專利名稱：一種用于治療或預防由高脂血癥和/或高血壓引起的勃起功能不全癥的藥物組合物的制作方法
一種用于治療或預防由高脂血癥和/或高血壓引起的勃起功能不全癥的藥物組合物技術領域：
本發明涉及一種用于治療或預防由高脂血癥和/或高血壓引起的勃起功能不全癥的 藥物組合物。背景技術：
近來，飲食生活的變化、環境污染以及過度的壓力等很大程度上改變了疾病的發生 率以及死亡原因，以心肌梗塞或腦中風為代表的心血管類疾病日益增加。到現在為止， 雖然已知有多種病態生理能誘發勃起功能不全癥，但其中，已知血管性病態生理是引起 勃起功能不全癥的最重要因素。高血壓、冠狀動脈疾病、動脈及靜脈疾病、骨盆損傷或高脂血癥等均是影響血管系 統的疾病及勃起功能不全癥的危險因素。IO名患有血管類疾病的男性中的8名、3名患 有心臟病的患者中的2名、接受過冠狀動脈旁路手術的患者中的半數以上均出現勃起功 能不全癥。在多種情況中，25%患有勃起功能不全癥的男性與其服用的藥物有關，還顯 示高血壓藥物服用者中有14%的勃起功能不全癥患病率，腎臟藥物的服用者中有28%的 勃起功能不全癥患病率。此外，已有報告50歲以上的男性中出現勃起功能不全癥的一 半人都是由血管類疾病誘發的。心血管系疾病的3代危險因素之一的高脂血癥是出現血中膽固醇或中性脂肪非正常 升高的狀態，是受到例如西歐化的飲食、壓力、運動不足等環境要素以及遺傳要素影響 的多因素疾病。已有報告血管性勃起功能不全癥患者出現的脂質代謝障礙是高膽固醇血 癥的越來越多，兩者之間具有密切關系(參見非專利文獻l)。高脂血癥是心血管疾病、 血管性勃起功能不全癥的主要危險因素，已知其原因是陰莖海綿體平滑肌的內皮依存性 松弛反應障礙及平滑肌細胞自身的變形引起了勃起功能不全癥。高血壓將由于血管內皮細胞、血管平滑肌及細胞外基質的變化而增加末梢血管的抗 力。高血壓是成人最常出現的心血管系疾病，是勃起功能不全癥的危險因素之一，已顯 示30%的高血壓患者患有勃起功能不全癥。因此，勃起功能不全的程度與高血壓的程度 及謙發期間成一定比例(參見非專利文獻2 )。高血壓誘發勃起功能不全癥的機制是流向陰莖的動脈血流減少，這可用心理因素及抗高血壓劑的影響來解釋。在誘發了高血壓的 動物陰莖組織的病理學變化中，出現了陰莖海綿體內皮細胞與平滑肌細胞損傷及增殖、 骨膠原沉著、陰莖海綿體白膜弱化等。此外，在其機能的變化中，還出現一氧化氮(N O)活性減少、氧化壓力增加、平滑肌收縮增加、神經因性NO依存性陰莖海綿體松弛 力減少等(參見非專利文獻3及非專利文獻4)。一氧化氮(N0)具有擴張血管作用、抗凝固作用、抗氧化作用、抗炎作用等，是維 持血管恒久性的最重要部分。因此，血管內皮中產生N0的NO S (—氧化氮合酶)的減 少、游離基的增加時將出現產生的N0是不活化的等，使NO的生理活性降低，結果是導 致出現動脈粥樣硬化。NO最重要的任務是松弛陰莖海綿體，對與勃起功能不全相關的高 齡老化、動脈粥樣硬化、高血壓及糖尿病等疾病模型的研究結果顯示勃起功能不全癥 的原因是以N O作用產生的非腎上腺素性-非膽堿性陰莖海綿體平滑肌松弛障礙、N 0 S活性減少、陰莖內NOS表達障礙為表征示出的NO生理活性的減少。因此，高脂血 癥、高血壓及勃起功能不全癥的治療共通點是找到能提高NO生物利用度的物質。現在，勃起功能不全癥治療劑是起到與c GMP (環磷酸鳥苷)竟爭反應的物質作用 的合成衍生物，通過阻斷PDE - 5 (5型磷酸二酯酶)單一通路來增加陰莖海綿體內的 cGMP濃度。由于不具有興奮性神經系統的活性，換句話說由老化及內分泌系疾病導 致n N O S基因表達減少或被抑制，而無法增加陰莖海綿體平滑肌內c GM P濃度，因 此抑制了 P D E - 5的酶活性或無法出現陰莖勃起的效果。更具體地說，治療劑的概念 是與Q 0 L (生活質量(Quality Of Life))制品的概念(雖然不與生命直接相關，但用 于治療使生活不便的癥狀而有助于使生活更加豐富的藥物)相近似的藥物，僅僅在必要 時服用可維持陰莖勃起的治療劑。