專利名稱：：用于分析和治療aids消耗綜合征和免疫細胞功能異常的組合物和方法
技術領域：
：本發明涉及由HIVI型包膜糖蛋白引起的異常細胞信號傳導。特別地，本發明提供用于鑒定由HlV-lgpl20及其降解產物引起的黑皮質素受體途徑刺激的抑制劑的組合物和方法。如此鑒定的抑制劑被認為適于治療與HIV有關的惡病質、T細胞的超活化和中樞神經系統疾病。
背景技術：
：體重的非自愿性和進行性下降是HIV感染(與HIV有關的惡病質)的癥狀。如疾病控制中心所定義的，當這種重量下降的量大于基準體重降低的百分之十(10%)并且伴隨有不存在繼發感染的情況下的慢性腹瀉或慢性虛弱和發燒時，所述重量下降被歸為與HIV有關的消耗綜合征(例如，AIDS消耗綜合征)。已知消耗綜合征是AIDS患者的生活品質下降中的重要表現，并且有助于HIV感染的患者的發病率和死亡率。在引入高效抗逆轉錄病毒療法(HAART)之前典型的AIDS消耗綜合征是很普通的。雖然如此，但是相當多的患者仍舊遭受到與HIV有關的惡病質和消耗綜合征的痛苦(Hoffmann,Rockstroh，Kamps等人，HIVMedicine2006,website)。而且，即使在HAART時期，重量下降也保持為死亡率的一個獨立的風險因素(Tang等人，JAIDS,31:230-236,2002)。患有典型的消耗綜合征的患者還具有提高的機會性感染的風險(DworkinandWilliamson,JAIDS,33:267-273,2003)并且可能患有認知功能障礙(Dolan等人，JAIDS,34:155-164,2003)。人們巳經研究了多種治療方案，包括營養法(腸內和胃腸外)、食欲增進劑法、合成代謝劑法、細胞因子調節劑法和脂肪酸補充法，但是這些方案的成功率有限。因此本領域需要一種治療與HIV有關的惡病質和消耗綜合征的可選擇的方案。發明概述本發明涉及由HIVI型包膜糖蛋白引起的異常細胞信號傳導。特別地，本發明提供用于鑒定由HlV-lgpl20及其降解產物引起的黑皮質素受體途徑刺激的抑制劑的組合物和方法。如此鑒定的抑制劑被認為適于治療與HIV有關的惡病質、T細胞的超活化和中樞神經系統疾病。特別地，本發明提供一種用于檢測樣品中的抗體的方法，該方法包括提供i)樣品，其中所述樣品包含抗體；以及ii)包含HIV-l促黑素細胞激素表位的多肽；在適于使所述抗體與所述多肽的HIV-1促黑素細胞激素表位結合的條件下使所述多肽與所述樣品接觸；以及檢測與所述多肽結合的HIV-1促黑素細胞激素表位-反應性抗體。在一些實施方案中，所述檢測包括酶聯免疫吸附測定和/或蛋白質印跡。在一些優選實施方案中，所述樣品來自感染HIV-1的患者。在進一歩的實施方案中，所述樣品來自AIDS疫苗接種者(例如，其可以是HIV-1陽性，也可以不是HIV-1陽性)。在一些實施方案中，該方法還包括在HIV-1促黑素細胞激素表位-反應性抗體的水平降低或消失的基礎上向受試者提供AIDS消耗疾病發展的預后的歩驟。在其他實施方案中，該方法還包括在HIV-1促黑素細胞激素表位-反應性抗體的水平降低或消失的基礎上向受試者提供HIV-1T調節細胞功能異常發展的預后的歩驟。在一些優選實施方案中，該方法還包括在HIV-1促黑素細胞激素表位-反應性抗體的水平降低或消失的基礎上向受試者提供HIV-1減弱的預后的歩驟。在其他實施方案中，所述樣品來自雜種瘤細胞培養物上清液。在一些實施方案中，所述多肽包含通過使用凝血酶切割而制得的HIV-lgpl20的50kDa片段。在其他實施方案中，所述多肽包含載體(例如，BSA、KLH等)。在一些特別優選的實施方案中，所述多肽包含SEQIDNO:17或SEQIDNO:24表征的氨基酸序列。在其他優選的實施方案中，所述多肽包含HIV-lgpl20蛋白。此外本發明提供這樣的方法，該方法還包括以體外分析的方式對中和HIV-1的抗體進行檢測的步驟。另外，本發明提供用于檢測樣品中抗體的試劑盒，其包含包含HIV-1促黑素細胞激素表位的多肽；以及用于檢測樣品中的HIV-1促黑素細胞激素表位-反應性抗體的說明。在一些實施方案中，所述試劑盒還包含陰性對照多肽。在其他實施方案中，所述試劑盒還包含陽性對照抗體和陰性對照抗體。在一些優選實施方案中，所述多肽包含SEQIDNO:17或24表征的氨基酸序列。而且，本發明一種用于鑒定作為人的黑皮質素受體(MCR)的HIV-1促黑素細胞激素表位刺激的抑制劑的化合物的方法，包括提供i)表達人的MCR的細胞系；ii)包含HIV-1促黑素細胞激素表位的多肽；以及iii)化合物；在適于使用所述多肽刺激所述人的MCR的條件下使所述細胞系和所述多肽在存在所述化合物和不存在所述化合物的情況下接觸，其中所述人的MCR在不存在而不是存在所述化合物的情況下產生刺激表明所述化合物是所述HIV-1促黑素細胞激素表位的抑制劑。在一些實施方案中，本方法還包括通過下列步驟來鑒定所述化合物作為人的MCR的人神經肽激素刺激的抑制劑在適于使用所述人神經肽激素刺激所述MCR的條件下使所述細胞系和人神經肽激素在存在所述化合物和不存在所述化合物的情況下接觸，其中所述人的MCR在不存在而不是存在所述化合物的情況下產生刺激表明所述化合物是所述人神經肽激素的抑制劑。在一些優選實施方案中，所述人的MCR是MC4R。在其他優選的實施方案中，所述人的MCR選自MC1R、MC2R、MC3R和MC5R。在一些特別優選的實施方案中，所述細胞系是表達MC4R的轉基因細胞系。在一些優選實施方案中，多肽包含SEQIDNO:17或24表征的氨基酸序列。此外本發明提供這樣的實施方案，其中人神經肽激素選自a-促黑激素(oc-MSH)、促皮質素(ACTH)、(3-促黑激素(P-MSH)和y-促黑激素(y-MSH)。圖1A示出了阿黑皮素原(POMC)前蛋白原(SEQIDNO:l)的氨基酸序列。圖1B示出了POMC-衍生的黑皮質素受體配體的比對a-促黑激素(如SEQIDNO:2表征的a-MSH或a-促黑素細胞激素)、p—促黑激素(如SEQIDNO:3表征的(3-MSH或P-促黑素細胞激素)、Y—促黑激素(如SEQIDNO:4表征的Y-MSH或Tz-促黑素細胞激素)、促腎上腺皮質激素(如SEQIDNO:5表征的ACTH或促皮質素)和反向所示的HIV-1SF2gpl20的片段(如SEQIDNO:6表征的K13M肽)。如該比對所示，所有5個序列中都保存有酪氨酸(Y)、精氨酸(R)和色氨酸(W)殘基。圖2A示出了來自GENBANK登錄No.NM—001035256的POMC轉錄變體1的cDNA序列(SEQIDNO:7)。圖2B示出了來自GENBANK登錄N.NM_000939的POMC轉錄變體2的cDNA序列(SEQIDNO:8)。盡管兩個cDNA序列都編碼相同的POMC蛋白質序列，但是與較短的變體2相比，較長的變體1在5，非翻譯區(UTR)具有額外的序列。圖3示出了HIV-1的SF2分離物的包膜(Env)gpl60的氨基酸序列(SEQIDN0:9)。殘基l-27對應于信號肽序列，殘基28-509對應于gpl20序列(SEQIDNO:15)，以及殘基510-855對應于gp41序列(SEQIDNO:16)。圖4示出了編碼前圖的Envgpl60序列的cDNA序列(SEQIDNO:10)。該序列對應于GENBANK登錄No.KO2007的HIV-1SF2分離物(Sanchez-Pescador等人，Science,227:484-492，1985)。圖5A示出了黑皮質素4受體的氨基酸序列(如SEQIDNO:ll所表征的MC4R)。圖5B示出了來自GENBANK登錄No.NM_005912的MC4R的cDNA序列(SEQIDNO:12)。圖6A示出了黑皮質素5受體(如SEQIDNO:13表征的MC5R)的氨基酸序列。圖6B示出了來自GENBANK登錄No.NM—005913的MC5R的cDNA序列(SEQIDNO:14)。圖7提供結合HIV-1SF2gpl20的肽的黑皮質素受體(SEQIDNO:17)與HIV墨2CAM2的表面糖蛋白(SEQIDNO:18)、HIV-2D205(SEQIDNO:19)、HIV-2D194(SEQIDNO:20)和SlVmac251(SEQIDNO:21)的比對。注意HIV-1gpl20而不是HIV-2和SIV表面糖蛋白含有保存在POMC-衍生的激素中的色氨酸殘基。圖8示出了激活人的MC4R的稱為G25G肽(SEQIDNO:17)的HIV-1SF2#79。圖9示出了沿著反向合成的激活人的MC4R的稱為K13M(SEQIDNO:6)的HIV-1SF2#33。圖10示出了由MC5R+T細胞的HIV-1gpl20剌激介導的CD4+CD25+調解性T細胞發展的失調，表明超活性和隨后T細胞缺失。未結合的a-MSH的序列提供為SEQIDNO:2，而結合的K13M病毒促黑素細胞激素表位的序列提供為SEQIDNO:6。圖11左邊示出了HIV-1gpl20的結構，右邊示出了50kDa片段的結構。HIV-1gpl20在V3環內被凝血酶切割，產生兩個片段(約70kDa和50kDa)。在切割時暴露的HIV-1促黑素細胞激素表位的位置由箭頭示出。表1列出了黑皮質素受體的亞型的藥理學性能和分布。表2列出了參與UCSFSCOPEcohort的特性。表3列出了國立精神衛生研究院(NIMH)心理藥物篩選計劃(PDSP)的人的中樞神經系統分子，該計劃篩選與HIV-1gpl20及其降解產物和包含HIV-1促黑素細胞激素表位的合成肽的結合和/或功能分析。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>表2<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>表3.國立精神衛生研究院(N1MH)心理藥物篩選計劃(PDSP)的結合分析組分<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>定義術語"基因"是指包含產生多肽或前體(例如HIV-1ENV)所必需的編碼序列的核酸(例如DNA)序列。多肽可以由全長編碼序列或編碼序列的任意部分來編碼，只要保留了全長或片段的期望活性或功能性能(例如酶活性、配體結合、信號轉導等)即可。該術語還涵蓋結構基因的編碼區以及在任一端位于靠近編碼區的5'和3'端約lkb或更長距離的序列，從而該基因對應于全長mRNA的長度。位于編碼區的5'端并且存在于mRNA上的序列也被稱為5'非翻譯序列。位于編碼區的3'端或下游并且存在于mRNA上的序列也被稱為3'非翻譯序列。術語"基因"涵蓋了cDNA和基因組形式的基因。基因的基因組形式或克隆含有被稱之為"內含子"或"間插區"或"間插序列"的非編碼序列間斷的編碼區，內含子為轉錄成核RNA(hnRNA)的基因區段；內含子可含有調節元件(增強子)。內含子被從核或初級轉錄本上除去或"剪接"；因此內含子在信使RNA(mRNA)轉錄本中是不存在的。mRNA在翻譯期間行使功能，規定了新生多肽中氨基酸的序列或順序。特別地，術語"HIV-1包膜基因"是指全長HIV-1包膜核苷酸序列。然而，還期望的是術語涵蓋HIV-1ENV序列的片段以及全長HIV-1ENV核苷酸序列內的其他域。另外，術語"HIV-1ENV核苷酸序列"或"HIV-1ENV多核苷酸序列"涵蓋DNA、cDNA禾卩RNA(例如，mRNA)序列。如果本文中所述的氨基酸序列是指天然存在的蛋白分子的氨基酸序列，則氨基酸序列等術語(如多肽或蛋白)不是將氨基酸序列限制為與所述的蛋白分子有關的完全天然的氨基酸序列。除了含有內含子，基因組形式的基因還包括位于存在于RNA轉錄本上的序列的5'和3'端的序列。這些序列被稱為"側接"序列或區域(這些側接序列位于存在于RNA轉錄本上的非翻譯序列的5'或3'端)。5'側接區可含有調節序列，如控制或影響基因的轉錄的啟動子和增強子。3'側接區可含有指導轉錄終止、翻譯后切割以及多聚腺苷酰化的序列。術語"野生型"是指具有在天然存在的來源分離時的基因或基因產物的特性的基因或基因產物。野生型基因是一種群中最頻繁觀察到的基因，因而被武斷地指定為基因的"正常"或"野生型"D相反，術語"修飾的"、"突變體"和"變體"是指當與野生型基因或基因產物相比時，在序列上和/或功能性能上表現出修飾(即改變的特性)的基因或基因產物。