作為mdm2和p53間相互作用的抑制劑的環狀-烷基胺衍生物的制作方法

專利名稱：：作為mdm2和p53間相互作用的抑制劑的環狀-烷基胺衍生物的制作方法作為MDM2和P53間相互作用的抑制劑的環狀-烷基胺衍生物發明領域本發明涉及作為MDM2和p53之間相互作用抑制劑的化合物及包含所述化合物的組合物。而且，本發明提供制備所公開的抑制劑的方法、包含所述抑制劑的組合物及使用其的方法，例如作為藥物。p53為肺瘤抑制蛋白質，其在調節介于細胞增殖和細胞生長停滯/細胞凋亡之間的平衡方面起重要作用。在正常情況下，p53半衰期很短，因此在細胞中p53的水平很低。然而，在響應細胞DNA破壞或細胞應激(例如致癌基因活化、端粒侵蝕、缺氧)時，p53的水平增加。這種p53水平增加導致許多基因的轉錄活化，這會驅動細胞生長停滯或者進入細胞凋亡過程。因此，p53的一個重要功能是防止受損細胞不受控制的增殖，并因此保護有機體免于癌癥的發展。MDM2是一種p53功能的關鍵負向調節劑。其通過結合至p53的氨基末端反式激活區而形成一種負向自動調節回路，因此，MDM2同時抑制p53活化轉錄的能力和靶向p53進行蛋白水解降解。在正常情況下，該調節回路負責維持p53的低水平。然而，在具有野生型p53的腫瘤中，活性p53的平纟軒濃度可通過拮抗MDM2和p53間的相互作用而增加。這將導致這樣的胂瘤細胞中p53-介導的前細胞凋亡和抗增殖作用的恢復。MDM2是一種細胞原癌基因。MDM2的過度表達已經在大量癌癥中被觀察到。MDM2在各種腫瘤中被過度表達是由于基因擴增或增加的轉錄或翻譯。MDM2擴增促進肺瘤發生的機制至少部分與其和p53的相互作用有關。在過度表達MDM2的細胞中，p53的保護功能受阻，因此細月包無法通過增加p53水平而響應DNA-皮壞或細力包應激，導致細胞生長停滯和/或細胞凋亡。因此，在DNA破壞和/或細胞應激后，過度表達MDM2的細胞自由地持續增殖并采取肺瘤發生顯型。在這些情況下，破壞p53和MDM2的相互作用將釋放p53并因此使生長停滯和/或細胞凋亡的正常信號發生作用。MDM2除了抑制p53之外，也可具有不同的功能。例如，已經證實，MDM2直接與pRb-調節的轉錄因子E2F1/DP1相互作用。該相互作用對9MDM2的p53非依賴性致癌活性很重要。E2F1區域顯示對p53的MDM2-結合域有顯著的類似性。因為MDM2與p53和E2F1的相互作用均^f立于MDM2的相同結合位點，可預期MDM2/p53拮抗劑將不僅活化細胞的p53，而且也調節E2F1的活性，其在肺瘤細胞中通常是不受調節的。而且，目前所使用的DNA石皮壞劑(化療和放療)的療效可能經由MDM2對p53的負調節而受到限制。因此，如果p53的MDM2反饋抑制受阻，則功能性p53水平的增加將通過恢復導致細胞凋亡的野生型p53的功能和/或逆轉與p53相關的藥物抗性來增加這種藥劑的療效。經證實在體內耳關合MDM2抑制和DNA-破壞治療可導致協同抗肺瘤效果(VousdenK.H.,Cell,第103巻,691-694,2000)。因此，MDM2和p53相互作用的石皮壞提供一種以野生型p53治療性介入腫瘤的方法，甚至在缺乏功能性p53的胂瘤細胞中可以顯示出抗增殖效果，并且另外可以使致腫瘤細胞對化療和放療敏感。發明背景JP11130750,公開于1999年5月18日，特別描述了作為5-HT受體拮抗劑的取代的苯基氨基羰基吲咮基衍生物。EP1129074,公開于2000年5月18日，描述了鄰氨基苯甲酸酰胺，其作為血管內皮生長因子受體(VEGFR)的抑制劑，且可用于治療血管生成病癥。EP1317443,公開于2002年3月21日，^>開了三環^又胺衍生物，可用作趨化因子受體CXCR4或CCR5調節劑，用于治療人類免疫缺陷性病毒和貓免疫缺陷病毒。EP1379239，公開于2002年10月10日，公開了作為5-HT6受體拮抗劑的N-(2-芳基乙基)千胺。WO00/15357,公開于2000年3月23日，提供了作為MDM2和p53之間相互作用的抑制劑的哌溱-4-苯基衍生物。EP1137418，公開于2000年6月8日，提供了用于恢復p53家族蛋白質的構象穩定性的三環化合物。EP1443937，公開于2003年5月22日，描述了取代的1，4-苯并二氮雜萆及其作為MDM2-p53相互作用的抑制劑的用途。EP1458380,公開于2003年6月26日，提供順式-2,4,5-三苯基-咪唑酮，其抑制MDM2蛋白質與p53樣肽之間的相互作用，且具有抗增殖活性。EP1519932,公開于2004年1月15日，公開了二芳基磺酰胺化合物，其結合MDM2且可用于癌癥治療。仍需要抑制MDM2和p53之間相互作用的有效的且強力的小分子。本發明的化合物在結構、其藥理活性和/或藥理功效方面不同于現有技術。
發明內容本發明提供用于治療癌癥的抑制MDM2和p53之間相互作用的化合物、組合物及方法。而且，本發明的化合物和組合物可用于提高化療和放療的效果。本發明涉及式(I)的化合物其N-氧化物形式、加成鹽或立體化學異構體形式，其中m為0、1或2,且當m為0時，則指直接4建；n為0、1、2或3,且當n為0時，則指直接鍵；p為0或l，且當p為0時，則指直接鍵；t為O或l,且當t為0時，則指直接鍵；—q=-y<為-CR8=C<且虛線為鍵，-C(=0)-CH<，-C(=0)-N<、-CHR8-CH〈或-CHR8"NK;其中R8各自獨立地為氫或Cw烷基；R^和R2各自獨立地選自氫、鹵素、Cw烷基、Cw烷氧基、芳基Cw烷氧基、雜芳基Cw烷氧基、苯硫基、羥基Cw烷基羰基、被選自氨基、芳基和雜芳基的取代基取代的C"烷基；或被選自氨基、芳基和雜芳基的取代基取代的C3-7環烷基；R3和R4各自獨立地選自氫、面素、Cw烷基、多卣代C!-6烷基、氰基、氰基C"烷基、羥基、氨基或Cw烷氧基；或R4和RS可以一起任選地形成選自亞甲基二氧基或亞乙基二氧基的二價基團；W為氫、d—6烷氧基羰基或d-6烷基；R6和R"7各自獨立地選自氫、d-6烷氧基Cw烷基或d-6烷基；或116和117可以一起任選地形成選自下述的二1"介基團-(CH2)2-0-(CH2)2-(b畫l),-(CH2)2-NR9-(CH2)2-(b-2),其中W為氫、Cw烷氧基d-6烷基或C^烷基；Z為選自下述的基團(a-9)(a-10)(a-ll)(a-12)^巾R"和Rn各自獨立地選自氫、鹵素、羥基、氨基、Cw烷基、硝基、多卣代Cw烷基、氰基、氰基Cw烷基、四唑并Cw烷基、芳基、雜芳基、芳基Q—6烷基、雜芳基d-6烷基，芳基(羥基)Cw烷基、雜芳基(羥基)d-6烷基、芳基羰基、雜芳基羰基、d—6烷基羰基、芳基d-6烷基羰基、雜芳基Cw烷基羰基、Cw烷氧基、C3.7環烷基羰基、C3.7環烷基(羥基)d-6烷基、芳基Cw烷氧基d-6烷基、d-6烷氧基d-6烷氧基d-6烷基、d-6烷基羰基氧基Cw烷基、d-6烷氧基羰基d，6烷氧基C"烷基、羥基Cw烷氧基d-6烷基、d-6烷氧基羰基C2-6烯基、d-6烷氧基d-6烷基、Cw烷氧基羰基、CL6烷基羰基氧基、氨基羰基、羥基d-6烷基、Md-6烷基、羥基羰基、羥基羰基d-6烷基和-(CH2)v-(C(0)r)-(CHR"VNR131114，其中v為0、1、2、3、4、5或6，且當v為0時，則指直接4建；r為0或l，且當r為0時，則指直接鍵；u為0、1、2、3、4、5或6,且當u為0時，則指直接4定；R"為氫或CL6烷基；R"為氫，d-6烷基，C3.7環烷基，被選自羥基、氨基、Cw烷氧基和芳基的取代基取代的d-6烷基，或被選自羥基、氨基、芳基和Cw烷氧基的取代基取代的Cw環烷基；R"和R"各自獨立地選自氫，Cw2烷基，Cw烷基羰基，Cw烷基磺酰基，芳基CL6烷基羰基，C3-7環烷基，Cw環烷基羰基，-(CH2)k-NR15R16，被選自羥基、羥基羰基、氰基、Cw烷氧基羰基、C^烷氧基、芳基或雜芳基的取代基取代的Cw2烷基，或被選自羥基、d-6烷氧基、芳基、氨基、芳基d-6烷基、雜芳基或雜芳基d-6烷基的取代基取代的(33-7環烷基；或R13和R"與其所連接的氮一起可以任選地形成嗎啉基、哌啶基、吡咯烷基、哌。秦基、或被選自d-6烷基、芳基Cw烷基、芳基d-6烷氧基羰基、雜芳基d-6烷基、Cw環烷基和Cw環烷基d-6烷基的取代基取代的哌。秦基；其中k為0、1、2、3、4、5或6，且當k為0時，則指直接鍵；R"和R"各自獨立地選自氫、C^6烷基、芳基d-6烷氧基羰基、Cw環烷基、被選自羥基、d-6烷氧基、芳基和雜芳基的取代基取代的Cw2烷基；被選自羥基、d-6烷氧基、芳基、芳基Cw烷基、雜芳基和雜芳基Cw烷基的取代基取代的Cw環烷基；或者R"和R"與其所連接的氮一起可以任選地形成嗎啉基、哌溱基或被d—6烷氧基羰基取代的哌嗪基；芳基為苯基或萘基；每個苯基或萘基可以任選地被一個、兩個或三個取代基取代，所述取代基各自獨立地選自鹵素、羥基、d-6烷基、氨基、多鹵代d-6烷基和Cw烷氧基;和每個苯基或萘基可以任選地被選自亞曱基二氧基和亞乙基二氧基的二價基團取代；雜芳基為吡啶基、吲哚基、喹啉基、咪唑基、呋喃基、噻吩基、哺二唑基、四唑基、苯并呋喃基或四氫呋喃基；每個吡啶基、吲哚基、喹啉基、咪唑基、呋喃基、p塞吩基、-惡二唑基、四唑基、苯并P夫喃基或四氫呋喃基可以任選地:故一個、兩個或三個取代基取代，所述取代基各自獨立地選自卣素、羥基、d-6烷基、氨基、多卣代d—6烷基、芳基、芳基C^烷基或d-6烷氧基；和每個吡咬基、吲哚基、喹啉基、咪唑基、呋喃基、噻吩基、苯并呋喃基或四氫呋喃基可以任選地被選自亞甲基二氧基或亞乙基二氧基的二價基團取代。式(I)的化合物也可以其互變異構體形式存在。這種形式雖然未明確顯示在上式中，但包括在本發明的范圍內。許多用于前述定義及下文中的術語在下文中解釋。這些術語有時原樣使用有時以復合術語使用。如在上述定義和下文使用的，卣素一般指氟、氯、溴和碘；Cw烷基定義具有1至6個碳原子的直鏈和支鏈飽和烴基，比如例如曱基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、l-曱基乙基、2-曱基丙基、2-曱基-丁基、2-甲基戊基等；羥基Q-6烷基定義在具有1至6個碳原子的直鏈和支鏈飽和烴基上的羥基取代基；三卣曱基定義包含三個相同的或不同的卣素取代基的曱基，例如三氟曱基；Cw環烷基包括具有3至10個碳的環烴基，比如環丙基、環丁基、環戊基、環戊烯基、環己基、環己烯基、環庚基等。術語"加成鹽"包括式(I)的化合物能與有機堿或無機堿比如胺、堿金屬堿和堿土金屬堿或季銨堿；或與有機酸或無機酸比如礦物酸、磺酸、羧酸或含磷酸形成的鹽類。術語"加成鹽"進一步包括式(I)的化合物能形成的可藥用鹽、金屬絡合物及其溶劑合物和鹽類。