作為類固醇硫酸酯酶抑制劑的甾族化合物的制作方法

專利名稱：作為類固醇硫酸酯酶抑制劑的甾族化合物的制作方法
專利說明作為類固醇硫酸酯酶抑制劑的甾族化合物 發明領域 本發明涉及一種化合物。具體地，本發明提供能夠抑制類固醇硫酸酯酶的化合物。

背景技術：
乳腺癌是一種危害性極大的疾病，一直為大多數西方國家中女性死亡的主要原因。據估計，每年全球約有一百萬名女性患上此病。1 英國是全世界乳腺癌死亡率最高的國家之一，每年有超過35,000名女性被確診，幾乎占所有癌癥病例的五分之一。據估計，在英國活到85歲年齡的女性中有十分之一會在其生命過程中發展乳腺癌。雖然現代治療方法以及該病的早期檢測已經大大提高了存活率，但乳腺癌仍然是35～54歲女性死亡的主要原因。2 所有女性均有患上乳腺癌的風險，雖然許多危險因子已經被確定。其中絕大多數與女性的激素和生育史以及她們的疾病家族背景有關。具有較高風險的女性通常是具有明顯家族病史、月經初潮開始早、絕經晚或在30歲以后首次足月妊娠的那些女性。2 在乳腺癌的最早階段，手術似乎是治療選擇。在絕大多數情況下，采用乳腺保留手術技術(如乳腺腫塊局部切除)而非乳房切除術。為了防止疾病復發，常常采取放療，尤其在采用了乳房保留技術的情況下。3放療還可以用于將大的腫瘤減小至可手術的大小，以便進行保留手術。4 對于晚期乳腺癌，當腫瘤已經擴散或者復發時，治療的目的不再是治愈，而是達到姑息性控制。當腫瘤轉移灶已達到諸如骨骼、皮膚、淋巴、結節或腦時，情況就是如此。治療根據患者的激素狀態(不管是絕經前還是絕經后的女性)和腫瘤的類型而改變。某些腫瘤事實上已經被證明其生長與發展依賴于雌激素，形成所謂的激素依賴型乳腺癌(HDBC，參見I-1)。當非HDBC采用化療來治療時，其目的是使用細胞毒劑的組合殺死分化腫瘤細胞，5預計HDBC對內分泌治療會有響應。
激素依賴型腫瘤的概念出現于20世紀60年代早期，當時首次引入雌激素作用模型。6為了使雌激素調節人體細胞的生長和功能，必須存在一種叫做人雌激素受體(hER)的特異性蛋白，7該蛋白位于細胞核內，與雌激素相互作用，導致結合絡合物(complex)的形成。該結合絡合物通過激活從特異性基因產生m-RNA而用作轉錄因子，所述特異性基因的一種或多種可能是腫瘤細胞有效生長所必需的。
具有可測定量受體蛋白水平的患者被分類為雌激素受體陽性(ER+)，與其相對的是雌激素受體陰性(ER-)。大約50％的絕經前女性和75％的絕經后女性屬于ER+組8，其中，乳腺癌的發展可能與雌激素的存在直接相關。已經證明內分泌治療(其中藥物的使用導致去除雌激素對細胞的刺激)是治療HDBC的有效方法。最初，開發了響應不同策略的兩類藥物抗雌激素藥物和芳化酶抑制劑。
作為雌激素受體拮抗劑的抗雌激素藥物已經是考慮用于HDBC的首選治療之一。它們的作用依賴于它們競爭性地結合特異性受體蛋白hER的能力，因此，防止內源性雌激素進入它們的特異性結合部位。所以，天然激素不能維持腫瘤生長。
在通常用于乳腺癌治療的抗雌激素藥物中，它莫昔芬(見下文)由于具有十分低的分子毒性概況而得到最廣泛的使用。雖然它莫昔芬具有非甾體骨架，但它具有激動劑-拮抗劑的混合活性，這制約了它的治療潛力。9另外，已報告患者在長期使用它莫昔芬治療之后出現某些形式的耐藥性。10 已經發現了新型純抗雌激素藥物(如以下的ICI 164384)與他莫昔芬相比效力有損失，這表明需要設計更有效的目標。11
它莫昔芬 ICI 164384 近年來出現了一類新型抗雌激素藥物，它結合了雌激素對靶組織(如骨骼或肝)的激動作用與對生殖組織(如乳腺或子宮)的拮抗和/或最低激動作用。12這些設計為選擇性雌激素受體調節劑(SERMs)的化合物，不僅在降低患者的乳腺癌風險上具有潛在效果，而且它們還顯示出提高骨礦物質密度并預防絕經后女性的骨質疏松。雷洛昔芬是第一種在臨床上使用的該類化合物。13許多SERMs目前處于臨床試驗階段，這些分子某一天可能取代它莫昔芬而成為治療患有HDBC的女性的一線藥物。
抑制類固醇生物合成途徑的一種或幾種酶的治療劑的使用，代表了另一控制雌激素依賴性腫瘤發展的重要策略。14芳化酶將雄激素C19類固醇轉化為雌激素C18類固醇，已經成為降低雌激素水平的主要靶標。這種含有細胞色素P450血蛋白的酶絡合物催化雄激素A環的芳構化，隨后脫除C19甲基，產生雌激素。
氨魯米特(見下文)是第一種用于治療乳腺癌的芳化酶抑制劑。然而，它顯示了許多不合意的副作用，因其廣譜抑制作用施加于其它P450-依賴型酶，改善初始結構的嘗試已使許多非類固醇化合物進入臨床試驗。15所開發的最新一代化合物(如來曲唑)結合了對該酶的高效和高選擇性，并且也具有良好耐受性。

AG來曲唑 不同類型的芳化酶抑制劑的結構。第I代氨魯米特，AG；第III代來曲唑。
傳統上，芳化酶抑制劑保留為的晚期HDBC患者的二線治療藥物，所述患者的疾病不再受它莫昔芬控制。然而，由于一些最新的芳化酶抑制劑具有極好的毒性特性，所以最近進行了一些臨床試驗來評價其作為HDBC的一線治療藥物的適宜性。
過去的十年中，生化和臨床上的有力證據表明，單獨抑制芳化酶不能有效減少雌激素對HDBC的刺激，理由是其它途徑涉及雌激素生物合成。現在認為硫酸酯酶途徑是乳腺腫瘤雌激素合成的主要途徑，因為發現硫酸酯酶活性所提供的雌酮比芳化酶活性的高10倍。16 在硫酸酯酶途徑中，雌激素經由兩種酶(方案如下)將雌酮硫酸酯水解為雌酮的雌酮硫酸酯酶(STS)和將雌酮還原為雌二醇的17β-羥基類固醇脫氫酶(17β-HSD)，由高度可利用的前體雌酮硫酸酯合成而來。這兩種酶代表了雌激素缺失策略的最新目標。

正常和腫瘤乳腺細胞中的雌激素來源。AR，芳化酶；ST類固醇磺基轉移酶；STS，類固醇硫酸酯酶；17β-HSD，17β-羥基類固醇脫氫酶；3β-IS，3β-羥基類固醇脫氫酶Δ5，Δ4-異構酶；ER，雌激素受體。
已經鑒定了幾種有效的雌酮硫酸酯酶的抑制劑。它們都具有取代芳環的共同結構，所述共同結構模擬了酶底物雌酮硫酸酯的酚式A環。在開發類固醇抑制劑時，在C3位置引入了各種化學基團，其中發現3-O-氨基磺酸酯對于雌酮分子是最有效的。所得化合物雌酮-3-O-氨基磺酸酯(下文)使芳基-O-氨基磺酸酯結構被鑒定為有效抑制STS所需的活性藥效基團。已經表明，EMATE以時間和濃度依賴方式抑制類固醇硫酸酯活性17，并具有口服體內活性。18然而，已經披露它具有高度雌激素活性，這提高了設計缺乏對hER激動劑活性的STS抑制劑的需求。
為了避免與活性甾核有關的問題，已經合成了非類固醇型抑制劑。其中活性藥效基團被保留的香豆素氨基磺酸酯如4-甲基香豆素-7-O-氨基磺酸酯(見下文，COUMATE)就屬于第一批被鑒定的這類抑制劑。19雖然COUMATE的效力低于EMATE，但它的優點是非雌激素性。20已經開發了某些基于三環香豆素的氨基磺酸酯，它們被證明比COUMATE更有效，同時保持其非雌激素特性。21667COUMATE的體外效力比EMATE高大約3倍，現正處于臨床試驗的臨床前開發階段。22
類固醇硫酸酯酶抑制劑EMATE、COUMATE和667COUMATE的結構。
PCT/GB92/01587教導了用于治療雌酮依賴型腫瘤(特別是乳腺癌)的新型類固醇硫酸酯酶抑制劑和包含它們的藥物組合物。這些類固醇硫酸酯酶抑制劑是氨基磺酸酯，例如N，N-二甲基雌酮-3-氨基磺酸酯，優選雌酮-3-氨基磺酸酯(EMATE)。已知EMATE是有效的E1-STS抑制劑，因為在0.1mM下，它顯示出對完整MCF-7細胞中E1-STS活性的抑制超過99％。EMATE還以時間和濃度依賴方式抑制E1-STS酶，這表明它用作有效的位點定向的滅活劑。雖然EMATE最初設計用于抑制E1-STS，但它還抑制脫氫表雄酮硫酸酯酶(DHA-STS)，人們認為該酶調節雌激素類固醇雄烯二醇的生物合成的關鍵作用。還有，現有證據表明，雄烯二醇可能作為乳腺腫瘤生長的促進劑可能具有更大重要性。EMATE在體內也具有活性，當它通過口服或皮下給藥時，幾乎完全抑制大鼠肝E1-STS(99％)和DHA-STS(99％)。另外，已經表明，EMATE對大鼠具有記憶增強作用。對小鼠的研究提示在DHA-STS活性與部分免疫應答的一部分的調節之間具有相關性。據認為，這種情況也可能在人類中出現。EMATE中的氨基磺酸酯結構部分的橋接O原子對于抑制活性具有重要意義。因此，當3-O-原子被其它雜原子置換時，如在雌酮-3-N-氨基磺酸酯和雌酮-3-S-氨基磺酸酯的情況下，這些類似物是較弱的非時間依賴型鈍化劑。
雖然EMATE可能獲得了最佳的E1-STS抑制效力，但有可能在硫酸酯酶的抑制過程中可能釋放雌酮，EMATE及其雌二醇同源物可能具有雌激素活性。
17β-HSD(催化雌激素和雄激素生物合成中的最后一步)也成為雌激素缺失策略的靶標。該酶負責類固醇類的氧化形式(低活性)與還原形式(高活性)的相互轉化。它的活性直接支持雌激素依賴型腫瘤的生長和發展，因為它優先將雌酮還原為雌二醇25，并且在一個次要的方面，將雄激素DHEA轉化為雄烯二醇(Adiol)，而雄烯二醇最近已經被證明具有雌激素特性，能夠與雌激素受體結合。26 17β-HSD屬于同工酶家族，迄今已經鑒定和克隆了11種。27每一類具有選擇性底物親合力和定向活性，這意味著必須要達到藥物作用的選擇性。1型17β-HSD是催化雌酮和雌二醇相互轉化的同種型。
不同于STS抑制劑，僅報道了少數幾種17β-HSD抑制劑。絕大多數1型17β-HSD的類固醇抑制劑共有D環改性結構。含有在16α位置上攜帶良好的離去基團的側鏈的雌二醇衍生物已經表明是一類有效的抑制劑。具體地，發現其中側鏈表現出對酶活性部位中的親核性氨基酸殘基的高度反應性的16α-(溴烷基)-雌二醇28是有前景的不可逆性抑制劑。具體地，在16位置上含有短溴烷基部分的類似物16α-(溴丙基)-雌二醇顯示出最高活性，依次是16α-(溴丙基)-雌二醇和16α-(溴丁基)-雌二醇，即最有效的系列(3和4)。然而，它們被證明是雌激素受體的純激動劑。

3R＝(CH2)3Br 芹黃素 4R＝(CH2)4Br 1型17β-HSD抑制劑16α-(溴丙基)-雌二醇，3； 16α-(溴丙基)-雌二醇，4和黃酮衍生物，芹黃素。
在消除有效抑制劑的固有雌激素活性(oestrogenicity)和可能同時將抗雌激素性能設置到分子中的嘗試中，合成了幾種具有抗雌激素藥物ICI164384的C7α烷基酰胺鏈的16α-(廣義上)-雌二醇衍生物。29然而，獲得了相當差的1型17β-HSD抑制，并且其中雌激素和抗雌激素性能分別沒有完全消除或分別或引入。
同樣，已經設計了1型17β-HSD的非類固醇抑制劑。類黃酮在結構上類似于雌激素，能夠與雌激素受體結合，具有雌激素或抗雌激素活性。30它們對芳化酶活性的作用在許多文獻中被證實，在最近的研究中，發現它們可減少由1型17β-HSD催化的雌酮向雌二醇的轉化。31從SAR研究中發現黃酮衍生物，例如芹黃素(圖6)，為對1型17β-HSD具有一定的抑制活性的有前景化合物，并且其在該抑制濃度下沒有雌激素性質。32 Ahmed等(Biochem Biophys Res Commun1999年1月，27；254(3)811-5)報告了STS的類固醇和非類固醇抑制劑的結構-活性關系研究。
類固醇脫氫酶(DH)(如雌二醇17β-羥基類固醇脫氫酶(E2HSD))具有調節與雌激素受體相互作用的配體的利用率的重要作用。I型E2HSD將雌酮(E1)還原為生物活性的雌激素，即雌二醇(E2)，而II型E2HSD通過催化E2氧化為E1而使E2失活。因此，鑒定具有DH抑制活性的化合物，尤其是I型E2HSD的抑制劑在抑制E2形成中具有治療價值。
WO 03/033518公開了下式的化合物
其中G是H或取代基。這些化合物尤其具有類固醇硫酸酯酶抑制劑活性。
發明概述 本發明提供能夠起有效類固醇硫酸酯酶抑制劑作用的新化合物。本發明鑒定，本申請的化合物是有效的類固醇硫酸酯酶抑制劑。


圖1示出了涉及從雌酮硫酸酯和雌二醇原位合成雌酮的一些酶。“STS”表示雌酮硫酸酯酶，“I型E2DH”表示I型雌二醇17β-羥基類固醇脫氫酶或1、3、5和/或7型雌二醇17β-羥基類固醇脫氫酶，“II型E2DH”表示II型雌二醇17β-羥基類固醇脫氫酶或2和/或8型雌二醇17β-羥基類固醇脫氫酶。
可以看出，涉及雌激素的外周合成(peripheral synthesis)的兩種酶是雌二醇17β-羥基類固醇脫氫酶和雌酮硫酸酯酶。
雌激素的原位合成被認為對腫瘤中的高雌激素水平起著重要作用，因此雌激素生物合成的特異性抑制劑具有治療內分泌依賴型腫瘤的潛在價值。
另外，即使經由硫酸酯酶途徑在惡性乳腺和子宮內膜組織中形成雌激素是造成高雌激素濃度的主要原因，但仍然存在有助于體內合成雌激素的其它酶促途徑。
因此，迫切需要開發新的治療劑用于治療這些癌癥。
本發明因此尋求克服一個或多個與治療乳腺癌和子宮內膜癌的現有技術方法有關的問題。
因此一方面，本發明提供化合物在制備藥物中的用途，該藥物能夠影響(例如實質上抑制)雌酮硫酸酯酶途徑(該途徑將雌酮和雌二醇相互轉化)和/或影響(例如實質上抑制)類固醇脫氫酶途徑(該途徑將雌酮和雌二醇相互轉化)。
本發明的該方面是有利的，因為通過給與一種化合物，可能阻斷由雌酮或E1S合成雌二醇。因此，本發明提供了具有可觀的治療優點，尤其是可用于治療乳腺癌和子宮內膜癌的化合物。
本發明化合物可以包含其它取代基。這些其它取代基例如可以進一步提高本發明化合物的活性和/或增加穩定性(體外和/或體內)。
發明詳述 根據本發明的一個方面提供了式I的化合物

式I 其中G是氟碳基(fluorocarbyl group)。
根據本發明的一個方面提供了一種藥物組合物，其包含與藥學上可接受的載體、稀釋劑、賦型劑或佐劑混合的式I化合物

式I 其中G是氟碳基。
根據本發明的一個方面提供了用于藥物的式I化合物

式I 其中G是氟碳基。
根據本發明的一個方面提供了式I化合物在制備用于治療與類固醇硫酸酯酶(STS)相關的病癥或疾病的藥物中的用途

式I 其中G是氟碳基。
根據本發明的一個方面提供了式I化合物在制備用于治療與有害的STS水平相關的病癥或疾病的藥物中的用途

式I 其中G是氟碳基。
根據本發明的一個方面提供了式I化合物在制備用于抑制類固醇硫酸酯酶(STS)活性的藥物中的用途

式I 其中G是氟碳基。
本發明的一個方面提供對有此需要的主體抑制類固醇硫酸酯酶(STS)活性的方法，該方法包括給與式I的化合物

式I 其中G是氟碳基。
本發明的一個方面提供式I化合物在制備用于調節和/或停滯和/或抑制細胞周期的藥物和/或用于調節和/或誘導細胞凋亡的藥物中的用途

式I 其中G是氟碳基。
為了方便參考，下面在適當的章節標題下論述本發明的這些和其它方面。然而，每一章節的教導并不必須局限于每一特定章節。
優選的方面 環體系 在本發明的一些方面中，該化合物優選具有式II結構

式II 其中G是氟碳基，R1是-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中的任何一個。
在本發明的一些方面中，該化合物優選具有式III結構

式III 其中G是氟碳基，R1是-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中的任何一個。
在本發明的一些方面中，該化合物優選地具有式IV結構

式IV 其中G是氟碳基，R1是-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中的任何一個。
在本發明的一些方面中，該化合物優選具有式V結構

式V 其中G是氟碳基，R1是-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中的任何一個。
在本發明的一些方面中，該化合物優選具有式VI結構

式VI 其中G是氟碳基，R1是-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中的任何一個。
在本發明的一些方面中，該化合物優選具有式VII結構

式VII 其中G是氟碳基，R1是-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中的任何一個。
在本發明的一些方面中，該化合物優選具有式VIII結構

式VIII 其中G是氟碳基，R1是-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中的任何一個。
在本發明的一些方面中，該化合物優選具有式IX結構