此外，雖然已經報告了這種化學合成的單一物質具有 心肌梗塞、心功能不全、血壓降低、腦梗塞、面色潮紅、視力減退等副作用，但由于全 世界對勃起功能不全癥治療劑的迫切需求，它仍然被很頻繁地使用。雖然將丙酮酸衍生物、煙酸衍生物、義夕*》系衍生物等藥物用作高脂血癥治療劑， 但是長時間服用將誘發消化不良、肝毒性、肌肉痛、橫紋肌變性、光過敏等副作用，必 須慎重使用，因此希望通過減少副作用來提高藥物的穩定性。雖然在臨床上將硝苯地平(nifedipine)與卡托普利(captopril)用作高血壓治療 劑，但是，由于這些藥物的毒性與藥效的無效率性，希望開發一種新形態的抗高血壓劑。另一方面，通過對經口服用勃起功能不全癥治療劑的高脂血癥患者、高血壓患者進 行研究，不僅僅完成了通過改善病癥來治療勃起功能不全癥的研究報告也完成了針對藥物的有效性和副作用的研究報告。此外，雖然現在市售的經口服用的勃起功能不全治療 劑在需要的時候服用后能獲得一次性及強制性的勃起效果，但是無法使其恢復到自然勃 起的效果。
因此，有必要研發一種在對高脂血癥、高血壓的個別病癥有所改善的同時，即使通 過慢性給藥來維持勃起功能也可能完全沒有副作用的藥物。
非專利文獻1Juenemann KP， Aufenanger J， Konrad T， Pill J, Berle B, Persson-Juenemann C. 1991. The effect of impaired lipid metabolism on the smooth muscle cells of rabbits. Urol Res. 19: 24-28
非專利文獻2 J BurchardtM， Burchardt T, Baer L， KissAJ， P認r RV, Shabigh A, de la Taille， Hay OR, Shabsigh R. Hypertension is associated with severe erectile dysfunction. J Urol 2000; 164: 1181-9非專利文獻3Behr—Roussel D， Gorny D， Mevel K， CompagnieS， Kern P, Sivan V， Bernabe J"， Bedigian MP, Alexandre L, Giuliano F. Erectile dysfunction: an early marker for hypertension, A longitudinal study in spontaneously hypertensive rats. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol 2005; 288: R276R28非專利文獻4Toblli JE， Stella I' Inerra F, Ferder L， Zeller F, Mazza ON. Morphological changes in cavernous tissue in spontaneously hypertensive rats. Am J Hypertension 2000; 13: 6869
發明內容
發明要解決的問題
因此，本發明人潛心研究沒有副作用且經過慢性給藥能維持勃起功能的，可有效治 療由高脂血癥和/或高血壓引起的勃起功能不全癥的藥劑，確認特定比例配比的山茱萸 熱水提取物、覆盆子熱水提取物、菟絲子熱水提取物、枸杞子熱水提取物及五味子熱水 提取物的組合物可減少血中總膽固醇及LDL-膽固醇、增加HDL-膽固醇、降低血壓、增 加神經系統及血管系統NOS蛋白質的表達、增加最大海綿體內壓，由此完成了本發明。
本發明的目的是提供一種用于治療或預防由高脂血癥和/或高血壓引起的勃起功能 不全癥的藥物組合物。