術語"可藥用鹽"指可藥用酸或堿加成鹽。如上文提及的可藥用酸或堿加成鹽指包括式(I)的化合物能形成的治療活性的非毒性酸和非毒性堿加成鹽形式。具有堿性特性的式(I)的化合物可以通過用合適的酸處理所述堿而轉變成其可藥用酸加成鹽。適當的酸包括例如無機酸比如氫卣酸，例如氬氯酸或氫溴酸；硫酸；硝酸；磷酸及類似的酸；或有機酸比如，例如乙酸、丙酸、羥基乙酸、乳酸、丙酮酸、草酸、丙二酸、琥珀酸(即丁二酸)、馬來酸、富馬酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、對甲苯磺酸、環己烷氨基磺酸、水楊酸、對氨基水楊酸、樸酸及類似的酸。.具有酸式特性的式(I)的化合物可以通過用合適的有機堿或無機堿處理所述酸形式而轉變成其可藥用堿加成鹽。適當的堿鹽形式包括，例如銨鹽、堿金屬鹽和堿土金屬鹽，例如鋰、鈉、鉀、鎂、鈣鹽等，與有機堿的鹽，例如千星(benzathine)、N-曱基-D-葡糖胺、哈胺(hydrabamine)鹽、和與氨基酸比如例如精氨酸、賴氨酸等的鹽。術語酸加成鹽或堿加成鹽也包括的式(I)的化合物能形成的水合物和溶劑加成形式。這種形式的實例為例如水合物、醇合物等。術語"金屬絡合物"指式(I)的化合物和一種或多種有機或無機金屬鹽之間形成的絡合物。所述有機鹽或無機鹽的實例包括周期表的第二主族金屬例如鎂或鈣、第三或第四主族金屬例如鋁、錫、鉛以及周期表第一至第八過渡族的金屬比如例如鉻、錳、鐵、鈷、鎳、銅、鋅等的卣化物、硝酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、乙酸鹽、三氟乙酸鹽、三氯乙酸鹽、丙酸鹽、酒石酸鹽、磺酸鹽例如甲基磺酸鹽、4-甲基苯基磺酸鹽、水楊酸鹽、苯甲酸鹽等鹽。如前文使用的術語"式(I)的化合物的立體化學異構體形式"定義為式(I)的化合物可具有的由通過相同順序的鍵鍵合的相同原子構成但具有不同的三維結構(其不可相互轉變)的所有可能的化合物。除非另有提及或說明，化合物的化學名稱包括所述化合物可具有的所有可能立體異構形式的混合物。所述混合物可包含所述化合物的基本分子結構的所有非對映異構體和/或對映異構體。純形式的或彼此混合物形式的式(I)的化合物的所有立體異構形式都包含在本發明的范圍內。特別感興趣的是立體化學純的式(I)的那些化合物。如本文提及的化合物和中間體的純的立體異構形式定義為基本上不含所述化合物或中間體的相同基本分子結構的其它對映體或非對映體形式的異構體。特別地，術語"立體異構純的"涉及具有立體異構過量至少80%(即一種異構體最少量為90%,其它可能異構體的最大量為10%)至立體異構過量100%(即，一種異構體的100%且沒有其它的)的化合物或中間體，更特別地，具有立體異構過量90%至100%,甚至更特別地具有立體異構過量94%至100%,且最特別地具有立體異構過量970/0至100%的化合物或中間體。術語"對映異構體純的"和"非對映異構體純的，，應當以相同的方式理解，但應當分別注意所述混合物的對映體過量、非對映體過量。式(I)的化合物的互變異構形式指包括其中例如烯醇基轉變成酮基(酮-烯醇互變異構)的式(I)的化合物。式(I)的化合物的N-氧化物形式指包括式(I)的那些化合物，其中一個或多個氮原子被氧化成所謂的N-氧化物，特別是那些其中一個或多個哌啶-、哌嗪或噠嗪基-氮被N-氧化的N-氧化物。可以按照本領域已知用于將三價氮轉化成其N-氧化物形式的方法將式(I)的化合物轉化成相應N-氧化物形式。所述N-氧化反應通常可以通過式(I)的起始原料與適當的有機或無機過氧化物反應進行。適當的無機過氧化物包括例如過氧化氫、堿金屬或堿土金屬過氧化物，例如過氧化鈉、過氧化鉀；適當的有機過氧化物可以包括過氧酸，比如例如過氧苯甲酸或卣素取代的過氧苯曱酸，例如3-氯過氧苯曱酸、過氧鏈烷酸例如過氧乙酸、烷基氬過氧酸，例如叔丁基氫過氧化物。適當的溶劑為例如水、低級醇例如乙醇等、烴例如甲苯、酮例如2-丁酮、卣化烴例如二氯曱烷，及這樣的溶劑的混合物。本發明也意味著包括在本發明的化合物中存在的原子的任何同位素。例如氬的同位素包括氚和氘，碳的同位素包括C-13和C-14。當在下文中使用時，術語"式(I)的化合物，，意味著也包括N-氧化物形式、可藥用酸或堿加成鹽及所有立體異構形式。第一組令人感興趣的化合物包括適用一種或多種下述限制的那些式(I)的化合物a)m為0;b)n為2;c)p為l;d)t為0;e)—qk為_CH=C<;f)R^和I^各自獨立地為氬；g)W和R4各自獨立地為氫；h)R5為氫；0116和117各自獨立地為氫或Cw烷基；j)Z為選自(a畫l)、(a-2)或(a-4)的基團；或k)R^和RH各自獨立地選自氫、羥基、d-6烷氧基羰基或羥基Cw烷基。第二組令人感興趣的化合物包括適用一種或多種下述限制的那些式(I)的化合物和第一組令人感興趣的那些化合物a)m為0jb)n為2;c)p為l;d)t為0;e)—qk為畫CH=C<;f)R^和RZ各自獨立地為氫；g)W和I^各自獨立地為氫；h)R5為氫；i)RS和R〒各自獨立地為氬；j)Z為選自(a-2)或(a-4)的基團；或k)R^和R11各自獨立地選自氫、羥基或羥基Cw烷基。一組優選的化合物包括式(I)的那些化合物及其任何亞組，其中m為0;n為0;p為l;t為0;R^和R2各自獨立地為氫；R3和R4各自獨立地為氫；R5為氫；R6和R7各自獨立地為氫或d-6烷基；Z為選自(a-l)、(a-2)或(a-4)的基團；或R^和RH各自獨立地選自氫、羥基、C"烷氧基羰基或羥基Cw烷基。一組更優選的化合物包括式(I)的那些化合物及其任何亞組，其中m為0;n為0;p為l;t為0;R^和R2各自獨立地為氬；R3和R4各自獨立地為氫；W為氫；116和117各自獨立地為氫；Z為選自(a-2)或(a-4)的基團；或者R"和R"各自獨立地選自氫、羥基或羥基d—6烷基。最優選的化合物為化合物No.1、化合物No.4和化合物No.5。<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>Co.No.5式(I)的化合物、其可藥用鹽及N-氧化物及其立體異構形式可以按常規方式制備。起始原料及一些中間體為已知化合物且可市售獲得的或可以根據本領域已知的常規反應方法制備。許多這種制備方法將更詳細地描述在下文中。用于獲得最終式(I)化合物的其它方法描述在實施例中。式(i)的化合物可以通過式(n)的中間體與式(m)的中間體反應制備，其中w為適當的離去基團，比如例如卣素，例如氟、氯、溴或碘，或磺酰氧基比如甲基磺酰氧基、4-曱基苯基磺酰氧基等。反應可以在反應-惰性溶劑中進行，所述惰性溶劑比如例如醇，例如甲醇、乙醇、2-曱氧基乙醇、丙醇、丁醇等；醚，例如4,4-二哺烷、1,1，-氧雙丙烷等；酮，例如4-甲基-2-戊酮；或N，N二曱基曱酰胺、硝基苯、乙腈、乙酸等。加入適當的堿比如，例如堿金屬或堿土金屬碳酸鹽或碳酸氫鹽例如三乙胺或碳酸鈉可用于吸收在反應過程中所釋放的酸。可以加入少量適當的金屬碘化物，例如碘化鈉或碘化鉀以促進反應。攪拌可以提高反應速率。所述反應可以方^f更地在室溫至反應混合物的回流溫度范圍內的溫度下進行，如果想要，反應可以在增壓下進行。r、n-Q、,Y—(CH2)fr(NH)廠(CH2)〗/X3(D)R'ny、,Y—(CH2)5",廠(CH2)]R(CH2)t—Z(I)其中p為1的式(I)的化合物，在本文中稱為式(I-a)的化合物，可以在適當的溶劑比如四氳呔喃中通過用氫化鋁鋰轉化式(IV)的中間體來制備。R5、N々oii,Y—(CH2)n_rC—NH~(CH2)(IV)R(CH2)t—ZR4R、N-Q,Y-(CH2)fNH—(CH2):.NR1、(CH2)t—ZR4(I-a)式(I-a)的^ft合物也可以通過在適當的試劑比如硼氫化鈉例如四氫硼酸鈉或聚合物負載的氰基三氬硼酸鹽的存在下，在適當的溶劑比如醇例如甲醇中，使適當的式(VI)的甲醛與式(V)的中間體反應制備。按相同的方式，其中t為1的式(I)的化合物，在本文中稱為式(I-b)的化合物，可以通過式(ii)的中間體與式(vn)的適當的甲醛反應制備。式(i)的化合物也可通過本領域已知的反應或功能基轉換互相轉變。許多這種轉換已經描述在上文中。其它實例為羧酸酯水解成相應的羧酸或醇；酰胺水解成相應羧酸或胺；腈水解成相應酰胺；在咪唑或苯基上的氨基可以通過本領域已知的重氮化反應及隨后以氫置換重氮基而被氫取代；醇可以轉變成酯和醚；伯胺可以;故轉化成仲胺或^又胺；雙4建可被氫化成相應單鍵；在苯基上的碘基可通過在合適的鈀催化劑的存在下插入一氧化碳而轉變成酯基。其中m為0的式(V)的中間體，在本文中稱為式(V-a)的中間體，可以通過在適當的溶劑比如曱醇中用水合肼轉化式(VIII)的中間體來制備。(vin)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage21</formula>式(V-a)的中間體，也可以通過在適當的溶劑比如甲醇或乙醇中，在金屬催化劑比如拉尼鎳和適當的還原劑比如氫的存在下，以式(XVI)的中間體開始由硝基還原成胺的反應制備。式(X)的中間體可以通過在適當的試劑比如N'-(乙基羰亞胺酰基(ethylcarbonimidoyl))-N,N-二甲基-l,3-丙二胺、一氫氯化物(EDC)及1-羥基-lH-苯并三唑(HOBT)的存在下，使式(XI)的中間體與式(XII)的中間體反應制備。所述反應可以在堿比如三乙胺的存在下，在適當的溶劑比如二氯甲烷與四氫呋喃的混合物中進行。式(vi)的中間體可以在適當的溶劑比如四氫呋喃中，通過式(xm)的中間體與氬化鋁鋰反應制備。式(vni)的中間體(同上對于式(xvi)的中間體)，其中t為o,在本文中稱為式(VIII-a)的中間體，可以通過在反應惰性溶劑比如N，N-二甲基甲酰胺中，在氯化氫的2-丙醇溶液的存在下，使式(IX)的中間體與式(XIV)的中間體反應制備，其中L為適當的離去基團比如例如鹵素，例如氟、氯、溴或碘，或d-6烷氧基例如甲氧基。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage22</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage23</formula>其中R6和R7都為氪的式(DC)的中間體，在本文中稱為式(IX-a)的中間體，可以通過在氰基硼氫化鈉的存在下，轉化式(XV)的中間體來制備。所述反應可以在反應-惰性溶劑比如例如乙酸中進行。式(I)的化合物及一些中間體可在其結構中具有至少一個立體生成中心。這樣的立體生成中心可存在于R或S構型中。