式IX 其中G是氟碳基，R1是-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中的任何一個。
在本發明的一些方面中，該化合物優選具有式X結構

式X 其中G是氟碳基，R1是-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中的任何一個。
在本發明的一些方面中，該化合物優選具有式XI結構

式XI 其中G是氟碳基，R1是-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中的任何一個。
在本發明的一些方面中，該化合物優選具有式XII結構

式XII 其中G是氟碳基，R1是-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中的任何一個。
在本發明的一些方面中，該化合物優選具有式XIII結構

式XIII 其中G是氟碳基，R1是-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中的任何一個。
十分高度優選下式的化合物或其藥學上可接受的鹽或酯形式
如本領域中所熟知的，經典的類固醇環結構具有以下通式
在上式中，已按常規方式標記各環。
生物等排體的實例為當環A、B、C和D中的任何一個或多個為雜環，且/或當環A、B、C和D中的任何一個或多個被取代，且/或當環A、B、C和D中的任何一個或多個被改性；但其中生物等排體具有類固醇特性。
在這方面，本發明的環體系類似于類固醇環結構，可以是類固醇環結構的生物等排體。
本發明多環結構的結構可以表示為
其中環A’、B’和C’各自獨立地表示雜環或非雜環，且其中每個環可以獨立地為取代或未取代的、飽和或不飽和的。
舉例而言，環A’、B’、C’和D’中的任何一個或多個可以獨立地被適合的基團取代，所述基團例如為烷基、芳基、羥基、鹵素基團、烴基(hydrocarbyl)、含氧烴基(oxyhydrocarbyl group)等。
A’、B’和C’中至少一個可以是雜環基(雜環)或非雜環基。
A’、B’、C’和D’中至少一個可以是飽和環結構或不飽和環結構(例如芳基)。
優選的是，A’、B’、C’和D’中至少一個是芳環。
優選地，該化合物(包括所有取代基在內)將含有不超過約50個碳原子，更通常不超過約30～40個碳原子。
D’的實例是五元環或六元環。
可作為本發明化合物的基礎的優選甾核環A’-D’包括下列化合物的環A～D 雌酮類和取代雌酮類，即 雌酮 16β-OH-雌酮 4-OH-雌酮 17-脫氧雌酮 6α-OH-雌酮2-OH-雌酮 7α-OH-雌酮2-MeO-雌酮 16α-OH-雌酮 雌酮 雌二醇類和取代雌二醇類，即 4-OH-17β-雌二醇 16β-OH-17β-雌二醇 6α-OH-17β-雌二醇 17α-雌二醇 7α-OH-17β-雌二醇 17β-雌二醇 4-OH-17α-雌二醇 17α-乙炔基-17β-雌二醇 6α-OH-17α-雌二醇 17β-乙炔基-17α-雌二醇 7α-OH-17α-雌二醇 17-脫氧雌二醇 16α-OH-17α-雌二醇2-OH-17α-雌二醇 16α-OH-17β-雌二醇2-OH-17β-雌二醇 16β-OH-17α-雌二醇2-MeO-17α-雌二醇2-MeO-17β-雌二醇 雌三醇類和取代雌三醇類，即 雌三醇 17-脫氧雌三醇 4-OH-雌三醇 2-OH-雌三醇 6α-OH-雌三醇 2-MeO-雌三醇 7α-OH-雌三醇 脫氫表雄酮類和取代脫氫表雄酮類，即 脫氫表雄酮 16α-OH-脫氫表雄酮 6α-OH-脫氫表雄酮 16β-OH-脫氫表雄酮 7α-OH-脫氫表雄酮 5-雄烯二醇 基團G 基團G是氟碳基。本文所使用的術語“氟碳基”是指至少含有碳和氟原子的基團。
在一個實施方案中，基團G是全氟烷基。更優選地，基團G是C1-10全氟烷基。
本文所使用的術語“全氟烷基”是指其中所有氫原子均被氟取代的烷基。全氟烷基的實例是三氟甲基、五氟乙基、七氟丙基等。
在另一優選實施方案中，基團G至少包含碳、氟和一個其它元素。更優選地，基團G至少包含碳、氟和氫。更優選的是，基團G僅僅包含碳、氟和氫。
優選的是，基團G包含1～10個碳原子，更優選包含1～6個碳原子，更優選包含1～3個碳原子。
優選的是，基團G具有式-A-B結構，其中A是1～9個碳原子的直鏈、支鏈或環狀亞烷基，B是1～10個碳原子的直鏈、支鏈或環狀全氟烷基。優選的是，A是式-(CH2)n-的基團，其中n是1～9的整數。優選的是，A具有兩個碳原子。優選地，B是式-(CF2)mCF3的基團，其中m是0或1～9的整數。優選地，B具有一個碳原子。
優選地，基團B具有式-(CH2)n(CF2)mCF3結構，其中n是1～9的整數，m是0或1～9的整數。優選地，n+m是1～10。n優選是2。m優選是0。
最優選的是，基團G是3，3，3-三氟丙基(-CH2CH2CF3)。
R1基團 本發明化合物的基團R1是-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中的任何一個。
在一個優選方面中，R1優選是氨基磺酸酯基。
R1或所述氨基磺酸酯基可以是下式的氨基磺酸酯基
其中R4和R5獨立地選自H、烷基、環烷基、烯基和芳基或其組合，或者一起表示亞烷基，其中所述或每個烷基或環烷基或烯基或任選含有一個或多個雜原子或基團。
在另一優選實施方案中，R1是-OH。
在本發明的一些方面中，優選地，R4和R5中至少一個是H。
在本發明的一些方面中，優選地，R4和R5均為H。
取代基 本發明的化合物可以具有除了這里所示環體系的那些取代基以外的取代基。此外，這里的環體系以通式給出，并且應該照此來解釋。給定環成員上沒有任何具體顯示的取代基，則表明該環成員可以被任何部分取代，其中H僅僅是一個例子。該環體系可以含有一個或多個不飽和度，例如在某些方面，該環體系的一個或多個環是芳族環。該環體系可以是碳環或者可以含有一個或多個雜原子。
本發明化合物，尤其本發明的環體系化合物可以含有除本文所示的那些取代基以外的取代基。舉例而言，這些其它取代基可以是下列之中的一個或多個一個或多個氨基磺酸酯基，一個或多個膦酸酯基，一個或多個硫代膦酸酯基，一個或多個磺酸酯基，一個或多個磺酰胺基，一個或多個鹵素基團，一個或多個O基，一個或多個羥基，一個或多個氨基，一個或多個含硫的基團，一個或多個烴基(例如含氧烴基)。
通常，本發明化合物的環體系A’B’C’D’可含有各種非干擾(non-interfering)取代基。尤其環體系A’B’C’D’可含有一個或多個羥基、烷基(尤其是低級(C1-C6)烷基，例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基和其它戊基異構體以及正己基和其它己基異構體)、烷氧基(尤其是低級(C1-C6)烷氧基，例如甲氧基、乙氧基、丙氧基等)、炔基(例如乙炔基)或鹵素(例如氟取代基)。
對于一些本發明化合物，優選地，該環體系被烴基硫烷基(hydrocarbylsulphanyl)取代。更優選地，環系統的A’環被烴基硫烷基取代。術語“烴基硫烷基”是指至少包含烴基(如本文所定義的)和硫的基團，優選-S-烴基，更優選-S-烴。該硫基可以任選被氧化。
對于一些本發明化合物，非常優選的是，至少該環體系的A’環的2位被烴基硫烷基取代。
優選地，該烴基硫烷基是-S-C1-10烷基，更優選-S-C1-5烷基，更優選-S-C1-3烷基，更優選-S-CH2CH2CH3、-S-CH2CH3或-SCH3。
對于本一些發明化合物，非常優選的是，該環體系的A’環被烷氧基取代。
對于一些本發明化合物，非常優選的是，至少該環體系的A’環的2位被烷氧基取代。
所述烷氧基優選是甲氧基。
對于一些本發明化合物，非常優選的是，至少該環體系的A’環被烴基取代。
對于一些本發明化合物，非常優選地，至少該環體系的A’環的2位被烷基取代。
所述烷基優選是乙基。
對于一些本發明化合物，非常優選的是，該化合物包含至少兩個或更多個氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基。
對于一些本發明化合物，非常優選的是，該化合物包含至少兩個氨基磺酸酯基。
對于一些本發明化合物，非常優選的是，該化合物包含至少兩個氨基磺酸酯基，其中所述氨基磺酸酯基不是在同一環上。
對于一些本發明化合物，非常優選的是，該環體系的A’環包含至少一個氨基磺酸酯基，且其中該環體系的D’環包含至少一個氨基磺酸酯基。
在本發明的一些方面中，A’環優選含有烷氧基取代基和烷基取代基中的一個或多個。因此根據本發明的一個方面，提供了式XIII的化合物