應當注意的是，天然存在的突變體可以被分離；這些是通過當與野生型基因或基因產物相比時，它們具有改變的特性的事實來鑒定的。如本文中所使用的，術語"核酸分子編碼"、"DNA序列編碼"和"DNA編碼"是指脫氧核糖核酸鏈上的脫氧核糖核苷酸的順序或序列。這些脫氧核糖核苷酸的順序決定了多肽(蛋白質)鏈上的氨基酸的順序。因此DNA序列編碼氨基酸序列。據說DNA分子具有"5'端"和"3'端"，因為單核苷酸發生反應從而按照這樣的方式制得寡核苷酸或多核苷酸，該方式使得一個單核苷酸戊糖環的5'端的磷酸酯與其臨近的3'端的氧在一個方向上通過磷酸二酯鍵而連接。因此，如果5'端的磷酸酯沒有和單核苷酸戊糖環的3'端的氧連接，則寡核苷酸或多核苷酸的末端被稱為"5'端"；如果3'端的氧未和隨后的單核苷酸戊糖環的5'端的磷酸酯連接，則寡核苷酸或多核苷酸的末端被稱為"3'端"。如本文中所使用的，據說核酸序列(即使在更大的寡核苷酸或多核苷酸內部)也具有5'端和3'端。在線性或環狀DNA分子中，不連續的元件被稱為"上游"或"下游"的5'端或3'端元件。這種術語反映了下列事實轉錄沿著DNA鏈以5'端至3'端的方式進行。指導連接的基因的轉錄的啟動子和增強子元件通常位于編碼區的5'端或上游。然而，增強子元件及時位于啟動子元件和編碼區的3'端時也可以發揮出它們的作用。轉錄終止并且多腺苷酸化信號位于編碼區的3'端或下游。如本文中所使用的，術語"具有編碼基因的核苷酸序列的寡核苷酸"和"具有編碼基因的核苷酸序列的多核苷酸"是指包含基因編碼區的核酸序列，或者換句話說，編碼基因產物的核酸序列的核酸序列。編碼區可以以cDNA、基因組DNA或RNA的形式存在。當以DNA的形式存在時，寡核苷酸或多核苷酸可以是單鏈的(即有義鏈)或雙鏈的。如果需要，合適的控制元件(增強子/啟動子、剪接界、多腺苷酸化信號等)可置于與基因編碼區極為接近之處，以允許轉錄的準確起始和/或初級RNA轉錄本的正確加工。可選擇地，本發明的表達載體中使用的編碼區可含有內源性增強子/啟動子、剪接界、間插序列、多腺苷酸化信號等，或者含有內源性和外源性控制元件的聯合。如本文中所使用的，術語"調節元件"是指控制核酸序列的表達的某些方面的遺傳元件。例如，啟動子是促進可操作地連接的編碼區的轉錄的起始的調節元件。其他調節元件包括剪接信號、多腺苷酸化信號、終止信號等。如本文中所使用的，術語"互補的"或"互補性"用來指與堿基配對規則相關的多核苷酸(即核苷酸序列)。例如，對于序列"A-G-T"互補于序列"T-C-A"。互補可以是"部分的"，其中僅僅某些核酸堿基依據堿基配對規則配對。或者，核酸之間可以存在"完全"或"全部"的互補。核酸鏈之間的互補程度對于核酸鏈間雜交的效率和強度具有重大影響。這在擴增反應、還有依賴于核酸之間的結合的檢測方法中尤為重要。術語"同源"是指互補程度。可存在部分同源或完全同源(即相同)。部分互補的序列是至少部分地抑制完全互補的序列與使用功能性術語"基本上同源的"命名的靶核酸雜交的序列。當用來指核酸結合時，術語"結合的抑制"是指抑制由同源序列競爭與靶序列結合而引起的結合。完全互補的序列與耙序列的雜交的抑制可使用雜交測定(DNA或RNA印跡、溶液雜交等)于低度嚴謹的條件下進行檢查。在低度嚴謹的條件下，基本上同源的序列或探針將競爭并抑制完全同源的核酸分子與靶的結合(即雜交)。這并不是說低度嚴謹的條件是允許非特異性結合的條件下；低度嚴謹的條件要求兩序列彼此之間的結合是特異性(即選擇性)的相互作用。非特異性結合的不存在可通過使用甚至缺少部分互補程度(即小于約30%的同源性)的第二靶進行測試；在非特異性結合的不存在時，探針將不會與第二不互補靶雜交。本領域熟知的是，可以使用多種等同條件構成低度嚴謹的條件；可考慮諸如探針的長度和性質(DNA、RNA、堿基組成)和靶的性質(DNA、RNA、堿基組成、存在于溶液中的或固定的等)以及鹽和其他組分的濃度(如甲酰胺、葡聚糖硫酸酯、聚乙二醇的存在或不存在)之類的因素，并且雜交溶液可以變化，從而產生不同于但又等同于上文所列條件的低度嚴謹的條件。另外，本領域己知在高度嚴謹的條件下促進雜交的條件(如提高雜交和/或洗滌步驟的溫度、在雜交溶液中使用甲酰胺等)。如本文中所使用的，術語"競爭結合"用來指如果第二多肽是第一多肽的變體、或相關或無關的多肽，則第一多肽具有結合這樣的底物的活性，第二多肽具有結合該相同底物的活性。第一多肽與底物結合的效率(如動力學或熱力學)可以等于、或大于、或小于第二多肽與底物結合的效率。例如，兩種多肽與底物結合的平衡結合常數(KD)可以是不同的。如本文中所使用的，術語"Km"是指酶的Michaelis-Menton常數并且定義為特異性底物的濃度，在該濃度下，給定的酶在酶催化的反應中發揮最大速度的一半速度。如本文中所使用的，術語"雜交"用來指互補核酸的配對。雜交和雜交強度(即核酸之間的結合強度)受到諸如核酸之間的互補程度、涉及條件的嚴謹性、形成的雜交鏈的Tm、以及核酸內G:C比之類的因素的影響。如本文中所使用的，術語"Tm"用來指"解鏈溫度"。解鏈溫度是雙鏈核酸分子群半數解離為單鏈的溫度。用于計算核酸Tm的等式是本領域所熟知的。正如標準文獻中所指出的那樣，當核酸處于lMNaCl的水溶液中時，簡單估計的Tm值可通過下列等式來計算Tm=81.5+0.41(%G+C)(例如參見,AndersonandYoung,QuantitativeFilterHybridization,M/c/e/c外6"Vfc加'o"，1985)。其他文獻包括更為復雜的將結構還有序列特性考慮到Tm的計算中的算法。如本文中所使用的，術語"嚴謹性"用來指在其之下進行核酸雜交的溫度、離子強度、以及存在其它化合物(如有機溶劑)的條件。本領域技術人員將知道通過改變上面單獨或共同所述的參數可以改變"嚴謹性"條件。在"高度嚴謹"的條件下，僅僅在具有高頻的互補的堿基序列的核酸片段之間發生核酸堿基配對(例如，在約85-100%相同、優選約70-100%相同的同源體之間在"高度嚴謹"的條件下可發生雜交)。在中度嚴謹的條件，僅僅在具有中等頻率的互補的堿基序列的核酸之間發生核酸堿基配對(例如，在約50-70%相同的同源體之間在"中度嚴謹"的條件下可發生雜交)。因此，由于互補的序列的頻率通常很低，因此"弱度"或"低度"度嚴謹的條件通常需要衍生自基因不同的有機體的核酸。當"高度嚴謹的條件"用來指核酸雜交時，包括等同于如下的條件在由5XSSPE(43.8g/1NaCl、6.9g/1NaH2P04H20禾Q1.85g/1EDTA,pH用NaOH調節為7.4)、0.5%SDS、5XDenhardt's試劑和100ng/ml變性鮭魚精DNA組成的溶液中于42°C結合或雜交，如果使用的是長度約500個核苷酸的探針，接著在包括0.1XSSPE、1.0%SDS的溶液中于42'C洗滌。當"中度嚴謹的條件"用來指核酸雜交時，包括等同于如下的條件在由5XSSPE(43.8g/lNaCl、6.9g/1NaH2P04H20和1.85g/1EDTA，pH用NaOH調節為7.4)、0.5%SDS、5XDenhardt's試劑和100|ig/ml變性鮭魚精DNA組成的溶液中于42°C結合或雜交，如果使用的是長度約500個核苷酸的探針，接著在包括l.OXSSPE、1.0%SDS的溶液中于42'C洗滌。"低度嚴謹的條件"包括等同于如下的條件在由5XSSPE(43.8g/1NaCl、6.9g/1NaH2P04H20禾口1.85g/1EDTA,pH用NaOH調節為7.4)、0.1%SDS、5XDenhardt's試齊J[50XDenhardt's每500ml含5gFicoll(型號400，Pharamcia)、5gBSA(級分V;Sigma)]和100g/ml變性鮭魚精DNA組成的溶液中于42。C結合或雜交，如果使用的是長度約500個核苷酸的探針，接著在包括5XSSPE、0.1%SDS的溶液中于42"C洗滌。下列術語用于描述兩個或多個多核苷酸之間的序列關系"參照序列"、"序列同源性"、"序列同源性百分比"和"基本上同源"。"參照序列"被定義為用作序列對比的基礎的序列；參照序列可以是較長序列的亞集(例如為序列列表中給出的全長cDNA序列的區段)，或者可包含完全的基因序列。通常，參照序列的長度為至少20個核苷酸，經常長度為至少25個核苷酸，常常長度為至少50個核苷酸。由于兩個多核苷酸可以分別(l)包含在兩個多核苷酸之間類似的序列(即，完全的多核苷酸序列一部分)，以及還可包含在兩個多核苷酸之間不同的序列，通常通過在"對比窗"上對比兩個多核苷酸的序列來進行兩個(或多個)多核苷酸的序列對比，從而鑒定和對比類似序列的局部區域。如本文中所使用的，"對比窗"是指至少20個連續的核苷酸位置的概念區段，其中多核苷酸序列可以與至少20個連續的核苷酸的參照序列進行對比，并且其中與兩個序列最佳比對的參照序列(不包含添加或缺失)相比，多核苷酸序列在對比窗中的部分可包含20%或更少的添加或缺失(即空隙)。排列對比窗的序列最佳比對可通過localhomologyalgorithmofSmithandWaterman[SmithandWaterman,AdvApplMath,2:482(1981)]bythehomologyalignmentalgorithmofNeedlemanandWunsch[NeedlemanandWunsch,JMolBiol,48:443(1970)]、thesearchforsimilaritymethodofPearsonandLipman[PearsonandLipman,ProcNatlAcadSci，USA,85:2444(1988)]、這些運算方法的計算機處理(Wisconsin遺傳學軟件包7,0版(geneticsComputerGroup,575ScienceDr.,Madison,Wis.)中GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA)、或通過觀察進行處理，經多種方法生成的最佳比對法(即導致在對比窗中的最高的同源百分比)被選擇。術語"序列同源性"是指兩個多核苷酸序列在對比窗中是相同的(即在核苷酸連著核苷酸的基礎上)。術語"序列同源性百分比"是通過比對對比窗上兩個最佳排列序列、確定相同的核酸堿基(例如A、T、C、G、U或I)存在于兩個序列中生成匹配部分的數量、區分對比窗(即窗口尺寸)內部分的全部數量與匹配部分的數量，將結合乘以IOO得到序列同源性百分比。如本文中所使用的，術語"基本上同源"表示多核苷酸序列的特性，其中與具有至少20個核苷酸位點、經常在至少25-50個核苷酸位點的對比窗上的參照序列相比，多核苷酸包含具有至少80%序列同源性、優選至少90%、95%或97%序列同源性、更優選至少99%序列同源性的序列，其中序列同源性百分比通過將參照序列與可包括缺失或添加對比窗上的參照序列的20%或更小的序列進行對比而計算得到。參照序列可以為較大序列的亞集，例如，為本發明在要求的組成的全長序列(例如，HIV-lEnv)的區段。至于多肽，術語"基本上同源"是指兩個肽序列，當最佳比對時，如通過程序GAP或BESTFIT采用缺省gapweight,具有至少80%序列同源性，優選至少90%序列同源性，更優選至少95%/97%或99%序列同源性。優選地，不相同的殘基位置經保守性氨基酸取代進行區分。保守性氨基酸取代是指具有類似側鏈的殘基的可交換性。例如，具有脂肪族側鏈的一組氨基酸為甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸；具有脂肪族-羥基側鏈的一組氨基酸為絲氨酸和蘇氨酸；具有含有酰胺的側鏈的一組氨基酸為天冬酰胺和谷酰胺；具有芳族側鏈的一組氨基酸為苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸；具有堿性側鏈的一組氨基酸為賴氨酸、精氨酸和組氨酸；以及具有含有硫側鏈的一組氨基酸為半胱氨酸和蛋氨酸。優選的保守性氨基酸取代基團為纈氨酸-亮氨酸-異亮氨酸、苯丙氨酸-酪氨酸、賴氨酸-精氨酸、丙氨酸-纈氨酸和天冬酰胺-谷酰胺。