在本發明中的式(I)的一些化合物和一些中間體可以包含不對稱的碳原子。所述化合物和所述中間體的純的立體異構形式可以通過使用本領域已知的方法獲得。例如，非對映異構體可以通過物理方法比如選擇結晶或色鐠技術，例如逆流分布、液相色譜等方法分離。對映異構體可以通過如下方法制備首先用合適的拆分試劑將所述外消旋混合物轉化成非對映體鹽的混合物或化合物，所述拆分試劑比如例如手性酸；然后，通過例如選擇結晶、超臨界流體色語或色譜技術例如液相色譜等方法物理分離所述非對映體鹽的混合物或化合物；和最后將所述分離的非對映體鹽或化合物轉化成相應的對映異構體。純的立體異構形式也可以從中間體和起始原料的純的立體異構形式獲得，條件是反應立體定向地發生。式(I)的化合物、其可藥用酸加成鹽和立體異構形式在抑制p53和MDM2之間相互作用上具有有價值的藥理性質。本文使用的術語"MDM2"指因mdm2基因的表達結果所獲得的蛋白質。在該術語的意義中，MDM2包含所有被mdm2編碼的蛋白質、其突變體、其選擇性的切斷蛋白質，及其磷酸化蛋白質。另外，如本文4吏用的術語"MDM2"包括MDM2類似物，例如MDMX(也稱為MDM4)和MDM2同系物及其它動物的類似物，例如人類同系物HDM2或人類類似物HDMX。本文使用的術語"抑制相互作用"或"相互作用的抑制劑"指防止或降低一種或多種分子、肽、蛋白質、酶或受體的直接或間接結合；或者防止或降低一種或多種分子、肽、蛋白質、酶或受體的正常活性。本文使用的術語"p53與MDM2的相互作用的抑制劑"或"p53-MDM2抑制劑，，為描述在如C.l中所述的分析中增加p53表達的藥劑。這種增加可由但不限于一種或多種下述作用機理所引起-抑制p53和MDM2之間的相互作用，-與MDM2或者p53蛋白質直接結合，-與上游或下游靶點，例如激酶或參與遍在蛋白化或SUMO修飾的酶活性的相互作用，-MDM2和p53在不同細胞區間的隔離或傳輸，-與MDM2結合的蛋白質的調節，例如(但不限于)p73、E2F-1、Rb、p21wafl或cipl,_向下調節或干4尤MDM2表達和/或MDM2活性，例如(但不限于)影響其細胞定位，翻譯后修飾、核輸出或泛素連接酶活性，-p53蛋白質的直接或間接穩定化，例如通過保持其為其功能結構形式或通過防止錯誤折疊，-增加p53表達或p53家族成員例如p63和p73的表達。-增加p53活性，例如通過(但不限于)增強其轉錄活性和/或-增加p53-信號通路的基因和蛋白質表達，例如(但不限于)p21wafl、cipl、MIC-1(GDF-15)、PIG-3和ATF隱3。因此，本發明公開了用作藥物的式(I)的化合物。而且，本發明還涉及用于制備用于治療經由p53-MDM2相互作用介導的病癥的藥物的化合物的用途，其中所述化合物為式(I)的化合物。如本文使用的術語"治療"涵蓋在動物特別是人類中的疾病和/或病癥的任何治療，包括(i)防止疾病和/或病癥在可能易感染所述疾病和/或病癥但還沒有診斷為患有其的受試者中出現；(ii)抑制所述疾病和/或病癥，即阻止其發展；(iii)減輕疾病和/或病癥，即引起疾病和/或病癥逆轉。術語"經由p53-MDM2相互作用所介導的病癥"指任何不希望的或有害的病癥，其導致或來自MDM2蛋白質與p53或誘導細胞凋亡、i秀導細胞死亡或調節細胞循環的其它細胞蛋白質間的相互作用的抑制。本發明也提供一種通過給藥需要這樣的治療的受試者例如哺乳動物(更特別是人類)有效量的本發明的化合物來治療p53-MDM2相互作用介導的病癥的方法。本發明的化合物可以具有在腫瘤細胞中的抗增殖作用，即使這樣的細胞沒有功能性p53。更特別地，本發明的化合物可以在具有野生型p53的肺瘤中和/或過表達MDM2的肺瘤中具有抗增殖作用。因此，本發明還提供一種通過給藥需要這樣的治療的受試者例如哺乳動物(更特別是人類)有效量的本發明的化合物來抑制腫瘤生長的方法。可以被抑制的腫瘤的實例為，但不限于肺癌(例如腺癌，且包括非-小細胞肺癌)、胰腺癌(例如胰腺癌比如，例如外分泌胰腺癌)、結腸癌(例如結腸直腸癌，比如例如結腸腺癌和結腸腺瘤)、食道癌、口腔鱗癌、舌癌、胃癌、鼻咽癌、淋巴系的造血腫瘤(例如急性淋巴細胞性白血病、B細胞淋巴瘤、Burkitt's淋巴瘤)、非何杰金氏淋巴瘤、何杰金氏病、骨髓性白血病(例如急性髓性白血病(AML))、曱狀腺濾泡癌、骨髓異常增生綜合征(MDS)、間充質來源的肺瘤(例如纖維肉瘤和4黃紋肌肉瘤)、黑素瘤、畸胎癌、成神經細胞瘤、腦腫瘤、神經膠質瘤、皮膚的良性腫瘤(例如角化棘皮瘤)、乳腺癌(例如晚期乳腺癌)、腎癌、卵巢癌、宮頸癌、子宮內膜癌、膀胱癌、前列腺癌包括末期疾病、睪丸癌、骨肉瘤、頭和頸癌及表皮癌。本發明的化合物也可用于治療和預防炎性病癥。因此，本發明還提供通過給藥需要這樣的治療的受試者例如哺乳動物(更特別是人類)有效量的本發明的化合物來治療和預防A!逸病癥的方法。免疫性疾病"指其中動物的免疫系統對自身抗原有不利反應的任何疾病。術語"自身抗原"指在動物體內正常發現的任何抗原。代表性的自身免疫性疾病包括，但不限于橋本氏甲狀l^炎(Hashimoto'sthyroiditis)、格雷夫斯病(Grave'sdisease)、多發性硬化、惡性貧血、阿狄森氏病、胰島素依賴性糖尿病、類風濕性關節炎、系統性紅斑狼瘡(SLE或狼瘡)、皮肌炎、克羅恩氏病(Crohn'sdisease)、韋4各納(氏)肉芽月中病、抗腎小球基膜病、抗磷脂綜合征、25皰滲樣皮炎、變應性腦脊髓炎、腎小球腎炎、膜性腎小球腎炎、肺出血腎炎綜合征、Lambert-Eaton、肌無力綜合征、重癥肌無力、大皰性類天皰瘉、多內分泌腺病、萊特爾氏病(Reiter，sDisease)和僵體綜合征。因此，本發明還提供一種通過向需要這樣的治療的受試者例如哺乳動物(更特別是人類)給予有效量的本發明的化合物來治療自身免疫性疾病和病癥和治療與構象上不穩定的或4昔折疊的蛋白質相關的疾病的方法。本發明的化合物也可以用于治療與構象不穩定的或錯折疊的蛋白質相關的疾病。與構象不穩定的或錯折疊的蛋白質相關的疾病的實例包括，但不限于嚢性纖維化病(CFTR)、馬方綜合征(微纖維蛋白)、肌萎縮性側索硬化癥(超氧化物歧化酶)、壞血病(膠原蛋白)、楓糖尿癥(a-酮酸脫氬酶絡合物)、成骨不全癥(l型前a前膠原)、克-雅病(朊病毒)、阿爾茨海默氏病(P-淀粉狀蛋白)、家族性淀粉樣變(溶菌酶)、白內障(晶體蛋白)、家族性高膽固醇血癥(LDL受體)、ocI-抗胰蛋白酶缺乏、泰-薩病(P-己糖胺酶)、色素性視網膜炎(視紫質)和矮妖精貌綜合征(胰島素受體)。因此，本發明還提供一種通過向需要這樣的治療的受試者例如哺乳動物(更特別是人類)給予有效量的本發明的化合物來治療與構象上不穩定的或錯折疊的蛋白質相關的疾病的方法。鑒于有用的藥理特性，目標化合物可以被配制成各種用于給藥目的的藥物形式。為了制備本發明的藥物組合物，將有效量的作為活性成分的具體的化合物以堿或酸加成鹽形式與可藥用載體混合成均質混合物，其中載體可以采取廣泛的形式，取決于用于給藥所需的制劑形式。這些藥物組合物期望地為優選地適合用于口服、直腸、經皮或通過腸胃外注射給藥的單一劑型。例如，在制備口服劑型的組合物中，可以使用任何通常的藥物介質，比如例如在口服液體制劑比如混懸劑、糖漿劑、酏劑和溶液的情況下，為水、二醇類、油類、醇類等；或在粉末劑、丸劑、膠嚢和片劑的情況下，為淀粉、糖、高嶺土、潤滑劑、結合劑、崩解劑等。因為其易于給藥，片劑和膠嚢代表最有利的口服劑量單位形式，在這種情況下，顯然采用固體藥物載體。對于腸胃外組合物，所述載體通常包含無菌水(至少大部分)以幫助溶解，雖然可以包含其它成分。例如，可以制備其中載體包括鹽溶液、葡萄糖溶液或生理鹽水和葡萄糖溶液的混合物的可注射的溶液。也可以制備可注射的混懸劑，在這種情況下，可以采用適當的液體載體、混懸劑等。在適于經皮給藥的組合物中，載體任選地包括滲透促進劑和/或適當的潤濕劑，任選地與小比例的任何性質的合適添加劑混合，所述添加劑不會對皮膚造成顯著的有害影響。所述添加劑可以促進給藥至皮膚和/或有助于制備所需的組合物。這些組合物可以以多種形式給藥，例如作為透皮貼劑、作為滴劑(spot-on)、作為膏劑。特別有利地是以易于給藥與劑量的均勻性的劑量單位形式配制前述藥物組合物。如在本文的說明書和權利要求書中使用的劑量單位形式指適合作為單一劑量的物理分散單位，每個單位包含預定量的活性成分，其經計算以結合所需的藥物載體產生期望的治療效果。這樣的劑量單位形式的實例為片劑(包括刻痕或包衣片劑)、膠嚢、丸劑、粉末袋、糯米紙嚢劑(wafer)、可注射的溶液或混懸劑、茶匙量(teaspoonful)、湯匙容量(tablespoonful)等及其分離的復合包(segregatedmultiple)。特別有利地是以易于給藥與劑量的均勻性的劑量單位形式配制前述藥物組合物。如在本文的說明書和權利要求書中使用的劑量單位形式指適合作為單一劑量的物理分散單位，每個單位包含預定量的活性成分，其經計算以結合所需的藥物載體產生期望的治療效果。這樣的劑量單位形式的實例為片劑(包括刻痕或包衣片劑)、膠嚢、丸劑、粉末袋、糯米紙嚢劑、可注射的溶液或混懸劑、茶匙量、湯匙容量等及其分離的復合包。本發明的化合物以足夠抑制MDM2和p53或誘導細胞凋亡、誘導細胞死亡或調節細胞周期的其它細胞蛋白質相互作用的量給藥。MDM2的致癌性潛能不僅通過其抑制p53的能力，也可通過其調節其它腫瘤抑制蛋白質的能力來確定，所述其它腫瘤抑制蛋白質例如成朝L網膜細胞瘤蛋白pRb和密切相關的E2F1轉錄因子。因此，本發明的化合物以足以調節MDM2和E2F轉錄因子之間斗目互作用的量給藥。本領域技術人員可容易地從在下文中給出的試馬全結果測定有效量。通常認為治療有效量為0.005mg/kg至100mg/kg體重，特別地為0.005mg/kg至10mg/kg體重。在一天中，在適當的間隔下，以一次、兩次、三次、四次或更多次亞劑量給藥所需的劑量可能是適當的。所述亞劑量可以配制成單位劑型，例如包含0.5至500mg，特別是每單位劑型包含10mg至500mg的活性成分。作為本發明的另一方面，設想p53-MDM2抑制劑與另一種抗癌劑的組合，特別是用作藥物，更特別是用于癌癥或相關疾病的治療。為了治療上述疾病，本發明的化合物可以有利地與一種或多種其它藥劑，更特別地與其它抗癌劑組合使用。