專利名稱：：用于治療在外科切除術后殘留在組織中的微小殘余腫瘤的方法和裝置的制作方法
技術領域：
：本發明涉及電穿孔系統、裝置以及利用這種裝置來治療腫瘤周圍部^立的組織的方法。更具體i也，本發明涉及通過用電穿孔的尿:P中和抗癌劑治療明顯的非癌性組織來減少肺瘤塊的體積(debulkingtumormass)、不損害(sparing)腫瘤周圍的組織、以及降低腫瘤塊尺寸和復發率。
背景技術：
：以下描述包括可有利于理解本發明的信息。然而，并不是承認，任何這樣的信息對于要求保護的本發明而言是現有技術或與本發明有關，或任何明確或間4妄地提及的出版物是現有技術。在工業化國家中，除血管疾病之外，癌癥是死亡的最常見原因。傳統上/>〗人的用于治療癌癥和肺瘤(其包4舌單個相對庫侖廓分明的組織塊(tissuemass))的方案(paradigm)包4舌通常與外科—刀除聯合使用的放療和化療。在外科切除術是一種選擇的情況下，外科手術通常是最有效的治療形式。然而，外科治療的效果取決于惡性組織的完全去除，該惡性組織包括主腫瘤塊以及經常存在于主腫瘤(maintumor)附近的分支和孩史4爭移。當去除主腫瘤時，外科醫生還試圖通過切除肺瘤周圍的明顯正常組織來消除這樣的局部或區域樣l轉移。這種組織稱作"邊緣組織"或簡單地稱作"邊緣"。在何種程度上去除邊緣組織取決于外科醫生的判斷。通常，整個肺瘤周圍0.5-2cm的邊緣是可以接受的。然而，對于侵襲性腫瘤，更廣泛的切除并不罕見。甚至是在仔細切除肺瘤和邊》彖以后，大多凄t類型的肺瘤還是會以10-40%的頻率復發。復發率取決于多種因素，包括腫瘤大小、腫瘤的類型和位置、患者的狀況等。為了降低復發率，外科手術后通常會進行放療和/或化療。盡管進4亍這些后續治療(secondarytreatment),^f旦復發率仍然令人不安i也專交高。除外科手術和;改射以外，還使用局部腫瘤控制的其他方法。這些方法包括射頻(RF)消融、光動力學療法(PDT)、冷凍療法(CRYO)、化放療(CR)、近程治療(BT)、直流電療法(GT),以及其他方法。夕卜科手術、RF、PDT、CRYO以及CR依賴于腫瘤和邊纟彖組織的完全去除或破壞，而放射、BT、以及GT留下或多或少的完整的經治療的正常組織，雖然輻射和BT會引起嚴重的瘢痕、纖維化以及血管和神經損傷。在任何情況下，健康組織的去除、瘢痕、以及身體(物理)損傷可以導致顯著的損形和顯著的身體部位和/或其功能的生理用途(physicaluse)的喪失。例如，大多凄t以上列出的目前用于石皮壞或去除肺瘤塊的外科手術的輔助方法會引起對腫瘤周圍的正常組織的非特異性損傷。在腫瘤塊的切除可以導致必須從器官去除腫瘤處的功能完全減弱(debilitating),其中上述器官包括舌、聲帶、直腸、唇、陰莖、或導致面部組織的精細肌肉(finemuscle)和視覺結構的完全減弱。為了避免上述損形并保持功能以及確併:乂人胂瘤周圍的組織清除上述癌細胞，本發明提供了外科手術的輔助方法或新輔助方法，因為在肺瘤學領域仍然需要不損害(sparing)相鄰于腫瘤的明顯健康組織并減小肺瘤塊、腫瘤的生長，以及復發率的裝置和方法，。
發明內容在第一種實施方式中，本發明包括一種降低組織中癌細胞生長的復發的4既率的方法。在一種4尤選實施方式中，該方法包i舌向所述組織的細胞提供電能的電穿孔脈沖和藥物。在一種相關的實施方式中，優選在電穿孔脈沖前立即向組織提供藥物或同時向組織提供藥物。在第二種實施方式中，本發明包括一種在外科切除術后治療殘留在組織中的殘余癌細胞的方法。優選地，本發明提供了通過使得樣丈小的結節(nodule)或其他形式的癌性組織在電穿孔電場中經受到藥物的處理來控制癌癥的進一步擴散。在一種相關的實施方式中，這才羊的治療可以是外禾+手術的輔助方法，因為它可以在肺瘤去除之前或以后施用。在一些情況下，尤其是在癌細J包還未形成為纖維塊(fibrousmass)的情況下，不可以采用任何手術程序。在這樣的情況下，EP治療纟是供了一種減小腫瘤塊并終止或延遲癌細胞在組織中的進一步生長的方法。在一種進一步相關的實施方式中，本發明的方法提供了較大胂瘤塊的減積術(或減積治療，debulking),其中通過抗癌劑(如博來霉素)的作用，來'軟化，肺瘤組織，以1更更容易乂人周圍的^fc康或正常組織去除肺瘤塊。在第三種實施方式中，本發明的方法減少了在切除肺瘤時必須去除的腫瘤部位周圍的正常組織(即"邊纟彖"組織)的量，/人而不損害正常組織并因此在更大程度上保留組織功能和外只見。在其他的實施方式中，本發明提供了一種器械，其能夠在需要時并以容易操作的方式為切除胂瘤周圍的組織提供所述電穿孔能量脈沖。在相關的實施方式中，本發明的裝置用于給予抗癌劑以及給予足以在邊緣區域引起組織電穿孔的電場。下文提供了本發明裝置的另外的實施方式。根據以下附圖、詳細描述、以及所附權利要求，本發明的其他特征和優點將是顯而易見的。本專利或申請文件包括至少一幅彩色附圖。在提出要求并支付必要的費用以后，美國專利商標局將提供本專利或專利申請出版物的具有彩色附圖的副本。圖1是示出了傷口強度的圖表，其是通過愈合中的皮膚樣本的斷裂點(breakingpoint)而測得，其中對該愈合中的皮膚樣本在體內進行下述處理單獨用鹽水、鹽水加電穿孔、單獨用博來霉素、以及博來霉素加電穿孔。在這些實驗中還處理了下層脂肪(underlyingfat)和月幾肉纟且織。圖2A-F是三色染色組織的顯微照片，其示出了(A)未處理的切開后第二天的組織與下述組織之間的對比(B)切開后第二天的用鹽水加電穿孔處理的組織；(C)在第二周鹽水加電穿3L處理；(D)在第二周博來霉素加電穿孔處理；(E)在第三周鹽水加電穿孔處理；以及(F)在第三周博來霉素加電穿孔處理。圖3A-D是在三周后，皮膚切口處的膠原沉積的染色(三色)顯微照片。圖3A和圖3C分別是博來霉素和鹽水處理的皮膚組織的明場像，而圖3B和圖3C是分別示出博來霉素和鹽水處理的皮膚組織的偏振光圖像。圖4A-D是示出切開后第三周的肌肉組織樣本的顯微照片；(A)單獨用鹽水，(B)鹽水加電穿孔，(C)單獨用博來霉素，以及(D)博來霉素加電穿孔。圖5是本發明的裝置的一種實施方式的橫斷面圖，其示出了一種包括手柄的實施方式，該手柄包括用來升高和降低活塞陣列的指專侖(或壓4侖，thumbwheel),其中活塞4,動通過電才及4十(electrodeneedle)的物質的裝載或分配。圖6示出了本發明的一種實施方式的分解圖。