如本文中所使用的，術語"片段"是指相對于天然蛋白具有氨基末端和/或羧基末端缺失的多肽，但剩余氨基酸序列與由全長cDNA序列推導出的氨基酸序列中的對應位點是同源的。片段的長度通常為至少4個氨基酸，優選長度為至少10個氨基酸，更優選長度為至少15個氨基酸，最優選長度為至少20個氨基酸或長度更長(例如長度為25至50個氨基酸)，并且跨越組成(本發明中要求的)與其各種配體和/或底物的分子間結合所需要的多肽的部分(例如，SEQIDN0:6的K13M或SEQIDNO:17的G25G)。如本文中所使用的，關于適用于對象的術語"天然存在"是指能在自然界中可見對象的事實。例如，這樣的多肽或多核苷酸序列是天然存在的，其存在于可從自然界內的一種來源中分離的有機體(包括病毒)中，并且不經過人在實驗室中人為修飾。"擴增"是涉及模板特異性的特殊情形的核酸復制。這是和非特異性模板復制(即模板依賴性、但不依賴于特定模板的復制)相比較而言。模板特異性在此不同于復制的保真性(即，合成正確的多核苷酸序列)和核苷酸(核糖核苷酸或脫氧核糖核苷酸)特異性。模板特異性通常是就"靶"特異性而進行描述的。從某種意義上講，目標序列是"靶"，因為它們被尋找以從其他核酸中分離出來。擴增技術主要針對這種挑選而設計。模板特異性在大多數擴增技術中通過選擇酶而實現。擴增酶是這樣的酶，其在它們被使用的條件下，在核酸的不均一混合物中，將僅僅加工特定的核酸序列。例如，r"《和p/"聚合酶，由于它們能在高溫下發揮作用，因此發現它們對結合的序列顯示出高特異性，并因此被引物限定；高溫導致了有利于引物和目標序列雜交而不與非目標序列雜交的熱動力學條件。如本文中所使用的，當術語"靶"用來指聚合酶鏈式反應時，是指被用于聚合酶鏈式反應的引物結合的核酸的區域。如本文中所使用的，術語"引物"是指寡核苷酸，無論是作為純化的限制性消化產物天然存在的，或者合成產生的，當放置在與核酸鏈互補的引物延伸產物的合成被誘導的條件下(即在核苷酸和誘導劑諸如DNA聚合酶存在的條件下和在合適的溫度和pH中)，該寡核苷酸能夠充當合成的起始點。引物優選是單鏈的，以獲得最大的擴增效率，但是可選擇地可以是雙鏈的。如果是雙鏈的，在用于制備延伸產物前，引物首先進行處理，以將它的鏈分開。優選地，引物是寡脫氧核糖核苷酸。引物必需足夠長，以在誘導劑的存在下起始延伸產物的合成。引物精確的長度將取決于許多因素，包括溫度、引物來源和使用方法。如本文中所使用的，術語"探針"是指寡核苷酸(即核苷酸序列)，無論是作為純化的限制性消化產物天然存在的，或者合成、重組、或通過PCR擴增產生的，其能夠與另一目標寡核苷酸雜交。探針可以是單鏈的或雙鏈的。探針可用于檢測、鑒定和分離特定的基因序列。據認為用于本發明的任何探針可以用任何"報道分子"標記，這樣在任何檢測系統中是可檢測的，檢測系統包括但不限于酶(例如ELISA和基于酶的組織化學分析)、熒光、放射和發光系統。不希望本發明受到特定的檢測系統或標記的限制。如本文中所使用的，術語"聚合酶鏈式反應"("PCR")是指Mullis的方法(美國專利No.4,683,195、4,683,202和4,965,188，它們的全文以引用的方式并入本文)，其包括增加在基因組DNA混合物中靶序列片段的濃度，不包括克隆或純化。用于擴增靶序列的該方法由下述步驟組成將過量的兩條寡核苷酸引物加入到含有期望的靶序列的DNA混合物中，然后在DNA聚合酶存在下進行精確有序的熱循環。兩條引物分別與雙鏈靶序列的兩條鏈互補。為了實現擴增，將混合物變性，然后使引物與它們在靶分子內的互補序列退火。退火之后，用聚合酶延伸引物，以便形成一對新的鏈。變性、引物退火和聚合酶延伸的步驟可以重讀多次(即變性、退火和延伸可以構成一個"循環"，可以有多個"循環")，以獲得高濃度的期望靶序列的擴增片段。期望靶序列的擴增片段的長度可以由引物相互之間的位置決定，因此長度是可控參數。依據該方法的重復性，該方法稱為"聚合酶鏈式反應"(下文中為"PCR")。因為靶序列的期望的擴增片段成為混合物中主要的序列(就濃度而言)，它們被叫作"PCR擴增的"。應用PCR，有可能將基因組DNA中的單拷貝的特異性靶序列擴增到用若干不同方法可以檢測的水平(例如，與標記探針雜交；摻入生物素化的引物，然后進行抗生物素蛋白-酶偶聯物檢測；將32P-標記的脫氧核糖核苷三憐酸(如dCTP或dATP)摻入到擴增片段中)。除了基因組DNA以外，任何寡核苷酸或多核苷酸序列可以使用合適的引物分子對進行擴增。特別地，由PCR方法產生的擴增片段本身就是隨后PCR擴增的有效模板。如本文中所使用的，術語"PCR產物"、"PCR片段"和"擴增產物"是指在兩個或多個循環的變性、退火和延伸的PCR步驟完成之后得到的化合物的混合物。這些術語涵蓋已經擴增出一個或多個靶序列的一個或多個片段的情況。如本文中所使用的，術語"擴增試劑"是指擴增所需的除引物、核酸模板和擴增酶之外的那些試劑(脫氧核糖核苷三磷酸、緩沖液等)。典型地，擴增試劑和其他反應組分一起放置和包含在反應容器(試管、微孔等)中。如本文中所使用的，術語"限制性內切核酸酶"和"限制性酶"是指細菌酶，它們中的每一個在特異性核苷酸序列上或附近切割雙鏈DNA。如本文中所使用的，術語"重組DNA分子"在本文中用于指由通過分子生物技術而彼此結合的DNA的片段構成的DNA分子。如本文中所使用的，術語"反義"用來指與特異性RNA序列(例如mRNA)互補的RNA序列。本定義中包括細菌基因調節中涉及的反義RNA("asRNA")分子。反義RNA可以通過任意方法制備，包括以反義方向使目的基因與允許編碼鏈合成的病毒啟動子相剪接進行的合成。例如，一旦將被轉錄鏈導入胚胎，那么該轉錄鏈與胚胎產生的天然mRNA合并而形成雙鏈體。這些雙鏈體將阻斷mRNA的進一步轉錄或阻斷其翻譯。按照這種方式可以產生突變體表型。術語"反義鏈"用來指與"有義"鏈互補的核酸鏈。命名為(-)(即"負")有時用來指反義鏈，而命名為(+)有時用來指有義("正")鏈。可以使用可得到的計算分析方法測定反義分子可介入的核酸序列區。當術語"分離的"用于核酸時，如同在"分離的寡核苷酸"或"分離的多核苷酸"中那樣，是指經鑒定并從在其天然來源中其通常所結合的至少一種污染物核酸中分離出來的核酸序列。分離的核酸是在有別于其天然可見的形式或背景下存在的。相反，未分離的核酸是以它們天然存在的狀態所見到的核酸，例如DNA和RNA。例如，給定的DNA序列(例如基因)見于宿主細胞染色體上靠近相鄰基因處；RNA序列(如編碼特異性蛋白的特異性mRNA序列)作為與眾多編碼蛋白的其他mRNA的混合物見于細胞中。然而，編碼MC4R的分離的核酸包括(作為舉例)通常表達MC4R的細胞之中的所述核酸處于不同于天然細胞的染色體定位、或者以其他方式側接了與天然所見的不同的核酸序列的此種核酸。分離的核酸、寡核苷酸或多核苷酸可以以單鏈的或雙鏈的形式存在。當分離的核酸、寡核苷酸或多核苷酸用于表達蛋白時，寡核苷酸或多核苷酸將至少包含有義鏈或編碼鏈(即，寡核苷酸或多核苷酸可以是單鏈的)，但可含有有義鏈和反義鏈兩者(即，寡核苷酸或多核苷酸可以是雙鏈的)。如本文中所使用的，當術語"部分"用來指核苷酸序列(如在"給定核苷酸序列的一部分"中那樣)時，是指該序列的片段。所述片段大小可以從四個核苷酸至全部核苷酸序列減去一個核苷酸(IO個核苷酸、20、30、40、50、100、200等)的范圍內變化。如本文中所使用的，當術語"編碼區"用來指結構基因時，是指作為mRNA分子翻譯的結果，編碼在新生多肽中發現的氨基酸的核苷酸序列。在真核細胞中，編碼區通過編碼引發劑蛋氨酸的核苷酸三聯密碼"ATG"結合在5'側，并且通過指定停止密碼子的三個三聯密碼(即TAA、TAG、TGA)中的一個結合在3'側。如本文中所使用的，術語"純化的"或"純化"是指從樣品中除去污染物。例如，HIV-lEnv抗體通過除去污染的非免疫球蛋白蛋白質而純化；它們也通過除去不與HIV-1Env結合的免疫球蛋白而純化。非免疫球蛋白蛋白質的去除和/或不與HIV-1Env結合的免疫球蛋白的去除導致樣品中HIV-1Env-反應性免疫球蛋白的百分比增加。在另一個實施例中，重組HIV-lEnv多肽在細菌宿主細胞中表達，并且所述多肽通過除去宿主細胞蛋白而純化；進而樣品中重組HIV-1Env多肽的百分比增加。術語"重組DNA"是指由通過分子生物技術而彼此結合的DNA的片段構成的DNA分子。類似地，術語"重組蛋白"是指由重組DNA表達的蛋白分子。如本文中所使用的，術語"融合蛋白"是指通過對將兩個基因序列合并來制得的雜交基因進行表達而形成的蛋白。典型地，這可通過使用現有的基因將cDNA克隆到框內表達載體中來完成。蛋白伙伴(fusionpartner)可發揮受體的作用(例如(3gal)，可以提供用于分離目的的工具(例如GST)，或者可以增加蛋白體內的半衰期(例如IgGFc)。適于產生重組蛋白的合適的系統包括但不限于原核生物(例如^cAen'c/7^co//)、酵母菌(例如Sacca/ww少c^cerev/w'ae)、昆蟲(例如baculovirus)、喃乳動物(例如中國倉鼠卵巢)、植物(例如紅花)和無細胞系統(例如兔網狀細胞)。如本文中所使用的，術語"天然蛋白"表示蛋白不含由載體序列編碼的氨基酸殘基；也就是說天然蛋白僅含天然存在的蛋白中可見的那些氨基酸。天然蛋白可通過重組方式來生產，或者可從天然存在的來源中分離。如本文中所使用的，當術語"部分"涉及蛋白(如在"給定蛋白的一部分"中那樣)時，是指該蛋白的片段。所述片段大小可以從四個連續的氨基酸殘基至全部氨基酸序列減去一個氨基酸的范圍內變化。術語"DNA印跡"是指在瓊脂糖或丙烯酰胺凝膠上分析DNA以根據大小分級DNA，接著將DNA從凝膠中轉移到固相支持物上，例如硝酸纖維素或尼龍膜。然后用標記探針探測固定的DNA，以檢測與所用探針互補的DNA物質。所述DNA可在電泳前由限制性內切酶切割。在電泳后，所述DNA可在向固相支持物轉移之前或期間部分脫嘌呤和變性。DNA印跡是分子生物學的標準工具(Sambrook等人，Mo〖ecw/wC/om—Jtg:/1丄a6orafo7Afa"wa/，ColdSpringHarborPress,NY,pp9.31-9.58，1989)。如本文中所使用的，術語"RNA印跡"是指通過瓊脂糖凝膠上的RNA電泳以根據大小分級RNA，接著將RNA從凝膠中轉移到固相支持物上，例如硝酸纖維素或尼龍膜。然后用標記探針探測固定的RNA，以檢測與所用探針互補的RNA物質。RNA印跡是分子生物學的標準工具(Sambrook，等人，s，ra,pp7.39-7.52,1989)。術語"蛋白質印跡"、"蛋白質免疫印跡"、"免疫印跡"和"Western"是指免疫分析固定在膜支持物上的蛋白質、多肽或肽。首先通過聚丙烯酰胺凝膠電泳(即SDS-PAGE)來將蛋白質溶解以將蛋白質分離，接著將蛋白質從凝膠轉移到固相支持物上，例如硝酸纖維素或尼龍膜。然后將固定的蛋白質暴露于對于目的抗原具有反應性的抗體。通過使用特異地結合初級抗體的次級抗體來檢測抗體(即初級抗體)的結合。次級抗體通常與這樣的酶偶聯，所述酶通過產生顯色的反應產物或催化熒光酶反應(例如ECL試劑、Amersham)來使抗原-抗體復合物可見。在其他實施方案中，可通過使用放射標記的次級抗體來檢測初級抗體的結合。如本文中所使用的，術語"抗原決定簇"是指抗原與特定抗體接觸的部分(即表位)。當蛋白或蛋白片段用于免疫宿主動物時，蛋白的許多區可誘導產生與蛋白指定區域或三維結構特異結合的抗體；這些區域或結構被稱為抗原決定簇。抗原決定簇可與完整的抗原(即用于引起免疫應答的"免疫原")競爭與抗體的結合。術語"抗體"是指多克隆抗體和單克隆抗體。作為對于目的蛋白或其片段進行免疫反應的結果而在動物中形成的多克隆抗體然后可以使用熟知的方法從血液中容易地分離，并通過柱層析色譜法進行純化，例如也可以使用己知的方法制備單克隆抗體(例如參見，WinterandMilstein，Atowre，349,293-299，1991)。如本文中所使用的，術語"抗體"涵蓋重組制備和修飾的抗體及其抗原結合片段，例如嵌合抗體、人源抗體、多功能抗體、雙特異性或寡特異性抗體、單鏈抗休和F(ab)或F(ab)2片段。術語"反應性"用來指這樣的抗體，該抗體能夠與目的抗原結合。