抗癌劑的實例包括，但不限于-鈿配位化合物，例如順柏、卡鉤或奧沙利鉑(oxalyplatin);-紫杉烷化合物，例如紫杉醇或多西他賽；-拓樸異構酶I抑制劑，比如喜樹堿化合物，例如伊立替康或托泊替康；-拓樸異構酶II抑制劑，比如抗腫瘤表鬼臼毒素或鬼臼毒素衍生物，例如依托泊苷或替尼泊苷；-抗肺瘤長春花生物堿，例如長春花堿、長春新》咸或長春瑞濱；-抗胂瘤核苷衍生物，例如5-氟尿嘧啶、亞葉酸、吉西他濱或卡培他濱；-烷化劑，比如氮芥或亞硝基脲，例如環磷酰胺、苯丁酸氮芥、卡莫司汀、塞替派、mephalan或洛莫司汀；-抗腫瘤蒽環類衍生物，例如柔紅霉素、多柔比星、鹽酸多柔比星脂質體(doxil)、伊達比星或米托蒽醌；畫耙向IGF-1受體的分子，例如picropodophilin;-tetracarcin書亍生物,<列i口tetrocarcinA;-糖皮質激素，例如潑尼+>;-抗體，例如曲妥單抗(HER2抗體)、利妥昔單抗(CD20抗體)、吉姆單抗、西妥昔單抗、pertuzumab或貝伐單抗；-雌激素受體拮抗劑或選擇性雌激素受體調節劑，例如他莫昔芬、氟維司群、托瑞米芬、屈洛昔芬、faslodex或雷洛昔芬；畫芳香酶抑制劑，比如依西美坦、阿那曲唑、來曲唑(letrazole)和伏氯唑；-分化藥劑，比如類視色素、維生素D或視黃酸及視黃酸代謝阻斷劑((RAMBA)例如異維生素A酸(accutane);-DNA曱基轉移酶抑制劑，例如氮雜胞普或地西他濱；4元葉酸物,例^t口premetrexeddisodium;-抗生素，例如放線霉素D、博來霉素、絲裂霉素C、更生霉素、洋紅霉素或柔紅霉素；-抗代謝藥，例如可樂定、氨基蝶呤、阿糖胞苷或曱氨蝶呤；-細胞凋亡誘導劑和抗血管生成劑，比如Bcl-2抑制劑，例如YC137、BH312、ABT737、棉酚、HA14國1、TW37或癸酸；-微管蛋白(tubuline)-結合劑，例如combrestatin、詳火水仙堿或i若考達唑；畫激酶抑制劑，例如黃酮吡立(flav叩eridol)、甲石黃酸伊馬替尼、厄洛替尼或吉非替尼；國法尼基專爭移酶(farnesyltransferase)#卩制劑,例嗦口tipifarnib;-組蛋白脫乙酰酶(HDAC)抑制劑，例如丁酸鈉、辛二酰苯胺異羥肟酸(SAHA)、縮酚酸肽(FR901228)、NVP-LAQ824、R306465、JNJ-26481585或曲古抑菌素A;-泛素-蛋白酶體通路抑制劑，例如PS-341、MLN.41或bortezomib;-Yondelis;-端粒酶抑制劑，例如telomestatin;-基質金屬蛋白酶抑制劑，例如巴馬司他、馬立馬司他、prinostat或metastat。如上所述，本發明的化合物也在使肺瘤細胞對化療和放療敏感的治療中具有治療應用。因此，本發明的化合物可用作"放射致敏劑，，和/或"化學致^t劑"或者可以與另一種"放射致敏劑，，和/或"化學致敏劑"組合使用。如本文使用的術語"放射致敏劑"被定義為一種分子，優選低分子量分子，以治療有效量給藥于動物以增加細胞對電離輻射的敏感性和/或促進可用電離輻射治療的疾病的治療。如本文使用的術語"化學致敏劑"被定義為一種分子，優選低分子量分子，以治療有效量給藥于動物以增加細胞對化療的敏感性和/或促進可用化療治療的疾病的治療。放射致敏劑的作用方式的幾種機制已在文獻中提出，包括缺氧細胞放射致敏劑(例如2-硝基咪唑化合物和苯并三溱二氧化物化合物)模擬氧或在缺氧下具有類似于生物還原劑性質的另一種方式；非缺氧細i包》文射致敏劑(例如卣代嘧咬)可以為DNA石咸的類似物，且優選引入到癌細胞的DNA中，由此促進輻射誘導的DNA分子的斷裂和/或防止正常DNA修復機制；及各種在疾病的治療中已^l假設為放射敏感劑的作用的其它可能的作用機制。目前許多癌癥治療方案使用放射致敏劑結合X射線的輻射。X射線活化的放射致敏劑的實例包括，但不限于下述的曱硝唑、米索硝唑、去曱米索硝唑、i乘莫硝唑、依他硝唑、尼莫唑、絲裂霉素C、RSU1069、SR4233、E09、RB6145、煙酰胺、5-溴脫氧尿苷(BUdR)、5-碘脫氧尿苷(IUdR)、溴脫氧尿苷、氟脫氧尿苷(FudR)、羥基脲、順鉑及其治療有凌丈的類4以物和書亍生物。癌癥的光動力學療法(PDT)采用可見光作為敏化劑的輻射活化劑。光動力學放射致敏劑的實例包括下迷的，但不限于血卟啉衍生物、光伏靈(Photofrin)、苯并吟啉衍生物、吟啉錫、pheoborbide-a、細菌葉綠素-a、萘菁、酞菁、鋅酞菁及其治療有效的類似物和衍生物。放射致敏劑可以與治療有效量的一種或多種其它化合物結合給藥，所述其它化合物包括但不限于促進放射致敏劑結合靶細胞的化合物；控制治療劑、營養物和/或氧流向靶細胞的化合物；在有或者沒有另外的輻射下作用于肺瘤的化療劑；或者其它治療癌癥或其它疾病的治療有效的化合物。化學致敏劑可以與治療有效量的一種或多種其它化合物結合給藥，所述其它化合物包括但不限于促進化學致敏劑結合靶細胞的化合物；控制治療劑、營養物和/或氧流向靶細胞的化合物；在有或者沒有另外的輻射下作用于肺瘤的化療劑；或者其它治療癌癥或其它疾病的治療有效的化合物。釣拮抗劑例如維拉帕米被發現在與抗腫瘤劑組合以建立腫瘤細胞對接受的化療劑的抗性的化學敏感性和增強這樣的化合物在藥物敏感的惡性胂瘤中的功效中有用。鑒于其有用的藥理學特性，根據本發明的組合的組分，即其它藥劑和p53-MDM抑制劑可以被配制成多種用于給藥目的的藥物形式。所述組分可以在各個藥物組合物中分別配制或在包含兩種組分的單一藥物組合物中配制。因此，本發明也涉及一種藥物組合物，其包含其它藥劑和p53-MDM及一種或多種藥物載體。本發明進一步涉及根據本發明的組合在制備抑制腫瘤細胞生長的藥物組合物中的用途。本發明進一步涉及一種包含作為第一活性成分的根據本發明的p53-MDM2抑制劑和作為第二活性成分的抗癌劑的產品，作為用于同時、分開或依序使用用于治療患有癌癥的患者的混合制劑。其它藥劑及p53-MDM2抑制劑可以同時給藥(例如在分開或在單一組合物中)或者以任何順序給藥。在后者的情況中，兩種化合物將在一個期間內以足以確保獲得有利作用或協同作用的數量和方式給藥。應當理解對組合中各種組分的給藥的優選的方法和順序及各自的劑量和療法將取決于要給藥的特定的其它藥劑及p53-MDM2抑制劑、它們的給藥途徑、要治療的特定的腫瘤及要治療的特定的宿主。給藥的最佳方法和順序及劑量和療法可容易地由本領域技術人員使用常規方法和參考本文所列出的信息確定。鉑配位化合物有利的給藥劑量為每平方米體表面積1至500mg(mg/m2),例如50至400mg/m2,特別是對于順鉑，每療程劑量為約75mg/m2,而對于卡柏，每療程劑量為約300mg/m2。紫杉烷化合物有利的給藥劑量為每平方米體表面積50至400mg(mg/m2)，例如75至250mg/m2,特別是對于紫杉醇，每療程劑量為約175mg至250mg/m2,而對于多西他賽，每療程劑量為約75至150mg/m2。喜樹堿化合物有利的給藥劑量為每平方米體表面積0.1至400mg(mg/m2)，例如1至300mg/m2,特別是對于^f尹立替康，每療程劑量為約100至350mg/m2,而對于托泊替康，每療程劑量為約1至2mg/m2。抗腫瘤鬼臼毒素衍生物有利的給藥劑量為每平方米體表面積30至300mg(mg/m2)，例如50至250mg/m2,特別是對于依托泊苷，每療程劑量為約35至100mg/m2,而對于替尼泊苷，每療程劑量為約50至250mg/m2。抗腫瘤長春花生物堿有利的給藥劑量為每平方米體表面積2至30mg(mg/m2),特別是對于長春堿，每療程劑量為約3至12mg/m2,而對于長春新堿，每療程劑量為約1至2mg/m2,和對于長春瑞濱，每療程劑量為約10至30mg/m2。抗胂瘤核普衍生物有利的給藥劑量為每平方米體表面積200至2500mg(mg/m2),例如700至15001500mg/m2,特別地對于5-FU，每療程劑量為200至500mg/m2,對于吉西他濱，每療程劑量為約800至1200mg/m2，和對于卡培他濱，每療程劑量為約1000至2500mg/m2。烷化劑比如氮芥或亞硝基脲有利的給藥劑量為每平方米體表面積100至500mg(mg/m2),例如120至200mg/m2，特別地對于環-疇酰胺，每療程劑量為100至500mg/m2，對于苯丁酸氮芥，每療程劑量為約O.l至0.2mg/kg，對于卡莫司汀，每療程劑量為約150至200mg/m2，和對于洛莫司汀，每療程劑量為約IOO至150mg/m2。抗腫瘤蒽環類衍生物有利的給藥劑量為每平方米體表面積10至75mg(mg/m2),例如15至60mg/m2，特別地對于多柔比星，每療程劑量為40至75mg/m2,對于柔紅霉素，每療程劑量為約25至45mg/m2，和對于伊達比星，每療程劑量為約10至15mg/m2。抗雌激素藥有利的給藥劑量為每日約1至100mg,取決于具體的藥劑和要治療的病癥。他莫昔芬有利地以5至50mg,優選10至20mg的劑量每天兩次口服，持續治療足夠的時間以獲得并維持治療效果。托瑞米芬有利地以約60mg的劑量一天一次口服給藥，持續治療足夠的時間以獲得并維持治療效果。阿那曲唑有利地以約lmg的劑量一天一次口月艮給藥。屈洛昔芬有利地以約20-100mg的劑量一天一次口服給藥。雷洛昔芬有利地以約60mg的劑量一天一次口服給藥。依西美坦有利地以約25mg的劑量一天一次口服給藥。抗體有利的給藥劑量為每平方米體表面積約1至5mg(mg/m2),或者如果與此不同，如本領域已知的。曲妥單抗有利的給藥劑量為每平方米體表面積1至5mg(mg/m2)，特別地每療程2至4mg/m2。這些劑量可以每療程給藥例如一次、二次或多次，其例如可以每隔7、14、21或28天重復。式(I)的化合物、其可藥用酸加成鹽和立體異構體形式可具有有價值用，包含檢測或測量標記化合物和/或p53和/或MDM2和/或其它分子、肽、蛋白質、酶或受體之間絡合物的形成。-險測或鑒定方法可以使用用標記劑比如放射性同位素、酶、熒光物質、發光物質等標記的化合物。放射性同位素的實例包括1251、1311、SH和"C。酶通常通過結合適當的底物而成為可檢測的，所述底物依次催化可檢測的反應。其實例包括，例如P-半乳糖苷酶、P-糖苷酶、石咸性磷酸酶、過氧化物酶和蘋果酸脫氬酶，優選辣根過氧化酶。所述發光物質包括，例如魯米諾、魯米諾衍生物、熒光素、水母素和熒光素酶。生物試樣可以限定為體組織或體液。體液的實例為腦脊液、血液、血漿、血清、尿液、痰、唾液等。下述實施例舉例說明本發明。試驗部分在下文中，"DMF"定義為N,N-二曱基曱酰胺，"DCM"定義為二氯甲烷，"EtOAc，，定義為乙酸乙酯，"EtOH，，定義為乙醇，"MeOH，，定義為曱醇，且"THF，，定義為四氫呋喃。溶乂對于許多化合物，熔點是用Kofler熱態實驗臺得到的，所述Kofler熱態實驗臺由具有直線溫度梯度的加熱板、滑動指針和以攝氏度表示的溫度標尺組成。方法A所述HPLC梯度由AllianceHT2795(Waters)系統提供，該系統包括具有脫氣器的四元泵、自動進樣器和二極管-陣列檢測器(DAD)。