圖7是本發明的裝置的一種實施方式的橫斷面圖，其中活塞是由螺桿來推動的，而螺桿是通過殼體50的順時針方向(升高活塞)和逆時4十方向(降^氐活塞)魂j爭加以馬區動的。圖8A和B是本發明的一種實施方式的透^L圖，其中殼體50的旋轉將往復地驅動活塞陣列。圖A示出具有托盤20的實施方式而圖B則示出沒有4乇盤20的實施方式的主體。圖9是透視圖，其示出了本發明的一種借助于翼形螺母來推動活塞陣列的實施方式。圖10示出了來自基體22下側的多個電極針的陣列的一個實例。圖IIA、B、C、以及D是示出了具有胂瘤(A)、具有在完全切除腫瘤前外科暴露的腫瘤(B)、具有在肺瘤切除后但在假(sham)EP處理前的開i文性傷口床(openwoundbed)(C)、以及具有在治療3周后的外科/治療部位(D)的試-驗動物的第2組同齡組動物的照片。對于此第2組，沒有進行電穿孔，并且即使已完全切除腫瘤，腫瘤仍然復發。圖12A、B、C、以及D是示出了具有腫瘤(A)、具有在完全切除腫瘤前外科暴露的腫瘤(B)、具有在腫瘤切除后〗旦在用EP進行治療前的開it性傷口床(C)、以及在治療3周后的外科/治療部位(D)的試—驗動物的第l組同齡組動物的照片。如用博來霉素-EP治療所見察到的，在治療部位沒有腫瘤復發。圖13A、B、以及C是示出了具有腫瘤(A);部分腫瘤切除以后(B);以及具有在治療3周后的外科/治療部位(C)的試-驗動物的第7組同齡組動物的照片。即佳^又部分地切除腫瘤，小鼠在第3周也未顯示任何肺瘤復發。圖14A、B、以及C是示出了具有腫瘤(A)、部分腫瘤切除后(B)、以及具有在治療3周后的外科/治療部位(C)的試驗動物的第4組同齡組動物的照片。在沒有進行EPT的情況下，腫瘤繼續生長。圖15示出了表V中所列數據的柱狀圖。PTE是指部分腫瘤切除，CTE是指完全胂瘤切除，Bi.v.是指靜脈內給予試驗動物的博來霉素，EP是指電穿孔，i.t.B是指瘤內給予的博來霉素，以及PEP是指局部電穿孔。具體實施例方式如本領域技術人員會明了的，以下描述詳細描述了本發明的某些優選實施方式，因此其僅是說明性的而并非描述本發明的實際范圍。在詳細描述本發明以前，應當明了，本發明并不限于所描述的特定的裝置安排、系統，以及方法，因為這些可以變化。還應當明了，本文所-使用的術語^義是為了描述特定的實施方式，而不是用來限制本發明的范圍，本發明的范圍由所附權利要求所限定。概述電穿孔療法(EPT),也稱作電化學療法(ECT),是一種用來治療局部癌性病變和腫瘤塊的方法。該方法包括瘤內或靜月永內給予某些化療藥物，最常用博來霉素。在大多數情況下，電穿孔(EP)是通過胂瘤細胞塊來實施的。脈沖參數通常在以下范圍內場強200-2000V/cm;月永沖長度0.1-10.0ms;月永沖凄丈2-20;以及月永沖頻率1-5Hz。施加上述電場會導致胂瘤細胞膜的透性化，這使抗癌藥物可以進入細月包，并且與在沒有電穿孔的條件下所)(見測到的情況相比，由于藥物的攝取而引起高達5000倍的細胞毒性。研究表明，EPT可有效^氐抗動物的許多類型的實體胂瘤以及人類的若干類型的胂瘤。事實上，目前若干臨床研究正在進行中，包括評價EPT用于治療頭頸部鱗狀細胞癌的安全性和效力的III期研究。然而，這種治療研究并沒有一皮設計為或用來治療或試驗EPT對與癌細胞共同存在的非癌性邊纟彖組織的影響。在用于局部和區域腫瘤控制的許多方法中，EPT有點獨特，因為它對正常組織的損害遠小于對惡性組織的損害。動物和人的體外和體內研究的結果表明，借助于凋亡和壞死機制，使用如博來霉素之類的藥物的EPT可有歲文i也石皮壞大多l丈肺瘤，而對胂瘤周圍的正常組織僅引起較小的作用(炎癥、少量壞死)，特別是當博來霉素的濃度、劑量、以及脈沖參數在適當的范圍內時。通常可經受(amenable)治療的腫瘤周圍的邊纟彖組織包括^旦不限于以下器官，包^"乳房、前列腺、舌、陰莖、唇(陰唇)、直腸、聲帶、肝、頭頸部鱗狀細胞癌(SCCHN)、皮膚的和其他腫瘤。無論肺瘤塊是否已經;故切除都可以對這樣的組織進行EPT。在這樣的癌癥中，通過以在很大程度上不受損地進行愈合并且可以消除樣支小轉移和會引起局部復發的延伸到組織中的腫瘤分支的方式來治療組織將顯著有利于患者。正如相對于本發明的方法也是可理解的，具有諸如博來霉素的藥劑的電穿孔治療可提供在靶向癌細胞中的可測量的選擇性的程度。這種方法學還與用具有4氐抗特定疾病狀態的比活(specificactivities)的其他藥劑進行的治療有關，如高度局部化的(localized)傳染病和其j也疾病^l犬態(其中存在感染或病變組織的病灶)，其中藥劑可以乾<向于被感染的或病變的細胞或細胞團(groupofcell)以破壞受到侵襲的細胞。在這樣的情況下，上述細J包和周圍組織的電穿孔將〗吏藥劑達到受感染或病變細胞中的期望的靶標，而且對未感染或正常細胞沒有有害影響(如經驗上所觀察到的)。異常和正常細胞的不同應答的分子和細胞機制目前是未知的。另夕卜，本發明的方法和裝置適用于癌細胞的部位分布對于外科手術不容易<多復的區域的疾病狀態。例如，可以以與治療邊緣組織床相同的方式，用本發明的裝置來治療包含纟啟小或局灶性疾病部位的面部皮膚組織，這樣的方式導致引起的瘢痕顯著小于(少于)由外科手術引起的瘢痕。因此，具體地說，可以連通周圍正常組織一起對肺瘤塊的細胞進行電穿孔，從而提供一種使腫瘤塊減小體積(debulking)的方法，提供一種阻止、終止或以另外的方式降低病變細胞的生長和/或復發率的機制。在這樣的情況下，可以在EPT之前或之后去除腫瘤組織，或甚至可以在EPT之后允許不切除腫瘤組織，在這樣的情況下，藥劑(如博來霉素)的效應將通過凋亡和/或壞死才幾制〗吏得細胞死亡并軟化腫瘤細月包塊(tumorcellmass),4妄著進一步壞死。附近的正常組織將在很大程度上保持不受侵襲。通常，用EPT治療腫瘤包括1單位/ccm4寺治療組織的博來霉素劑量，以4單位/ml的濃度瘤內注射。產生l永沖場以l吏得通常以6個分離的4Hz月永沖施加該場，每一個在6個不同的場方向，每一個具有100usec持續時間，以200和2000V/cm之間任一點，<旦通常在600和1500V/cm之間，更經常在600和1400V/cm之間，以及甚至更經常在1200-1300V/cm之間的額定場強穿過腫瘤塊。增加博來霉素劑量或濃度以及增加電穿孔脈沖的強度超過標準參數可以導致對正常組織的更嚴重的影響。