例如，HIV-1促黑素細胞激素表位-反應性抗體是與HIV-1gpl20或HIV-lgpl20片段(例如，包含SEQIDNO:17的氨基酸序列的肽)結合的抗體。如本文中所使用的，術語"免疫測定法"是指任何使用至少一種特異性抗體來檢測或定量抗原的測定法。免疫測定法包括但不限于蛋白質印跡法、ELISA法、放射免疫測定和免疫熒光測定法。許多不同的ELISA格式都是本領域已知的，所有這些都在使用本發明中發現。然而，并不希望本發明受到這些測定法的限制。如本文中所使用的，術語"ELISA"是指酶聯免疫吸附測定(或EIA)。許多ELISA法和應用是本領域已知的，并且在許多文獻中有所描述(例如參見，Crowther,"Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay(ELISA)，"inMo/ecw/ar5/ow"/7ocfe//aw必ooA:,Rapley等人[eds.]，pp.595-617，HumanaPress,Inc.,Totowa，NJ,1998;HarlowandLane(eds.)，爿"0'&odiw爿丄a6on^"M""w"/,ColdSpringHarborLaboratoryPress,1988;Ausubel等人(eds.),Cwre"http://Woco/s/"Mo/"w/"r腸/ogy,Ch.11，JohnWiley&Sons,Inc.,NewYork,1994)。另外，還有許多市售的ELISA測試系統。如本文中所使用的，"檢測抗體"是發揮可見或定量作用的抗體，其通常是偶聯的酶部分，在加入合適的底物后通常產生顏色或熒光反應產物。在ELISA中通常與使用的檢測抗體偶聯的酶包括辣根過氧化物酶、脲酶、堿性磷酸酶、葡糖淀粉酶和p-半乳糖苷酶。在一些實施方案中，檢測抗體針對目的抗原，而在其他實施方案中，檢測抗體是抗物質型(anti-species)抗體。可選擇地，檢測抗體使用標記(如生物素、熒光標記或放射線同位素)來制備并使用該標記來進行檢測和/或定量。如本文中所使用的，術語"報道試劑"、"報道分子"、"檢測底物"和"檢測試劑"用來指允許與抗原結合的抗體的檢測和/或定量的試劑。例如，在一些實施方案中，報道試劑是與抗體偶聯的酶的比色底物。將合適的底物導入抗體-底物偶聯物中導致比色信號或熒光信號的產生(例如在結合與目標抗原偶聯的抗體后)。其他報道試劑包括但不限于放射性化合物。這種定義還涵蓋使用生物素和抗生物素蛋白基化合物(如包括但不限于neutravidin和streptavidin)作為檢測系統的一部分。如本文中所使用的，術語"轉基因"是指這樣的外源基因，通過將該外源基因導入新的受精卵或早期胚體中來將外源基因置于有機體中。術語"外源基因"是指通過試驗控制而導入動物基因組中的任意核酸(例如基因序列)，并且可以包括在該動物中發現的基因序列，只要導入的基因不存在與天然存在的基因所在位點相同的位點即可。如本文中所使用的，術語"載體"用來指將DNA區段從一個細胞轉移至另一個細胞的核酸分子。術語"賦形劑"有時與"載體"替換使用。如本文中所使用的，術語"表達載體"是指含有可操作地連接的編碼序列在特定的宿主微生物中表達需要的所期望的編碼序列和合適的核酸序列的重組DNA分子。在原核生物中表達所需要的核酸序列通常包括啟動子、操作子(可任選的)和核糖體結合位點，并且經常是與其他序列一起的。巳知真核細胞使用啟動子、增強子以及終止和多腺苷酸化信號。如本文中所使用的，術語宿主細胞是指不管是位于體外還是位于體內的任何真核細胞或原核細胞(例如，諸如￡.co/i之類的細菌細胞、酵母菌細胞、哺乳動物細胞、禽類細胞、兩棲類細胞、植物細胞、魚類細胞和昆蟲細胞)例如，宿主細胞可位于轉基因動物中。如本文中所使用的，術語"轉染"是指將外源DNA導入真核細胞。轉染可通過本領域已知的多種方法來完成，包括磷酸鈣-DNA共沉淀法、DEAE-葡聚糖介導的轉染法、polybrene介導的轉染法、電穿孔法、微量注射法、脂質體融合法、脂轉染法、原生質體融合法、反轉錄病毒感染法和生物射彈法。術語"穩定轉染"或"穩定地被轉染"是指將外源DNA導入并整合到轉染細胞的基因組中。術語"穩定轉染子"是指將外源DNA穩定地整合到基因組DNA中的細胞。術語"瞬時轉染"或"瞬時地被轉染"是指如果外源DNA無法整合到轉染細胞的基因組中，則將外源DNA導入細胞。外源DNA在轉染細胞的核中存在數天。在此期間，外源DNA受到管理內源性基因在染色體中表達的調控。術語"瞬時轉染子"是指導入外源DNA但無法整合該DNA的細胞。術語"磷酸鈣共沉淀法"是指將核酸導入細胞中的方法。當核酸以磷酸鈣-核酸共沉淀的形式存在時，增強了核酸向細胞中的導入。許多研究組改進了GrahamandvanderEb(GrahamandvanderEb，Virol,52:456,1973)的初始的技術，從而優化了用于特定類型的細胞的條件。文獻中有許多這種改進。術語"受試化合物"是指可用于治療或預防疾病、病害、病患或身體技能紊亂，或另外改變樣品生理學或細胞狀態的任何化學物、藥劑、藥物等。受試化合物包括已知和潛在的治療化合物。受試化合物可以通過采用本發明的篩選方法來確定要是治療的。"己知的治療化合物"是指在這種治療或預防中已經顯示有效的化合物(如通過動物試驗或先前給予人類的經驗)。術語"患者"和"受試者"是指為用于接受藥物處理的候選者的哺乳類(人或動物)。術語"對照"是指提供試驗比較受試者或樣品的背景的受試者或樣品。例如，對照受試者或樣品的使用允許根據試驗方法的效果來指定檢測方法。在一些實施方案中，術語"對照受試者"是指接受模擬處理(例如僅使用PBS或鹽水中的正常兔IgG)的動物。術語"樣品"和"樣本"以其最廣泛的意義使用。一方面，它們是指包括樣本或培養物。另一方面，它們是指包括生物樣品和環境樣品。這些術語涵蓋所有由人和其他動物中獲得的樣品的所有類型，包括但不限于體液，如尿液、血液(例如包括血清或血漿)；排泄物.，腦脊髓液；精液；唾液和傷口分泌液以及固體組織。然而，這些例子不應當理解為對適用于本發明的樣品類型的限制。如本文中所使用的，術語"白細胞"是指被稱為白血細胞(其幫助機體抵御感染和其他疾病)的細胞，包括(例如)粒細胞(例如嗜中性粒細胞、嗜曙紅細胞、嗜堿白血球)、單核吞噬細胞和淋巴細胞(例如B細胞、T細胞、自然殺傷細胞)。如本文中所使用的，術語"純化的"是指從天然環境中除去的、分離的或分開的分子(例如核酸或氨基酸序列)。因此"分離的核酸序列"是純化的核酸序列。"基本上純化的"分子是至少60%、優選至少75%、更優選至少卯％沒有可天然存在的其他組分。如本文中所使用的，術語"激動劑"是指模擬"內源"或"天然"化合物的作用的分子或化合物。激動劑可以與這些天然化合物在構象、變化或其他特性方面一致。因此，激動劑可以被在細胞表面上表達的受體識別。這種識別可導致細胞內生理和/或生物學上發生變化，使得細胞在激動劑的存在下按照與天然化合物的存在下相同的方式發生反應。激動劑可包括蛋白、核酸、碳水化合物、或與黑皮質素受體結合或相互反應的任何其他分子。如本文中所使用的，術語"拮抗劑"和"抑制劑"是指抑制"內源"或"天然"化合物的作用的分子或化合物。拮抗劑在與這些天然化合物在構象、變化或其他特性方面可以一致，也可以不一致。因此，拮抗劑可以被激動劑所識別的相同或不同受體識別。掊抗劑可以具有變構象作用，這抑制了激動劑的作用(例如抑制HIV-l促黑素細胞激素表位或HIV-lgpl20與黑皮質素受體結合)。與激動劑相反，拮抗劑化合物在細胞內未導致生理和/或生物學上發生變化，使得細胞在不存在拮抗劑的條件下按照與天然化合物的存在下相同的方式發生反應。拮抗劑和抑制劑可包括蛋白、核酸、碳水化合物、或與黑皮質素受體、包含HIV-1促黑素細胞激素表位的多肽結合或相互反應，或者抑制黑皮質素受體受到包含HIV-1促黑素細胞激素表位的多肽刺激的任何其他分子。如本文中所使用的，術語"提供預后"是指提供有關HIV-1感染的存在對于受試者將來的健康的影響的信息(例如，包括確定與其他感染HIV-1的個體相比，發生與HIV-1有關的惡質病、消耗疾病、T調節細胞功能異常和CNS疾病中的一種或多種疾病的可能性或相反風險)。如本文中所使用的，術語"使用所述試劑盒的說明書"包括有關使用試劑盒中所含的試劑在來自受試者的樣品中檢測病原性(如HIV-1)促黑素細胞激素表位-反應性抗體的說明書。在一些實施方案中，所述說明書還包括美國食品藥品監督管理局(FDA)所要求的有關標注體外診斷產品的目的用途的聲明。FDA將體外診斷歸類為醫療器械，并要求其通過510(k)或分析物特殊試劑(ASR)手續批準。510(k)申請所需信息包括1)體外診斷產品的名稱，包括商品名或專利商品名、通用名或常用名，以及裝置的分類名；2)產品的目的用途；3)如果適用的話，遞交510(k)呈遞書的所有人或操作者的機構登記號；如果已知的話，所述體外診斷產品依FD&C法513章所處的分類、其合適的組別，或者如果所有人或操作者判定所述裝置未依此章分類，(應提交)這種判定以及判定所述體外診斷產品未如此分類的根據的聲明；4)建議的足以描述所述體外診斷產品的商標、標簽及廣告，其目的用途、以及使用說明書。適用的情況下，應提供照片或工程圖；5)表明所述裝置類似于和/或有別于美國商業流通中可比類型的其他體外診斷產品的聲明，并附具支持該聲明的數據；6)作為實質等同判定基礎的安全性和有效性數據的510(k)總結；或者支持FDA發現實質等同的510(k)安全性和有效性信息將在書面請求書的30之內公諸于眾的聲明；7)遞交人確信據其所知在上市前通告中所遞交的所有數據和信息真實準確且未遺漏重要事實的聲明；8)FDA做出實質等同判定所必需的有關所請求體外診斷產品的任何附加信息。附加信息可在美國FDA的互聯網頁獲得。發明詳述本發明涉及由HIVI型包膜糖蛋白引起的異常細胞信號傳導。特別地，本發明提供用于鑒定由HIV-1gpl20及其降解產物引起的黑皮質素受體途徑剌激的抑制劑的組合物和方法。如此鑒定的抑制劑被認為適于治療與HIV有關的惡病質、T細胞的超活化和中樞神經系統疾病。I.黑皮質素系統在其他肽類激素中，黑皮質素是一組阿黑皮素原(POMC)衍生肽，包括促皮質素(ACTH)以及a-、p-和y-促黑素細胞激素(MSH)(例如參見，Raffin-Sanson等人，EurJEndocrinol,149:79-90,2003)。這些生物活性肽起到細胞表面黑皮質素受體的內源性激動劑的作用，并且在類固醇生成、色素沉著、消炎、食物攝入、能量消耗和性行為的控制方面扮演許多生理學上的角色。分子克隆研究表明黑皮質素受體存在五個亞型(被稱為MC1R、MC2R、MC3R、MC4R禾nMC5R)，它們形成了G蛋白偶聯受體的獨特的家族。所有五個黑皮質素受體通過刺激G蛋白來激活腺苷酸環化酶，從而提高細胞內的cAMP(Cone,NatureNeuroscience，8:571-578,2005)。受體的五個亞型可通過它們的組織分布、生理學功能和它們識別多種黑皮質素肽的能力(表1)來區分。黑皮質素-4受體(MC4R)在多個中樞神經系統(CNS)位點中表達，并且在維持體重平衡方面表現出關鍵的作用(O'Rahilly等人，NatureMedicine,10:351-352,2004;以及Huszar等人，Cell,88:131-141,1997)。黑皮質素-4受體的激活通過降低食物攝取和增加能量消耗來減少體內脂肪蓄積(Balthasar等人，Cell,123:493-505,2005)。近期的研究表明了通過黑皮質素-4受體直接中樞調節至白色脂肪組織的交感神經傳出，進而導致脂類動員和降低肥胖的證據(Berthound等人,AmJPhysiolRegulIntegrCompPhysiol,289:1236-1237，2005)。下列事實證實了黑皮質素-4受體在人的能量平衡中的重要性黑皮質素-4受體的突變現在已被認為是人的單基因肥胖的最常見的形式(Srinivasan等人，JClinInvest,114:1158-1164;O'Rahilly等人，NatureMedicine,10:351-352,2004;以及Farooqi等人，NEngiJMed,348:1085-1095,2003)。