解決問題的技術手段
為了達到上述目的，依據本發明，提供了一種治療或預防由高脂血癥和/或高血壓引起的勃起功能不全癥的藥物組合物，其含有干燥重量比為5~10: 5-10: 1~ 5: 1-5: 0. 5-1. 5的山茱萸熱水提取物、枸杞子熱水提取物、覆盆子熱水提 取物、菟絲子熱水提取物及五味子熱水提取物。發明效果依據本發明的復合中藥熱水提取物將減少血中總膽固醇與LDL-膽固醇，增加HDL-月旦固醇，降低血壓，增加神經系統及血管系統NOS蛋白質的表達，增加最大海綿體內壓， 不僅具有維持單純性陰莖勃起的治療效果，在提高身體NO生物利用度的同時，還可調 節伴隨有高脂血癥和/或高血壓的全部病態生理，維持自然勃起的功能。因此，依據本 發明的復合中藥熱水提取物可有效用于治療或預防由高脂血癥和/或高血壓引起的勃起 功能不全癥。
圖1示出依據本發明的復合中藥熱水提取物的濃度與誘發了高脂血癥的小白鼠 血中總膽固醇、H D L -月旦固醇及L D L -月旦固醇的數值的關系圖。圖2 a示出依據本發明的復合中藥熱水提取物及單獨中藥熱水提取物與誘發了 高脂血癥的小白鼠陰莖組織內蛋白質NO S的表達程度的關系圖。圖2 b示出依據本發明的復合中藥熱水提取物的濃度與誘發了高脂血癥的小白 鼠陰莖組織內蛋白質NO S表達程度的關系圖。圖3示出依據本發明的復合中藥熱水提取物的濃度與誘發了高脂血癥的小白鼠 陰莖海綿體最大內壓的關系圖。圖4示出依據本發明的復合中藥熱水提取物的濃度與誘發了高血壓的小白鼠血 壓変化的關系圖。圖5 a示出依據本發明的復合中藥熱水提取物及單獨中藥熱水提取物與誘發了 高血壓的小白鼠陰莖組織內蛋白質N 0 S的表達程度的關系圖。圖5 b示出依據本發明的復合中藥熱水提取物的濃度與誘發了高血壓的小白鼠 陰莖組織內蛋白質N S的表達程度的關系圖。圖6示出依據本發明的復合中藥熱水提取物的濃度與誘發了高血壓的小白鼠陰 莖海綿體最大內壓的關系圖。
具體實施方式以下，從中藥方面詳細說明本發明組合物的組成成分。山茱萸是山茱萸科落葉小喬木山茱萸果實的干燥果肉，味酸，性溫，可用于精血虧 虛癥或腎陽不足癥。此外，還有降低高血壓及血糖作用、消炎抗菌作用及保護肝腎的效 果。山茱萸提取物中含有熊果酸(ursolic acid)、久乂酸、蘋果酸以及其他四種葡糖苷 (glucoside)等。熊果酸是具有抗糖尿病活性的脂溶性物質；4種葡糖苷是莫諾苷 (morroniside)、 馬錢素(loganin)、 獐牙菜脊(sweroside)、 曱基莫諾苦 (methylmorroniside)(Lee YC， Kim YE， Lee BY, Kim CJ. Chemical Compositions of Corni Fructus and Separating Properties of Its Flesh by drying. Korean J Food Sci Technol 1992; 24: 447-50)。此外，已知山茱萸的齊墩果酸-3 - 0-單鎖鏈素 (oleanolic acid 3—0—mono desmosides)具有才中制葡萄#唐吸》1欠的才幾能(Matsuda H, Murakami T， Shimada H， Mats咖ura N, yoshikawa M, Yamahara J. Inhibitory mechanisms of oleanolic acid 3-0-mono desmosides on glucose absorption in rats, Biological and Pharmaceutical Bulletin 1997; 20: 717-9)。枸杞子是落葉灌木，高可達2.5m,枝頭下垂，短枝上有刺，長枝下部叢生有2-3 片葉。它具有改善糖尿病、恢復疲勞、防止老化、降脂、保護肝功能以及抗癌抗菌等作 用。