將來自柱的物流分離至MS檢測器。所述MS檢測器裝配有電噴霧電離源。毛細管針電壓為3kV，保持在LCT(來自Waters的Flight-Z-噴霧質譜儀的時間)中的輻射源溫度為IO(TC。使用氮作為噴霧器的氣體。用Waters-MicromassMassLynx-Openlynx數據系統進4亍數據采集。在nXterra-RPC18柱(5jum,3.9x150mm)上進行反相HPLC，流速為1.0ml/分鐘，溫度為30°C。釆用兩個流動相(流動相A:100%的7mM乙酸銨；流動相B:100%的乙腈；)進行梯度條件洗脫在5分鐘內從85。/。的A、15%的B(維持3分鐘)至20°/。的A、80%的B,保持20%的A和80%的B共6分鐘，并用初始條件再平tf3分鐘。使用的注射體積為20jul。對于陽性電離方式，錐空電壓為20V。通過使用0.08秒的中間掃描延遲以0.8秒從100至900掃描獲得質譜。所述LC梯度由AcquityUPLC(Waters)系統提供，該系統包括二元泵、樣品收集器、柱加熱器(設定在55°C)和二極管-陣列檢測器(DAD)。將來自柱的物流分離至MS檢測器。所述MS檢測器裝配有電噴霧電離源。使用0.02秒以0.18秒的駐留時間從100至1000掃描獲得質譜。所述毛細管針電壓為3.5kV,所述源溫度保持在140°C。使用氮氣作為噴霧器氣體。用Waters-MicromassMassLynx-Openlynx數據系統進行數據采集。在橋連的乙基硅氧烷/二氧化硅(BEH)C18柱(1.7nm,2.1x50mm)進行反相UPLC，流速0.8ml/min。使用兩種流動相(流動相A:在H20/曱醇95/5中0.1%的甲酸；流動相B:甲醇)進行梯度條件，在1.3分鐘從95%的A至5%的A,95Q/。的B,并保持0.2分鐘。使用0.5ju1的注射體積。對于陽性電離方式，錐空電壓為10V,而對于陰性電離方式，錐空電壓為20V。A.中間體化合物的制備實施例A1在氬氣下，在0。C,向5-硝基二氪吲哚(10.0g，0.061mol)和4-氯吡咬鹽酸鹽(ll.Og,0.073mol)在DMF(60ml)中的溶液中分批加入叔丁醇鉀(17.0g,0.15mol)。將該混合物加熱至IO(TC16小時。將該混合物傾入水中，并用EtOAc萃取兩次。分離有機層，干燥(MgS04)，過濾并蒸方法Bg)....中..間..體.丄的.制.備.釘發溶劑。通過在硅膠上的柱色譜(40-63jum)(洗脫劑環己烷/EtOAc/MeOH50/50/0至0/80/20)純化殘余物兩次。收集純的成分，并蒸發溶劑，得到2.49g(17。/。)呈橙褐色固體的中間體1。lHNMR(300畫z,DMSO-d6)58,47(dd,2H,J=6.4,J=1.6),8.06(m2H),7.41(d,1H,J=9.6),7.28(dd,2H,J=6.4,J=1.6),4.16(t,2H,J=8.6),3.22(t,2H,J=8.6)。MS(ES+)w/z242(M+l)。bLt間.體.i的制.備.CTY^在室溫下，在30psi的氬氣下，攪拌中間體1(2.4g,0.010mol)和拉尼鎳(5ml，在水中50%的漿液)在EtOH(45ml)和THF(45ml)中的混合物3小時。在通過硅藻土墊過濾后，蒸發溶劑，得到2.01g(96。/。)呈褐色固體的中間體2。工HNMR(300MHz,CDC13)58.32(dd,2H,J=6.4,J=1.5)，7.15(d,1H,J=8.5)，6.92(dd,2H,J=6.4,J=1.5),6.63(d,1H，J=2.2),6.50(dd,1H,J=8.3,J=2.4)，3.92(t,2H，J=8.3),3.44(brs,2H),3.08(t,2H,J=8.3)。在氬氣下，向中間體2(1.9g，0,0089mol)在DCM(20ml)和THF(20ml)中的溶液中連續加入吲哚-3-乙酸(2.0g,0.012mol)、1-羥基苯并三唑水合物(1.6g,0.012mol)和l-(3-二曱基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(2.2g,0.012mol)。在室溫下，攪拌該反應混合物40小時。為了完成反應，加入p引咮國3陽乙酸(1.6g,0.0089mol)和l-(3-二曱基氨基丙基)國3國乙基碳二亞胺鹽酸鹽(1.7g,0.0089mol),并在室溫下再攪拌該混合物16小時。蒸發溶劑，并通過在硅膠上的柱色譜(40-63jum)(洗脫劑DCM/MeOH/NH4OH95/5/0.1至80/20/0.1)純化殘余物。蒸發收集的成分，用MeOH洗滌得到的固體并干燥，得到1.95g(60。/。)的中間體3。&NMR(300顧z,DMS0-d6)510.93(brs，1H),10.08(brs,1H),8.31(d,2H,J=6.3),7.88(d,IH,J=8.1),7.58(m,2H)，7.34(m,2H),7.26(dIH,J=2.1)，7.17(d,2H,J=6.6),7.07(t,IH,J=6.9),6.98(t,IH,J=7.4),3.99(t2H,J=8.3),3.71(s,2H),3.12(t,2H,J=8.2)。MS(ES+)附/z369(M+l)。實施例A2."....中..間..體..4..的.制.備在氬氣下，向5-硝基二氫吲哚(5.0g,0.030mol)和4-氯喹啉(6.0g,0.037mol)在DMF(30ml)中的溶液中分批加入叔丁醇鉀(8.4g,0.075mol)。在100。C攪拌該混合物16小時，然后在室溫下攪拌70小時。將該混合物傾入水中，并用EtOAc萃取3次。分離有機層，用鹽水洗滌，干燥(MgS04)，過濾并蒸發溶劑。通過在硅膠上的柱色譜(40-63Mm)(洗脫劑EtOAc/環己烷50/50至100/0)純化殘余物。收集純的成分，并蒸發溶劑，得到2.26g(26%)呈橙色固體狀的中間體4。H麗R(300MHz,CDC13)58.93(d,IH,J=4.9),8.11(m,2H),7.92(dd,1H，J=8.9,J=2.5),7.85(d,IH,J=7.7),7'82(dt,IH,J=7.0,J=1.4)，7.60(dt,IH,J=6.8,J=1.2),7.54(d,IH,J=4.9),6'26(d，IH,J=8.9),4.30(t,2HJ=8.4),3.35(t,2H,J=8.2)。MS(ES+)m/z292(M+l)。t)...t.間.體.;L的.制務<formula>formulaseeoriginaldocumentpage36</formula>.在室溫下，在30psi的氫氣下，攪拌中間體4(2.0g,0.0069mol)和拉尼鎳(5ml,在水中50%的漿液)在EtOH(30ml)和THF(30ml)中的混合物4.5小時。在通過硅藻土墊過濾后，蒸發溶劑，得到1.81g(lOO%)呈橙色固體的中間體5。&NMR(300畫z,CDC13)58.71(d,1H,J=5.1),8.07(d,1H,J=8.5),8.01(d,1H,J=8.5),7.67(t,1H,J=7.0),7.41(t,IH,J=7.1),7.09(d，1H，J=5.1)6.67(s,IH),6.49(d,IH,J=8.3),6.38(dd,IH,J=8.3,J=1.9),4.04(t,2H，J=7.9),3.39(brs,2H),3.12(t,2H,J=7.8)。MS(ES+)m/z262(M+l)。力....中..間.體.i的.制.備在氬氣下，向中間體5(1.7g，0.0064mol)在DCM(50ml)和THF(50ml)中的溶液中連續加入吲哚-3-乙酸(5.0g，0.0084mol)、l-羥基苯并三唑水合物(l.lg，0.0084mol)和l-(3-二曱基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(1.6g,0.0084mol)。在室溫下，攪拌該混合物16小時。蒸發溶劑，并通過在硅膠上的柱色譜(40-63jum)(洗脫劑DCM/MeOH/NH4OH90/10/0.l)純化殘余物。收集純的成分，并蒸發溶劑，得到1.15g(43%)呈褐色泡沫狀的中間體6。&N進(300MHz,CDC13)58.74(d,1H,J=5.1),8.61(brs,1H),8.09(d,IH,J=8.1),7.91(d,IH,J=8.4),7.70-7.62(m,2H),7.41(m,4H),7.22(m,3H),7,09(d,IH,J=5.1),6.74(dd,IH,J=8.4,J=1.8),6.38(d,IH,J=8.4),4.04(t,2H,J=8.0),3.89(s,2H),3.15(t,2H,J=7.9)。MS(ES+)m/z419(M+l)。實施例A3t間.體.？.的制.務.在室溫下，在氬氣下，攪拌吲哚-3-乙酸(2.0g，0.013mol)和l,l-羰二咪哇(2.1g,0.013mol，滴力口)在DCM(28ml)中的混合物2小時。加入N,0-二曱基羥基胺鹽酸鹽(1.3g，0.013mol),在室溫下攪拌該混合物16小時，然后傾入水和水中。用4N氬氧化鈉溶液調節pH至IO，并用EtOAc萃取水層兩次。分離有機層，用3N鹽酸洗滌，干燥(MgS04),過濾并蒸發溶劑，得到2.37g(89%)呈粉紅色固體的中間體7。'HNMR(300MHz,CDC13)58.09(brs,1H),7.66(d,1H,J=7.5)7.36(d,1H，J=7.5)，7.22-7.lO(m,3H),3,92(s,2H),3.66(s,3H),3.23(s,3H)。實施例A4在BiotageInitiator微波裝置中，加熱5-硝基二氬吲咮(4.0g,0.024mol)和4-氯-2-p比啶羧酸、曱基酯(5.0g,0.029mol)在乙酸(24ml)中的混合物至120°C25分鐘。用水淬滅該反應，通過加入飽和碳酸鉀溶液調節pH至pH9。用DCM萃取該混合物3次。分離有機層，干燥(MgS04),過濾并蒸發溶劑。通過在硅膠上的柱色譜(40-63jum)(洗脫劑DCM/MeOH100/0至90/10)純化殘余物。收集純的成分，并蒸發溶劑，得到1.37g(19。/o)呈黃色固體狀的中間體8。工HNMR(300MHz,CDC13)58.65(d,IH,J=5.6),8.16(dd,IH,J=8.9,J=2.1),8.11(s，IH),7.98(d,1H，J=2.5),7.35(d，IH,J=8.9),7.30(dd,IH,J=5.7,J=2.5),4.23(t,2H,J=8.5),4,05(s,3H),3.32(t,2H,J=8.4)。