II.HIV-l包膜糖蛋白HIV包膜(Eiw)糖蛋白介導病毒與宿主細胞的結合以及隨后的膜的融合(WyattandSodroski，Science,280:1884-1888,1998)。gpl60包膜糖蛋白在合成過程中裝配為三聚體，并且在轉運至感染的細胞表面的過程中被切割為胞外域(gpl20)片段和跨膜(gp41)片段。切割允許Env在與CD4受體結合(Dalgleish等人,Nature,312,763-767,1984;以及Klatzmann等人，Nature,312:767-768，1984)以及與CXCR4或CCR5共同受體結合(Feng等人，Science,272:872-877,1996;Trkola等人，Nature,384:184-187,1996;以及Wu等人，Nature,384:179-183,1996)時發生構象變化。對來自多個病毒分離物的gpl20氨基酸序列進行比(Starcich等人，細胞，45:637-648,1986)。gpl20胞外域的保守區形成了對于與gp41跨膜域的相互作用和對于與宿主細胞上的病毒受體的相互作用來說都很重要的結構。人們在明晰包膜結構和功能之間的關系的同時測定了HIVgpl20的晶體結構(例如參見，Berger,NatureStructureBiology,5:671-674;Kwong等人，Nature,393:648-659,1998;MooreandBinley，Nature,393:630-631，1998;Rizzuto等人，Science,280:1949-1953;WyattandSodroski,Science,280:1884-1888,1998;以及Wyatt等人，Nature,393:705-711，1998)。gpl20糖蛋白由包膜復合體脫落，并且可以在AIDS患者的血清中發現濃度為約12-92ng/ml(Schneider等人，JGenVirol,67:2533-2538，1986;以及Oh等人，JAIDS,5:251-256,1992)。在自然感染過程中，gpl20引出病毒中和抗體和非中和抗體。非中和抗體經常針對在可溶性gpl20中暴露的但在三聚體包膜復合體中是隱蔽的gpl20區域。相反，中和抗體識別三聚體包膜復合體中的表位(通常在與受體結合位點相鄰的gpl20的區域)(SattentauandMoore，JExpMed，182:185-196，1995;以及MooreandSodroski，JVirol,70:1863-1872,1996)。HIV-1gpl20顯示出易受V3環切的影響，從而產生70kDa和50kDa兩個片段(WernerandLevy，JVirol，67:2566-2574，1993)。特別地，在使用HIV-1gpl20對應于IIIB分離的研究中，人們發現凝血酶和類胰蛋白酶在胰蛋白酶位點(如SEQIDNO:32表征的GPGR/AFVT)處切割gpl20，而組織蛋白酶E在胰凝乳蛋白酶樣位點(如SEQIDNO:32表征的GPGRAF/VT)處切割gpl20(Clements等人，AIDSResHumRetroviruses,7:3-16,1991)。還證實的是在CD4結合引起的構象變化后，凝血酶樣蛋白酶在如SEQIDNO:32表征的GP/GRAFVT處切割gp120(Johnson等人，FEBSLett,337:4-8，1994)。由于隨后T-細胞膜與絲氨酸蛋白酶有關，因此發現類胰蛋白酶TL2在V3環內切割gp120(Niwa等人，EurJBiochem，237:64-70,1996)。本發明認為一個或兩個gpl20降解片段(例如，70kDaN端片段和/或50kDaC端片段)在與HIV-1有關的病理學中發揮作用。III.HIV-1gpl20介導AIDS的病理假設由HIV-1gpl20對宿主肽的構象模擬在AIDS病理的多種方面發揮作用。事實上，在發展本發明之前，本發明人提出gpl20的第二變異區的片段(ASTTTNYT，對應于HIV-1SF2序列的殘基185-192，如SEQIDNO:22表征)的肽T模擬，MSH激素(Dominy，MedHypothesis,27:1-4,1988)。盡管沒有證實這種假設，但是對于HIV-1gpl20的氨基酸序列的進一步的分析表明，如本文中實施例l中所述，促黑素細胞激素表位位于HIV-1gpl20的C端附近。具體而言，在發展本發明的過程中，發現HIV-1gpl20的第五保守域(包括第五a螺旋和第二十五P片層之間的殘基)的、被成為G25G(SEQIDNO:17)的肽是MC4R的弱激動劑(圖7和8)。另外，如本文中首次所示，發現按照與G25G肽的序列的相反方向的方式合成的、被稱為K13M(SEQIDNO:6)的肽和a-MSH、(3-MSH、Y-MSH和ACTH—樣具有相同的關鍵的色氨酸、精氨酸和酪氨酸殘基(圖l)。重要的是，還發現K13M肽是MC4R的弱激動劑(圖9).A.AIDS消耗綜合征本發明認為HIV-1gpl20或其降解產物中的促黑素細胞激素表位在體內與MC4R或其他CNS細胞表面分子結合并將它們激活，從而在與HIV有關的惡病質和AIDS消耗綜合征的發展中發揮作用。特別地，據認為MC4R受到HIV-1gpl20的慢性刺激有助于食欲減退和增加能量消耗。在查閱本發明的上下文時，近期的研究提供了對本發明的支持。具體而言，人們發現HIV-lgpl20在包括患有與HIV-l有關的癡呆的患者中、在疾病的所有階段都存在于中樞神經系統中(Ritola等人，JViroI,79:10830-10834,2005)。而且，與僅接受賦形劑的對照大鼠相比，每日側腦室施用HIV-lIIIBgp120，施用5天，顯著地降低了大鼠的食物和水的攝取量(Guzman等人，NeurosciLett,396:50-53,2006)，從而降低了重量的增加。盡管不需要機理方面的知識來實施和使用本發明并且本發明并不限于任何特定的作用機理，但是認為由于感染HIV-l的細胞而引起的gpl20的自然脫落與分泌肽類激素的外分泌腺的情況類似。在類似的擴展中，MC4R的主要內源性配體(x-MSH在濃度為30pg/ml是生理學上活性的，而HIV-1gpl20在AIDS患者的循環濃度為12-92ng/ml級(例如大3倍)。因此，認為超生理性濃度的gpl20與神經肽激素競爭與MC4R結合。B.調解性T細胞的功能異常另外為了在體重平衡中發揮重要作用，黑皮質素系統在調節T細胞激活的水平方面是關鍵的。通過在抗原致敏型T細胞的表面上表達的黑皮質素-5受體(MC5-R)，a-MSH刺激了CD4+CD25+調節性T(Treg)細胞的發展。CD4+CD25+調解性T細胞反過來部分通過釋放轉化生長因子(TGF)-p來抑制其他T細胞亞型的激活(TaylorandNamba，ImmunolCellBiol,79:358-367，2001)。近期已經在CD4+T細胞中發現了高水平的MC1R、MC2R和MC3RmRNA以及MC5RmRNA，而在NK細胞、單核細胞和粒細胞中發現中等水平的這些mRNA(Anderson等人，ScandJImmunol,61:279-284，2005)。本發明認為HIV-1gpl20在體內通過SEQIDNO:17的病毒促黑素細胞激素表位與MC1R、MC2R、MC3R和MC5R中的一種或多種結合并使它們激活。HIV-1gpl20的黑皮質素受體刺激肽的鑒定如用于MC5R的實施例2中所述的那樣確定。具體而言，本發明認為與抗原致敏型T細胞上的MC5R或其他細胞表面分子結合的HIV-1包膜促黑素細胞激素表位干擾CD4+CD25+調解性T細胞的發展。調解性T細胞數量的減少表明其本身免疫學上過度刺激。實際上，正在積累AIDS的進展與€04+CD25+調解性T細胞的降低和T細胞的超活化的增加之間的關系的證據(Nixon等人，MicrobesInfect,7:1063-1065，2005)。另一方面，cc-MSH(MC5R和MC4R的內源性配體)的血漿水平的提高與感染HIV的患者的存活率的增加有關。具體而言，無進展因子的情況下a-MSH的循環濃度大于有進展因子的情況下oc-MSH的循環濃度，而白細胞介素-l-受體拮抗劑和可溶性腫瘤壞死因子受體的循環濃度則未觀察到這種關聯(Airaghi等人，JLabClinMed,133:309-315,1999)。C.中樞神經系統疾病在普遍使用高效抗逆轉錄病毒療法(HAART)的時期，與HIV有關的神經精神性疾病不斷增多。據估計，30Y。的感染HIV-1的成年人受到輕微認知運動損害障礙的影響。另外，盡管使用了HAART，但是10y。的感染的患者將發展與HIV-l有關的癡呆。事實上在美國，HIV-1感染是年輕人的癡呆的最主要的病因。基礎研究使與HIV有關的中樞神經系統(CNS)疾病涉及HIV-1包膜糖蛋白(被稱為gpl20)。分別在CNS中表達HIV-1gpl20和gpl60的兩系轉基因小鼠表明了神經病理學(Toggas，Nature,367:188-193,1994;以及Berrada等人，JVirol,69:6770-6778,1995)。本發明認為HIV-lgpl20或其降解產物中的促黑素細胞激素表位在體內與一個或多個CNS細胞表面分子結合并使它們激活，從而在HIV-CNS疾病的發展中發揮作用。特別地，據認為CNS受體受到含有促黑素細胞激素表位的HIV-1包膜片段的慢性刺激有助于與HIV有關的神經精神性疾病。IV.病毒促黑素細胞激素表位-反應性抗體的制備在一些實施方案中，提供抗體以允許檢測含有病毒促黑素細胞激素表位的蛋白。抗體可以使用多種免疫原來制備。在一個實施方案中，免疫原是對應于用于制備識別HIV-lsF2gpl20的抗體的HIV-lsF2促黑素細胞激素表位(SEQIDNO:17)的合成肽。這種抗體包括但不限于多克隆抗體、單克隆抗體、嵌合抗體、單鏈抗體、Fab片段和Fab表達文庫。在其他優選的實施方案中，HIV-1促黑素細胞激素表位由基因八肽序列WRXXXXXY(SEQIDNO:31)所限定，其中在位置1處的W、在位置2處的R和在位置8處的Y都是不變體，X可以是二十個天然人氨基酸中任何的氨基酸。因此，本發明的HIV-1促黑素細胞激素表位包含至少8個氨基酸。然而，在優選實施方案中，本發明的組合物和方法包含由HIV-lsF2促黑素細胞激素表位(SEQIDNO:17)構成的多肽、含有HIV-lsF2促黑素細胞激素表位(SEQIDNO:17)的多肽、以及由HIV-lsF2促黑素細胞激素表位(SEQIDNO:17)構成的或含有HIV-lsF2促黑素細胞激素表位(SEQIDNO:17)的多肽。在特別優選的實施方案中，變體包括相對于SEQIDNO:17具有l至22(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21或22)個保守性氨基酸變化(例如替代)的HIV-1促黑素細胞激素表位，使得保持或基本上保持與MC4R或MC5R中一者或兩者的結合。在進一步優選的實施方案中，變體包括相對于SEQIDNO:17具有l至22個保守性或非保守性氨基酸變化(例如替代)的HIV-1促黑素細胞激素表位，使得保持或基本上保持與MC4R或MC5R中一者或兩者的結合。在更進一步的實施方案中，變體包括相對于SEQIDNO:17具有l至8(例如，1、2、3、4、5、6、7或8)個更少的N-端氨基酸禾n/或具有l至9(例如，1、2、3、4、5、6、7、8或9)個更少的C-端氨基酸的HIV-1促黑素細胞激素表位，使得保持或基本上保持與MC4R或MC5R中一者或兩者的結合。在特別優選的實施方案中，HIV-1促黑素細胞激素表位的變體包括SEQIDNO:17表征的氨基酸序列的變體，其中在位置9處的W、在位置10處的R和在位置10處的Y都是不變體，使得保持或基本上保持與MC4R或MC5R中一者或兩者的結合。本領域己知的各種方法可用于制備針對病毒促黑素細胞激素表位的多克隆抗體。為了制備抗體，可以通過注射對應于病毒促黑素細胞激素表位的肽來對多種宿主動物(包括但不限于兔、小鼠、大鼠、綿羊和山羊等)進行免疫。在優選的實施方案中，肽與免疫原載體(例如，白喉類毒素、牛血清白蛋白、匙孔血藍蛋白等)接合。