式XIII 其中R2和R3獨立地選自H和烴基，R2和R3中至少一個是烴基。
在本發明的優選方面，提供選自式XIV～XIX的化合物的化合物

式XIV

式XV

式XVI

式XVII

式XVIII

式XIX 其中R2和R3獨立地選自H和烴基，其中R2和R3中的至少一個是烴基。
優選地，R2和R3中的至少一個是烷基。優選地，R2和R3中的至少一個是C1-C10烷基，優選C1-C6烷基，優選C1-C3烷基。優選地，R2和R3中的至少一個是-CH3或-CH2CH3。
在一個方面中，優選地，R2是烴基，且R3是H。
在另一個優選方面中，R2和R3中的至少一個是烷氧基。優選R2和R3中的至少一個是甲氧基。
高度優選的本發明化合物可以選自以下化合物
其中 R＝(CH2)2CF3且R2＝H R2＝OMe R2＝-S-Me 其它方面 根據本發明的一個方面，提供了用于藥物的本發明化合物。
根據本發明的一個方面，提供了藥物組合物，其包含任選與藥學上可接受的載體、稀釋劑、賦型劑或佐劑混合的本發明化合物。
根據本發明的一個方面，提供了本發明化合物在制備藥物中的用途，所述藥物用于治療與STS相關的病癥(condition)或疾病。
根據本發明的一個方面，提供了本發明化合物在制備藥物中的用途，所述藥物用于治療與有害的STS水平相關的病癥或疾病。
對于一些應用，優選地，所述化合物沒有或具有最小的雌激素效應。
對于一些應用，優選地，所述化合物具有雌激素效應。
對于一些應用，優選地，所述化合物具有可逆作用。
對于一些應用，優選地，所述化合物具有不可逆作用。
在一個實施方案中，本發明化合物用于治療乳腺癌。
本發明化合物可以是鹽的形式。
本發明還涵蓋了用于制備本發明化合物的新穎中間體。例如，本發明涵蓋了用于化合物的新穎醇前體。又例如，本發明涵蓋了用于化合物的雙保護前體。本文提供這些前體中的每一種的實例。本發明還包括了用這些前體的每一種或兩者合成本發明化合物的方法。
我們還已經鑒定，在本發明的一些方面，本發明化合物還可以抑制類固醇脫氫酶(HSD)的活性。
所謂類固醇脫氫酶或HSD是指17β羥基類固醇脫氫酶。一方面中，17β羥基類固醇脫氫酶是EC1.1.1.62。
HSD優選是1、3、5和/或7型。HSD優選將雌酮(酮)轉化為雌二醇(羥基)。
HSD優選是2型和/或8型。HSD優選將雌二醇(羥基)轉化為雌酮(酮)。
因此，在其它方面中，本發明提供 ·本發明化合物在制備藥物中的用途，所述藥物用于治療與類固醇脫氫酶相關的病癥或疾病。
·本發明化合物在制備藥物中的用途，所述藥物用于治療與有害的類固醇脫氫酶水平有關的病癥或疾病。
·本發明的化合物在制備用于抑制類固醇脫氫酶活性的藥物中的用途。
·本發明的化合物在制備用于抑制類固醇脫氫酶活性的藥物中的用途。
一種方法，其包括(a)用一種或多種本發明候選化合物進行類固醇脫氫酶試驗；(b)測定所述一種或多種候選化合物是否能夠調節類固醇脫氫酶活性；以及(c)選擇能夠調節類固醇脫氫酶活性的一種或多種所述候選化合物。
一種方法，其包括(a)用一種或多種本發明候選化合物進行類固醇脫氫酶試驗；(b)測定所述一種或多種候選化合物是否能夠抑制類固醇脫氫酶活性；以及(c)選擇能夠抑制類固醇脫氫酶活性的一種或多種所述候選化合物。
·通過上述方法鑒定的化合物，其在藥物中的用途以及包含任選與藥學上可接受的載體、稀釋劑、賦型劑或佐劑混合的所述化合物的藥物組合物。
在本發明的一些方面，類固醇脫氫酶優選是I型類固醇脫氫酶。
在本發明的一些方面，類固醇脫氫酶優選是II型類固醇脫氫酶。
HSD優選是1、3、5和/或7型。HSD優選將雌酮(酮)轉化為雌二醇(羥基)。
HSD優選是2和/或8型。HSD優選將雌二醇(羥基)轉化為雌酮(酮)。
我們也已經確定，在一些方面，為抑制類固醇脫氫酶(HSD)的活性，本發明化合物并非必須被氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基之一取代。因此，在一些方面，本發明提供了如本文所定義的化合物，其中R1是任意取代基。在這方面，R1優選為H、OH或烴基，更優選為OH。
因此，在其它方面，本發明提供 ·下式的化合物
其中G是氟碳基。
·所述化合物在制備藥物中的用途，所述藥物用于治療與類固醇脫氫酶相關的病癥或疾病。
·所述化合物在制備藥物中的用途，所述藥物用于治療與有害的類固醇脫氫酶水平有關的病癥或疾病。
·所述化合物在制備用于抑制類固醇脫氫酶活性的藥物中的用途。
·所述化合物在制備用于抑制類固醇脫氫酶活性的藥物中的用途。
一種方法，其包括(a)用一種或多種上式的候選化合物進行類固醇脫氫酶試驗；(b)測定所述一種或多種候選化合物是否能夠調節類固醇脫氫酶活性；以及(c)選擇能夠調節類固醇脫氫酶活性的一種或多種所述候選化合物。
一種方法，其包括(a)用一種或多種上式的候選化合物進行類固醇脫氫酶試驗；(b)測定所述一種或多種候選化合物是否能夠抑制類固醇脫氫酶活性；以及(c)選擇能夠抑制類固醇脫氫酶活性的一種或多種所述候選化合物。
·通過上述方法鑒定的化合物，其在藥物中的用途以及包含任選與藥學上可接受的載體、稀釋劑、賦型劑或佐劑混合的所述化合物的藥物組合物。
一些優點 本發明的一個重要優點是，本發明化合物能用作STS抑制劑。
本發明化合物的另一個優點是，它們在體內可能是有效的。
一些本發明化合物可以是非雌激素性化合物。這里，術語“非雌激素性”是指不表現雌激素活性或基本上沒有雌激素活性。
另一個優點是，一些化合物不能代謝為顯示或誘導激素活性的化合物。
一些本發明化合物的優點還在于它們具有口服活性。
與已知的STS抑制劑相比，一些本發明化合物改善了體內作用持續時間。
一些本發明化合物可用于治療癌癥(例如乳腺癌)以及(或者)非惡性病癥，例如預防自身免疫病，當需要從較早的年齡給與藥物時尤其如此。
因此相信一些本發明化合物具有除治療內分泌依賴型癌癥(endocrine-dependent cancers)以外的治療用途，例如治療自身免疫病。
類固醇硫酸酯酶 類固醇硫酸酯酶(有時稱為steroid sulphatase或steryl sulphatase或簡稱為STS)水解數種硫酸酯化(sulphated)類固醇，如雌酮硫酸酯，脫氫表雄酮硫酸酯和膽固醇硫酸酯。STS已經被指定為酶編號EC 3.1.6.2。
已克隆和表達STS。例如，參見Stein等(J.Biol.Chem.26413865-13872(1989))和Yen等(Cell 49443-454(1987))的報道。
STS是與許多疾病狀況有關的酶。
例如，研究人員已發現，STS的全面缺乏STS產生魚鱗癬。根據一些研究人員，STS缺乏在日本相當普遍。相同的研究人員(Sakura等，J Inherit Metab Dis 1997Nov；20(6)807-10)還報道了過敏性病(如支氣管哮喘、過敏性鼻炎或特應性皮炎)可能與類固醇硫酸酯酶缺乏有關。
除了由于STS活性總體缺乏引起的疾病以外，增高的STS活性水平也可能引起疾病。例如，如上所述，存在著支持STS在乳腺癌生長和轉移中起作用的強力證據。
STS還已經牽涉其它疾病。例如，Le Roy等(Behav Genet 1999Mar；29(2)131-6)已經確定，在類固醇硫酸酯酶濃度與小鼠攻擊行為的啟動之間可能存在遺傳相關。作者得出結論，類固醇的硫酸酯化可能是復雜網絡的原動力，所述復雜網絡包括牽涉突變引起攻擊的基因。
STS抑制 據信，與STS活性相關的某些疾病病況歸因于無活性的硫酸酯化雌酮轉化為活性的非硫酸酯化雌酮。在與STS活性相關的病況中，人們希望抑制STS活性。
這里，術語“抑制”包括減小和/或消除和/或屏蔽和/或防止STS的有害作用。
STS抑制劑 根據本發明，本發明化合物能用作STS抑制劑。
這里，本文所使用的關于本發明化合物的術語“抑制劑”是指能夠抑制STS活性(例如減小和/或消除和/或屏蔽和/或防止STS的有害作用)的化合物。STS抑制劑可以起拮抗劑作用。
可使用完整MCF-7乳腺癌細胞或胎盤微粒體來評價化合物抑制雌酮硫酸酯酶活性的能力。另外，可以使用動物模型。有關合適的試驗規程的細節在下面的章節中提供。應注意，可以使用其它試驗來測定STS活性以及STS抑制。例如，還可以參考WO-A-99/50453的教導。
優選地，對于一些應用，該化合物進一步表征為這樣的特征如果氨基磺酸酯基被硫酸酯基取代而形成硫酸酯衍生物，那么該硫酸酯衍生物可被具有類固醇硫酸酯酶(E.C.3.1.6.2)活性的酶水解(即，當與類固醇硫酸酯酶EC3.1.6.2在pH7.4于37℃下孵育時)。
一個優選實施方案中，如果化合物的氨基磺酸酯基被硫酸酯基置換而形成硫酸酯化合物，那么硫酸酯化合物可被具有類固醇硫酸酯酶(E.C.3.1.6.2)活性的酶水解，當與類固醇硫酸酯酶EC3.1.6.2在pH7.4于37℃下孵育時，獲得的Km值低于200mmol，優選低于150mmol，優選低于100mmol，優選低于75mmol，優選低于50mmol。
一個優選實施方案中，如果化合物的氨基磺酸酯基被硫酸酯基置換而形成硫酸酯化合物，那么隨后硫酸酯化合物可被具有類固醇硫酸酯酶(E.C.3.1.6.2)活性的酶水解，當與類固醇硫酸酯酶EC3.1.6.2在pH7.4于37℃下孵育時，獲得的Km值低于200mmol，優選低于150mmol，優選低于100mmol，優選低于75mmol，優選低于50mmol。
一個優選實施方案中，本發明化合物不能被具有類固醇硫酸酯酶(E.C.3.1.6.2)活性的酶水解。
對于一些應用，優選地，本發明化合物對所需靶標(如STS)具有至少約100倍的選擇性，優選對所需靶標具有至少約150倍的選擇性，優選對所需靶標具有至少約200倍的選擇性，優選對所需靶標具有至少約250倍的選擇性，優選對所需靶標具有至少約300倍的選擇性，優選對所需靶標具有至少約350倍的選擇性。
應注意，本發明化合物除了抑制STS活性的能力以外，可具有其它有益特性，或者具有兩者之一。
類固醇脫氫酶 類固醇脫氫酶或“DH”(簡稱)可以被分類為兩種類型I型和II型。酶(例如雌二醇17β-羥基類固醇脫氫酶(E2HSD))的這兩種類型在調節與雌激素受體相互作用的配體有效性方面起重要作用。I型將雌酮(E1)還原為生物活性的雌激素，即雌二醇(E2)，而II型E2HSD通過催化E2氧化為E1而使E2失活。
DH抑制 據認為，與DH活性有關的一些疾病病況歸因于無活性的雌酮轉化為活性的雌二醇。在與DH活性相關的病況中，人們希望抑制DH活性。
這里，術語“抑制”包括減小和/或消除和/或屏蔽和/或防止DH的有害作用。
根據本發明，本發明化合物能用作DH抑制劑。
這里，本文所使用的關于本發明化合物的術語“抑制劑”是指能夠抑制DH活性(例如減小和/或消除和/或屏蔽和/或防止DH的有害作用)的化合物。DH抑制劑可以起拮抗劑作用。
可以使用具有充足I型E2HSD活性的T47D乳腺癌細胞或用于II型抑制劑研究的MDA-MB-231細胞來評價化合物抑制類固醇脫氫酶活性的能力。在兩種細胞系中，產物的形成與時間和細胞數線性相關。適合的試驗規程的細節在實施例章節中提供。
應指出，本發明化合物可具有除了抑制DH活性的能力以外的其它有益特性，或者具有代替抑制DH活性的能力的其它有益特性。
氨基磺酸酯基 在一個實施方案中，環X具有氨基磺酸酯基作為取代基。本文所使用的術語“氨基磺酸酯”包括氨基磺酸的酯或氨基磺酸的N-取代衍生物的酯，或它們的鹽。
如果R1是氨基磺酸酯基，那么本發明的化合物稱為氨基磺酸酯化合物。
通常，氨基磺酸酯基具有以下結構式 (R4)(R5)N-S(O)(O)-O- 其中優選R4和R5獨立地選自H、烷基、環烷基、烯基和芳基或它們的組合，或者一起表示亞烷基，其中所述或每個烷基或環烷基或烯基或任選含有一個或多個雜原子或基團。
當被取代時，本發明的N-取代化合物可以含有一個或兩個N-烷基、N-烯基、N-環烷基或N-芳基取代基，優選含有或各自含有最多10個碳原子。當R4和/或R5是烷基時，優選值(values)是其中R4和R5各自獨立地選自含有1～6個碳原子的低級烷基的那些，即甲基、乙基、丙基等。R4和R5可以均為甲基。當R4和/或R5是芳基時，典型值是苯基和甲苯基(PhCH3；o)。在R4和R5表示環烷基的情況下，典型值為環丙基、環戊基、環己基等。當結合在一起時，R4和R5通常表示亞烷基，其提供4～6個碳原子的鏈，任選被一個或多個雜原子或基團打斷，以例如提供五元雜環(例如嗎啉代、吡咯烷基(pyrrolidino)或哌啶基)。
在這些值內，包括含有一個或多個不干擾所述化合物的硫酸酯酶抑制活性的基團作為取代基的烷基、環烷基、烯基和芳基取代的基團。示例性非干擾取代基包括羥基、氨基、鹵素、烷氧基、烷基和芳基。
在一些實施方案中，氨基磺酸酯基可以通過與基團X內或基團X上的一個或多個原子稠合(或連接)而形成環結構。
在一些實施方案中，可以存在多于一個的氨基磺酸酯基。例如，可以有兩個氨基磺酸酯基(即，雙-氨基磺酸酯化合物)。如果這些化合物以甾核為基礎，優選第二個氨基磺酸酯基(或其它氨基磺酸酯基中的至少一個)位于甾核的17位上。這些基團不必是相同的。
在一些優選的實施方案中，R4和R5中至少一個是H。
在一些進一步優選的實施方案中，R4和R5各自是H。
膦酸酯基 如果R1是膦酸酯基，那么本發明的化合物稱為膦酸酯化合物。
通常，膦酸酯基具有以下結構式 (R6)-P(O)(OH)-O- 其中優選R6為H、烷基、環烷基、烯基和芳基或它們的組合，其中所述或每一個烷基或環烷基或烯基或任選含有一個或多個雜原子或基團。
當被取代時，本發明的N-取代化合物可以含有一個或兩個N-烷基、N-烯基、N-環烷基或N-芳基取代基，優選含有或各自含有最多10個碳原子。當R6是烷基時，R6可以是含有1～6個碳原子的低級烷基，即甲基、乙基、丙基等。例如，R6可以為甲基。當R6是芳基時，典型的值是苯基和甲苯基(PhCH3；o)。在R6表示環烷基的情況下，典型的值為環丙基、環戊基、環己基等。R6甚至可以包括亞烷基，其提供4～6個碳原子的鏈，任選被一個或多個雜原子或基團打斷，以例如提供五元雜環(例如嗎啉代、吡咯烷基或哌啶子基)。
在含有不干擾所述化合物的硫酸酯酶抑制活性的一種或多種基團作為取代基的值內，包括烷基、環烷基、烯基和芳基取代基。示例性非干擾取代基包括羥基、氨基、鹵素、烷氧基、烷基和芳基。
在一些實施方案中，膦酸酯基可以通過與基團X內或基團X上的一個或多個原子稠合(或結合)而形成環結構。
在一些實施方案中，可以存在多于一個的膦酸酯基。例如，可以有兩個膦酸酯基(即，雙-膦酸酯化合物)。如果這些化合物以甾核為基礎，優選第二個膦酸酯基(或其它膦酸酯基中的至少一個)位于甾核的17位上。這些基團不必是相同的。
硫代膦酸酯基 如果R1是硫代膦酸酯基，那么本發明的化合物稱為硫代膦酸酯化合物。
通常，硫代膦酸酯基具有具有以下結構式 (R7)-P(S)(OH)-O- 其中R7優選是H、烷基、環烷基、烯基或芳基或它們的組合，其中所述或每一個烷基或環烷基或烯基或任選含有一個或多個雜原子或基團。
當被取代時，本發明的N-取代化合物可以含有一個或兩個N-烷基、N-烯基、N-環烷基或N-芳基取代基，優選含有或各自含有最多10個碳原子。當R7是烷基時，R7可以是含有1～6個碳原子的低級烷基，即甲基、乙基、丙基等。例如，R7可以為甲基。當R7是芳基時，典型值是苯基和甲苯基(PhCH3；o)。在R7表示環烷基的情況下，典型值為環丙基、環戊基、環己基等。R7甚至可以包括亞烷基，其提供4～6個碳原子的鏈，任選被一個或多個雜原子或基團打斷，以例如提供五元雜環(例如嗎啉代、吡咯烷基或哌啶子基)。
在含有不干擾所述化合物的硫酸酯酶抑制活性的一種或多種基團作為取代基的值內，包括烷基、環烷基、烯基和芳基取代基。示例性非干擾取代基包括羥基、氨基、鹵素、烷氧基、烷基和芳基。
在一些實施方案中，硫代膦酸酯基可以通過與基團X內或基團X上的一個或多個原子稠合(或結合)而形成環結構。
在一些實施方案中，可以存在多于一個的硫代膦酸酯基。例如，可以有兩個硫代膦酸酯基(即，雙-硫代膦酸酯化合物)。如果這些化合物以甾核為基礎，優選第二個硫代膦酸酯基(或其它膦酸酯基中的至少一個)位于甾核的17位上。這些基團不必是相同的。
磺酸酯基 如果R1是磺酸酯基，那么本發明的化合物稱為磺酸酯化合物。
通常，磺酸酯基具有以下結構式 (R8)-S(O)(O)-O- 其中R8優選是H、烷基、環烷基、烯基或芳基或它們的組合，其中所述或每一個烷基或環烷基或烯基或任選含有一個或多個雜原子或基團。
當被取代時，本發明的N-取代化合物可以含有一個或兩個N-烷基、N-烯基、N-環烷基或N-芳基取代基，優選含有或各自含有最多10個碳原子。當R8是烷基時，R8可以是含有1～6個碳原子的低級烷基，即甲基、乙基、丙基等。例如，R8可以為甲基。當R8是芳基時，典型值是苯基和甲苯基(PhCH3；o)。在R8表示環烷基的情況下，典型值為環丙基、環戊基、環己基等。R8甚至可以包括亞烷基，其提供4～6個碳原子的鏈，任選被一個或多個雜原子或基團打斷，以例如提供五元雜環(例如嗎啉代、吡咯烷基或哌啶子基)。
在含有不干擾所述化合物的硫酸酯酶抑制活性的一種或多種基團作為取代基的值內，包括烷基、環烷基、烯基和芳基取代基。示例性非干擾取代基包括羥基、氨基、鹵素、烷氧基、烷基和芳基。
在一些實施方案中，磺酸酯基可以通過與基團X內或基團X上的一個或多個原子稠合(或結合)而形成環結構。
在一些實施方案中，可以存在多于一個的磺酸酯基。例如，可以有兩個磺酸酯基(即，雙-磺酸酯化合物)。如果這些化合物以甾核為基礎，優選第二個磺酸酯基(或其它磺酸酯基中的至少一個)位于甾核的17位上。這些基團不必是相同的。
磺酸酯/膦酸酯/硫代膦酸酯/氨基磺酸酯的組合 對于本發明的一些化合物，可以存在一個如本文所定義的磺酸酯或膦酸酯或硫代膦酸酯或氨基磺酸酯中的；以及另一個如本文所定義的磺酸酯或膦酸酯或硫代膦酸酯或氨基磺酸酯。例如，本發明化合物可以包含一個氨基磺酸酯基和一個膦酸酯基。
如果本發明的這些化合物以甾核為基礎，優選所述另一個基團位于甾核的17位上。
烴基 本文所使用的術語“烴基”是指至少包含C和H的基團，并且可以任選包含一個或多個其它適合的取代基。此類取代基的實例包括鹵素、烷氧基、硝基、烷基、環狀基團等。除了取代基可能是環狀基團以外，取代基可以結合形成環狀基團。如果烴基含有多于一個的C，那么這些碳不必相互連接。例如，至少兩個碳可以通過適合的元素或基團連接。因此，該烴基可以含有雜原子。適合的雜原子對于本領域技術人員來說顯而易見，例如包括硫、氮和氧。烴基的非限制性實例是酰基。
典型的烴基是烴基團。這里使用的術語“烴”是指烷基、烯基、炔基或芳基中的任何一種，所述烷基、烯基和炔基可以是直鏈、支鏈或環狀的。術語烴還包括任選被取代的那些基團。如果該烴是其上具有取代基的支鏈結構，那么該取代可以是在烴主鏈上或在支鏈上；或者，所述取代可以既在烴主鏈上，又在支鏈上。
含氧烴基 本文所使用的術語“含氧烴基”是指至少包含C、H和O的基團，并且可以任選包含一個或多個其它適合的取代基。此類取代基的實例包括鹵素、烷氧基、硝基、烷基、環狀基團等。除了取代基可能是環狀基團以外，取代基可以結合形成環狀基團。如果烴基含有多于一個的C，那么這些碳不必相互連接。例如，至少兩個碳可以通過適合的元素或基團連接。因此，該烴基可以含有雜原子。適合的雜原子對于本領域技術人員來說顯而易見，例如包括包括硫和氮。
在本發明的一個實施方案中，該含氧烴基是烴氧基(oxyhydrocarbon group)。
這里，術語“烴氧基”是指烷氧基、烯氧基、炔氧基或芳氧基中的任何一個，所述烷氧基、烯氧基和炔氧基可以是直鏈、支鏈或環狀的。術語烴氧基還包括任選被取代的那些基團。如果烴氧基是其上具有取代基的支鏈結構，那么該取代可以是在烴主鏈上或在支鏈上；或者，所述取代可以既在烴主鏈上，又在支鏈上。
通常，該含氧烴基具有結構式C1-6O(例如C1-3O)。
使用癌細胞測定STS活性的試驗 (規程1) MCF-7細胞中類固醇硫酸酯酶活性的抑制 使用完整的MCF-7人乳腺癌細胞在體外測定類固醇硫酸酯酶的活性。該激素依賴型細胞系廣泛用于研究對人乳腺癌生長的控制。它具有顯著的類固醇硫酸酯酶活性(Maclndoe等，Endocrinology，123，1281-1287(1988)；Purohit & Reed，Int.J.Cancer，50，901-905(1992))，可以從美國典型培養物保藏中心(American Type CultureCollection)(ATCC)和英國(例如皇家癌癥研究基金會(The Imperial Cancer ResearchFund))獲得。
