專利名稱：：黃姜水不溶性皂苷脂質體及其制備方法和應用的制作方法
技術領域：
：本發明涉及黃姜水不溶性皂苷脂質體及其制備方法和用途，屬于醫藥領域。技術背景黃姜又名穿地龍，土名椏邊姜，學名盾葉薯蕷(DioscoreaZingberensis-wright)，多年生草質藤本植物，其塊莖有較高的藥用和化工價值，經過加工可提煉皂苷、雙稀等醫藥、化工用品，是激素類藥物必不可少的成份，被喻為"激素之母"，并廣泛應用于化妝、保健、避孕鎮痛、麻醉等類藥物，是一種市場需求較為穩定的藥材。黃姜皂苷類物質具有良好的抗心血栓功效，但黃姜皂苷大多數屬于留體皂苷家族，不同皂苷單體水相溶解度不一，大多數單體分子量較大，很難溶于水。實驗結果表明，這類皂苷脂溶性和水溶性都較差，這一特點使其不易透過腸壁被人體吸收；同時由于黃姜皂苷的特殊生理溶血特性，使黃姜皂苷無法采取靜脈注射這一方法。由于黃姜水不溶性皂苷的這兩個缺點，雖然它有良好的抗心腦血管疾病的功效，但是無法制成有效的藥物。在藥物載體輸送系統中，微乳、納米粒、脂質體等亞微粒的研究，已經成為藥物新劑型研究中非常活躍的領域。將藥物包封于這些亞微粒中可，可改變藥物在體內的分布，增加藥物在靶器官的分布量，從而提高療效，減輕毒副作用。脂質體具有良好的生物相容性，制備工藝簡單，藥物包封于脂質體中，能降低藥物毒性，增強藥理作用，而且能夠降低藥物的消除速率，延長藥物作用，增加藥物的體內外穩定性。由于藥物本身性質不同，對同一種脂質體選用不同的膜材不同的制備方法包封率會有很大的差距，因而在制備時針對包封藥物要在膜材和制備方法上多做篩選，同時還要解決產品穩定性及被包藥物泄露的問題。因此制備脂質體的瓶頸在于如何尋找合適的輔料及輔料用量，尋找合適的藥脂比，使其在包封率、載藥量、穩定性方面均適應臨床需要。目前，尚無將黃姜水不溶性皂苷制成脂質體的相關報道。
發明內容本發明所解決的技術問題是提供黃姜水不溶性皂苷的新劑型，以黃姜水不溶性皂苷為活性成分，加入脂質成分等藥用輔料制備而得的脂質體，可以提高黃姜水不溶性皂苷的穩定性、吸收性、靶向性和親水性，提高黃姜皂苷生物利用度。本發明原料黃姜水不溶性皂苷屬于現有產品，制備方法之一是將黃姜清洗處理后，用約600克干黃姜用1200毫升乙醇在75攝氏度條件下回流熱提，趁熱抽濾，濾液干燥后用水溶解，收集不溶于水的沉淀部分，該沉淀部分(以干品計)中主要成分為黃姜水不溶性皂苷，含量在60%70%左右，另還含有少量的黃姜水溶性皂苷，含量為15%，其他為天然脂類等成分，該沉淀部分可以直接作為原料制備本發明脂質體；也可以將該沉淀部分通過有機溶劑萃取，去除脂質成分，即得本發明原料黃姜水不溶性皂苷，該黃姜水不溶性皂苷也作為原料制成本分發明脂質體。采用沉淀部分為原料時，由于沉淀中含水率較大約為40—50%，所以在沉淀中會含有部分可溶性皂苷，以沉淀直接為原料制備脂質體在包封黃姜水不溶性皂苷的同時也會在脂質體雙分子層內水相中包封入黃姜可溶性皂苷，這樣既包封了黃姜可溶性皂苷也包封了黃姜水不可溶性皂苷，這樣使得皂苷的包封率比單一包封黃姜可溶性皂苷或黃姜水不可溶性皂苷要高本發明脂質體是含有下述重量配比的組分制備而成的黃姜水不溶性皂苷740份、脂質成分4090份、表面活性劑320份。