MS(ES+)柳々300(M+1)。在室溫下，在1氣壓的氫氣下，攪拌中間體8(1.2g,0.0045mol)和拉尼鎳(4ml，在水中50%的漿液)在MeOH(20ml)和THF(20ml)中的混合物20小時。在通過硅藻土墊過濾后，蒸發溶劑，得到1.06g(880/0)呈橙色固體的中間體9。工HNMR(300MHz,CDC13)58.40(d,IH,J=5.8),7.77(d,1H,J=2.5),7.18(d,1H,J=8.4),7.05(dd,IH,J=5.8,J=2.6),6.62(d,1H,J=2.2)，6.52(dd,&1..$.間.體義的.制.備.1H,J=8.4,J=2.4)，4.00(m,5H),3.09(t,2H,J=8.3)。MS(ES+)附/z270(M+l)。實施例A5."....中..間.體.丄Q..的.制.務在IO(TC下，攪拌5-氨基吲咮(1.1g，0.0086mol)和鄰苯二甲酸酐(2.6g,0.017mol)在DMF(20ml)中的混合物5小時，然后在室溫下攪拌64小時。在EtOAc中稀釋該反應混合物，用氯化銨的飽和溶液洗滌兩次，干燥(MgS04),過濾，并蒸發溶劑。將得到的油狀物收集在乙酸(15ml)中，并在室溫下攪拌20分鐘，然后加熱至80。C1.5小時。加入水，并用飽和碳酸鈉溶液調節pH至pH4。用EtOAc萃取該混合物兩次。分離有機層，干燥(MgS04),過濾并蒸發溶劑。通過在硅膠上的柱色譜(40-63lim)(洗脫劑EtOAc/環己烷40/60)純化殘余物。收集純的成分，并蒸發溶劑，得到2.06g(91°/0)的中間體10。!HNMR(300MHz,CDC13)58.32(brs,1H),7.97(m，2H),7.79(m,2H)，7.66(d,1H,J=2.0),7.49(d,1H,J=8.6),7.27(dd,1H,J=5.7,J=2.8),7.17(dd,1H,J=8.6,J=2.0),6.61(t,1H,J=l.l)。MS(ES+)m々263(M+l)。fel.i且體..u..的.制.務在室溫下，攪拌中間體10(2.1g,0.0079mol)和氰基硼氬化鈉(987mg，0.016mol)在乙酸(30ml)中的混合物18小時。加入水，并用飽和碳酸鈉溶液調節pH至6。用EtOAc萃取該混合物兩次。分離有機層，用鹽水洗滌，干燥(MgS04)，過濾并蒸發溶劑。通過在硅膠上的柱色譜(40-63jum)(洗脫劑EtOAc/環己烷30/70至70/30)純化殘余物。收集純的成分，并蒸發溶劑，得到726mg(35。/。)呈黃色固體狀的中間體11。力N匿(300MHz,CDC13)57.93(m,2H),7.77(m,2H),7.09(s,1H),7.00(d,1H,J=8.2),6.70(d,1H,J=8.2),3.62(t,2H，J=8.4),3.09(t,2H:J=8.4)。MS(ES+)m/z265(M+l)。在BiotageInitiator微波裝置中，加熱中間體11(570mg,0.0022mol)、4-溴-6,7-二氫-5H國[1]吡啶-7-醇(554mg,0麓6mol)和5N鹽酸在2-丙醇(0.57ml，0.0029mol)在DMF(llml)中的混合物至120°C1小時。用飽和碳酸氫鈉溶液淬滅反應，并用DCM萃取3次。蒸發溶劑。并通過在硅膠上的柱色譜(40-63jum)(洗脫劑EtOAc/MeOH100/0至80/20,然后是DCM/MeOH95/5至90/10)純化殘余物。收集純的成分，并蒸發溶劑，得到651mg(76。/。)呈黃色固體狀的中間體12。&麗R(300MHz,CDC13)58.30(d,1H,J=5.6),7.95(m,2H),7.79(m,2H)，7.23-7.12(m,3H),6.94(d，1H,J=8.4),5.24(t,1H,J=7,0),4.18(m,1H),4.08(m,1H),3.25(m,2H),3.00(m,1H),2.85(m,1H),2.57(m，1H),2.06(m,IH)。MS(ES+)m/z398(M+l)。在室溫下，將水合肼(137jul，0.0028mol)加入到中間體12(557mg,0.0014mol)在MeOH(5.5ml)中的混懸液中，并加熱該得到的混合物至70°C40分鐘。用水淬滅該反應，并用EtOAc萃取4次。分離有機層，干燥(MgS04),過濾并蒸發溶劑，得到392mg(100。/。)呈橙褐色固體的中間體13。&NMR(300MHz,CDC13)58.18(d,1H,J=5.8),7.07(d,1H,J=5.8),.4)...中.且體..11.的.制.務6.49(d,1H，J=8.3),6.63(d,IH,J=2.1),6.48(dd,IH,J=8.3,J=2.4)，5.21(mIH),4.19(brs,2H),4.03(m，3H),3.05(m,3H),2.84(m,IH),2.50(m,IH)2,03(m,IH)。實施例A6^..U.體.丄i.的.制.務在140。C的微波爐中的封閉管中，加熱2,3-二氫-3,3-二曱基-5-硝基-lH-吲哚(0.003mol)和4-溴-吡啶(0.003mol)在1-丁醇(5ml)中的混合物30分鐘，然后將其收集在10%碳酸鉀的溶液中，并用EtOAc萃取。用水洗滌有機層，然后用NaCl和鹽水洗滌，干燥(MgS04),過濾并蒸發溶劑。通過在硅膠上的柱色譜(20-45jum)(洗脫劑DCM/MeOH100/0至98/2)純化殘余物(0.8g)。收集純成分并蒸發溶劑。從乙腈中結晶殘余物(0.45g，64%)。濾出沉淀物并干燥，得到0.216g(31%)的中間體14,熔點為217。C(Kofler)。工H麗R(DMS0-d6)S1.4(6H,s),3.92(2H,s),7.3(2H,m),7.45(1H,m),8,10(2H,m),8.47(2H,m)LCMS(ES+)m/z270(M+1),Rt=0.77,方法Bb).中..間.體.ll的.制務.在室溫下，在3bar壓力下氫化中間體14(0.003mol)和拉尼鎳(0.9g)在MeOH(20ml)中的混合物1小時，然后用硅藻土過濾。用MeOH洗滌硅藻土。蒸發濾液，得到0.8g(100Q/Q)的中間體15。.Q)....中..間..體J灸.的.制.務6H在室溫下，將溴-三吡咯烷基磷代六氟磷酸酯(bromotris(pyrrolidino)phosphoniumhexafluorophosphate)(0.004mol)分4比力口入中間體15(0.003mol)、1H-吲哚-3-乙酸(0.004mo1)、1-羥基苯并三唑(0.04mol)和二異丙醚(0.005mol)在DCM(15ml)的溶液中。在室溫下攪拌該混合物過夜。用10%的碳酸鉀溶液洗滌有機層兩次，干燥(MgS04),過濾并蒸發溶劑。通過在硅膠上的柱色譜(15-40pm)(洗脫劑DCM/MeOH/NH4OH95/5/0.2)純化殘余物(3.2g)。收集純成分，并蒸發溶劑。從乙腈中結晶殘余物(0.7g,52%)。濾出沉淀物并干燥，得到0.55g(41%)的中間體16，熔點158。C(Kofler)。力NMR(DMSO誦d6)S1.28(6H,s),3.7(2H,s),3.73(2H,s),6.99(lH,t,J=7.7Hz),7,07-7.11(3H,m),2,25(1H,d,J-3.6Hz),7.30國7.39(3H,m)7.55(lH,br,d,J=3.6Hz),7.62(lH,d,J=7.7Hz),8.3(2H,d,J=7.7Hz),10.03(1H,br,s),10.92(1H,br,s)LCMS(ES+)m/z397(M+1),Rt=8.43,方法AB.最終化合物的制備實施例Bl化合物i的制備i"^r^^Vnr^！在氬氣下，將氫化鋁鋰(423mg，0.0011mol)分批加入中間體3(1,0g,0.0027mol)在THF(60ml)的混懸液中。在室溫下攪拌該混合物24小時，用水和稀釋的Rochelle鹽溶液淬滅，并用DCM萃取3次。分離有機層，干燥(MgS04)，過濾并蒸發溶劑。通過在硅膠上的柱色譜(40-63jum)(洗脫劑DCM/MeOH/NH4OH95/5/0.l)純化殘余物。收集純的成分，并蒸發溶劑，得到170mg(18。/。)呈黃色泡沫狀的化合物1。&NMR(300MHz,CDC13)58.36(brs,1H),8.32(d,2H,J=6.6),7.63(d,1H,J=7.8),7.39(d,1H，J=7.5),7.24國7.11(m,3H)，7'07(d，IH,J=1.8)6.93(d,2H，J=6.6),6.58(s,IH),6.45(dd,IH,J=8.4，J=2.1),3.93(t,2H，J=8.2),3.62(brs，IH),3.46(t,2H，J=7.5),3.09(m,4H)。LCMS(ES+)w/z355(M+1),Rt=8.30,方法A實施例B2化舍.物.2的制備.在氬氣下，在室溫下，將氫化鋁鋰(391mg，0.010mol)分批加入中間體6(l.lg,0.0026mol)在THF(55ml)中的溶液中。在室溫下攪拌該混合物18小時。在0。C，用MeOH淬滅該反應。加入水和稀釋的Rochelle鹽溶液，用DCM萃取該混合物3次。分離有機層，用鹽水洗滌，干燥(MgS04),過濾并蒸發溶劑。通過在硅膠上的柱色譜(40-63jum)(洗脫劑DCM/MeOH/NH4OH97/3/0.5)純化該殘余物。收集純的成分，并蒸發溶劑，得到121mg(12。/o)呈橙色泡沫狀的化合物2。&畫R(300MHz,CDC13)58.70(d,1H,J=5.1),8.18(brs,1H),8.07(d,1H,J=8.7),8.03(d,1H，J=8.7),7,66(m,2H),7.41(m,2H)，7.22(t,1H:J=7.7),7.12(m,3H),6.63(s,1H),6.56(d,1H,J=8.4)，6.34(dd，IH,J=8.4,J=2.1),4.06(t,2H,J=7.8),3.46(t,2H,J=6.8),3.12(m,4H)。MS(ES+)m/"05(M+l)。實施例B3化令.梭3的制備一O在0。C，在氬氣下，將氫化鋁鋰(14mg,0.00036mol)加入到中間體7(74mg,0.00036mol)在THF(lml)中的溶液中。在(TC,攪拌該混合物1小時，用5%的硫酸氬鉀溶液淬滅，并用EtOAc萃取兩次。分離有4幾層，用鹽水洗滌，干燥(MgS04),過濾并蒸發溶劑，得到呈橙色油狀物的吲咮-3-基乙醛。