在非常高的場強和/或脈沖長度下，EP本身(即，例如，沒有博來霉素)可以誘導不可逆的細胞膜變質，導致落入有效電場內的腫瘤以及正常細月包組織的^s皮壞。在進一步相關的實施方式中，當注射DNA作為治療藥劑時(4o在美國專利6,528,315中所陳述的，其以引用方式結合于本文)，可以利用1-600V/cm之間的脈沖場強來操作用于實施本發明的方法的裝置本身。在這樣的實施方式中，DNA理想地編碼對于待治療的包含月中瘤的組織具有治療性抗癌歲丈應的多肽。對于其他藥劑，包括基因、蛋白質、細胞因子、趨化因子、類固醇、抗體、脂Ai、以及反義核酸，可以使用同樣高的脈沖參數(即，例如，800-1500V/cm或，可替才奐i也，1-600V/cm，更優選200至600V/cm,以及進一步更優選400-600V/cm)。進一步預料到，可以使用這些和任何其他藥劑，其中這樣的藥劑可促進傷口愈合而并不促進惡性細胞的生長。就在EPT中使用上述藥劑而言，可以使用低至50V/cm的低端場強以在含有微小病變和病變細胞的組織內對細胞進4于電穿孔，其中所述組織還未形成異常的組織塊。如前所述，在一種實施方式中，本發明的癌癥療法的理i侖基礎涉及外科切除腫瘤塊('減積術，)以降低患者的生物壓力，外科消除邊緣組織以根除微轉移和侵入的胂瘤組織，并用放療和/或化療來控制腫瘤的局部、區域和全身擴散。雖然外科切除肺瘤本身通常可解除患者的病痛，沒有嚴重的后遺癥，^a隨后的邊^^切除、；改療和化療步驟對于患者可能是非常有害的。這些治療會嚴重影響生理和機械功能、外觀、生活質量以及最終結果。因此，理想的是，將腫瘤的外-牛切除與一種治療方法結合，該治療方法(a)比目前的方法更有效地防止由于微轉移和侵襲性肺瘤組織導致的腫瘤復發，以及(b)使周圍邊緣組織的損失降至最小。在本發明中，提供了EPT作為外牙牛輔助方法或新輔助方法的新用途，以減小腫瘤塊、防止腫瘤復發、并4吏需要切除的邊纟彖組織降至最少或二者。現在開始描述本發明的方法，本發明目的是提供了一種用來在切除的癌細胞部位周圍的正常組織中降低腫瘤復發的概率的新方法。換言之，本發明的方法包括治療癌細胞部位周圍的組織"邊緣"，這樣的癌細月包通常形成在不同(distinct)組織部位。在一種優選實施方式中，本發明的方法可以減少必須連同腫瘤以及其癌細胞一起-故切除的組織的量并4吏放療或化療變得多余。該方法包括將電能的電穿孔月永沖施加于月中瘤部^f立周圍的組織。除了施加電穿3U永沖外，該方法進一步包括提供(優先在電脈沖以前或同時)一種包含抗癌藥物的制劑(formulation)。在一種優選實施方式中，上述藥物包括-生物活性分子。例如，該藥物可以包4舌編碼可表達的多肽的核酸，酶的基因序列的核酸。另一個實例包括反義DNA或RNA、或千擾RNA(RNAi)。可替換地，該藥物可以包括多肽或有才幾分子，如細胞因子、趨化因子、抗體、順鉑或博來霉素、或任何具有抗癌活性的其他分子。此外，上述披露的任何化合物可以以制劑的形式給藥，其中所述制劑可以包括本領域公知的藥用鹽、緩沖劑以及其他賦形劑的任何組合(如在本領域^^知的)。例如，對于核酸的制劑可以包4舌例如所述核酸和聚谷氨酸(聚-L-谷氨酸)，如在美國專利7,173,116中所描述的，其全部內容以引用方式結合于本文。在一種進一步的實施方式中，本發明的方法包括利用能夠將電穿孔脈沖施加于腫瘤部位的局部區域的裝置來施加上述電穿孔脈沖。在一種優選實施方式中，這樣的裝置可以包括細長針狀電才及的陣列。取決于所需要的電脈沖的強度以及耳又決于抗癌劑的遞送方式，可替換的實施方式可以使用短的非穿透性電極或半穿透性微針電才及。在這樣的實施方式中，該裝置將^皮:沒計為不需要活塞和遞送針。代之以，可以利用4又包括電極陣列的電穿孔裝置來實施該治療方法，這種陣列包括非穿透性或半穿透性電極。在這樣的情況下，將通過獨立的裝置(如注射器)來遞送藥物。在一種進一步優選的實施方式中，關于本發明裝置的任何物理構造，在治療過程的實施中，電才及可相乂寸于4寺治療的組織加以定4立以產生具有足以在特定區i或和深度內電穿孔所述組織中的細月包的場強和能量的電場。通常，該裝置將^皮定位以將電穿孔脈沖傳遞至腫瘤切除部位周圍(三維)的預選擇邊緣組織內的所有組織。取決于切除肺瘤的大小和電極陣列的大小，可以通過完整地施加一次電穿孔脈沖來電穿孔周圍的邊縛_組織，或通過定位和重新定位電極陣列以將肺瘤部位邊緣組織完全包圍在電穿孔能量場中而需要多次施加電穿孔脈沖。在一些實施方式中，電極可以作為將要通過電穿孔進入細胞的藥劑的遞送針，而在其他實施方式中，對組織給予藥劑可以獨立于電極在組織中的給予/定位。另外，為了確保本發明的方法能夠將健康的非癌性組織暴露于電穿孔脈沖而并未顯著損害所述健康組織，對在暴露于電穿孔脈沖后的開放性創傷周圍的健康組織的恢復特性進行了研究。如下文所披露的，用電穿孔脈沖、或電穿孔脈沖和抗癌劑對健康組織的治療對于治療區i或的細力包并沒有可測量的顯著影響，并且愈合的開方文性創傷類似于未經治療的和/或正常的組織。因為可以偵:健康組織暴露于電穿孔^K沖而沒有顯著的損害，所以在肺瘤周圍的組織的治療中使用電穿孔使得外科醫生達到切除健康組織的更窄的邊緣的目的成為可能。一jt殳治療過程本發明的方法的一種實施方式是治療外科傷口邊緣，或更一般地是腫瘤的邊緣，并且在該方法中(a)與具有或沒有后續治療的常規外科腫瘤和邊緣切除術相比，實現優異的復發率(即，較小頻率的復發)；(b)降低或消除對外科切除邊緣組織的需要，同時保持與傳統外科邊緣切除相同或更好的復發率，因而保護功能組織；以及(c)減少或消除外科腫瘤切除術(有或沒有邊纟彖切除)以后對放療或化療的需要，同時保持與傳統的外科邊緣切除和后續治療(如》文療以及化療)相同的或優異的復發率。以下實施例是用來舉例說明而不是限制本發明。雖然它們是可以使用的那些實施例的代表，但可以可替換地使用本領域技術人員已知的其l也過禾呈。實施例I用電穿孔脈沖和/或抗癌劑治療開》文性創傷周圍的明顯健康組穿孔，我們進行了一系列的實-驗以表明可以實施正常組織的電穿孔(有或沒有抗癌劑)而不會對皮膚、皮下以及月幾肉組織中的愈合過程產生顯著影響。在此實驗中，在分為l-6組的8只豬試驗動物的每只的背肌中形成18個經皮切口。在第l-5研究組中，形成》從向切口，而在第6組中切口方向沖黃向于月幾纖維的縱向。在每個切口部位，不進^亍任何注射，注射生理鹽水、或注射溶液中的博來霉素，以使得注射物位于1cm的;罙度并且三次注射;f皮此間隔1cm,在每個切口的每一側有一個注射物U皮此在3cm內)并且一個注射物在+刀口中心。