細胞保存在含有20mM HEPS、5％胎牛血清、2mM谷氨酰胺、非必需氨基酸和0.075％碳酸氫鈉的最低必需培養基(MEM)(Flow Laboratories，Irvine，Scotland)中。使用以上培養基以大約1×105細胞/瓶的量對至多30份平行的25cm2組織培養瓶進行接種。細胞生長至80％融合，每3天更換培養基。
在一式三份25cm2組織培養瓶內的完整單層MCF-7細胞用Earle’s平衡鹽溶液(EBSS購自英國ICN Flow，High Wycombe)洗滌，于37℃下，用無血清MEM(2.5ml)中的5pmol(7×105dpm)[6，7-3H]雌酮-3-硫酸酯(比活性60Ci/mmol，購自美國馬薩諸塞州波士頓市New England Nuclear)連同雌酮-3-氨基磺酸酯(11種濃度0；1fM；0.01pM；0.1pM；1pM；0.01nM；0.1nM；1nM；0.01mM；0.1mM；1mM)孵育3～4小時。孵育后，將每一培養瓶冷卻，用移液管將培養基(1ml)轉移到含有[14C]雌酮(7×103dpm)(比活性97Ci/mmol，購自Amersham Interantional Radiochemical Centre，Amersham，英國)的獨立試管內。將該混合物與甲苯(5ml)徹底振蕩30秒鐘。實驗表明，通過這種處理，>90％的[14C]雌酮和<0.1％的[3H]雌酮-3-硫酸酯從水相中被去除。移出一部分(2ml)有機相，蒸發，閃爍光譜測定法測定殘留物中的3H和14C含量。由所獲得的3H計數(校正所使用的培養基和有機相的體積以及所添加的[14C]雌酮的回收率)和底物的比活性來計算水解的雌酮-3-硫酸酯的質量。每一批實驗包括對由硫酸酯酶陽性的人胎盤(陽性對照)制備的微粒體以及沒有細胞的燒瓶(以評價底物的表觀非酶促水解)進行孵育。在用Zaponin處理細胞單層之后，使用庫爾特計數器測定每一瓶的細胞核的數目。使用每一批中的一個燒瓶，利用臺盼藍排斥法(Phillips，H.J.(1973)InTissue culture and applications，[edsKruse，D.F.& Patterson，M.K.]；第406-408頁；Academic Press，New York)評價細胞膜狀態和生存力。
類固醇硫酸酯酶活性的結果表示為對106個細胞計算的在孵育期(20小時)中形成的總產物(雌酮+雌二醇)的平均值±1S.D.，相對不含雌酮-2-硫酸酯酶的孵育其減低(抑制)百分率顯示統計學顯著性。使用非成對學生t檢驗(Unpaired Student’st-test)來檢驗結果的統計顯著性。
使用胎盤微粒體測定STS活性的試驗 (規程2) 胎盤微粒體中類固醇硫酸酯酶活性的抑制 用剪刀將得自正常足月妊娠的硫酸酯酶陽性的人胎盤充分剪碎，用冷的磷酸鹽緩沖液(pH 7.4，50mM)洗滌一次，然后再懸浮于冷的磷酸鹽緩沖液(5ml/g組織)。采用被2分鐘的冰浴冷卻期隔開的三個10秒鐘爆發，用Ultra-Turrax勻漿機進行勻漿。通過以2000g離心(4℃)30分鐘，除去核與細胞碎片，20℃下儲存上清份樣(各2ml)。通過Bradford的方法(Anal.Biochem.，72，248-254(1976))測定上清的蛋白質濃度。
使用如下條件進行孵育(1ml)蛋白質濃度為100mg/ml、底物濃度為20mM[6，7-3H]雌酮-3-硫酸酯(比活性60Ci/mmol，購自美國馬薩諸塞州波士頓市NewEngland Nuclear)，孵育時間為20分鐘，在37℃下孵育。如果必要，使用8種化合物濃度0(即對照)；0.05mM；0.1mM；0.2mM；0.4mM；0.6mM；0.8mM；1.0mM。孵育后，將各個樣本冷卻，用移液管將培養基(1ml)移入到含有[14C]雌酮(7×103dpm)(比活性97Ci/mmol，購自Amersham Interantional Radiochemical Centre，Amersham，英國)的獨立試管內。將該混合物與甲苯(5ml)徹底振蕩30秒鐘。實驗表明，通過這種處理，>90％的[14C]雌酮和<0.1％的[3H]雌酮-3-硫酸酯從水相中被去除。移出一部分有機相(2ml)，蒸發，閃爍光譜測定法測定殘留物中的3H和14C含量。由所獲得的3H計數(校正所使用的培養基和有機相的體積以及所添加的[14C]雌酮的回收率)和底物的比活性來計算水解的雌酮-3-硫酸酯的質量。
用于測定STS活性的動物試驗模型 (規程3) 雌酮硫酸酯酶活性的體內抑制 可使用動物模型，尤其使用卵巢切除的大鼠來研究本發明化合物。在該模型中，雌激素性化合物刺激子宮生長。
口服給與大鼠該化合物(10mg/Kg/天，總共5天)，而另一組大鼠僅僅接受載體(丙二醇)。還有一組皮下接受10μg/天的量的化合物EMATE，共計5天。在研究結束時，獲取肝組織的樣本，如前所述，使用3H雌酮硫酸酯作為底物分析雌酮硫酸酯酶的活性(參見PCT/GB95/02638)。
用于測定雌激素活性的動物試驗模型 (方案4) 體內雌激素活性的缺乏 可使用動物模型，尤其使用卵巢切除的大鼠來研究本發明化合物。在該模型中，雌激素性化合物刺激子宮生長。
口服給與大鼠該化合物(10mg/Kg/天，總共5天)，而另一組大鼠僅僅接受載體(丙二醇)。還有一組皮下接受10μg/天的量的雌激素化合物EMATE，共計5天。在研究結束時，獲取子宮，稱重，結果表示為子宮重量/總體重×100。
對子宮生長沒有顯著影響的化合物不具有雌激素性。
治療 本發明化合物可用作治療劑—即，在治療應用中。
術語“治療”包括治愈效果、緩解效果和預防效果。
治療可以針對人或動物，優選雌性動物。
藥物組合物 在一個方面中，本發明提供藥物組合物，它包含根據本發明的化合物和任選的藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦型劑(包括它們的組合)。
該藥物組合物可以在人和獸醫中用于人或動物用途，通常包含藥學上可接受的稀釋劑、載體或賦型劑中的任何一種或多種。治療用途的可接受的載體或稀釋劑在制藥領域中是眾所周知的，例如描述于Remington′s Pharmaceutical Sciences，MackPublishing Co.(A.R.Gennaro edit.1985)中。可以根據預期給藥途徑和標準藥學實踐來選擇藥用載體、賦型劑或稀釋劑。該藥物組合物可以包含任何適合的粘結劑、潤滑劑、混懸劑、包衣劑、增溶劑作為所述載體、賦型劑或稀釋劑，或者除了所述載體、賦型劑或稀釋劑以外包括任何適合的粘結劑、潤滑劑、混懸劑、包衣劑、增溶劑。
該藥物組合物中可以具有防腐劑、穩定劑、染料，甚至矯味劑。防腐劑的實例包括苯甲酸鈉、山梨酸和對羥基苯甲酸酯類。還可以使用抗氧化劑和混懸劑。
根據不同的遞送體系可以有不同的組成/配制要求。例如，可將本發明的藥物組合物配制成使用微型泵遞送，或通過粘膜途徑遞送，例如作為鼻噴霧劑或吸入用氣溶膠或可攝入的溶液；或者胃腸外給藥，該組合物配制為可注射形式，例如通過靜脈內、肌內或皮下途徑遞送。或者，該制劑可以設計為通過兩種途徑遞送。
在該藥物經粘膜途徑通過胃腸粘膜遞送的情況下，它應該在通過胃腸道遞送期間保持穩定。例如，它應該抵抗蛋白水解的降解，在酸性pH下穩定，抵抗膽汁的去污劑(detergent)效應。
適當時，所述藥物組合物按下列方式施用吸入形式；栓劑或陰道栓的形式；以洗液、溶液、霜、軟膏或撲粉的形式局部施用；使用皮膚貼片；以含有諸如淀粉或乳糖的賦型劑的片劑、或者在單獨或與賦型劑混合于膠囊或微囊(ovules)內、或者以含有矯味劑或著色劑的酏劑、溶液或混懸液的形式口服；或者它們可以胃腸外注射，例如靜脈內、肌內或皮下注射。對于胃腸外施用，該組合物可最好以無菌水溶液的形式使用，該無菌水溶液可以含有其它物質，例如足夠的鹽或單糖，以便使該溶液與血液等滲。對于口含或舌下施用，所述組合物可以片劑或錠劑的形式施用，能夠以常規方式配制所述片劑或錠劑。
聯合藥物 本發明化合物可以與一種或多種其它活性劑(例如一種或多種其它藥物活性劑)聯合使用。
例如，本發明化合物可以與以下物質聯合使用其它STS抑制劑和/或其它抑制劑(如芳化酶抑制劑(例如4-羥基雄烯二酮(4-OHA))和/或類固醇(如天然存在的sterneurosteroids脫氫表雄酮硫酸酯(DHEAS)和孕烯醇酮硫酸酯(PS))和/或其它結構類似的有機化合物。其它STS抑制劑的實例可以在以上參考文獻中找到。例如，用于本發明的STS抑制劑包括EMATE，以及類似于這里提到的化合物5的2-乙基17-脫氧化合物和/或2-甲氧基17-脫氧化合物。
另外，或者作為替代方案，本發明化合物可以與生物反應調節劑結聯合使用。
術語生物反應調節劑(“BRM”)包括細胞因子、免疫調節劑、生長因子、造血調節因子、集落刺激因子、趨化因子、溶血因子和溶栓因子、細胞表面受體、配體、白細胞粘附分子、單克隆抗體、預防和治療性疫苗、激素、細胞外基質組分、纖維粘連蛋白等。對于某些應用，優選的生物反應調節劑是細胞因子。細胞因子的實例包括白介素(IL)，例如IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-19；腫瘤壞死因子(TNF)，例如TNF-α；干擾素α、β和γ；TGF-β。對于某些應用，細胞因子優選為腫瘤壞死因子(TNF)。對于某些應用，TNF可以是任何類型的TNF，例如TNF-α、TNF-β，包括它們的衍生物或混合物。更優選的細胞因子是TNF-α。關于TNF的教導可以在現有技術中找到，例如WO-A-98/08870和WO-A-98/13348。
給藥 一般地，主治醫師決定最適合于個體對象的實際劑量，并且該劑量隨著年齡、體重和具體患者的反應而變化。以下劑量是平均情形的示例。當然，可以有適用更高或更低劑量范圍的個別情況。
本發明的組合物可以通過直接注射給藥。組合物可以配制成胃腸外、粘膜、肌內、靜脈內、皮下、眼內或透皮給藥。根據需要，藥物可以按0.01～30mg/kg體重，例如0.1～10mg/kg體重，更優選0.1～1mg/kg體重的劑量給藥。
又例如，本發明的藥物可以根據每天1～4次(優選每天1次或2次)的方案給藥。用于任何具體患者的具體的劑量水平和劑量頻率可以變化，并且將取決于各種因素，包括所用的具體化合物的活性，該化合物的代謝穩定性和作用時間長短、年齡、體重、一般健康狀況、性別、飲食、給藥方式和時間、排泄率、藥物組合、具體病癥的嚴重程度和接受治療的主體。
除了上述典型的遞送方式以外，術語“給藥”還包括通過諸如脂質介導的轉染、脂質體、免疫脂質體、脂質轉染(lipofectin)、陽離子表面兩親物(CFAs)以及它們的組合等技術遞送。此類遞送機制的途徑包括但不限于粘膜、鼻、口、胃腸外、胃腸、局部或舌下途徑。
術語“給藥”包括但不限于粘膜途徑遞送，例如作為鼻噴霧劑或吸入氣溶膠或作為可攝取溶液；胃腸外途徑遞送(通過可注射形式遞送)，例如靜脈內、肌內或皮下途徑。
因此就給藥而言，本發明的STS抑制劑可按任何適合的方式，采用常規藥物配制技術和藥用載體、佐劑、賦型劑、稀釋劑等進行配制，并且通常用于胃腸外給藥。近似有效劑量率可以是1～1000mg/天，例如10～900mg/天，或甚至100～800mg/天，取決于所討論化合物的單獨活性，并針對平均體重(70Kg)的患者而言。優選和更有效的化合物的更常用劑量率是200～800mg/天，更優選200～500mg/天，最優選200～250mg/天。它們可以按單劑量方案、分劑量方案和/或多劑量方案持續給藥數天。對于口服給藥，它們可以配制為單位劑量含有100～500mg化合物的片劑、膠囊、溶液或混懸劑。或者優選將化合物配制于適合的胃腸外給藥用載體中，用于胃腸外給藥，并且提供200～800mg，優選200～500mg，更優選200～250mg的單日劑量率。但此類有效日劑量根據活性成分的固有活性和患者體重而變化，此類變化屬于主治醫師的技術和判斷范疇內。
低給藥頻率(dosing frequency) 根據一個非常優選的方面，本發明化合物可以按頻率低于每日給藥的給藥方案來給藥。令人驚奇的是，已發現相比于已知的類固醇硫酸酯酶抑制劑，本發明化合物顯示格外長的作用持續時間。
因此，本發明提供了本發明化合物的給藥方法，其包括劑量給藥間隔選自每周一次給藥(dosing)、每周兩次給藥、每兩周一次給藥、每月兩次給藥和每月一次給藥的連續給藥方案。
此外，本發明提供了本發明化合物的給藥方法，其包括給藥周期為大約每3天一次到大約每16天一次的連續給藥方案。
優選地，維持該連續給藥方案直到獲得所需的治療效果。
所謂每周一次給藥是指，每周給與一次單位劑量的本發明化合物，即，在7天的期間內給藥一次，優選在每一周的同一天給藥。在每周一次給藥方案中，通常大約每7天給與單位劑量。每周一次給藥方案的一個非限制性實例要求每個星期天給與單位劑量的本發明化合物。優選地，該單位劑量不是在連續日給藥，但每周一次給藥方案能夠包括其中在分屬兩個不同的周周期(weekly period)的兩個連續日給與單位劑量的給藥方案。
近似有效劑量率可以是1～1000mg/周，例如10～900mg/周，或甚至100～800mg/周，這取決于所討論化合物的單獨活性，并針對平均體重(70Kg)的患者而言。對于優選且活性更高的化合物，更常用的劑量率是200～800mg/周，優選200～500mg/周，更優選200～250mg/周。它們可以按單劑量方案、分劑量方案和/或多劑量方案持續給藥數天。對于口服給藥，它們可以配制為單位劑量含有100～500mg化合物的片劑、膠囊、溶液或混懸劑。或者優選將化合物配制于適合的胃腸外給藥用載體中，用于胃腸外給藥，并且提供200～800mg，優選200～500mg，更優選200～250mg的單周劑量率。
所謂每周兩次給藥是指，每周給與兩次單位劑量的本發明化合物，即，在7天的期間內給藥2次，優選在每個周周期的相同兩天給藥。在每周兩次給藥方案中，每個單位劑量通常大約每3～4天給與。每周兩次給藥方案的一個非限制性實例要求每個星期日和星期三給與單位劑量的本發明化合物。優選地，所述單位劑量不是在同一天或連續與給與，但每周兩次給藥方案能夠包括其中單位劑量在一個周周期或不同的周周期之內的兩個連續日給與單位劑量的給藥方案。
近似有效劑量率可以是1～1000mg/每周兩次，例如10～900mg/每周兩次，或甚至100～800mg/每周兩次，這取決于所討論化合物的單獨活性，并針對平均體重(70Kg)的患者而言。對于優選且活性更高的化合物，更常用的劑量率是200～800mg/每周兩次，優選200～500mg/每周兩次，更優選200～250mg/每周兩次。它們可以按單劑量方案、分劑量方案和/或多劑量方案持續給藥數天。對于口服給藥，它們可以配制為單位劑量含有100～500mg化合物的片劑、膠囊、溶液或混懸劑。或者優選將化合物配制于適合的胃腸外給藥用載體中，用于胃腸外給藥，并且提供200～800mg，優選200～500mg，更優選200～250mg的單個每周兩次劑量率。
所謂每兩周一次給藥是指，在2周期間給與一次單位劑量的本發明化合物，即，在14天的期間內給藥一次，優選在每個兩周周期的同一天給藥。在一周兩次給藥方案中，每一單位劑量通常大約每14天給與。每兩周一次給藥方案的一個非限制性實例要求每隔一個星期日給與一個單位劑量的本發明化合物。優選地，該單位劑量不在連續日給藥，但每兩周一次給藥方案能夠包括其中在兩個不同的兩周周期之內的兩個連續日給與該單位劑量的給藥方案。
近似有效劑量率可以是1～1000mg/兩周，例如10～900mg/兩周，或甚至100～800mg/兩周，這取決于所討論化合物的單獨活性，并針對平均體重(70Kg)的患者而言。對于優選且活性更高的化合物，更常用的劑量率是200～800mg/兩周，優選200～500mg/兩周，更優選200～250mg/兩周。它們可以按單劑量方案、分劑量方案和/或多劑量方案持續給藥數天。對于口服給藥，它們可以配制為單位劑量含有100～500mg化合物的片劑、膠囊、溶液或混懸劑。或者優選將化合物配制于適合的胃腸外給藥用載體中，用于胃腸外給藥，并且提供200～800mg，優選200～500mg，更優選200～250mg的單個每兩周一次劑量率。
所謂每月兩次給藥是指，在一個月歷(monthly calendar period)期間兩次給與單位劑量的本發明化合物。在每月兩次給藥方案中，優選在每一個月的相同兩個日期投給劑量。在每月兩次給藥方案中，每一單位劑量通常大約每14～16天給藥。每月兩次給藥方案的一個非限制性實例要求在該月的第一天或大約第一天以及在該月的第15日或大約第15日(即中點)劑量給藥。優選地，不在同一天或連續日給與單位劑量，但每月兩次給藥方案能夠包括其中在一個月內或不同月內的兩個連續日給與單位劑量的給藥方案。每月兩次方案這里定義為不同于，并且不包括兩周一次給藥方案，因為這兩個方案具有不同的周期性，導致在長時間內給與不同的劑量數。例如，在一年內，根據每月兩次方案，給與共計約24個劑量(因為一年有12個日歷月份)，而根據兩周一次給藥方案，給與共計約26個劑量(因為在一年內有大約52周)。
近似有效劑量率可以是1～1000mg/每月兩次，例如10～900mg/每月兩次，或甚至100～800mg/每月兩次，這取決于所討論化合物的單獨活性，并針對平均體重(70Kg)的患者而言。對于優選且活性更高的化合物，更常用的劑量率是200～800mg/每月兩次，優選200～500mg/每月兩次，更優選200～250mg/每月兩次。它們可以按單劑量方案、分劑量方案和/或多劑量方案持續給藥數天。對于口服給藥，它們可以配制為單位劑量含有100～500mg化合物的片劑、膠囊、溶液或混懸劑。或者優選將化合物配制于適合的胃腸外給藥用載體中，用于胃腸外給藥，并且提供200～800mg，優選200～500mg，更優選200～250mg的單個每月兩次劑量率。
所謂每月一次給藥是指，在一個月歷期間給與一次單位劑量的本發明化合物。在每月一次方案中，優選在每一個月的同一日期投給劑量。在每月一次給藥方案中，每一單位劑量通常大約每28天到32天給藥。
近似有效劑量率可以是1～1000mg/月，例如10～900mg/月，或甚至100～800mg/月，這取決于所討論化合物的單獨活性，并針對平均體重(70Kg)的患者而言。對于優選且活性更高的化合物，更常用的劑量率是200～800mg/月，優選200～500mg/月，更優選200～250mg/月。它們可以按單劑量方案、分劑量方案和/或多劑量方案持續給藥數天。對于口服給藥，它們可以配制為單位劑量含有100～500mg化合物的片劑、膠囊、溶液或混懸劑。或者優選將化合物配制于適合的胃腸外給藥用載體中，用于胃腸外給藥，并且提供200～800mg，優選200～500mg，更優選200～250mg的單月劑量率。
根據一個高度優選的實施方案，本發明提供了對哺乳動物治療與類固醇硫酸酯酶相關的病癥或疾病的方法，所述方法包括按照給藥間隔大于每天一次的時間表，對所述哺乳動物給與單位劑量形式的將藥學有效量的本發明化合物。優選地，該給藥間隔選自每周一次給藥、每周兩次給藥，兩周一次給藥，每月兩次給藥和每月一次給藥。十分優選地，該給藥間隔是每周一次給藥。
根據另一非常優選的實施方案，本發明提供了對哺乳動物治療與有害的STS水平有關的病癥或疾病的方法，所述方法包括按照給藥間隔大于每天一次的時間表，對所述哺乳動物給與單位劑量形式的藥學有效量的本發明化合物。優選地，該給藥間隔選自每周一次給藥、每周兩次給藥，兩周一次給藥，每月兩次給藥和每月一次給藥。十分優選地，該給藥間隔是每周一次給藥。
根據另一非常優選的實施方案，本發明提供了對有此需要的哺乳動物治療癌癥的方法，所述方法包括按照給藥間隔大于每天一次的時間表，對所述哺乳動物給與單位劑量形式的藥學有效量的本發明化合物。優選地，該給藥間隔選自每周一次給藥、每周兩次給藥，兩周一次給藥，每月兩次給藥和每月一次給藥。十分優選地，該給藥間隔是每周一次給藥。所述癌癥優選自內分泌依賴型癌癥。更優選地，所述癌癥選自乳腺癌、子宮內膜癌或前列腺癌，最優選乳腺癌。
根據另一非常優選的實施方案，本發明提供了對有此需要的哺乳動物治療癌癥的方法，所述方法包括按照給藥間隔大于每天一次的時間表，對所述哺乳動物給與單位劑量形式的藥學有效量的本發明化合物。優選地，該給藥間隔選自每周一次給藥、每周兩次給藥，兩周一次給藥，每月兩次給藥和每月一次給藥。十分優選地，該給藥間隔是每周一次給藥。所述癌癥優選自內分泌依賴型癌癥。更優選地，所述癌癥選自乳腺癌、子宮內膜癌或前列腺癌，最優選乳腺癌。