本發明脂質體可以由薄膜法、逆相蒸發法、熔融法、注入法、冷凍干燥法、表面活性劑法、復乳法、鈣融合法、超聲法、溶劑擴散法或高壓乳勻法中任一種方法制備而得；制備而得的脂質體形態均一，粒徑為150nm600nm，包封率高，滲漏率低，符合藥典對脂質體制劑的各項要求。本發明脂質體既可以作為制劑直接使用，也可以作為其他制劑的原料應用，如本發明脂質體可以為口服制劑、吸入劑、氣霧劑或噴霧劑的原料；主要應用制備治療心腦血管疾病的藥物。本發明黃姜水不溶性皂苷脂質體，通過脂質體的形式，由于脂質體與細胞膜的生理相似性使得脂質體包裹的藥物比未包裹的藥物容易吸收，同時由于有脂質體的包裹，在血液P^7.4的條件下，藥物不會突釋，避免了黃姜皂苷溶血性會造成的危險。所以本發明脂質體極大的提高了黃姜在藥物治療方面的前景，并且為腦、肝、心臟靶向的脂質體的構建創造了平臺，可以通過配料中增加具有腦、肝、心臟靶向的脂溶性基團，使此基團存在于脂質體的表面達到主動靶向的效果；另一方面，通過對脂質體的粒徑的控制可以達到被動靶向的效果。同時提高了黃姜水不溶性皂苷穩定性，吸收性，被動靶向性和親水性，有效利用了可溶性黃姜皂苷過程中的沉淀中的水不溶性皂苷，并可在此水不溶性皂苷的脂質體基礎上制成胃部或者腸道吸收的黃姜皂苷制劑以及心肌靶向，肝靶向黃姜皂苷制劑，并提高黃姜皂苷的生物利用度，延長黃姜皂苷在體內的代謝時間以及穩定性。本發明黃姜水不溶性皂苷脂質體有如下優點1、黃姜皂苷在醇提時會產生大量的水不溶性物質，這些不溶性物質(即黃姜水不溶性皂苷)還沒有應用于制劑的相關報道，本發明脂質體為利用這些沉淀中皂苷的提供了全新的方法。2、黃姜水不溶性皂苷脂質體的穩定性良好。脂質體將皂苷包裹在脂質雙分子中間，可避免光線，氧，酸堿等不穩定因素對皂苷的破壞，保證了皂苷的穩定性；脂質體不僅能使藥物體外具有良好的穩定性，并能防止藥物被胃酸破壞，使藥物在體內也具有良好的穩定性。3、黃姜水不溶性皂苷脂質體具有良好的生物利用能力。脂質體是由類脂雙分子層構成的藥物載體，與生物組織有較大的相似性和組織相容性，能提高藥物的吸收率；同時脂質體能避免藥物在血液中突釋，防止因皂苷的溶血性所帶來的副作用；并且由于類脂雙分子層的存在，可以通過在配制初乳時加入特殊靶向脂溶性基團，從而在此類脂雙分子層中加入特殊靶向基團，使脂質體具有生物靶向的功能。4、黃姜水不溶性皂苷可以與脂質體輔料中的其他組分任意調配，使此脂質體制備方法既可以包封親水性或乳劑型藥物，也可以包封親脂性藥物。本發明通過形成脂質體，使黃姜水不溶性皂苷成為親水性脂質體，提高了藥物的水溶性。具體實施方式本發明黃姜水不溶性皂苷脂質體是含有下述重量配比的組分制備而成的黃姜水不溶性皂苷740份、脂質成分4090份、表面活性劑320份。根據組分篩選實驗，本發明黃姜水不溶性皂苷脂質體，其特征在于，從包封率考慮優選下述組分配比黃姜水不溶性皂苷915份、脂質成分7687份、表面活性劑49份，即藥脂比為1:510。綜合考慮包封率、載藥量和穩定性及成本，優選組分配比為黃姜水不溶性皂苷1540份、脂質成分4076份、表面活性劑成分920份，即藥脂比為1:15。