將中間體9(200mg，0.00074mol)和氰基硼氬化鈉(64mg，0.0010mol)在MeOH(2.3ml)和乙酸(2滴)的混合物滴加至前述醛(236mg，0.0015mol)在MeOH(2ml)中的溶液中。在室溫下，攪拌該反應混合物16小時。用水淬滅反應，用飽和碳酸氫鈉溶液淬滅反應，并用EtOAc萃取3次。分離有機層，用鹽水洗滌，干燥(MgS04),過濾并蒸發溶劑。通過在硅膠上的柱色譜(40-63jum)(洗脫劑EtOAc/MeOH100/0至90/10)純化殘余物。收集純的成分，并蒸發溶劑，得到190mg(44Q/。)呈橙色泡沫狀的化合物3。&N證(300MHz,CDC13)58.42(d,IH,J=5.7),8.08(brs,1H),7.79(d,1H,J=2.4),7.63(d,1H,J=7.8),7.40(d,1H,J=8.1),7.25畫7.07(m,5H),6.59(s,1H),6.48(dd,1H,J=8,7,J=2.1),楊(m,5H),3.48(t,2H,J=6.8),3.12(m,4H)。MS(ES+)w/"13(M+l)。實施例B4化合物4的制.備.將硼氫化鈉(92mg,0.0024mol)慢慢地加入到化合物3(100mg,0.00024mol)在MeOH(3ml)中的溶液中。在室溫下攪拌該混合物1小時，然后在80。C攪拌4小時，并在室溫下再攪拌85小時。用水淬滅該反應，并用EtOAc萃取該混合物。分離有機層，用鹽水洗滌，干燥(MgS04),過濾并蒸發溶劑。通過在硅膠上的柱色譜(40-63jum)(洗脫劑DCM/MeOH90/10至85/15)純化殘余物。收集純的成分，并蒸發溶劑，得到50mg(54%)呈黃色泡沫狀的化合物4。丄H麗R(300MHz,DMSO-d6)510.83(brs,1H),8.14(d，1H,J=5.7),7.54(d,1H,J=7.8),7.35(d,IH,J=7.8),7,22(m,2H),7.14(d,IH,J=2,l),7.70(dt,1H,J=7.6,J=1.2),6.98(dt,1H,J=7.5,J=0.9),6.86(dd,IH,J=6.0J=2.4),6.62(d,IH,J=2.1),6.45(dd，IH,J=8.7,J=2.2)，5.39(brs,2H),4.49(d2H,J=4.0),3.92(t，2H,J=8.2),3.30(m，2H),3.06(t,2H，J=8.1),2.96(t,2HJ=7,5)。MS(ES+)m/z385(M+l)。實施例B5.佐.金.物..l的.制務.在0。C，在氬氣下，將氬化鋁鋰(14mg，0.00036mol)加入到中間體7(74mg,0.00036mol)在THF(lml)中的溶液中。在(TC攪拌該混合物1小時，用5%的硫酸氫鉀溶液淬滅，并用EtOAc萃取兩次。分離有機層，用鹽水洗滌，干燥(MgS04),過濾并蒸發溶劑，得到呈橙色油狀物的吲咮-3-基乙醛。向中間體13(100mg，0.00037mol)和氰基硼氫化鈉(33mg,0.00052mol)在MeOH(1.5ml)和乙酸(2滴)的混合物中滴加前述醛(57mg0.00036mol)在MeOH(0.5ml)中的溶液。在室溫下，攪拌該反應混合物18小時。用飽和碳酸氬鈉溶液淬滅反應，并用EtOAc萃取兩次。分離有機層，用鹽水洗滌，干燥(MgS04)，過濾并蒸發溶劑。通過在硅膠上的柱色鐠(40-63pm)(洗脫劑DCM/MeOH100/0至90/10)純化殘余物。收集純的成分，并蒸發溶劑，得到79mg(52%)呈黃色泡沫狀的化合物5。HNMR(300MHz,CDC13)58.37(brs,1H)，8.15(d,1H,J=5.8),7.63(d,IH,J=7.8),7.37(d,IH,J=7.1)，7.2攀，1H，J=7.6,J=1.2),7.12(dt,1H，J=7.6,J=l.l),7.07(m,2H),6.83(d,1H,J=8.5),6.56(d,1H,J=2.0),6.40(dd,1H，J=8.5,J=2.3),5.22(t,1H，J=6.7),4.19(brs,1H),4.04(m,3H),3.44(t,2H,J=6.7),3.06(m,5H),2.83(m,1H),2.54(m，1H),2.08(m，1H)。MS(ES+)m/z411(M+l)。實施例B6化令物6的制務在N2氣流下，將中間體16(0.001mol)分批加入四氫鋁鋰(0.002mol)在THF(10ml)中的溶液中。攪拌該混合物并回流24小時，傾入冰水中并用硅藻土過濾。用EtOAc洗滌珪藻土。用EtOAc萃取濾液。分離有機層，干燥(MgS04),過濾并蒸發溶劑。通過在硅膠上的柱色譜(IOpm)(洗脫劑DCM/MeOH/NH4OH95/5/0.5)純化殘余物(0.45g)。收集純的成分，并蒸發溶劑，得到0.042g的化合物6。力NMR(DMSO國d6)51.28(6H,s)，2.95(2H,t,J=7.7Hz),3.27-3.34(2H,m),3.65(2H,s)，5.38(lH，br，t,J=6.4Hz),6.45(lH,dd,J=4Hz,7.7Hz),6.57(lH,d，J=4Hz),6.96-7.02(3H，m),7.07(lH,t,J=7.7Hz)，7.15-7.5(3H,m),7.35(lH,d,J=7.7Hz),7.55(lH,d,J=7.7Hz)，8.22(lH,d,J=7.7Hz),10.83(1H,br,s)MS(ES+)附/z383(M+l),Rt=9.17,方法A表F-1列出了在上述實施例之一中制備的化合物。.表F畫lHCo.No.1;實施例[Bl]Co.No.2;實施例[B2〗<formula>formulaseeoriginaldocumentpage47</formula>Co.No.3;實施例[B3]Co.No.4;實施例[B4]OH、？Co.No.5;實施例[B5]Co.No.6;實施例[B6]c.藥理學實施例所述化合物保存p53在A2780細胞中的能力用p53酶聯免疫吸附分析測定。p53分析法是一種采用兩種多克隆的抗體的"三明治"酶免疫分析法。將對p53蛋白質特異性的多克隆抗體固定在塑料孔的表面上。任何存在于要測定的樣品中的p53將結合至捕捉抗體(captureantibody)。生物素化的檢測劑多克隆抗體也識別p53蛋白質，并將結合任何p53，其通過捕捉抗體保持。反之，所述檢測劑抗體被辣根過氧化酶-結合的鏈霉抗生素蛋結合。所述辣根過氧化酶催化顯色底物鄰-苯二胺的轉化，其強度與結合至培養板上的p53蛋白的量成正比。使用分光光度計定量顯色反應產物。定量通過使用已知濃度的純化的重組HIS標記的p53蛋白質構建標準曲線獲得(參見實施例C.l)。式(I)化合物的細胞活性在U87MG腫瘤細胞上利用比色分析法對細胞毒性或存活率測定(參見實施例C.2)。U87MG細胞為具有野生型p53的人類成膠質細月包瘤細胞。在該細月包系中，MDM2密切地控制p53表達。在37。C，在潤濕的含有5。/。C02的培養箱中，在補充有10%胎牛血清(FCS)、2mML-谷氨酰胺和慶大霉素的RPMI1640中培養A2780細月包(ATCC)。在96孔培養板中，以每孔20.000個細胞接種A2780細胞，培養24小時，并在37。C在潤濕的培養箱中用化合物處理16小時。在培養后，用磷酸緩沖鹽水洗滌細胞一次，且每孔加入30jul的低鹽RIPA緩沖液(20mMtris、pH7.0、0.5mMEDTA、1%NonidetP40、0.5%DOC、0.05%SDS、lmMPMSF、1jig/ml抑肽酶和0.5"/ml亮肽素)。將培養板置于水上30分鐘以完成溶胞。通過使用如下所述的三明治ELISA檢測在溶胞產物中的p53蛋白質。用在涂層緩沖液(o.lmNaHC03pH8.2)中濃度為1mg/ml的捕捉抗體pAbl801(Abcamab28-100)涂布高結合性聚苯乙烯EIA/RIA96孔培養板(Costar9018)，每孔50jul。使抗體在4。C粘附過夜。用磷酸緩沖鹽水(PBS)/0.05。/。吐溫20洗滌涂層的培養板，加入300ju1的阻斷緩沖液(PBS,P/o牛血清白蛋白(BSA))，在室溫下培養2小時。在阻斷緩沖液中制備純化的重組HIS標記的p53蛋白質的稀釋液，范圍為3-200ng/ml，并用作標準品。用PBS/0.05。/。吐溫20洗涂培養板兩次，并加入阻斷緩沖液或標準品，80jul/孑L。向所述標準品中，加入20jul的溶胞緩沖液。將樣品加入到其它孔中，20jul溶胞產物/孔。在4。C培養過夜后，以PBS/0.05。/o吐溫20洗滌培養板兩次。將100iu1二代多克隆抗體p53(FL-393)(Tebubio，sc-6243)的等分試樣以在阻斷緩沖液中1iug/ml的濃度加入到各孔中，并4吏在室溫下粘附2小時。用PBS/0.05%吐溫20洗滌培養板三次。以0.04jug/ml加入在PBS/1%的BSA中的檢測抗體抗兔子HRP(sc-2004,Tebubio),并在室溫下培養l小時。用PBS/0.05。/q吐溫20洗滌培養板三次，并加入lOO]ul的底物緩沖液(底物緩沖液是在使用前不久通過加入1片10mg來自Sigma的鄰-苯二胺(OPD)和125ju1的3%H202至25ml的OPD緩沖液35mM的檸檬酸，66mM的Na2HP04,pH5.6而制備的)。在5至10分鐘后，通過每孔加入50ju1的終止緩沖液(lMH2S04)終止顯色反應。使用Biorad微培養板讀數器測量在雙波長490/655nm的吸收度，然后分析結果。對于每個試驗，平行進行對照組(不包含藥物)和空白培養(不包含細胞或藥物)。從所有的對照值和樣本值減去空白試驗值。對于每個樣品，p53的值(吸收度單位)被表示為存在于對照組中p53值的百分比。高于140%的百分數保存被定義為顯著的。本文中，試-瞼化合物的效果表示為提供至少140%的存在于對照組中的p53的值的最低劑量(LAD)(參見表F隱2)。G""擅雍.念.杭將所有的試驗化合物溶于DMSO中，并在培養介質中制備其它稀釋液。在細胞增殖分析中最終DMSO濃度從不超過0.1%(v/v)。對照組包含U87MG細胞和DMSO，但沒有化合物，而空白組包含DMSO，但沒有細胞。將U87MG細胞以3000個細胞/孔/100]u1接種在96-孔細胞培養板中。24小時后，替換培養基并將化合物和/或溶劑加入至200jul的最終容積。在培養4天后，用200ju1的新鮮培養基代替培養基，并使用MTT-基分析評價細胞生長。因此，將25pl的MTT溶液(來自Serva的在磷酸緩沖鹽水中的0.5%MTT,研究等級)力。入到各孔中，并在37。C進一步培養所述細胞2小時。然后，小心地吸出培養基，并通過加入各孔0.1M甘氨酸和100(i1DMSO溶解藍色的MTT-formazan產物。