根據另一非常優選的實施方案，本發明提供了對有此需要的哺乳動物治療乳腺癌的方法，所述方法包括按照給藥間隔為每周一次的時間表，對所述哺乳動物給與單位劑量形式的藥學有效量的下式化合物
治療試劑盒 在其它實施方案中，本發明涉及用于方便而有效地實施本發明方法的試劑盒。這種試劑盒尤其適用于遞送固體口服劑型，如片劑或膠囊。這種試劑盒優選包括若干單位劑量。這種試劑盒可以包含具有以它們的預期使用順序排列的劑量的卡片。這種試劑盒的一個實例是“泡眼包裝(blister pack)”。泡眼包裝在包裝工業中是眾所周知的，廣泛用于包裝藥物單位劑型。如果需要，可以提供例如數字、字母或其它標記形式的記憶輔助工具，或者插入日歷，指出治療計劃表中能夠給予劑量的日期。或者，可以包含與雙膦酸酯的劑型相似或不同的安慰劑或鈣或飲食補充劑，以提供每日給藥劑量的試劑盒。
藥學上可接受的鹽 當本發明化合物含有堿性部分時，可從有機酸和無機酸形成藥學上可接受的鹽，所述酸例如是乙酸、丙酸、乳酸、檸檬酸、酒石酸、丁二酸、富馬酸、馬來酸、丙二酸、扁桃酸、蘋果酸、鄰苯二甲酸、鹽酸、氫溴酸、磷酸、硝酸、硫酸、甲磺酸、萘磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、樟腦磺酸和類似的已知可接受的酸。當本發明化合物含有酸性部分時，還可從有機堿和無機堿形成鹽，優選堿金屬鹽，例如鈉鹽、鋰鹽或鉀鹽。細胞周期 本發明化合物可用于治療細胞周期紊亂的方法。
如“分子細胞生物學(Molecular Cell Biology)”第3版，Lodish等，第177-181頁中所述，不同的真核細胞能以非常不同的速率生長和分裂。例如酵母細胞能夠每120分鐘分裂一次，而海膽和昆蟲的真核細胞中受精卵的第一次分裂僅需要1530分鐘，因為一個大的原有(pre-existing)細胞發生再分裂。然而，大多數生長的植物和動物細胞花費10～20小時來達到數目增倍，一些以慢得多的速率復制。成人的許多細胞，如神經細胞和橫紋肌細胞根本不分裂；其它細胞，如有助于傷口愈合的成纖維細胞在需要時生長，但在其它時候處于靜止。
還有，每一個分裂的真核細胞必須容易地將同樣的遺傳物質賦予兩個子細胞。真核細胞中的DNA合成不會貫穿整個細胞分裂周期中發生，而是局限于細胞分裂之前的一部分周期。
用全部能夠生長和分裂的哺乳動物細胞的培養物徹底分析了真核細胞DNA合成與細胞分裂之間的關系。發現與細菌相反，真核細胞僅花費其一部分時間用于DNA合成，并且在細胞分裂(有絲分裂)之前數小時完成DNA合成。因此，在DNA合成之后和細胞分裂之前出現了時間間隙；發現在分裂之后和下一輪DNA合成之前存在另一間隙。該分析得出了這樣的結論，真核細胞周期由M(有絲分裂)期、G1期(第一間隙)、S(DNA合成)期、G2期(第二間隙)并返回M期組成。在有絲分裂之間的各期(G1、S和G2)統稱為間期。
組織中的許多非分裂細胞(例如所有靜止成纖維細胞)在有絲分裂之后和剛好在DNA合成之前使該周期暫停；這種“靜息”細胞據說已經從細胞周期中退出并處于G0狀態。
通過使用熒光激活細胞分揀器(FACS)來測定它們的相對DNA含量，有可能在細胞處于細胞周期的三個間期階段之一時對其進行鑒定處于G1(DNA合成之前)的細胞具有規定量為x的DNA；在S期間(DNA復制)，它具有x到2x的DNA；而在G2(或M)期，它具有2x的DNA。
動物細胞中有絲分裂和胞質分裂的階段如下所示 (a)間期。間期的G2階段剛好在有絲分裂開始之前。染色體DNA在S期中已經復制并與蛋白質結合，但染色體仍然沒有作為明顯的結構看到。核仁是在光學顯微鏡下可見的唯一的核亞結構。在DNA復制之前的二倍體細胞中，每一類具有兩種形態染色體，該細胞被稱為2n。在DNA復制之后的G2期中，該細胞是4n。每一個染色體DNA具有四個拷貝。由于姐妹染色體還沒有相互分離，所以它們被稱為姐妹染色單體。
(b)早前期。每個中心粒與新形成的子中心粒一起開始向細胞的相反極移動；染色體可以作為長絲被看到。核膜開始解聚為小泡。
(c)中和晚前期。染色體凝聚已完成；每一個可見的染色體結構由在其著絲粒處結合在一起的兩個染色單體組成。每一染色單體含有兩個新復制的子DNA分子之一。微管紡錘體開始從緊鄰中心粒的區域放射，向它們的兩極移動靠近。一些紡錘絲從一個極到達另一個極；大多數達到染色單體并附著在著絲粒。
(d)中期。染色體向細胞的赤道移動，在那里它們排列于赤道面。姐妹染色單體仍然沒有分離。
(e)后期。兩個姐妹染色單體分離為獨立的染色體。各自含有著絲粒，所述著絲粒通過紡錘絲連接至其移向的一極。因此，每一染色體的一個拷貝被賦予每一子細胞。同時，細胞延伸，而極對極紡錘體也延伸。當卵裂溝開始形成時，胞質分裂開始。
(f)末期。在子細胞核的周圍形成新膜；染色體展開，變得不太清楚，核仁再次變得可見，并在每一子細胞核的周圍形成核膜。胞質分裂幾乎完成，當微管和其它纖維解聚時，紡錘體消失。在整個有絲分裂過程中，在每一極的“子”中心粒生長直至達到其全長。在末期，每一初始中心粒的復制完成，在下一個間期中將產生新的子中心粒。
(g)間期。胞質分裂一經完成，細胞進入細胞周期的G1期，在沿周期再次進行。
應了解，細胞周期是極其重要的細胞過程。偏離正常的細胞周期能夠導致許多內科疾病。增加和/或不受限制的細胞周期可以導致癌癥。減少的細胞周期可以導致退行性病癥。本發明化合物的使用可提供治療這類紊亂和病癥的手段。
因此，本發明化合物可適用于治療細胞周期紊亂，如癌癥，包括激素依賴型癌癥和非依賴激素的癌癥。
可用本發明的化合物、組合物和方法治療的癌癥包括、但不限于心臟肉瘤(血管肉瘤、纖維肉瘤、橫紋肌肉瘤、脂肪肉瘤)、粘液瘤、橫紋肌瘤、纖維瘤、脂肪瘤和畸胎瘤；肺支氣管癌(鱗狀上皮細胞癌、未分化的小細胞癌、未分化的大細胞癌、腺癌)、肺泡(細支氣管)癌、支氣管腺瘤、肉瘤、淋巴瘤、軟骨瘤樣錯構瘤、間皮瘤；胃腸道食道(鱗狀細胞癌、腺癌、平滑肌肉瘤、淋巴瘤)、胃(癌、淋巴瘤、平滑肌肉瘤)、胰腺(導管腺癌、胰島瘤、胰升血糖素瘤、胃泌素瘤、類癌瘤、舒血管腸肽瘤(vipoma))、小腸(腺癌、淋巴瘤、類癌瘤腫瘤、卡波西肉瘤、平滑肌瘤、血管瘤、脂肪瘤、纖維神經瘤、纖維瘤)、大腸(腺癌、管式腺瘤、絨毛狀腺瘤、錯構瘤、平滑肌瘤)、結腸、結腸直腸、直腸；生殖泌尿道腎(腺癌、維耳姆斯瘤[腎母細胞瘤]、淋巴瘤、白血病)、膀胱和尿道(鱗狀細胞癌、移行細胞癌、腺癌)、前列腺(腺癌、肉瘤)、睪丸(精原細胞瘤、畸胎瘤、胚胎性癌、畸胎癌、絨毛膜癌、肉瘤、間質細胞癌、纖維瘤、纖維腺瘤、腺瘤樣瘤、脂肪瘤)；肝臟肝癌(肝細胞癌)、肝膽管型肝癌、肝母細胞瘤、血管肉瘤、肝細胞性腺瘤、血管瘤；骨骨原性肉瘤(骨肉瘤)、纖維肉瘤、惡性纖維組織細胞瘤、軟骨肉瘤、尤文氏肉瘤、惡性淋巴瘤(網狀細胞肉瘤)、多發性骨髓瘤、惡性巨細胞脊索瘤、骨軟骨瘤(osteochronfroma)(骨軟骨性外生骨疣)、良性軟骨瘤、成軟骨細胞瘤、軟骨粘液纖維瘤、骨樣骨瘤和巨細胞瘤；神經系統顱骨(骨瘤、血管瘤、肉芽瘤、黃瘤、畸形性骨炎(osteitis deformans)、腦膜(腦膜瘤、腦脊膜肉瘤(meningiosarcoma)、神經膠質瘤病(gliomatosis))、腦(星形細胞瘤、髓母細胞瘤、神經膠質瘤、室管膜瘤、生殖細胞瘤[松果體瘤]、成膠質細胞瘤多態、少突神經膠質瘤、許旺氏細胞瘤、視網膜母細胞瘤、先天性腫瘤)、脊髓纖維神經瘤、腦膜瘤、神經膠質瘤、肉瘤)；婦科子宮(子宮內膜癌)、宮頸(宮頸癌、腫瘤前期子宮頸非典型增生)、卵巢(卵巢癌[漿液性囊腺癌、粘液性囊腺癌、未分類癌]、顆粒細胞-泡膜(granulosa-thecal)細胞腫瘤、塞-萊二氏細胞瘤、無性細胞瘤、未成熟畸胎瘤)、外陰(鱗狀細胞癌、上皮內癌、腺癌、纖維肉瘤、黑色素瘤)、陰道(透明細胞癌、鱗狀細胞癌、葡萄樣肉瘤(胚胎性橫紋肌肉瘤)、輸卵管(癌)；血液血液(粒細胞性白血病[急性和慢性]、急性淋巴母細胞性白血病、慢性淋巴細胞性白血病、骨髓增生性疾病、多發性骨髓瘤、脊髓發育不良綜合征)、肉芽腫性淋巴瘤病、非霍奇金氏淋巴瘤[惡性淋巴瘤]；皮黑素肉瘤、皮膚基底細胞癌、鱗狀細胞癌、卡波西肉瘤、發育不良痣(moles dysplastic nevi)、脂肪瘤、血管瘤、皮膚纖維瘤、瘢痕瘤、銀屑病；和腎上腺神經母細胞瘤。因此，這里所述的術語“癌細胞”包括罹患上述任何病癥的細胞。
另外，本發明化合物可適于治療癌癥，例如乳腺癌、卵巢癌、子宮內膜癌、肉瘤、黑色素瘤、前列腺癌、胰腺癌等和其它實體腫瘤。
在一個優選實施方案中，本發明化合物用于治療內分泌依賴型癌癥。優選的內分泌依賴型癌癥是乳腺癌、子宮內膜癌、前列腺癌和卵巢癌。
對于一些應用，細胞周期被抑制和/或阻止和/或阻滯，優選其中細胞周期被阻止和/或阻滯。在一個方面，可以在G2/M期抑制和/或阻止和/或阻滯細胞周期。在一個方面，細胞周期可以被不可逆地阻止和/或抑制和/或阻滯，優選其中細胞周期被不可逆地阻止和/或阻滯。
術語“不可逆地阻止和/或抑制和/或阻滯”是指在應用本發明的化合物后，該化合物的效果，即阻止和/或抑制和/或阻滯細胞周期的效果，在該化合物除去時仍然可見。更具體地，術語“不可逆地阻止和/或抑制和/或阻滯”是指，當按照本文所述的細胞周期試驗規程分析時，用感興趣的化合物處理的細胞在規程I的階段2之后的生長弱于對照細胞。該規程的細節在下文提供。
因此，本發明提供了具有以下作用的化合物通過阻止和/或抑制和/或阻滯細胞周期而體外抑制雌激素受體陽性(ER+)和ER陰性(ER-)乳腺癌細胞的生長；和/或使完整動物(即，不切除卵巢)中的亞硝基甲脲(NMU)誘發的乳腺腫瘤退化，和/或阻止和/或抑制和/或阻滯癌細胞的細胞周期；和/或通過阻止和/或抑制和/或阻滯細胞周期而在體內起作用和/或起細胞周期激動劑(cell cycling agonist)的作用。
細胞周期試驗 (規程5) 程序 階段1 以105細胞/孔的密度將MCF-7乳腺癌細胞接種到多孔培養板中。使細胞附著并生長，直到大約30％融合，此時對它們進行如下處理 對照—不處理 感興趣的化合物(COI)20μM 使細胞在含有COI的生長培養基中生長6天，每3天更換培養基/COI。在該時期結束時，使用庫爾特細胞計數器計數細胞數。
階段2 在用COI處理細胞6天之后，以104細胞/孔的密度對細胞再接種。不增加進一步的處理。在生長培養基的存在下，使細胞繼續生長另外6天。在該時期結束之后，再次計數細胞數。
使用癌細胞測定DH活性的試驗 (規程6) 分別在T47D和MDA-MB-231乳腺癌細胞的完整細胞單層中測定雌酮至雌二醇(E1→E2，I型E2DH)以及雌二醇至雌酮(E2→E1，II型E2DH)的轉化率。在燒瓶內培養細胞，直到它們達80～90％融合。在2.5ml培養基中不存在(對照)或存在各種試驗化合物(10μM)的條件下，將3H-E1或3H-E2(6pmol，約90Ci/mmol)加入到每一燒瓶內。還在沒有細胞的燒瓶內加入底物，并且平行孵育(空白)。
在37℃下，與T47D細胞孵育30分鐘或與MDA細胞孵育3小時之后，將2ml的培養基加入到分別含有14C-E2或14C-E1(約500cpm)和50μg E2或E1的試管內。用二乙醚(4ml)從水性培養基中萃取類固醇。在固體二氧化碳-甲醇混合物中冰凍水相之后，將醚相潷析到獨立試管內，在40℃和空氣流下將醚蒸發至干燥。將殘留物溶解在少量的二乙醚中，施加于含有熒光指示劑的TLC板上。使用DCM-乙酸乙酯(41v/v)通過TLC將E1和E2分離。在UV光下進行造影之后，在TLC板上標記來自每一孵育燒瓶的產物的位置。切取標記的區域，放入含有甲醇(0.5ml)的閃爍管內，以洗脫產品。在用閃爍光譜法測定之后，計算所形成的3H-產物的和所回收的14C-E2或14C-E1的量。所形成的產物的量根據程序損耗和每一燒瓶內的細胞數進行校正。
癌癥 如上所述，本發明的化合物可用于治療細胞周期疾病。一種特定的細胞周期疾病是癌癥。
癌癥一直是大多數西方國家的主要死亡原因。迄今開發的癌癥療法包括阻斷激素的作用或合成以抑制激素依賴型腫瘤的生長。然而，目前使用攻擊性較強的化療來治療非依賴激素的腫瘤。
因此，開發用于抗癌治療激素依賴型腫瘤和/或非依賴激素的腫瘤，且不產生與化療有關的一些或全部副作用的藥物，代表了主要的治療進展。
已知，雌激素在其合成后經歷了許多羥基化和綴合反應。直到最近認為，這些反應是代謝過程的一部分，最終使雌激素呈水溶性并增強它們從體內清除。現已明確，一些羥基代謝物(例如2-羥基和16α-羥基)和綴合物(例如雌酮硫酸酯，E1S)在確定雌激素在體內的一些復雜作用中具有重要意義。
研究人員已經調查了2-和16-羥基化雌激素的形成與改變罹患乳腺癌風險的條件之間的關系。現有證據表明，提高2-羥化酶活性的因素與降低的癌癥風險有關，而增加16α-羥基化的那些因素可能提高乳腺癌的風險。有關2-甲氧基雌二醇為具有抗有絲分裂性能的內源性代謝物的證據的不斷增多，已激起了對雌激素代謝物的生物作用的進一步興趣。通過兒茶酚雌激素甲基轉移酶由2-羥基雌二醇(2-OHE2)形成2-MeOE2，所述酶是廣泛分布于人體的一種酶。
研究人員指出，通過皮下注射Meth A肉瘤、B16黑色素瘤或MDA-MB-435雌激素受體陰性(ER-)乳腺癌細胞發現，體內2-MeOE2抑制腫瘤的生長。它還抑制內皮細胞增殖和遷移以及體外血管生成。因此提出，2-MeOE2體內抑制腫瘤生長的能力可能歸因于其能夠抑制腫瘤誘導的血管生成，而非直接抑制腫瘤細胞的增殖。
2-MeOE2發揮其有效抗有絲分裂和抗血管生成作用的機制仍然有待闡明。有證據表明，在高濃度下，它能夠抑制微管聚合，并對秋水仙堿與微管蛋白的結合具有弱抑制劑的作用。但最近，在阻斷有絲分裂的濃度下，細胞內的微管蛋白纖絲沒有發現發生解聚，而是具有在紫杉醇處理后所見到的相同形態。因此，像紫杉醇(用于乳腺癌和卵巢乳腺癌治療的藥物)一樣，2-MeOE2通過穩定微管動力學來起作用。
雖然確將2-MeOE2鑒定為癌癥的新治療劑代表著重要的進展，但是，口服施用的雌激素的生物利用度很低。此外，它們在其第一次通過肝臟期間會經歷廣泛的代謝。作為開發用于治療乳腺癌的類固醇硫酸酯酶抑制劑的研究計劃的一部分，雌酮-3-O-氨基磺酸酯(EMATE)被鑒定為有效的定向活性位點的(active site-directed)抑制劑。出乎意料的是，EMATE證明具有強力的雌激素性能，它在大鼠中的口服親子宮活性(oral ulterotrophic activity)比雌二醇高100倍。其增強的雌激素活性被認為歸因于它被紅血細胞(rbcs)吸收，紅血細胞防止其在通過肝臟期間發生失活，并起到儲庫的作用，使其緩慢釋放，持續延長的時期。合成并測試了許多A環改性的類似物，包括2-甲氧基雌酮-3-O-氨基磺酸酯。雖然該化合物作為類固醇硫酸酯酶抑制劑與EMATE等效，但它缺乏雌激素活性。
我們相信，本發明的化合物提供了用于治療癌癥(尤其乳腺癌)的手段。
另外，或者作為備選(or in the alternative)，本發明的化合物可用于阻斷包括白血病和實體腫瘤(例如乳腺、子宮內膜、前列腺、卵巢和胰腺腫瘤)在內的癌癥的生長。
治療相關的雌激素 我們相信，本發明的一些化合物可用于控制體內(尤其女性體內)的雌激素水平。因此，一些化合物可以用于提供控制生育的手段—例如口服避孕藥片、丸劑、溶液或錠劑。或者，該化合物可以植入物的形式或作為貼片使用。