已知枸杞子中含有的類黃酮類,丁 (rutin)具有維持毛細血管正常抗力且降低血管 通透性的機能，對人體內毛細血管具有強化作用和收縮作用，因此可作為循環系統疾病 的治療劑、抗糖尿病活性劑、降血壓劑等(KimHS, ParkYS， Kim CI. Changes of Serum Lipid Profiles after Eating Lycii Fructus in Rats Fed High Fat Diet. Korean J Nutr 1998; 31: 263-70)。覆盆子是薔薇科落葉灌木徳利苺的未成熟干燥果實，味酸，性溫，具有保護肝腎的 作用。東醫寶監中記載覆盆子性平，無毒，味酸，固精、補肝明目、補腎氣、烏黑頭發。 此外，最近的研究證明其具有改善腎臟機能、不孕癥、陽痿、遺精及夢遺，強身健體， 清滌血液，補肝明目的效果。此外，徳利苺未成熟果實加水分解性單寧中可分離出l種 單寧酸(gallotannin)及3種鞣花單寧(ellagitannin),理化性狀及光譜數據還報告具 有沒食子酸、2， 3 - (S)-HHDP-D -吡喃葡糖、地榆素(sanguiin) H - 4及 地榆素H- 6。在覆盆子中，確認其成分中沒食子酸等酚性化合物對酶的脂質及氧化有 較強的抑制活性。酚性化合物廣泛分布于食品類的2次代謝產物中，具有多種結構及分山梨酸甲酯 0.002g 蒸餾水定容至60ml.制法按實施例一中的方法制備黃連阿膠湯提取物，加入處方各輔料和蒸餾水， 再經超濾器超濾，超濾液灌裝，滅菌，即得。糊精 5g 水 適量制法按實施例二中的方法制備柴黃連阿膠湯提取物，加入處方量輔料按常 規方法制成顆粒劑，低溫干燥，壓丸即得。(三) 制備黃連阿膠湯軟膠囊 內容物處方黃連阿膠湯提取物2 30.2g植物油 30g對羥基苯甲酸乙酯 0.02g蜂蠟 5g制法按實施例二中的方法制備黃連阿膠湯提取物，加入優選處方百分量的植物油、 蜂蠟，對羥基苯甲酸乙酯按常規工藝制備而成。(四) 制備黃連阿膠湯膠囊劑 處方-.黃連阿膠湯提取物2 10-95%淀粉 5-55%硬酯酸鎂 0.1-5% 優選處方黃連阿膠湯提取物2 30.2g淀粉 15g硬酯酸鎂 0.5g制法按實施例二中的方法制備柴黃連阿膠湯提取物，加入處方量輔料按常 規方法制成顆粒劑，低溫干燥，灌裝即得。實施例四黃連阿膠湯口服液體制劑制備方法 處方黃連阿膠湯提取物l 5-80%蔗糖 5.0-50%環己基氨基磺酸鈉 5.0-40%山梨酸甲酯 0.001-2%蒸餾水 10-卯％.優選處方黃連阿膠湯提取物1 25.1g 蔗糖 3.0g 環己基氨基磺酸鈉 0.5g8精細粉碎。混合粉碎后的山茱萸3 2 g 、枸杞子3 2 g 、覆盆子1 6 g 、菟絲子1 6 g 及五味子4 g,加入l L水，沉淀4小時后，將完全沉淀的沉淀物填充入提取器中，1 0 0 。C時加熱提取5小時后，過濾。用減壓濃縮器將濾液濃縮成濾液1/10體積的液體， 冷凍干燥，得到粉末狀復合中藥熱水提取物。 對照例1 :單味中藥熱水提取物的制備用實施例1的相同方法分別提取山茱萸、枸杞子、覆盆子、菟絲子及五味子，獲得 各種粉末狀單味中藥熱水提取物。實驗例1 :用誘發了高脂血癥的小白鼠測定血中總膽固醇、H D L -月旦固醇及L D L -膽固醇與本發明的復合中藥熱水提取物濃度的關系為了調查誘發高脂血癥的小白鼠血中總膽固醇、HDL -膽固醇及LDL -膽固醇 的數值與本發明的復合中藥熱水提取物的濃度關系，如下所述進行實驗。1-1.日常飲食性高脂血癥的誘導以及樣品的給藥實驗動物是(株)S AMT AKOW^f才(烏山市、韓國)提供的1 6周齡的3 60 g小白鼠4 8只，將其分成6組，每組8只。1組作為正常組，供給一般的日常飲食， 另5組實驗組自由供給添加了 1. 5 %膽固醇、0. 2 5 %膽酸及2 5 %牛脂的高脂肪 曰常飲食4周，來誘導日常飲食性高脂血癥。