其中，脂質成分采用三酰甘油酯、甘油酯、留體類、蠟類、油酸，大豆油中的至少一種；表面活性劑(也可稱為乳化劑)采用大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂、藥用聚乙二醇、藥用卡波姆、糊精、淀粉、司盤、吐溫、聚乙二醇硬脂酸酯、硬脂酸聚烴氧(40)酯中的至少一種具體地，脂質成分中的三酰甘油酯為三硬脂酸，三棕櫚酸，三月桂酸，三油酸，中鏈脂肪酸的甘油酯，長鏈脂肪酸的甘油酯中的至少一種；所述的甘油酯為單硬脂酸甘油酯，含有單、二、三酰甘油酯的合成甘油酯中的至少一種；所述留體類為膽固醇；所述蠟類為微晶石蠟，鯨酯蠟中的至少一種。在使用固體脂質的同時還可以通過加入油酸、大豆油等常溫液態脂質成分制備納米固體脂質載體，通過在脂質體脂質雙分子層中增加油相來提高載藥量，在常溫下，固體脂質與液體脂質配比可選擇4:16的比例混合，制備過程中加入油酸須使用高壓乳勻法(或稱微射流技術，高壓均質法)或高速剪切法制備脂質體。本發明脂質體，可以由薄膜法、逆相蒸發法、熔融法、注入法、冷凍干燥法、表面活性劑法、復乳法、鈣融合法、超聲法、溶劑擴散法或高壓乳勻法中任一種方法制備而得。具體制備方法如下A、從黃姜原料中提取黃姜總皂苷時的下層沉淀，下層沉淀通過有機溶劑萃取的方法去除黃姜天然脂質成分即為黃姜水不溶性皂苷；制備脂質體的組分重量配比如下黃姜水不溶性皂苷740份、脂質成分4090份、表面活性劑320份；B、黃姜水不溶性皂苷與脂質成分通過加熱熔融或有機溶劑溶解后，經過高速剪切制成初乳，其中有機溶劑包括二氯甲烷、三氯甲烷、乙醚、乙醇或汽油至少一種；C、脂質的初乳通過旋轉蒸發器旋轉薄膜蒸發，制成脂質薄膜；D、脂質薄膜與含有表面活性劑的水溶液水合，攪拌振蕩，得黃姜水不溶性皂苷脂質體E、或將步驟B所得初乳與同溫的含有表面活性劑的水溶液混合，經過超聲分散后制成脂質分散水溶液。F、將步驟E獲得脂質分散水溶液通過高速剪切或高壓乳勻法(或稱微射流，高壓均質法)或擠壓過濾或微乳法處理，形成黃姜水不溶性皂苷脂質體。G、或將將脂質成分通過有機溶劑溶解后通過旋轉蒸發器旋轉薄膜蒸發，制成脂質薄膜;其中有機溶劑包括二氯甲烷、三氯甲烷、乙醚、乙醇或汽油至少一種；H、步驟G所得脂質薄膜與含有表面活性劑黃姜水不溶性皂苷水分散液水合，再通過超聲或攪拌振蕩，得黃姜水不溶性皂苷脂質體。上述制備方法中采用的水溶液包括蒸餾水、去離子水、純凈水、磷酸緩沖溶液、甘露醇溶液中至少一種；采用的表面活性劑為大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂、藥用聚乙二醇、藥用卡波姆、糊精、淀粉、司盤、吐溫、聚乙二醇硬脂酸酯、硬脂酸聚烴氧(40)、膽酸鈉的至少一種。本發明脂質體因選用的輔料及制備方法不同制備出的脂質體可分為SNL與NLC，該兩種形式脂質體既可以作為制劑直接使用，也可以作為其他制劑的原料應用，如本發明脂質體可以為口服制劑、吸入劑、氣霧劑或噴霧劑的原料。黃姜水不溶性皂苷脂質體在制備治療心腦血管疾病的藥物中的應用。通過下列實施例說明本發明的具體實施方式，但本發明的保護范圍，不局限于此。實施例中采用的是黃姜水不溶性皂苷，制備方法為將黃姜清洗處理后，用約600克干黃姜用1200毫升乙醇在75攝氏度條件下回流熱提，趁熱抽濾，濾液干燥后用水溶解，不溶于水的沉淀部分，將該沉淀部分通過有機溶劑萃取，去除脂質成分后，即為本發明原料黃姜水不溶性皂苷實施例l取黃姜水不溶性皂苷5g，大豆卵磷脂5g，司盤2g，膽固醇5g加到1000ml圓底燒瓶中，用1:1氯仿甲醇混合溶液300ml將上述成分溶解，水浴超聲處理5min后形成穩定的淡黃色均勻混懸液，置于3(TC恒溫水浴中旋轉蒸發，使脂質在圓底燒瓶壁上形成一層薄膜。