佳:用了博來霉素(一種抗癌劑)，其中每次注射包括0.125ml(4單位/ml鹽水)。然后利用直徑為0.5cm的6針電極陣列(每個脈沖的額定場強是1,233V/cm)借助于來自脈沖發生器的雙極脈沖(530V,每個月永沖100psec)對切口進4亍處理。具體地i兌，在外一牛手術前，4吏得8只iN生Yorkshire/Hampshire雜交豬(40-50kg)適應環境5-7天。利用無菌手術標記物(surgicalmarker)在背上標記切口位置。每個切口是5cm長并在肌肉中的深度為5mm。在第1-5組中的所有動物均4妄受18個》從向切口，而在第6組中的動物接受橫向切口，與表I一致。每個研究組包括24個切口。表I<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>在每個切口的12個部〗立上注射總體積為1.5ml的鹽7K或t粵來霉素(6U)，6個部位在肌肉中以及6個部位在皮膚中。利用直徑為0.5cm，1.5cm長的針陣列，對用電穿孔治療的切口進行電穿孔。在月幾肉切口的每一側，在切口中心3cm處進4亍3次電穿孔，每個電穿孔部位與其他部位相隔1cm。對皮膚沒有進行電穿孔。用4-0Vicryl可吸收間斷縫合線閉合肌外膜。用4-0尼龍間斷縫合線閉合皮膚。在術后的第2天、第1周、第2周、或第3周將豬處死。從切口中心獲耳又包含皮膚和至少5mm深度的下層月幾肉(underlyingmuscle)的組織學樣本，并立即;改置在10%中性緩沖福爾馬林中。另外的對照樣本獲自背上的未切開的皮膚。在染色和切片以后，利用以下參數將皮膚、皮下組織、以及肌肉在0-3級的范圍內進行組織學分級愈合、肉芽形成/纖維化、PMN，s、淋巴細胞、組織細胞、壞死、出血以及非典型細月包。在三個不同時間點，即第7、14、以及21天，對乂人切口中心切除的皮膚條進行機械試驗。浸泡在鹽水中的紗布包裹皮膚條并在同一天利用Instron900(InstronCorp.Norwood,MA)測i式+刀口斷裂強度，其中4吏用100磅的測力4義(loadcell),以0.5in/min運4亍。通過對每個切口直到斷裂點的伸長與應變作圖來確定斷裂強度。在第1組(沒有鹽水或博來霉素)中，皮膚切口的斷裂強度隨時間而增加乂人切開后的第1周的1800kPa到第2周的2500kPa以及第3周的5000kPa。注射鹽水(第2組)產生類似的結果。第3組(注射鹽水連同電穿孔)在任何時候并不顯著地不同于第2組，這表明電穿孔對斷裂強度并沒有引起不利的影響。在第l周，與所有三個不使用博來霉素的組相比，所有三個使用博來霉素治療的組具有顯著(即，90%)降低的斷裂強度，這表明博來霉素已延遲了皮膚的傷口愈合。因為第4組和第5組;波此沒有顯著的不同，所以電穿孔對于斷裂強度沒有不利的影響。第2周后，在第l-5組之間沒有顯著差異。只有用博來霉素和電穿孔的沖黃向切口呈現更低的斷裂強度。這種效應持續至第3周，其中第6組比第l-5組具有顯著更低的斷裂強度。如圖l所示，切開后三周，在單獨用鹽水、鹽水加電穿孔、單獨用博來霉素、或博來霉素加電穿孔之間沒有顯著差異。甚至愈合的橫向切口的強度足以對于患者不會在風險方面成為臨床上的擔憂。組織學評《介在四個不同時間點，即，第2、7、14、以及21天，乂人切口中心獲取包含皮月夫和至少5mm月幾肉的組織學沖羊本并立即》文入10%中性緩沖福爾馬林中。組織學研究表明，在第7天出現統計學意義上的顯著變化(僅僅是博來霉素組)。所有未處理的組織和注射鹽水的組織的外觀仍保持正常。到第21天，將所有注射博來霉素的樣本與注射鹽水的對照比較。例如，當將注射鹽水與注射鹽水加電穿孔的組織樣本進行比較時，電穿孔的效果僅為在1周內皮膚組織細胞的數量稍微增加以及在2周內皮膚淋巴細胞減少。電穿孔對任何其他參數，如皮膚、皮下組織以及肌肉的愈合沒有影響。此外，當將博來霉素與博來霉素加EP處理的組織樣本進行比較時，在第2天或第l周沒有顯著差異。在2周內，電穿孔引起肌肉壞死顯著增加，但該差異到第3周消失。在3周內，電穿孔引起皮膚組織細胞的減少，但顯示出肌肉中的肉芽組織/纖維化增加，證明了愈合。甚至在有博來霉素存在的情況下由電穿孔引起的皮膚、皮下組織或肌肉的愈合并沒有持續的顯著差異。如圖2A-F所示，當在未處理的組織、鹽7K加電穿孔處理的iE織、以及博來霉素加電穿孔處理的組織之間進行比較時，到第三周，傷口愈合變得組織學上等效。具體地說，到第三周，鹽水加電穿孔等效于博來霉素加電穿孔(比4交E和F)。到第2周，鹽水加電穿孔比博來霉素和電穿孔顯示出更好的愈合(比較C和A)。到第3周，鹽水加電穿孔表現出等效于在第2周的博來霉素加電穿孔(比較E和D)。如圖3A-D所示，對于其〗也組織學特4iE,月交原沉積在愈合中的傷口，^旦對于博來霉素處理的樣本具有比用鹽水處理的樣本更'f曼的速率。具體地說，在沒有電穿孔的情況下，在由鹽水治療的動物中的切口(C和D)顯示出與真皮的膠原纖維連續的深藍色膠原纖維，而博來霉素治療的動物的切口(A和B)則顯示出具有4交少的與皮膚膠原連續區域的淡藍色膠原纖維。關于對肌肉組織的效果(如果有的話)，如圖4A-D所示，顯微照片表明，在3周內，與單獨使用鹽水或單獨4吏用博來霉素相比，電穿孔并不引起肌肉組織愈合的顯著差異。考慮縱向與橫向切口的效果(如果有的話)，在存在鹽水與博來霉素對比的情況下，在2天或1周內沒有顯著差異。在2周和3周內，僅有的顯著組織學差異在于在研究的全部三個組織層中肉芽組織/纖維4匕的凄t量上。在各種情況下，在皮月夫、皮下ia織以及月幾肉中，縱向切口比橫向切口具有更多的肉芽組織/纖維化，其中存在顯著差異。這可以預料到縱向切口通常比橫向切口愈合更好。對于縱向和橫向切口來說，皮膚、皮下組織以及肌肉的愈合的得分并沒有顯著差異。總結在存在或不存在博來霉素的情況下，在第2和第3周以及可i侖證地甚至在第l周內，肌肉的電穿孔并沒有引起豬真皮斷裂強度的顯著改變。然而，4義與切口相比、或與用鹽7jc注射的切口(在進4亍或不進行EP的情況下)相比，博來霉素的存在(與是否使用EP無關)與豬真皮斷裂強度的降低相關，直到治療后l-2周。關于組織學，組織的電穿孔并沒有導致皮膚、皮下組織或力幾肉的愈合的顯著差異。因此，電穿孔療法并不會對月幾肉或皮膚的愈合帶來顯著不利的影響。