因此，本發明的化合物可用于治療與雌激素有關的激素病癥。
另外或者作為備選，本發明的化合物可用于治療與雌激素相關的那些病癥以外的激素病癥。因此，本發明的化合物還能夠影響激素活性，還能夠影響免疫應答。
神經變性疾病 我們認為，本發明的一些化合物可用于治療神經變性疾病和類似病癥。
例如，據認為，STS抑制劑可用于增強患有健忘癥、頭部損傷、阿爾茨海默氏病、癲癇性癡呆、早老性癡呆、外傷后癡呆、老年性癡呆、血管性癡呆和中風后癡呆之類的疾病的患者的記憶功能或用于增強另外尋求記憶增進的個體的記憶功能。
TH1 我們認為，本發明的一些化合物可用于TH1問題(implications)。
例如，據認為，STS抑制劑在巨噬細胞或其它抗原呈遞細胞內的存在可以導致致敏T細胞發動TH1(高IL-2、IFNγ，低IL-4)應答的能力降低。其它類固醇(如糖皮質激素)的正常調節作用因此占優勢。
炎癥性疾病 我們相信，本發明的一些化合物可用于治療炎癥性疾病，例如與以下的任何一種或多種有關的疾病自身免疫，例如包括類風濕關節炎、I和II型糖尿病、系統性紅斑狼瘡、多發性硬化癥、重癥肌無力、甲狀腺炎、血管炎、潰瘍性結腸炎和克羅恩氏病；皮膚病，例如銀屑病和接觸性皮炎；移植物抗宿主病；濕疹；哮喘和器官移植后排斥反應。
例如，據認為，STS抑制劑可以防止DHEA或相關類固醇對免疫和/或炎癥反應的正常生理效應。
本發明的化合物可用于制備顯示內源性糖皮質激素樣效應的藥物。
其它治療 還應理解，本發明的化合物/組合物可以具有其它重要醫學意義。
例如，本發明的化合物或組合物可用于治療WO-A-99/52890中所列舉的疾病，即 另外，或者作為備選，本發明的化合物或組合物可用于治療WO-A-98/05635中所列舉的病癥。為了方便參考，現提供該列表的一部分癌癥、炎癥或炎性疾病、皮膚病、發燒、心血管活動、出血、凝血和急性期反應、惡病質、厭食、急性傳染、HIV感染、休克狀態、移植物抗宿主反應、自身免疫病、再灌注損傷、腦膜炎、偏頭痛和阿斯匹林依賴性抗血栓形成；腫瘤生長、侵襲和擴散、血管生成、轉移、惡性病、腹水和惡性胸膜腔積液；腦局部缺血、缺血性心臟病、骨關節炎、類風濕性關節炎、骨質疏松癥、哮喘、多發性腦硬化癥、神經變性、阿爾茨海默氏病、動脈粥樣硬化、中風、血管炎、克羅恩氏病和潰瘍性結腸炎；牙周炎、齒齦炎；銀屑病、特異性皮炎、慢性潰瘍、大皰性表皮松解；角膜潰瘍形成、視網膜病和手術傷口愈合；鼻炎、變應性結膜炎、濕疹、過敏癥；再狹窄、充血性心力衰竭、子宮內膜異位癥、動脈粥樣硬化或內硬化(endosclerosis)。
另外，或者作為備選，本發明的化合物或組合物可用于治療WO-A-98/07859中所列舉的病癥。為了方便參考，現提供該列表的一部分細胞因子和細胞增殖/分化活性；免疫抑制劑或免疫刺激劑活性(例如用于治療免疫缺陷，包括人免疫缺陷病毒感染；調節淋巴細胞生長；治療癌癥和多種自身免疫病，以及防止移植排斥或誘導腫瘤免疫性)；調節造血，例如治療脊髓或淋巴疾病；促進骨、軟骨、腱、韌帶和神經組織的生長，例如用于治愈傷口、治療燒傷、潰瘍和牙周病以及神經變性；抑制或活化促卵泡激素(調節生育力)；趨化/化學趨向活性(例如為使特異性細胞類型移動到損傷或感染部位)；止血和血栓溶解活性(例如用于治療血友病和中風)；抗炎活性(用于治療例如膿毒性休克或克羅恩氏病)；用作抗微生物劑；例如新陳代謝或行為的調節劑；用作鎮痛藥；治療特定營養缺乏病；在人醫或獸醫學中用于治療例如銀屑病。
另外，或者作為備選，本發明的組合物可用于治療WO-A-98/09985中所列舉的病癥。為了方便參考，現提供該列表的一部分巨噬細胞抑制和/或T細胞抑制活性和由此的抗炎活性；抗免疫活性，即對細胞和/或體液免疫應答(包括與炎癥無關的應答)的抑制效應；抑制巨噬細胞和T細胞粘附于細胞外基質組分和纖維粘連蛋白的能力，以及增量調節fas受體在T細胞中的表達；抑制不想要的免疫反應和包括關節炎在內的炎癥，包括類風濕性關節炎，與過敏癥有關的炎癥，過敏反應，哮喘，系統性紅斑狼瘡，膠原病和其它自身免疫病，與動脈粥樣硬化有關的炎癥，動脈硬化，動脈粥樣硬化性心臟病，再灌注損傷，心跳停止，心肌梗塞，血管炎癥性疾病，呼吸困難綜合征或其它心肺疾病，與系消化性潰瘍有關的炎癥，潰瘍性結腸炎和其它胃腸道疾病，肝纖維化，肝硬化或其它肝病，甲狀腺炎或其它腺體疾病，腎小球腎炎或其它腎臟和泌尿科疾病，耳炎或其它耳鼻喉科疾病，皮炎或其它皮膚疾病，牙周病或其它牙科疾病，睪丸炎或副睪-睪丸炎，不育，睪丸外傷(orchidal trauma)或其它免疫相關性睪丸疾病，胎盤功能紊亂，胎盤功能不全，習慣性流產，子癇，先兆子癇和其它免疫和/或炎癥性相關性婦科疾病，后葡萄膜炎，中間體眼色素層炎，前葡萄膜炎，結膜炎，脈絡膜視網膜炎，葡萄膜視網膜炎(uveoretinitis)，視神經炎，眼內炎癥(例如視網膜炎或黃斑囊樣水腫)，交感性眼炎，鞏膜炎，色素性視網膜炎，退行性眼底病(degenerative fondus disease)的免疫和炎癥性部分，眼外傷的炎癥性部分，由感染引起的眼炎，增殖性玻璃體視網膜病變，急性缺血性視神經病，過大的傷疤(例如在青光眼濾過手術后)，對眼植入物的免疫和/或炎癥反應以及其它免疫和炎癥相關性眼科疾病，與自身免疫病有關的炎癥(其中在中樞神經系統(CNS)或任何其它器官中，免疫和/或炎癥抑制是有益的)，帕金森氏病，由治療帕金森氏病所產生的并發癥和/或副作用，愛滋病相關的癡呆合并癥，HIV-相關性腦病，視神經脊髓炎(devic’s disease)，薛登漢氏舞蹈病，阿爾茨海默氏病和其它退行性疾病，CNS疾病或病癥，斯托克斯病的炎癥性部分，脊髓灰質炎后綜合癥，精神障礙的免疫和炎癥性部分，脊髓炎，腦炎，亞急性硬化性全腦炎，腦脊髓炎，急性神經病，亞急性神經病，慢性神經病，格林-巴利綜合癥，薛登漢氏舞蹈癥(chora)，重癥肌無力，假性腦瘤，唐氏綜合癥，亨廷頓病，肌萎縮性側索硬化，CNS壓迫或CNS外傷或CNS感染的炎癥性部分，肌萎縮和營養不良的炎癥性部分，以及中樞和周圍神經系統的免疫和炎癥相關性疾病，外傷后炎癥，膿毒性休克，傳染病，手術的炎癥并發癥或副作用，骨髓移植或其它移植并發癥和/或副作用，基因治療的炎癥和/或免疫并發癥和副作用，例如，由于感染病毒載體，或者與AIDS有關的炎癥，用于壓低或抑制體液和/或細胞免疫應答，用于通過減少單核細胞或淋巴細胞的量而治療或改善單核細胞或白細胞增殖性疾病，例如白血病，在移植天然或人工細胞、組織和器官(如角膜、骨髓、器官、晶狀體、起搏器)、天然或人造皮膚組織的情況下用于預防和/或治療移植排斥。氨基磺酸酯化合物的制備 可通過使適當的醇與適合的氯化物反應來制備本發明的氨基磺酸酯化合物。例如，可通過使適當的醇與式R4R5NSO2Cl的合適氨磺酰氯反應來制備本發明的氨基磺 酸酯化合物。
用于實施反應的典型條件如下所述。
在0℃下，將氫化鈉和氨磺酰氯加入到攪拌的醇的無水二甲基甲酰胺溶液中。隨后，將反應液加熱到室溫，此后繼續攪拌另外24小時。將反應混合物倒入冷的碳酸氫鈉飽和溶液中，所得水相用二氯甲烷萃取。合并的有機萃取物用無水MgSO4干燥。過濾，隨后真空蒸發溶劑，并與甲苯共蒸發，得到粗殘留物，其進一步通過快速色譜純化。
優選地，在與氨磺酰氯反應之前使所述醇適當衍生化。如果需要，可按已知方式保護醇中的官能團，并在反應結束時脫除該一個或多個保護基。
優選地，按照Page等的教導(1990 Tetrahedron 46；2059-2068)制備氨基磺酸酯化合物。
可通過適當結合Page等(1990 Tetrahedron 46；2059-2068)與PCT/GB92/01586的教導來制備膦酸酯化合物。
可通過適當修改Page等(1990 Tetrahedron 46；2059-2068)與PCT/GB92/01586的教導來制備磺酸酯化合物。
可通過適當修改Page等(1990 Tetrahedron 46；2059-2068)與PCT/GB91/00270的教導來制備硫代膦酸酯化合物。
優選的制備方法也在下文中描述。
總結 總之，本發明提供了用作類固醇硫酸酯酶抑制劑和/或類固醇脫氫酶抑制劑的化合物及其藥物組合物。
實施例 下面僅通過舉例的方式來說明本發明。
實施例 概述 乳腺癌是一種在歐洲和北美至關重要的疾病。在英國，乳腺癌致死的人數比任何其它類型癌癥都要多。激素依賴型乳腺癌占絕經后女性病例的約三分之二；它對應于腫瘤的生長和發生依賴于雌激素的一類乳腺癌。
內分泌治療，通過使用抑制雌激素生物合成中的一種或幾種酶促途徑的藥物來控制雌激素循環水平，其針對HDBC。可以考慮不同的靶標，大多數的工作圍繞抗雌激素藥物和芳化酶抑制劑進行。類固醇硫酸酯酶和1型17β-HSD后來作為有效的靶標出現。
雖然已經開發了幾種有效的STS抑制劑，但1型17β-HSD沒有引起同樣多的關注，僅報道了很少的活性分子。根據EMATE的D環衍生物是有效的1型17β-HSD抑制劑的這一事實，我們著手設計和合成具有減低的雌激素活性的EMATE的類似物。這樣得到了一系列其中D環為哌啶二酮部分且N原子攜帶各種側鏈的化合物。
在乳腺癌細胞上進行了抗STS的生物學試驗，揭示了攜帶丙基或吡啶甲基側鏈的衍生物具有極高的活性。它們的效力比EMATE高很多，IC50為1nM。
實驗 1—一般方法 所有化學品購自Aldrich Chemical Co.(Gillingham，Dorset，UK)或LancasterSynthesis(Morecambe，Lancashire，UK)。所有有機溶劑(分析純級)由Fisons pic(Loughborough，U.K.)供應。無水N，N-二甲基甲酰胺(DMF)和N，N-二甲基乙酰胺(DMA)分別用于所有N-烷基化和氨磺酰化反應，購自Aldrich，使用之后在N2正壓下保存。氨磺酰氯通過采用Apel和Berger48的方法來制備，并按Woo等人所述16，以甲苯溶液形式保存。緊鄰使用之前，將適量的該溶液在真空中濃縮。
E1S和E1購自Sigma Chemical Co.(Poole，UK)。[6，7-3H]E1S(比活性，50Ci/mmol)和[4-14C]E1(比活性，52mCi/mmol)購自New England Nuclear(Boston，MA)。[6，7-3H]E1(比活性，97Ci/mmol)得自the Amersham InternationalRadiochemical Centre(Amersham，U.K.)。
在預涂板(Merck TLC鋁片硅膠60F254，Art.No.5554)上進行薄層色譜(TLC)。產物和起始原料(SM)通過在紫外光下觀測來檢測或用磷鉬酸的甲醇溶液處理后加熱來檢測。在硅膠(Sorbsil C60)上進行快速柱色譜。以KBr片，使用Perkin-ElmerSpectrum RXI FT-IR測定紅外光譜，峰位置按cm-1表示。1H NMR和DEPT-edited13C NMR光譜用JMN-GX 400 NMR光譜儀記錄，化學位移按相對于內標四甲基硅烷(TMS)的百萬分率(ppm，δ)記錄。使用以下縮寫來描述1H NMR和13C NMR譜的共振br，寬峰；s，單峰；d，雙重峰；t，三重峰；q，四重峰；m，多重峰；及其組合，例如dd，兩個雙重峰。AB系統的化學位移(δA和δB)通過取每一個雙重峰的中值和標記為JAB或JBA的相應耦合常數來約計。例如，根據在化合物21的附錄2中所示的化學式計算δA和δB。在配備Waters 996 PDA檢測器的WatersMillenium32儀器上進行HPLC分析。在2mL/min的甲醇/水梯度洗脫下，經WatersRadialpack C18，8×100cm柱記錄痕量物質(traces)。在Bath大學的the MassSpectrometry Service Center記錄質譜。使用間硝基芐醇(NBA)作為基質來進行FAB-MS，由Bath大學的the Microanalysis Service完成元素分析。使用Reichert-JungThermo Galen Kofler block測定熔點，未經校正。
3-芐氧基-雌酮
在N2氣氛下，于0℃將氫化鈉(60％礦物油分散體，0.68g，20.34mmol)加入到攪拌的雌酮(5.0g，18.49mmol)的無水DMF(50mL)溶液中，將所得懸浮液攪拌1小時。然后加入芐基溴(2.42mL，20.34mmol)，將該反應混合物在80℃下加熱4小時。將所得溶液倒入冰/水中，將所分離的有機級分萃取到乙酸乙酯(150mL)中，用水(4×50mL)洗滌，干燥(MgSO4)，過濾，在真空中蒸發。所得淺黃色粗產物從異丙醇中重結晶，獲得白色片狀晶體3-芐氧基-雌酮(4.73g，71％)mp 129-131℃[文獻26(石油醚)132-134℃]。IR(KBr)vmax3100，2950-2840，1730，1600，1500cm-1。1H NMR(CDCl3)δ 0.91(3H，S，C-18-H3)，1.41-2.54(13H，m)，2.86-2.93(2H，m，C-6-H2)，5.04(2H，s，OCH2Ar)，6.73(1H，d，J＝2.5Hz，C-4-H)，6.80(1H，dd，J＝8.6Hz and J＝2.5Hz，C-2-H)，7.20(1H，d，J＝8.6Hz，C-1-H)和7.30-7.44(5H，m，C6H5)。
3-芐氧基-馬連酸
將碘(7.6g，29.94mmol)在95mL MeOH中的溶液和KOH(13.7g)在27mL水和61mLMeOH中的溶液交替地滴加到2-芐氧基雌酮(3.8g，10.54mmol)的MeOH(1L)攪拌溶液中，以使該混合物的顏色保持橙色/棕色。加樣進行45分鐘，將所得淺黃色溶液在氮氣氛下于室溫攪拌過夜。然后將該混合物濃縮，倒入水(800mL)中。在用5M HCl酸化后，將有機級分萃取到醚(600mL)中，用硫代硫酸鈉水溶液(4×100mL)、水(4×100mL)洗滌，干燥(MgSO4)，過濾，并真空蒸發。然后將所得黃色泡沫(4.54g)溶于KOH(7.6g)在MeOH/H2O 1:2(228mL)中的溶液中，加熱至回流保持4小時。將最終的棕色混合物倒入水中(800mL)中，在用5M HCl酸化之后，將有機物萃取到乙酸乙酯(300mL)中。在用鹽水(4×200mL)洗滌后，對有機層進行干燥(MgSO4)，過濾，真空蒸發，獲得黃色殘留物(4.32g)。將它從氯仿/己烷5:3中重結晶，獲得奶油色粉末狀3-芐氧基-馬連酸(3.25g，75％)mp 212-215℃[文獻18(甲醇水溶液)226-227℃]IR(KBr)vmax3050-2650，1700，1600-1500cm-1。1H NMR(DMSO-d6)δ1.02(3H，s，C-18-H3)，1.20-2.78(11H，m)，2.72-2.76(2H，m，C-6-H2)，5.05(2H，s，OCH2Ar)，6.68(1H，d，J＝2.5Hz，C-4-H)，6.75(1H，dd，J＝8.7Hz和J＝2.5Hz，C-2-H)，7.18(1H，d，J＝8.7Hz，C-1-H)，7.30-7.42(5H，m，C6H5)和12.14(2H，s，CO2H)；13C NMR(DMSO-d6)δ 15.4(q)，25.8，26.5，29.7，35.8，36.1(全部t)，40.7，41.8，42.5(全部d)，46.2(s)，68.9(t)，112.3，114.0，126.3，127.3(2x)，127.5，128.2(2x)(全部d)，131.6，137.2(2x)，156.0，173.9和178.6(全部s)。MS m/z(FAB+)408.2[41，M+]，91.1[100，(CH2Ar)+]。HRMS m/z(FAB+)C25H28O5的計算值408.1937；實測值408.1940。