將200ml8呢甘露醇溶液倒入，水合，震蕩，超聲，每進行5s超聲暫停ls超聲時間總計30min后得到白色半透明脂質體混懸液，用微孔濾膜過濾除去大顆粒雜質后分離后得黃姜水不溶性皂苷脂質體。實施例2.取膽固醇10g，蛋黃卵磷脂20g，司盤5g，聚乙二醇5g，吐溫5g，油酸10g轉移到大燒瓶中，加熱熔融或加乙醇等有機相溶解后，超聲30min，得到穩定混濁液，加入黃姜水不溶性皂苷25g，再加去含表面活性劑3y。的離子水500ml，超聲20min后進行高速剪切0.5min，獲得初乳。將初乳用高壓均質機在7(TC，80mpa壓力下均質10次，室溫冷卻，即可得到黃姜水不溶性皂苷納米結構脂質載體水懸浮液，將水溶液上層脂質體懸浮物用用微孔濾膜過濾除去大顆粒雜質后，可分離得到黃姜水不溶性皂苷納米結構脂質載體。實施例3將黃姜水不溶性皂苷2g，大豆卵磷脂3g、膽固醇3g，溶解于150ml甲醇溶液中，混合均勻后，超聲處理20分鐘，3(TC水浴減壓旋轉蒸發至甲醇溶液蒸發完畢，可以得到黃姜水不溶性皂苷大多孔脂質體，加入8。/。甘露醇50ml，超聲波處理20分鐘，靜置分離即得黃姜水不溶性皂苷單室脂質體。實施例4稱取10g的黃姜水不溶性皂苷溶于200ml的甲醇中超聲溶解，另稱取10g的硬脂酸和5g卵磷脂溶于150ml的二氯甲烷中，再與前者混勻后高速減切5min后，在旋轉蒸發儀上3(TC水浴減壓蒸干，再加入一定量2.5%吐溫80水溶液，進行5s超聲暫停ls超聲時間總計30min，即得黃姜水不溶性皂苷脂質體混懸液。分離后可獲得黃姜水不溶性皂苷脂質體SNL.施例5將5g黃姜水不溶性皂苷溶解于25g油酸加膽酸鈉5g，司盤4g，超聲處理30min，再高速剪切5min，得黃姜皂苷懸濁液。準確稱取大豆磷脂5g、膽固醇5g、黃姜皂苷懸濁液10g于500ml圓底燒瓶中，再加入150mll:l的甲醇-氯仿混合溶劑，振搖溶解，然后將燒瓶放在旋轉蒸發儀上(轉速60r/min)，37。C恒溫水浴減壓蒸發除去有機溶劑，在瓶內部形成一層均勻的類脂膜。將此燒瓶用透氣的紗布封口，防止雜質進入，抽真空靜置1220h，使類脂充分鏈接、組合和伸展，殘余有機溶劑充分揮發。將20mlpH6.8的磷酸鹽緩沖溶液加入燒瓶中，再加入一些小的玻璃球以幫助分散，再次將燒瓶連于旋轉蒸發儀上(轉速60r/min)，直到瓶壁上的膜完全溶脫形成均勻的乳白色分散液為止。若壁上薄膜不能完全溶脫，可用旋渦振蕩器震蕩使脂膜巻曲包裹黃姜水不溶性皂苷形成黃姜水不溶性皂苷脂質體。穩定性實驗實施例15制備的黃姜水不溶性皂苷脂質體，在將黃姜水不溶性皂苷脂質體從制備時的黃姜水不溶性皂苷脂質體混懸液中分離后，將黃姜水不溶性皂苷脂質體置于水溶液中，儲存在室溫25攝氏度，相對濕度75%條件下密閉放置。放置l-3個月后測定水溶液中黃姜水不溶性皂苷脂質體中黃姜不溶性皂苷含量變化情況，即考察脂質體的穩定性。以初始時期脂質體組分中皂苷含量為100%，與其他時間脂質體組分中黃姜水不溶性皂苷含量對照，得出皂苷平均含量變化曲線。