這似乎也適用于利用EPT來治療胂瘤周圍組織的情況，因此，在旨在降低腫瘤復發的創傷邊緣治療中，本發明的方法提供了一種外科切除術或其他干預治療的可替代方法。實施例II假設的治療方案設想，利用本發明的方法和裝置的外科手術通常將遵循可能采用以下步驟的方案1.如本領域外科醫生所通常實施的，手術切除主腫瘤塊。外科醫生將僅切除主要的(primary)腫瘤塊或還將切除手術邊緣。可替換地，可以通過許多消融療法中的一種來消融主腫瘤，如RF(射頻)消融、PDT(光動力學療法)、冷凍療法、化放療、近程放射治療、或甚至是電療法，并且消融或不消融邊纟彖組織。2.在外科切除(或消融)胂瘤塊以后，在進4于或不進行邊纟彖組織的切除(或消融)的情況下，將通過EPT并采用博來霉素或其他4匕療或生物學藥物來治療切除(或消融)部4立周圍的整個組織。藥物-EPT治療將進行到由外科醫生根據理論考慮、科學研究、或實踐經馬全所確定的深度。變型A.對于切除具有標準邊^^的胂瘤的方案1.在此規程變化中，在已連同標準邊緣切除胂瘤以后，用標準EPT方案治療整個創傷表面(腫瘤邊緣床)至適當深度，通常為1cm，其中上述標準EPT方案通常包4舌局部注射抗癌劑，4妾著利用至少一個多電極陣列裝備的裝置(例如，6針陣列或本發明裝置的其他電極的布置，如圖5-10所示)進行電穿孔，然后，例如，在適當的電壓下在至少三個場方向(orientation)發送月永沖。場定向是才旨由任何兩個帶相反電荷的電極之間的電脈沖所產生的電場的空間和方向上的定向。在此實施方式中，方案變型A可以在沒有使用(或可替換地減少使用)傳統的手術后的后續治療的情況下進行。在這樣的情況下，本發明的方法是意在實現與完全手術邊纟彖切除以及后續治療相比，具有相同的或更好的復發率。2.在胂瘤邊緣床的EPT以后，如果需要的話，可以用常規的后續治療(如放療或化療)來進一步治療患者，從而與沒有EPT治療的邊緣組織相比，提供另外的潛在保護以4氐抗腫瘤復發。實施上述步驟1和步驟2的結果是意在包括相對于常規療法而言，在一定程度上保留組織的情況下，改善的治愈率或復發時間，盡管邊緣組織還是會^MC切除。變型B.對于不切除邊纟彖的切除胂瘤的方案1.在此方案變型方法中，在腫瘤切除以及減少的或沒有邊鄉彖切除以后，用標準EPT方案治療整個傷口表面至適當深度，通常為1cm，其中上述標準EPT方案通常包括局部注射抗癌劑，4妾著利用多電極陣列(例如，6針陣列或如附圖所示的陣列)進行電穿禮，并且，例如，在適當電壓下在至少三個場方向上發送月永沖。2.在這種M4I和另外的常^L后續治療以后，期望的結果是完全或部分保留邊緣組織并潛在地改善了治愈率或復發時間。在上述規程的可替換的實施方式中，沒有提供傳統的后續治療，然而所期望的結果還是完全或部分保留邊纟彖組織以及改善的治愈率或復發時間。實施例III現在開始描述適合于治療切除的肺瘤的邊纟彖床的電穿孔裝置，在第一種實施方式中，該裝置用來提供將抗癌劑(例如博來霉素)遞送到邊^彖組織并均勻分布遍及邊緣床的能力。在第二種實施方式中，該裝置用來提供將電能的多個脈沖遞送到邊緣組織的能力，其中電能的多個脈沖足以引起整個邊緣床的細胞的電穿孔至1和1.5cm之間的深度。在第三種實施方式中，本發明的裝置可以^)奪電穿孔月永沖遞送到邊纟彖床的大部分(substantialportion)，如果沒有遞送到全部邊纟彖床(取決于裝置和肺瘤的相對尺寸)，則通過個別(single)放置本發明的裝置從而將電穿孔脈沖提供到整個邊緣床，該裝置應優選僅需要放置一次。在其<也實施方式中，該裝置包4舌以幾4可陣列定<立的多個電才及，以在陣列的所選電極之間提供一系列電脈沖的遞送。在一種相關的實施方式中，該裝置可以包括多種形狀以容納各種腫瘤形狀和尺寸并進一步以優選的幾何形狀提供電極陣列。在另外其他的實施方式中，本發明的裝置的電極可以包括細長的中空4十，以偵J尋該電才及可以既作為電4及又是抗癌劑遞送4十。在一種特別優選的實施方式中，本發明的裝置可以包括有棱角的蓋(sharpscover)以覆蓋電4及并纟是供將抗癌劑遞送到中空針的4幾構以及一種用于在外科手術前保持電極無菌的裝置。現在開始描述本發明的裝置的具體細節，圖5示出了本發明的裝置10,其包括基本上剛性的有棱角的蓋20，該蓋兼作(doublesas)治療劑裝載托盤。該蓋/托盤20進一步包括裝料口21,其可以裙:設計為具有能夠任何所期望類型的用于連接到流體源的配件相連接的配件，其中流體源用于填充^乇盤以達到所期望水平的治療性物質。蓋/托盤20良好地(snuggly)適配于本發明裝置的主體，其本身包括基本上為剛性的基體22,多個細長電極23的陣列穿過該基氺反，并且各自獨立i也連4妄至電導線24,該導電線在裝置的側面部分終止于用于附著連接于電能源的插頭或連接器25。將基體22和插頭25連接于主體基體30,其本身包括多個孔31的陣列(參見圖6)。每個孔包括中空電極/針，通過中空電極/針可以傳遞物質(如治療性物質)。與基體30裝配的是基體40,其包括多個活塞41的陣列。基體40連接于一才幾械裝置，其可以推動基底40朝向和遠離基體30的移動，以驅動基體40的活塞41的陣列進入或抽離基體30。在一種實施方式中，通過中心桿60來驅動基體40，其中中心桿60的一端連接于基體40并且另一端被構造為棘爪(ratchet)和拇指起動的棘輪(thumbactivatedwheel)61。在——種相關的實施方式中，基體50進一步形成封閉的支撐結構63以包圍和封閉中心桿60。該支撐結構63可以進一步包括用戶友好的手柄64。在才喿作中，才喿作者將<吏用裝料口21來用流體的治療性藥劑(如博來霉素)將蓋/托盤20填充至所期望的水平，然后使用指輪(或壓輪)61將藥劑吸入孔31中(圖6)。然后，操作者利用由支撐結構63形成的手柄從托盤20移走該裝置，并將該裝置放置在組織或邊緣床上的適當位置。然后，操作者插入電極，起動指輪61以將藥劑給予組織然后激活電極，該裝置事先已經通過插頭25連接于電能源。本發明的裝置可以進一步包括部件的其他各種安排以提供相同的結果。例如，在一種實施方式中，該裝置可以包括連接于基體30的、可選地是動態的殼體50。因為取決于本發明所選的式樣，在可選的基礎上，殼體50^皮認為是動態的，殼體可以順時針方向和逆時針方向旋轉以升高和降低活塞而不是利用指輪。在如圖5所示的實施方式中，殼體50并不是動態的，因為雖然殼體50可以凝:轉，zf旦對于手柄和指4侖來i兌，此實施方式中的這樣的4t轉沒有用處。