正常組給予1 m L蒸餾水，實驗組中的1組給予1 m L蒸餾水，剩余4組用注射器 (注射乂 > f )在8周內 一 日 一次經口給予溶解了上述實施例1制得的復合中藥熱水提 取物(50、 100、 200、 300mg/kg)的lmL蒸餾水。 1 )正常組2)高脂肪日常飲食組3 )高脂肪日常飲食組+實施例1制得的復合中藥熱水提取物5 0 m g / k g4 )高脂肪日常飲食組+實施例1制得的復合中藥熱水提取物1 0 0 m g / k g5 )高脂肪日常飲食組+實施例1制得的復合中藥熱水提取物200mg/kg6 )高脂肪日常飲食組+實施例1制得的復合中藥熱水提取物3 0 0 m g / k g 1_2.血中總膽固醇、HD L-膽固醇及LD L -膽固醇的測定 為了確定上述高脂肪日常飲食飼養的小白鼠是否誘發了高脂血癥，從眼窩靜脈取血，實驗完了后從小白鼠腹部大動脈取血。1 2小時絕食后取血、3 7。C時凝固2小時，1 5 0 0 0 r p m離心分離血清后，取上清液。用市售試劑盒(K i t ) ( A S AN制 藥、韓國)在UV吸光度5 0 0 n m時通過R i c h m o n酶法測定膽固醇，通過N om a等酶法測定高密度脂質膽固醇(H D L - C )。根據F ridewald form u 1 a式子計算低密度脂質膽固醇(L D L - C )。低密度脂質膽固醇(L D L - C )=總月旦固醇-[高密度脂質膽固醇(H D L - C ) -(中性脂肪/ 5 )]圖1示出了結果。如圖l所示，在攝取高脂肪日常飲食3 0天時，正常組與高脂肪日常飲食組的血中 膽固醇濃度之間示出有顯著差異，確認誘發了高膽固醇血癥。對高脂肪日常飲食組經口 給予本發明的復合中藥熱水提取物(50、 100、 200、 300mg/kg)8周， 示出高脂肪日常飲食組的總膽固醇及L D L-C數值有減少的趨勢，以及H D L - C數 值有增加的趨勢。其中，給予本發明的復合中藥熱水提取物5 Omg / k g組的總膽固 醇是104. 5±32mg/dL,高脂肪日常飲食組的總膽固醇是17 4. 2 ± 3 8. 1m g / d L ,示出給予本發明的復合中藥熱水提取物5 0 m g / k g的給藥組與 高脂肪日常飲食組相比有顯著的減少。此外，給予本發明的復合中藥熱水提取物5 Om g / k g的給藥組的HDL- C是29. 7±4. 9mg/dL,高脂肪日常飲食組的 HDL- C是15. 5±8. 4mg/dL,給予本發明的復合中藥熱水提取物5 0 m g / k g的給藥組與高脂肪日常飲食組相比有顯著的增加。實驗例2:誘發了高脂血癥的小白鼠的陰莖組織內蛋白質NO S的表達程度與本發明的復合中藥熱水提取物濃度的關系為了調查誘發了高脂血癥的小白鼠陰莖組織內蛋白質NO S的表達程度與本發明 的復合中藥熱水提取物濃度的關系，如下所述進行實驗。2-1.組織的采取及酶源的制備飼養結束后，用填充了乙醚的干燥器使小白鼠麻醉后，切開下腹部從腹部大動脈取 血，使之死亡后，摘出陰莖和睪丸。將摘出的組織在O. 9 %生理食塩水中洗去血液， 用濾紙吸去鹽溶液，稱重后，立即用液氮急速冷凍。另一方面，將取得的血液立即轉移 到肝素處理的管內，在2500rpm(4。C)時離心分離1 5分鐘，分離血漿。將分 離的血漿和臟器在使用前于-7 0 。C保存。在200nMHepes、 320 mM蔗 糖、1 mM乙二胺四乙酸(E D T A )、 1 mM二At蘇糖醇(D T T )、 10g/mL亮 肽素、2 g /m L抑肽酶、1 g /m L胃蛋白酶抑制劑、1 0 g /m L胰蛋白酶抑制劑、 1 mM苯甲基磺酰氟化物(PM S F )溶液中使組織內酶源均質化后，離心分離(4 。C、 1 0 0 0 0 r p m、 15分鐘)，蛋白質定量后將上清液于-7 0 。C保存。2-2.