表l黃姜水不溶性皂苷脂質體的穩定性比較<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>結果表明在室溫25攝氏度時，相對濕度75%條件下密閉放置條件下，放置三月后，黃姜水不溶性皂苷在脂質體中脂質體包封的黃姜水不溶性皂苷含量從100%降至68.02%，證實通過此方法處理的黃姜水不溶性皂苷脂質體在溶液中具有良好的穩定性。一、黃姜水不溶性皂苷脂質體脂質成分比例篩選實驗發明人研究過程中發現，由于脂質成分的種類比例不同，制備所得脂質體的脂質雙層分子晶型不同，穩定性、包封率、粒度大小都會有極大的改變，所以需要進行大量的實驗進行通過制備空白脂質體篩選脂質成分的種類及配比。此處分別選用單硬脂酸甘油酯，硬脂酸、棕櫚酸這3種生理相容較好的脂質作為固體脂質成分篩選其配比，結果見表2。表2空白脂質體脂質成分的種類及配比篩選實驗<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>采用硬脂酸或棕櫚酸作為固態油相制備的NLC不穩定，PI值高，單分散性差，不能準確測出平均粒徑值，貯存l周后聚集產生沉淀，這可能與硬脂酸、棕櫚酸熔點較高、易于結晶有關。而采用單硬脂酸甘油酯作為固態油相制備的NLC較穩定，貯存l個月后粒徑及PI值均變化不大。將單硬脂酸甘油酯與硬脂酸或棕櫚酸按一定比例混合，制備的NLC粒徑較小，4'C貯存1個月后粒徑與PI基本保持不變，穩定性好，其中以單硬脂酸甘油酯:棕櫚酸=3:1制備的NLC粒徑最小。二、黃姜水不溶性皂苷脂質體藥脂比篩選試驗以高壓均質法，以單硬脂酸甘油酯:棕櫚酸油酸=3:1:6為固體脂質成分，大豆軟磷脂、司盤、膽固醇等作為表面活性劑，與黃姜水不溶性皂苷進行包封率比較試驗見表3表3黃姜水不溶性皂苷脂質體藥脂比篩選試驗<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>藥物制備時卵磷脂質量濃度越高，脂質體粒徑越大；而黃姜水不溶性皂苷質量濃度越低，雖然包封率越高，但載藥量越低。而對于藥脂比的確定，要綜合考慮包封率和載藥量兩個效果，使兩者均達到較好水平，根據現在做的動物性實驗，大約可推算出一個成人用量黃姜水不溶性皂苷約600毫克(0.6克)c0.6克/(載藥量X包封率)=實際藥物大約質量包封率=[脂質體中的藥量/(介質中的藥量+脂質體中的藥量)]X100%上述結果表明當藥脂比為1:510，包封率較好；但由于本發明制劑為脂質體，必須以隔絕空氣的方式包裝來防止脂質成分氧化，如采用雙層鋁薄或泡罩方式包裝，包裝成本與藥物成本。藥物過大會影響包裝成本，故在包封率符合制劑要求的情況下，藥脂比為1:15，可降低包裝成本，以適應臨床需要。權利要求1.黃姜水不溶性皂苷脂質體，其特征在于，它是含有下述重量配比的組分制備而成的黃姜水不溶性皂苷7～40份、脂質成分40～90份、表面活性劑3～20份；其中，所述脂質成分為三酰甘油酯、甘油酯、甾體類、蠟類中的至少一種；所述表面活性劑為大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂、藥用聚乙二醇、藥用卡波姆、糊精、淀粉、司盤、吐溫、聚乙二醇硬脂酸酯、硬脂酸聚烴氧(40)酯、膽酸鈉中的至少一種。