可替換地，如圖7和圖8所描繪的，殼體是動態的，因為通過螺桿70驅動基體40朝向或遠離基體30，其中螺桿70在一端連4妾于基體40并在另一端通過所述螺桿70的接合而連接于殼體50。與螺桿70的螺絲互相作用的殼體50部分本身形成螺紋71，其通過殼體50的旋轉將使得基體40遠離或朝向基體30移動。在操作中，操作者將如先前所描述的用藥劑填裝蓋/托盤20,然后將圓盤狀裝置適當地》丈置在^寺治療的組織上。在將電才及插入組織中以后，在向下壓該裝置的同時，使用者將以使活塞朝向基體30移動并從而將藥劑推入組織中的方向旋轉殼體50。然后操作者將激活電極，，i設該裝置已事先通過插頭25連4妄于電能源。本發明的其他實施方式是可能的，如使用連接于螺桿70的翼形螺母80來驅動活塞41(參見圖9)。在這樣的實施方式中，殼體50將不包括螺紋71而取而代之的是僅包括平滑的鉆孔(smoothbore),帶有螺紋的中心4干60可以通過該平滑的鉆孔。在這才羊的實施方式中，操作者將不需要旋轉殼體而僅需旋轉翼形螺母。本發明的其他實施方式是可能的，如使用非人力(或不活動的，inanimate)方式來4,動活塞陣列。例如，不是采用人力(或活動的力，animateforce)來操作翼形螺母、指輪、或驅動螺桿，可以通過電動活塞來驅動活塞。在這樣的實施方式中，例如，對于在圖6-8中所4皮露的實施方式，可以將電動枳j文置在具有殼體50的布置中，以引起殼體的雙向旋轉。同樣，可以將電動機附著于齒輪(如在指輪的實施方式中)以驅動活塞的升高和降低。另夕卜，如本領域技術人員將明了的，該裝置可以包括指示器用來在活塞已達到它們相應的進入或離開孔31的最大行程時提示操作者。更進一步的實施方式包括使用各種各樣的供能參數(energizingparameter),其包招"使用<壬<可形式的單4及和/或雙才及脈沖，包括「<旦不限于脈沖、指數式衰減脈沖、矩形脈沖等的系列(train)。更進一步，本發明可以使用場強在10和1500V/cm之間的脈沖。此夕卜，本發明設想了為單獨地或與剩余電極的任何組合一起的陣列的每個電極供能的能力。例如，在一種實施方式中，可以對任何4個相鄰電才及施力口月永沖，以致兩個電才及是帶正電荷而相反對的電才及均帶負電荷。這樣的脈沖發生可^是供"相反，"脈沖發生，如在美國專利第5，993，434和5，702，359號中所披露的。在其他脈沖發生形式中，可以為單對電極供能以將電穿孔脈沖的能量賦予組織，直到為所有相鄰對電極供能至少一次。雖然在圖中未示出，但應當明了，本發明的裝置(如在其各種實施方式中所披露的)包括單獨呈送(individuallyaddressed)的電招j十。這是通過結合在基體22中來實現的，如通過夾層技術(即，基體22可以包括兩層結構，導電線被放置在兩層之間的格柵中)，導電線連接是從電極到裝置的側面(如導線24所示)，并終止于具有多個引腳連接器容量的插頭25。實施例IV在此實施例中，在小鼠中進行了一系列實驗，其中在單獨實施外科手術后或在實施外科手術和EPT后測定肺瘤復發率。具體地說，本實驗包括一項體內研究，以確定在棵鼠中，在皮下引入HT-29人結腸癌細胞以及切除由這樣的引入所產生的肺瘤以后，EPT對手術邊緣治療的效果。對于試-驗動物的處理，該實-驗是在人道的條件下進行的。實-驗設計如下。將4-6周齡的正常無胸&泉雌性;棵鼠分為8組，除第1組包4舌10只動物和第3組包4舌7只動物之外，每組為6只小鼠。HT-29細胞系來自人結腸癌并且在小鼠中是一種侵襲性的快速生長的腫瘤。每組中，利用21號計量注射針和注射器以兩個相鄰接種物(5xl06細胞)的形式使動物接受HT-29人胂瘤細胞。HT-29細胞系獲自ECACC(#HTB-38)，在包含90%的2.2g/L碳酸氬鈉，以及10%的小牛血清的含有1.5mML-谷氨酰胺的McCoy's5a培養基中(改進的)中調節其生長。細胞被在生長周期中分化為1:2至1:4,直到獲得了足夠用于此實-驗的細胞。接種后，腫瘤被固定在接種部位。定期監測每只動物的腫瘤體積并利用以下7>式進行計算肺瘤體積-(a、b/2)，式中'a，是最小直徑而V是垂直于'a，的最大直徑。從可用手觸知腫瘤之日起每周測量肺瘤三次。4吏肺瘤不斷生長直到大小為500到1500立方毫米之間。然后在進行EPT或不進行EPT的情況下，進行外科腫瘤切除、部分切除、或不切除。在這些實^r中，EPT是指用博來霉素和電穿孔(EP)進行治療。在實施EP的情況下，利用每個電招>一翁入物一個月永沖周期(即，4Hz的6個脈沖)，利用才示準的MedPulser發生器(Genetronics，Inc.SanDiego,CA)和具有iU至為1cm、電極之間的距離為0.86cm,以及針長度為1cm的一次性六針陣列的施加器(applicator)來進4亍EP。每個矩形月永沖具有100usee的持續時間和1500V的施力口電壓。對于第4-8組以及第10和11組，在瘤內注射博來霉素以后，以這才羊的方式插入4十電才及陣列即將肺瘤包圍在針陣列內，或在最大肺瘤的情況下，將針穿透腫瘤的邊緣。經皮插入針陣列并且基本上垂直于攜帶胂瘤的小鼠的脅腹(側腹，flank)表面。可^#換地，在首先切除胂瘤、^接著i.v.注射博來霉素然后進行EP的情況下，經皮插入針電極陣列包圍手術創傷區域(第5-8組)。在實驗中使用博來霉素的情況下，將它以4U/ml鹽水(1U=1mg)并盡可能均勻地，如所指出的，以0.25ml/cm3待治療組織的體積的劑量注入肺瘤和邊緣組織。可替換地，在指定的情況下，將相應量的博來霉素注入尾靜月永。實驗使用8個同齡組，每組至少6只小鼠。每個同齡組經受的治療方案是任何下述的任意組合EP、博來霉素、以鹽水代替博來霉素、腫瘤完全切除、肺瘤部分切除、以及不切除腫瘤。表II和表ni^皮露了該治療方案。表II<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>對表n所列的動物進行實驗，將動物麻醉，接著切除或部分切除腫瘤(如指定的)，接著靜脈內(i.v,)注射博來霉素或鹽水。如上所述，博來霉素的劑量取決于如上所述的肺瘤的大小。在3至4分鐘以后，用EP治療指定的動物，接著用鉗子和外科粘合劑閉合傷口。在第1同齡組中，外科切除整個腫瘤(參見，例如圖12B和圖12C),并用博來霉素和EP對動物進行治療。