3-芐氧基-16，17-裂環(seco)-雌-1，3，5(10)-三烯-16，17-酰亞胺
在氮氣氛下，于180℃將3-芐基-馬連酸(3.25g，7.96mmol)和尿素(3.25g，54.11mmol)加熱45分鐘。將所得棕色殘留物破碎，加入丙酮(200mL)，獲得棕色懸浮液。將該混合物濃縮至大約100mL，加入硅膠，去除溶劑。將所得粉末轉移到快速色譜柱上。用氯仿/丙酮(96∶4)洗脫，獲得白色固體狀3-芐氧基-16，17-裂環-雌-1，3，5(10)-三烯-16，17-酰亞胺(2.75g，89％)。為了分析，將樣品從EtOH中重結晶，獲得無色針狀物mp225-226℃。IR(KBr)vmax3260，2900-2870，1720，1700，1600-1500cm-1。1H NMR(DMSO-d6)δ 1.09(3H，s，C-18-H3)，1.20-2.72(11H，m)，2.76-2.80(2H，m，C-6-H2)，5.05(2H，s，OCH2Ar)，6.72(1H，d，J＝2.5Hz，C-4-H)，6.76(1H，dd，J＝8.7Hz和J＝2.5Hz，C-2-H)，7.19(1H，d，J＝8.7Hz，C-1-H)，7.31-7.44(5H，m，C6H5)和10.63(1H1s，NH)；13C NMR(DMSO-d6)δ 16.2(q)，25.1，25.2，29.2，32.4，32.7(全部t)，37.8，40.3(全部d)，40.5(s)，41.9(d)，68.9(t)，112.2，114.1，126.0，127.3(2x)，127.4，128.2(2x)(全部d)，131.5，137.0，137.1，156.0，172.1和178.9(全部s)。MSm/z(FAB+)390.2[58，(M+H)+]，91.1[100，(CH2Ar)+]。HRMS m/z(FAB+)C25H28NO3的計算值390.2069。實測值390.2059。C25H27NO3的分析計算值C，77.09；H，6.99；N，3.60。實測值C，76.90；H，6.99；N，3.73。
3-芐氧基-N-(3，3，3-三氟丙基)-16，17-裂環-雌-1，3，5(10)-三烯-16，17-酰亞胺(CMS01179)C28H30F3NO3MW 485.54
向3-芐氧基-16，17-裂環-雌-1，3，5(10)-三烯-16，17-酰亞胺(2.0g，5.14mmol)的無水乙腈(250mL)溶液中加入碳酸鉀(0.780g，5.66mmol，1.1eq)、碘化鉀(0.1g)、3-溴-1，1，1-三氟丙烷(1.61g，10.3mmol，2eq)和18-冠醚(crown)-6(2.98g，11.31mmol，2.2eq)，將該反應液在82℃下加熱24小時。在冷卻和蒸發乙腈后，將所得的橙色泡沫再溶解于乙酸乙酯(220mL)中，用鹽水(2×200mL)洗滌，經硫酸鎂干燥，蒸發。急驟層析法(200g二氧化硅，使用5cm φ柱子，用20％乙酸乙酯/己烷沖洗)洗脫得到標題化合物(1.36g，54％)，為白色結晶固體； mp 180-182℃； Rf0.52(20％乙酸乙酯/己烷)； 1H NMR(270MHz，CDCl3)δ 1.38(3H，s，18-CH3)，1.10-2.00(6H，m)，2.20-2.50(6H，m)，2.80-2.90(2H，m)，2.97(1H，dd，J＝4.7和8.3Hz)3.90-4.20(2H，m，CH2-CF3)，5.02(2H，s，O-CH2)6.71(1H，d，J＝2.7Hz，4-CH)，6.79(1H，dd，J＝2.7和8.5Hz，2-CH)和7.20(1H，d，J＝8.5Hz，1-CH)和7.30-7.50(5H，m，5x ArH)； 13C NMR(67.9MHz，CDCl3)δ 16.8(CH3)，25.5，25.8和29.7(全部CH2)，31.9(q，J＝29.3Hz，CH2CF3)，33.3，33.5和33.7(全部CH2)，38.6和40.3(都是CH)，41.6(CH2)，42.5(CH)，70.0(O-CH2)，112.8，114.7和126.4(全部CH)，127.5(2 x CH)，128.0(CH)和128.7(2 x CH)，131.6，137.1，137.5，157.1，171.6和178.2(全部C)； 19F NMR(376MHz，CDCl3)δ-65.30(3F，t，J＝10.53Hz CF3)； HPLC(CH3CN的70％H2O溶液)tr＝XXX(100％)； LCMS(AP-)，m/z 394.26(M-，100％)。
C28H30F3NO3的分析計算值C69.26，H6.23，N2.28。實測值C，H，N％。3-羥基-N-(3，3，3-三氟丙基)-16，17-裂環-雌-1，3，5(10)-三烯-16，17-酰亞胺(CMS01181，STX1937) C21H24F3NO3 MW 395.42
在氫氣氛下，將3-芐氧基-N-(3，3，3-三氟丙基)-16，17-裂環-雌-1，3，5(10)-三烯-16，17-酰亞胺(1.10g，2.27mmol)與10％Pd/C(0.10g)在甲醇(40mL)和四氫呋喃(40mL)中的溶液攪拌3小時。在通過硅藻土墊過濾去除催化劑之后，蒸發溶劑，獲得白色固體。重結晶(二乙醚/己烷)，獲得標題化合物(0.870g，97％)，為白色結晶固體； mp194-196℃； Rf0.41(20％乙酸乙酯/己烷)； 1H NMR(270MHz，CDCl3)δ 1.16(3H，s，18-CH3)；1.20-1.60(3H，m)，1.65-2.00(3H，m)，2.20-2.50(6H，m)，2.80-2.90(2H，m)，2.96(1H，dd，J＝4.7和8.3Hz)，3.90-4.20(2H，m，CH2-CF3)，6.57(1H，d，J＝2.5Hz，4-CH)，6.64(1H，dd，J＝2.5和8.4Hz，2-CH)and 7.15(1H，d，J＝8.4Hz，1-CH)； 13C NMR(67.9MHz，CDCl3)δ 16.3(CH3)，25.5，25.7和29.5(全部CH2)，31.9(q，J＝28.7Hz，CH2CF3)，33.2(q，J＝3.1Hz，CH2CH2CF3)，33.5和33.7(都是CH2)，38.6和40.2(都是CH)，41.6(C)，42.4(CH)，113.1和115.0(都是CH)，預計126.0(q，J＝276.8Hz，CF3)，但不存在，126.5(CH)，131.4，137.4，153.6，171.6和178.4(全部C)； 19F NMR(376MHz，CDCl3)δ-65.341(3F，t，J＝10.52Hz，CF3)； HPLC(70％CH3CN水溶液)tr＝2.58min(95.15％)； LCMS(AP-)，m/z 394.26(M-，100％)。
C21H24F3NO3的分析計算值C63.79，H6.12，N3.52。實測值C，H，N％。
HRMS(ES+)實測值396.1765；C21H25F3NO3(M+H)+理論值396.1781。
3-氨磺酰(sulfomoyl)氧基-N-(3，3，3-三氟丙基)-16，17-裂環-雌-1，3，5(10)-三烯-16，17-酰亞胺(CMS01188，STX1938) C21H25F3N2O5S MW 474.49
室溫下，將0.6M氨磺酰氯的甲苯(5.80mL，3.50mmol，2.5eq.)溶液減壓蒸發。將所得白色固體溶于無水N，N-二甲基乙酰胺(2.5mL)中，在氮氣下冷卻至0℃。向該攪拌溶液中滴加3-羥基-N-(3，3，3-三氟丙基)-16，17-裂環-雌-1，3，5(10)-三烯-16，17-酰亞胺(0.55g，1.39mmol)的N，N-二甲基乙酰胺(2.5mL)溶液，然后除去外部冷卻，使反應液溫熱到室溫過夜。所得淺棕色懸浮液用乙酸乙酯(50mL)稀釋，用飽和氯化銨水溶液(3×50mL)和鹽水(50mL)洗滌，然后經無水硫酸鎂干燥，過濾，減壓蒸發。將所得膠溶于最小量的二氯甲烷(5mL)中，加入二乙醚(25mL)，然后按小份加入己烷(100mL)，以引發沉淀。重結晶(二氯甲烷/己烷)，獲得標題化合物(0.584g，88％)，為白色結晶固體； mp 192-194℃； Rf0.18(20％乙酸乙酯/己烷)； 1H NMR(270MHz，CDCl3)δ 1.16(3H，s，18-CH3)，1.20-2.00(6H，m)，2.20-2.50(6H，m)，2.85-2.95(2H，m)，2.96(1H，dd，J＝4.7和8.3Hz)3.92-4.15(2H，m，CH2-CF3)，4.97(2H，s，NH2)，7.05(1H，d，J＝2.5Hz，4-CH)，6.64(1H，dd，J＝2.5和8.5Hz，2-CH)和7.15(1H，d，J＝8.5Hz，1-CH)； 13C NMR(67.9MHz，CDCl3)δ16.3(CH3)，25.3，25.4and29.3(全部CH2)，31.9(q，J＝29.1Hz，CH2CF3)，33.2(q，J＝3.8Hz，CH2CH2CF3)，33.4和33.5(都是CH2)，38.0和40.2(都是CH)，41.4(C)，42.6(CH)，119.3和121.8(都是CH)，126.0(q，J＝276.8Hz，CF3)，126.8(CH)，138.2，138.25，148.1，171.3和178.1(全部C)； 19F NMR(376MHz，CDCl3)δ-65.317(3F，t，J＝10.52Hz，CF3)； HPLC(90％CH3CN水溶液)tr＝1.070s(1.45％)tr＝1.921s(98.55％)； LCMS(ES-)，m/z 473.16(M-H-，100％)。
HRMS(ES+)實測值497.1325；C21H25F3N2NaO5S(M+Na)+理論值497.1334。HRMS(FAB+)XXX(M)+的計算值，實測值； C21H25F3N2O5S的分析計算值C 53.16，H 5.13，N 5.90。實測值C，H，N％。本發明化合物與已知的類固醇硫酸酯酶抑制劑的IC50值比較 在JEG-3細胞中測定STX1938的IC50值。STX1938的IC50值是35pM，而與之相比，在相同分析中所測定的STX213的IC50值是180pM。
示出STX1938和STX213的結構用于比較
圖2示出了單劑量口服STX1938后15天大鼠肝臟的STS活性的抑制率。作為比較，STX213 STS活性已經恢復69％，即，僅保持31％抑制率。
STX1938的體內效力 試驗程序 MCF-7STS細胞(超表達STS的細胞) 在含有10％FCS的RPMI中常規培養MCF-7細胞。將STS的cDNAs克隆到含有抗新霉素基因的pCI-NeO載體中，并轉染到MCF-7細胞中。使用G418選擇穩定的克隆，建立細胞系，評價酶的表達和活性。
小鼠 從Harlan Olac獲得切除卵巢的無胸腺雌性MF-1裸鼠(nulnu)(6～8周齡)。在孵育MCF-7STS細胞之前24小時，給動物皮下注射雌二醇硫酸酯(E2S)。在孵育當天，將5×106MCF-7STS細胞(50μl，含于Matrigel中)皮下注射到小鼠的右脅腹。在細胞孵育之后，給小鼠注射E2S(100μg/50μl)，24小時后，另一次注射這些類固醇。然后小鼠每周接受3次E2S，直到研究結束為止。當腫瘤已達到大約80mm3時，通過口服給與1mg/kg的化合物(100μl；載體10％THF90％丙二醇)來起動給藥。每周記錄腫瘤測量值和動物的體重。在停止劑量給藥后的多個時間點采集腫瘤和肝臟組織的樣本以及血液樣本。
研究1 在研究期內，小鼠每周5/7天口服給與0.1mg/kg、1mg/kg和10mg/kg的STX1938。
研究2 為了比較STX1938與STX64的效力，經口服每周給與小鼠一次1mg/kg的任一(either)化合物，共計7周。
腫瘤 每周測量腫瘤，使用公式長度×寬度2/2來計算它們的體積。
STS活性測定 將腫瘤或肝臟組織的樣本在磷酸鹽緩沖鹽水(pH7.4，含有250mM蔗糖)中勻漿。一式兩份的等分試樣用由未標記底物(Sigma，Dorset Poole，UK)調至20μM最終濃度的[3H-E1S](53Ci/mmol，2-3nM，Perkin Elmer，Boston MA)孵育4小時。將[4-14C]雌酮納入反應混合物中，以監控程序損耗(procedural losses)。在孵育期結束時，通過甲苯分配將產物雌酮從反應混合物中分離出來。除去等份的甲苯，通過液體閃爍光譜法測定3H和14C的放射性。由檢測到的3H計數計算水解的雌酮硫酸酯的質量，按程序損耗進行校正。
血漿雌二醇濃度 通過特異性放射免疫測定程序測定血漿雌二醇濃度。
數據分析 使用學生t檢驗評價不同組的腫瘤體積差異的顯著性。
結果 研究1 給與1mg/kg和10mg/kg的STX1938顯著降低了裸鼠中E2S刺激的腫瘤的生長(圖3)。1mg/kg和10mg/kg劑量下的腫瘤STS活性幾乎完全被抑制(圖4)。
研究2 雖然每周一次給藥STX1938顯著降低了腫瘤的生長，但在該給藥時間表下，STX64是無效的(圖5)。每周一次給藥STX1938導致幾乎完全抑制了腫瘤(圖7)和肝臟(圖6)STS。在給藥結束后，該酶的活性繼續被抑制達一段延長時間。相反，在該給藥時間表下，STX64僅僅將肝臟和腫瘤的STS活性降低25～50％。在停止給藥STX1938之后，血漿雌二醇水平顯著降低達一段延長時間(圖8)。
總結 STX1938是有效的STS抑制劑，在1mg/kg和10mg/kg的劑量下，顯著抑制了源自超表達STS的MCF-7乳腺癌細胞的、E2S刺激的異種移植物的生長。腫瘤STS活性幾乎完全被STX1938所抑制。
當按每周一次的給藥時間表給與STX1938時，其能夠阻斷源自超表達STS的MCF-7乳腺癌細胞的、E2S刺激的異種移植腫瘤的生長。腫瘤和肝臟STS活性也完全被抑制。當每周一次給藥時，STX1938比STX64效力更大，其原因被認為是，STX1938在體內的作用持續時間長于STX64。這表明，STX1938適合開發為每周給藥一次的治療劑。
以上說明書中提到的所有出版物、專利和專利申請通過引用并入本文。
不脫離本發明的精神和范圍的各種修改和變型對于本領域技術人員來說是顯而易見的。雖然結合具體的優選實施方案描述了本發明，但應理解，要求保護的本發明不應過度局限于這些具體實施方案。事實上，為實施發明而對上述方案所進行的對于化學、生物或相關領域的技術人員來說顯而易見的各種修改均落入隨附權利要求的范圍內。
縮寫

