具有與賴氨酸相比伸長的側鏈的氨基酸的情況下，X"獨立地選自任意氨基酸，優選G，K，L，Q,R，S或T;在X17不是帶正電荷的非蛋白原性的具有與賴氨酸相比伸長的側鏈的氨基酸的情況下，Xn選自任意氨基酸，優選A，G，P，Y或帶正電荷的天然的、非天然的或衍生的氨基酸，優選K，R，H或鳥氨酸；Xi8獨立地選自任意氨基酸，優選L或Q;在X19不是帶正電荷的非蛋白原性的具有與賴氨酸相比伸長的側鏈的氨基酸的情況下，Xw獨立地選自任意氨基酸，優選帶正電荷的氨基酸，例如K，R，H或鳥氨酸；條件是，X,。、X16、Xn或X19中的至少一個是帶正電荷的非蛋白原性的氨基酸，其具有與賴氨酸相比伸長的側鏈。57.根據權利要求56的肽，其中X1D、X16、Xn或L中的至少一個是帶正電荷的氨基酸，且其中所述帶正電荷的氨基酸優選地選自*天然帶正電荷的氨基酸，例如賴氨酸，精氨酸，組氨酸和鳥氨*非天然的帶正電荷的氨基酸，其優選具有與賴氨酸相比伸長的參最初帶負電荷的氨基酸，但是它們被合適的化學基團衍生以給它們提供帶正電荷的基團；條件是，X1D、X16、Xn或X19中的至少一個是帶正電荷的非蛋白原性的氨基酸，其具有與賴氨酸相比伸長的側鏈。58.根據權利要求57的肽，其中由側鏈的延伸單元提供帶正電荷的氨基酸的延伸，其中所述延伸單元是脂族或芳族基團。59.根據權利要求58的肽，其中由CH2單元提供所述延伸，其中CH2單元的數目優選地是1至6。60.根據權利要求55-59中的至少一項的肽，其中所述帶正電荷的非蛋白原性的與賴氨酸相比伸長的氨基酸是非天然氨基酸。61.根據權利要求的肽60，其中所述非天然氨基酸選自高精氨酸，氨基苯丙氨酸和氨基萘基丙氨酸。62.根據權利要求56的肽，其特征在于，X:。或Xn是帶電荷的氨基酸。63.根據權利要求56的肽，其特征在于，Xu是帶電荷的氨基酸。64.根據權利要求55-63之一的肽，其中在位置Xu、X,7和/或X^處的帶電荷的氨基酸是帶正電荷的或帶負電荷的，且選自天然氨基酸，非天然氨基酸，和衍生的氨基酸。65.根據權利要求64的肽，其特征在于，X1D、Xn和/或19是帶負電荷的氨基酸。66.根據權利要求65的肽，其特征在于，所述帶負電荷的氨基酸選自參天然的帶負電荷的氨基酸，尤其是D或E;*非天然的帶負電荷的氨基酸，其優選具有伸長的側鏈，例如Aad:2-氨基庚二酸，Asu;參最初帶正電荷的氨基酸，但是它們被合適的化學基團衍生以給它們提供帶負電荷的基團。67.根據權利要求66的肽，其特征在于，用于將帶正電荷的氨基酸轉化成帶負電荷的氨基酸的基團選自二酸，例如二羧酸或二磺酸。68.根據權利要求55-67之一的肽，其中Xs是D-氨基酸，優選D-苯丙氨酸。69.根據權利要求55-68之一的肽，其包含下述氨基酸序列X4X5X6X7X8X9X10X11XuX13X14X15Xi6Xi7Xi8X19其中X6至L具有上述含義，且其中X4-是F、Y、或F或Y的衍生物，其中所述F或Y的衍生物攜帶至少一個吸電子取代基；乂5=選自任意氨基酸，優選A，H，K，L，M，S，T或I。70.根據權利要求69的肽，其中所述吸電子取代基選自氨基，硝基和卣素。71.根據權利要求70的肽，其中l選自4-氨基-苯丙氨酸，3-氨基-酪氨酸，3-硪-酪氨酸，3-硝基-酪氨酸，3，5-二溴-酪氨酸，3，5-二硝基-酪氨酸，3，5-二碘-酪氨酸。72.—種EPO模擬肽，其包含至少2個單體EP0模擬肽共有序列，其中至少一個單體肽共有序列是根據權利要求1-71中的至少一項的肽。73.根據權利要求72的肽，它是二聚體，且包含至少一個根據權利要求1-71中的至少一項的單體肽共有序列。74.與靶分子結合的化合物，其包含(i)至少兩個肽單元，其中每個肽單元包含至少兩個具有把結合能力的結構域；(ii)至少一個聚合栽體單元；其中所述的肽單元連接到所述的聚合載體單元，且其中至少一個肽單元的至少一個結構域是根據權利要求1-71中的至少一項的肽。75.根據權利要求74的化合物，其中至少一個肽單元包含根據權利要求73的肽二聚體。