在第2同齡組中，乂人動物中切除腫瘤，但J又注射鹽水而不是博來霉素并且不進4于EP。^又實施"假，，EP過程，其中電極陣列插入腫瘤中但沒有對電極施加脈沖。在第3同齡組中，部分地(至少95%)切除胂瘤，接著是注射博來霉素和電穿孔。在第4同齡組中，仍是部分切除腫瘤，接著是鹽水注射和-假EP處理。表III<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>在表III中，將同齡組動物麻醉，接著以如上所述的劑量和體積進行瘤內給予博來霉素溶液。在給予藥物以后進行EPIO分鐘，接著15分鐘過后切除腫瘤或部分切除腫瘤，然后進行傷口閉合。在第8同齡組中，不完全地進行EP(由表III中的*表示)，其中針陣列電極被如此放置以使得有效電穿孔僅發生在約75%的腫瘤和伴隨的邊緣組織中。換言之，EP治療對于腫瘤來說是偏移的(offset)。除上述實馬全之外，我們還增力口了完成EPT和肺瘤切除之間的時間以^f古i十月中瘤纟且織的大體質；也(grossconsistency)并^j"它進4亍纟且織學評價。出于這個目的，使用了三個另外的同齡組第9、10、和ll組。在表IV中示出了實驗方案。表IV<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>麻醉第9組動物，4妄著完全切除腫瘤。才企查腫瘤的質地并保存在福爾馬林中以供以后的組織學評估，如同第lO和ll同齡組的腫瘤組織那才羊。只于第10同齡組的經麻醉的動物以:^上所述的劑量和容積進行瘤內給予博來霉素溶液。在藥物給予后IO分鐘進行EP。在EP后2小時，切除腫瘤。如在第10同齡組中那才羊治療第11同齡組的動物，不同之處在于，在EP后24小時完全切除它們的腫瘤。如上所述，閉合所有傷口。結果針對上述第1至8同齡組，在治療后三周，我們4全查了試驗動物的腫瘤復發率。如表V和圖15所披露的，接受博來霉素和EP的大多數動物避免了腫瘤氛發(參見圖15中的縮寫所定義的描述)。<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>*%效果是基于每組中在治療后沒有發生腫瘤生長的試驗動物的數目^+A表示部分EPT過程，其中治療偏離腫瘤/腫瘤床。具體地/說，第1-8組^是供的結果表明，對腫瘤床組織的治療在治療部位保護動物免受腫瘤復發方面4是供了意想不到的和驚人的益處。如數據所示，無論是完全切除或是部分切除胂瘤，僅僅使用切除并不是有效的。這可能是由于所使用腫瘤類型的侵襲性特性，盡管仔細地外科切除了與人類中類似的侵襲性肺瘤有關的腫瘤，其仍在肺瘤部位或附近留下侵襲性瘤片段和/或微轉移。這種類似的情況在人的手術治療中也會遇到，雖然在人類中的復發率通常在10至40%的范圍內，而不是如在此小鼠實驗中所觀察到的那樣高。重要的是，如由部分腫瘤切除的結果所呈現的，利用〗吏用博來霉素的EPT伴隨著腫瘤復發的顯著降低，即使手術過程未能(在這種情況下是故意的)切除全部腫瘤塊。此外，給藥途徑似乎對于效果并沒有起到重要作用，因為分別通過i.v.和i.t.給予可產生類似的結果。另外，甚至在完成f粵來霉素-EP治療和腫瘤切除之間15分4中間隔以后，可驚人地提供效能效果(efficacyeffect)。數據進一步支持可有效治療4妄種(seedin)在組織中的樣t小腫瘤的該治療方法，其中在實驗中僅部分地進行EP而沒有肺瘤切除，即有效電場是偏離腫瘤的。在這種情況下，仍然有67%的效果，這表明至少存在由EPT引起的孩i局部效果(microregionaleffect)。在此實例研究中，并沒有包括用于試驗單獨給予博來霉素而不進行EP或相反(即，僅進行EP而沒有博來霉素)的同齡組，因為已知給予博來霉素而不進行EP沒有顯著的抗腫瘤活性。對于引入試,驗動物中的腫瘤細胞，我們^使得腫瘤塊可以生長到相對較大尺寸。參見示出了治療前試-驗動物中的腫瘤的圖IIA、12A、13A以及14A。圖11B和12B表示最終切除前在暴露肺瘤的階4殳的外-牛腫瘤切除的實例。圖IIC、12C、13B、以及14B表示在完全切除腫瘤后并在博來霉素-EPT前(圖12C)或鹽水-々iEP治療前(圖IIC)、或在部分肺瘤切除后并在鹽水-，i治療前(圖14B)、或在i.t.博來霉素-EPT后15分鐘(圖13B)的創傷的實例。圖IID示出了在完全切除腫瘤和鹽水-々iEP治療以后的復發腫瘤，圖14C示出了在部分切除肺瘤和鹽水"艮EP治療以后的復發腫瘤。圖12D和13C分別示出了在切除胂瘤以及用i.v.博來霉素和EP治療后、或用i.t.博來霉素和EP并隨后部分切除肺瘤后的沒有腫瘤的腫瘤部位。這些過程優于目前的用i.t.或i.v.抗癌藥物來治療癌癥的標準過程。在藥物-EPT治療以前或以后切除胂瘤可防止在腫瘤部位形成大的壞死塊(necroticmass)，身體必須吸收或消除上述壞死塊，憑經^驗其至少需要幾周并增大了并發癥的相JL率。在藥物-EPT以前或以后切除腫瘤可能會促進傷口愈合并減少潛在的并發癥。另外，采用本發明的方法，可以〗吏用瘤內和靜脈注射藥物。對于第9-11同齡組，我們觀測到，在治療以后腫瘤的質地(consistency)會隨時間逐漸變化。當治療后兩小時切除肺瘤時(第10同齡組)，其質地會更軟、輪廓不是很分明的并且它滲漏出水腫液體^f旦相對地幾乎沒有血液。在治療后24小時切除的肺瘤(第11同齡組)已完全軟化成有時凈皮稱作液化性壞死的質地。在該時間點手術切除有些困難，因為與第9同齡組動物的實體肺瘤組織塊相比，腫瘤的邊界輪廓是不清晰的。有趣的是，當我們從第5和7同齡組切除腫瘤時，甚至在治療后15分鐘我們就觀察到腫瘤的軟化，其使得與未治療腫瘤的情況相比，實施具有輪廓分明的邊界的手術切除更困難一些。然而，這并不影響該治療的成功，因為第5和7同齡組均沒有呈現腫瘤復發。這些觀察結果提供了使用藥物，如博來霉素或其他抗癌劑，并與作為輔助方法的EPT或肺瘤減積治療(其可以另外單獨使用或連同其他癌癥治療一起使用)結合的機會的證據。例如，可以用博來霉素-EPT治療腫瘤，通過簡單的微創過程除去崩解的腫瘤物質，并且如果需要的話，接著進行常規治療(如放療或化療)或其他胂瘤治療方式。液化腫瘤物質的容易除去還使得傷口可以更快地愈合并具有更少的并發癥，尤其是在較大腫瘤的情況下。沖艮據本發明披露的內容，本文披露和要求的所有組合物和方法可以在沒有過度實驗的情況下加以制備和實施。