埃 Ac 乙酰基 Acc MS 精確質譜 Adiol雄烯二醇 Adione 雄烯二酮 AG 氨魯米特(aminogluthethimide) aq 含水的 Ar 芳基 arom 芳族的 BMA 3-芐基-馬連酸 Bn 芐基 br 寬峰 ℃ 攝氏度 13C NMR 碳核磁共振 ca 大約 cm 厘米 COUMATE 4-甲基香豆素-7-O-氨基磺酸酯 δ化學位移，ppm d雙重峰 dd 兩個雙重峰 DHEA 脫氫表雄酮 DMF 二甲基甲酰胺 DMSO 二甲亞砜 E1 雌酮 E2 雌二醇 EMATE雌酮-3-O-氨基磺酸酯 ER 雌激素受體 eq 當量 FAB 快速原子轟擊 g克 h小時 hER 人雌激素受體 1H NMR 質子核磁共振 HPLC 高壓液相色譜 17β-HSD 17β-羥基類固醇脫氫酶 Hz赫茲 IC50 50％抑制濃度 IR紅外 J 耦合常數，Hz λmax 最大吸收波長 Lit. 參考文獻 μ 微 m 多重峰 M 摩爾/升 m-NBA 間硝基芐醇 m-RNA 信使核糖核酸 MHz 兆赫茲 min 分鐘 mmol 毫摩爾 mol 摩爾 mp熔點 MS質譜 m/z 質荷比 NADPH 煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸 nM納摩爾 NMR 核磁共振 ppm 百萬分率 Rf保留因子 r.t. 室溫 S.D. 標準偏差 Pd-C 鈀-活性炭 TBAF 四丁基氟化銨 TBDMS 叔丁基二甲基甲硅烷基 THF 四氫呋喃 TLC 薄層色譜法 TMS 四甲基硅烷 v 信號的頻率，Hz vs 對
參考文獻
(1)Saunders，C.M.；Baum，M.Management of early breast cancer.Oncol.in Pract.1994，3，4-8
(2)Nicholls P.J.Breast cancer managementscience and care together.Pharm.J.1997，259，459-470
(3)Miller，B.A.；Kolonel，L.N.；Bernstein，L.；Young，Jr.J.L.；Swanson，G.M.；West，D.；Key，C.R.；Liff，J.M.；Glover，C.S.；Alexander，G.A.；et al.(eds).Racial/Ethnicpatterns of cancer in the united states 1988-1992.National Cancer Institute 1996
(4)(a)Kaae，S.and Johansen，H.Does simple mastectomy followed by irradiation offerthe survival comparable to radical procedures？International Journal of RadiationOncology，Blology，Physics.1977，2，1163-1166(b)Holli，K.；Saaristo，R.；lsola，J.；Joensuu，H.and Hakama，M.Lumpectomy with or without postoperative radiotherapyfor breast cancer with favourable prognostic featuresresults of a randomised study.Br.J.Cancer 2001，84(2)，164-169
(5)Early Breast Cancer Trialists’Collaborative Group.Effects of adjuvant Tamoxifenand of cytotoxic therapy on mortality in early breast cancer.N.Eng.J.Med.1988，319，1681-1692
(6)Gorski，J.；Toft，D.；Shyamala，G.；Smith，D.；Notides，A.Hormones receptorsstudies on the interaction of estrogens with the uterus.Recent Prog.Horm.Res.1968，24，45-80
(7)Gorski，J.and Gannon F.Current models of steroid hormone actiona critique.Ann.Rev.Physiol.1976，38，425-450
(8)Coulson，C.J.Steroid biosynthesis and action，2ndedition.Molecular Mechanism ofDrug Action.1994，95-122
(9)(a)Horwitz，K.B.and McGuire，W.L.Nuclear mechanism of estrogen actioneffects of oestradiol and anti-estrogens on estrogens receptors and nuclear receptorprocessing.J.Biol.Chem.1978，253，8185-8191(b)Horwitz，K.B.；Koseki，Y.andMcGuire，W.L.Oestrogen control of progesterone receptor in human breat cancerroleof oestradiol and antiestrogen.Endocrinology 1978，103，1742-1751
(10)(a)Jordan，V.C.The strategic use of antiestrogens to control the developmentand growth of breast cancer.Cancer，1992，70，977-982(b)Powles，T.J.Breastcancer prevention Breast Cancer Res.2000，2，10-12
(11)Wakeling，A.E.；Bowler，J.Steroidal pure antiestrogens.J.Endocrinol.1987，112，R7-R10
(12)Sexton，M.J.；Gherman，R.B.Selective estrogen receptor modulatorsthe idealestrogen replacement？Prim.Care.Update Ob/Gyns 2001，8(1)，25-30
(13)Agnusdei，D.；Liu-Leage，S.；Augendre-Ferrante，B.Ann.Endocrinol.1999，60(3)，242-246
(14)John Smith，H.；Nicholls，P.J.；Simons，C.；Le Lain，R.Inhibitors ofsteroidogenesis as agents for the treatment of hormone-dependent breast cancer.Exp.Opin.Ther.Patents 2001，11，789-824
(15)(a)Castiglione-Gertsch，M.New aromatase in hibitorsmore selectivity，less toxicity，unfortunately，the same activity.Eur.J.Cancer 1996，32A，393-395(b)Miller，W.R.Aromatase inhibitors-where are we now？Br.J.Cancer 1996，73，415-417
(16)Santner，S.J.；Feil，P.D and Santen，R.J.In situ estrogen production via theoestrone sulphatase pathway in breast tumourrelative importance vs the aromatasepathway.J.Clin.Endocrin.Metab.1984，59，29-33
(17)Purohit，A.Williams，G.J.；Howarth，N.M.；Potter，B.V.L.and Reed，M.J.Inactivation of steroid sulphatase by an active site-directed inhibitor，estrone-3-O-sulfamate.Biochem.1995，34，11508-11514
(18)Purohit，A.；Williams，G.J.；Roberts，C.J.；Potter，B.V.L.；Reed，M.J.In vivcinhibition of oestrone sulphatase and dehydroepiandrosterone sulphatase by estrone-3-O-sulfamate.Int.J.Cancer 1995，62，106-111
(19)Woo，L.W.L.；Howarth，N.M.；Purohit，A.；Hejaz，H.A.M.；Reed，M.J.andPotter，B.V.L.Steroidal and nonsteroidal sulfamates as potent inhibitors of steroidsulphatase.J.Med.Chem.1998，41，1068-1083
(20)Purohit，A.；Woo，L.W.L.；Singh，A.；Winterborn，C.J.；Potter，B.V.L.andReed，M.J.Invivo activity of 4-methylcoumarin-7-O-sulfamate，a non steroidal，norestrogenic steroid sulphatase inhibitor.Cancer Res.1996，56，4950-4955
(21)(a)Woo，L.W.L.；Purohit，A.；Malini，B.；Reed，M.J.and Potter，B.V.L.Potenactive site-directed in hibition of steroid sulphatase by tricyclic coumarin-basedsulfamates.Chemistry & Biology 2000，7，773-791(b)Malini，B.；Purohit，A.Ganeshapillai，D.；Woo，L.W.L.；Potter，B.V.L.；Reed，M.J.Inhibition of steroidsulphatase activity by tricyclic coumarin sulfamates.J.Steroid Biochem.Molec.Biol2000，75，253-25(c)Purohit，A.；Woo，L.W.L.；Barrow，D.；Hejaz，H.A.M.Nicholson，R.I.；Potter，B.V.L.；Reed，M.J.Non-steroidal and steroidal sulfamatesnew drugs for cancer therapy.Mol.Cell.Endocrinol.2001，171，129-135
(22)Purohit，A.；Woo，L.W.L；Potter，B.V.L.；Reed，M.J.In vivo inhibition ofoestrone sulphatase activity and growth of nitrosomethylurea-induced mammarytumours by 667 COUMATE.Cancer Res.2000，60，3394-3396
(23)Claussner，A.；Nédelec，L.；Nique，F.；Philibert，D.；Teush，G.；Van de Velde，P.11β-Amidoalkylestradiols as new series of pure anti-estrogens.J.Steroid.Biochem.1992，41，609-614
(24)Li，P-K.；Chu，G-C.；Guo，J.P.；Selcer，K.W.Development of potent non-estrogenic oestrone sulphatase inhibitors.Steroids 1998，63，425-432
(25)(a)Jin，J-Z.；Lin，S-X.Human estrogenic 17β-hydroxysteroid dehydrogenasepredominance of oestrone reduction and its induction by NADPH.Biochem.Biophys.Res.1999，259，489-493(b)Penning，T.M.Molecular endocrinology of hydroxysteroiddehydrogenases.Endocrine Reviews 1997，18，281-305
(26)(a)Labrie，F.At the cutting edge.Intracrinology.Mol.Cell.Endocrinol.1991，78，C113-C118(b)Poulin，R.；Labrie，F.Stimulation of cell proliferation and estrogenicresponse by adrenal C19-？5-steroids in the ZR-75-1 Human Breast Cancer Cell Line.Cancer Res.1986，46，4933-4937
(27)(a) Peltoketo，H.；Luu-The，V.；Simard，J.；Adamski，J.17β-hydroxysteroiddehydrogenase(HSD)/17-ketosteroid reductase(KSR)family；nomenclature and maincharacteristics of the 17 HSD/KSR enzymes.J.Mol.Endocrinol.1999，23，1-11(b)Peltoketo，H.；Isomaa，V.；Maentausta，O.；Vihko，R.Complete amino acid sequence ofhuman placental 17β-hydroxysteroid dehydrogenase deduced from cDNA.FEBS Lett.1988，239，73-77(c)Wu，L.；Einstein，M.；Geissler，W.M.；Chan，H.K.；Elliston，K.O.；Andersson，S.Expression cloning and characterization of human 17β-hydroxysteroiddehydrogenase type 2，a microsomal enzyme possessing 20α-hydroxysteroiddehydrogenase activity.J.Biol.Chem.1993，268，12964-12969(d)Geissler，W.M.；Davis，D.L.；Wu，L.；Bradshaw，K.D.；Patel，S.；Mendonca，B.B.；Elliston，K.O.；Wilston，J.D.；Russell，D.W.；Andersson，S.Male pseudohermaphroditism caused bymutation of testicular 17β-hydroxysteroid dehydrogenase 3.Nat.Genet.1994，7，34-3g(e)Adamski，J.；Normand，T.；Leenders F.；Monte，D.；Begue，A.；Stehelin，D.；Jungblut，P.W.；de Launoit，Y.Molecular cloning of a novel widely expressed human80 kDa 17β-hydroxysteroid dehydrogenase IV.Biochem.J.1995，311，437-443(f)Deyashiki，Y.；Ohshima，K.；Nakanishi，M.；Sato，K.；Matsuura，K.；Hara，A.Molecularcloning and characterization of mouse oestradiol 17β-dehydrogenase(A-specific)，amember of the aldoketoreductase family.J.Biol.Chem.1995，270，10461-10467
(28)Tremblay，M.R.；Auger，S.and Poirier，D.Synthesis of 16-(bromoalkyl)-estradiolshaving inhibitory effect on human placental oestradiol 17β-hydroxysteroiddehydrogenase(17β-HSD type 1).Bioorg.Med.Chem.1995，3，505-523
(29)Tremblay，M.R.；Poirier，D.Overview of a rational approach to design type I 17β-hydroxysteroid dehydrogenase inhibitors without estrogenic activitychemical synthesisand biological evaluation.J.Steroid.Biochem.1998，66，179-191
(30)Collins，B.M.；Mac Lachlan，J.A.；Arnold，S.F.The estrogenic and anti-oestrogenic activities of phytochemicals with the human estrogen receptor expressed inyeast.Steroids 1997，62，365-372
(31)(a)Makela，S.；Poutanen，M.；Kostian，M.L.；Lehtimaki，N.；Strauss，L.；Santti，R.；Vihko，R.Inhibition of 17 beta-hydroxysteroid oxidoreductase by flavonoids in breastand prostate cancer cells.Proc.Soc.Exp.Biol.Med.1998，217，310-316
(32)LeBail，J.C.；Laroche，T.；Marre-Fournier，F.；Habrioux，G.Aromatase and 17β-hydroxysteroid dehydrogenase inhibition by flavonoids.Cancer Lett.1998，133，101-106
(33)Coldham，N.G.；James，V.H.T.A possible mechanism for increased breast cellproliferation by progestins through increased reductive 17β-hydroxysteroiddehydrogenase activity.Int.J.Cancer 1990，45，174-178
(34)Purohit，A.；Hejaz，H.A.M.；Walden，J.；MacCarthy-Marrogh，L.；Packam，G.；Potter，B.V.L.；Reed，M.J.The effect of 2-methoxyestrone-3-O-sulphamate on thegrowth of breast cancer cells and induced mammary tumours.Int.J.Cancer 2000，85，584-589
(35)Heer，J.；Miescher，K.
Steroide.Marrianol-und
oestrogene
II.Helv.Chim.Acta 1945，28，156-165
(36)(a)Matkovics，B.；
，B.；Baláspiri，L.Rearangement of steroids，VII.Schmidtreaction and Beckmann rearrangement of oestrone and its derivatives.Acta Chim.Acad.Scien.Hung.1974，80，79-87(b)Regan，B.M.；Newton Hayes，F.17-and 17-Aza-D-homosteroids.J.Am.Chem.Soc.1956，78，639-643
(37)Gupta，R.and Jindal，D.P.Synthesis and biological activity of some D-ringmodified oestrone derivatives.Ind.J.Chem.1999，38B，563-571
(38)Love，B.and Dawson，C.R.Alkylphenols related to the poison ivy principle.Animproved method of synthesis involving the Na-Butanol cleavage of benzyl ethers.J.Am.Chem.Soc.1956，78，6095-6101
(39)Okada，M.；Iwashita，S.；Koizumi，N.Efficient general method for sulfamoylation ofa hydroxyl group.Tet.Lett.2000，41，7047-7051.
(40)C.A.Hioruchi & J.Y.Satoh，Regioselective 2-lodination of Estradiol，Estriol &Oestrone，J.Chem.Soc.，Chem.Commun.，1982，671-672.
(41)M.Numazawa and Y.Ogura，J.Chem Soc.，Chem.Commun.1983，9，533.
(42)Williams，G.J.；Woo，L W.L.；Mahon，M.F.；Purohit，A.；Reed，M.J.；Potter，B.V.L.X-ray crystal structure and mechanism of action of oestrone 3-O-sulphamate，asynthetic active site-directed inhbitor of oestrone sulphatase.Pharm.Sci.1996，2，11-16
(43)Ghosh，D.；Pletnev，V.Z.；Zhu，D-W.et al.Structure of the human estrogenic 17beta-hydroxysteroid dehydrogenase at 2.20
resolution.Structure，1995，3，503-513
(44)(a)Lin，S.X.；Han，Q.；Azzi，A.；Zhu，D-W.；Gongloff，A.；Campbell，R.L.3Dstructure of human estrogenic 17β-HSDbinding with various steroids.J.SteroidBiochem.Mol.Biol.1999，69，425-429(b)Puranen，T.；Poutanen，M.；Ghosh，D.；Vihko，R.and Vihko，P.Origin of substrate specificity of human and rat 17β-hydroxysteroid dehydrogenase Type 1，using chimeric enzymes and site-directedsubstitutions.Endocrinology 1997，138，3532-3539
(45)Breton，R.；Housset，D.；Mazza，C.；Fontecilla-Camps，J.C.The structure of acomplex of human 17β-hydroxysteroid dehydrogenase with oestradiol and NADP+identifies two principal targets for the design of inhibitors.Structure(Lond)1996，4，905-915
(46)Apel，R.；Berger，G.
das hydrazidosulfamid Chem.Ber.1958，91，1339-1341
(47)Woo，L.W.W.；Lightowler，M.；Purohit，A.；Reed，M.J.；Potter，B.V.L.Heteroatom-substituted analogues of the active-site directed inhibitor estra-1，3，5(10)-trien-17-one-3-sulphamate inhibit oestrone sulphatase by different mechanism.J.Steroid Biochem Mol.Biol.1996，57，79-88
(48)Duncan，L.；Purohit，A.；Howarth，N.M.；Potter，B.V.L.；Reed，M.J.Inhibition ofoestrone sulphatase activity by estrone-3-methyl-thiophosphonatea potentialtherapeutic agent in breast cancer Cancer Res.1993，53，298-30權利要求
1、式I的化合物或其藥學上可接受的鹽或絡合物
式I
其中G是氟碳基，R1是-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中的任何一個。
2、根據權利要求1所述的化合物或其藥學上可接受的鹽或絡合物，所述化合物具有式II的結構
式II。
3、根據權利要求1所述的化合物或其藥學上可接受的鹽或絡合物，所述化合物具有式III的結構
式III。
4、根據權利要求1所述的化合物或其藥學上可接受的鹽或絡合物，所述化合物具有式IV的結構
式IV。
5、根據權利要求1所述的化合物或其藥學上可接受的鹽或絡合物，所述化合物具有式VII的結構
式VII。
6、根據權利要求1所述的化合物或其藥學上可接受的鹽或絡合物，所述化合物具有式VIII的結構
式VIII。
7、根據權利要求1所述的化合物或其藥學上可接受的鹽或絡合物，所述化合物具有式XI的結構
式XI。
8、根據權利要求1所述的化合物或其藥學上可接受的鹽或絡合物，所述化合物具有式XII的結構
式XII。
9、根據前述權利要求中任一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽或絡合物，其中基團G是式-A-B的基團，其中A是1～9個碳原子的直鏈、支鏈或環狀亞烷基，B是1～10個碳原子的直鏈、支鏈或環狀全氟烷基。
10、根據權利要求9所述的化合物或其藥學上可接受的鹽或絡合物，其中A是式-(CH2)n-的基團，其中n是1～9的整數。
11、根據權利要求9或10所述的化合物或其藥學上可接受的鹽或絡合物，其中基團A具有兩個碳原子。
12、根據權利要求9～11中任一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽或絡合物，其中B是式-(CF2)mCF3的基團，其中m是0或1～9的整數。
13、根據權利要求9所述的化合物或其藥學上可接受的鹽或絡合物，其中基團G具有式-(CH2)n(CF2)mCF3結構，其中n是1～9的整數，m是0或1～9的整數。
14、根據權利要求13所述的化合物，其中n+m是1～10。
15、根據前述權利要求中任一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽或絡合物，其中基團G是3，3，3-三氟丙基(-CH2CH2CF3)。
16、根據前述權利要求中任一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽或絡合物，其中R1是氨基磺酸酯基。
17、根據權利要求1所述的化合物或其藥學上可接受的鹽或絡合物，所述化合物具有下式結構
18、根據前述權利要求中任一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽或絡合物，其中R1或所述氨基磺酸酯基具有下式結構
其中R4和R5獨立地選自H、烷基、環烷基、烯基和芳基或其組合，或者一起表示亞烷基，其中所述或每個烷基或環烷基或烯基或任選含有一個或多個雜原子或基團。
19、根據權利要求18所述的化合物或其藥學上可接受的鹽或絡合物，其中R4和R5中至少一個是H。
20、根據權利要求19所述的化合物或其藥學上可接受的鹽或絡合物，其中R4和R5為H。
21、根據前述權利要求中任一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽或絡合物，所述化合物具有式XII的結構
式XII
其中G是氟碳基；
其中R1是OH或下式的氨基磺酸酯基
其中R4和R5獨立地選自H、烷基、環烷基、烯基和芳基或其組合，或者一起表示亞烷基，其中所述或每個烷基或環烷基或烯基或任選含有一個或多個雜原子或基團。
22、根據權利要求21所述的化合物或其藥學上可接受的鹽或絡合物，所述化合物具有下式的結構
23、一種藥物組合物，其包含任選與藥學上可接受的載體、稀釋劑、賦型劑或佐劑混合的根據權利要求1～22中任一項所述的化合物。
24、根據權利要求1～22中任一項所述的化合物，其用于藥物。
25、根據權利要求1～22中任一項所述的化合物在制備藥物中的用途，所述藥物用于治療與類固醇硫酸酯酶(STS)相關的病癥或疾病。
26、根據權利要求1～22中任一項所述的化合物在制備藥物中的用途，所述藥物用于治療與有害的STS水平相關的病癥或疾病。
27、根據權利要求1～22中任一項所述的化合物在制備藥物中的用途，所述藥物用于抑制類固醇硫酸酯酶(STS)的活性。
28、根據權利要求1～22中任一項所述的化合物在制備藥物中的用途，所述藥物用于抑制類固醇硫酸酯(STS)的活性。
29、根據權利要求1～22中任一項所述的化合物在制備用于治療癌癥的藥物中的用途。
30、根據權利要求29所述的用途，其中所述癌癥選自內分泌依賴型癌癥。
31、根據權利要求30所述的用途，其中所述癌癥是乳腺癌、子宮內膜癌或前列腺癌。
32、根據權利要求1～22中任一項所述的化合物在制備藥物中的用途，所述藥物用于對需要其的哺乳動物治療與類固醇硫酸酯酶相關的病癥或疾病，所述治療包括按照給藥間隔大于每天一次的計劃表，對所述哺乳動物給與藥學有效量的本發明化合物。
33、根據權利要求32所述的用途，其中以單位劑量給與所述化合物。
34、根據權利要求32所述的用途，其中所述給藥間隔選自每周一次給藥，每周兩次給藥，兩周一次給藥、每月兩次給藥和每月一次給藥。
35、根據權利要求32所述的用途，其中所述給藥間隔是每周一次給藥。
36、基本上如上文所述任何一個實施例所述的化合物。
37、基本上如上文所述任何一個實施例所述的組合物。
38、基本上如上文所述任何一個實施例所述的方法。
39、基本上如上文所述任何一個實施例所述的用途。
全文摘要
本發明提供了能夠抑制類固醇硫酸酯酶的式(I)化合物，其中G是氟碳基，R1是氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中的任何一個。
文檔編號A61K31/56GK101395171SQ200780007423
公開日2009年3月25日 申請日期2007年2月28日 優先權日2006年3月1日
發明者B·V·L·波特, M·J·里德, L·W·L·吳, A·普羅希特, P·富斯特 申請人:斯特里克斯有限公司