取決于宿主種類，可使用多種佐劑(包括但不限于Fremid's(完全和不完全)、礦物凝膠(例如氫氧化鋁)、表面活性物質(例如溶血卵磷脂、pluronic多元醇、聚陰離子、肽、油狀乳液、血藍蛋白、二硝基酚和諸如BCG(卡介苗)之類的潛在有用的人佐劑)來增加免疫應答。為了制備針對病毒促黑素細胞激素表位的單克隆抗體，據認為提供用來由培養中的連續細胞系產生抗體分子的任何技術都將都本發明中發現具有用處(例如參見，HarlowandLane,爿w/7'6o(^'es..j丄fl60n3fOA"yA/awwa/，CoW5]pr/wgT/ar6or丄a60rfl/0a"3;P"m，ColdSpringHarbor，NY)。這些技術包括但不限于用于制備人單克隆抗體的雜種瘤技術(K池lerandMilstein，Nature,256:495-497，1975;以及Cote等人，ProcNatlAcadSci,USA80:2026-2030，1983)以及三系雜交瘤技術和EBV-雜種瘤技術(Cole等人，Mowoc/owa/am/Ccmcer7Tzera/^，AlanR.Liss,Inc.,pp.77-96，1985)。在本發明的另外的實施方案中，單克隆抗體使用諸如PCT/US90/02545中所述的技術來在無菌動物中產生。另外，據認為單鏈抗體(美國專利No.4,946,778;以引用的方式并入本文)的制備中描述的技術都將在病毒促黑素細胞激素表位-特異性單鏈抗體的制備中發現具有用處。本發明的另外的實施方案使用構建Fab表達文庫中描述的技術(Huse等人，Science246:1275-1281,1989)使得快速和簡便地鑒定對于HIV-1gpl20具有所需的特異性的單克隆Fab片段。據認為任何合適地制備抗體片段的技術都將在含有抗體分子獨特型(抗原結合區)的抗體片段的產生發現具有用處。例如這些片段包括但不限于可以通過抗體分子的胃蛋白酶消化產生的F(ab')2片段；可以通過使F(ab')2片段的二硫鍵還原而產生的Fab'片段；以及可以通過用木瓜蛋白酶和還原劑處理抗體分子產生的Fab片段。在抗體的制備中，據認為通過下列本領域己知的方法會完成對所需抗體的篩選例如放射免疫測定法、ELISA(酶聯免疫吸附測定法)、"夾心"免疫測定法、免疫放射測定法、凝膠擴散沉淀反應法、免疫擴散測定法、原位免疫測定法(例如膠體金、酶或放射線同位素標記)、蛋白質印跡法、沉淀反應法、凝集測定法(例如凝膠凝集測定法、血凝測定法等)、補體結合測定法、熒光免疫測定法、蛋白A測定法以及免疫電泳測定法。在一個實施方案中，通過檢測初級抗體上的標記來檢測抗體結合。在另一個實施方案中，通過檢測次級抗體或試劑與初級抗體的結合來檢測初級抗體。在進一步的實施方案中，次級抗體是標記的。許多用于對免疫測定中的結合進行檢測的方式都是本領域已知的，并且都在本發明的范圍內。特別地，本領域熟知的是，在任何免疫方案中，應當在不使用載體分子的條件下提供免疫原肽。例如如果肽可與KLH接合，則其可以與BSA接合，或直接在篩選試驗中使用。上述抗體可用于與病毒促黑素細胞激素表位的固定和結構有關的領域的方法(例如用于蛋白質印跡法)中，以測定合適的生物樣品等中的水平。抗體可用于檢測來自個體的生物樣品中的病毒促黑素細胞激素表位。生物樣品可以是含有細胞的生物流體，例如但不限于血液、血清、血漿、組織間隙液、尿液、腦脊髓液等。然后可以使用合適的策略(例如，ELISA法或放射免疫測定法)和方式(例如，微孔、量桿等)直接測定生物樣品中病毒促黑素細胞激素表位的存在。可選擇地，可以通過(例如)聚丙烯酰胺凝膠電泳法(PAGE)在存在或不存在十二烷基硫酸鈉(SDS)的條件下將樣品中蛋白按照大小分離，并通過免疫印跡法(蛋白質印跡法)來檢測病毒促黑素細胞激素表位的存在。免疫印跡技術通常對于針對肽(對應于蛋白的表位)而產生的抗體的效果更好，因此特別適用于本發明。V.使用病毒促黑素細胞激素表位進行藥物篩選本發明提供使用病毒促黑素細胞激素表位、HIV-1gpl20或其降解產物來作為篩選這樣的藥物(例如，小分子、肽、肽模擬物、抗體等)的耙的方法和組合物，其中所述藥物可以抑制由HIV-1包膜片段引起的CNS細胞表面分子(如MC4R和/或MC5R)的異常刺激。如下面和別處所述，可以設計一些不同的分析系統(授予Lee等人的美國專利No.5，卯8,609，1999;授予Cone等人的美國專利No.6,100,048,2000;以及授予Cone等人的美國專利No.6,278,038,2001,它們的全文以引用的方式并入本文)并用于鑒定調節MC4R和/或MC5R的活性的化合物或組合物。下述系統可配制成試劑盒。為了這個目的，包含病毒促黑素細胞激素表位的多肽可包裝在多種容器(例如，小瓶、管、微孔板管、瓶等)內。其他試劑可被包括在單獨的容器內，與試劑盒(例如陽性對照樣品、陰性對照樣品、黑皮質素肽(包括但不限于ot-MSH和ACTH衍生物))、緩沖液、介質等一起提供。A.基于細胞的分析根據本發明，可以使用一種基于細胞的分析系統來篩選用于調節CNS細胞表面分子(如MC4R和/或MC5R)的病毒促黑素細胞激素表位刺激的化合物。在一些實施方案中，如此鑒定的化合物適于治療AIDS消耗綜合征和HIV-介導的T調節細胞功能異常。為了這個目的，可以使用內源性表達MC4R或MC5R的細胞來篩選化合物。可選擇地，為了篩選的目的，可以使用基因工程化以表達MC4R或MC5R的細胞系(如293細胞、COS細胞、CHO細胞、纖維原細胞等)。優選地，在分析中可以使用基因工程化以表達功能性受體(對應于因黑皮質素肽引起的激活)的宿主細胞作為端點(例如通過測定化學、生理、生物或表型變化、宿主細胞基因或報道基因的誘導、cAMP水平的變化、腺苷酸環化酶的活性、宿主細胞G蛋白的活性、細胞外酸化速度、宿主細胞激酶的活性、增生、分化等)。為了在篩選分析中使用，表達功能性MC4R或MC5R的宿主細胞應當對于MC4R或MC5R配體給出顯著的應答，優選大于5倍背景水平的誘導。取決于讀數，宿主細胞應當優選具有許多特性以使由于黑皮質素肽引起的誘導應答最大化，從而用于(例如)檢測CRE報道基因較強的誘導，下列方面將是有利的(a)低天然水平的cAMP，(b)能夠與MC4R或MC5R相互作用的G蛋白，(c)高水平的腺苷酸環化酶，(d)高水平的蛋白激酶A，(e)低水平的磷酸二酯酶，以及(f)結合蛋白的高水平的cAMP應答元件。為了增加對于黑皮質素肽的應答，宿主細胞可被工程化以表達更大量的有利的因子或更少量的不利的因子。另外，可以減少用于誘導CRE報道分子的可選擇的途徑以降低基礎水平。在使用這種細胞系統中，將表達黑皮質素受體的細胞暴露于受試化合物或賦形劑對照(例如安慰劑)。在暴露后，可以分析細胞以測定黑皮質素受體的信號轉導途徑的組分的表達和/或活性，或者可以分析信號轉導途徑本身的活性。例如，在暴露后，可以分析用于誘導cAMP的細胞裂解物。受試化合物提高cAMP水平的能力高于在使用賦形劑對照處理的細胞中觀察到的水平的能力，表明受試化合物誘導由黑皮質素受體(其由宿主細胞表達)介導的信號轉導。在篩選可用作由病毒促黑素細胞激素表位引起的黑皮質素受體刺激的選擇性拮抗劑的化合物中，重要的是包括激活MCR的配體(例如，cc-MSH、p-MSH或ACTH)以測試與賦形劑對照相比，受試化合物對于信號轉導的抑制。在本發明的特定的實施方案中，可以向表達黑皮質素受體的細胞中導入含有與許多不同的報道基因中的任何報道基因相連的cAMP應答元件的構建體。這種報道基因可包括但不限于氯霉素乙酰基轉移酶(CAT)、熒光素酶、GUS、生長激素或胎盤堿性磷酸酶(SEAP)。在將細胞暴露于受試化合物后，可定量報道基因表達的水平，從而確定受試化合物調節受體活性的能力。由于堿性磷酸酶選自細胞，因此堿性磷酸酶分析法在實施本發明中是特別有用的。因此，可以分析組織培養物上清液中的分泌的堿性磷酸酶。另外，堿性磷酸酶的活性可以通過熱量測定法、生物發光測定法或化學發光測定法來測定(Bronstein等人，Biotechniques,17:172-177,1994)。這些分析方法提供了用于藥物篩選的簡便、靈敏、簡單、自動化的檢測系統。當需要區分黑皮質素受體并且需要鑒定選擇性激動或拮抗MC4R或MC5R的化合物時，應當使用一組宿主細胞來進行上述分析方法，其中所述每個宿主細胞被基因工程化以表達黑皮質素受體中的一種(MC1R至MC5R)。人的黑皮質素受體的表達優選為了藥物發現的目的。下列文獻描述了各種受體的克隆和表征MC1R和MC2R(Mountjoy等人，Science,257:1248-1251，1992;以及ChhajlaniandWikberg,FEBSLett,309:417-420,1992);MC3R(Roselli-Rehfuss等人，ProcNatlAcadSci,USA:卯:8856-8860,1993;以及Gantz等人，JBiolChem，268:8246-8250,1993);MC4R(Gantz等人，JBiolChem,268:15174-15179,1993;以及Mountjoy等人，MolEndo,8:1298-1308,1994);以及MC5R(Chhajlani等人，BiochemBiophysResCommun，195:866-873,1993;以及Gantz等人，BiochemBiophysResCommun,200:1214-1220,1994);它們的全文均以引用的方式并入本文。因此上述序列中的每一個均可用于使表達黑皮質素受體中一者以用于本文中所述的篩選分析中的細胞或細胞系工程化。為了鑒定特異性或選擇性調節MC4R的活性對于病毒促黑素細胞激素表位的刺激的化合物，將MC4R的激活效果或抑制效果與受試化合物對于其他黑皮質素受體的效果相比。可選擇地，如果宿主細胞表達超過一種黑皮質素肽受體，則由這些受體產生的背景信號值可以從信號值中"減去"(Gantz等人,supra)。這些非MC4R黑皮質素受體產生的背景應答可以由許多方法確定，包括通過反義抗體或拮抗劑來消除MC4R的活性。就此而言，應當注意的是野生型CHO細胞對于黑皮質素肽表現出小的內源性應答，這必須從背景中減去。可選擇地，由其他黑皮質素受體引起的活性可通過使用MC4R特異性配體激活宿主細胞或者包括其他黑皮質素受體的特異性抑制劑來消除。B.非基于細胞的分析除了基于細胞的分析以外，非基于細胞的分析系統可用于鑒定抑制與CNS細胞表面分子(如MC4R和/或MC5R)結合的病毒促黑素細胞激素表位的化合物。例如，分離的膜可用于鑒定抑制與MC4R相互作用的HIV-1gpl20的化合物。在使用分離的膜的典型的試驗中，HEK293細胞可基因工程化以表達MC4R。膜可以通過標準的技術而獲得，并且和1251-標記的配體(例如，分離的a-MSH、(3-MSH、Y-MSH或ACTH)—起用于體外的結合分析中。通過比較在存在過量的未標記的配體的條件下進行的結合分析來確定特異性結合。為了鑒定抑制病毒促黑素細胞激素表位與MC4R的結合的化合物，將膜和標記的配體在存在或不存在受試化合物的條件下進行溫育。與賦形劑對照樣品相比，與受體結合并且與標記的配體競爭與膜結合的化合物降低了信號。可選擇地，可溶性MC4R可以被重組表達并用于非基于細胞的分析，從而鑒定抑制與MC4R結合的病毒促黑素細胞激素表位的化合物。制備重組表達的MC4R多肽或MC4R融合蛋白。在非基于細胞的分析中，重組表達的MC4R通過本領域熟知的方式附在固體基材(如試管、微孔或柱)上。然后分析受試化合物的抑制與MC4R結合的病毒促黑素細胞激素表位的能力。C.用于篩選目的的候選化合物上述和別處(美國專利公開No.20030105024，Cone等人，2003，其全文以引用的方式并入本文)的分析方法可以鑒定影響病毒促黑素細胞激素表位介導的MC4R的活性的化合物。例如影響病毒促黑素細胞激素表位介導的MC4R的活性的化合物包括但不限于與MC4R的化合物、抑制病原性配體的結合的化合物、和激活信號轉導的化合物(激動劑)或阻斷激活的化合物(拮抗劑)、以及與MC4R的病原性配體結合并且中和病原性配體(例如，HlV-lgpl20的病毒促黑素細胞激素表位)的化合物。