雖然通過優選實施方式描述了本發明的組合物和方法，但對于本領域技術人員來說，在不偏離本發明的精神和范圍下，可以對本發明的組合物和方法以及本文所描述方法的步驟或步驟順序可以進行改變是顯而易見的。更具體地說，所描述的實施方式僅是說明性的而不是限制性的。對本領域技術人員來說，所有類似的替換和改進被認為是在如由所附權利要求所限定的本發明的精神和范圍內。在本說明書中提及的所有專利、專利申請、以及出版物代表了本發明所屬領域的技術人員的水平。所有專利、專利申請、以及出版物(包括那些要求對其優先權或另一權益的專利、專利申請、以及出X反物)以引用方式結合于本文，就^象特定地且個別地指出每一4分個別的出版物結合于本文。可以在沒有本文未具體4皮露的任何要素的情況下，適當地實施本文所描述的發明。因此，例如，在本文的每種情況下，術語"包含"、"基本包含"、以及"包括，，的任何一個可以用其他兩個術語的任何一個來代替。已采用的術語和4普詞是用作描述而不是限制的術語，因此使用這樣的術語和措詞并不意味著排除全部或部分示出的和描述的特點的任何等同替代物，而是應當明了在所要求的發明的范圍內各種改進是可能的。因此，應當明了，雖然已通過優選實施方式和可選的特征具體地披露了本發明，但本領域技術人員可以利用本文所4皮露構思的改進和變4b,并且這一羊的改進和變^H^皮i人為是包含在如所附權利要求所限定的本發明的范圍內。權利要求1.一種用于減少哺乳動物組織中腫瘤細胞生長復發的方法，包括(a)提供源，用于將電穿孔的電脈沖施加于所述組織；(b)提供能夠減少腫瘤生長的藥劑；(c)將所述藥劑給予所述組織；以及(d)通過所述源將所述電穿孔的電脈沖施加于所述組織，從而將所述藥劑遞送到所述細胞中，以導致減少或消除腫瘤細胞生長。2.根據權利要求1所述的方法，其中，所述藥劑選自由博來霉素、順賴、多肽、抗體、RNAi、反義核酸、編碼治療活性多肽的可表達基因、趨化因子、以及細胞因子組成的組。3.根據權利要求2所述的方法，其中，將所述藥劑靜脈內或瘤內遞送到所述哺乳動物組織中。4.根據權利要求2所述的方法，其中，所述RNAi、反義核酸、以及可表達基因是在聚-L-谷氨酸溶液中配制的。5.根據權利要求1所述的方法，其中，所述腫瘤細胞選自由皮膚組織中的癌細胞、位于哺乳動物的頭部或頸部的癌細胞、以及黑色素瘤細胞i且成的纟且。6.根據權利要求1所迷的方法，其中，所述電穿孔的電脈沖包括具有額定場強的^K沖，其中所述額定場強選自由1500V/cm、*1200V/cm、在800和1500V/cm之間、在200和800V/cm之間組成的組。7.—種用于在哺乳動物的切除腫瘤的位置和周圍減少所述哺乳動物組織中腫瘤生長復發的方法，包括(a)^是供源，用于將電穿孔的電脈沖施加于所述組織；(b)提供能夠降低胂瘤生長的藥劑；(c)將所述藥劑給予所述組織；以及(d)通過所述源將所述電穿孔的電脈沖施加于所述組織，從而將所述藥劑遞送到所述細胞中，以導致減少或消除所述組織中的腫瘤細月包生長。8.根據權利要求7所述的方法，其中，所述藥劑選自由博來霉素、順柏、蛋白質、抗體、RNAi、反義核酸、編碼治療活性多肽的可表達基因、趨化因子、以及細胞因子組成的組。9.才艮據^又利要求8所述的方法，其中，通過,爭月永內或在所述組織處和周圍直4妾注射將所述藥劑遞送到所述哺乳動物組織中。10.根據權利要求8所述的方法，其中，所述RNAi、反義核酸、以及可表達基因是在聚-L-谷氨酸溶液中配制的。11.一種在腫瘤周圍的哺乳動物組織(即，邊緣組織)中進行原位治療的方法，包4舌;]夸至少一個電穿孔的電力永沖和一種能夠損傷或殺死癌細胞的藥劑給予所述邊緣組織，/人而治療所述邊纟彖組織。12.根據權利要求11所述的方法，其中，通過靜脈內或通過直接注射到所述胂瘤和邊緣組織中將所述藥劑給予到所述哺乳動物纟且織中。13.一種治療在外科切除腫瘤塊后殘留在組織中的孩￡小殘余腫瘤的方法，包4舌將能夠損傷或殺死所述殘余腫瘤的藥劑給予之前相鄰于和圍繞所述腫瘤塊且包含所述殘余胂瘤的所迷組織；以及將至少一個電穿孔的電脈沖給予所述組織，其中，所述藥'厶療，以殺死所述殘余的胂瘤14.根據權利要求13所述的方法，其中，所述藥劑選自由博來霉素、順粕、蛋白質、抗體、RNAi、反義核酸、編石馬治療活性多肽的可表達基因、趨化因子、以及細胞因子組成的組。15.根據權利要求14所述的方法，其中，通過靜脈內或直接注射到之前相鄰于和圍繞所述腫瘤塊的所述組織中將所述藥劑給予到所述哺乳動物組織中。16.根據權利要求14所述的方法，其中，所述RNAi、反義核酸、以及可表達基因是在聚-L-谷氨酸溶液中配制的。17.—種用于治療哺乳動物組織的系統，所述哺乳動物組織包括位于相鄰和/或靠近肺瘤部位的細胞，所述系統包括(a)電穿孔裝置；以及(b)治療性物質，其特征在于，所述裝置包括至少一個多電極的陣列，當所述電極定位在所述組織中時，所述電極能夠將流體體積從至少一個可變容積的容器中引至所述組織，其中，可以以預定方式進一步為所述電極供能，所述預定方式選自由為單電極對供能、為相反電極對供能、順序地為所述電極的選定部分供能、以及同時為所述電極的選定部分供能組成的組。18.—種用于治療哺乳動物中切除腫瘤部位周圍的組織床的裝置，包括(a)多個電才及的陣列，包括通過其中運送流體介質的腔；(b)多個隔室的陣列，所述隔室能夠容納流體介質并與所述腔流體連通；(c)多個活塞的陣列，其中每一個適合于所述隔室并能夠可滑動地可調節定位于所述隔室中；(d)致動器，用于可滑動:l也調節所述活塞的位置；以及(e)電能源，可連4妾于所述電才及，用于將電穿孔的電脈沖貝武予所述電才及。19.根據權利要求14所述的裝置，其中，所述致動器是指輪。20.根據權利要求14所述的裝置，其中，所述致動器是翼形螺母。21.根據權利要求14所述的裝置，其中，所述致動器是電動機。22.根據權利要求14所述的裝置，其中，所述致動器是螺桿傳動的。全文摘要本發明涉及對癌性腫瘤部位周圍的明顯正常組織進行治療以降低癌性組織部位上及附近的癌癥復發的概率，以及減少通常連同腫瘤一起被切除的明顯健康組織的量，從而通過消除或延遲腫瘤復發以及不損害正常組織來獲得其功能并避免不必要的損形，從而為癌癥患者提供顯著的益處。文檔編號A61N1/30GK101426550SQ200780014313公開日2009年5月6日申請日期2007年3月2日優先權日2006年3月3日發明者保羅·戈德法布,戴爾特墨·拉布塞申請人:基因特倫尼克斯公司