蛋白質印跡法(Western blotting)用牛血清白蛋白(bovine ser咖albumin、 B S A)才艮據布才立得福德(Bradford)方法 定量的蛋白質3 0 g在9 5 。C時變性5分鐘后、用1 2 %不連續SDS- PAGE (discontinuous sodium dodecylsulfate) -聚丙烯酰胺凝股(polyacrylamide gel)進 行電泳。進行電泳的蛋白質在2 5 v o 1 t下在O. 2 m聚偏(二)氟乙烯(P VD F (poly-vinylidenedif luoride) 、 Amershambioscience、 USA) 膜上移動2小時3 0分。進行電泳的膜是用抑制緩沖液(blocking buffer)(含有5 % 脫脂粉乳的TBS- T緩沖器)在室溫中反應3 0分鐘后阻斷。使e N O S (內皮細胞 一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase ) ) 、 nNOS(神經源性一氧化 氮合酶(neuronal nitric oxide synthase) )(BD Biosciences 、 US A )各抗體反應2小時后，用T TBS (Tris-Tween緩沖的生理鹽水(Buffered saline》 每隔1 0分鐘清洗3次。在室溫中使2次抗體抗-小鼠I g G - H R P 、抗-山羊I g G-HRP(l: 2000稀釋)(Zymed Laboratories, USA) 反應1小時后，經洗凈階段后再用T T B S 5分鐘洗6次。在顯色劑E C L (增強化學 發光法(enhanced cherailuminescence))溶液中反應2分鐘，比較膜上感光出現的波 段的厚度來確定有無表達蛋白質以及其差異。給高脂肪日常飲食組給予以麥酒蔵(匕'7 夕、，)為主要成分的'；^f大匕。A 1 m g / k g作為陽性對照組。圖2a示出了誘發了高脂血癥的小白鼠陰莖組織內的蛋白質N0S的表達程度與本發 明的復合中藥熱水提取物及單獨中藥熱水提取物的關系，圖2b示出了誘發了高脂血癥 的小白鼠陰莖組織內蛋白質N0S的表達程度與本發明的復合中藥熱7jc提取物的濃度的關 系。如圖2 a所示，可以確認將本發明的復合中藥熱水提取物給藥于誘發了高脂血癥的 小白鼠，其陰莖組織內蛋白質N0S的表達較只給予單味中藥熱水提取物有顯著增加。此外，如圖2 b所示，可以確認將本發明的復合中藥熱水提取物給藥于誘發了高脂 血癥的小白鼠，其陰莖組織內蛋白質N0S的表達與陽性對照組(大匕V")相比有 顯著增加。考慮到這種結果，大匕VL將是能通過不僅僅增加NO S酶表達增加機 制也增加cGMP的濃度來維持勃起功能的藥物。此外，這種結果還可來解釋依據本發 明的復合中藥熱水提取物的多種機制。特別地，依據本發明的復合中藥熱水提取物的濃 度越低，NO S酶的表達程度越好，其中5 Omg / k g給藥組最為明顯。雖然高脂血癥及高膽固醇癥可由于內皮細胞依存性松弛因子(E D R F )之一的一氧化氮生成體系 的障礙而引起勃起功能不全癥，但依據本發明的復合中藥熱水提取物可通過增加e NOS與n N O S蛋白質的表達程度，來很大程度地改善血管性勃起功能不全癥。實驗例3:用誘發了高脂血癥的小白鼠測定陰莖海綿體最大內壓與本發明的復合中 藥熱水提取物濃度的關系為了調查誘發了高血脂癥的小白鼠陰莖海綿體最大內壓與本發明復合中藥熱水提 取物濃度的關系，如下所述進行實驗。向誘發了高脂血癥的小白鼠腹腔內注射乂"l^f ^(Zoletil) 0. 2mL將其全身麻 醉后，切開氣管插入氣道管(P E 2 4 0聚乙烯管)以確保氣道。將聚乙烯管(P E-5 0聚乙烯管)插入右側頸動脈后，切開下腹部至龜頭表皮正中央的皮膚，露出腹腔 至陰莖海綿體的皮下組織后，將23G針插入右側陰莖海綿體中，聚乙烯管連接在壓力轉 換器及生理記錄器之間，同時測定全身血壓和陰莖海綿體內壓。