將該培養^反在微培養板振蕩器上再振搖IO分鐘，之后通過Biorad微培養板讀數器在540nm讀取吸光度。在實驗中，各個試驗條件的結果為3個重復孔的平均值。對于初篩目的，以單一固定濃度1(T5M試驗化合物。對于活性化合物，重復試聰r以建立整個濃度-響應曲線。對于每個試驗，平行進行對照組(不包含藥物)和空白培養(不包含細胞或藥物)。從所有的對照值和樣本值減去空白試驗值。對于每個樣品，細胞生長的平均值(以吸光度單位計)表示為對照組的細胞生長的平均值的百分數。當適當時，使用分級數據的概率單位分析計算IC5Q-值(降低細胞生長至對照組的50%所需的藥物的濃度)(Finney,D丄，ProbitAnalyses,第2版，笫10章，GradedResponses,CambridgeUniversityPress,Cambridge1962)。本文中，試驗化合物的效果表示為pIC50(IC50-值的負對數值)(參見表F-2)。在一些試^^中，所述增殖試驗適于且用于384孔培養板(參見表F-2)。表F-2:表F-2列出了根據實施例C.1和C.2試驗的化合物的結果.<table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table>D.組合物實施例膜包衣片.片..安的.制備.將100g式(I)的化合物、570g乳糖和200g淀粉的混合物充分混合，然后用5g十二烷基硫酸鈉和10g聚乙烯-p比咯烷酮在約200ml的水中的溶液潤濕。將濕粉末混合物過篩，干燥并再次過篩。之后，加入100g的微晶纖維素和15g的氫化植物油。將全部物質充分混合并壓制成片，得到10.000片，每片包含10mg式(I)的化合物。將5g的乙基纖維素在150ml的二氯曱烷中的溶液加入到10g曱基纖維素在75ml變性乙醇中的溶液中。然后，加入75ml的二氯甲烷和2.5ml的1,2,3-丙三醇。熔融10g的聚乙二醇并將其溶于75ml的二氯甲烷中。將后者溶液加入到前者中，然后加入2.5g的十八酸鎂、5g的聚乙烯吡咯烷酮和30ml濃縮的有色混懸液，并將全部物質均質化。在包衣裝置中，采用如此得到的混合物包衣所述片芯。權利要求1.式(I)的化合物其N-氧化物形式、加成鹽或立體化學異構體形式，其中m為0、1或2，且當m為0時，則指直接鍵；n為0、1、2或3，且當n為0時，則指直接鍵；p為0或1，且當p為0時，則指直接鍵；t為0或1，且當t為0時，則指直接鍵；id="icf0002"file="A2007800101510002C2.tif"wi="18"he="3"top="122"left="33"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="yes"/>為-CR8＝C＜且虛線為鍵、-C(＝O)-CH＜、-C(＝O)-N＜、-CHR8-CH＜或-CHR8-N＜；其中R8各自獨立地為氫或C1-6烷基；R1和R2各自獨立地選自氫，鹵素，C1-6烷基，C1-6烷氧基，芳基C1-6烷氧基，雜芳基C1-6烷氧基，苯硫基，羥基C1-6烷基羰基，用選自氨基、芳基或雜芳基的取代基取代的C1-6烷基，或用選自氨基、芳基或雜芳基的取代基取代的C3-7環烷基；R3和R4各自獨立地選自氫，鹵素，C1-6烷基，多鹵代C1-6烷基，氰基，氰基C1-6烷基，羥基，氨基或C1-6烷氧基；或R4和R5可以任選地形成選自亞甲基二氧基或亞乙基二氧基的二價基團；R5為氫、C1-6烷氧基羰基或C1-6烷基；R6和R7各自獨立地選自氫、C1-6烷氧基C1-6烷基或C1-6烷基；或R6和R7可以一起任選地形成選自下述的二價基團-(CH2)2-O-(CH2)2-(b-1)，-(CH2)2-NR9-(CH2)2-(b-2)，其中R9為氫、C1-6烷氧基C1-6烷基或C1-6烷基；Z為選自下述的基團其中R10和R11各自獨立地選自氫、鹵素、羥基、氨基、C1-6烷基、硝基、多鹵代C1-6烷基、氰基、氰基C1-6烷基、四唑并C1-6烷基、芳基、雜芳基、芳基C1-6烷基、雜芳基C1-6烷基，芳基(羥基)C1-6烷基、雜芳基(羥基)C1-6烷基、芳基羰基、雜芳基羰基、C1-6烷基羰基、芳基C1-6烷基羰基、雜芳基C1-6烷基羰基、C1-6烷氧基、C3-7環烷基羰基、C3-7環烷基(羥基)C1-6烷基、芳基C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷基羰基氧基C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基C1-6烷氧基C1-6烷基、羥基C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基C2-6烯基、C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基、C1-6烷基羰基氧基、氨基羰基、羥基C1-6烷基、氨基C1-6烷基、羥基羰基、羥基羰基C1-6烷基和-(CH2)v-(C(＝O)r)-(CHR17)u-NR13R14；其中v為0、1、2、3、4、5或6，且當v為0時，則指直接鍵；r為0或1，且當r為0時，則指直接鍵；u為0、1、2、3、4、5或6，且當u為0時，則指直接鍵；R17為氫或C1-6烷基；R12為氫，C1-6烷基，C3-7環烷基，被選自羥基、氨基、C1-6烷氧基和芳基的取代基取代的C1-6烷基，或被選自羥基、氨基、芳基和C1-6烷氧基的取代基取代的C3-7環烷基；R13和R14各自獨立地選自氫，C1-12烷基，C1-6烷基羰基，C1-6烷基磺酰基，芳基C1-6烷基羰基，C3-7環烷基，C3-7環烷基羰基，-(CH2)k-NR15R16，被選自羥基、羥基羰基、氰基、C1-6烷氧基羰基、C1-6烷氧基、芳基或雜芳基的取代基取代的C1-12烷基，或被選自羥基、C1-6烷氧基、芳基、氨基、芳基C1-6烷基、雜芳基或雜芳基C1-6烷基的取代基取代的C3-7環烷基；或R13和R14與其所連接的氮一起可以任選地形成嗎啉基，哌啶基，吡咯烷基，哌嗪基，或被選自C1-6烷基、芳基C1-6烷基、芳基C1-6烷氧基羰基、雜芳基C1-6烷基、C3-7環烷基和C3-7環烷基C1-6烷基的取代基取代的哌嗪基；其中k為0、1、2、3、4、5或6，且當k為0時，則指直接鍵；R15和R16各自獨立地選自氫，C1-6烷基，芳基C1-6烷氧基羰基，C3-7環烷基，被選自羥基、C1-6烷氧基、芳基和雜芳基的取代基取代的C1-12烷基，被選自羥基、C1-6烷氧基、芳基、芳基C1-6烷基、雜芳基和雜芳基C1-6烷基的取代基取代的C3-7環烷基；或者R15和R16與其所連接的氮一起可以任選地形成嗎啉基、哌嗪基或被C1-6烷氧基羰基取代的哌嗪基；芳基為苯基或萘基；每個苯基或萘基可以任選地被一個、兩個或三個取代基取代，所述取代基各自獨立地選自鹵素、羥基、C1-6烷基、氨基、多鹵代C1-6烷基和C1-6烷氧基；和每個苯基或萘基可以任選地被選自亞甲基二氧基和亞乙基二氧基的二價基團取代；雜芳基為吡啶基、吲哚基、喹啉基、咪唑基、呋喃基、噻吩基、噁二唑基、四唑基、苯并呋喃基或四氫呋喃基；每個吡啶基、吲哚基、喹啉基、咪唑基、呋喃基、噻吩基、噁二唑基、四唑基、苯并呋喃基或四氫呋喃基可以任選地被一個、兩個或三個取代基取代，所述取代基各自獨立地選自鹵素、羥基、C1-6烷基、氨基、多鹵代C1-6烷基、芳基、芳基C1-6烷基或C1-6烷氧基；和每個吡啶基、吲哚基、喹啉基、咪唑基、呋喃基、噻吩基、苯并呋喃基或四氫呋喃基可以任選地被選自亞甲基二氧基或亞乙基二氧基的二價基團取代。2.根據權利要求1的化合物，其中m為0;n為0;p為l;t為0;R1和112各自獨立地為氬；R3和R4各自獨立地為氪；W為氫；RS和R7各自獨立地為氫或C^烷基；Z為選自(a-l)、(a-2)或(a-4)的基團；或R"和R11各自獨立地選自氳、羥基、C^烷氧基羰基或羥基d-6烷基。3.根據權利要求1或2的化合物，其中m為0;n為0;p為l;t為0;R1和112各自獨立地為氫；113和尺4各自獨立地為氫；W為氫；116和7各自獨立地為氫；Z為選自(a-2)或(a-4)的基團；或111()和R11各自獨立地選自氫、羥基或羥基Cw烷基。4.根據權利要求1、2或3的化合物，其中所述化合物為化合物No.1、化合物No.4或化合物No.5，H、一NoCo.No.1Co.No.4^x^^^^^^^^Co.Sfo.55.用作藥物的根據權利要求1、2、3或4的化合物。6.藥物組合物，包含可藥用載體和作為活性成分的治療有效量的如權利要求1至4中所述的化合物。7.制備如在權利要求6中所述的藥物組合物的方法，其中所述可藥用載體和如權利要求1至4中所述的化合物緊密地混合。8.根據權利要求1、2、3或4的化合物在制備用于治療由p53-MDM2相互作用介導的病癥的藥物中的用途。9.抗癌劑和根據權利要求l、2、3或4的化合物的組合。10.—種用于制備如在權利要求1中所述的化合物的方法，其特征在于a)使式(II)的中間體與式(III)的中間體反應，其中W為適當的離去基團，比如例如鹵素，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>b)在處于適當的溶劑中的氫化鋁鋰的存在下，將式(IV)的中間體轉化成式(I)的化合物，其中p為l,本文稱為式(I-a)的化合物，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>C)在適當的溶劑中，在適當的試劑的存在下，使適當的式(VI)的醛與式(V)的中間體反應，或者d)使式(n)的中間體與適當的式(vn)的醛反應，形成其中t為i的式(I)的化合物，本文中稱為式(I-b)的化合物，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>全文摘要本發明提供式(I)的化合物、其作為p53-MDM2相互作用的抑制劑的用途以及包含所述式(I)的化合物的藥物組合物。其中n、m、p、t、R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、Q、Y和Z具有定義的含義。文檔編號A61K31/4439GK101405285SQ200780010151公開日2009年4月8日申請日期2007年3月19日優先權日2006年3月22日發明者A·P·龐塞萊特,B·吉思倫,B·肖恩特杰斯,C·G·沃穆斯,C·邁耶,J·F·A·拉拉姆佩,J·-M·康特雷拉斯,L·范希夫特,M·焦伯特申請人:詹森藥業有限公司