2.根據權利要求l所述的黃姜水不溶性皂苷脂質體，其特征在于，它是含有下述重量配比的組分制備而成的黃姜水不溶性皂苷915份、脂質成分7687份、表面活性劑49份。3.根據權利要求2所述的黃姜水不溶性皂苷脂質體，其特征在于，它是含有下述重量配比的組分制備而成的黃姜水不溶性皂苷1540份、脂質成分4076份、表面活性劑成分920份。4.根據權利要求l所述的黃姜水不溶性皂苷脂質體，其特征在于，所述脂質成分中所述的三酰甘油酯為三硬脂酸，三棕櫚酸，三月桂酸，三油酸，中鏈脂肪酸的甘油酯，長鏈脂肪酸的甘油酯中的至少一種；所述的甘油酯為單硬脂酸甘油酯，含有單、二、三酰甘油酯的合成甘油酯中的至少一種；所述留體類為膽固醇；所述蠟類為微晶石蠟，鯨酯蠟中的至少一種。5.根據權利要求14任一項所述的黃姜水不溶性皂苷脂質體，其特征在于，由薄膜法、逆相蒸發法、熔融法、注入法、冷凍干燥法、表面活性劑法、復乳法、鈣融合法、超聲法、溶劑擴散法或高壓乳勻法中任一種方法制備而得。6.以權利要求l所述的黃姜水不溶性皂苷脂質體制備而得的制劑，其特征在于，所述制劑為口服制劑、吸入劑、氣霧劑或噴霧劑。7.權利要求l所述的黃姜水不溶性皂苷脂質體的制備方法，它包括如下步驟A、稱取下述重量配比的組分黃姜水不溶性皂苷740份、脂質成分4090份、表面活性劑320份；B、按照薄膜法、逆相蒸發法、熔融法、注入法、冷凍干燥法、表面活性劑法、復乳法、鈣融合法、超聲法、溶劑擴散法或高壓乳勻法中任一種方法制備，即得。8.根據權利要求7所述的黃姜水不溶性皂苷脂質體的制備方法，其特征在于，所述步驟B使用的方法如下1)黃姜水不溶性皂苷與脂質成分通過加熱熔融或有機溶劑溶解后，經過高速剪切制成初乳；2)脂質的初乳通過旋轉蒸發器旋轉薄膜蒸發，制成脂質薄膜；3)脂質薄膜與含有表面活性劑水溶液水合，再通過超聲或攪拌振蕩，得黃姜水不溶性皂苷脂質體。9.根據權利要求7所述的黃姜水不溶性皂苷脂質體的制備方法，其特征在于，所述步驟B使用的方法如下1)黃姜水不溶性皂苷與脂質成分通過加熱熔融或有機溶劑溶解后，經過高速剪切制成初乳；2)將步驟l)所得初乳與同溫的含有表面活性劑的水溶液混合后，經過超聲處理制成脂質分散水溶液；3)將脂質分散水溶液通過高速剪切或高壓乳勻法或擠壓過濾或微乳法處理，形成黃姜水不溶性皂苷脂質體。10.權利要求l所述的黃姜水不溶性皂苷脂質體在制備治療心腦血管疾病的藥物中的應用。全文摘要本發明涉及黃姜水不溶性皂苷脂質體及其制備方法和用途，屬于醫藥領域。該脂質體是含有下述重量配比的組分制備而成的黃姜水不溶性皂苷7～40份、脂質成分40～90份、表面活性劑3～20份。制備而得的脂質體形態均一，粒徑為150nm～600nm，包封率高，滲漏率低，符合藥典對脂質體制劑的各項要求。本發明脂質體既可以作為制劑直接使用，也可以作為其他制劑的原料應用，如本發明脂質體可以為口服制劑、吸入劑、氣霧劑或噴霧劑的原料；主要應用制備治療心腦血管疾病的藥物。文檔編號A61K36/88GK101156929SQ200710201919公開日2008年4月9日申請日期2007年9月29日優先權日2007年9月29日發明者侯曉敏,航左,顧迎春,魏于全,文黃申請人:四川大學華西醫院