用i wo r y作為電算 數據處理系統，將整個管用2 5 0 U/mL肝素進行處理。將前列腺從露出的下腹部至 膀胱間小心剝離出后，將鉤狀的針電極懸掛在右側前列腺后外部位置上，來電刺激骨盆 神經叢及海綿體神經。1 0V、 2. 4mA電刺激后，同時測量海綿體內壓及全身血壓。 與實驗組進行比較的主要勃起功能指標是最大海綿體內壓(intracavernosal pressure、I C P )和最大海綿體內壓/平均動脈血壓(ICP/mean arterial pressure、 I C P/MAP)。神經刺激海綿體后，取血3 c c,稱量摘出的陰莖與睪丸的重量，液氮中 保存。圖3示出了結果。如圖3所示，本發明的復合中藥熱水提取物給藥組達到最大海綿體內壓的平均時間 與高脂肪日常飲食組相比有顯著縮短，與正常組沒有差異。示出了本發明的復合中藥熱 7K提取物給藥組與高脂肪日常飲食組相比的最大海綿體內壓(I C P )的增加，其中給 藥復合中藥熱水提取物5 0mg / k g組具有最顯著差異。在最大海綿體內壓/平均動 脈血壓(I C P / MA P )方面，按照正常組〉復合中藥熱水提耳又物5 0mg/kg給 藥組〉復合中藥熱水提取物1 0 0mg / k g給藥組的順序顯著增加。因此，依據本發 明的復合中藥熱水提取物實際上作用于陰莖內，這是表明其與勃起功能具有密切關系的 直接證據。實驗例4:誘發了高血壓的小白鼠血壓變化與本發明的復合中藥熱水提取物濃度的關系為了調查誘發了高血壓的小白鼠的血壓變化與本發明復合中藥熱水提取物濃度的 關系，如下所述進行實驗。4 - 1 .高血壓的誘導及樣品給藥實驗動物是(抹)S AMTAK0^4才(烏山市、韓國)提供的1 6周齡的2 5 0 ~ 3 0 0 g自發性高血壓雄性小白鼠(spontaneous hypertensive rat、 S HR ) 1 5只。將實驗組分成3組(對照組、實驗1組、及實驗2組)，每1組中分有S H R小 白鼠5只。對照組經口給予蒸餾水，實驗組經口給予溶有根據上述實施例1制得的復合 中藥熱水提取物(100、 300mg/kg)的水4周。4 - 2 .血壓的測定將S H R雄性小白鼠裝入塑料筒使之固定不動，在尾巴上用巻曲的電子血壓計 (electro-sphygmomanometer) P E - 3 0 0 (I I T C 、 U S A )血流測定器 (plethysmography)測量藥物給藥前后的收縮壓3次，比4交平均值。圖4示出了結果。如圖4所示，對照組在藥物給藥前后的收縮壓分別是2 5 4. 3 ± 1 4. 5mmH g、 2 3 7. 7 ± 2 4. 8mmHg,沒有顯著差異。給予本發明的復合中藥熱水提取 物100mg/kg的給藥組在藥物給藥前后的收縮壓分別是266. 7±14. 0m mHg、 187. 5±21. 6mmHg，復合中藥熱水提取物300mg/kg給藥 組在藥物給藥前后的收縮壓分別是2 71.8±23.9mmHg、178.0±14.6 mmHg。如上所述，全部本發明的復合中藥熱水提取物給藥組的收縮壓均有顯著降低 (p < 0 . 0 5)。實驗例5 :誘發了高血壓的小白鼠陰莖組織內蛋白質NOS表達程度與本發明的復合 中藥熱水提取物濃度的關系為了調查誘發了高血壓的小白鼠陰莖組織內蛋白質eNO S、 nNO S的表達程度 與本發明的復合中藥熱7K提取物濃度的關系，用上述實驗例2 - 2的蛋白質印跡法進行 觀察。圖5a示出誘發了高血壓的小白鼠陰莖組織內蛋白質N0S的表達程度與依據本發明 的復合中藥熱水提取物及單獨中藥熱水提取物的關系，圖5b示出誘發了高血壓的小白 鼠陰莖組織內蛋白質N0S的表達程度與依據本發明的復合中藥熱水提取物的濃度的關 系。如圖5 a所示，可確認將本發明的復合中藥熱水提取物給藥于誘發了高血壓的小白鼠，其陰莖組織內蛋白質N O S的表達程度較只單獨給予單味中藥熱水4是取物有非常顯 著的增加。