本發明的一些實施方案提供了具有下列通式的哺乳動物的黑皮質素受體激動劑A-B-C-D-E-F-G-酰胺，其中A是脂肪族氨基酸殘基，包括(例如)Leu、Ile、Nle和Met以及它們的類似物和取代的衍生物；B是酸性氨基酸殘基，包括(例如)Asp和Glu;C是堿性氨基酸殘基，包括(例如)His;D是具有d-構象的芳族氨基酸殘基，包括d-Phe、d-Tyr及其取代的衍生物；E是堿性氨基酸殘基，例如Arg、Lys、高Arg、高Lys、以及它們的類似物或取代的衍生物；F是Trp或其取代的衍生物；以及G是Lys、高Lys、或它們的衍生物。在本發明的黑皮質素受體激動劑的肽的實施方案中，所述肽通過在肽的位置B處的Asp或Glu殘基的側鏈羧基與位置G處的Lys或高Lys殘基的側鏈氨基之間形成酰胺鍵而環化。本發明的其他實施方案提供了具有下列通式的哺乳動物的黑皮質素受體拮抗劑A-B-C-D-E-F-G-酰胺，其中A是脂肪族氨基酸殘基，包括(例如)Leu、Ile、Nle和Met、以及它們的類似物和取代的衍生物；B是酸性氨基酸殘基，包括(例如)Asp和Glu;C是堿性氨基酸殘基，例如，His;D是具有d-構象的芳族氨基酸殘基，包括d-Nal及其取代的衍生物；E是堿性氨基酸殘基，例如，Arg、Lys、高Arg、高Lys以及它們的類似物和取代的衍生物；F是Trp或其取代的衍生物；以及G是Lys、高Lys或它們的取代的衍生物。在本發明的黑皮質素受體拮抗劑的肽的實施方案中，所述肽通過在肽的位置B處的Asp或Glu殘基的側鏈羧基與位置G處的Lys或高Lys殘基的側鏈氨基之間形成酰胺鍵而環化。在優選的實施方案中，本發明的黑皮質素受體拮抗劑是MC4受體和/或MC5受體的激動劑。然而，應當注意的是適于使用本發明的分析方法還可鑒定調節MC4R或MC5R信號轉導的化合物(諸如影響下游信號傳導事件之類的化合物，如參與轉導由與MC4R結合的配體激活的信號的G蛋白活性的抑制劑或增強子)。這種影響MC4R或MC5R的下游信號傳導事件的化合物的鑒定和使用被認為會調節MC4R對于AIDS消耗綜合征發展的作用和調節MC5R對于HIV-1介導的調解性T細胞功能異常的作用。可根據本發明篩選的化合物包括但不限于肽、抗體及其片段、和其他優選與HIV-1gpl20結合以抑制由所含的病毒促黑素細胞激素表位引起的MC4R或MC5R刺激的有機化合物(例如肽模擬物)。化合物可包括但不限于肽，例如可溶性肽(包括但不限于任意肽文庫的成員)(Lam等人，Nature354:82-84，1991;以及Houghten等人，1991，Nature,354:84-86，1991);以及由D-和/或L-構象氨基酸制成的組合化學衍生的分子文庫；磷酸肽(包括但不限于任意的或部分降解的指導的磷酸肽文庫的成員)(Songyang，Cell,72:767-778,1993);抗體(包括但不限于多克隆抗體、單克隆抗體、人源化抗體、抗獨特型抗體或單鏈抗體、以及它們的FAb、F(ab')2和FAb表達文庫片段和表位結合片段)；以及小有機或無機分子。其他可根據本發明篩選的化合物包括但不限于(例如)能夠穿越血腦屏障的小有機分子。D.被Bygpl20或其降解產物結合的另外的CNS細胞表面分子國立精神衛生研究院(NIMH)的心理藥物篩選計劃(PDSP)被用于鑒定被HIV-1gpl20及其用凝血酶切割的50kDa和70kDa產物以及包含病毒黑皮質素表位的合成肽結合的另外的CNS細胞表面分子。特別地，本發明考慮受體篩選策略(Roth等人，ProcNatlAcadSciUSA，99:11934-11939，2002;以及ArmbrusterandRoth,JBiolChem,280:5129-5132,2005)以鑒定用于HIV-1包膜的分子耙。配體結合篩選和功能性篩選被用于在分子范圍內限定HIV-1包膜介導的精神活動。具體而言，多種包含病毒黑皮質素表位的多肽與細胞的膜制劑接觸，所述細胞表達克隆的受體從而以高通量格式的方式確定Ki值。克隆的受體包括但不限于乙酰膽堿受體、腎上腺素能受體、多巴胺受體、GABA受體、組胺受體、谷氨酸受體、阿片受體、肽類受體、5-羥色胺受體、轉運蛋白、腺苷受體、前列腺素受體和咪唑啉受體(參見表3)。本發明認為gpl20及其一種或兩張降解產物與涉及體重平衡、炎癥和認知的CNS受體結合并使它們激活。VI.藥物組合物本發明還提供單獨包含病毒促黑素細胞激素表位的抑制劑或拮抗劑(包括抗體)或以與至少一種其他試劑(例如穩定用化合物)聯用的藥物組合物，并且可以在任何滅菌、生物相容的藥物載體(包括但不限于鹽水、緩沖鹽溶液、葡萄糖和水)中施用。本發明的方法發現在治療疾病或改變生理狀態中具有作用。肽可以在藥學上可接受的載體(例如生理鹽水)中靜脈施用至患者。可以使用肽的細胞內遞送的標準方法(例如通過脂質體遞送)。這些方法是本領域技術人員所熟知的。本發明的制劑可用于胃腸外(例如靜脈、皮下、肌肉內和腹膜內)施用。使用上述基因療法也可以完成多肽的細胞內治療施用。A.劑量的確定這種化合物的毒性和療效可以通過標準的藥學方法在細胞培養物或試驗動物中確定，例如測定LDso(總體的50%的致死量)禾PIEDm)(總體的50%的有效治療量)。毒性和療效之間的劑量之比為治療指數，并且可以表示為LD5()/ED5()。盡管可以使用具有毒副作用的化合物，但是應當小心設計這樣的遞送系統，其中為了使對未感染的細胞的潛在損害最小化，該系統使這種化合物靶向于影響組織的位點，從而減少副作用。取決于施用途徑，正常的劑量可在O.l至IOO，OOO微克之間變化，最大總量為約lg。關于遞送的特定劑量和方法的指導在下列文獻中有所描述參見美國專利No.4,657,760;5,206,344;或5,225,212，它們全文以引用的方式并入本文。相對于小分子抑制劑，本領域的技術人員使用更多種抗體的制劑。腦內施用可要求以與靜脈注射不同的方式進行遞送。由細胞培養分析和動物研究中獲得的數據可用于配制用于人的劑量。這種化合物的劑量優選在較小毒性或沒有毒性的條件下在循環濃度(包括ED5o)的范圍內。取決于使用的劑型和使用的施用途徑，所述劑量可在該范圍內變化。對于本發明的方法中使用的任何化合物，可以由細胞培養物的分析中開始評價治療有效量。如細胞培養物中確定的那樣，可以在動物模型中配制劑量，從而獲得包括ICM)(即，受試化合物使癥狀獲得半數最大抑制效果的濃度)的血漿循環濃度范圍。這種信息可用于更精確地確定可用于人的劑量。血漿中的含量可通過(例如)高效液相色譜法來測定。B.制劑和應用根據本發明使用的藥物組合物可以按照常規的方式使用一種或多種生理學上可接受的載體或輔料來配制。因此，化合物以及它們的生理學上可接受的鹽和溶劑化物可以被配制并通過吸入或吹入(通過嘴或鼻)、或口服、面頰、胃腸外或直腸施用的方式進行給藥。對于口服給藥，藥物組合物可采用(例如)通過常規的方式使用下列藥學上可接受的輔料制備的片劑或膠囊形式的形式例如粘合劑(如玉米預糊化淀粉、聚乙烯吡咯垸酮或羥丙基甲基纖維素)；填料(如乳糖、微晶纖維素或磷酸氫鈣)；潤滑劑(如硬脂酸鎂、滑石或二氧化硅)；崩解劑(如馬鈴薯淀粉或羧甲淀粉鈉)；或潤濕劑(如十二烷基硫酸鈉)。片劑可以通過本領域熟知的方法進行包衣。用于口服施用的液體制劑可采用(例如)溶液劑、糖漿劑或混懸劑的形式，或者它們可以以干產物的形式存在，并在使用前與水和合適的賦形劑一起構造。這種液體制劑可通過常規的方式使用下列藥學上可接受的添加劑來制備例如混懸劑(如山梨醇糖漿、纖維素衍生物或氫化食用脂肪)；乳化劑(如卵磷脂或阿拉伯樹膠)；非水性賦形劑(如杏仁油、油脂、乙醇或分餾植物油)；以及防腐劑(對羥苯甲酸甲酯或丙酯、或者山梨酸)。如果需要，制劑還可含有緩沖鹽、香味劑、著色劑和甜味劑。用于口服施用的制劑可被合適地配制，從而控制活性化合物的釋放。對于面頰施用，所述組合物可采用以常規的方式配制的片劑或錠劑的形式。對于通過吸入來施用，根據本發明使用的化合物以來自加壓藥包或噴霧器的氣霧劑形式，借助于使用合適的拋射劑(如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙垸、二氧化碳或其他合適的氣體)便利地遞送。就加壓氣溶膠而言，可以通過安裝遞送計量的量的閥門來測定劑量單位。可以配制含有化合物和合適的粉末基質(如乳糖或淀粉)的粉末混合物的用于吸入器和吹入器的明膠的膠囊和藥筒。可以配制用于通過注射，例如通過快速推注或連續輸注給藥的化合物。可以將注射用制劑制成單位劑型，例如含有添加的防腐劑的安瓿或多-劑量容器。這些組合物可以采用諸如在油或水性賦形劑的混懸液、溶液或乳劑這類形式，并且可以含有配制試劑，如混懸劑、穩定劑和/或分散劑。可選擇地，活性成分可以為在使用前用合適的賦形劑(如無菌無熱原水)溶解的粉末形式。還可以將化合物配制成直腸組合物，諸如栓劑或保留灌腸劑，例如含有常用栓劑基質(如可可脂或其它甘油酯)。除了上述制劑以外，還可以將化合物配制為長效制劑。可以通過植入(如皮下或肌肉內)或通過肌肉內注射來施用這種長效制劑。因此，例如可以使用合適的聚合物或疏水性材料(例如作為在可接受的油中的乳劑)、或離子交換樹脂、或作為微溶性衍生物(如作為微溶性鹽)來配制化合物。如果需要，可以將組合物制成可以含有一種或多種包含活性成分的單位劑型的藥包或配藥裝置。例如藥包可以包括金屬或塑料箔(如泡罩包)。所述藥包或配藥裝置可以配有給藥用說明書。實驗下列實施例的提出是為了表明和進一步解釋本發明的某些優選實施方案和方面，不能理解為對本發明的范圍的限制。在下面公開的試驗中會用到下列縮寫eq(等同物)；M(摩爾濃度)；pM(微摩爾濃度)；N(摩爾當量)；mol(摩爾數)；mmol(毫摩爾)；nmol(微摩爾)；nmol(納摩爾)；g(克)；mg(毫克)；pg(微克)；ng(納克);I或L(升)；ml(毫升)；(微升)；cm(厘米)；mm(毫米)；nm(微米)；nm(納米)；。C(攝氏度)；U(單位)，mU(毫單位)；min.(分)；sec.(秒)；％(百分比)；kb(千堿基)；bp(堿基對)；以及PCR(聚合酶鏈式反應)。實施例1激活人的黑皮質素-4受體(hMC4R)的HIV-lsF2gpl20肽的鑒定通過PeninsulaLabs(Belmont,CA)合成一系列對應于HIV-1SF2gpl20的第五保守域的氨基酸序列的肽。細胞系.將人的黑皮質素-4受體(hMC4R)的DNA編碼序列亞克隆到pcDNAIneo載體(Invitrogen)中，并且使用改進的磷酸鈣法(ChenandOkayama，MolCellBiol,7:2745-2752,1987)穩定地轉染至人胚腎293(HEK293)細胞中。將穩定轉染的細胞在含有10。/。的新生小牛血清(NCS)和lmg/ml的G418的DMEM中選擇，并在補充500ng/mlG418的介質中生長。腺苷酸環化酶分析.在將細胞暴露于劑量增加的gpl20肽后，通過測定細胞將^H]腺嘌呤轉化為卩H]cAMP的能力來直接確定腺苷酸環化酶的活性。使用在含有10%NCS的DMEM中2.5pCi的[3印腺嘌呤來將包含約1x106的細胞的復制孔溫育2小時。在使該介質吸氣后，使用1mlof2.5。/。高氯酸、0.1mMcAMP來使細胞增容。除去裂解物(0.8ml),使用80pl的4.2NKOH和0.42ml的H20中和。將樣品混合，并使沉淀物沉淀。在P-計數儀中對總共0.1ml的各裂解物進行計數，從而確定導入到細胞中的[3司腺嘌呤的總量。在Dowex和氧化鋁柱上連續進行層析后將cAMP從裂解物中分離。cAMP從氧化鋁柱上用4ml的Tris(pH7.4)洗脫，并在(3-計數儀中計數。通過確定[3司腺嘌呤轉化為pH]cAMP的百分率來計算反應性環化酶的活性。使用Kaleidagraph軟件包(SynergySoftware,Reading,PA)來擬合數據的曲線，從而計算ECM)和最大應答值。結果.如圖8所示，G25G肽(#79)刺激腺苷酸環化酶在表達hMC4R的轉基因HEK-293細胞中的活性。具體而言，HIV-lSF2gpl20G25G肽(GGGDMRDNWRSELYKYKVVKIEPLG，SEQIDNO:17)在濃度為10-6M時刺激cAMP的產生，而一些對照肽(例如，#77R12Q=RNSSSSGSSGAGQ,SEQIDNO:23)在測試的濃度下并沒有刺激hMC4R誘導的腺苷酸環化酶的活性。