76.根據權利要求74或75的化合物，其中所述的栽體單元是或包含至少一種天然的或合成的分支的、樹枝狀的、或線性的聚合物，且優選地選自聚甘油，聚唾液酸，葡聚糖，淀粉或聚乙二醇，或其它生物惰性的水溶性聚合物。77.根據前述權利要求74-76中的至少一項的化合物，其中所述的聚合栽體單元包含分支單元。78.根據權利要求77的化合物，其中所述的分支單元包含甘油或聚甘油。79.根據前述權利要求74-78中的至少一項的化合物，其中所述的載體分子的分子量是至少5kD，優選20至200或4000kD,在使用諸如聚乙二醇等較小栽體的情況下，是20-80kD。80.根據前述權利要求74-79中的至少一項的化合物，其中所述的載體單元由至少2個聚合亞基組成，其中所述的聚合亞基通過至少一個生物可降解的共價接頭結構相連接。81.根據前述權利要求中的至少一項的化合物，其包含第一生物可降解的載體單元，其中肽單元和第二聚合載體單元連接到所迷的第一聚合載體單元上。82.根據權利要求81的化合物，其中所述的第二載體單元具有比所述第一載體單元低的分子量，且其中優選是HES的所述第一栽體單元的約20-50%連接位點被優選是分子量約3-10kD的PEG的所述第二載體單元占據。83.根據前述權利要求中的至少一項的化合物，其中使用經修飾的聚合載體單元，84.根據權利要求83的化合物，其中所述肽單元通過共價鍵連接到所述的聚合載體單元上，且連接通過所述肽單元的反應性氨基酸、N-末端氨基和/或C-末端羧酸發生，其中所述的反應性氨基酸優選地選自賴氨酸，半胱氨酸，組氨酸，精氨酸，天冬氨酸，谷氨酸，絲氨酸，蘇氨酸和酪氨酸，且其中在所述的聚合載體單元不具有適當的反應性偶聯基團的情況下，使用偶聯單元來修飾聚合載體單元，其中所述的偶聯單元優選地選自與所述肽單元的氨基起反應的酰化基團；與所述肽單元上的硫氫基(巰基)、甲硫基、咪唑并或氨基起反應的烷基化基團，最優選馬來酰亞胺基；與蛋白的羧基起反應的酯和酰胺形成基團；與所述肽單元上的巰基起反應的二硫化物形成基團，例如5，5'-聯硫基雙(2-硝基苯甲酸酯)基團，鄰吡啶基二硫化物和烷基硫醇基團；與所述肽單元的胍部分起反應的二羰基，例如環己二酮基，和其它l，2-二酮基；與所述肽上的酚基起反應的重氮基；與所述肽單元上的氨基起反應的反應基團，其來自溴化氰與所述聚合載體單元的反應。85.根據權利要求84的化合物，其中所述的反應性氨基酸是半胱氨酸，且其中所述的偶聯基團是馬來酰亞胺。86.編碼根據權利要求1-73中任一項的肽的核酸。87.—種肽，其特征在于，它是根據權利要求1-73中的至少一項的肽的反向肽和/或逆/反向肽，或完全由D-氨基酸組成的相應肽。88.二聚化單體肽單元以形成EPO模擬肽二聚體的方法，其中所述二聚體通過在單體肽單元之間形成共價鍵來創建，其中所述鍵在第一個單體肽單元的C-末端氨基酸和第二個單體肽單元的N-末端氨基酸之間形成。89.根據權利要求88的方法，其中使用單體肽單元，其在C-或N-末端攜帶具有能形成共價鍵的側鏈官能度的氨基酸，其中在第一個單體肽單元的C-末端氨基酸的側鏈和第二個單體肽單元的N-末端氨基酸的側鏈之間形成共價鍵。90.根據權利要求88或89的方法，其中將2個單體肽單元連接成二聚體的共價鍵是二硫橋或二硒橋。91.根據權利要求88-90之一的方法，其中在2個單體EP0模擬肽單元之間形成分子間鍵的氨基酸選自半胱氨酸，半胱氨酸衍生物例如高半胱氨酸和硒代半胱氛酸，硫代賴氨酸，K或E。92.EPO模擬肽二聚體，其包含權利要求1-73中的任一項定義的EP0模擬肽序列。93.通過根據權利要求88-91的方法生產的EPO模擬肽二聚體，其優選包含權利要求1-73中的任一項定義的肽序列。全文摘要本發明涉及具有特定性質的經修飾的EPO模擬肽。文檔編號A61K38/00GK101443351SQ200780015575公開日2009年5月27日申請日期2007年3月9日優先權日2006年3月9日發明者H-G·弗蘭克,U·哈伯爾申請人:阿普拉根有限公司