此外，如圖5 b所示，將本發明的復合中藥熱水提取物給藥于誘發了高血壓的小白 鼠，其陰莖組織內蛋白質NO S的表達程度與對照組相比有顯著增加，特別是復合中藥 熱水提取物1 0 0 m g / k g給藥組的eNOS、 nNOS表達程度有較大增加。我們 發現，雖然復合中藥熱水提取物300mg/kg給藥組的eNOS、 nNOS表達程 度與對照組相比有增加，但是與復合中藥熱水提取物1 0 0 m g / k g給藥組相比則降 低了。實驗例6:用誘發了高血壓的小白鼠測定陰莖海綿體最大內壓與本發明的復合中藥 熱水提取物濃度的關系為了調查誘發了高血壓的小白鼠陰莖海綿體最大內壓與本發明的復合中藥熱水提 取物濃度的關系，用上述實驗例3的方法神經刺激海綿體后，記錄結果。圖6示出了結果。如圖6所示，對照組的最大海綿體內壓是2 7 . 1 ± 4 . 5 mmH g ,給予本發明 的復合中藥熱水提取物(100mg/kg、 300mg/kg)的給藥組的最大海綿 體內壓分別是8 3. 3±1. 9mmHg、 5 5. 0±4. 6mmHg,給予本發明的 復合中藥熱7jc提取物的給藥組與全部的對照組相比在統計學上有顯著增加(p < 0. 0 5 )。對照組最大海綿體內壓/平均動脈壓(I C P / MAP )的百分比是l 4. 9 ± 1. 4 %,給予本發明的復合中藥熱水提取物(100mg/kg、 300mg/kg) 的給藥組的分別是6 2. 8 ± 3. 9 %、 4 4. 1 ± 3. 9 %，給予本發明的復合中藥 熱水提取物的給藥組與全部對照組相比在統計學上有顯著增加(p < 0. 0 5 )。給予 本發明的復合中藥熱水提取物(100mg/kg、 300mg/kg)的給藥組之間 沒有顯著差異。接下來，例證性示出了本發明組合物的制劑例。制劑例l:散劑的制備實施例1的復合中藥熱水提取物 2 g乳糖 1 g將上述成分混合，裝入密封的布袋中，制得散劑。制劑例2 :錠劑的制備實施例1的復合中藥熱水提取物 1 0 0 m g玉米淀粉 1 0 0 m g乳糖 1 0 0 m g硬脂酸鎂 2 m g混合上述成分后，根據常規的錠劑制備方法打錠，制得錠劑。制劑例3 :膠嚢劑的制備實施例1的復合中藥熱水提取物 1 0 0 m g玉米淀粉 1 0 0 m g乳糖 1 0 0 m g硬脂酸鎂 2 m g混合上述成分后，根據常規膠囊劑的制備方法填充入明膠膠囊內，制得膠囊劑。
權利要求
1.一種用于治療或預防由高脂血癥引起的勃起功能不全癥的藥物組合物，其含有干燥重量比為5～10∶5～10∶1～5∶1～5∶0.5～1.5的山茱萸熱水提取物、枸杞子熱水提取物、覆盆子熱水提取物、菟絲子熱水提取物及五味子熱水提取物。
2. —種用于治療或預防由高血壓引起的勃起功能不全癥的藥物組合物，其含有干 燥重量比為5-10: 5-10: 1-5: 1-5: 0. 5-1. 5的山茱萸熱7jc提取 物、枸杞子熱水提取物、覆盆子熱水提取物、菟絲子熱水提取物及五味子熱水提取物。
3. —種用于治療或預防由高脂血癥及高血壓引起的勃起功能不全癥的藥物組合 物，其含有干燥重量比為5 ~ 1 0 : 5-10: 1~5: 1-5: 0. 5~1. 5的山 茱萸熱水提取物、枸杞子熱水提取物、覆盆子熱水提取物、菟絲子熱水提取物及五味子 熱水提取物。
全文摘要
本發明提供了一種用于治療或預防由高脂血癥和/或高血壓引起的勃起功能不全癥的藥物組合物，其含有干燥重量比為5～10∶5～10∶1～5∶1～5∶0.5～1.5的山茱萸熱水提取物、枸杞子熱水提取物、覆盆子熱水提取物、菟絲子熱水提取物及五味子熱水提取物。
文檔編號A61P9/12GK101229274SQ200710307818
公開日2008年7月30日 申請日期2007年12月28日 優先權日2006年12月29日
發明者李恩正, 黃成萬, 黃成淵 申請人:柳韓公司;黃成淵