另外，如圖9中所示，對應于G25G肽的一部分沿著相反方向合成的肽#33K13M也刺激腺苷酸環化酶在表達hMC4R的轉基因HEK-293細胞中的活性。具體而言，K13M肽(KYKYLESRWNDRM，SEQIDNO:6)在濃度為1(^M時刺激cAMP的產生，而其他沿著正向或反向合成的具有類似長度的gpl20肽在測試的濃度下并沒有刺激hMC4R誘導的腺苷酸環化酶的活性。測試下列另外的gpl20肽#27fM13K=MRDNWRSELYKYK，SEQIDNO:24;#29fR12K=RDNWRSELYKYK,SEQIDNO:25;#31rK14D=KYKYLESRWNDRMD,SEQIDNO:26;#35rK17G=KYKYLESRWNDRMDGGG,SEQIDNO:27;#37fG17K=GGGDMRDNWRSELYKYK,SEQIDNO:28;#39rK12R=KYKYLESR麗DR，SEQIDNO:29;以及#41fD14K=DMRDNWRSELYKYK,SEQIDNO:30。實施例2激活黑皮質素-5受體(MC5R)的HIV-lsF2gpl20肽的鑒定細胞系.將人的黑皮質素-5受體(hMC5R)的DNA編碼序列亞克隆到合適的真核生物表達載體(如pcDNAIneo載體(Invitrogen))中，并且使用改進的磷酸鈣法(ChenandOkayama,MolCellBiol,7:2745-2752，1987)或其他合適的技術穩定地轉染至人胚腎293(HEK293)細胞中。將穩定轉染的細胞在含有10%的新生小牛血清(NCS)和lmg/ml的G418的DMEM中選擇，并在補充500pg/mlG418的介質中生長。腺苷酸環化酶分析.在將細胞暴露于劑量增加的gpl20肽后，通過測定細胞將^H]腺嘌呤轉化為^H]cAMP的能力來直接確定腺苷酸環化酶的活性。使用在含有10%NCS的DMEM中2.5|tiCi的卩H]腺嘌呤來將包含約1x106的細胞的復制孔溫育2小時。在使該介質吸氣后，使用1mlof2.5n/。高氯酸、0.1mMcAMP來使細胞增容。除去裂解物(0.8ml)，使用80^的4.2NKOH和0.42ml的H20中和。將樣品混合，并使沉淀物沉淀。在(3-計數儀中對總共0.1ml的各裂解物進行計數，從而確定導入到細胞中的[3司腺嘌呤的總量。在Dowex和氧化鋁柱上連續進行層析后將cAMP從裂解物中分離。cAMP從氧化鋁柱上用4ml的Tris(pH7.4)洗脫，并在(3-計數儀中計數。通過確定[311]腺嘌呤轉化為["H]cAMP的百分率來計算反應性環化酶的活性。使用Kaleidagraph軟件包(SynergySoftware,Reading,PA)來擬合數據的曲線，從而計算EC5。和最大應答值。實施例3病毒促黑素細胞激素表位-反應性抗體的制備和檢測肽的合成.使用C端甘氨酸和半胱氨酸殘基合成對應于M13K(如SEQIDNO:24表征的MRDNWRSELYKYK)的肽，以與載體偶聯。類似地，在將半胱氨酸殘基引入N端或C端后合成對應于G25G(SEQIDNO:17)和K13M(SEQIDNO:6)的肽，以促進與載體(如匙孔血藍蛋白(KLH))偶聯。多克隆抗體的制備.使用約50pg在磷酸鹽緩沖液(PBS)中重新懸浮并且用等體積的RIBI佐齊!J(RIBIImmunochemResearchInc.,Hamilton,MT)乳化的KLH-偶聯的肽在O、15、30天對BALB/c鼠進行腹膜內免疫。在初始免疫前收集血液，并在每次免疫后從尾靜脈收集血液，然后分析血清部分的特異性抗體的含量。通過蛋白質印跡使用衍生自十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)凝膠的條帶(與諸如牛血清白蛋白(BSA)之類的第二載體偶聯的減少的肽、重組可溶性HIV-1gpl20和/或HIV-1Env-表達細胞(例如感染的細胞)的裂解物)來測定HIV-1Env-反應性抗體。在示例性的實施方案中，使用在完全Freund's佐劑中的M13K-KLH免疫BALB/c鼠。在8周試驗期后，使用在不完全Freund，s佐劑中的M13K-KLH免疫鼠，然后每隔2周使用在PBS中的M13K-KLH重新免疫。在每次用ELISA測試針對M13K-BSA的免疫1周后收集來自鼠的血清。在第一次免疫后，獲得1:50至1:400的抗體滴度，在隨后的免疫中，抗體滴度增加為l:25，600至1:51,200。單克隆抗體(mAb)的制備.在使用與KLH偶聯的gpl20肽免疫后3天從BALB/c鼠中獲得脾細胞。該脾細胞按照5:1的比例與P3x63Ag8.653骨髓瘤細胞融合，然后在含有次黃嘌呤-氨喋呤-胸腺定的DMEM中選擇雜種瘤。如多克隆抗體的制備中所述，篩選組織培養物上清液的HIV-l-反應性。酶聯免疫吸附測定(ELISA).通過免疫誘導的HIV-1包膜-特異性抗體可以通過ELISA使用重組可溶性HIV-1gpl20或gpl20peptide-BSA偶聯物作為抗原來分析。Immunlon-2plate在48°C的碳酸鈉緩沖液(15mMNa2C03，35mMNaHC03[pH9.8])中過夜，從而包裹rgp120(1mg/ml)。使溶液吸氣，然后將孔填充100ml的含有2.5Q/。胎牛血清的阻斷緩沖液(FilterPaperDiluent;DuPont,Wilmington,Del.),然后在37。C下溫育4小時。將板用含有0.05y。Tween20的PBS洗4次。在含有硼酸鹽緩沖液(O.lM硼酸，47mM硼酸鈉，75mMNaCl，0.05%[vol/vol]Tween20)和2.5%胎牛血清的孔中按照l:50稀釋來評價血漿樣品。通過使用堿性磷酸酶-偶聯的羊抗猴免疫球蛋白G(SigmaChemicalCompany,St.Louis,Mo.)來觀察顏色，然后使用在乙醇胺緩沖液(0.9M乙醇胺-7mMMgC12[pH9.8]和濃HC1)中的對-硝基苯磷酸二鈉六水合物(Sigma104phosphatasesubstrate)進行溫育。測定405nm處的吸光度。中和抗體的檢測.通過使用之前所述的細胞殺傷力測定法(Montefiori等人,JClinMicrobiol,26:231-235，1988)在MT-2細胞中測定中和HIV-1的抗體。病毒原料在H9細胞中制備，并且通過p24濃度和在MT-2細胞中的50%組織感染劑量來滴定。類似的分析可用于測定針對病毒分離物(在CEMxl74細胞中進行病毒原料的滴定和分析)的中和抗體。在測定之前將血清樣品在56'C下加熱失活1小時。實施例4使用凝血酶對HIV-1gpl20進行切割和抗體的蛋白質印跡分析SF162分離物的HIV-1gpl20由國立衛生研究院AIDS試劑計劃(目錄no.7363)獲得。人血漿凝血酶由Sigma公司(目錄no.T9010)獲得。將20微升的HIV-1gpl20(1.2pg4a)和10微升的凝血酶(30Units/ml)混合并在37。C下溫育2小時。向gpl20-凝血酶混合物中加入SDS加樣緩沖液和還原劑，加熱至85°C2小時，然后通過SDS-PAGE(2嗎gpl20/lane)分析。在電泳后，將蛋白轉移至用于蛋白質印跡分析的PVDF膜。轉移后的凝膠使用CoomassieBlue染色，轉移后的印染使用PonceauS染色。將膜切成條，在4GC下在牛奶-tween溶液中阻斷過夜。將每個條帶與對照或受試抗體反應。陽性對照是HIV-lgpl20單克隆抗體，陰性對照是細胞培養物介質，受試抗體是由M13K-KLH免疫的鼠的雜種瘤克隆的細胞培養物上清液。120kDa、70kDa和更小的50kDa的條帶在CoomassieBlue染色的凝膠中是可見的。50kDa的條帶有時被對于對應于BSA穩定劑的更大的條帶弄模糊。通過陽性對照抗體檢測到120kDa和70kDa的條帶，而在測試的稀釋液中在受試抗體和陰性對照的線未檢測到條帶。上述說明書中提到的所有出版物和發明都以引用的方式并入本文。本發明的所述方法和系統的各種變化和改變對于本領域技術人員來說是明顯的，并且不脫離本發明的范圍和精神。盡管結合特別優選的實施方案對本發明進行了說明，但是應該理解要求的本發明并不受到這種特定的實施方案的限制。事實上，用于實施本發明的方法的各種變化(對于本領域技術人員來說是顯而易見的)都在所附權利要求的范圍內。權利要求1.一種用于檢測樣品中的抗體的方法，包括a)提供i)樣品，其中所述樣品包含抗體；以及ii)包含HIV-1促黑素細胞激素表位的多肽；b)在適于使所述抗體與所述多肽的HIV-1促黑素細胞激素表位結合的條件下使所述多肽與所述樣品接觸；以及c)檢測與所述多肽結合的HIV-1促黑素細胞激素表位-反應性抗體。2.權利要求l所述的方法，其中所述檢測包括酶聯免疫吸附測定。3.權利要求l所述的方法，其中所述檢測包括蛋白質印跡。4.權利要求l所述的方法，其中所述樣品來自感染HIV-1的患者。5.權利要求1所述的方法，其中所述樣品來自AIDS疫苗接種者。6.權利要求l所述的方法，其中所述樣品來自雜種瘤細胞培養物上清液。7.權利要求l所述的方法，其中所述多肽包含通過使用凝血酶切割而制得的HIV-1gpl20的50kDa片段。8.權利要求l所述的方法，其中所述多肽包含載體。9.權利要求l所述的方法，其中所述多肽包含SEQIDN0:17或SEQIDNO:24表征的氨基酸序列。10.權利要求1所述的方法，其中所述多肽包含HIV-1gpl20蛋白。11.權利要求1所述的方法，還包括以體外分析的方式對中和HIV-1的抗體進行檢測的步驟。12.—種用于檢測樣品中的抗體的試劑盒，包含a)包含HIV-1促黑素細胞激素表位的多肽；以及b)用于檢測樣品中的HIV-1促黑素細胞激素表位-反應性抗體的說明書。13.權利要求12所述的試劑盒，還包含陰性對照多肽。14.權利要求13所述的試劑盒，還包含陽性對照抗體和陰性對照抗體。15.權利要求12所述的試劑盒，其中所述多肽包含SEQIDNO:17或SEQIDNO:24表征的氨基酸序列。16.—種用于鑒定作為人的黑皮質素受體(MCR)的HIV-1促黑素細胞激素表位刺激的抑制劑的化合物的方法，包括a)提供i)表達人的MCR的細胞系；ii)包含HIV-1促黑素細胞激素表位的多肽；以及iii)化合物；b)在適于使用所述多肽刺激所述人的MCR的條件下使所述細胞系和所述多肽在存在所述化合物和不存在所述化合物的情況下接觸，其中所述人的MCR在不存在而不是存在所述化合物的情況下產生刺激表明所述化合物是所述HIV-1促黑素細胞激素表位的抑制劑。17.權利要求16所述的方法，還通過下列歩驟c)鑒定所述化合物作為人的MCR的人神經肽激素刺激的抑制劑在適于使用所述人神經肽激素剌激所述MCR的條件下使所述細胞系和人神經肽激素在存在所述化合物和不存在所述化合物的情況下接觸，其中所述人的MCR在不存在而不是存在所述化合物的情況下產生刺激表明所述化合物是所述人神經肽激素的抑制劑。18.權利要求16所述的方法，其中所述人的MCR是MC4R。19.權利要求16所述的方法，其中所述人的MCR選自MC1R、MC2R、MC3R禾口MC5R。20.權利要求18所述的方法，其中所述細胞系是表達所述MC4R的轉基因細胞系。21.權利要求16所述的方法，其中所述多肽包含SEQIDNO:17或SEQIDNO:24表征的氨基酸序列。22.權利要求17所述的方法，其中所述人神經肽激素選自cx-促黑激素(a-MSH)、促皮質素(ACTH)、(3-促黑激素((3-MSH)和y-促黑激素(y-MSH)。全文摘要本發明涉及由HIVI型包膜糖蛋白引起的異常細胞信號傳導。特別地，本發明提供用于鑒定由HIV-1gp120及其降解產物引起的黑皮質素受體途徑刺激的抑制劑的組合物和方法。如此鑒定的抑制劑被認為適于治療與HIV有關的惡病質、T細胞的超活化和中樞神經系統疾病。文檔編號A61K39/395GK101415835SQ200780011793公開日2009年4月22日申請日期2007年4月5日優先權日2006年4月5日發明者S·S·多米尼申請人:加州大學評議會